First description of PVL-

positive methicillin-resistant Staphylococcusaureus (MRSA) in wild

boar meat.Manuela Valencia Botero

U.P.B3rd semester

Molecular Biology

INTRODUCTION

Staphylococcus aureus

Generous: staphylococcusSpecie: AureusCharacteristics: • Principal agent of hospital infections but were also

described outside hospitals• Is a pathogenic agent that cause infections of skin

and soft tissue infections, endocarditic, CNS infections and in the genitourinary tract.

• Is gram positive• one of the most heat resistant bacteria and salinity• lives on the skin, skin glands and mucous membranes

of warm-blooded animals• in 1992 considered the most frequent pathogen in

nosocomial infection and mortality associated with infection

• The staphylococcal food poisoning (SFP) occurs after

ingestion of foods that are contaminated with Staphylococcus aureus.

• People can put the colonies of S. aureus in the food chain with contant with animal meat, dairy products and salads.

• In Europe most of the MRSA belonged to CC398 and lack factor to transcribe PVL and staphylococcal enterotoxins causing low virulence.

Methicillin

• Methicillin is a beta-lactam antibiotic used to treat infections such as Gram positive agents producing beta-lactamase

• The walls of bacteria contain a lines crossed between peptidoglycan chains links, methicillin acts by inhibiting the synthesis of this wall by competitive inhibition of transpeptidase enzyme to avoid the formation of these crosslinks

Resistence

• Methicillin in 1959 (a semi-synthetic penicillin) was used as an antimicrobial treatment and in 1961 the first case of resistance was reported.

• staphylococcus has 3 methods of methicillin resistance: hyperproduction of beta-lactamase, modification of PBPs and intrinsic resistance to methicillin.

• Beta-lactamase is an enzyme that breaks the beta-lactam ring of antibiotics

Panton-Valentine leukocidin (PVL)

• Is one of the major exotoxins of the staphylococcus aure, its creates pores in the membranes of infected cells

• PVL is associated with increased virulence of certain strains of Staphylococcus aureus.

• Is the cause of necrotic lesions involving the skin or mucosa

MRSA

• Methicillin resistant Staphylococcus aureus is a serious problem, since it is difficult to combat and easy to acquire. MRSA has the ability to offer resistance against the antibiotic causing serious disease.

• Is a matter of concern the MRSA associated to livestock (LA-MRSA) that affects people that is related to pigs, poultry, cattle like vets and farmers, because they are colonized..

GENERAL OBJETIVE The purpose is the detection of MRSA non-CC398 in wild boar meat that encode the PVL. Showing the probability to obtain

diseases with more severity

METODOS

Aislamiento

• Por medio de un programa de vigilancia en 2011• Los staphylococcus de carne de jabalí con marcador de

coagulasa positivo fueron enviados a Alemania para el estudio.

• Se obtuvieron 28 muestras de 7 tiendas.• La prevalencia fue de MRSA para la carne de jabalí fue del

4.8%

Tipificación de los aislamientos

Identificación bacteriana:• Es la taxonomía bacteriana que nos permite

construir sistemas que permitan la clasificación de las bacterias.

• Aquí se utiliza Familia (géneros relacionadas entre si), genero ( especies relacionadas entre si), especie ( cepas relacionadas entre si) y cepa (aislamiento de una especie en particular)

• Las pruebas deben hacerse con colonias unicas, procedentes de cultivos puros.

• Esta practica se puede llevar a cabo

por medio de métodos convencionales, semiautomatizados o automatizados.

Micro arreglo de DNA

• Superficie solida a la cual se une una colección de fragmentos de DNA . Sirve para analizar la expresión diferencial de genes es decir la variabilidad .

• Los aislamientos PVL-positivos se caracterizaron además mediante un comercialmente disponible kit de microarrays que cubre 333 secuencias blanco que corresponden a aproximadamente 185 genes distintos y sus variantes alélicas. Esto incluye, genes que codifican para los determinantes de resistencia a los antibióticos pertinentes y factores de virulencia. El análisis de los perfiles de matriz basada en la presencia o ausencia de los genes investigados se realizaron utilizando el software Bionumerics.

