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Técnicas de Reproducción Asistida en Ovejas y Cabras
INSEMINACIÓN ARTIFICIAL Y
TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
Inseminación artificial
Consiste en el depósito de los espermatozoides en el aparato reproductor de la hembra por medios distintos a la cópula
Antecedentes
1780 en Italia Spallanzani obtuvo cachorros de sabueso
1907 en Rusia y Japón buenos resultados experimentales en vacas, borregas, cerdas, conejas
1931 en Rusia, 90 % de fertilidad en 31,900 ovejas inseminadas
1937-1939 inicia el uso práctico a nivel mundial de la inseminación artificial en ovejas y vacas
Antecedentes
A partir de 1962 se inseminan cabras lecheras en EU
1965 se aplica en gran escala en diferentes especies domésticas, en la ex Unión Soviética se llegaron a inseminar 47 millones de ovejas
Desde los 80’s en Francia, España, Australia, Inglaterra, Nueva Zelanda y EU se inseminan anualmente miles de vacas, ovejas, cabras, cerdas y diferentes especies de cérvidos
En México se usa principalmente en vacas lecheras
Ventajas de la inseminación artificial
Mejoramiento genético
Reducción del número de sementales
Aumento de la eficiencia reproductiva en las hembras
Prevención de enfermedades por traslado y por contacto sexual
Calendarización de actividades (empadre, partos)
Conservación prolongada del semen y generación de ingresos por su
venta
Desventajas de la inseminación artificial
Costo
Uso de hormonas y equipo relativamente sofisticado
Personal capacitado
Inferiores parámetros reproductivos (fertilidad y prolificidad)
Tipo de semen
• Semen fresco 24 a 30 °C (1 día)
• Semen enfriado 5 °C (2-3 días)
• Semen congelado - 196 °C (años)
Inseminación artificial
Tipo de semen
Técnica inseminación fresco enfriado congelado
--------------------------------------------------------------------------------------------------------
Inseminación vaginal 300 x 106 No efectivo No efectivo
(0.25 - 0.50 ml)
Inseminación cervical 100 x 106 150 x 106 No efectivo en ovejas
(0.12 - 0.25 ml) ¿Efectivo en cabras?
Inseminación intrauterina 50-75 x 106 100-150 x 106 25-35 x 106
(0.12 - 0.25 ml) (a la descongelación)
2-5 x 106
Inseminación vaginal
No es recomendable realizarla ni con semen fresco.
• Porcentajes de fertilidad muy bajos
0 - 20 %
Inseminación cervical
Hasta antes de la laparoscopía era la técnica más usada en ovejas
• Es preferible el aplicar semen fresco
• En cabras se emplea también para semen congelado Porcentajes de fertilidad variables 20 - 70 %
Inseminación cervical
La inseminación sencilla o única se hace 12 horas después de detectar las hembras en celo
Doble IA a las 12 y 24 horas, al menos 10% más fertilidad
Sin detección de calores la inseminación es a tiempo fijo, alrededor las de 56-60 hrs de retirada la P4
Se han probado diferentes métodos para dilatar y atravesar el cérvix: Aplicadores con punta recta, doblada o enroscada Agujas largas para llegar directamente al útero Dilatadores y pinzas para sujetar la os externa
Inseminación transcervical
Métodos para atravesar el cérvix: Uso de catéteres flexibles
Inseminación transcervical
Inseminación intrauterina
El depósito del semen puede hacerse mediante laparotomía o laparoscopía
La laparotomía medio ventral es una cirugía mayor, permite exteriorizar el útero y depositar el semen en su interior, a través de una aguja catéter
Es una técnica efectiva, mal realizada puede originar infecciones, adherencias o hernias
Inseminación intrauterina
La laparoscopía es una cirugía invasiva menor, con prácticamente un nulo periodo postoperatorio
Permite el uso tanto de semen fresco y enfriado, pero sobre todo la masificación del uso de semen congelado
Desventajas: equipo y material costoso, capacitación
