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Faculté de Médecine et de Pharmacie de Rabat Laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie

Pr. YAHYA CHERRAH

ANNEE : 2011-2012

Pr. Y. CHERRAH Pr. A. BOUKLOUZE Pr. S. SERRAGUI

Pr. R. EL JAOUDI Pr. M. AIT EL CADI Pr. Y. BOUSLIMAN

TRAVAUX PRATIQUES TOXICOLOGIE II

2ème ANNEE DE PH ARMACIE

http://www.pdfcomplete.com/cms/hppl/tabid/108/Default.aspx?r=q8b3uige22

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Pr. YAHYA CHERRAH

RECOMMANDATIONS AUX ÉTUDIANTS ü Il est impératif de respecter la répartition des groupes de TP

ü Le port de la blouse blanche est obligatoire pendant les séances.

ü Chaque étudiant avant de quitter la salle doit nettoyer sa

Paillasse ainsi que le matériel utilisé.

ü Les comptes rendus doivent être rédigés par binôme.


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Pr. YAHYA CHERRAH

SOMMAIRE :

DOSAGE DES NITRITES METHODE

AU REACTIF DE ZAMBELLI………………………………… .5

DOSAGE DES IONS SULFATES……………………………… 8

DOSAGE DES IONS NITRATES……………………………… 13

DOSAGE DES IONS FLUORURES…………………………… 17

RECHERCHE ET DOSAGE DE

L'ETHANOL……………………………………………………… 20

DETERMINATION DE L’ACTIVITE

CHOLINESTERASIQUE ……………………………………… ..27

RECHERCHE TOXICOLOGIQUE

DES CHLORATES ……………………………………………… 32


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Pr. YAHYA CHERRAH

TOXICOLOGIE ANALYTIQUE DOSAGE SPECTROPHOTOMETRIQUES


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Pr. YAHYA CHERRAH

DOSAGE DES NITRITES

METHODE AU REACTIF DE ZAMBELLI

I- INTRODUCTI ON : Suivant l’origine des eaux, la teneur en nitrites est assez variable. La méthode au

réactif de ZAMBELLI a une sensibilité de l’ordre de quelques micro-grammes

par litre. Il sera nécessaire d’en tenir compte pour l’interprétation des résultats et

de prendre toutes précautions utiles pour la pureté des réactifs et la propreté de

la verrerie.

L’équilibre entre l’ammoniaque, les nitrites et nitrates peut évoluer rapidement

sous l’influence de phénomènes biologiques, il convient donc de procéder au

dosage des nitrites le plutôt possible après prélèvement, en les conservant à

40°C.

II- PRINCIPE :

L’acide sulfanilique, en milieu chlorhydrique en présence d’ion ammonium et

de phénol, forme avec les ions NO2

- un complexe coloré jaune dont l’intensité est proportionnelle à la concentration

en Nitrite.

III- MATERIELS ET REACTIFS :

1- Matériels :

- Fioles jaugées : 1L (2)

- Bêchers : (3)

- Eprouvettes : 500ml (1), 1000ml (1), 25ml (1) et 10ml (1)

- Pipettes : 10ml (1), 5ml (1), 2 ml (1)

- Tubes à essai : 15ml (1)


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Pr. YAHYA CHERRAH

- Bain-marie, balance, agitateur.

2- Réactifs :

Ammoniaque pur (d = 0,925) ;

Solution mère étalon de NO2 0,23g /l (détailler ce calcul dans le rapport) :

- Nitrite de sodium---------------------------0,345g

- Eau fraîchement distillée -----------------1000ml

Cette solution se conserve mieux si l’on prend la précaution d’y ajouter 1 ml de

chloroforme.

Solution fille étalon d’ion NO2 à 0,0023g/l : - Préparer cette solution dans une fiole jaugée de 100 ml à partir de la solution mère avec

de l’eau distillée.

