step by step - vvs verměřovice s.r.o. · 2018. 10. 14. · staphylococcus aureus enterococcus sp....

Faremní kultivace

v systému kontroly mastitid

STEP BY STEP

Prezentace shrnuje pětileté výsledky depistáží

a systémů ozdravování chovů pomocí

faremní diagnostiky původců mastitid dojnic:

- z více než 300 farem mléčného skotu v ČR

- ze stád o počtu 50 až 1100 dojnic

- s cílem dosažení stabilních hodnot kontrol užitkovosti pod 200

tisíc SB a ozdravení chovů od kontagiózních původců mastitid

MVDr. Miroslav Věříš

Slavětín nad Metují 18, 549 01 Nové Město nad Metují

Tel.: 00420 603218079 Email: [email protected]

Faremní diagnostiku původců mastitid

A. - neznám

B. – znám, ale na farmě nepoužívám

C. – používám pouze pro určení, zda mastitidu léčit ATB

D. – používám pro identifikaci patogenů a následnou cílenou léčbu

I. Depistáž spektra patogenů

• PCR - polymerasová řetězová reakce (polymerase chain

reaction)

• Molekularně biologicke vyšetření. Detekce DNA patogenů

metodou multiplex real-time PCR. Tato metoda neumožňuje

kvantitativní hodnocení.

• Přesné, citlivé ( zachytí od 1 kusu živé i mrtvé bakterie)

• Odebírá z bazénu, 500ml mléka sterilně

• Speciální skleněné odběrné nádoby poskytuje a vyšetření v

Čechách provádí Státní veterinární ústav Olomouc a Jihlava

• Tato depistáž se kvalitativně nedá nahradit jakýmkoli

množstvím standartně vyšetřovaných vzorků

Depistáž spektra patogenů Protokol používaný v Čechách v SVÚ Jihlava a Olomouc

Molekularně biologicke vyšetřeni. Detekce DNA bakteriálnich původců mastitid

Metoda: multiplex real-time PCR

Čislo vzorku ………

Původce Výsledek

Staphylococcus aureus

Enterococcus sp.

Corynebacterium bovis

Gen pro s-laktamazu

Escherichia coli

Streptococcus dysgalactiae

Staphylococcus sp

Streptococcus agalactiae

Streptococcus uberis

Klebsiella sp.

Serratia marcescens

Arcanobacterium pyogenes

Používá se SET DG mastitid pro 12 druhů….. 800,- Kč

Extra PCR vyšetření Mycoplasma bovis….…..600,- Kč

Prothoteca ……………………………………. 600,- Kč

Suma…………………………………………2000.-Kč

2. Výběr vhodné faremní diagnostiky

Výběr faremní diagnostiky závisí na spektru zachycených patogenů.

Pokud se nenajde druh, který vyžaduje přesnou identifikaci z důvodu

specifické léčby, můžeme stanovit jednotný protokol léčby a běžný

typ faremní diagnostiky (v Čechách se jedná o cca 20% farem).

Příklad:

Výběr vhodné faremní diagnostiky

Vybrané patogeny, které vyžadují specifický přístup k terapii a musí

se určit s přesností na konkrétní druh:


Streptococus agalactiae

Mycoplasma bovis


Streptococcus parauberis

Serratia marcescens

Nocardia asteroides

Pseudomonas aeruginosa

Candida rugosa

Prothoteca zopfii

PM test (Pure milk test) určí na druh více než 30 mikroorganismů

Spektrum patogenů způsobujících mastitidy

na své farmě

A. – neznám a neřeším

B. – neznám, ale používám postupný protokol léčby

C. – znám a provádím ozdravování od konkrétního patogena

D. – znám a provádím preventivní program na základě dat KU

Co je to protokol léčby mastitid na farmě ? Způsob léčení mastitid, zahrnuje ATB i další terapeutika

Příklady:

Monoantibiotický PL – zpravidla IMM použití nejnovějšího ATB

Víceantibiotický PL - IMM aplikátory s více synergně působícími ATB

Postupný PL – nejdříve se nasadí levné IMM ATB jako lék první volby, při selhání terapie se aplikuje drahé IMM abt, v případném 3. kole následuje INJ ATB léčba

Cílený PL – nejprve se určí druh patogena, který způsobil mastitidu, poté se na základě známé citlivosti nasadí odpovídající ATB

Výběr vhodné faremní diagnostiky

Výrobce v České republice: LabMediaServis s.r.o., Jaroměř

www.labmediaservis.cz

- PM test obsahuje

1. třísektorovou petriho misku se třemi originálními multichromovými

agary. Každý sektor misky umožňuje růst jedné skupiny původců mastitid u

krav (Streptokoky, Stafolokoky a G- bakterie), zatímco ostatní bakterie jsou

inhibovány. Kolonie jednotlivých druhů bakterií vyrostou ve specifické barvě.