Análisis PFGE

• Separación de moléculas de gran tamaño en función de su capacidad para moverse a través de los poros de un gel cuando se someten a un campo eléctrico pulsatil

• Preparación de agarosa para electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE).

• El ADN genómico en los tapones se digirió con 30 U de restricción

• Los fragmentos generados fueron separados utilizando un 240 sistema

Susceptibilidad antimicrobiana• Los aislamientos fueron probados por

microdilución en caldo según las directrices de CLSI.

• Los 19 antimicrobianos probados fueron cefoxitina, cloranfenicol , ciprofloxacina, clindamicina, eritromicina, fusidato, gentamicina, kanamicina, linezolid, mupirocina, penicilina, quinupristina / dalfopristina, rifampicina, estreptomicina, sulfametoxazol, tetraciclina, tiamulina, trimetoprim y vancomicina.

RESULTADOS

• De los 28, 20 MRSA estaban relacionados con el CC398, y los otros estaban distribuidos en otros CC así: CC45 (1), CC93 (1),CC8 (6).

• Estos que no son CC398 están en carne y preparados de carne• Los datos sobre la presencia de S. aureus y MRSA en el población de

animales salvajes y de caza son escasos hasta el presente • Los 8 MRSA tuvieron un análisis mas profundo se detectaron genes (Luks-

PV y LukF-PV) para PVL en siete de los ocho aislados analizados• Al igual que en estados unidos el CC fue el CC8• Una proporción sorprendentemente alta de los aislados que albergan

genes luk-PV • (7 de 28 aislados; 25,0%)• El código para CC45 no tenia genes para PVL ni mostro características

diferentes de virulencia

• a la kanamicina (tres aislamientos), ciprofloxacina (seis aislamientos), eritromicina (tres aislamientos), cefoxitina, y penicilina (todos los siete aislados).

• Ellos fueron asignados a tres diferentes patrones de resistencia fenotípica.

• todos eran fenotípicamente resistente a por lo menos dos antimicrobianos.

• Albergaban hasta ocho genes de resistencia diferentes.• Es posible decir que la contaminación se da después de

haber pasado por los humanos pero esto lleva muchos factores que lo afectan para ser una certeza por lo que se concluye que hay múltiples vías de entrada a lo largo de la cadena alimentaria

• Es necesario enfatizar que el manejo correcto de la carne en todas las etapas del procesamiento y cadena de comercialización, de la caza a la comercialización, es un requisito previo para una alta calidad de los alimentos .

• MRSA multirresistente que son positivos para PVL en los alimentos tienen que ser considerados como un peligro más grave para la salud pública que el típico LA-MRSA

DISCUSSION

DISCUTION

PERSON THEORYTRUE

ORFALSE

Smith , T.C and Pearson Clonal complex CC398 is the predominant clone livestock

TRUE

Hanson, B.Mpollution is given after passing for the humans

FALSE

Atanassova,VThe correct handling of game meat at all stages of the processing and marketing chain from hunting to marketing at retail is a prerequisite for a high food quality

TRUE

Fall, C High proportion (58.9%) of MRSA harbouring luk-PV genes compared to industrialized contries

TRUE

PERSONAL CONCLUSION

• The result of the investigation with respect to others shows that if there are patterns that are similar but yet the results still vary from place to place, showing some environmental and social factor.

• Is essential the proper handling of meat from the time the animals are killed until they are put in the kitchen, interruption in any point in the food chain, produce the introduction the staphylococcus.

• All new techniques for bacterial differentiation make it more possible the identification of the different types of resistance in bacteria and give the opportunity to change treatment in patients to one more efficient.

• the staphylococci is a major public health problem especially in the hospitals, is real obligation keep clean and properly sanitized hospitals to prevent the spread of this highly infectious bacterial agent, which increasingly shows that can go a little beyond us.