Réactif de ZAMBELLI : - HCL pur (d = 1,19) -----------------------260ml

- Acide sulfanilique -------------------------5g

- Phénol cristallisé ---------------------------7,5g

- Chlorure d’ammonium--------------------135g

- Eau distillée (exempte de NO2-) --------625ml

3- Préparation du réactif de ZAMBEILLI :

§ Introduire dans une fiole jaugée d’un litre : l’eau distillée et l’HCL ;

§ Dissoudre dans le mélange l’acide sulfanilique et le phénol en chauffant

légèrement au bain–marie jusqu’à dissolution complète ;

§ Ajouter le chlorure d’ammonium et agiter jusqu’à dissolution ;

§ Après refroidissement ajuster jusqu’à 1L avec l’eau distillée.

N.B : Le nitrite est un produit qu’il faut manipuler avec délicatesse vue sa

toxicité et son impact sur la santé de l’homme.


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Pr. YAHYA CHERRAH

IV- ETABLISSEMENT DE LA COURBE D’ETALONNAGE :

Dans une série de tubes à essai (15ml) numérotés introduire successivement les

réactifs en agitant après chaque addition :

Numéro de tube

T 1 2 3 4 X 1 X2

Solution fille étalon (ml)

0 2 3 4 5 10 10

Eau distillée (ml)

10 8 7 6 5 0 0

Réactif de Zambelli (ml)

2 2 2 2 2 2 2

ATTENDRE 10 MINUTES, PUIS AJOUTER

Ammoniaque pur (ml)

2 2 2 2 2 2 2

- Effectuer la lecture au spectrophotomètre à la longueur d’onde de 435 nm. V- RESULTATS ET CALCULS : - Présenter les résultats dans un tableau ;

- Donner la courbe d’étalonnage en annexe ;

- Calculer les concentrations correspondantes en mg/l de NO2

- Exprimer la concentration de la solution inconnue en nitrites en mg/l et en

mol/l ;

- Donner la teneur en azote nitreux en mg/l ;

- Interpréter les résultats obtenus ;

- Conclure ;

N.B :


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Pr. YAHYA CHERRAH

- Opérer le dosage le plus rapidement possible après prélèvement ;

- Sensibilité : [NO2-] >0,05mg/l.

DOSAGE DES IONS SULFATES

I-PRINCIPE:

Les sulfates sont précipités en milieu chlorhydrique à l'état de sulfates de

baryum.

Le précipité obtenu est stabilisé à l'aide d'une solution de Tween.

Les suspensions homogènes sont mesurées par spectrophotométrie.

II- REACTIFS :

- Sulfates de sodium (12mg% p/v en SO42-)

- Solution d'HCL au 1/10 à partir d'une solution concentrée 12N

- Solution de Tween 80 à 25%

- Solution de chlorure de baryum stabilisée :

*Chlorure de baryum--------------10g

*Solution de Tween----------------20 ml

*Eau distillée-----------------------100 ml

III- MODE OPERATOIRE :

1-Etablissement de la courbe d'étalonnage :

Introduire dans des erlenmeyers :

1 2 3 4 X1 X2

Solution standard de SO42- (ml)

0 3 7 10 39 39

Eau distillée

39 36 32 29 0 0

HCL 1/10 (ml)

1 1 1 1 1 1

Solution de chlorure de baryum (ml)

5 5 5 5 5 5


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Pr. YAHYA CHERRAH

- Agiter énergiquement et laisser reposer 15 min;

- Agiter de nouveau;

- Lire au spectrophotométre à la longueur d'onde 650nm.

2- Préparation des échantillons :

Les échantillons à analyser sont traités de la même manière que la gamme

d'étalonnage.


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Pr. YAHYA CHERRAH

TOXICOLOGIE ANALYTIQUE

POTENTIOMETRIE PAR ELECTRODES SELECTIVES AUX IONS


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Pr. YAHYA CHERRAH

I- BUT : Le but du présent travail est de faire découvrir par l'étudiant les

principales caractéristiques de l'électrode sélective, ses limites d'utilisation dans

le contrôle des médicaments et de l'environnement.

II- EQUATION DE NERNST : La potentiométrie est basée sur l’exploitation

de la relation de NERNST qui s’écrit :

∆E : Différence de potentiel ; E0 : Potentiel normal ; Zx : Charge de l’ion à étudier ; R : Constante des gaz parfaits ; T : Température ; F : Constante de Faraday ; ax : Activité de l’ion à étudier

III- POTENTIOMETRIE DIRECTE A FORCE IONIQUE CONSTANTE :

Une électrode indicatrice ne mesure pas une concentration mais une activité. Ces

deux paramètres sont liés l’un à l’autre selon la relation suivante :

* γ = coefficient d’activité (entre 0 et 1), il est voisin de 1 lorsque l’ion étudié est

en solution très diluée. (γ = ½ ΣCi Zi 2).