2. sterilní jednorázovou zkumavku

3. jednorázový dezinfekční tampon

pro očištění hrotu struku

4. sterilní jednorázovou kličku pro

nanesení vzoru mléka ze zkumavky

na povrch agarů v petriho misce.

1. 2.

3.

4.

Cena za 1 PM test 85 Kč,-

.

• Asepticky odebraný vzorek mléka naneseme na povrchy všech tří

agarů , misku PM testu uzavřeme víčkem a v pozici dnem vzhůru

uložíme do inkubátoru.

• Inkubujeme při teplotě 37,5 ± 0,1°C a 55% relativní vlhkosti po

22 (max 28) hodin. Tato doba je dostačující k nárůstu

mikrobiálních kolonií ze zárodků přítomných v naneseném vzorku

mléka.

• K inkubaci můžeme použít medicínský nebo jiný komerčně

dostupný inkubátor, rozhoduje citlivost a udržení požadovaných

parametrů.

Postup provedení PM testu

3. Depistáž zastoupení patogenů v chovu

Zavedení PM testu na farmě musí provést odborník

- identifikuje spektrum patogenů pro konkrétní stádo (při uzavřeném

obratu stáda zpravidla 5-10 druhů se stabilním výskytem na farmě)

- určí jejich pořadí dle závažnosti (morbidita, kontagiozita)

- vyhotoví textový a fotografický manuál identifikace patogenů pro

navštívenou farmu

- zajistí kontrolu kolonií na MALDITOFU – bezpodmínečně nutné

- stanoví citlivosti na antibiotika IN VITRO

Hmotnostní spektrometr MALDI TOF dokáže vzorek bakteriálního kmene odebraného přímo z povrchu PMtestu

rozstřelit nanosekundovým laserem na částice vržené do vakua v detektoru, kde se změří jejich rychlost. Ta je úměrná

jejich hmotnosti a počítačové vyhodnocení hmotnostních spekter umožňuje identifikaci vzorku z databáze 4000 známých mikroorganismů. Vyšetření v ČR provádí SVÚ

Olomouc a Jihlava v ceně cca 50 Kč,-/ vzorek

Depistáž zastoupení patogenů v chovu

• V mléčné žláze více než 200 druhů mikroorganismů, u 100 z nich patogenita

• kvantifikace patogenů mléčné žlázy – nutnost zmapovat výskyt kmenů zachycených

PCR metodou

• Odběr vzorků cca 10% krav u stád do100 kusů a dalších 5% z počtu krav nad 100

kusů

• Min. 5 odstřiků před odběrem, aseptický odběr vzorků mléka

• Vzorky mléka pro depistáž se vybírají ze 3 skupin krav:

1. skupina: Dojnice do 3 měsíců po otelení, neléčené v uplynulém týdnu, kterým se mezi předposlední a poslední kontrolou užitkovosti výrazně (cca o 50 - 100%) zvýšil počet buněčných elementů. Odebírají se plné vzorky (full samples) mléka 2. skupina: Dojnice krátce před zasušením, které měly v laktaci opakující se mastitidy nebo mají zvýšený počet buněčných elementů. Odebírají se plné vzorky (full samples) mléka 3. skupina: Dojnice s novou dosud neléčenou mastitidou (počet - co se najde), odebírá se čtvrťový vzorek (quarter sample)z postižené čtvrti.

Depistáž zastoupení patogenů v chovu

Příklady z praxe a výsledky

1. Farma A, 280 ks krav

2. Farma B, 490 ks krav

3. Farma C, 90 ks krav

Skupina 1: 18 kusů dojnic Skupina 2: 18 kusů dojnic Skupina 3: eventuální mastitidy

Skupina 1: 10 ks dojnic Skupina 2: 10 ks dojnic Skupina 3: eventuální mastitidy

Skupina 1: 30 ks dojnic Skupina 2: 30 ks dojnic Skupina 3: eventuální mastitidy

Sestavení protokolů léčby

Farma A, 260 krav Molekularně biologicke vyšetřeni. Detekce DNA bakterialnich původců mastitid


