staphylococcus aureus and food poisoning -...

14
Genet. Mol. Res. 2 (1): 63-76 (2003) Received November 27, 2002 Published March 31, 2003 Genetics and Molecular Research 2 (1): 63-76 (2003) FUNPEC-RP www.funpecrp.com.br Review Staphylococcus aureus and food poisoning Yves Le Loir, Florence Baron and Michel Gautier Laboratoire de Microbiologie UMR1055, Ecole Nationale Supérieure Agronomique de Rennes, Institut Nationale de la Recherche Agronomique, 65, rue de Saint Brieuc, CS84215, 35042 Rennes cedex, France Corresponding author: Y. Le Loir E-mail: [email protected] ABSTRACT. Food-borne diseases are of major concern worldwide. To date, around 250 different food-borne diseases have been described, and bacteria are the causative agents of two thirds of food-borne disease outbreaks. Among the predominant bacteria involved in these diseases, Staphylococcus aureus is a leading cause of gastroenteritis resulting from the consumption of contaminated food. Staphylococcal food poisoning is due to the absorption of staphylococcal enterotoxins preformed in the food. Here, we briefly review the latest data on staphy- lococcal enterotoxins and some papers exemplifying the interactions between S. aureus and the food matrix; environmental factors affecting staphylococcal enterotoxin production are discussed. Key words: Staphylococcus aureus, Food poisoning, Enterotoxins, Food matrix

Upload: lethuy

Post on 16-Jun-2019

220 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

������������� �������������������� ��

���� ������������������������������������������������ �������� ��! "�

����������������� ���������� ������������������������������� ���!����"��!���������

���� �������������������������������������������� #$%&'(��&���� �������� ��! "�

������

������������ �������������������

���������������� ������ �� ���������������

#"���"������ ������������$���%���&&�� '�����"����"�� ( )*��� ��+$������, ������������-����� ���"����"�����"���!���!��+$������, ���&��� �����("����.��� ���/(01��&���&�1������������2��3�"���/�����)�����$�" �!����4��#��#���'��"�������5��"6!������"�7�

������������������������������� �������������������������������������� ����� ������������������������������������������� ��� ��� �������� ������ � ��� ����� � ��������������������������������� ������������������������������������������������� ���������������� ��������������������� ������������ ���� ����������� ����!�� �"�������� ��� �������������������� ���� ��� �"����������������#�� �� ��������� ����$��������� �"����������������������� �"�����������������#��������� � ����#�� � "�������������������������� �������� �������#%������������ ������� �������� �"����������������#� ��������������������

�������������������� ������� �������&�������#�����������#

) �*��*����� ��� ��

���� ������������������������������������������������ �������� ��! "�

���� ���

�����������������'�()*����� ����"���+����$�����,����-������.�������� � ����������#��������������"���������������������"��������� ���� ��� �������/�0��� ���� ��� �()� ���� ���� ��������� !"� ���� ���"����"��� ��������������������������)��������������������������������������()�� ���������� ����������������"���"� ������������������ ������������������������� ��������� ��������� ��������������" ��������������������������� ������������������� ������� ����1����"�������������������������������-������������()������������ ������������������� ��������������� �������������������� �������������� ������� ���������������� �()��� ��������������������"���������������������2����������������3����!�����'���� ���)��������������% 4����� �� ���� !� ��"5� ���2������� ��� 677����� ���� ������*��()������� ������ 89:��������������;��������� ���-������������������������"��������� ���������������� ���������������" ���� ��������������()������<=��������������:�������� ���-���������<�>����������������"�1�������� ���������"��� ����<???�����'������� ������1��������@����!���������� 677�������������� �%$��������������������*����������<�:9�()�����������������<9�;9> ����������������<;>;��� ���-���������<��������1�������������'����������3!���������������������������������������������#�� ��������<*�������������������������� �()���� ������������������������� ����������������� ������������()����������(������������ ���������� ����������� �����������������������������"�� ���������������������� �"�������������� ����������� ������������� ��������� �������� ������������ ���"�� ��������#��� �����������'����������������*���� ���'��#�� �� ������ ������ *�!���A���� �������������������� ��������� ������������������

�������(��� �+����� ���������"������������� "���,�������������#������"� ������---��������� �#��.�������������� /��������� ������+������������

(��� �+�����

��������������������� ������

����������� �'� ��� ���0�1/���!����!02�����"��0������ ������� /���

������������ ���

���� �������� � ������

��������� ���

2� �!���

3 ������ ��������������� �� 0���������0������������0���������� 0�(�����+���02450���� ��� 0������0�� � �

3� "���,�%�6�7���

�� 8

�������

�������7 �

�������� 8

�������� 8

�������8 7

(���%�6��97��

9� �

�7 �

�� �

��� �

��� 9

��- �

2��� ���:� ����%�6�8���

�� 8

�� �

��� 7

�� �

�� 9

��� �

;�� ��%�6���

���

�����

�����

�����

�����

�����

������������� �������������������� ��

���� ������������������������������������������������ �������� ��! "�

���������� ������������������

������������������������ ��������� �������������� ���������"� ������������� ��B����"���7��� ����������� ����������0������������������'�������A��� ��������A��������������* ��������#����������� ��������� �����������������"� ����������� ��������������������������� ����"�����������+�������������#�� ���� A���� ���������������������������������� ����������� ��������� �������

