tmd175 slide laboratory diagnostic hiv and aids

7/26/2019 Tmd175 Slide Laboratory Diagnostic Hiv and Aids

http://slidepdf.com/reader/full/tmd175-slide-laboratory-diagnostic-hiv-and-aids 1/38

LABORATORYLABORATORYDIAGNOSTIC HIV ANDDIAGNOSTIC HIV AND

AIDSAIDS

Prof. DR. Dr.Prof. DR. Dr. RatnaRatna AkbariAkbari GanieGanie,,

SpPKSpPK, FISH, FISH

CLINICAL PATHOLOGY DEPARTMENT MEDICALFACULTY USU / RSUP H.ADAM MALIK

MEDAN



WHOWHO menentukanmenentukan diagnosis HIVdiagnosis HIV dandanAIDSAIDS berdasarkanberdasarkan gejalagejala klinisklinis dandan jenis jenis

testes pemeriksaanpemeriksaanGejalaGejala klinisklinis HIVHIV dandan AIDSAIDS menurutmenuruttaha antaha an daridari WHOWHO dimulaidimulai adaada tahuntahun

19901990 kemudiankemudian diperbaharuidiperbaharui bulanbulanSeptember 2005September 2005

KondisiKondisi iniini eraterat kaitannyakaitannya dengandengan infeksiinfeksioportunistikoportunistik..



Perkembangan HIV menurut WHO,Perkembangan HIV menurut WHO,dibagi dalam 4 stadium:dibagi dalam 4 stadium:

Stadium IStadium IInfeksiInfeksi HIVHIV asimtomatikasimtomatik dandan tidaktidakdikategorikandikategorikan sebagaisebagai AIDS,AIDS, padapada tahaptahapiniini en idaen ida HIVHIV tidaktidak men adarimen adari bahwabahwa

merekamereka telahtelah terinfeksiterinfeksi ((serokonversiserokonversi))Stadium IIStadium II

TermasukTermasuk manifestasimanifestasi membranmembran mukosamukosa

kecilkecil dandan radangradang saluransaluran pernafasanpernafasan atasatasyangyang berulangberulang,, padapada fasefase iniini belumbelumnampaknampak gejalagejala tetapitetapi virusvirus tetaptetap aktifaktif



Stadium IIIStadium IIIFaseFase simptomatiksimptomatik,, termasuktermasuk diarediare kronikkronikyangyang tidaktidak dapatdapat dijelaskandijelaskan selamaselama lebihlebihdaridari sebulansebulan,, infeksiinfeksi bakteribakteri parahparah,, dandantuberkulosistuberkulosis

AIDS, yangAIDS, yang berartiberarti kumpulankumpulan penyakitpenyakityangyang disebabkandisebabkan oleholeh virus HIV,virus HIV, adalahadalah

fasefase akhirakhir dandan biasanyabiasanya bercirikanbercirikan suatusuatu jumlah jumlah CD4CD4 kurangkurang 200200



StrukturStruktur HIVHIV

g . , u u me ca m cro o ogy ag . , u u me ca m cro o ogy a



HIV replication cycleHIV replication cycle



PatogenesisPatogenesisHIV/AIDSHIV/AIDS

Fig 19.33, hal 245,Fig 19.33, hal 245,medical microbiologymedical microbiology



Clinical features andClinical features andprogression of HIVprogression of HIVinfectioninfection



Beberapa tes HIVBeberapa tes HIV

PemeriksaanPemeriksaan dasardasar::

– – FBC (full blood count)FBC (full blood count)

– – PemPem.. fungsifungsi hatihati

– – PemPem.. fungsifungsi ginjalginjal:: ureumureum dandan kreatininkreatinin – – AnalisaAnalisa urinurin

– – PemPem.. fesesfeses lengkaplengkap



PemeriksaanPemeriksaan penunjangpenunjang

– – TesTes antibodiantibodi terhadapterhadap HIVHIV

– – Viral load Viral load

– – CD4/CD8CD4/CD8



FULL BLOOD COUNT (FBC)FULL BLOOD COUNT (FBC)HbHbEritrositEritrositHematokritHematokritLeukositLeukositTrombositTrombosit

– – NeutrofilNeutrofil – – LimfositLimfosit – – MonositMonosit

– – EosinofilEosinofil – – BasofilBasofilLEDLED

Ini Ini sangat sangat tergantung tergantung pada pada stadium HIVstadium HIV dan dan AIDS,AIDS,sehingga sehingga diperlukan diperlukan

pemeriksaan pemeriksaan yang lain yang lain sebagai sebagai pemeriksaan pemeriksaan dasar dasar