Čislo vzorku: xxxxxxxxx

Původce Vysledek

Staphylococcus aureus negativni

Enterococcus sp. negativni

Corynebacterium bovis negativni

Gen pro s-laktamazu negativni

Escherichia coli negativni

Streptococcus dysgalactiae pozitivní

Staphylococcus sp. pozitivni

Streptococcus agalactiae pozitivni

Streptococcus uberis negativni

Klebsiella sp. negativni

Serratia marcescens negativni

Arcanobacterium pyogenes negativni

Prekultivace

Cil vyšetřeni / metoda vyšetřeno vzorků negativni pozitivni dubiozni

Mycoplasma bovis 1 1 0 0

PCR (Mbov) Molekularně biologickym vyšetřenim Real-Time PCR nebyla zjištěna přitomnost DNA Mycoplasma bovis.

STEP 1.

Vyšetření bazénového vzorku mléka pomocí metody PCR (SVÚ Olomouc)

Co znamená záchyt bakterie Streptococcus agalactiae ?

A. – provedu ozdravování chovu vyřazením nakažených dojnic

B. – po cílené depistáži léčím IMM ATB postižené čtvrti

C. – je nakažlivá, ale potlačí ji zoohygienická opatření na dojírně

D. – neznám, neřeším, nejde o zásadní problém

Klebsiella oxytoca

PCR POZITIVNÍ: Streptococcus dysgalactiae

Staphylococcus sp.

Streptococcus agalactiae

Bacillus pumilus

Staphylococcus haemolyticus

Staphylococcus equorum Enterococus faecalis

STEP 2. Proškolení práce se sety faremní diagnostiky

Primární depistáž na farmě Ověření nálezů - Malditof (laboratoř)

Farma A

.

E.coli

Streptococcous agalactiae

- Na PM testu roste v světlemodrých koloniích na STR sektoru

- Léčka intramammární, vysoce úspěšná

- Na farmách ČR v současné době méně častý nález

Kriteria 200 dnů p.p.

SB o 100%

Bez nálezu patogenů

Klebsiella

KNS

S. agalactiae

Drenč 50l, (INJ ATB) INJ NSAID 2-5x po 24hod

IMM Amoxicillinum 3x po 24hod + mast

IMM Prednisolonum 2-5x po 24hod, mast

KONTROLA UŽITKOVOST

KLINICKÁ MASTITIDA

STEP 3. Sestavení systému kontroly mastitid

Vypracování protokolů léčby

Monokultura

Celková klinika (horečka)

Lokální klinika (čtvrť)

Nejsou klinické změny

Patrně proběhla

G- mastitida Mast 6x po 12hod

SCC přes 400 tisíc


IMM Chymotripsinum 3x po 24hod

S.dysgalactiae

Směs KNS

Poškozený strukový kanálek

Evidence

Farma A

Farma A, mastitidy 2016 01 2016

02 2016

03 2016

04 2016

05 2016

06 2016

07 2016

08 2016

09 2016

10 2016

11 2016

12 2016

Brakované krávy (ks)

2 6 5 0 16 2 8 4 7 1 15 2

Průměr SB z KU (tisíce)

428 446 423 480 362 412 346 356 325 304 327 282

Počet PM testů (ks)

- - - 72 46 59 38 26 22 16 19 17

ATB terapie S.agalactiae (ks)

? ? ? 22

15 19 12 5 2 0 1 0

ATB terapie S.dysgalactiae

? ? ? 4 3 2 0 1 0 3 1 2

ATB terapie KNS (ks)

? ? ? 8 3 4 5 7 4 7 4 5

ATB terapie E.coli Klebs. , ostatní

18 21 16 2 1 2 5 3 5 2 4 4

Spotřeba ATB ter. mastitid (Kč)

5720

7436 6136 7592 4368 5642 3536 1768 2132 1300 1690 1508

Farma A, Streptococcus agalactiae

Měsíc v roce


Farma B, 490 krav Molekularně biologicke vyšetřeni. Detekce DNA bakterialnich původců mastitid



Původce Vysledek

Staphylococcus aureus pozitivní

Enterococcus sp. pozitivní



Escherichia coli pozitivní

Streptococcus dysgalactiae negativni


Streptococcus agalactiae negativni

Streptococcus uberis negativni

Klebsiella sp. negativni

Serratia marcescens pozitivní


Prekultivace




STEP 1.