����� ������� � ���������������������������������������� �()����3!�� ��������������1�������������A���� ������� ���� ��������'(�"���������A����������*��������"�����������������������' ��B����������������� ������������"���������� ����������*�! ���� ������������������������������������������������ ���� ������������� ������� � ������������ �� ������ ��� ������� ����"� ����� ������������������������� ������������!"� ����� ���>������ ��������� ���� ����������� �������������������=�'<������������������"*���������������������������������" ������������������" �4���������������������������������������������� ���������������� ��� �����)������ ������"����������������"� ���������������� �������������� ������������� ���������� ����������������<�����������������

����� �������������������������A���� ������� ���� ���������1� �������� ������������#�'(���������*����� �������������������������������� ��������������������"��������" �����������������������������������" �� ��� �������������"����������� ��������������� ������������#� ����������������� ����������������#�������������������������"�� ��������>�C4 ��<����������������������� ���������������������������� �������������������������� ������������"���� ������������������"��� �� ���"����� �������������"�����'� �����������*���������� �"� ����������<>��;:�� �����������(����������#������� ����"���"�������������������������������"���������������������������� �"#�������������

�������� ����A���� ������ ����������"�������� ���� ��������'0�D�� �����*�����" ��� ����������������"��������������������)��������" ���������������"������������������������������ ����������" �� ���� �� ��������������� � ������ ��� ������6�����"�������������������� ����� ��':��<��� ��������� ���� ����������� �����������=�*�@�����'�����*�" �� ��������������"������������������������������ � ��������" ����������������������'���������:�� ��������� ���� ����������� ��������� ���� �����=�*��������������"������������� ����7����������!"� ����� ���������" �����������������������"��� �"��������� ��������� �������

������������� ������������������������������

������������ ���� �����������������A���� �����������%����������������������������������� ������4�������� ������������� ����������� ������ �������������'���������������� �������*������� �"����������������������������"��-"���������������"����� �������� �� ����"���������� ������"��������� ����������� �!������� ����������������� ��������� �"����������������#��'!&�*������������������������ ��� �"�������� ��� ��������3��������� � �������

) �*��*����� ��� ��

���� ������������������������������������������������ �������� ��! "�

������������������ ��������������������� ��������� ���� �������������� �����������������������"�������"�������������� ����2������������ ������������������� �()��������������������� ��� ������������ �� ��������� ��������������������� �������� ���������������������������������� �������������������3 ��;����E� �������� � ����������������������������� ������������������������ ��� ��������'9C��=>��C4������ ����� ;���;9C4%!�����������<??�*� $'=����?�;������� ����� 9��9��%(��������<?>?*����������������������������'� ��<�E2�4�*����������������������������� ������������������"� ��������� ��� �������������������������"�# ��� ���� ������� � ������ �������B������ ����������� ���������������� �������� ��� ����������������������F������������� ������ ����������������������������������B���� ������ ��������� �������� �"�����������������(����G������������������� ��������������-��' ����������������2,F@�>���97<�����1!,:>>>7<����*�!������"� �����������������������<��� �7� ������ ������ ����<�� �7� ���B����� �������� ������������� ����������������B���� ������ ���� ������������������"(������H��'<??�*�1����"�������������������������������"���� ������������������� ������ �'� ��<��� �7�����������������������*������"������������������� �� �����������

������������ ������������������ ��������" ���������������������������������)������'<?>=*������ ������" ����������������#� ��������" ��'���������������"������������������������������� �� �*��������������������������������

������������ ������ ������ ����������������������� ��#����������������������������������������������������������������� ���������� ���������� ����������������������"���B���������������� ������� ��� �"��������� ������ ������ ��� � ������ �������� �� ��#�������"����������� �������� ������ ��������������������� �������,� ������������� ���� � ������� ��������� �"�������� ��� ����������"�����������" �� �������� �����6���!&������"� ����� ��� �"�������� ��� ��������������������� ������������������������ ��������"�������'�����������������*���������� �"� ������� �' ���;�����>�*���������"� �������������������������� ����=��

�����������������������������������������

!��������� �"��������� ����������������� ���� ������" ������!&�'I�"�<??�*�����#�� ���������������������������� ���������������������� ������������������������������������������� ������J����������� ������ ������������������!&�'(������������<?>>*������������� ������������ ��������� ����������������� ��� ����������� ��� ���%������������������������� ������!&�'(��������������<*���������������� ������������"�������� ��� ���������������������"����������� �"�������� ��� ���������������'D������"������<??=*�

����������������������������

!�������!&�������� ����������"��� ���� ������������������� �"�������� ��� �������1���� ���!&����� ������ � �����B������������������ �������������

������������� �������������������� �

���� ������������������������������������������������ �������� ��! "�

�����B������������������� ��!&�'$����������<?>9*�!&('$�������(��������<?9�* ���!&4 '!����� ���! ���� <?>;*���� ���������� ��������� ��!&����������������"���������" �������������������������"� �������� ������������� ����������� �"�������� ��� ��������������<=� �����!&�" �������������� ��������������������������B�������������'������*����!&��������� ���������������

������������������� ������ ��������������������������������������������������������������������������������������� �!� �������������"�������������������������������������������#��������"������������$�������������������%�������������������������&

�������&����� �������!������������� � /������������ � ���/����������� ��� �<����='�

1�<��

='4='>='(�=';=''='�='2='?='@='�='%='3

='3

���������������-��������������7�����������9����

='%

���-�������-���8���-�������9������9����8���

='�

���7���-������9��������8���8�������8���

='@

���9����������7��������-���7���9���

='?