A force ionique constante, le coefficient d’activité est constant. On pourra

alors tracer une droite d’étalonnage représentant la fonction E=f (pC) :

∆E = E0 ± 2,3 RT / ZxF log (ax)

ax= γ.C

∆E = E0 ± S log C ∆E = E0 - S pC


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Pr. YAHYA CHERRAH

* S = 2,3 (RT/ZxF) : Pente de la droite d'étalonnage. Sa valeur théorique, selon

la relation de Nernst, est de (± 59mV/décade) pour un ion monovalent et de (±

29mV/décade) pour un ion bivalent. Pratiquement, une bonne réponse doit être

caractérisée par une pente d’au moins 90% de la valeur théorique ;

* pC : - log [concentration de l’ion].


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Pr. YAHYA CHERRAH

DOSAGE DES IONS NITRATES

I- Introduction :

La recherche d’un rendement toujours plus grand pousse les agriculteurs à

utiliser de plus en plus d’engrais pour leurs cultures notamment des engrais

azotés.

Les feuilles de la menthe fixent les ions nitrates provenant de ces engrais et

voient ainsi leur concentration en ces ions particulièrement élevée.

Dans l’organisme, ces ions nitrates sont réduits en nitrites qui peuvent perturber

le transport de l’oxygène par le sang et donner des nitrosamines, substances

cancérigènes. Le dosage des nitrates revêt donc d’une importance particulière.

Le dosage par électrode sélective présente de grands avantages (gain de temps,

plus grande précision) vis-à-vis des méthodes plus traditionnelles telles que la

méthode calorimétrique ou la méthode de dosage de l’azote total par la méthode

de Kjeldahl.

II- Principe :

L’électrode sélective aux ions nitrates est une électrode à membrane

polymérique, elle est utilisée comme une électrode indicatrice pour mesurer

l’activité des ions nitrates. Elle donne une réponse (potentiel) proportionnelle à

la concentration des ions nitrates selon la relation :

E = f (-log [NO3 -] ) E = f(p[NO3 -])

Cette fonction est linéaire pour une gamme de concentration allant de 10-1 à

10 -5 M en ions nitrates.

La réponse de l’électrode est aussi influencée par la présence d’autres ions

en solution tels les ions sulfates SO4 2-.


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Pr. YAHYA CHERRAH

III- MATERIELS ET REACTIFS :

1- Matériels :

- Bêcher pour la pesée ;

- Eprouvette de 50ml ;

- Etuve réglée à une température de 110°c ;

- Chauffe-ballon réglé à 75°c à 80°c ;

- 6 Fioles de 100ml ;

- Erlenmeyer de 250ml ;

- Entonnoir ;

- Papier filtre ;

- Buchner et pompe à vide ;

- Electrode sélective : électrode indicatrice ;

- Electrode de référence : électrode au calomel saturée ;

- pH mètre – millivoltmètre ;

- Agitateur à vitesse réglable ;

- Bêcher de 80ml pour les mesures ;

- Bêcher de 200ml pour laver les électrodes ;

- Papier pour essuyer les électrodes ;

- Pipette de 5ml.

2- Réactifs :

- Solution mère KNO3

- 1M ;

- Solution mère de CuSO4 1M.


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Pr. YAHYA CHERRAH

IV- ETABLISSEMENT DE LA COURBE D’ETALONNAGE :

1- Préparation de la gamme d’étalonnage :

- A partir d’une solution mère de KNO3 1M, préparer par dilutions successives

dans des fioles jaugées de 100ml, les solutions suivantes : 10-1 M, 10-2 ……..et

10 –5 M en KNO3 dans l’eau distillée ;

- A partir d’une solution mère de CuSO4 1M, préparer dans une fiole jaugée de

100ml, la solution 10-2 M.