Vyšetření bazénového vzorku mléka pomocí metody PCR (SVÚ Jihlava)

PCR POZITIVNÍ: Staphylococcus aureus

Enterococcus sp.

Escherichia coli

Staphylococcus sp.

Serratia marcescens

Staphylococcus epidermidis

S.chromogenes

Staphylococcus xylosus




Farma B

.

E.coli


- Na PM testu roste v růžových koloniích na STA sektoru

- Subklinické, recidivující (po 6 týdnech)mastitidy

- Dokáže přežít uvnitř bílých krvinek, kde je neléčitelný ATB

- Léčí se při zaprahování

- Pro ozdravení stáda nutný systém opatření

KRITERIA 1.KU nad 300 tis.

90 dnů p.p. SB o 100%


E. coli

S. chromogenes S.epidermidis

S.xylosus



IMM DC Cefalonium Ochranná lhůta nad 50 dnů

IMM Amoxicillinum 3x po 24hod + mast

IMM Prednisolonum 2-5x po 24hod + mast


KLINICKÁ MASTITIDA



Monokultura




Patrně proběhla

G- mastitida Mast

6x po 12hod



IMM Chymotripsinum

2x po 24hod

Identifikace inf. čtvrti

Zasušení čtvrti

Ojedinělý nález

Monokultura IMM Cefquinomum 3x po 12hod INJ Cefquinomum 4x po 24hod


Směs KNS

Patrně poškozený

kanálek

Evidence

Po dobu 12 měsíců všechny krávy

před zasušením

V laktaci do 90 dnů p.p.

Při zaprahování

Farma B

Serracia m. IMM Cefoperazone 3x po 24hod + mast

Farma B, mastitidy 2016

01 2016

02 2016

03 2016

04 2016

05 2016

06 2016

07 2016

08 2016

09 2016

10 2016

11 2016

12 2016


3 15 2 31 7 3 14 15 3 16 12 13


426 382 406 431 384 290 316 357 311 283 262 294


- - - 135 102 88 84 89 79 87 82 84

ATB terapie S.aureus(ks)

- - - 22 18 19 11 7 4 5 3 4

Terapie KNS (ks)

- - - 3 2 4 1 4 2 3 2 4

Terapie E.coli Klebs. , ostatní

29 32 35 1 0 1 1 2 1 2 0 1


10920 12636 12870 49920 35568 38402 22750 17264 9620 10946 6318 12116

Farma B, mastitidy 2017

01 2017

02 2017

03 2017

04 2017

05 2017

06 2017

07 2017

08 2017

09 2017

10 2017

11 2017

12 2017


7 16 3 6 18 5 20 18 4 16


268 312 261 226 243 238 222 259 245 230


73 76 62 26 25 22 28 27 22 23

ATB terapie+ZP S.aureus(ks)

2 4 0 2 1 0 0 1 0 0

Terapie KNS (ks)

5 5 3 2 3 4 4 2 5 3

Terapie E.coli Klebs. , ostatní

1 4 1 2 0 1 4 5 2 1


5824 9260 2236 6318 2574 2028 5408 7930 2912 2158

Farma B, Staphylococcus aureus

Měsíc v roce


Farma C, 90krav Molekularně biologicke vyšetřeni. Detekce DNA bakterialnich původců mastitid



Původce Vysledek

Staphylococcus aureus negativni

Enterococcus sp. negativni



Escherichia coli pozitivni

Streptococcus dysgalactiae pozitivní


Streptococcus agalactiae negativní

Streptococcus uberis pozitivní

Klebsiella sp. pozitivni

Serratia marcescens pozitivní


Prekultivace




STEP 1.

Vyšetření bazénového vzorku mléka pomocí metody PCR (SVÚ Jihlava)

PCR POZITIVNÍ: Escherichia coli Staphylococcus xylosus

Streptococcus dysgalactiae

Staphylococcus sp.


Klebsiella sp.

Serratia marcescens



Farma C


Na PM testu roste na STR

sektoru v koloniích tmavěmodré barvy Obvyklá intramamarní (3 aplikace) terapie selhává

Úspěšná je 6 – 8 denní kombinovaná aplikace ATB nebo specializované IMM preparáty

Proč je standartní léčba Streptococus uberis neúspěšná ?

A. – je to nakažlivý patogen, rychle se rozšiřuje a znovu napadá čtvrť

B. – vytváří ložiska, v kterých ho zničí jen dlouhodobé působení dobře penetrujícího ATB

C. – ATB na něho neučinkují

D. – je odolný environmentální patogen a nedá se zničit

Kriteria 150 dnů p.p.