Inseminación intrauterina
Se puede hacer a las 12 hrs de detectado el celo
Sin detección de calores la inseminación es a las 56-60 hrs de retirada la P4
En ovejas y cabras superovuladas se insemina a las 48 horas de retirada la P4 y con al menos 100 x 106 (viables)
La fertilidad en las ovejas y cabras inseminadas intrauterinamente con semen congelado varía entre el 30 y el 60 %
Con semen fresco aplicado intrauterinamente la fertilidad no debe ser menor al 60 %
TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
ANTECEDENTES
1890 primer experimento sobre transferencia de
embriones en conejos
ANTECEDENTES
1932 transferencia de embriones en ovejas y
cabras
1970 a nivel comercial en Inglaterra, Estados
Unidos, Australia, Nueva Zelanda, Francia,
Sudáfrica, Canadá y Brasil
VENTAJAS
Incremento del número de animales superiores
genéticamente
En algunas hembras se obtiene en una sola
ocasión, un mayor número de crías de las que
podría tener en toda su vida
VENTAJAS
Formación de rebaños productivamente uniformes
En México se usa en ovejas y cabras principalmente
para multiplicar animales con fenotipo de interés
Se puede usar para la conservación de especies en
peligro de extinción
Permite un mejor entendimiento de eventos específicos
de la gestación
DESVENTAJAS
Es una técnica costosa en cuanto a materiales y
equipo
Es necesario que sea realizada por personal
capacitado
Los resultados presentan grandes variaciones
Etapas de la transferencia
de embriones
Sincronización de donadoras y receptoras
Superovulación y monta o inseminación artificial
de donadoras
Recolección y evaluación de embriones
Transferencia de embriones a receptoras
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Primavera
Verano
Otoño Invierno
Invierno
Primavera
Verano
Otoño
dic ene feb mar abr may jun jul ago sep oct nov dic ene feb mar abr may jun jul ago sep oct nov
REPRODUC A N E S T R O
REPRODUCCIÓN
A N E S T R O
REPRODUC
anestro vs estación reproductiva
Transferencia de embriones
Sincronización de donadoras y receptoras
• Uso de una o dos esponjas o CIDR´s
(Niveles constantes de P4 en sincronización y postmonta)
Superovulación
Gonadotropinas exógenas
a) FSH (Folltropin 180-200 mg, Pluset 200 UI, Ovagen 8.80 mg)
• Dosis total dividida en 6 a 8 aplicaciones I.M.
• Origen porcino vs ovino
• Esquemas constantes vs decrecientes
• Administración única S.C.
• Uso de inyectores o micro-bombas osmóticas
• Dosis mayores de FSH, combinación con eCG
PROTOCOLO “ESTANDAR” PARA CASITODAS LAS RAZAS DE OVEJAS Y CABRAS
DONADORAS RECEPTORAS
1 AM COLOCAR ESPONJA 1 AM COLOCAR ESPONJA
10 FSH AM 20 UI, PM 15 UI (IM) 11 PM RETIRAR ESPONJA
11 AM 15 UI, PM 15 UI + 300 UI eCG (IM)
12 AM 10 UI, PM 10 UI
13 AM 5 UI, PM 5 UI 13 AM/PM DETECTAR ESTROS
12 AM RETIRAR ESPONJA 18 PM DIETAR (SIN ALIMENTO)
13 Y 14 AM/PM DETECTAR ESTRO 19 AM/PM DIETAR (SIN AGUA NI ALIMENTO)
Y MONTAS
20 TRANSFERIR EMBRIONES
18 PM DIETAR (SIN ALIMENTO)
27 A 30 AM/PM DETECTAR ESTRO
19 AM/PM DIETAR (DAR MONTA O REPROGRAMAR)
(SIN AGUA NI ALIMENTO)
45 - 50 DIAGNÓSTICO DE GESTACIÓN
20 RECOLECTAR EMBRIONES + PGF2α (ULTRASONOGRAFÍA DE IMAGEN
21 AM PGF2α
22 A 25 AM/PM DETECTAR ESTRO
(DAR MONTA O REPROGRAMAR)
FSH 20 UI = 1.0 ml
eCG 200 UI = 1.0 ml
PGF2α 250 µg = 1.0 ml
Superovulación
Gonadotropinas exógenas
b) eCG Una sola aplicación de 1500-3000 UI
• Favorece presentación de folículos anovulatorios y
• regresión lútea prematura
Dosis reducidas, uso de anti-eCG, combinación con GnRH
Resultados aceptables en borregas Pelibuey y Panza Negra
Factores que pueden afectar la respuesta a la superovulación
Desarrollo folicular
En las ovejas y las cabras se han observado dos oleadas foliculares
durante la fase lútea y una durante la fase folicular, con un intervalo
de 4 a 6 días entre ellas.