2- Mesure du potentiel :

- Plonger les deux électrodes, de référence et indicatrice, sèches et propres dans

un bêcher contenant les solutions à analyser en commençant par la plus diluée ;

- Assurer une agitation convenable ;

- Relever la valeur du potentiel après sa stabilisation.


- Peser précisément environ 1g de la poudre de menthe ;

- Diluer à 50ml avec de l’eau distillée dans un erlenmeyer et porter à douce

ébullition pendant 10 min en agitant de temps en temps ;

- Filtrer quantitativement sur papier-filtre ou centrifuger ;

- Recueillir le filtrat ou le surnageant dans un ballon jaugé de 100ml ;

- Laver le résidu avec de l’eau distillée bouillante ;

- Après refroidissement, porter au trait de jauge par de l’eau distillée ;

- Effectuer la mesure du potentiel de la même manière que pour les solutions

standards.

V- RESULTATS ET DISCUSSION :

- Présenter un tableau clair des mesures et résultats obtenus pour chaque

manipulation ;

- Donner les graphiques d’étalonnage ;


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Pr. YAHYA CHERRAH

- Calculer la pente de la droite d'étalonnage et comparer avec la valeur annoncée

par le constructeur (-56mV/ décade) ;

- Comparer le coefficient de sélectivité Kij mesuré pour les ions sulfates avec la

valeur annoncée par le constructeur (Kij = 10) ;

- Calculer la concentration en mg/ l et en ppm de menthe ;

- Se conformer aux recommandations pour la rédaction du rapport.


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DOSAGE DES IONS FLUORURES

I- PRINCIPE :

L'électrode sélective aux ions fluorures est une électrode combinée à membrane

cristalline (cristal de Fluorure de Lanthane). Elle donne une réponse (potentiel)

proportionnelle à la concentration aux ions fluorures :

E = E0 - S Log [F-]

La relation (E = f (Log [F-])) est linéaire pour une gamme de concentration

allant de 10-1 M à 10-5 M en ions fluorures.

II- MATERIELS ET REACTIFS :

1- Matériels :

- Electrode combinée sélective aux ions fluorures ;

- pH-mètre- Millivoltmètre ;

- Agitateur à vitesse réglable ;

- Ballons jaugés en polyéthylène : 50ml (5) ;

- Flacons en polyéthylène : 5 ;

- Pipettes en polyéthylène : 5ml, 10ml ;

- Bêchers en polyéthylène : (2).

2-Réactifs :

- Solution mère NaF 0,1M ;

- Tampon citrate (pH= 5,8).

III- ETABLISSEMENT DE LA COURBE D’ETALONNAGE :

1- Préparation de la gamme d’étalonnage :

A partir de la solution mère de NaF 0,1M, préparer par dilutions successives

dans des ballons jaugés en polyéthylène de 50 ml ; les solutions suivantes :


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Pr. YAHYA CHERRAH

10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 M dans l’eau distillée d’une part et dans le tampon

citrate (pH= 5,8) d’autre part.

2- Mesure du potentiel :

- Plonger l’électrode sélective aux ions Fluorures sèche et propre dans un bêcher

en polyéthylène contenant les solutions à analyser en commençant par la plus

diluée ;

- Assurer une agitation convenable ;

- Relever la valeur du potentiel après sa stabilisation ;

- Reprendre les points ci-dessus pour les autres solutions de fluorures préparées

dans le tampon citrate.


- Plonger l'électrode sèche et propre dans un Bêcher contenant l'échantillon traité

préalablement de la même manière que les solutions standards ;

- Effectuer la mesure du potentiel de la même manière que pour les solutions

standards.

IV- RESULTATS ET DISCUSSION :

- Présenter un tableau clair des mesures et des résultats ;

- Donner le graphique d’étalonnage [E(mV) = f (pF-)] ;

- Calculer la pente de la droite d'étalonnage, ensuite son équation ;

- Déterminer la concentration inconnue premièrement par référence à la droite

d'étalonnage, ensuite par l'intermédiaire de l'équation de la droite calculée

préalablement ;

- Donner la concentration en mg/ l et en ppm ;

- Se conformer aux recommandations pour la rédaction du rapport.


