MINISTERE DE LEDUCATIONREPUBLIQUE DU MALI NATIONALE Un Peuple Un But Une Foi UNIVERSITE DE BAMAKO FACULTE DE MEDECINE DE PHARMACIE ET DODONTO-STOMATOLOGIE Anne universitaire : 2004 2005N . . .

TITRE :

THESE Prsente et soutenue publiquement le dcembre 2004 devant la Facult de Mdecine, de Pharmacie et dOdonto-Stomatologie Par Monsieur Boubacar Souley AMADOU Pour obtenir le grade de Docteur en Pharmacie (Diplme dEtat) JURY Prsident :ProfesseurMoussaHARAMAAssesseurs :Professeur Ynimgu Albert. DEMBELE Docteur Ibrahim MAIGA Directeur de thse : Professeur Drissa DIALLO

ETUDE DE LA PHYTOCHME ET DE8 ACTVTE8BOLOGOUE8 DE Combretum gutnosum Perr. ex DC {COMBRETACEAE} DEDCACESET DEDCACESET DEDCACESET DEDCACESET REMERCEMENTS REMERCEMENTS REMERCEMENTS REMERCEMENTS DEDICACES Au nom dAllah, Le Clment, Le Misricordieux GloireToi !Nousnavonsdesavoirquecequetunousasappris.CertescestToi lOmniscient, le Sage : Sourate 2, Verset 32 (Saint Corant).Louange et Gloire Dieu, le Tout Puissant, qui nous a permis de mener bien ce modeste travail. PrireetbndictionsdAllahsurleprophteMohamed,PaixetSalutsurlui,leseaudes prophtes, ainsi que ses compagnons, pour nous avoir apport une religion comme lIslam A mon pre El hadjSouleyAMADOU :Jai toujours trouv auprs de toi, comprhension et soutien. Tes prires et tes conseils ne mont jamais fait dfaut tout au long de mes tudes. Trouve travers ce modeste travail, la rcompense de ton affection, de tes sacrifices et de ta patience. A ma mreFatouma MOUMOUNI : Silesparentsdoiventregretterquelquechoseunjour,cestdenavoirpasassezfaitpour lducation de leurs enfants ; les enfants de navoir pas assez aim leurs parents.Maman,jenoublieraijamaistessagesconseilsprodigusmonendroit.Cesttoiquidisais quon ne remercie pas ses parents. Seulement, je ne trouve pas aujourdhui un moyen dviter de te remercier pour tout ce que tu as fait pour nous. Ton souci primordial a toujours t la russite detesenfants.Quetessacrifices,despeinesettesprivationstrouventleurrcompensedans laboutissement de ce modeste travail qui est aussi le fruit de ta persvrance, de ton courage et surtout de ta patience. Ce travail est galement le fruit de ton amour, tes bndictions et surtout ta bonne ducation. Je voudrais travers ce modeste travail, te rendre un hommage mrit et te dire combien je suis fier de lducation que tu nous as donne. Puisse le Tout Puissant nous accorder de tavoir encore longtemps auprs de nous pour que tu puisses bnficier de lombre de larbre que tu as si jalousement protg etentretenu. A mon oncle et mes tantes : Issa, Kadi et HaouaMOUMOUNI : Vous mavez beaucoup soutenu travers vos conseils, vos encouragements et vos bndictions. Trouveztraverscemodestetravail,lexpressiondemaprofondereconnaissanceetle tmoignage de mon profond respect A mes frres et surs : Soumana, Abdoulaye, Omar et NafissaSOULEYAMADOU : Aforcedecourageetdepersvrance,jachveaujourdhuiuntravailquiestaussilevtre. Puisselaffection,laconfianceetlasolidaritquinousanimentresterinbranlables. Fraternellement ! A la mmoire de mes frre et sur : Feus Soumaila etRoukailaSOULEYAMADOU : Vous nous avez quitts trs tt, mais votre souvenir toujours vivace dans mon cur ma soutenu tout au long ce travail. Ce travail vous est ddi en tmoignage de mon profond respect pour vos mes respectives. Dormez donc en paix. A la mmoire de ma grand-mre : Feue Mariama ABDOU : Les mots me manquent pour texprimer toute ma reconnaissance. Ta vie durant, tu nas mnag aucun effort pour ma russite. Je noublierai jamais tes conseils, tes bndictions, tes privations et surtout tes sacrifices consentis mon gard. Tu as su minculquer les vertus du travail bien fait, lamourduprochainetlhumilit.Cetravailtestddientmoignagedemonprofondrespect pourtonmeetenreconnaissancedetonaffection.DorsenpaixGrand-mreetqueleTout Puissant taccepte dans son paradis. A mes oncles et tantes, pour vos conseils et vos encouragements. Recevez travers ce modeste travail lexpression de ma profonde gratitude et de ma sincre reconnaissance. Ames cousins et cousines : Reconnaissance infinie. A mes neveux et nices .

A mes amis et frres : Papa Maga, Hamani Idrissa,Mourtala Assao : Plusque des voisins, nous sommes des frres. Restons donc unis. Merci pour le soutien moral. Amesamisdenfance :Jegarderaitoujoursensouvenirlesmomentsquenousavonspasss ensemble. Que Le Tout Puissant nous garde aussi longtemps ensemble et quil guide nos pas sur le droit chemin ! A mes camarades et amis : Adamou Saidou, Moustapha Tahirou, Souleymane Aouami, ZiboDiawara,ZaraKala,HamsatouDjermakoye,RamatouBoubacar,HadizaGao,Hamani Idrissa, Mohamed Maiga, Abdoul Sangar, Hamane Tour, Drissa Sidib, Pinda Thiam, Djamila Bello,HalimaSombo,AissaCiss,AbdoulayeDicko,RokiaDembel. Continuons dans la voie de la consolidation de nos liens damiti et de fraternit gardons toujours lesprit dquipe. Bonne chance nous tous. Amicalement. Amescamaradesduclubdesamis:GarbaMamaneSalissou,OumarouAboubacar, Mourtala Assao, Ali Kalilou. Restons solidaires, nous gagnerons inch Allah. A mes cadets : Dominique ARAMA, Mariam, Niar. Du courage et bonne chance. Soyez surtout persvrants et patients. A mes amis de linternat de la FMPOS : Toute ma gratitude. A tous ceux qui se rappellent encore de mon nom. MENTION SPECIALE A lUniversit dOslo (Norvge) : pour le soutien matriel et financier travers le projet CNRST/ NUFU Plantes mdicinales (Rpublique du Mali / Gouvernement Norgvien). Au Professeur Berit Smestad PAULSEN de lUniversit dOslo, pour les conseilstechniques que vous nous avez prodigus lors de votre sjour au Mali. Veillez accepter ce travail comme le fruit de votre apport inestimable tout au long de sa ralisation. A lInstitut des Maladies Tropicales de Bles en Suisse pour son concours technique dans la ralisation de ce travail Au Professeur Drissa DIALLOVotre souci majeur a t laboutissement de ce travail qui a ncessit votre concours sous toutes les formes. Grce vous, nous avons appris la rigueur scientifique et lamour du travail bien fait. PuisseleToutPuissantvousaiderraliservosprojetslespluschersetvousaccorderlongue vie. Respectueusement. Au Docteur RokiaSANOGO Nous garderons de vous le souvenir dun matre disponible, toujours lcoute de ces lves. Soyez en donc remercie. Au Docteur AbabacarMAIGA Nous avons eu le privilge de bnficier de votre aide tout au long de ce travail. Veillez recevoir en retour nos sentiments de profonde reconnaissance. Au Docteur Ibrahim MAIGA, chef du Service du Laboratoire de Biologie Mdicale de LHpital National du Point G et tous les Techniciens de ce Service pour leur esprit de collaboration et de courtoisie dont ils ont su faire montre tout au long de notre sjour. A mon sauveur et grand frre : Docteur Abdoulaye Adamou : Je noublierai jamais ce que vous avez fait pour moi tout au long de la ralisation de ce travail. Vos sages conseils techniques ont beaucoupcontribularalisationdecetravail.QueDieuvousaideraliservosprojetsles plus chers ! A tout le personnel du laboratoire du Dpartement Mdecine traditionnel : Mr Famolo DIARRA, Mr Kassim COULIBALY, Mme MAIGA, Mr Seydou DEMBELE, Mr. Karim FOFANA, et lquipe de la production,pour leur disponibilit. AtouslescamaradesfinalistesenpharmaciedelapromotionProfesseurBoubacarSidiki CISSE pour le soutien moral. A mes camarades internes du laboratoire du DMT : JudithMOGODE,Oumar SANGARE,SoryDIALLO,YayaTGOLA,SandrineFOTSING,AissataDIALLO,FatimOUATTARA, AminataKEITA,AmadouDIALLO,NouhounKONATE,ArimaOUSMANE,GreteHOPE,MoussaDOUMBIA,MmeCOULIBALYMariam,pourlesmomentsagrablesetinoubliables passs ensemble.Bonne carrire professionnelle tous. Amicalement ! REMERCIEMENTS AuMalietaupeuplemalien :Nousnoublieronsjamaislesmomentsmmorablespasss danscepays,symboledunetraditiondhospitalitlgendaire.PuisseleToutPuissantveiller longtemps sur ce pays qui, nous devons beaucoup Trs cordialement! AuNigeretsonpeuple :Pouravoirmisnotredispositionlesmoyensncessairestoutau long de notre sjour en terre malienne, dans le cadre de nos tudes. AucorpsprofessoraldelaFacultdeMdecine,dePharmacieetdOdontostomatologie pour la qualit de la formation reue. A mes enseignants de lcole primaire, du collge et du lyce. A mon matre de lcole coranique . A mon oncle Mr Mohamed KANTE et son pouse Mme KANTE Maimouna TOURE Veillez accepter ce travail, comme le fruit de tous les efforts consentis mais aussi lexpression de ma profonde gratitude et de ma reconnaissance infinie. AtouslesEtudiantsnigriensauMalipourlesoutienmoral.QueDieunousaideatteindre nos objectifs dans ce pays ! Cordialement. A toutes les Communauts africaines au Mali : pour lesprit de collaboration et de courtoisie. A lassistance pour le soutien moral. Quetousceuxqui,deprsoudeloin,ontcontribudirectementou indirectementlaralisationdecemodestetravail,trouventicinos sentimentsdeprofondegratitudeetdereconnaissanceinfinie.Trs cordialement. HOMMAGEANOSHOMMAGEANOSHOMMAGEANOSHOMMAGEANOS MATRESETJUGES MATRESETJUGES MATRESETJUGES MATRESETJUGES A notre matre et prsident du jury : Professeur MoussaHARAMA : Professeur titulaire de chimie organique la facult de mdecine, de pharmacie et dodontostomatologie Honorable matre, cest un rel plaisir pour nous que vous ayez accept de prsider notre jury de thse. Votre rigueur scientifique, votre humilit et vos qualits humaines ne font lombre daucun doute. Veillez accepter cher matre, nos sentiments de sincre reconnaissance. A notre matre et juge : Professeur Ynimgu Albert DEMBELE: Matre de confrences agrg en chimie organique la facult de mdecine, de pharmacie et dodontostomatologie Secrtaire principal de la facult de mdecine, de pharmacie et dodontostomatologie Honorable matre, cest un immense plaisir que vous nous faites en acceptant de participer lamlioration de la qualit de ce modeste travail.Veillez accepter cher matre nos sincres remerciements et notre infinie reconnaissance. A notre matre et juge : Docteur Ibrahim MAIGA Matre assistant de bactriologie -virologie la facult de mdecine, de pharmacie et dodontostomatologie Chef de service du laboratoire de biologie mdicale et hygine hospitalire de lhpital national du Point G Honorable matre, nous sommes trs sensible lhonneur que vous nous faites en acceptant de juger ce modeste travail. Votre simplicit et votre rigueur scientifique font de vous un matre aim et respect de ses lves. Soyez assur cher matre, de notre profonde reconnaissance. A notre matre et directeur de thse : Professeur Drissa DIALLO : Matre de confrences agrg de pharmacognosie la facult de mdecine, de pharmacie et dodontostomatologieChef de service du dpartement mdecine traditionnelle de linstitut national de recherche en sant publique Honorable matre, la spontanit avec laquelle vous avez accept de diriger ce travail nous rconforte plus dun gard. Notre sjour dans votre service nous a permis dapprcier en vous vos imminentes qualits humaines et scientifiques : disponibilit, ponctualit, rigueur et amour du travail bien fait. Veillez accepter cher matre, le tmoignage de notre profond respect et de notre sincre reconnaissance. Table des matires Pages CHAPITRE 11 Introduction....2 Motivations...3 Objectifs....3 CHAPITRE 2 : TRAVAUX ANTERIEURS.... 