Factores que pueden afectar la respuesta a la superovulación
Presencia de folículos dominantes
La presencia de un folículo dominante origina disminución en tasa ovulatoria
y en calidad embrionaria.
La dominancia folicular en ovejas y cabras puede ser compartida por varios
folículos (codominancia).
Esquemas de sincronización con GnRH y PGF2 (día cero).
Factores que pueden afectar el número y la calidad de los embriones recolectados
Folículos anovulatorios y cuerpos lúteos con regresión prematura
• Niveles elevados de E2 originan fallas en el transporte de gametos y
fertilización (ovocitos).
• Cuerpos lúteos de mala calidad o con lisis prematura originan la recolección
de embriones atrasados en desarrollo y calidad no transferibles
• Bajos niveles de P4 afectan desarrollo y viabilidad embrionaria (IGF’s).
P4 postmonta
Factores que pueden afectar el número de los embriones recolectados
Número de montas dirigidas o inseminaciones.
Debido a la presencia de un mayor número de ovocitos se necesitan altas y
constantes concentraciones de espermatozoides.
Al menos una monta dirigida cada 8 horas.
IA cervical a las 12 y 24 horas de detectado el celo con al menos 300 x 106 de
espermatozoides.
IAIU a las 12 horas de detectado el celo con 50 x 106 si es semen fresco o al
menos 100 x 106 si el semen fue congelado.
Recolección de embriones
Técnica utilizada y experiencia
a) Laparoscopía (difícil aún con práctica).
b) Laparotomía medio ventral (adherencias, hernias).
c) Combinar laparoscopía y mini-laparotomía medio ventral
Gestar a las donadoras
Recolección de embriones
Dirección del lavado
a) De cuerno del útero hacia oviducto
b) De oviducto hacia cuerno del útero
Clasificación de las estructuras recolectadas
grado desarrollo clave calidad clave
Óvulo 1 Excelente o bueno 1
Embrión de 2 a 16 células 2 Regular 2
Mórula temprana 3 Pobre 3
Mórula compacta 4 No transferible 4
Blastocisto inicial 5
Blastocisto maduro 6
Blastocisto expandido 7
Blastocisto en eclosión 8
Evaluación de embriones
Grado de desarrollo, calidad y tipo de embrión
a) Se prefiere la transferencia de mórulas tempranas hasta blastocistos
expandidos calidades 1 y 2.
b) Mayor viabilidad en embriones frescos que en congelados.
c) Transferir en fresco los de menor desarrollo y calidad, dejar los
mejores para congelar.
d) Combinar buenos y malos, buenos y no transferibles.
Transferencia de embriones
Embriones frescos vs congelados y número de embriones.
OVEJAS
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78
38.4
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Transferencia de embriones
Factores que pueden afectar la viabilidad embrionaria
Técnica de transferencia y experiencia.
Transferencia de embriones
Factores que pueden afectar la viabilidad embrionaria
Sincronía entre el estro de la donadora y la receptora
(no más de 24 horas de asincronía).
Presencia y calidad del cuerpo lúteo en la receptora
(dosis medias de eCG en la sincronización, 200-300 UI).
Transferencia de embriones
Factores que pueden afectar la viabilidad embrionaria
Monta previa en receptoras de embriones (excelente en cabras)
Transferencia de embriones Factores que pueden afectar la viabilidad embrionaria
Condición corporal de donadoras y receptoras
(2.5 a 3 en escala de 5)
Estrés en donadoras y receptoras.
Siempre debe evitarse el maltrato a los animales siempre (no jalarlas
de la lana, pelo o de las orejas).
El estrés favorece secreción de cortisol , oxitocina y PGF2.