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Pr. YAHYA CHERRAH

TOXICOLOGIE ANALYTIQUE TITRAGE VOLUMETRIQUE


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RECHERCHE ET DOSAGE DE L'ETHANOL

I/Recherche :

A/ Test de Curry :

1- Principe :

La recherche de l'alcoolémie par le test de Curry peut être effectuée sur sang

total prélevé sur fluorure de sodium. On utilise des cellules de Conway.

2- Réactifs:

• Solution saturée de carbonate de potassium dans l'eau distillée (K2CO3)

• Réactif A: Acide sulfurique pur (d=1,83)

• Réactif B : Solution 0,1 N de bichromate de potassium

Bichromate de potassium……….4,90 g

Eau distillée q.s.p …………….1000ml

Mélanger 100 ml de A et 1000 ml de B.

Réactif sulfochromique préparé extemporanément

3- Matériel :

• Cellule de Conway.

• Table oscillante de Dale.

4-Mode opératoire :

Dans le compartiment central d'une cellule de Conway, placer 1ml de réactif

sulfochromique. Dans le compartiment latéral, placer 1ml de sang d’un coté et à

l'opposé 1ml de solution saturée de carbonate de potassium.


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Pr. YAHYA CHERRAH

Fermer la cellule, l'étanchéité étant assurée, mettre en contact le sang et la

solution saturée de K2CO3 par un doux mouvement de rotation.

Placer la cellule sur la table oscillante pendant quinze minutes.

Préparé un témoin dans les mêmes conditions, en remplaçant le sang par 1 ml

d'eau distillée (ou 1ml de sang frais ne contenant pas d'alcool).

5- Résultats et interprétation:

Après quinze minutes, placer la cellule sur fond blanc et examiner le

compartiment central après avoir homogénéise le contenu à l'aide d'un petit

agitateur en verre. Comparer la coloration de la solution avec celle du témoin.

• Si la coloration reste jaune sans aucun changement :

Alcoolémie <0,5 g par litre.

• Si la coloration jaune virera au vert ou bleu :

Alcoolémie >0,5 g par litre.

B/ Alcotest :

1- Principe :

L'Alcotest permet de déceler la présence d'alcool dans le sang à partir de l'air

expiré. Elle est utilisée dans le cadre de la prévention routière.

Le principe de cette technique est basé sur le fait qu'environ 2 L d'aire alvéolaire

contiennent la même quantité d'éthanol que 1 ml de sang.

2-Description du matériel Alcotest:

Les boites Alcotest contiennent 10 tubes réactifs, 10 embouchures stérilisées et

une poche en matière plastique. Les tubes Alcotest, scellés aux deux extrémités,

contiennent une masse réactive jaune qui se colore en vert en présence de

vapeurs d'alcool.


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Pr. YAHYA CHERRAH

Sur le tube Alcotest sont imprimés:

a) une flèche indiquant le sens dans lequel doit être expulsé l'aire expiré;

b) un anneau repère blanc, qui divise la coluche réactive jaune en deux

parties égales.

3- Conditions de conservation et d'utilisation:

Les tubes Alcotest peuvent être stockés pendant 3 ans, à la condition d'être

conservés sous emballage fermé à l'abri de la lumière et à une température

inférieures à 30°C.

Toutefois avant utilisation, on s'assurera que le contenu des tubes Alcotest est

toujours d'un jaune pur.

4-Mode d'emploi:

a) Prélever un tube de la boite Alcotest ;

• Saisir ce tube le plus près possible de la pointe à ouvroir;

• Entamer la pointe en l'appuyant légèrement sur la petite scie se trouvant

sur le côté de la boîte;

• Briser la pointe dans l'ouverture prévue à cet effet;

• Casser de même l'autre pointe (voir fig.1).


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Pr. YAHYA CHERRAH

b) Placer le tube dans l'orifice de la poche en matière plastique vide, c'est-à-

dire aplatie, de telle sorte que la flèche imprimée sur le tube soit dirigée

vers la poche

(voir fig.2).

c) Après avoir enlevé le papier recouvrant une embouchure (voire fig.3):

• Faire entrer en force le tube Alcotest dans cette embouchure, en tenant le

tube entre le pouce et l'index et en évitant soigneusement de toucher

l'embouchure;

• L’embouchure peut alors être retirée de la boite dans laquelle elle est

placée (voir fig.3)

• Pour procéder à une épreuve, le sujet doit remplir complètement, en une

seule expiration, la poche en matière plastique par l'intermédiaire de

l'embouchure et du tube Alcotest;

• Cette opération doit durer au minimum 10 secondes et au maximum 20

secondes (voire fig.4);

• Après usage séparer le tube de la poche en tenant celle-ci par son embout!