4 2.1 : Monographie de Combretum glutinosum Perr. ex DC...5 2.2 :Les antioxydants...13 2.3 : Les antifongiques...23 2.4 : Les infections bactriennes....29 2.5 : Les inflammations..36 2.6 :Le paludisme..42 CHAPITRE 3 : TRAVAUX PERSONNELS.49 3.1 : Mthodologie..50 3.1.1 : Etudes phytochimiques.....50 3.1.1.1 : Matriel vgtal.50 3.1.1.2 : Identification de la matire premire....50 3.1.1.3 : Ractions de caractrisation.......51 3.1.1.4 : Extractions .60 3.1.1.4.1 : Matriels..60 3.1.1.4.2 : Extraction avec leau....................................................................................................60 Dcoction leau..60 Macration........60 3.1.1.4.3 : Macration avec lthanol 80%.................................................................................61 3.1.1.4.4 : Extraction avec les solvants polarit croissante.....62 3.1.1.5 : Chromatographe sur couche mince.........64 3.1.2 :Tests biologiques.....65 3.1.4.1 : Dtermination de lactivit antioxydante......65 SOMMARE SOMMARE SOMMARE SOMMARE 3.1.4.2 : Dtermination de lactivit antifongique66 3.1.4.3 : Dtermination de lactivit antibactrienne..............71 2.1.4.4 : Dtermination de lactivit anti-inflammatoire....73 2.1.4.5 : Dtermination de lactivit antiplasmodiale..76 3.2 : Rsultats... .78 3.2.1 :Etudes phytochimiques....78 3.2.1.1 : Ractions de caractrisation78 3.2.1.1.1 : Ractions en tubes sur la poudre des corces de tronc........78 3.2.1.1.2 : Dosage de certaines substances.......79 3.2.1.1.3 : Ractions en tubes sur la poudre des corces de racines..81 3.2.1.1.4 : Dosages de certaines substances...81 3.2.1.2:Extractions..84 3.2.1.3:Chromatographie sur couche mince....85 3.2.2: Tests biologiques.92 2.2.2.1:Dtermination de lactivit antioxydante.92 3.2.2.2:Dtermination de lactivit antifongique..95 3.2.2.3:Dtermination de lactivit antibactrienne..96 3.2.2.4 : Dtermination de lactivit anti-inflammatoire100 3.2.2.5 : Dtermination de lactivit antiplasmodiale.103 ANALYSES ET DISCUSSIONS.105 CONCLUSION......112 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES....115 ANNEXES.....122 RESUME....124 Lexique des abrviations et symboles chimiques ADN :Acide dsoxyribonuclique AINS : Anti-inflammatoire non strodien AIS :Anti-inflammatoire strodien Al :allis ARN :Acide ribonuclique ARNm : ARN messager ARNt :ARN de transfert : beta : suprieur AUG :Augmentation BAAR :Bacille acido alcoolo rsistantB A W : Butanol acetic acid water CCM : Chromatographie sur couche mince Cm :centimtre CNAM : Centre national dappui la lutte contre la maladie CO2 : Gaz carbonique CuSO4 :Sulfate cuivrique DPPH :1,1 diphnyl 2 picrylhydrazyle DCM :Dichloromthane DMSO :Dimthylsulfoxide DMT : Dpartement Mdecine Traditionnelle C : Degr Celcius EtOH : Ethanol FeCl3 : Chlorure ferrique FeSO4 : Sulfate ferreux FMPOS : Facult de mdecine, de pharmacie et dodontostomatologie g : gramme HHDP : Acide hexahydroxydiphnique HCCl3 : Chloroforme HCl :Acide chlorhydrique IC50 :Concentration inhibitrice 50 INH : Inhibition INRSP : Institut National de Recherche en Sant Publique KOH :hydroxyde de potassium kg : kilogramme LDL :Low density lipoprotein MeOH : Mthanol mg : milligramme MH :Mueller Hinton ml :millilitre mm :millimtre mn : minute MTA :Mdicament traditionnel amliorMTT :Mthylthiozoylttrazolium M/V : Masse par volume N2 : Azote molculaire NaHCO3 : Hydrognocarbonate de sodium nm : nanomtre O2 :Oxygne molculaire 1O2 :Oxygne singulet OMS :Organisation mondiale de la sant PE : Prise dessai % : pour cent q s p :Quantit suffisante pour Rf :Rapport frontal RM :Raymond Marthoud SD:Dviation standard SDA :Sabouraud Dextrose Agar SDB :Sabouraud Dextrose Broth SIDA : Syndrome dimmunodficience acquiseT : Tare g: microgramme l : micro litre Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 1 CHAPTRE 1 Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 2 Introduction LusagedelamdecinetraditionnelleesttrsrpanduenAfrique.Sonaccessibilit,sa disponibilitetsapopularitnefontlombredaucundoute,danslamesureoenviron80% dAfricains y ont recours pour leurs besoins de sant. Parailleurs,selonlOrganisationMondialedelaSant(OMS),prsde6377espcesde plantes sont utilises en Afrique, dont plus de 4000 sont des plantes mdicinales, ce qui constitue 90 % de la mdecine traditionnelle en Afrique (OMS, 2003). Ces dernires annes, plusieurs molcules isoles des plantes sont devenues des mdicaments efficaces:citonsparexempleletaxolissudeTaxusbaccataL.(Taxaceae)poursesproprits anticancreuses remarquables (cancer de lovaire et cancer du sein) et de lartmisinine isole de Artemisia annua L. (Asteraceae) pour ses proprits antipaludiques (Hostettmann, 2001). Au Mali, le Dpartement Mdecine Traditionnelle (DMT) de lInstitut National de Recherche enSantPublique(INRSP),centrecollaborateurdelOMS,travailleaveclesthrapeutes traditionnelsafindemettreladispositiondespopulations,desmdicamentstraditionnels amliors(MTA)basesdeplantes.Ainsi,septMTAonttdjmissurlemarch pharmaceutique (Diallo, 2000). CombretumglutinosumPerr.ExDC,estuneplanterputepoursesdiversesvertus.Cette plante,quiestauSngallespcelaplusprescriteparlesthrapeutestraditionnelsestutilise traditionnellementpourtraiterdiversesaffectionsnotammentlepaludisme,lhypertension artrielle, lanmie, la fivre bilieuse hmaturique, la blennorragie, la syphilis, les plaies, la toux, lictre, les pneumonies, les spasmes (Traor, 1983 ;Malgras,1992). Nosinvestigationsontconcernlacaractrisationdesdiffrentsgroupeschimiquesetles activits antioxydante, antifongique, antibactrienne, anti-inflammatoire et antiplasmodiale. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 3 Motivations Notretravailatmotivdunepart,parlesoucidevaloriseretdepromouvoirlesplantes mdicinales du Mali, en vue de faciliter laccs des populations des mdicaments traditionnels amliorsmoindrecot,etdautrepart,parlancessitdobjectiveroudinfirmerles utilisations traditionnelles de Combretum glutinosum Perr. ex DC. Objectifs Objectif gnral tudier la phytochimie et les activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC . Objectifs spcifiques Identifier les principales utilisations traditionnelles de Combretum glutinosum; Identifier les diffrents groupes chimiques prsents dans les poudres des corces de tronc et de racines de Combretum glutinosum ; Dterminerlactivitantioxydantedesextraitsaqueux,thanoliques,mthanoliqueset dichloromthaniques des poudres des corces de tronc et de racines de Combretum glutinosum ; Dterminerlactivitantifongiquedesextraitsaqueux,thanoliques,mthanoliqueset dichloromthaniques des poudres des corces de tronc et de racines de Combretum glutinosum ;Dterminerlactivitantibactriennedesextraitsaqueux,thanoliques,mthanoliqueset dichloromthaniques des poudres des corces de tronc et de racines de Combretum glutinosum ; Dterminerlactivitanti-inflammatoiredesextraitsaqueux,thanoliques,mthanoliqueset dichloromthaniques des poudres des corces de tronc et de racines de Combretum glutinosum ; Dterminerlactivitantiplasmodialedesextraitsaqueux,thanoliques,mthanoliqueset dichloromthaniques des poudres des corces de tronc et de racines de Combretum glutinosum. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 4 CHAPTRE 2 CHAPTRE 2 CHAPTRE 2 CHAPTRE 2 : :: : TRAVAUX ANTEREURS TRAVAUX ANTEREURS TRAVAUX ANTEREURS TRAVAUX ANTEREURS Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 5 2.1 : Monographie de Combretum glutinosum Perr. ex DC Combretunmglutinosum,courammentappelKinkelibacoriaceestuneplantedelafamille des Combretaceae. Cette famille est constitue de 18 genres dont 370 espces de Combretum (Malgras, 1992 ; Mc Gaw et al, 2001). 2.1.1: Position dans la systmatique (Cret, 1965) Rgne : Vgtal Sous rgne : Eucaryotes Embranchement : Spermatophytes Sous embranchement :Angiospermes Classe : Dicotyldones Srie :Dialyptales Ordre :Myrtales Famille :Combretaceae Sous famille :Combretoideae Genre :Combretum Espce :glutinosum 2.1.2 :Synonymes (Maydell, 1980) Combretum passargei Engl. Et Diels Combretum leonense Engl. Et Diels Combretum hypopilinum Diels Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 6 2.1.3 : Noms locaux de Combretum glutinosum(Enda.sn, 2003 ; Kerharo et Adam, 1974) TableauI : NOMS LOCAUX DE Combretum glutinosum Pays Ethnies/ DialectesAppellations BninGbe- FonDosso Gen Atissainsain VheAtkipi Burkina Faso Gourmantch Lifapelu Mossi/ MoorKoagenga Cte dIvoire ManinkaNaiargbw GhanaGrussi- KassenaVakogu NabtNkunga GuineMandingueDbakat MaliBambaraTchyangara bl, Tgara BoboIntianon MinyankaKogolo-Kagala Peulh Dooki, Buski Sonink/ MarkaBanamba SonrhaKokorba TamacheckAkalafa MauritanieMaure Tikfit NigerDjerma Kokorbey Haussa Taramnya TubuKadagar NigeriaFula/ FulfuldBoodi Yoruba Dagudo Sngal DiolaKalakudum SrreYaay Toucouleur Dodji kewud Wolof RattThse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 7 2.1.4:Description botanique Combretum glutinosum se prsente sous forme darbre ou darbuste pouvant atteindre 12 m de haut.Laplanteestfacilementreconnaissableparsesgrossesfeuillesalternes,verticillesou opposes, et se distingue des autres espces de Combretum par ses sept dix nervures saillantes(Maydell, 1980). Le tronc est souvent tordu et recouvert dune corce rugueuse.Lesfeuillessonttrspolymorphessurlemmearbre.Ellessontcollantesetpoisseuses,trs profondmentrticuleslafaceinfrieureavecunepubescenceblanchtreouparfoispresque glabre.Lerevtementtomenteuxdesrameaux,toujoursvisiblelaloupe,estunsigne caractristique typique de lespce.Combretum glutinosum prsente des fleurs en pis axillaires de couleur jauntre, mesurant 6 10 cm de long. Lesfruitssontdesaknesindhiscents,avec4ailesmembraneuses,renfermantunegraine dpourvue dalbumen. Ils sont sans cailles, lgrement collants, mesurant 2,5 3 cm de long sur 2,8 cm de diamtre. Ils sont verts dans la jeunesse, maturit rouge-vif, et ficels(Malgras, 1992 ; Kerharo et Adam, 1974).