Tes antibodi terhadap HIVTes antibodi terhadap HIV

TesTes menggunakanmenggunakan bahanbahan whole blood whole blood

AntibodiAntibodi dihasilkandihasilkan setelahsetelah seorangseorangterinfeksiterinfeksi HIVHIV lebihlebih kurangkurang 33--88 mingguminggu

Window perio Window perio ((tahaptahap jendela jendela),), dimanadimanapadapada saatsaat iniini antibodiantibodi belumbelum terdeteksiterdeteksi

PadaPada tahaptahap window period window period kemungkinankemungkinan

bisabisa dilakukandilakukan pemeriksaanpemeriksaan antigenantigenataupunataupun pemeriksaanpemeriksaan viral load viral load



Beberapa jenis tes antibodi HIVBeberapa jenis tes antibodi HIVRapid testRapid test

ELISAELISA

Western BlottingWestern Blotting



Rapid testRapid testMaterial provided:Material provided:

– – SD BIOLINE HIVSD BIOLINE HIV--1/2 test device/ Multi1/2 test device/ Multi--device/strip/POCTdevice/strip/POCT

– – ,,

pipette (20pipette (20 µµl/drop)l/drop)

– – Assay diluentAssay diluent



Test procedureTest procedureI. Blood specimen (with a lancet):I. Blood specimen (with a lancet):

1.1. Pierce with sterile lancet providedPierce with sterile lancet provided

2.2. Take a 20Take a 20 µµl capillary pipette provided, drawl capillary pipette provided, drawblood into the capillary pipette to black lineblood into the capillary pipette to black line

.. µµ o rawn oo n o e samp eo rawn oo n o e samp ewell (s)well (s)

4.4. Add 4 drops of assay diluent into the sampleAdd 4 drops of assay diluent into the sample

well (s)well (s)



II. Blood (by venipucture), plasma or serumII. Blood (by venipucture), plasma or serum

specimenspecimen1.1. Add 10Add 10 µµl of plasma or serum (l of plasma or serum (2020 µµl ofl of

2.2. Add 4 drops of assay diluent into theAdd 4 drops of assay diluent into thesample well (s)sample well (s)



ELISAELISA



PEMERIKSAAN ELISAPEMERIKSAAN ELISAPEMERIKSAAN ELISAPEMERIKSAAN ELISA

HumoralHumoral componentcomponent ::

PenderitaPenderita HIV ( + )HIV ( + ) membentukmembentuk antibodiantibodi antianti--envelopeenvelope antibodiantibodi gp120, antigp120, anti--p24p24 antibodiantibodi

MetodeMetode pemeriksaanpemeriksaan ::-- ELISA (KUANTITASI)ELISA (KUANTITASI)-- Rapid test (KUALITASI)Rapid test (KUALITASI)

HIV Antigen ELISAHIV Antigen ELISA mendeteksimendeteksi HIV core AntigenHIV core Antigen(p24)(p24) merupakanmerupakan mayor antigen .mayor antigen .

HIVHIV antibodiantibodi terhadapterhadap protein gp120protein gp120 dandan p24p24



Pemeriksaan antibodi → Induplo ( cekPemeriksaan antibodi → Induplo ( cek

ulang denganulang dengan duplikasi )duplikasi )duplikasi )duplikasi )duplikasi )duplikasi )duplikasi )duplikasi ) untukuntukmenghindari teknikal error dan falsemenghindari teknikal error dan false

positif.positif.

Hasil : Reaktif → pemeriksaanHasil : Reaktif → pemeriksaankonfirmasi menggunakan metodekonfirmasi menggunakan metode

Western BlottingWestern BlottingWestern BlottingWestern BlottingWestern BlottingWestern BlottingWestern BlottingWestern Blotting (Immunoblotting)(Immunoblotting) ........