5-Résultats:

• Sera considérée comme positive toute épreuve dans laquelle la masse

réactive jaune virera au vert;

• L'épreuve de l'Alcotest doit être faite au plus tôt 15 minutes après

l'absorption de boissons alcoolisées ou aromatiques (jus de fruit).

• Ce temps d'attente est également nécessaire après utilisation d’une

vaporisation buccale;


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Pr. YAHYA CHERRAH

• La personne à tester ne doit pas fumer ou sucer des bonbons alcoolisés, ni

dans les 15 minutes précédant l'épreuve, ni pendant le test. La coloration

brune, résultant d'une forte proportion de fumée de tabac, peut altérer la

coloration réactive initiale. Dans ce cas le contrôle doit également être

répété après 15 minutes.

II/ DOSAGE PAR LA MÉTHODES DE CORDEBARD :

1/Principe:

Extraction de l'alcool par distillation en présence d'acide picrique et oxydation à

froid le bichromate de potassium en solution azotique, selon le principe indiqué

par CORDEBARD.

CH3 CH2 OH+ O2→ CH3 COOH + H2O

2-Matériel :

• Appareil de SCHLOESING-AUBIN …………………….1

• Ballon jaugé de 250 ml……………………………………1

• Chauffe ballon …………………………………………….1

• Réfrigérant ……………………………………...…………1

• Cristallisation de 500ml………………………………..…..1

• Erlenmeyers de 250 ml bouché émeri…………….……….2

• Burette graduée en 1/20éme de ml………………………….1

• Billes de verre lavées au sulfochromique

• Bêchers de 100ml……;……………………………………2

• Eprouvettes de 50 ml………………………………………3

• Pipettes graduées

• Pissette…………………………………………………… ..1

• Entonnoir ………………………………………………… ..1


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3-Réactifs :

• Solution saturée d'acide picrique à 1,5% HOC6H2(NO2) 3 : 15g environ

d'acide picrique sont dissous à chaud dan 800 ml d'eau bidistillée. Porter

la solution à ébullition durant 10 minutes pour chasser les matières

volatiles réductrices.

Après refroidissement compléter à 1000 ml avec de l'eau distillée. Utiliser

la solution saturée surnageante.

• Solution nitro-chromique N/10:

ü Bichromate de potassium pur et sec …………………….4g.

ü Acide nitrique pur d =1,39 (exempt de vapeurs nitreuses préparant,

barboter pendant 15 minutes un courant d'air filtré sur tampon de

coton)…………………q.s.p 1000ml

• Thiosulfate de sodium N/10.

• Iodure de potassium pur.

4- Mode opératoire:

a) Extraction :

Avant l'extraction, il est nécessaire de nettoyer très soigneusement les

différentes pièces de l'appareil par le sulfochromique et de les laver ensuite

plusieurs fois à l'eau distillée.

Compléter le nettoyage en distillant dans l’appareil monté, 400 à 500 ml d’eau

distillée dont on recueille 250 à 300 ml qui serviront à rincer le ballon

distillatoire et la verrerie.

Introduire 10 ml de sang prélevé sur oxalate ou sur fluorure de sodium, en

agitant constamment, dans le ballon de l'appareil d'Aubin renfermant 60 ml de

solution saturée d'acide picrique et quelques billes de verre.


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Distiller 20 à 30 ml dans une éprouvette jaugée de 50 ml refroidie par de la glace

et préalablement remplie de 15 ml d'eau distillée en ayant soin que le tube

terminal de l'appareil plonge jusqu'au fond de l'éprouvette jaugée dans cette eau

distillée .