���-���������������7���8�������

='2

���������������7���7���9���

='�

������9���9������������

=''

��8��������-��7����

=';

��7����7�������

='(�

�������8���

='>

�������

='4

���

�����������������������������������������!���� �����������������������������������-��������;����"��������"������ �����������������������"�������������0���� ���� ��������"������� ��B���� �� �� ����� ��������������� ������"���������������������"'�������������*����"�������"���������������� ������"����-"���������� � ������" ������������� ���������"����������������� ��������������"�����������"����" ������������ � ���2������������!&(���!&4<����������������"������� �"�����" ����������!�� �"����������������#�(�����������"���" � ����������� $������ � ����������������� $����������������������������������� ��� ����������'(��������<?>;*�!�� �"����������������#���������"������������������%���"������������������������������� ������ ����������������"������������'(��������<?>;*�������������������"���������������������������-����� ������ �����������"��� ������������������������'(��������<?>;*�A����� ������������� ��� �� ��������� ����� ��������������� ��!&����������������������������"����"�������������������������"����B������������ ���������������� ��������������� ������������������������$������������������������������"������������� ����������������"������������������� �������������"�2������������!&����!&)���� ��������������������'����� �������������������*������������'���������������������"*� ����������������'(������<??�*�$������������� !&��!&(����!&4�����������������"�������� �� ��� �������#����� ��� $'!������������<??�*�1������B���� ������ ���������� ���� ���������������!&�����"�������� ������!&�" ��!&������������������ �������#��������������������������������������� ����������"����������"��������� $'!������������<??�*���"�������������'(������<??�*��������������������������������!&��������������'����������������� $*��������"������"�������������� ������������

) �*��*����� ��� ��

���� ������������������������������������������������ �������� ��! "�

A�����������!&������ ����������� �� ���������� ������������������ �������� '�����=*�����#�� ������ � �������"� ���"� ��� ����� �����'(����"���0���������<?>�%4������������<?>?*�����������������"�������������������������'!�� �����1�������<?9>*���������������� ������9����� ��������������� �� ������ '!�����������<?99*�!&4

����� � ��������"����� ����������

���������"�����'��-���������������<*��������������"��� ����� ����'4����������<?>>*����������������"�"����������������������# ������� �������� ����������� ��������������"�������������'�� %D�������������<??�*��������������������������� �"����������������"���������'�� %4�����������<??�% ������������2���������*�!������������� ���!&�������������������"����� �"�������������������� ����� ���� ���������������� �� ���� �� �������������� ��� ��� ��� ����� ��� ������'�������������<??;%K����������<??>*�F��������������"@����������'����*����������������!&(������#�������"��������#��'�!!�*�������������������������� �#� ���������������� ����������������������� �"��������� �# �������������"�������B�����������'2���������*���� ��������� �� ��� �������!&�� ������ ���� ���������������"� ���� ��������������������������"'��������<�� �7�*���� ������ ����������������� ������ ��"��� �����������!&�����# ������'��������*�

������� ' �(�����')������ ��*** �+��,�����-����.�����������// �0������������"�������-����%�"�����-�����-���-������"�������������1�����������������������-������������'2(��������� 3������456�����450����������������� ����������������45.�����457����������,���������������������������������������������������� �!��$����& �0�����������������������������������������������������������8����������������5����������49����#����8�����:������,�����;����/��������������������8��������������8��������������������������������������������������,�������� �� ���������������<!�$�**=& �.�������������������������������������������������������������������������������������������������.>2�02��/�������� ����??��� ��������� ��?���,����?�������"?��<���?������@�� ��������������������

���������A��������� ��� ������ ��� ���/����������� ��� �<����='�

�?

�� ��8 ��8 ��� 8�8 ��� ��� ��� ��� 9

�� ��7 ��%��%�8 �7�

�� 78 ���

� �9�

� -��

� 77�

���������

>� ��/�������,�����0��-870��-88@��������B���0��-88>����������=����+�� 0��-8�>����������=����+�� 0��-8-2�+���� ��� 0��--������� ��� 0��--������� ����0��--������� ��� 0��--�(��������>������0��-�->�/�������?������0��-8-(������ ��� 0��-88������� ��� 0��--8=������C��0��--7������� ��� 0��--8D����� ��� 0��--83������ ��� 0�����#� :������� ��� 0�����@�������� ��� 0�����@�������� ��� 0�����@�������� ��� 0�����

���������!���,;��

��0����80�����07����07����07����0��8��07����0�����0���

��09�7��0�9��70����90-�8

����807�7�

�707�-��907-��

��9089��

���0����

���0����

�� ���='���� ������

�����-��-��-��-

��8

��������8��8

��97�

��-���7�

�����

�����

�����

&���������� ������

�7�������������

�78

�7��78�9��9���8�9�

��9��

���-�

��78�

�����

3�#��� ���"��

��98��8��8��8��

���

��9��������-8����-

�����

�����

�����

��8��

='� /��

4>(�(�(�(��"�+����(�������(���� �;