False positif jarang terjadi.False positif jarang terjadi.Kekurangan :Kekurangan :Kekurangan :Kekurangan :Kekurangan :Kekurangan :Kekurangan :Kekurangan :

-- Memerlukan waktu yang lamaMemerlukan waktu yang lama

-- Membutuhkan Staff yang terlatihMembutuhkan Staff yang terlatih

-- Memerlukan biaya yang relatif mahalMemerlukan biaya yang relatif mahal



Western BlottingWestern Blotting(Confirmation Test)(Confirmation Test)



••Untuk Untuk tujuantujuan surveilanssurveilans,, reagenreagen yangyangdipilihdipilih harusharus memilikimemiliki sensitivitassensitivitas >>99%,99%, dandan

spesifisitasspesifisitas reagenreagen berikutnyaberikutnya >98%,>98%, dandanuntuk untuk reagenreagen ketigaketiga spesifisitasspesifisitas >95%>95%

asymptomatic asymptomatic

••SemuaSemua regensiaregensia yangyang dipakaidipakai harusharusterdaftarterdaftar didi DepKesDepKes RI.RI.



Tes HIV Viral Load PCRTes HIV Viral Load PCRMetode PCR menyediakan suatuMetode PCR menyediakan suatu

mekanisme untuk mendeteksi targetmekanisme untuk mendeteksi targetorganisme dengan konsentrasi yangorganisme dengan konsentrasi yang

tinggi dan dibuat tiruannya berlipat gandatinggi dan dibuat tiruannya berlipat gandasehingga ada tidaknya virus dan bakterisehingga ada tidaknya virus dan bakterispesifik serta mutasi materi genetik dapatspesifik serta mutasi materi genetik dapatdideteksidideteksi



TahapanTahapan ProsesProses PCRPCRPrePre – – PCR :PCR :

PreparasiPreparasi reagensiareagensia

PreparasiPreparasi spesimenspesimen :: isolasiisolasi/ / purifikasipurifikasi DNA/DNA/RNARNA

PCR :PCR : prosesproses amplifikasiamplifikasiDenaturasiDenaturasi ((pemisahanpemisahan rantairantai DNA)DNA)

Annealing (Annealing (penempelanpenempelan primer)primer)

Extension (Extension (pemanjanganpemanjangan oleholeh enzimenzim))PostPost – – PCR :PCR :

DeteksiDeteksi/ / AnalisaAnalisa HasilHasil PCRPCR



Viral load HIV adalah jumlah partikel virusViral load HIV adalah jumlah partikel virusHIV yang ditemukan dalam setiap mililiterHIV yang ditemukan dalam setiap mililiterdarahdarah

Semakin ban ak umlah artikel virus HIVSemakin ban ak umlah artikel virus HIV

di dalam darah, semakin cepat seldi dalam darah, semakin cepat sel--selselCD4 dihancurkan dan semakin cepatCD4 dihancurkan dan semakin cepatpasien menuju ke arah AIDSpasien menuju ke arah AIDS



Viral load HIV dapat diukur dengan PCR,Viral load HIV dapat diukur dengan PCR,salah satu metode PCR yang digunakansalah satu metode PCR yang digunakansaat ini adalah dengan COBASsaat ini adalah dengan COBAS

AMPLICORTMAMPLICORTM Analyzer Process Steps Analyzer Process Steps Dalam proses amplifikasi target sekuenDalam proses amplifikasi target sekuendi andakan b rulandi andakan b rulan --ulan hin aulan hin a

didapat jutaan kopi yang dinamakandidapat jutaan kopi yang dinamakanamplikon. Hasil pemeriksaan dilaporkanamplikon. Hasil pemeriksaan dilaporkansebagai copies/mL atau dalamsebagai copies/mL atau dalam

perhitungan matematik logaritma atau ‘log’perhitungan matematik logaritma atau ‘log’



Misalnya hasil pasien X adalah 173.000Misalnya hasil pasien X adalah 173.000copies/mL=log 5,24 atau pelaporan dalamcopies/mL=log 5,24 atau pelaporan dalam

satuan International Unit= 88.230satuan International Unit= 88.230IU/mL=log 4,946IU/mL=log 4,946

Viral loadViral load VL menun ukkan tin in aVL menun ukkan tin in a

replikasi HIV dan kecepatanreplikasi HIV dan kecepatanpenghancuran CD4 dan tinggi rendahnyapenghancuran CD4 dan tinggi rendahnyaVL menunjukkan cepatVL menunjukkan cepat--lambatnyalambatnya

perjalanan penyakit dan kematianperjalanan penyakit dan kematian



PengukuranPengukuran CD4CD4++

PengukuranPengukuran cellular componentcellular component ::

Target cellTarget cell adalahadalah T.helperT.helper (CD4+)(CD4+)

Normal :CD4+ :65 %Normal :CD4+ :65 % dandan CD8+ : 35%CD8+ : 35% daridaritotal Ttotal T--cellcell

PadaPada penderitapenderita AIDSAIDS konsentrasikonsentrasi CD4+CD4+menurunmenurun secarasecara drastisdrastis..