Figure n 1:Combretum glutinosum Rameau feuill Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 8 2.1.5 : Cycle vgtatifLesfeuillesdeCombretumglutinosumapparaissentdenovembrefvrier ;lesfleursde dcembre avril ; et les fruits ds fin dcembre (Malgras, 1992). 2.1.6 :Distribution gographique CombretumglutinosumestuneplanteoriginairedelAfriquetropicale.Elleexistedanslesrgionssoudano-guinennes,duSngaljusquauSoudan.Cestuneespcegalement retrouvedanslessavanesboiseslintrieurduSngaletauxenvironsdulacdesGuiers(Kerharo et Adam, 1974). 2.1.7 :Station CombretumglutinosumestrencontreauSahelsurlesdunesfixes, dans le Sahel soudanais, surlessolspierreux,ainsiquedanslazonesoudaniennesurleslatrites.Cestunarbrequi colonise les jachres. Il est retrouv au bord des mares, ainsi quen Mauritanie o il existe avec 200 mm de pluie. Cest une espce qui rsiste la scheresse (Maydell, 1980 ; Kerharo et Adam, 1974). 2.1.8 :Utilisations en mdecine traditionnelle CombretumglutinosumestlespcedeCombretumlaplusrpandueauSngaletlaplus prescriteparlesthrapeutestraditionnellesdansletraitementdesaffectionscourantessur lensemble du territoire. (Kerharo et Adam, 1974).Lagrandeconsidrationdanslaquelleelleesttenueserefltemmedanscertainsdesesnoms vernaculaires. Ainsi, le nom Srre Yaye signifie la mre des mdicaments ; le nom Soc Diambakatan signifie la feuille qui ne doit pas (N Gaba et al., 1980). La plante est employe en mdecine populaire dans le traitement des affections hpato-biliaires, les affections urinaires, les dmes, lhypertension artrielle, la toux, le paludisme, les gastrites infantiles, la protinurie (Enda.sn, 2003). Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 9 2.1.8.1 : Les feuilles Les feuilles sont utilises pour leurs proprits diurtique, cholagogue, dpurative et fbrifuge, sousformededcoctoudinfus,raisonde5feuillespourunlitredeau.Lesbourgeonsde feuillessontpils,mlangslabouilliedemilrougerefroidie,puisadministrsdansle traitement de la dysenterie, (Enda.sn. 2003). Lesfeuillesvertes,crasessontappliquessurlesblessuresquelonlaveaussiavecune infusion de feuilles. Elles sont galement administres en cas de bronchite, de malaria, danmie, de migraine, dpanchement sanguins, ainsi quen cas de rhume (Maydell, 1980). Les feuilles tendres en dcoction, sont utilises pour traiter la toux, la fivre des enfants et dans lessoinsdesplaiesenbainetlotion.Ledcoctestaussiutilisenbainetfumigationcomme dfatiguant et dans les maux de poitrine. Les rameaux feuills en dcoction, sont utiliss dans le traitement de lictre, le paludisme, la gastrite infantile et les conjonctivites (Malgras, 1992). Le macr de 24 heures des feuilles pulvrises, ajout de sel gemme, pris par voie orale, traite la fivrebilieusehmoglobinurique.Lestendresfeuillesmchesetlasaliveavale(trois bouffes),traitentlamibiasedysentrique.Lemacrdesfeuillespiles,additionndalunest administrjeunencasdeconstipation.Chezlesfemmessujettesdesavortementsrpts, linfus des feuilles est rgulirement pris en boisson et bain au cours de la grossesse et quelques tempsavantcelle-ci.Encasdemorsuredeserpent,lestendresfeuillessontmchesetlejus aval, puis le rsidu est appliqu sur la blessure (Traor, 1983). AuSngal,lesfeuillesontunehauterputationpourletraitementdesmaladiesdelapoitrine, les coliques, les maladies de lestomac. En Gambie et au Nigeria, le macr des feuilles est pris comme purgatif. En Cte dIvoire, les Maninka prennent le dcoct des feuilles en bain et courant dair, contre la fatiguegnrale.Lesfeuillesschesetconcassessontutilisesdansleshmorragiespost circoncisionnelles (Burkill, 1985).Ladcoctiondesfeuillesestaussiutilisecommediurtiquehypotenseur la posologie de 30 g de feuilles dans un litre deau (Pousset, 2004). Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 10 2.1.8.2 :Les corces Lescorcesdetronc,detigeetderacinessontutilisescommeantihelminthiqueset aphrodisiaque.LinfusdescorcesestutilisauSngalpourarrterlesvomissementset comme revigorant sexuel (Enda.sn, 2003). Lescorcesbroyesdonnentunesortedepelucheutiliseavecsuccssurlesblessures.Les Peuhls du Nigeria utilisent linfus des corces pour se baigner en cas de grippe et de rhumatisme (Burkill, 1985). 2.1.8.3 :Les racines Les extraits de racines sont utiliss contre les maladies de lestomac ainsi que la toux (Maydell, 1980). Le dcoct de racines est utilis contre les douleurs rnales dorigine diverse, ainsi que contre la blennorragie (Burkill, 1985). 2.1.8.4 :Les fruits Les fruits immatures schs et pils, sont actifs sur les chancres syphilitiques. Les graines vertes crases sont utiles dans le traitement des blessures, la syphilis, ainsi que dans lart vtrinaire (Maydell, 1980). 2.1.8.5 :la gomme Combretumglutinosumfournitunegommeditegommedetroisimechoix.Cettegommeest utiliseenpharmaciecommelaxatifetantidiarrhique.Sonpouvoiradhsifpermetson utilisationdanslappareillagedescolostomiesetgalementpourlafixationdesprothses dentaires (Sanogo, 1999). 2.1.8.6 :Autres utilisations Laplanteestsouventaussiutiliseenassociationavecdautresplantesvertusmdicinales reconnuescommeXimeniaamericanaL.(Olacaceae)dansletraitementdelafivrejaune, Securinega virosa (Roxb) Baill (Euphorbiaceae) dans le traitement de la bilharziose, Strophantus sarmentosus DC. (Apocynaceae) dans le traitement de la lpre, Guiera senegalensis J.F.Gmel. (Combretaceae) dans le traitement de limpuissance sexuelle, Balanites aegyptiaca L. (Del)(Balanitaceae) dans le traitement des maladies mentales (Maydell, 1980).Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 11 Le tronc donne un bois jaune et dur. Ce bois est utilis dans la construction des huttes. Cest un boisdefeuetdecharbonnagedebonnequalit.Lesextraitsdescorcesdetroncdonnentun colorant jaune excellent utilis dans lindigoterie. 2.1.9 : Donnes phytochimiques (Kerharo et Adam, 1974 ; Traor, 1999) Dans les feuilles de lespce sngalaise, ont t dcels les constituants chimiques suivants : quatre htrosides flavoniques ; des composs poly phnoliques : destanins :taninshydrosolublesettaninscondenssouproanthocyanidols.Lacombreglutinine estuntaninhydrolysableisoldelextraitmthanoliqueausoxhletdesfeuillesdelespce sngalaise.Troisautrestaninsonttisolsdecetextrait.Ilsagitdu2,3(S) hexahydroxydiphnoyl- D Glucose, de la punicaline et de la punicalgine. (Akino et al., 1994). des flavonodes ; des stilbenodes (combretastatines) ; des alcalodes ; des acides organiques : acide gallique, acide ellagique, acide frulique ; des leucocyanidols et leucodelphinidols. 2.1.10 :StructureschimiquesdequelquescompossisolsdesfeuillesdeC.glutinosum (Traor, 1999 ; Akino et al., 1994) OCH3OHOCH3OCH3H3CO HO OHOCH3OCH3OCH3H3CO Combretastatine A Combretastatine B Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 12 OHHOHOOOHOHHOOOHOHOHO COHOHHOOOHH2COHHOR1R2OHHOH R1 = R2 = HOHHOCOOHOCHOHOHOH R1 = R2 = H : PunicalinePunicalgine OHHD HOOCOHOHOHOOOOHOHOCOOOHO OCOOHOHOHHOCO HHOOCHH2CHHOHHO OH HO OHOHH Combreglutine Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 13 2.1.11 :Donnes pharmacologiques et toxicologiques Une tude clinique portant sur les diffrentes indications thrapeutiques signales a t ralise par le Blatt. Lexprimentation ralise avec le dcoct aqueux de feuilles (cinq feuilles pour un litre deau) a mis en vidence une action intressante comme diurtique et hypotenseur dappoint (Enda.sn,2003)Deplus,uneobservationatfaitedansuncasdelithiasernaleetuneautre dans un cas dictre par hpatite (Kerharo et Adam, 1974). Par ailleurs, il a t rapport que les extraits chloroformiques et mthanoliques des feuilles et des tigesontinhiblacroissancedeBacillussubstilis,Staphylococcusaureus,Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli. Par contre, lextrait aqueux a t inactif (Keita, 2002). .Parailleurs,uneexprimentationralisechezlasourisavrifilactivitantitussiveet antispasmodique (Pousset, 2004). LespceCombretumglutinosumestpeutoxique.Lexprimentationtoxicologiqueralise Dakar par Daff (Enda.sn, 2003 a montr une toxicit quasi nulle (Enda.sn, 2003). Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 14 2.2 : Les antioxydants 2.2.1 :Gnralits : Prsent dans lair pour environ une partie sur cinq, loxygne est indispensable la vie de la plupart des tres vivants et permet la respiration, plus gnralement les oxygnations. Il est utilis enthrapeutique,eninhalationcontrelanoxieglobaleoucellulaire,leshmorragies,ainsique dans de nombreuses affections pulmonaires, les embolies gazeuses des plongeurs, etc. Loxygneestllmentgazeuxdelaseizimecolonnedansletableaudelaclassification priodiquedeslments.Lesorganismesvivantsanarobiesutilisent le haut niveau nergtique deloxygnemolculaire(O2) pour oxyder les hydrates de carbone, les protines et les graisses afindeproduiredugazcarbonique,deleauetlnergiencessaireauprocessusdelavie.En plus de son rle dans la conversion de lnergie, loxygne est utilis par les enzymes telles que les monoamines-oxydases pour mtaboliser des composs endognes et exognes (Cavin, 1999). Indispensable la vie, loxygne est une source dagression laquelle sont soumis tous les tres vivants. En effet, sous laction des rayons UV, des radiations ionisantes, de nombreux mtaux de transitionetaucoursdediversesractionsenzymatiques,desformeshautementractivesde loxygneapparaissenttellesqueloxygnesingulet(1O2),leperoxydedhydrogneH2O2,les peroxydes alkyles ROOH et les radicaux hydroxyles OH, peroxyles ROO, et alkoyles RO. On les dsignesouventcommeespcesractivesdeloxygne(ERO).Cesderniressontutilisespar les cellules phagocytaires de lorganisme (les macrophages) pour combattre les agents infectieux tels que les bactries et les virus. Toutefois, les bienfaits de ces composs hautement toxiques ne restentpassansconsquenceprincipalementpourlesstructuresbiologiquesdescellules (protines,lipides,ADN).Denombreusespathologiesparmilesquelleslathrosclrose, larthrite,lasthme,lamaladiedeParkinson,lemongolismeetlaneurodgnrescencesonten partie, lies laction de ces formes ractives de loxygne (Bossokpi, 2002). On appelle radical libre une molcule contenant un ou plusieurs lectrons non apparis. Bien que letermeradicallibreaitsouventtassimiluneespceractiveouunoxydant,ilest important de signaler que les radicaux libres ne sont pas forcment des oxydants. De mme, tous lesoxydantsnesontpasdesradicauxlibres.Lesradicauxlibressontcependantunecible privilgie pour amliorer les thrapeutiques diffrents stades pathologiques.Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 15 2.2.2 :Dfinition dun antioxydant Toutesubstancequi,lorsquelleestprsenteenfaibleconcentrationcomparecelledu substratoxydable,retardeouprvientdemaniresignificativeloxydationdecesubstratest appeleantioxydant.Letermedesubstratoxydableincluttoutessortesdemolculesinvivo. Ainsi,lorsquedesespcesractivesdeloxygnesontgnresinvivo,denombreux antioxydantsinterviennent.Ilsagitprincipalementdenzymes :lasuperoxydasedismutase,la glutathionperoxydase,lacatalaseetaussidesmolculesdefaiblemassemolculairecommele tripeptide glutathion ou lacide urique. En plus de ces substances propres lorganisme, les mdicaments et lalimentation peuvent tre galement dautres sources dantioxydants. En ce qui concerne les mdicaments, de nouveaux composs aux proprits antioxydantes sont en cours de dveloppement. Actuellement,plusieursthrapeutiquescommelesanti-inflammatoiresnonstrodiens,les antihyperlipoprotiniques,lesantihypertenseurs,onttvaluspourleursproprits antioxydantes. Citons entre autres exemples : - Le probucol(lurselle) : est un mdicament qui, en plus de ces effets connus dans la baisse du tauxdecholestrolsanguin,prvientlathrogenseenagissantcommeantioxydanteten supprimant loxydation des lipoprotines de faible densit (LDL). -Lacideascorbique :VitamineC :estunpuissantrducteuretjoueunrleimportantdansla rgnrationdelavitamineE.OnretrouvelavitamineCprincipalementdanslesaliments suivants : les lgumes, le poivron, le persil, les agrumes et la kiwi (Bossokpi, 2002). OHO OHCHOCH2OOH Acide ascorbique -Letocophrol :VitamineE :prvientlaperoxydationdeslipidesmembranairesinvivoen capturant les radicaux peroxyles. Elle est prsente dans les huiles vgtales telles que lesThse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 16 huiles dArachis hypogeae L. (Fabaceae), ainsi que les noix, les amandes, les graines, le lait, les ufs, et les lgumes feuilles vertes. CH3H3CHOCH2(CH2 CH2 CHCH2)3 HH3C Tocophrol ou Vitamine E -LavitamineP(citrine,bioflavoridineetnaringine,rutine,hespridine) :LavitamineP intervient dans linsuffisance veineuse par une diminution de la permabilit et une augmentation delarsistancedescapillaires.Elleagitparinhibitiondelaformationetdelalibrationde lhistamine ; loxydation de ladrnaline serait galement empche. Lactivit antiradicalaire de la vitamine P serait due lentit catchole qui est un trs bon capteur de radicaux libresElleestretrouvedanslefoie,laviande(volaille),lepoisson,lesfruitsetlgumessecs,les crales (Chevaley, 2000). O OOH OOCH3OHGlc RhamO Vitamine P 2.2.3 :Les antioxydants naturels Lintrt port aux antioxydants naturels ne cesse de crotre ces dernires annes. En effet, on trouve dans la littrature scientifique de plus en plus des publications sur des composs naturels aux propritsantioxydantes (Potterat, 1997).Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 17 Lesantioxydantsnaturelssontprsentsdanstouteslespartiesdesplantessuprieures.Cesont pourlaplupartdescomposspolyphnoliques.Uncompospolyphnoliqueesttoutcompos possdant un noyau aromatique contenant un ou plusieurs substituants hydroxyles, incluantdiffrentsgroupesfonctionnelsdrivs(esters,glycosides,etc.).Ilssontrpandusparmiles plantes alimentaires et sont rgulirement consomms par un grand nombre de personnes. Parmi cescomposs,lesflavonodesreprsententlaclassedesubstanceslaplustudie(Bossokpi, 2002).Ilfautgalementmentionnerdautresclassesdesubstancesantioxydantestellesqueles tanins, les xanthones, les coumarines, les carotnes, les lignanes. 2.2.3.1 :Les flavonodesCesontdespigmentsquasiuniverselsdesvgtaux.Presquetoujourshydrosolubles,ilssont responsables de la coloration des fleurs, des fruits, et parfois des feuilles (Bruneton, 1993). Les flavonodes jouent un rle important dans le systme de dfense. Ils sont largement prsents danslesfruits,leslgumes,lethetlevin.Lesflavonodespeuventfonctionnersoitcomme chlateurs de mtaux (querctine), soit capteurs de radicaux hydroxyles, superoxydes, alkoyles et peroxydes (Madhavi et al, 1996). Parmilesflavonodes,citonslamorinequiprsentenonseulementuneactivitantioxydante enverslesradicauxperoxyles,maisgalementuneactivithpato-protectrice.Ellecontribue aussi linhibition de loxydation des lipoprotines de faible densit (LDL) quisont impliques dans lathrogense. OOHOHOOHOHHO OH Morine 2.2.3.2 :Les xanthones Lespropritspharmacologiquesreconnuesdesxanthonessontlinhibitiondela monoamine oxydase, leur activit antimicrobienne, et leur cytotoxicit (Hostettmann, 1989).Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 18 La manguifrine est une xanthone qui possde la proprit dinhibition envers la peroxydation des lipides, ainsi que des proprits de capteur de radicaux libres contre les anions superoxydes(Anderson et al, 1996). OOOHOHOHO Glc Manguifrine 2.2.3.3 :Les coumarines Lescoumarinessontcapablesdeprvenirlaperoxydationdeslipidesmembranairesetde capterlesradicauxhydroxyles,superoxydesetperoxyles.Lesconditionsstructuralesrequises pour lactivit antioxydante des coumarines sont similaires celles signales pour les flavonodes (Anderson et al., 1996). O O Coumarine 2.2.3.4 : Les carotnodes Les carotnodes sont des constituants membranaires des chloroplastes et forment un groupe de pigments liposolubles. Ils contribuent la coloration jaune, orange ou rouge des fruits et lgumes. Ils sont souvent retrouvs dans les plantes alimentaires. Lescarotnodesragissentavecloxygnesingulet,lesradicauxperoxylesetalkoyles,en capturant les radicaux libres (Krinskey, 1989). 2.2.3.5 : Les lignanes Leslignaneslesplustudisdupointdevuedeleuractivitantioxydantesontlesdrivs bifuranyles des graines de ssame (Sesamum indicum DC., Pedaliaceae). La forte rsistance la dtriorationoxydativedelhuiledessameasuscitdepuisplusieursannesdenombreuses Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 19 recherches sur les graines de ssame. Les lignanes diarylfuranofuraniques tels que le ssaminol, ont dmontr des proprits antioxydantes expliquant ainsi la stabilit de cette huile. OOOOOOOH Ssaminol 2.2.3.6 : Les tanins Lestaninssontdescomposspolyphnoliquesayantlapropritdetransformerlapeauen matriauimputrescible :lecuir.Lestaninssontdescompossprsentantdesproprits antioxydantes significatives. On les classe en deux grands groupes chez les vgtaux : Les tanins hydrosolubles : sont des esters dun sucre(ou dun polyol apparent) et dun nombre variabledemolculesdacidephnol.Lesucreestsoitlacidegallique,soitlacide hexahydroxydiphnique(HHDP)etsesdrivsdoxydation :dshydrohexadiphnique,acide chbulique (tanins ellagiques ou ellagitanins) ; OHHO OHCOOH

HOHO OHOHCO2H CO2HOH HO Acide gallique Acide (S) hexahydroxydiphnique Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 20 OOOHOHCO2HCO2HHO2C

OOOOHOHOHOHO Acide chbuliqueAcide ellagique Les tanins condenss ou proanthocyanidols sont des polymres flavoniques. Ils ont t isols ou identifisdetouslesgroupesvgtaux,GymnospermesetFougrescompris(Madhavietal, 1996 : Traor, 1999).OOHHOOHR1OHR2

OOH Srie 2-R, 3-S : R1 = R2 = H : Afzelchol ;Flavon - ol R1 = OH, R2 = H: Catchol ; R1 = R2 = OH : Gallocatchol 2.2.3.7 : Les stilbenodes Les stilbenodes sont des composs phnoliques qui possdent deux noyaux benzniques spars par un pont thane ou thne, cest dire les dibenzyls et les stilbnes, ainsi que les produits qui leursontbiosynthtiquementrattachs :phnanthrne ;9,10-diphnanthrne ;phnyl dihydroisocoumarines. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 21 Lesstilbnes,gnralementE,peuventtrelibresouhtrosidiques,parfoispolymriques.Ils sont prsents dans de nombreuses familles de vgtaux suprieurs. Ces composs sont prsents chez toutes les espces du genre Combretum (Traor, 1999). OOOHHO OHCO2HHO Hydrangnol Acide lunularique 2.2.4 : Mthodes de tests antioxydants 2.2.4.1 :Test mesurant lactivit antioxydante contre le lysosomePrincipe : Dtectiondelactivitantioxydantedunesubstanceparoxydationdeslysosomesparle2,2-azobis, 2 amidinopropane (Salvi, 1998). 2.2.4.2 : Rduction du radical 1,1diphenyl-2 picrylhydrazyle (DPPH) Test sur CCM : Principe : Il sagit de dposer des extraits, fractions ou produits purs tester sur des plaques CCM de gel de silice GF254 en aluminium et dveloppesdans des systmes de solvants appropris. Aprs schage, rvler les plaques CCM avec une solution mthanolique 2 mg/ml. Des activits antiradicalairesapparaissentsousformedespotsdecouleurjaune-blancsurunfondviolet (Cavin, 1999). Nous avons utilis ce test dans notre mthodologie pour rechercher lactivit antioxydante de nos extraits. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 22 2.2.4.3 : Test mesurant lactivit antioxydante au moyen des carotnodesTest sur CCM : Principe : Les plaques CCM sont prpares de la mme manire que pour le test du DPPH, puis rvles avecunesolutionchloroformique0,5mg/mlde-carotne.LaplaqueCCMestensuite exposesousunelampeUV254nmjusqudcolorationdelaplaque.Lessubstances antioxydantesapparaissentenjaunesurfondblanc.Ilfautfaireparticulirementattentionaux substances dj colores en jaune, car elles peuvent donner de faux positifs (Cavin, 1999). 2.2.5 : Quelques plantes activit antioxydante reconnue (Keita, 2002) TableauII : QUELQUES PLANTES A ACTIVITE ANTIOXYDANTE IDENTIFIEES AU MALI Noms scientifiquesFamilles Parties utilises Entada africana Guill. et Perr.MimosaceaeRacines Diospyros abyssinica ( Hiern ) F. White EbenaceaeFeuilles Psorospermum guineense Hochr Hypericaceae Feuilles Burkea africana Hook CeasalpinaceaeEcorces du tronc Cussonia barteri Seenm AraliaceaeRacinesLannea velutina RichAnacardiaceae Feuilles, corces de racines Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 23 2.3 : Les antifongiques 2.3.1 : Gnralits Lapathologiefongiqueaconnuuneprogressionaucoursdecesderniresannes,compte tenu de laugmentation des localisations mycosiques profondes, viscrales et septicmiques. Les premires sont dues des champignons trs rpandus dans la nature, habituellement saprophytes, ne devenant pathognes que dans certaines conditions : usage croissant des antibiotiques large spectre ;corticothrapie ;thrapeutiquesimmunosuppressives.Chezlessujetsinfectsparle SIDA, on parle de mycoses iatrognes. Elles sont causes par des champignons dits opportunistes quisontsoitlvuriformes(Candida,Cryptococcus),soitfilamenteux(Aspergillus, Cephalosporum).Les secondes sont dues des champignons pathognes se dveloppant dans les pays chauds et qui sontimportslafaveurdelextensiondutourisme,etdesbrassagesdespopulations.Cesmycoses exotiques sont lhistoplasmose, les blastomycoses et les myctomes. Si le traitement des mycoses superficielles cutanes ou muqueuses ne prsente plus de relles difficults, il en est tout autrementpourlesmycosesprofondes :celles-ciprsententtoujoursuncaractredegravitet sont rapidement volutives, car elles surviennent sur un terrain affaibli ou immunodprim. Le dveloppement des antifongiques se heurte ainsi deux obstacles majeurs : une faible activit - fongicide in vivo en regard des rsultats in vitro ; - une mauvaise diffusion travers la paroi trs paisse des champignons du fait de sa composition (chitine,phospholipidesetstrols).Cesconstituantssontabsentschezlesbactries,cequi expliquequelaplupartdesantibiotiquesantibactriensnesontpasdesantifongiques.Les substances antifongiques doivent de ce fait prsenter une hydrophobie leve. 2.3.2 : Classification des mycoses 2.3.2.1 : Mycoses exclusivement superficielles Ce sont les mycoses tropisme exclusivement cutan. On distingue les dermatophytoses : de la peau glabre : herpes circin ; des plis (intertrigos) : eczma margin de Hebra (face intrieure des cuisses) : pied dathltedes zones pilieuses : sycosis (barbe) ; Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 24 des ongles : onyxis ou onychomycoses. 