'�2?@B*�%E3E

������������� �������������������� ��

���� ������������������������������������������������ �������� ��! "�

3(����������������������������������������������������������� �!��$����&

����������� �������� �����!�� ��������������� ��� �<����='�����

���� ���� ������� ��� ���������

�� ������� >� ��/� ���� ��,�����0� �-87F� >�� � ���>� ��/0��--9

�" ����!��!�0���!��0� �������

=����������?������0��-�8=���� ��� ��� 0��-��F�4� "��!�� ��� 0��-87

��� &��!�� 4� "��!�� ��� 0��-87

�����

�� ������� /������ #� :������� ��� 0�����

�� ���!�����?>987� >�/�������?������0��-8-

�� ����� �+������ (������ ��� 0��-88

� ���� ��������������� �����0����!��!�

@�������� ��� 0�����

�� ��0�����!��!� @�������� ��� 0�����

D����� ��� 0��--8

3������ ��� 0�����

#� :������� ��� 0�����

@�������� ��� 0�����

@�������� ��� 0�����

@�������� ��� 0�����

���!�����?>987�

�� ������� /������

�� ������� /������

��0�����!��!�

��0�����!��!�

��0�����!��!�

�A

�,

��

�!

��E

��E

�������������������������������

���!&���������� ���"� ������������ "��������#���������� ������ �"��������������� ��������� �����G"��������#��������!&���!!���# ����������(������� �������� "��������#����������#��������������������� �����������B�����������������"���� �"����������������� �������' ������������(���������F�����"�����*�3����������"�!&���������������������� ���� ��������� ��������()����������������"��������� ��������������������" ��������!&���&���!&$��������������"�������������������� ����� ���������� ���������������"�0����������"��������������������� ��� ���������� ������������B���������"��������������������� ������ ����������!&�" �����������!&����� ������� ������������ ��B������������������������������#����!&������� ��# ��������������� �������� ��������������� ����7�������������������������"��������������"��������� "��������#������������������� �������������"�������������������������6 ���" ��� "������� ��� ���" ����� ������� ������ ������� �� ������� ��� ������������������������ ����������� �������������"�(���������������� ��������������#����������������������"� ������������ �������������"!&���������������"�!� ���������������������"� ���!&���� ����� ����� ������������-���� �� ������������ ��� ����� '$������ ���� <??=%)���� �� ���� ����*�2���������������������������#������������������������������������������������������������������� �� �������������"����������������� ����������"'$����������<??;*�!� �������������"������� ������������������ !&����������

) �*��*����� ��� �

���� ������������������������������������������������ �������� ��! "�

���������� ����'�4F*������������������ �����"��� ��#'0$4*� ������� �������������'�G4*��������������� �����������4F���� ���� � �����������0$4�����1��11�� ��� ����������G4'�����<�*�0$4��� �������� ��#���� ��"���������� ���� ����G4����������������� ���������"���"������������������� ���������� ����� �������������������� ����������� ����"��� �������������������� �����������"��������� �� ��"� ����������� �����,��"� ������������������-��� �� ������� ������������0$4� ���G4'0�4��������������<*�!� ����������#���������������"��������"������������� � �� �@����� ����4F����"����������������������4F������0$4�����11� �G4�������������������'�����<(*�1����������������������������!&���0$4� �����B���� ������������@���� ����G4���������������������������� �� ������������ ��� ������� �������������������������� ���������� ������"�� ������� � ������������ !&��#��"���������������������!&������������������������ ������������� �������� �� � ������������ ������� �������� ������ ��#� ����� �"������'0�4��������������<*����������� !&���������������������������������������-��������������������"��������� ���������!&(������� ���������"����������������� ������� �������������"�!&(� ��������������������������� ���������������������� ���� ��� ��������������'A���� �������������*�

�������������"� !&��������������������-������ �������������"������������#������"���B���"���������-���"���!&����"��������������� ������������������������"�������"���������������� ��������������������')��������������*�H������������������!&�������"� ����� ��� ������%���"��"����������� �������������� ����������������������������������������� ������������������ ���������'(��������<?>;%����������������<??�*����� �����������B�������������� �"�������� ��� ����������������������������������<L�������"���"��� ������������"'&������������<?>>*��������������������������������������������� ��������������� �� !&�� �������������"�����������"���������� ������"�����-���,�������� ������� !&����"������� ������������� ������ ������������"�����������������"���'$����������<??=%)��������������*�$�������

�A<����

α ���� β�����

������<��������������

#

���������4����������������������������,�����������A<���� ���A<���������,������������,���������������� ����������������������������<����������������������������������$�&����������������������;���������������������������%�$.�2&�������// �A������<���%����������A<�������������A<���������������$A2(&�����,��������$B�&��������������������������������� ����������������A<��������,�������������������� �A����������������������������������������������.�2�������//����������<���8�����������B������ �A���,��������������������������A<���������,����� �4������������������������ �������#�����������(������������

A2(

.�2�2�����//

4�

������������� ��������������������

���� ������������������������������������������������ �������� ��! "�

!&1���������"������� ������������������� �����������������%�������������"���������������� �����"�������������� �����!&�'0�����������<??>*�!�B���������"��� ���������������"���� ��!&��!&D���!&H�������������������� ����"������� ',������������<%��-���������������<*������������!&������������������"�� ����������������"�!&� ������ �����������������$����������������� ���������������������������" �������������������#������"��" �������������"���������������������#����������������������������������������������������� �������������"'$����������<??9%(���������F�����"�����*�

��������������������������������������������������������� ���

0��"���������������������������������������� ��������� ������!&�' ������������(��������<?>?%A���������<?>?*�!& ���������������������������������� ���������"������� ������� ������ ��������������� ��������� ������������ ��!&������ ��� �������# �������4�������� �# ������� �� ����������������������������������������� ����������� ����������� ��'2���������*������������� ���������������#������������������� �����������B���������@�������������" ���������������������"���������������" ���������������!& ��������� ��������� ���� ������ ������!&��!&(��!&4������������� ������������������"������������',�������0���<??9*�A��������������������������������"� �����!& ����������� �����" ��!&(���!&4'(��������<?>?*����������"� ������������������������� � $���������B������ ����������������������������������������������������������� ��� �������"������� �����!&��A������������ $�����������������"� ������� �# ������'F������������<??�%2���������*�!& ���������� ������������ $����������������� $�3�����"�!& ���������������� $�������������� $�������������������� "����������"��������������� ���������#�� ����������������������������"� �����������������!& ���������$���������������� ����������������������������"� ���� ���� $������!& ��������������������������������<�E���� ������� ��� $'2�����������$���������<?>;*�,��������������������� $���������������� ��������� !&(�!&4����!&)������������# ������� �� 'F���������(����"�<??�*������������ ���B���������������������� ��������� ������������� ���������"����������� �������� ��� ��������A��������'<?>?*���������������������������������������� ��� ������������������������������������� ���� �����������!& ���������4�� �������������������������������� ���������������������������',����������<?>>%@����-"�F�-���������<??>*��� ��������������� ��������'!�������������<??>*����� ���� ��������������������"������������� ���������������� $��#"��� ���#�� ������������ ����� �������������������������������"������� ��������������������������������������

����������������������������������

1���������� ��� �"�������� ��� ���������� ������ ������ ��������������������������������!&� ����������� ��������������# ������������ ������������� ��������������������� ���������0���� ��������� ������ ������������� ���

) �*��*����� ��� �

���� ������������������������������������������������ �������� ��! "�

������������� � ����������� �������� ������������������������ ���������� ����������B��������� ��������'����������������*�0��"� ����� ������������������������� ������ ��������������� ���������� �"�������� ��� �������������������������������� ���� ���������������������������������������������� ���������������������������� ������@������#�� ���� ��� �"�������� ��� ������������������������������'(��������<?>?*�1������������������������������������������������������� ������������������ ��� ������-��������� ��������������� ����� ������� �������� 1� ��� ������������� ��� ������� ���������������� �� ���"����������� ����������������������������������� ��������������� ��� ������!&'(��������<?>?*�1�<?>������������������������� ���� �"�������� ��� ����������D������"�3!���������������������������������������������������� ������� ��=������� ��� ������-�����G������-��������������� �"��������������� ��������!&��������������"������#�� ����������������� �������� ������������ ��"�������������������������� ������������� ��������� ������ �������������������� ���������� �������������� ���������� ������������� �����������������' ������-����*�1��������� ������ ������������������������" �������������������!&����������"������"���2���������������������� ��� �"�������� ��� ��������������������������������������������" �������������� ���������3!�'(������<??�*����������� �#�� �������B�������������������������"� !&�'��������*�

��� ���������������� �������������� �"�������� ��� ������� ������" ������������"����������1����3����D������ ���#�� ����;E� ������ �"�������� ��� ��������� ������������<?:?���<??�������������� ����������������������������� �����"���%��E� ����������������� �����"���� �����"������������>E������������ ��������9E�� ���������� �����;��E������'+�����������<??;*�1����������������� ����������������� �"�������� ��� ��������� �����������"��� ����'<???�����*�������������� �������� ��������������������� ������ ������������ �����"�������������� ������ ��;�E� �������������� ����E������������ �� ��<�E� �������� ��� ��<<E����������� ������� ��<<E��� �����" ��?��E'� ���$��������������������*�1����3����!����������������� �"�������� ��� ������������� ������������<?9����<?>��;:E�����������������<��;E���������<<�;E�� �����"���<E�� ������������"<�=E����� ������������� �����1�<9�<E� ������������ ��������������������'A���������<?>?*��������������� ��� �"�������� ��� ������� ������"�������������%�����"�������� ����������������� ������ �������������� ������������1�������� ���#�� ������������ ���� ����������������������������������!�#����������������"�# �������������� �������� ��� ������������������ �"�������� ��� ��������������

1���"������������������� ��������������������'������������������ ���������������������������� �����"������"��������������-��*���������������������� ����������������� ��� ����2������������� �������������������������������������������������������������� �������������������� ��B����������������������������� ������'�����������*�

