tosoh – hba1 c

Tosoh – HbA1c

Marianne Birkekær

Bioanalytikerunderviser Marianne Birkekær, Klinisk Biokemi Næstved sygehus 2012

Former af hæmoglobin

Voksne: HbA(97%), HbA2(2,5%) og HbF(0,5%)

HbA ~ HbA1 : HbA1a, HbA1b og HbA1c

Nyfødte: 20 % HbA og 80 % HbF

HbF nedbrydes på 6 mdr til under 1 %

Hæmoglobinvarianter:

Skyldes mutationer i proteinmolekylet

HbS, HbE, HbC og HbD

HbA(dult)

Kolonne og filter

Analyseprincip

Salt koncentration

Høj

Prøve Injektion KolonneDetektor

－

－－－

－

Lav

1 2 3

Detektoren detekterer kun “røde “ proteiner i prøven ved at arbejde med to bølgelængder:415 (detek) og 510nm(ref)

Flowdiagram (simplificeret)

Top-højde

Retentions Tid

Prøve A : stærk interaktionStor fraktion

Prøve B :svag interaktionLille fraktion

FlowDetector

Analyseprincip

Flow i forhold til kromatogram

1. Buffer 1 injeceres.(Grøn)(FP) HbA1a og HbA1b

2. Buffer 2 injeceres.(Rød)HbF, l-HbA1c og s-HbA1c

3. Buffer 2+3 injeceres (Rød+Gul)Forhold 1: 1HbAo

4. Buffer 3 injeceres.(Gul)Evt.Hb-var (D, S, C)

Total bufferforbrug G8:Grøn: 0,80 mlRød: 0.88 mlGul: 0.72 ml

1

2

3

4

Interaktion med resin

Kraftig

svag

HbC

HbS

HbA0

s-HbA1c

l-HbA1c

HbF

HbA1b

HbA1a

HbD

Retentionstider for de forskellige fraktioner

A1A: 0.25-0,27A1B: 0.28-0.33HbF: 0.40-0.49lA1c: 0.50-0,57sA1c: 0.57-0.61A0 : 0.87-0.91H-V0: 0.98-1.06H-V1: 1.13-1.22H-V2: 1.26-1.35

Udnyttelse af forskellighed i ion-interaktioner

– Grundlæggende Hb separation

(HbA1a- HbA0)

– Hb-variant separation

(HbD,HbS,HbC)

Alle separeret ved hjælp af forskellige saltkoncentrationer og pH-

værdier i bufferene

G8 Variant mode 1.6 min kromatogram

Fraktionnavn

Procentangivelse

RetentionstidRetentionstid-sA1c: 0,57-0.61

Areal

Totalareal 500-4000

Kalibreringsligning

TP-værdi >250

Beregning af resultat: (sker automatisk)52,12 (sA1c)

x= --------------------------------- (x 100%) = 4,9 %1073 (Total) – 3,29 (HbF)

HbA1c = 1,0 x 4.9% + 0,0= 4,9%

TP-værdi

TP = Theoretical PlatesIndikerer kolonnens beskaffenhed/kvalitet og dermed også toppenes skarphed

og kvalitet på kromatogrammet - Beregnes på sA1c-toppen

TP = 5.54 x (RT / W½)2

RT = Retentions Tid sA1c

W½ = Top-bredde ved halv højde.

TP > 250

1. Kan falde voldsomt ved tilstedeværelse af variant (ses kun på den pågældende prøve !)2. Ved fald til vedblivende værdi < 250 er det typisk et udtryk for at kolonnen skal skiftes.

TP<250 på én prøve -> fokuser på selve prøven/patientenTP<250 på flere prøver -> teknisk fejl

Resultater og svar

LMV Indikation Diagnostik af Diabetes Mellitus type II samt kontrol af diabetesbehandling. Medicinsk baggrund HbA1c er slutprodukt i en ikke-enzymatisk glykering af hæmoglobin. Forholdet mellem HæmoglobinA1c og total-

Hæmoglobin kan betragtes som et eksponentielt vægtet gennemsnit af de forudgående 2-3 måneders glukosekoncentration, således at de sidste ugers værdier vægter mere end de tidligere.

Kan ikke anvendes på børn under 6 måneder, da hæmoglobin F ikke glykeres. Nyresygdomme og jernmangel kan give forhøjede værdier. Hæmolytiske og hæmoragiske tilstande giver lavere

værdier. Hvis der forekommer abnorme hæmoglobinvaranter i kromatogrammet, eller HbF er større end 15%, kan svaret ikke

afgives. Fructosamin kan anvendes til monitorering af patienter med hæmoglobinvarianter, hvor der ikke kan afgives et svar

på HbA1c.Fructosamin afspejler middelglucoseværdien for de sidste 2-3 uger. (link til Fructosamin): http://www.unilabs.dk/Laboratoriemedicin/Analyser/Analysefortegnelse/ Tolkning En værdi for HbA1c på eller over 48 mmol/mol er den diagnostiske grænse for diabetes.Ved diagnostik af diabetes bør

foretages 2 uafhængige HbA1c-målinger. Dog kan HbA1c IKKE anvendes diagnostisk ved patienter med mistanke om gestationel diabetes, patienter med

nyreinsufficiens, personer med hæmoglobinopati og patienter med hæmatologiske sygdomme, der påvirker erythrocytlevetiden. I sådanne tilfælde skal der anvendes diagnostisk glukosemåling eller glukosebelastning.

Endvidere skal HbA1c tolkes med varsomhed ved akut opstået sygdom hos såvel børn som voksne. Såfremt HbA1c ligger i intervallet 42 -48 mmol/mol, bør målingen gentages årligt.

http://www.unilabs.dk/Laboratoriemedicin/Analyser/Analysefortegnelse/

Referenceinterval

Hb (Fe; B)-Hæmoglobin A1c (Fe); 31 - 44 mmol/mol (IFCC)Hb (Fe; B)-Hæmoglobin A1c (Fe); 5,0 - 6,2 % (DCCT)P-Glucose;stofk.(gennemsnit;HbA1c;proc.) 5,4 - 7,3 mmol/l (eAG)

17 feb. 2012 :HbA1c til at diagnosticere type 2 diabetes

Undgår faste før prøvetagning Ingen døgnvariation Svar ”straks” Der er enkelte situationer, hvor Sundhedsstyrelsen ikke anbefaler at bruge HbA1c

blodprøven, for eksempel hvis patienten er gravid. I disse situationer anbefaler styrelsen at benytte den hidtidige metode.

Fremover vil en værdi af HbA1c på eller over 6,5 procent være den diagnostiske grænse for diabetes. Den ændrede metode vil sandsynligvis betyde, at flere med ikke-diagnosticeret diabetes kan få en diagnose, og dermed få fordelene af en mulig behandling.

”Kendte” varianter

Hb A/D Hb A/S Hb A/C

Eksempler

tosoh – hba1 c

Documents