KonsentrasiKonsentrasi CD4+CD4+ dihubungkandihubungkan dengandengan

konsentrasikonsentrasi CD8CD8MenyebabkanMenyebabkan rasiorasio CD4+ / CD8CD4+ / CD8 terbalikterbalik padapada

HIV / AIDSHIV / AIDS



TEKNIK PEMERIKSAANTEKNIK PEMERIKSAAN CD4+CD4+

CaraCara ImmunophenotypingImmunophenotyping menggunakanmenggunakanFlowFlow CytometriCytometri dandan Cell sorterCell sorter

PrinsipPrinsip :: MenggabungkanMenggabungkan kemampuankemampuan alatalat--

masingmasing permukaanpermukaan cellcell dengandengan kemampuankemampuanmemisahkanmemisahkan cell yangcell yang beradaberada dalamdalam suatusuatususpensisuspensi menurutmenurut karakteristikkarakteristik masingmasing--

masingmasing dengandengan menggunakanmenggunakan satusatu atauatau lebihlebihProbe yangProbe yang sesuaisesuai secarasecara automatisautomatis melaluimelaluisuatusuatu celahcelah yangyang diteruskanditeruskan oleholeh seberkasseberkassinarsinar laser.laser.



CellCell SinyalSinyal elektronikelektronikdetectordetector

Sinar laser

cell

DetectorDetector →→ dicatatdicatat sebagaisebagai karakteristikkarakteristikcellcell yangyang bersangkutanbersangkutan

→→ IdentifikasiIdentifikasi jenis jenis cellcell

→→ aktivitasaktivitas cellcell→→ JumlahJumlah cellcell dalamdalam populasipopulasi

campurancampuran



Diagnosis HIV pada bayiDiagnosis HIV pada bayi

InfeksiInfeksi HIVHIV dapatdapat terjaditerjadi padapada bayibayi selamaselama

kehamilankehamilan,, saatsaat melahirkanmelahirkan,, dandan waktuwaktumenyusuimenyusui

berusiaberusia 1818 bulanbulan keke atasatas berartiberarti anakanaktersebuttersebut terinfeksiterinfeksi HIVHIV

TesTes virus HIV (RNA virus)virus HIV (RNA virus) dengandengan alatalatPCRPCR dapatdapat dipakaidipakai untukuntuk diagnosadiagnosa HIVHIVpadapada bayibayi



WHO mengusulkan Tes Viral Load untukWHO mengusulkan Tes Viral Load untukdiagnosa infeksi HIV pada bayi sebaiknyadiagnosa infeksi HIV pada bayi sebaiknyadilakukan pada usia 6 minggu ke atasdilakukan pada usia 6 minggu ke atas

Untuk menghindari negatif palsuUntuk menghindari negatif palsusebaiknya dilakukan dua tes virus untuksebaiknya dilakukan dua tes virus untuk

konfirmasi bahwa anak tidak terinfeksikonfirmasi bahwa anak tidak terinfeksiSebaiknya tes antibodi juga harusSebaiknya tes antibodi juga harusdilakukan setelah anak berusia 18 bulandilakukan setelah anak berusia 18 bulan

sebagai konfirmasi ulangsebagai konfirmasi ulang



TesTes antibodiantibodi HIV yangHIV yang positifpositif padapada anakanak berusiaberusia1818 bulanbulan keke atasatas berartiberarti anakanak terinfeksiterinfeksi HIVHIV

TesTes PCR HIV yangPCR HIV yang negatifnegatif padapada anakanak belumbelum

berusiaberusia enamenam mingguminggu tidaktidak meyakinkanmeyakinkan bahwabahwaanakanak tidaktidak terinfeksiterinfeksi HIVHIV

AnakAnak dengandengan testes PCR HIVPCR HIV negatifnegatif yangyang

sebaiknyasebaiknya ditesdites PCR HIVPCR HIV ulangulang

((Antiretroviral therapy of HIV infection in infantsAntiretroviral therapy of HIV infection in infants

and children in resource and children in resource- -limited setting limited setting , WHO, WHO2006 )2006 )



UntukUntuk parapara klinisiklinisi dalamdalam memantaumemantau

progresivitasprogresivitas penyakit,penyakit, diperlukandiperlukanpemeriksaanpemeriksaan ::

ViralViral LoadLoad (PCR)(PCR)

tmd175 slide laboratory diagnostic hiv and aids

Documents