���� ������������������������

�������������������������������������������������������������������������� ��������������� ��� ������ ������� ���������� ��������#�����������

������������� �������������������� �

���� ������������������������������������������������ �������� ��! "�

��������������������E'(��������<?>?*�2������������������������"����������" ������ ��� ������������ �������� ��� ����������$�����������#�� ���� ������������������������������ ���������������������� ��������1�������������:<������������� �����������������<��?E������������#����'F����������<??9*�1�)������������������" �� �������������������� ���������������� �����������"<� =<=���� �� ���������������!&����'H���������������*�����������"��� �� ������0���A�����(��-��������='=;E*� <�9���� �� ������� ������������������ ��������!& ��������'4������������<???*�1������������������� ����������������������������� ��!&���&'!&���) ��4�����������*������� ������"��������!&��0����������"�A�����"������������������������� ���������� ������������������������ ��9��>E� ���������������������#��������!&���!&I�������������'����������������<*���������������������������� ���������� ��������#���������������������"��������!&�������������������������������!&��!&4����!&)� ��� �����������������!&A�!&1����!&I����������� ���������!&��������������� �����������������������'����������������<*���������������� ��������������� ������ �������"��!&������ .��������/'����!&���&*�������" �����������"G4F� ;;����� ��������������� ���������"� �����������������������"��� ��B����"� �����������������!&A�$�1����I�����'�9E*����������������� ��������������������������������������� �������"���������������� ���������'F�������A���������*�2�����������������������G4F��������������� !&�����'��������������"�������������*��������#�������� ���������!��������-"������������������������"�'&H1!�*�������������� �� ��!&���!&&'���� ���������<?>:*�����������������"���������0���� �����������!&���!&&����������������������������������������������� ���������������������� ��������� ��������� �����!&���������������� �������!&��F������"�&H1!� ��!&$'!����+����<??:*���� ��!&A���!&1����������������',�������������*�,������� �������!&$���������"������������������� �"�������� ��� ������'!����+����<??:*�������������������������� ��������� ������������ !&$�$����������� ���������������������������� �������������������������� ����������������������� !&A��!&1���������������� ������F2����������',�������������*�������������������� �������� B�������������������� !& ��������� �������������������������� ������������ �����������������"��������!&���� ��� ������������������G4F�������������������������������"��������!&������������"������������������ ������������������������������� �"�������� ��� ��������������������� ���

���� ����������

!�� �"�������� ��� �������� ������������� ���������� ����������������G������������� ������ �����������!& ��������������� ���� ������� ���������������������� � ��� ���������$����������" ������� ������� �����������!& ��������� ������ ���� ���������������������������"�������������� ���� �������� ������������� ��������������������� ������������� ������ �� ������� ������� �����������B���� ������ ��������� ���������������� �������������� �������"� �������������������������������������������������������()����������������������������������������� ������������������#�� ������������������� ����������� �������� �"����������� ����� �7������������ �����'�����

) �*��*����� ��� �

���� ������������������������������������������������ �������� ��! "�

������ �����������*� ��<��� �7��������������������2������������!& ���������������������� ������ ������������������������������������������������� ����������������"�������� ��� ������ ��"�������������'� ������-�� ����*���"��� ������������� ����'� �������� ����*��������!&����������� ���������������������� ��� ���������0������������� ���� �� ����������������!& ���������!�� �"��������� ����������������� ����������� ����� !& ����������������������� ��������������������������������������� ����������B���� ��������������������� ������������������������ �������� �������#����� ������������� !& ��������� ������ ��F������������������ ��������� ������ ���!&����� �����������#������� �"�������0���� ��������� ������������������� ����� ������������������������� ��!&��������� ������ �������������������������������������������������������������B������������� ��� �"�������� ��� ����������������

���������

������������������ ����������������������� ��������� ������������������������������ ������������������������������������������������� �����������������������������������������������������������������������������

� ������������������� ������ ������ � ���!��"�������������#����������������������������������� ����������� ����$�����%��#���&��������������������� ����������������������� ����

������������!"���� ������#����������$�%�����! �������'��#�(����������� ��������&������������������������� ����������� ��'&##������'���)'

&������'��������������������*�����&���������������������������&������������������������ �������!��"��#�$� ��������������

&� ������(�����'���� )����������'��#�(����������������� ���������!��"��#�$� ��������������&������������*�)���"����������������(���$�������!!�+�,&��������-����&�(������������ ���#���&������.(

����#���������#�(��������������%�&� ����$� ������'����������&�) ����+����������� ���!!����!��/����������������&��������(����������������������������#�(��������

�������� ���0�!������ ��������� )��� !��&�������+��+� ����&��,���-�..�����&���������������$��*��-��������!�����"�������*�������1������� ������

#��������������������������� ��#���������%�&� ����$� �������(�����������)&�������'������������.�������&�������#���������������#�(����������������� ��������������(�#��������

������!��������)����������������������'������&��/�� ��� ����!2�1������� ����3����������������#������������������������1�����4�%'5����

+����4�%4�����+��������"����4�6�����4�784�##�������!&��/�� ��� ����!�������������� ���3���"��#�� ������� ����*����������0�(��4�*"4����*�����

0�����4�3��4�9���:���4�9:4�7'+4�##� �2���2&�� �)���!��������� ������!!����!��'��#�(����������������� ���+������������.(���#�����������++ ���!���!)&�� �)���!��������� ������!!� ���!!�9&�����������,&�������� ���� �(#��+����#�(����������������� ��

�����!������ �������,��2 � �&�������*������ �� ��%�����"�����!)�9&�����������,&���������������#�(����������������� ���%�����

���������������������#(���������� ����$����-����-������+, �������&�������*������ �� ��%�����"�����!��%�����-�������������.��������������-��#��������������#�(��������

�������� ���%������%���������������'����� ������&������#������&�� �)���!� ���� �"���������������������������� ������#�(����������������� ���+�����

������ #�����������������������������������������������������(+����2���!&��0���+��������%����������.����������#������ ��$�#�������'(����!��)�&�)�������� �����*�������"-������������ �#����� � ����������������.���������������������!��"��#

$� ����������������������������1�� � %���(�� ������!������������� �������"���&����������������� ���������� ����������(������

�� ���.(������������� �����������������.�-����������������$��;���������������$� �������+ ��2 )�2 �����/���������&��/�� ��� ����)��"&��������������������#�(�������������#��#�������������#�(��������

�������� ���0���������� ��������2)��� ������/������+����)��!���&��� ��������"��2���� !�����1����������,��������<��&����������� �#������

������������� �������������������� �

���� ������������������������������������������������ �������� ��! "�

� #����������������������� ���.(������&����� ����������������� �* ���.�������#������/���� �� ���� ��

�� ������#��� � �%����#!��'���� ��'!��������������!"������)��&1�����"�����)��������!������������� ���.�������#�����������������������&������&���(�����������-�����������(���4���#�(��������������������� ���+�������&��������������������#������-�������!��-����$� ��������0'���)�����)

�������!��� � ������3�����&�� �)���!����!!�%������������&�����������,&�������������(#��1����#�(���������������� ��������!������ �������,����� �����

#�%�������������! �+����#��������(���������.���(#���������������� ������������������������������������������#������!������������ �����'(���������

#��/���������0����"������ �� ��%�����"��������1 ��� ������������������� ���������$� ������1�&���0�����2

-%����������������������&����������' �����&��/�� ��� ����!!�1��������������&��������������#�(����������������� ���+���������������&�.�����������#�(��������������#�����������-��-�����������������������!��"��#�$� ����������2���2��

1��$/��� ���!'�������)�� '��1�������3!��&�������*��������/����"!�������)���!����� �������!������%���������;���������#&����-��#�����������(�������������.�-���������������� ������������&���#����&#�����������!������ �������0���2�)�

*���/���/����������!��"��������������������������������#�(������������� �������������!��"��#�$� ������ ��2�)�2��

*����.�� ���'���&��0���&'������������!&������� ���!!��!��������'�� �������(�����&���$���� ������*����.���������4�.���������4�����������������#���������������������������������!��$�#�����0+0��2���2 �

���/��������� �����4��������1��*� �)�����&��%����"��*���$��������,�� �����,�������6���� ����������������������������������-������5�����4����������������������%��#2������3��#���+0���������

��������'�����������"�����+�55 ����!������)�������(������������#�(����������&#������������ ����!�%4���$�#����'��� )�� �

��������3��*���������#��+�55 ����!������������"��'�����''�����&�� �)���!�����2�6���������#�����������������.�����������������������������&�����(�����-������������#�(����������������� ������������������(���2�)��2�!2

��%�����!����������� "�����&�������*��������9&�����������,&���������������#�(����������������� ���%2��������,&��������#���������������������(#��%����#�(����������������� ����$����-����-������++,��2���222

��%�����!��������!�����..������������������� "�������6���������++�� ��%�����#��� ���..�������,�����&�������*������ �3�-���������������������������������&�#�����.���������������-��(��������&���&���������#�(����������������� ���%��$����$� ��������0��!�)����

����/���6�����&��/�� ��� ����)������#�����(����&��&���������#�(����������������� ���$�33�3��������4���#�������4�������,&����������(����(#����#�#�������!��������������+�'��2����2��)

����/���6����/�����!���&��/�� ��� ����� �����$��-!� ���!)�%��#������������������,&����������#�(����������������� ���+�!��������������+(+��)����)��2

!�������� ��"�)�����������������3�����������&7���������/� �����-��������!��,�����������1��&����%� ��������������*���������4��������(�#��-�������#���������������� �������4���������#&����-���&����(����&#�������������������������� ���!�����������((�������))

!�)��!��������'��#�(�������������������������3���$�#� ��"��#�$� ����������9�������4�=4���� ������=���9���������<�������4�9���:���4�9:4�7'+4�##� ��� )!