2.3.2.2 : Mycoses cutanomuqueuses Elles sont essentiellement causes par les espces du genre Candida. On distingue : descandidosesoropharyngesetdigestives :lesatteintesbuccalessontlesplusimportantes ; elles se traduisent par un muguet souvent associ une glossite ; des candidoses gnitales : il sagit de balanite chez lhomme et de vulvo-vaginite chez la femme. Les facteurs favorisants sont nombreux : diabte, grossesse, contraception orale ; descandidosescutanes :chaleuretmacrationsontlesconditionsfavorableslextension cutane de ces mycoses. 2.3.2.3 : Mycoses profondes Trois grands groupes de mycoses profondes peuvent tre distingus : -lescandidosesdissmines :lagentresponsableestCandidaalbicans.Leslocalisationssont nombreuses : oculaire, ostoarticulaire, cardiaque, urinaire, crbrale ou septicmique ; - les aspergilloses : le champignon responsable est Aspergillus fumigatus qui possde des spores ariennes pouvant tre inhales ; -lescryptococcoses :lagentcausalestCryptococcusneoformans.Ladissminationsefait partirdufoyerpulmonaire,parvoiehmatogneetaboutitunenvahissementmning :la cryptococcose neuromninge. 2.3.3 :Les mdicaments antifongiques conventionnels2.3.3.1 :La nystatine et lamphotricine B Ces deux molcules possdent le mme sucre amine : la nycosamine qui est lie un long cycle lactone contenant des groupements polyniques. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 25 OOH3CH3CH3CHOOH OHOHOH OH OOHOHCOOHOONH2OHH3C Amphotricine B (Fungizone ) OOH3CH3CH3CHOOH OHOHOH OHOHCOOHOONH2OHH3COHO Nystatine (Mycostatine ) Mode daction Les polynes ont la fois une activit fongicide et fongistastique.A pH acide, la nystatine et lamphotricine B sont plus rapidement absorbes en grande quantit par les levures qu pH neutre ou alcalin. Le mode daction relve de divers mcanismes dont la Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 26 formationdecomplexesinsolublesaveclesstrolsdelamembranecellulaireaboutissantdes troubles de la permabilit cellulaire et entranant la mort des cellules. 2.3.3.2 :La grisofulvine (Grisofuline) Mode daction Elleinhibedesdosesfongicideslasynthsedesacidesnucliques.Elleaffectelamitose cellulaire (arrt de la mtaphase).Sonactionfongistastiqueestresponsabledelaltrationdelaparoifongiquesaccompagnant danomaliesdedveloppementdeshyphesterminauxquislargissent,spaississentet senroulent. OCH3H3COClCOO CH3OCH3 Grisofulvine(Grisofuline ) 2.3.3.3: La flucytosine Mode daction Cestunanti-mtaboliquedelacystine.Certainschampignonsontunecytosinepermase ncessaire la traverse de leur membrane cellulaire et dautres bases pyrimidiques et puriques. Unecytosinedsaminasetransformelaflucytosineenfluoro5uridine,puisphosphoryleen flucytosinetriphosphate.Cettedernire,incorporelARN,bloquelasynthsedesprotines indispensables la vie cellulaire fongique.NNH2FHO Flucytosine (Ancotil ) Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 27 2.3.3.4 :Les drivs imidazols Mode daction Ilsaltrentlastructuredelaparoifongiqueavecblocagedestrodesetinhibitiondela synthse des protines. NNClClClHCCH2OH2CNNClCl CotrimazoleMiconazole

2.3.4 :Mthodes des tests antifongiques 2.3.4.1 : Mthodes de diffusion Principe Dterminationdelactivitantifongiquedunextraitsurunmilieudeculturetraversdes cylindresoudesdisquescontenantlessolutionstitrer.Ilseformedeszonescirculairessurle fond opaque du milieu de culture (Chevaley, 2000). 2.3.4.2 :Mthode bio autographique Principe Dtectiondelactivitantifongiquedunesubstanceparinhibitiondunmilieudeculturede Candida albicans sur une plaque CCM (Diallo, 2000). Cestcettemthodequenousavonsutilisedansnotremthodologiepourdterminerlactivit antifongique de nos extraits. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 28 2.3.5 : Quelques plantes activit antifongiques TableauIII: PLANTES A ACTIVITE ANTIFONGIQUE (Diallo, 2000) Noms scientifiques FamillesParties utilises Diospyros abyssinica Hiern Ebenaceae Racines Glinus oppositifolius L. ADC Aizoaceae Parties ariennes Parkia biglobosa K.Mimosaceae Ecorce du tronc Swartzia madagascariensis D. LeguminosaeRacines Ximenia americana Min.Oleraceae Racines Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 29 2.4 :Les infections bactriennes 2.4.1 :Rappel sur les bactries Unebactrieestunmicrobeformduneseulecellule,visibleaumicroscope,appartenant une zone de transition entre le rgne animal et le rgne vgtal.Commetoutecellule,lesbactriessontconstituesdunnoyau,isoloudiffus,unprotoplasme contenant des granulations et des vacuoles, une paroi parfois dune capsule. Certainesbactriessontmobilesgrcedescilsvibratiles.Selonleurmodedenutritionetleur comportement vis--vis de loxygne, les bactries sont classes en arobies et en anarobies. Les bactries se reproduisent selon deux modes : - la division simple ou scissiparit ; - la sporulation, la spore reprsentant la forme de rsistance et de dissmination du germe. Pourcrotre,lesbactriesdoiventtrouverdanslemilieuextrieurdesconditionsphysico-chimiques favorables qui leur sont ncessaires et les aliments couvrant leurs besoins nergtiques lmentairesetspcifiques.Surleplanpratique,cesbesoinssontsatisfaitsdansdesmilieux labors par lhomme en vue dtudier les bactries et sont appels de ce fait, milieux de culture. 2.4.2 :Exemple de classification des bactries dintrt mdical2.4.2.1 : Bactries en forme de sphre : les coccies 2.4.2.1.1 : Coccies Gram positif NousavonslesgenresStaphylococcus,Streptococcus,Micrococcus,Pneumococcus. Enterococcus. 2.4.2.1.2 : Coccies Gram ngatif Nous avons le genre Neisseria. 2.4.2.2 : Bactries en forme de btonnet : les bacilles 2.4.2.2.1 :Bacilles Gram positif Nous avons les genres Listeria, Erysipelothria, Bacillus, Cynetobacter, Actynomyces. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 30 2.4.2.2.2 :Bacilles Gram ngatif NousavonslesgenresEnterobacter,Pasteurella,Haemophilus,Bordetella,Brucella, Francisella,Pseudomonas,Acinetobacter,Vibrion,Campylobacter,Moraxella,Aeromonas, Escerichia, Klebsiella. 2.4.2.2.3 :Bacilles acido-alcoolo rsistants (BAAR) Ici, nous retrouvons le bacille de la tuberculose (Mycobacterium tuberculosis) et celui de la lpre (Mycobacterium leprae). 2.4.2.3 :Bactries en forme de spirale : les spirochtes Nous avons les genres Treponema, Leptospira, Borrella, Spirilum. 2.4.2.4 :Flore bactrienne anarobie 2.4.2.4.1 : Gram positif NousavonslesgenresClostridium,Peptococcus,Peptostreptococcus,Propionobacterium, Bifidobacterium. 2.4.2.4.2 :Gram ngatif Nous avons les genres Veillonella, Fusobacterium, Bacteroides. 2.4.3 :Les infections bactriennes Uneinfectionbactrienneestunensembledetroublesquirsultentdelapntrationdune bactrie pathogne dans un organisme. Elle peut tre : - locale, lorsquelle se manifeste uniquement au niveau o les germes ont pntr ; - gnrale, lorsquun germe franchit les barrires opposes par lorganisme son entre (peau, muqueuses) ou au niveau des ganglions, il pntre dans le sang et se dissmine par celui-ci dans tout lorganisme ; - focale : cest linfection en foyer dans les tissus ou organes o les germes sont apports par la circulation sanguine. 2.4.4 : Traitement des infections bactriennes par les antibiotiques Unantibiotiqueestuncomposchimiquelaborparunorganismevivantouproduitpar synthse,coefficientchimiothrapeutiquelevdontlactivitthrapeutiquesemanifeste Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 31 faible dose, dune manire spcifique, par linhibition de certains processus vitaux, lgard des virus, des micro-organismes ou mme de certains tres pluricellulaires. 2.4.4.1 : Mcanisme daction des antibiotiquesLesantibiotiquesagissentsurlesmicro-organismesselonplusieursmcanismesdontcertains sont connus : -actionsurlaparoibactrienne :lasynthsedesmucopeptidesdelaparoibactrienneest perturbe par linhibition de certains enzymes : peptido-glycane synthtase, transpeptidase. Les -lactamines, la cyclosrine, la bacitracine, la vancomycine, la fosfomycine, agissent par ce mcanisme,deprfrencesurlesbactriesjeunesdontlaparoiestencoursddification.Les bactries Gram positif dont la paroi est riche en mucopeptides sont les plus sensibles ; -action sur la membrane cytoplasmique et la membrane extrieure des bactries Gram ngatif : certains antibiotiques se fixent sur les phospholipides de la membrane cytoplasmique, entranant unealtrationdelapermabilitdecettemembrane.Ilsoprentcommedesagentstensioactifs cationiques. Les constituants cellulaires schappent du cytoplasme bactrien, ce qui provoque la mort cellulaire. La gramicidine et la tyrocidine agissent par ce mcanisme ; - action sur la rplication de lADN : certains antibiotiques perturbent la rplication de lADN. Il sagit des quinolines ; - action sur la traduction de lARN m : lARN m et lARN t sont les cibles des antibiotiques et lesmcanismesdetraductiondelARNmsonttroubls.Certainsantibiotiquessefixentsurla sousunitribosomale30S,dautresinterviennentdediversesmaniressurlasousunit ribosomale50S.Nousretrouvonsicilesaminosides,lesmacrolides,leslincosamides,les streptogramines, les cyclines, les phnicols, lacide fusidique. 2.4.4.2 :Structure de quelques antibiotiques antibactriens2.4.4.2.1. Les -lactamines CH2CO NHNCH3CH3SCOOH O Pnicilline G Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 32 2.4.4.2.2 :Les fosfomycines OH3C POOHOH Fosfomycine 2.4.4.2.3:Les aminosides OHNH2OHNH2OOOOOHOHCH3NHCH3NH2OHCH2NH2 Gentamicine 2.4.4.2.4 :Les macrolides lincosamides Synergistines (MLS) NCH3C3H7COHN CHCHOHCH3OSCH3OHOHOH Lincomycine 2.4.4.2.5: Les ttracyclines OHCONH2O OH O OHOH NH2OH Ttracycline Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 33 2.4.4.2.6 : Les phnicols O2NHC CHOHNHCOCHCl2CH2OH Chloramphnicol 2.4.4.2.7: Lacide fusidique HOCH3HCH3HOCH3COOHH3CCH3OCOCH3CH3H Acide fusidique 2.4.4.2.8 :Les quinolones NFN NCOOHC2H5H3C Pfloxacine Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 34 2.4.4.2.9 : Les inhibiteurs de la synthse des folates H3COH3COOCH3NNNH2NH2 Trimthoprime 2.4.5 : Sensibilit et rsistance aux antibiotiques Ilexistelasensibilitdugermeinvitroetcelleinvivo.Certainsantibiotiquesontune pharmacocintiqueneleurpermettantpasdatteindrelesgermesdanslesfoyersinfectieuxde certains organes ou tissus. Il est donc ncessaire de sinformer sur les mcanismes de rsorption, de diffusion, de transformation et dlimination des antibiotiques dans lorganisme de lhte. Peu dantibiotiques sont capables de traverser la barrire hmo-meninge et donc dtre utiles dans le traitement des mningites. En recherchant les germes sensibles, il est possible dtablir le spectre dactivit de lantibiotique. La rsistance aux antibiotiques peut tre spontane ou acquise.La rsistance acquise peut tre limite un seul antibiotique ou concerner plusieurs dentre eux (rsistance croise). La rsistance est dite croise pour une famille dantibiotiques. Larsistanceacquisesurvientengnralparmutationchromosomiqueoupartransfertextra- chromosomique (rsistance plasmidique). Notons enfin que les antibiotiques occupent en ville comme lhpital, une place prpondrante, non seulement dans les dpenses en mdicaments, mais surtout dans larsenal thrapeutique. Decetintrtdcouleunerecherchescientifiqueimportantequiconduitaujourdhui lexprimentation et la commercialisation de nouvelles molcules. Pouruneconomiedesantetunebonnepriseenchargedesinfectionsbactriennes,le prescripteur et le pharmacien doivent veiller ce que les antibiotiques soient utiliss bon escient afin dviter lapparition rapide de rsistances, ainsi que les maladies nosocomiales.

Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 35 2.4.6 : Quelques plantes activit antibactrienne TableauIV : QUELQUES PLANTES A ACTIVITE ANTIBACTERIENNE (Ekoumou, 2003) Noms scientifiquesFamilles Parties utilises Allium sativum (L). Gaertn LiliaceaeBulbes Aloe vera (L). Burn. F LiliaceaeFeuilles Carica papaya L.Caricaceae Feuilles Manguifera indica L.Anacardiaceae Feuilles Tamarindus indica L.LeguminoseaeFruits Psidium guajava L. Myrtaceae Feuilles Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 36 2.5 : Les anti-inflammatoires 2.5.1 : Dfinition de linflammation Linflammationestunensembledephnomnesractionnelsseproduisantaupointirritpar unagentpathogne.Ellesetraduitordinairementparquatresymptmescardinaux :chaleur, rougeur, douleur et tumfaction (quadrilatre de Celse).Linflammation peut tre aussi dfinie comme un processus gnral ractionnel de tout ou partie delorganismeuneagression,quellesoitchimique,physique,bactrienne,viraleou parasitaire. Elle peut tre aigu ou chronique. Ce processus de dfense de lorganisme peut parfois voluer de faon anormale et dclencher des maladies auxquelles sont opposes des mdicaments dits anti-inflammatoires pouvant tre conventionnels ou traditionnels. Linflammation ainsi dfinie se droule en trois phases : unepremirephasequiconsisteenuneaugmentationde lapermabilitcapillaireentranant dme et gonflement. Cest au cours de cette phase que les substances responsables de la douleur sont libres ; unedeuximephasecaractrisepar une prdominance des polynuclaires dans linfiltration cellulaire puis il ya diminution de leur nombre pour faire place des cellules mononucles ; une troisime phase dite de rparation dans laquelle le fibroblaste est la cellule dominante. Lesfacteursdclenchantuneinflammationsontmultiplesetvaris :chaleur,lumire, traumatisme, toxique, etc. Beaucoup dlments cellulaires interviennent dans linflammation : - les polynuclaires neutrophiles ; - les polynuclaires osinophiles ; - les lymphocytes ; - les plasmocytes. 2.5.2 : Effets locaux et gnraux de linflammation Un foyer inflammatoire, mme localis, est susceptible davoir une rpercussion sur lensemble de lorganisme. Lorsquil ya inflammation, surtout sil sagit dune raction lie un processus Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 37 infectieux, le taux de leucocytes sanguins augmente. Ce phnomne est d au dversement dans le sang des leucocytes jeunes de la moelle et une acclration de la maturation des mylocytes mdullaires.Ilenrsulteuneaugmentationdutauxdespolynuclairesjeunesauxnoyauxpeu segments dans le sang. Lesmcanismesrglantlesmodificationsdesleucocytessanguinsnesontquepartiellementconnus.Eneffet,lamajoritdesinfectionssaccompagnentduneaugmentationdutauxdes leucocytes ;ilyananmoinsdescasoletauxdeleucocytessanguinsdiminue(leucopnie) : cest ce que lon observe dans la fivre typhode. 2.5.3 :Les anti-inflammatoires conventionnels 2.5.3.1 : Historique DslpoquedHippocrate,ilyaenviron2400ans,lespropritsanalgsiquesetanti-inflammatoiresdediversextraitsvgtauxcontenantdessalicylstaientconnuesetmises profit chez lhomme. En particulier, taient utilises des prparations partir de la saule (Salixalba L.;Salicaceae).Lisolementdelacidesalicyliqueetlapprofondissementdes connaissances pharmacologiques sur les salicyls datent du 19me sicle. Ledveloppementcommercialdessalicylsdevientimportantaveclasynthsechimique,par Felix Hoffmann en 1899, sous le nom de lacide actylsalycilique (Aspirine). Il a fallu attendre les annes 1950 pour voir apparatre sur le march la phnylbutazone, suivi de lindomtacine quelques annes plutard.Eneffet,en1949,lespropritsanti-inflammatoiresdelacortisonetaienttablies,stimulant ainsi la recherche dautres anti-inflammatoires non strodiens (AINS).2.5.3.2 :Les anti-inflammatoires non strodiens (AINS) LesAINSsontdfiniscommetantlaclassedemdicamentsquipossdentlesmmes propritspharmacologiquesquelacideactylsalicylique(Aspirine) :analgsique, antipyrtique, anti-inflammatoire. Les AINS ont une action symptomatique rapide. Ils permettent de rduire les signes locaux dune ractioninflammatoire :douleur,rougeur,chaleur,dmeetimpotencefonctionnellequi peuvent en rsulter. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 38 Mcanisme daction LesAINSinhibentprincipalementlemtabolismedelacidearachidoniqueparlavoiedela cyclo-oxygnase. Cependant dautres effets doivent tre voqus, en particulier la diminution, de la migration cellulaire, du mtabolisme oxydatif, ainsi que des actions surdivers constituants du tissu conjonctif (protoglycane, glycoprotine, collagne). Interactions mdicamenteuses Dplacementdesanticoagulantsdeleursliaisonsprotiques ;antagonismedesdiurtiqueset antihypertenseurs ;augmentationdelatoxicitsanguinedulithiumetdumthotrxate ; potentialisation des effets des sulfamides hypoglycmiants. Effets secondaires Toxicitgastro-intestinale ;effetsrnaux ;actionanti-agrganteplaquettaire ;retard laccouchement ; asthme induit ; raction allergique. Contre-indicationsAllergieconnueauxAINS ;traitementanticoagulant ;ulcregastro-duodnal ;grossesseet allaitement ; insuffisance rnale ou hpatique. Structures de quelques AINS Driv salicyl :COOHO C CH3O Acide actylsalicylique (Aspirine) Acide fnamique : CH2COOHNHCl Cl NCOOHNHCF3 Diclofenac (Voltarne) Acide niflumique (Nifluril ) Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 39 2.5.3.3 : Les anti-inflammatoires strodiens (AIS) LesAISouglucocorticodessontdesmdicamentsutilisscontrelinflammation,drivs dhormonesnaturellesscrtesparlecortexsurrnaleouhmisynthtisspartirdextraits animaux ou vgtauxLutilisationdesglucocorticodesadjunelonguehistoiredepuisqueHenchaadministrla cortisone 21 patients atteints de polyarthrite rhumatode en 1948.Lon sait maintenant mieux apprcier les risques de cette thrapie et lon possde des composs plus actifs et moins dangereux (Coyen, 1981). Mcanisme daction des AIS Les glucocorticodes sont utiliss soit titre substitutif pour suppler une dfense surrnalienne, soitdosepharmacologiqueolespropritsanti-inflammatoiresimmunosuppressivessont recherches.Lesglucocorticodessontdesstrodesetcommetouteslesmolculesdecette famille,ilsagissentenseliantdesrcepteursouenpartielalbumine.Laprsencedun hydroxyleenfonction11estessentiellepourlactivitglucocorticode.Lesglucocorticodes sontpeusolublesdansleau.Ilsinhibentfortementlaractioninflammatoireprcoceetses manifestations cliniques connues do leur grand succs en thrapeutique (Neuwinger, 1996). Effets secondaires des AIS Troubles mtaboliques (mtabolisme hydro-lectrolytique, mtabolisme des lipides, des glucides, des protides) ; troubles digestifs : ulcre gastro-duodnal ; sensibilit aux infections. Structures de quelques AIS : OHOFC OCH2OHOHCH3

OHOCOCH2OH DexamthasonePrednisone Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 40 2.5.4: Mthodes de tests anti-inflammatoires dme la carraghnine sur rats surrnalectomiss Principe Contrlersilactionanti-inflammatoiredessubstancesnonstrodiquesestbiendueune activit propre et non une scrtion de corticodes partir des surrnales. dme par traumatisme exprimental selon Riester et Jaques Principe Rduireundmedepattepartraumatismeexprimental,parlesanti-inflammatoirescomme prcdemment indiqu. Tourniquets poditifs Principe Rduire ldme provoqu chez le rat, par ligature de larticulation tibio-tarsienne, par les anti-inflammatoires. Abcs la carraghnine Principe Rduireunabcsprovoquchezlasouris,parinjectionsous-cutanedelacarraghnine,par des substances anti-inflammatoires. Cest cette technique que nous avons utilise dans notre mthodologie pour tester lactivit anti-inflammatoire de nos extraits. Arthrite de Freud Principe Rduirelarthritechroniqueprovoqueauniveaudelapattedurat,parinjectionde Mycobacterium butyricum par certaines substances anti-inflammatoires. Technique de leffusion pleurale Principe Rduire lpanchement pleural, provoqu par linjection intra-pritonale dun agent irritant, laide de substances anti-inflammatoires. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 41 Linflammation locale de loreille du rat Principe Linflammationdeloreilledurat,provoqueparlapplicationlocaledhuiledecrotonpeut tre rduite par lapplication de substances anti-inflammatoires. 2.5.5 :Quelques plantes activit anti-inflammatoires (Bossokpi, 2002) TableauV: QUELQUES PLANTES A ACTIVITE ANTI-INFLAMMATOIRE Noms scientifiques Familles Parties utilises Annona senegalensis Pers. Annonaceae Racines et Feuilles Cola nitida (Vent), Shlott. SterculiaceaeCoques Biophytum petersianum Klotz OxililidaceaePlante entire Combretum nigricans Lepr.Combretaceae Feuilles Datura inoxiaMillSolanaceae Feuilles Securidaca longepedonculata Fres. PolygalaceaeRacines Tamarindus indica L. CeasalpinaceaeRameaux feuills Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 42 2.6 :Le paludisme Encore appel malaria, le paludisme est une affection parasitaire due laction pathogne dun protozoaire hmatozoaire du genre Plasmodium.2.6.1 :Donnes statistiques et pidmiologiques (Institut Pasteur, 2004)Lepaludismetueunenfanttoutesles30secondesenAfriqueetentre1et3millionsde personnesparan,selonlesestimationsdel'OMS.Deuxmilliardsd'individus,soit40%dela populationmondiale,sontexpossetonestime500millionslenombredecascliniques survenant chaque anne. Les moyens de lutte existants sont les mdicaments antipaludens (dont les plus connus sont la chloroquine ou la quinine, lartmisinine et ses drivs) et la lutte contre les moustiques vecteurs du parasite Plasmodium. Mais la situation est d'autant plus proccupante quedepuisplusieursannes,lesparasitesdveloppentdeplusenplusdersistancesaux mdicaments, et que les moustiques dveloppent des rsistances aux insecticides. Lepaludismetoucheunecentainedepaysdanslemonde,particulirementleszonestropicales dfavorisesd'Afrique,d'Asieetd'AmriqueLatine.L'Afriqueest,deloin,lecontinentleplus touch avec 90% des cas de paludisme recenss dans ses zones tropicales. Des pidmies peuvent survenirlorsdemouvementsdepopulationspeuexposesaupaludismeversdeszones hautement endmiques. Quatre espces de parasites du genre Plasmodium sont responsables de la maladie chez l'homme : -Plasmodiumfalciparumestl'espcelapluspathogneetresponsabledescasmortels.Elleest prsente dans les zones tropicales d'Afrique, d'Amrique Latine et d'Asie, et elle est dominante en Afrique ; -Plasmodiumvivaxco-existeavecP.falciparumdansdenombreusespartiesdumonde,etest prsente dans certaines rgions tempres ; - Plasmodium ovale, principalement trouve en Afrique de l'ouest, ne tue pas mais peut entraner des rechutes 4 5 ans aprs la primo infection ; -Plasmodiummalariaeaunedistributionmondialemaistrsingale.Ellen'estpasmeurtrire mais peut entraner des rechutes jusqu' 20 ans aprs la primo infection. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 43 2.6.2 : Transmission Le paludisme est transmis l'homme par la piqre d'un moustique femelle, du genre Anopheles, elle-mme infecte aprs avoir piqu un homme impalud: la femelle, en prenant le repas de sang ncessaire sa ponte, injecte le parasite son hte.LatransmissiondePlasmodiumd'unhommeunautresefaitdoncparl'intermdiairedu moustique, le principal en cause tant Anopheles gambiae. Il existe un seul cas de contamination inter-humainedirecte,lorsqu'unefemmeenceinteinfectecontaminesonenfantparvoie transplacentaire. 2.6.3 : Cycle du parasite LecycledePlasmodiumestcomplexeetcomportedeuxtapesessentielles:uncycleasexu chez l'homme, et un cycle sexu chez le moustique.L'anophlefemelleinjectel'hommeleparasitesousformede"sporozote".Celui-cimigre rapidement, via la circulation sanguine, vers le foie. Il pntre dans la cellule hpatique, o il se divisetrsactivementpourdonnernaissance,enquelquesjours,desdizainesdemilliersde nouveauxparasites:les"mrozotes".Lacelluledufoieclateenlibrantcesparasitesdansle sang:l,ilspntrentl'intrieurdesglobulesrougesetsemultiplient.Lorsquecesderniers clatentleurtour,lesmrozoteslibrsdanslacirculationsanguineinfectentdenouveaux globules rouges. Achaquecyclederplicationdesmrozotes,desparasitessexusmlesetfemelles (gamtocytes)sontformsl'intrieurdesglobulesrouges.Lorsqu'unmoustiquepiqueune personneinfecte,ilingrecesgamtocytes,quisetransformentengamtes.Leurfcondation engendreunzygote,quisediffrencieenoocystedansletubedigestifdumoustique.Les oocystesproduisentdessporozotes,quimigrentverslesglandessalivairesdumoustique.Les rechutestardivesdepaludismeobserveslorsd'infectionsparP.vivaxetP.ovale sont dues la possibilitpourcesespcesdesubsistersousuneformelatente("hypnozote")danslacellule hpatique de l'homme. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 44 Figure n2: SCHEMA DU CYCLE PARASITIRE DE Plasmodium falciparum (Institut Pasteur, 2004) 2.6.4 : Symptomatologie Lesmanifestationscliniquesdupaludismesonttrsdiverses.Lepaludismedbuteparune fivre830joursaprsl'infection,quipeuts'accompagner-ounon-demauxdette,de douleursmusculaires,d'unaffaiblissement,devomissements,dediarrhes,detoux.Descycles typiques alternant fivre, tremblements avec sueurs froides et transpiration intense, peuvent alors survenir : c'est " l'accs palustre". La priodicit de ces cycles dpend de l'espce de parasite en cause,etconcideaveclamultiplicationdesparasitesetl'clatementdesglobulesrouges,qui conduitgalementl'anmie.LepaludismeP.falciparumpeuttrefatals'iln'estpastrait. Dans certains cas, les globules rouges infects peuvent bloquer les vaisseaux sanguins irriguant le cerveau : c'est le neuropaludisme, souvent mortel. Dans les rgions o le paludisme est hautement endmique,lespersonnessonttellementsouventinfectesqu'ellesfinissentpartre Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 45 naturellementimmunises("immunitacquise"),gnralementaprsdenombreusesannes d'infection chronique, et sont alors des porteurs plus ou moins asymptomatiques du parasite. 2.6.5 :Diagnostic biologique Ilesttabliparlexamenmicroscopiquedunegouttedesangaprscolorationaumaygraw giemsa, qui colore le cytoplasme du parasite en bleu et son noyau en rouge. 2.6.6 : Prvention et traitements Plusieursmolculesantipaludiquespeuventtreutilisesenprophylaxie(prventionlorsd'un voyageenzoneendmique)ouenthrapeutique.Lesplusconnuessontlachloroquineoula quinine.D'autres,commelamfloquine,sontutilisesdanslesrgionsoviventdesparasites chloroquinorsistants. Il est dangereux de partir en zone de transmission intense de paludisme sans prise rgulire d'un traitementprventif,enparticulierpourlesenfantsetlesfemmesenceintesquiontunrisque accru d'accs grave. Le traitement prventif doit tre prescrit par un mdecin. Il tient compte des zonesvisites(risque,existenceounondersistance),deladureduvoyageetaussidela personne:l'ge,lesantcdentspathologiques,uneintolranceauxantipaludens,unepossible interaction mdicamenteuse, une grossesse. Mais les mdicaments anti-paludens ne garantissent pas une protection absolue contre l'infection etilestaussiimportantdeseprotgerdespiqresdemoustiques(moustiquaires,produitsanti-moustiques).Aucunmoyenprventifn'assureluiseuluneprotectiontotaleet,mmesiun traitementadaptatbienpris,ilestpossibledefaireunecrisedepaludisme,parfois d'apparition tardive. Les premiers symptmes sont souvent peu alarmants mais le paludisme peut tremortelsisontraitementestretard.Aussi,encasdefivremmelgre,denauses,de mauxdette,decourbaturesoudefatigueaucoursdusjouroudanslesmoisquisuiventle retour, un mdecin doit tre consult en urgence. La prise d'un chantillon de sang est ncessaire pour confirmer le diagnostic.Unedesdifficultsmajeuresdanslamiseaupointd'unvaccincontrePlasmodiumest,qu'au coursdesavie,leparasitepassesuccessivementparplusieursstadesavecdesphasesd'intense multiplicationasexuechezl'homme(danslescellulesdufoie-phasehpatique-puisdansles Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 46 globulesrougesdusang-phaserythrocytaire)etunephasedereproductionsexuesuiviede multiplication, chez l'insecte. Chaque stade se termine par la libration d'un parasite d'une forme diffrente, donc porteur d'antignes diffrents et induisant des rponses immunitaires diffrentes, ce qui compliquela recherche d'un vaccin. 2.6.7 :Mdicaments antipaludens (Togola, 2002) 2.6.7.1 : Quinine et drivs LaquinineestunalcalodeobtenupartirdescorcesdeQuinquina.Elleexerceuneaction schizonticidesanguinerapidesurlesdiffrentesespcesplasmodiales.Sonadministration prolongepermetunegurisondupaludismePlasmodiumfalciparummaisrarementde linfection Plasmodium vivax. Laquinidineestundiasteroisomredelaquinineavecdespropritsantimalariques similaires.Ellenestpasrecommandepourletraitementderoutinedupaludismesimple,mais plutt pour celui compliqu et par voie parentrale. Lachloroquineestuneamino4quinolinetrsactivesurlesformesasexuesdesquatre espces de Plasmodium, sauf dans les rgions o existent des souches pharmacorsistantes. Le chef de file des amino 9 quinolines est la primaquine qui est trs active sur les gamtocytes de toutes les espces de Plasmodium, ainsi que sur les formes exo rythrocytaires latentes. NH3COCHHONCH2CH2CH CH2 NClNHHC CH2CH3CH2CH2 NC2H5C2H5 Quinine Chloroquine NNHHC CH2CH3CH2CH2 NH2OCH3

NClNH CHCH3CH2 CH2 CH2 NC2H5C2H5 Primaquine Mpacrine Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 47 2.6.7.2 : Artmisinine et drivs Lartmisinine est obtenue partir des feuilles de Artemisia annua L. (Asteraceae). Lartmether est un driv hmisynthtique de lartmisinine obtenu par rduction de loxygne fixsurlecarboneenposition12,ensuiteuneestrificationdugroupementOHform,pour aboutir deux isomres :et . Lartsunate est obtenu par rduction du groupement lactone de lartmisinine. Lartmisinineetsesdrivssontdespuissantsschizonticides,notammentaveclessouchesde Plasmodium falciparum chimiorsistantes. OOOO H3CCH3CH3O

OOOO H3CCH3CH3O CO CH2 CH2 COONa OOOO H3CCH3CH3OCH3 Artmisinine Artsunate Artmether 2.6.7.3 :Le malarial Le malarial est un mdicament traditionnel amlior prpar partir de trois plantes : - 62% de feuilles de Cassia occidentalis L. (Ceasalpinaceae) ; - 32% de feuilles de Lippia chevalieri Moldenke (Verbenaceae) ; - 6% de capitules de Spilantes oleraceae Jacq (Asteraceae). LactivitantimalariquedumalarialatvaluesurlaprolifrationdePlasmodium falciparumligneFCC32(chloroquinosensible) ;lesactivitsdudcoctdumalarial(CI50 = 0,6mg/ml) et de Cassia occidentalis taient similaires, les deux autres cocts (Lippia chevalieri et Spilantes oleraceae) ont t plus actifs avec respectivement 0,3 et 0,18 mg/ml. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 48 2.6.8 : Quelques plantes activit antipaludique reconnue (Togola,2002) TableauVI: QUELQUES PLANTES A ACTIVITE ANTIPALUDIQUES Noms scientifiquesFamilles Parties utilises Cassia occidentalis L.Ceasalpinaceae Feuilles Lippia chevalieri Moldenke Verbenaceae Feuilles Khaya senegalensis Desr. Meliaceae Ecorces de tronc Spilantes oleraceae Jacq.AsteraceaeCapitules Nauclea latidifolia Sm. Rubiaceae Ecorces de tronc Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 49 CHAPTRE3 CHAPTRE3 CHAPTRE3 CHAPTRE3 TRAVAUX PERSONNELS TRAVAUX PERSONNELS TRAVAUX PERSONNELS TRAVAUX PERSONNELS Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 50 3.1 :Mthodologie 3.1.1 :Etudes phytochimiques 3.1.1.1 : Matriel vgtal Le matriel vgtal a t constitu par les corces de racines et celles de tronc de Combretum glutinosum,collectesrespectivementle03et04janvier2004,Siby(RgiondeKoulikoro, Rpublique du Mali) par lherboriste Bakary Traor.Leschagedesdroguesatralissuruneclaie,lombre,etlatempratureambiantedu laboratoire du DMT pendant une semaine. Pour broyer les drogues sches, nous avons utilis un broyeur Resch type SM2000 OSI / 1430 pm. Nous avons obtenu des poudres marron et jauntre trsfinesrespectivementpourlescorcesderacinesetcellesdetronc.Nousavonsutilisces poudrespournosfuturesinvestigationsphytochimiquesetpharmacologiques.Unspcimenest disponible lherbier du DMT. 3.1.1.2 :Identification de la matire premire 3.1.1.2.1 : Caractres morphologiques Les racines de C. glutinosum sont droites, rugueuses et de couleur jaune-clair. Le tronc de C. glutinosum est rugueux, de couleur jaune et recouvert dune corce rougetre. 3.1.1.2.2 : Caractresorganoleptiques La poudre des corces de racines de C. glutinosum est de couleur marron, dodeur faible et de saveur astringente. LapoudredescorcesdetroncdeC.glutinosumestdecouleurjauntre,dodeurfaibleetde saveur astringente. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 51 3.1.1.3Ractions de caractrisation 3.1.1.3.1 : Ractions en tubes 3.1.1.3.1.1 :Alcalodes Solution analyser Nousavonsintroduit10gdepoudrevgtaleschedansunerlenmeyerde250ml,puis nous avons ajout 50 ml de H2SO4 10 %. Aprs agitation, nous avons laiss macrer 24 heures la temprature du laboratoire du DMT puis filtr sur papier filtre. Ensuite, nous avons complt le filtrat 50 ml avec de leau distille. Caractrisation Dansdeuxtubesessainousavonsintroduit1mldefiltratetajout5gouttesderactifde Mayer dans le premier tube et 5 gouttes de ractif de Dragendorff dans le second. Sil apparat un prcipit, la prsence dalcalodes est confirme par leur extraction. 