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TÉCNICAS
INMUNOLÓGICAS
CATEDRA DE MICROBIOLOGIA Y
PARASITOLOGIA
FOUBA
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TECNICAS INMUNOLÓGICAS
CELULAR HUMORAL
CÉLULAS SENSIBILIZADAS ANTICUERPOS CATEDRA DE MICROBIOLOGIA Y
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Pruebas Cutáneas o
Intradermorreacciones
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Prueba de tuberculina de Mantoux ó Reacción de PPD
Charles Mantoux (1877-1947) médico francés 1910
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AFINIDAD
ESPECIFICIDAD
SENSIBILIDAD
TECNICAS INMUNOLÓGICAS Propiedades:
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AFINIDAD
Es la fuerza de unión entre el Ag y el Ac.
Específicamente entre el Fab
del Ac y el epítope del Ag. CATEDRA DE MICROBIOLOGIA Y
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ESPECIFICIDAD
Es la capacidad de una técnica para determinar entre
2 Ag diferentes.
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SENSIBILIDAD Es una medida que indica
cuan eficaz es una técnica para poner de manifiesto
pequeñas cantidades de la incógnita
(ya sea un Ag o un Ac) CATEDRA DE MICROBIOLOGIA Y
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DETECCIÓN DE
REACCIONES Ag - Ac
ANTÍGENOS ANTICUERPOS
• Proteínas
• Glicoproteínas
• LPS
• Inmunoglobulinas
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ANTÍGENOS
Tienen 2 características básicas:
1º Inmunogenicidad: capacidad de generar Ac.
2º Especificidad :
capacidad de unirse a ellos.
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INMUNOGLOBULINAS (ANTICUERPOS) ESQUEMA
ANTÍGENOS
EN EL SUERO HAY GLOBULINAS ALFA, BETA Y GAMMA.
“GAMMAGLOBULINA”
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TIPOS DE INMUNOGLOBULINAS
IgM:
• ES LA PRIMERA EN SINTETIZARSE CONTRA EL ANTÍGENO.
• ES PENTAMÉRICA Y MUY GRANDE.
• FIJA EL COMPLEMENTO.
IgG:
• ES LA SEGUNDA EN SINTETIZARSE, LA MÁS ABUNDANTE Y
LA MÁS ESPECÍFICA.
• PUEDE ATRAVESAR LA PLACENTA.
• ES NEUTRALIZANTE Y FIJA EL COMPLEMENTO.
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ANTICUERPOS • POLICLONALES
Pabs • MONOCLONALES
Mabs 1975 Dres. Neils Jerne, G Koehler,
Cesar Milstein
ESPECIFICIDAD
CLONALIDAD
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SISTEMAS DE DETECCIÓN
AGLUTINACIÓN
PRECIPITACIÓN
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HEMAGLUTINACIÓN
SISTEMAS DE DETECCIÓN
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DETECCIÓN DE GRUPO ABO
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En otros ensayos la visualización
del complejo se hace marcando
uno de los reactivos
(Ag. o Ac.),
con alguna sustancia detectable.
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SISTEMAS DE DETECCIÓN
• INMUNOFLUORESCENCIA
• ELISA (Enzime Linked ImmunoadSorbent
Assay) o Ensayo inmunosorbente ligado a
enzimas.
• RIA o RADIOINMUNOANÁLISIS CATEDRA DE MICROBIOLOGIA Y
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INMUNOFLUORESCENCIA
La marcación se realiza con una sustancia fluorescente.
Para la observación se usa un microscopio de fluorescencia.
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Fluorocromos
• Isotiocianato de Fluoresceína
• Rodamina
• Auramina O
• Naranja de acridina
• Blanco de calcofluor CATEDRA DE MICROBIOLOGIA Y
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INMUNOFLUORESCENCIA SISTEMAS DE DETECCIÓN
DIRECTA INDIRECTA
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ELISA (Enzime Linked ImmunoadSorbent Assay)
Ensayo inmunosorbente ligado a enzimas
La marcación se realiza con una enzima,
de manera que al agregar un cromógeno y el
sustrato de dicha enzima, se puede
calcular la cantidad de complejos formados
midiendo la intensidad del color producido.
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COLORIMÉTRICO
SISTEMAS DE DETECCIÓN ELISA
Simple: Ac Sandwich: Ag CATEDRA DE MICROBIOLOGIA Y
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ELISA
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COLORIMÉTRICO: ELISA
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SISTEMAS DE DETECCIÓN COLORIMÉTRICO ELISA
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RIA
(Radioimmunoassay)
Radioinmunoensayo
La marcación es por un isótopo radiactivo,
de manera que en este caso medimos
radiación asociada al complejo.
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RIA (Radioimmunoassay)
Radioinmunoensayo
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CONVERSIÓN SEROLÓGICA ó
SEROCONVERSIÓN
• SE TOMAN 2 MUESTRAS DE SUERO DEL MISMO
PACIENTE, UNA EN EL MOMENTO DE LA CONSULTA
Y LA SEGUNDA A LOS 15 DÍAS.
• LAS DOS MUESTRAS SE PROCESAN JUNTAS Y
POR EL MISMO MÉTODO.
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TITULACIÓN SUERO
PURO 1 : 2 1 : 4 1 : 8 1 : 16
TÍTULO: 1:4
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RESPUESTA “PRIMARIA” DE ANTICUERPOS
14 DÍAS ENTRA EL ANTÍGENO
MESES
IgM
IgG
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RESPUESTA “SECUNDARIA” DE ANTICUERPOS
2 DÍAS
ENTRA EL ANTÍGENO MESES
IgM
IgG
ESTO SE DEBE A LA MEMORIA INMUNOLÓGICA Y SIRVE PARA LA
VACUNACIÓN Y PARA EL DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO DE UNA
ENFERMEDAD INFECCIOSA (ej: DOSAJE DE IgM PARA UNA INFECCIÓN
AGUDA Y DE IgG PARA UNA INFECCIÓN PASADA)
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Esta presentación fue realizada por Laura Gliosca y María Inés González
2011 CATEDRA DE MICROBIOLOGIA Y
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