!�����!����&�����+����� �� ���!!�'��#�(����������������� ���$������ ���������������������������������������������!������ �������,�� �22� �2�

+������)��1���&�������'������ �����#&����� �+##������������#&���������������������#���������������#������������������������;������������������������ ��#�����#���������������������������&�.����%��#����������������0��)��!�

+���� ����!��+����0������&(��"��2���� (��'�����������(�%�����'"��������� ����#��(�������������&����&�������� �#��������(����������������������� ���3���$����� ���������������������������9�-���4�<"�����'�&��(4�<4�����=%>4�9���:���4�9:4�7'+4�##�2)2� ��

���������#�����������-��������(�'�����!�������(-�������0�����������.�������0������.�-��������&���������������� ���������������#��������������&#�����������5����$� ��������(����2����

������!����)����!#��'���������!'����5��������#�%�����������&�������*������2�%���������;����������-����(#��%����#�(����������������� �����.���������������-��&������(���#����������������������(��� �� � ���

�����������!+��6��0�����!������ �� ��%�����"���������� ����������(�����������.���������&#���������������&#����������1�&��$� �������''��))���

) �*��*����� ��� �

���� ������������������������������������������������ �������� ��! "�

��+� �5��!��������"��-������������ #������������������� ��������������� ���������������������##4���������&�����-������������&������6�����7�����2�2�2��

�������� ���3����������3��&�� �)���!������� ����'������!�3����������������������������;�����������#�(����������������� ����(#���/�����3������������������ ����������������((��222)�22 !

(���������� ��������%� ������!����!2�%��.��������������������������-��(4�#>4������&.�#���������#����&������������������������ ���#���&������!��"��#����������!2���!2�

(�%�����'"�������"�����������(����������������������&�������3���- ���*�����&��*����������5��������4�=+4�9�-���4<"4�5������4�??4�"�����(4�0+�����<���4�?34�����+'*�"����4�@���������4�0%4�7'+4�##�2��� �)

�����+��������0������ ��������6������#8���9����� ����� ����/�0���+�������0���������������4���4������������������������������ ��������������������������������������������� ���#���&���-������������ ���������������.���������4����4��������������!��������$� ��������,��!�)�!��

������6�����������������)�+������������,&������������������������������� ���#���&������.(������������ ���������������(��������������������!��"��#�$� �������0(��))�!�

�0����"�������/��#6���#������������(�%�����'"����� �� ��%�����"��������$��������������.����������#��#�������������#�(����������������� ���8��������������( ��2���2��

���������*�����������*����������������������&����!!�1�������������������������������&��&��������������������������� ��������������&������������������� �����%������%��#���&���������.�����&��&���������!��"��#�$� �������(����)���

'�/�������&�����&�� �)���!�������+��������#>������������ #�����������������������(���������&�������� ���������������� ���!������ �������������������

'�/�������&��(�%�����'"�����&�� �)���!�������/�&�����������������������#>����������� #����������������������(���������&��������� ���������������� ����������������(,��22!��22!!

'������!"�����*�/������������'��#�(����������������� �������������������������������(#������������.("%<����5�����������!��"��#�$� �������������)�

'������ !"��*��������!"��#� ������ ����'��������(� ����)�1������� ���#���&������.(� ���#�(������������������������������5�����������!��"��#�$� ������2�����2����

����������3����/��������3����������+�����������+��������������+������6�����!�1���������������������������������������&��&�����������.���-��&����������������� ������������������&����������!�"��#�$� �������������)

��������!!����� 5����������!2��������#������������������,&�����������#�(����������������� ���%��!�������������+'����2����2��

����������� ��� ��8 �������9����� �����8�����$�������������#����&�������������������4��9���4������������ ���#���&��������������������� ������������������������������������!��"��#�$� ��������������

��0��������(���������� ��&�����'��3������� '�����+�������!�������3�����-������������#�(���������������� ����.(����������������-������.(������#>����������������!��"��#�$� ��������,��22� �

��.���������������� ���!!����)!�%��������������&���������#�(����������������� ���$�������������+,���)2��)!

�� ����������������� ������ ����� � ���))� 3�����������������������;�����������#������� ��-��-��������������� ���$�#���&��������������������� ���!������ ������+ ��2�)�2��

���6���������/����� ������ 3������������������#&�����������������������#�(����������������� ��4�>������%�&� ����$� �������(���� 2!�� 2

���6���������/�����������0���������������#�(����������������� ���>�.(������;(�������������&�����.�������(�!��"��#�* ����' ��2�)�22�

3���5�����(-��'�$��������+����������*���������������!���-%��������������&��/�� ��� ���!��0���������������#�(����������������� ����.(���;(���������� ���&�����.��������(�������������&������(��� ���#������� �������������� ���� #��(������� ����.��(� �(������������%�&� ���$� �������'���!!��!��

3����������3��&���������#+�����&�� �)���!�����2�'��#�(����������������� ���+������������ #�����������������������.(�������������(���������&��������� ��������������(���2���2��

,����$)8'�$����������)�����������$�)�����#� �/�����8�� ��������!��������*��"�������*����5�)���������'��������6�����!�$���-��&�������������� ���#���&������.(������������� ����&�����������&����&���������#������������������A���������������������!����� ��1����('���)2��!�

,�2��%��(��'������1�����(�%�����'"�������/��.�����#������������ ��� ����(��������.(����#�(���������&#�����������* ���.�������#������/��� ������������)

�������������'��������#�����*� ������'!�����2�'��#�(��������������#����������������7������8������4����������%��#����������������,�������2�

����/�� ������� ���!!����� ��0�����*������!������������� ���0�#���������������������� ��������������������������� ������������������8�"%$��$� ��������������(�����)��22