3.1.1.3.1.2 :Substances poly phnoliques Solution analyser : infus 5 % Nous avons projet 5 g de poudre dans 100 ml deau bouillante contenue dans un erlenmeyer de 250 ml. Aprs infusion de 15 mn, nous avons filtr et complt le filtrat 100 ml avec de leau distille. Caractrisation Tanins Dans un tube essai, nous avons introduit 5 ml dinfus 5 % et ajout 1 ml de solution aqueuse de FeCl3 1 %. En prsence de tanin, il se dveloppe une coloration verdtre ou bleu-noirtre. -tanins catchiques A5mldinfus5%,nousavonsajout5mldHClconcentr.Lensembleatport bullitionpendant15mnpuisfiltrsurpapierfiltre.Enprsencedetaninscatchiques,ilse forme un prcipit rouge soluble dans lalcool iso amylique. -tanins galliques : raction de Stiasny A 30 ml dinfus 5 %, nous avons ajout 15 ml de ractif de Stiasny (10 ml de formol 40 % et 5 ml d HCl concentr), puis nous avons chauff au bain-marie 90 C pendant 15 mn environ. Aprs filtration, le filtrat a t satur par 5 g dactate de sodium pulvris. Nous avons ensuite Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 52 ajout 1 ml goutte goutte dune solution de FeCl3 1 %. Lobtention dun prcipit montre la prsence de tanins galliques. Filtrer et saturer 10 ml du filtrat dactate de sodium. Ajouter quelques gouttes de FeCl3 1 %. Ledveloppementduneteintebleu-noirindiquelaprsencedetaninsgalliquesnonprcipits par le ractif de Stiasny. FlavonodesA linfus 5 % prsentant une coloration plus ou moins fonce, nous avons ajout un acide (5 ml de H2SO4 10 %) puis une base (NH4OH). Si la coloration saccentue par acidification, puis vire au bleu-violac en milieu basique, cela permet de conclure la prsence danthocyanes. -Ractionlacyanidine :nousavonsintroduitdansuntubeessai5mldinfus5%,et ajout 5 ml dalcool chlorhydrique (thanol 95 %, eau distille, HCl concentr parties gales en volumes) ; puis quelques copeaux de magnsium et 1 ml dalcool iso amylique. Lapparitiondunecolorationroseorange(flavones)ouroseviolace(flavonones)ourouge (flavonols, flavononols) rassemble dans la couche surnageante dalcool iso amylique indique la prsence dun flavonode libre (gnines). Les colorations sont moins intenses avec les htrosides flavoniques. Laractionestngativeavecleschalcones,lesdihydrochalcones,lesaurones,lescatchineset les iso flavones. - Leucoanthocyanes : nous avons effectu la raction la cyanidine sans ajouter les copeaux de magnsiumetchauffaubain-mariependant15mn.Enprsencedeleucoanthocyanes,ilse dveloppe une coloration rouge cerise ou violace. Les catchols donnent une teinte brun-rouge. 3.1.1.3.1.3. :Drivs anthracniques Anthraquinones libres A 1 g de poudre, nous avons ajout 10 ml de chloroforme et chauff pendant 3 mn au bain-marie. Nous avons ensuite filtr chaud et complt 10 ml. A 1 ml de lextrait chloroformique obtenu, nousavonsajout1mldeNH4OHdiluetagit.Lacolorationplusoumoinsrougeindiquela prsence danthraquinones libres. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 53 Anthraquinones combines -LesO-htrosides :Apartirdursidudeladroguepuiseparlechloroforme,nousavons prpar un hydrolysat auquel il a t ajout 10 ml deau, 1 ml d HCl concentr puis maintenu le tube essai au bain-marie bouillant pendant 15 mn. 5 ml de lhydrolysat sont agits avec 5 ml de chloroforme.Alaphaseorganique,nousavonsajout1mldeNH4OHdilu. ;laprsence danthraquinones est rvle par la coloration rouge plus ou moins fonce. La raction peut tre plus pousse par addition 5 ml de lhydrolysat 3 4 gouttes de FeCl3 10 %, puis agitation avec 5 ml de chloroforme. A la phase chloroformique, nous avons ajout 1 ml de NH4OH dilu et agiter. En prsence de produits doydation des anthranols ou des anthrones, la coloration rouge est plus intense que prcdemment. - Les C-htrosides : Nous avons repris la phase chloroformique qui a t conserve par 10 ml deau,puisajout1mldeFeCl310%.Aprsbullitionaubain-mariependant30mn,nous avons agit avec 5 ml de chloroforme et ajout la phase chloroformique 1 ml de NH4OH dilu. Une coloration rouge plus ou moins intense indique la prsence de gnines C-htrosides. Diffrenciation des quinones : Raction de Brissemoret et CombesA 1 g de poudre humecte avec H2SO4 10 %, nous avons ajout 20 ml dun mlange volume galdtheretdechloroforme.Aprsmacrationde24heures,5mldufiltratobtenusont vapors lair, puis le rsidu repris par quelques gouttes dthanol 95 %. Ensuite, nous avons ajout goutte goutte une solution aqueuse dactate de nickel 5 %. 3.1.1.3.1.4 :Strols et triterpnes Lextraittesteratobtenupartirde1gdepoudreet20mldtherlaisssenmacration pendant 24 heures, puis filtrs et complts 20 ml avec de lther. Aprs avoir vapor sec 10 mldelextrait,nousavonsdissoutlersidudans1mldanhydrideactiquepuis1mlde chloroforme.Nousavonsensuitepartagdansdeuxtubesessai. Lun servant de tmoin, nous avonsmisdanslefonddusecondtubeessail aidedunepipette12mldeH2SO4 concentr. A la zone de contact des deux liquides, il y a formation dun anneau rouge bruntre ou violet,lacouchesurnageantedevenantverteouviolettervlelaprsencedestrolset triterpnes. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 54 3.1.1.3.1.5 :Carotnodes Aprsvaporationsecde5mldelextrait,nousavonsajout23gouttesdunesolution saturedetrichloruredantimoinedanslechloroforme.Ilsedveloppeenprsencede carotnodes une coloration bleue devenant rouge par la suite. 3.1.1.3.1.6 : Htrosides cardiotoniques Solution analyser Nous avons introduit 1 g de poudre dans un tube essai puis ajout 10 ml dthanol 60 % et5mldunesolutiondactateneutredeplomb10%.Lensembleatportbullition pendant10mn.Ensuite,nousavonsfiltrsurcotonaprsavoirportaubain-mariebouillant pendant 10 mn. Caractrisation Nousavonsagitlefiltratobtenuavec10mldeCHCl3dansuntubeessaienvitantla formationdunemulsion(mettredansuneampouledcanter).Aprsdcantation,laphase chloroformiqueatsoutirelaidedunepipettepuispartageentretroistubesessaiet vapore au bain-marie jusqu sec. Les rsidus ont t repris avec 0.4 ml disopropanol et dans les trois tubes, ont t ajouts respectivement 1 ml de ractif de Baljet, 1 ml de ractif de Kedde et1mlderactifdeRaymond-Marthoud.Ensuite,nousavonsintroduitdanschaquetube2 gouttesdeKOH2%danslthanoletobservaprsunedizainedeminutes.Enprsencede cardnolides, les colorations suivantes se dveloppent :- tube 1 : orang ;- tube 2 : rouge-violac ; - tube 3 : violet fugace. 3.1.1.3.1.7 : Saponosides Dcoct 1 % Nous avons port bullition 100 ml deau distille dans un erlenmeyer de 250 ml et y ajout 1g depoudrepuismaintenirunebullitionmodrependant15mn.Aprsfiltration,nousavons ajust le filtrat 100 ml. Caractrisation Dansunesriede10tubesessainumrotsde110,nousavonsrepartisuccessivement1, 2,.10 ml du dcoct 1 % prpar et ajust le volume dans chaque tube 10 ml avec de leau Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 55 distille.Ensuite,chaquetubeatagitdanslesensdelalongueurpendant15secondesen raisonde2agitationsparseconde.Aprsavoirlaissaurepospendant15minutes,nousavons mesur la hauteur de la mousse dans chaque tube. Le tube dans lequel la hauteur de la mousse est de 1 cm indique lindice de mousse : 1000 Indice de mousse =Numro du tube 3.1.1.3.1.8 : Composs rducteurs Nous avons introduit 5 ml de dcoct aqueux 10 % dans un bcher de 100 ml et vapor sec au bain-marie. Au rsidu, a t ajout 1 ml de ractif de Fehling (0,5 ml de ractif A et 0,5 ml de ractif B, mlange extemporan). Lobtention dun prcipit rouge-brique indique la prsence de composs rducteurs. 3.1.1.3.1.9 : Oses et holosides Nous avons introduit 5 ml du dcoct 10 % dans un bcher de 100 ml et vapor au bain-marie sec. Au rsidu, il a t ajout 2 3 gouttes de H2SO4 concentr. Aprs 5 mn, nous avons ajout 3 4 gouttes dthanol satur avec du thymol. Le dveloppement dune coloration rouge rvle la prsence doses et holosides.3.1.1.3.1.10 : Mucilages Nous avons introduit 1 ml du dcoct 10 % dans un tube essai et ajout 5 ml dthanol absolu. Aprsunedizainedeminutes,lobtentiondunprcipitfloconneuxparmlange,indiquela prsence de mucilages. 3.1.1.3.1.11 :Coumarines 5mldextraitthrobtenuaprsunemacrationde24heuressontvaporslairlibre,puis reprisavec2mldeauchaude.Lasolutionestpartageentre2tubesessai.Laprsencede coumarines est rvle aprs ajout dans lun des tubes de 0,5 ml de NH4OH 25 % et observation de la fluorescence sous une lampe UV 366 nm. Une fluorescence intense dans le tube o il a t ajout lammoniaque indique la prsence de coumarines. Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 56 3.1.1.3.1.12 : Htrosides cyanogntiques Nous avons introduit dans un tube 1 g de poudre et ajout 5 ml de tolune et 5 ml deau. Aprs agitation, nous avons nettoy la partie suprieure du tube essai. Le papier picrosod frachement prpar a t fix laide dun bouchon la partie suprieure du tube. La prsence dhtrosides cyanogntiques est rvle par la coloration rouge plus ou moins intense du papier picrosod. 3.1.1.3.2 : Dosages de certaines substances 3.1.1.3.2.1 :Substances extractibles par leau Nous avons fait une dcoction pendant 15 mn avec 1 g de poudre dans 20 ml deau distille. Le filtratatmisdansunecapsulepralablementtareetvaporsec.Lacapsuleatensuite pese aprs refroidissement et la masse du rsidu dduite. 3.1.1.3.2.2: Substances extractibles par lthanol 80 % Nous avons fait une macration de 24 heures la temprature ambiante du laboratoire du DMT. Aprsfiltration,lefiltratatmisdansunecapsulepralablementtarepuisvaporsec.La capsule a ensuite t pese aprs refroidissement et la masse du rsidu dduite. 3.1.1.3.2.3 : Dosage de leau 3.1.1.3.2.3.1 :Mthode gravimtrique Principe :ilconsistedterminerlaperteenmassedunequantitconnuedepoudrepar dessiccation ltuve la temprature de 103 C 2 C pendant 24 heures. Mode opratoire : nous avons ensuite introduit 5 prises dessai (1 2 g) respectivement dans 5 verres de montre pralablement tars (T1 T5). Les masses des prises dessai plus les tares ont t notes P1 P5. Aprs 24 heures de sjour ltuve la temprature de 103 C 2 C, nous les avons pess de nouveau et not P1 P5. Les prises dessai ont t places ltuve jusqu masse constante.

Lamassedeaucontenuedanslapoudredechaqueverredemontrenotemestdonneparla formule : M =P-PLa masse de la prise dessai est : M PE=P - T Thse de pharmacie Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae) 57 Le pourcentage deau contenue dans la poudre est : Masse eau % eau= MPE M PE : Masse de la prise dessai. Nousavonsdterminlamoyennedespourcentagesdeaudes5verresdemontredansles mmes conditions. 3.1.1.3.2.3.2 : Mthode de lentranement azotropiquePrincipe :ilconsisteentranerleaucontenuedansuneprisedessaidelapoudrepar distillation avec un solvant non miscible. Mode opra