SB o 50%


E. coli, Klebsiella

S. chromogenes KNS

S. uberis


IMM Pirlimycinum 8x po 24hod + mast

•IMM Amoxicillinum 3x po 24hod + mast

IMM Prednisolonum 2-5x po 24hod + mast


KLINICKÁ MASTITIDA



Monokultura




Patrně proběhla

G- mastitida Mast

6x po 12hod



IMM Chymotrypsinum

2x po 24hod

S.dysgalactiae

Směs KNS

Poškozený strukový kanálek

Evidence

Ojedinělý nález

Monokultura

Evidence

Farma C

Serracia m. IMM Cefquinomum 3x po 24hod + mast

Farma C, mastididy 2016

01 2016

02 2016

03 2016

04 2016

05 2016

06 2016

07 2016

08 2016

09 2016

10 2016

11 2016

12 2016


1 2 0 6 1 0 3 1 0 7 0 2


314 326 286 310 275 296 382 374 349 332 273 255


- - - - - - - 32 11 6 5 5

ATB terapie S.uberis(ks)

? ? ? ? ? ? ? 6 4 2 3 2


? ? ? ? ? ? ? 5 2 1 0 1


? ? ? ? ? ? ? 3 0 1 2 2


5 3 5 4 5 11 13 8 2 0 0 1


1456 832 1248 1118 1612 3796 3926 8086 4628 1872 2574 1976

Farma C, mastitidy 2017

01 2017

02 2017

03 2017

04 2017

05 2017

06 2017

07 2017

08 2017

09 2017

10 2017

11 2017

12 2017


2 0 0 6 1 0 3 2 1 2


238 289 233 218 186 215 231 202 182 189


6 5 5 7 5 5 8 7 4 6

ATB terapie S.uberis(ks)

2 0 0 2 1 0 2 0 0 1


1 0 0 2 0 2 1 1 0 1


0 1 0 1 1 0 2 3 1 1


0 1 1 0 1 1 2 2 1 0


1690 728 572 1820 962 650 2158 1092 416 988

Farma C, Streptococcus uberis

Měsíc v roce

Sestavení protokolů léčby, časový harmonogram rady z praxe

Při zavádění systému kontroly mastitid z první kontroly užitkovosti prověříme

PM testem krávy nad 1 milion SCC

Z nich bez nálezu bakterií bude cca 60% (většinou s ireverzibilně poškozeným

parenchymem mléčné žlázy) – bez rizika nakažení pro zdravé dojnice

Zbývajících cca 40% bude pozitivních na nárůst patogenů

U krav se záchytem mikroorganismů neléčitelných ATB - M. bovis, Pseudomonas,

Prothoteca, Nocardia identitikujeme postiženou čtvrť (čtvrťové hodnoty SB) a

provedeme nucené zasušení

U krav s dlouhodobým působením S.aureus, S.uberis, S.parauberis je

pravděpodobné selhání jakékoli léčby – zvážíme vyřazení ( kriteria hodnocení –

kolik měsíců jsou zvýšené SCC, počet postižených čtvrtí, fáze laktace)

Odhad doby intenzivního systému kontroly mastitid do cíleného zlepšení

parametrů (cca 3 měsíce u S.agalactiae, 9 měsíců u S.aureus, 2 roky u S.uberis a

S.parauberis)

Management farmy musí mít vůli a prostředky k udržení nastaveného systému

Závěrem…

Odlišnost mastitid je daná nejen klinickým rozlišením, ale musíme zohlednit i

přítomnost a druh etiologického agens

Každý patogen mléčné žlázy má svoji strategii, jak čtvrť infikovat, jak se bránit

obranným reakcím imunitního systému dojnice, jak přežít útok terapeutik a jak se

dál šířit.

Z odborného a ekonomického hlediska není správné v chovu mléčného skotu hledat

univerzální antibiotikum na všechny mastitidy, preferujeme zavedení více protokolů

léčby, používání jednodruhových ATB, antibiotika s indikačním omezením

aplikujeme jen v odůvodněných případech

PM test barevně odliší více než 30 druhů patogenů mléčné žlázy. Druhová

diagnostika původce mastitidy nám umožňuje minimalizovat náklady na léčbu při

vlastní ceně PM testu 85 Kč

Děkuji za pozornost ...

step by step - vvs verměřovice s.r.o. · 2018. 10. 14. · staphylococcus aureus enterococcus sp....

Documents