La distillation terminée, rincer le tube et compléter à 50 ml à l'aide d'eau

distillée, agiter.

b) Dosage :

Introduire successivement dans un Erlenmeyer B.E de 250 ml : 10 ml de

solution nitro-chromique N/10 et 5 ml de distillat. Boucher, agiter en tournant

pendant 5 minutes. Ajouter alors 40 ml d'eau distillée. Introduire 1g d'iodure de

potassium et 100 ml d'eau distillée préparé instantanément. Après une minute de

contact, verser à la burette le thiosulfate de Na N/10 = « X1 » jusqu'à disparition

de la coloration jaune et virage au bleu des sels de Cr. Faire le même essai

témoin en remplaçant le distillat par 5 ml d'eau distillée, « X2 » est le volume de

thiosulfate de Na correspondant au témoin.

c)Taux de l'alcoolémie:

(X2 ml-X1 ml) x 1,15 = poids d'alcool /litre de sang. Gramme d'alcool / litre de

sang.


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Pr. YAHYA CHERRAH

ACTIVITE CHOLINESTERASIQUE

1- Principe: Certains insecticides comme les organo-phosphorés ou les carbamates sont des

inhibiteurs de la cholinestérase qui est un enzyme qui catalyse l'hydrolyse de

l'acétylcholine en acide acétique et choline.

Au laboratoire, l'activité cholinestérasique est évaluée en mesurant la variation

de pH due à la libération de l'acide acétique à partir du substrat « acétyl-choline

» pendant un temps déterminé.

2- Réactifs:

1- Eau distillée exempte de CO2 (Sans CO2) faire bouillir 500 ml d'eau distillée

Pendant 10mn et la laisser à l'abri de l'air. Cette eau servira à la préparation des

réactifs 1 et 2.


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Pr. YAHYA CHERRAH

2- Réatif 1: Solution de Bleu de Bromothymol (B.B.T)

- Bleu de Bromothymol…………………………100mg

- NaOH 0,05 N…………………………………..3,2 ml

- Eau distillée exempte de CO2…………………..100ml

Vider les tubes du contenu de B.B.T et du NaOH dans une fiole de 100 ml et la

remplir à moitié avec de l'eau distillée exempte de CO2 Boucher tout de suite la

fiole. Mélanger légèrement et la laisser reposer 1heure. Ensuite compléter avec

l'eau distillée exempte de CO2 jusqu'à 100ml. Cette solution peut se conserver

plusieurs mois à l'abri de la lumière et de la chaleur.

3- Réactif 2: Solution de substrat

- Chlorhydrate d'acétylcholine …………………….une pincée

- Eau distillée exempte de CO2……………………50 ml

Remplir l'extrémité de la spatule de substrat (le chlorhydrate d'acétylcholine).

L'introduire dans le flacon marqué " substrat". Ajouter 50 ml d'eau distillée

exempte de CO2. La solution de substrat doit être préparée chaque jour. Il faut la

déposer à l'abri de la chaleur.

3- Mode opératoire

Suivant le nombre de personnes qui seront soumises à l'évaluation de l'activité

cholinestérasique, prendre une série de petits tubes du kit lovibond mis à votre

disposition. Numéroter les 2 premiers tubes de la façon suivante:

-1er tube: Témoin Blanc (T.B)

-2ème tube : Témoin Réaction (T.R)

Les autres tubes serviront pour les personnes à tester


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Pr. YAHYA CHERRAH

La réaction se fera de la façon suivante:

Tube blanc Tube témoin Tube malade Sang du sujet non exposé au pesticides

10 µl 10µl -

Sang des malades ou personnes à tester

- - -

Eau distillée sans CO2

1ml - -

Indicateur « B.B.T »

- 0,5ml 0,5 ml

-Bien mélanger le contenu de tube blanc avec la micropipette et le transférer

dans la cuve de 2,5 mm. La placer dans le compartiment gauche du comparateur.

Les étapes ci-dessus doivent être exécutées à la minute près.

-Ajouter 0,5 ml du substrat dans le tube témoin. Boucher et mélanger par

retournement. Transférer dans la cuve de 2,5 mm et le placer dans le

compartiment droit du comparateur.

- Noter l'heure à la minute près : c'est le temps zéro. Lire immédiatement dans

le compartiment droit. Le résultat doit être inférieur ou égal à 12,5%.

-A intervalle d'une minute, ajouter 0,5 ml de la solution de substrat dans les

tubes "personnes à tester" en prenant la précaution de respecter l'intervalle de 1

minute entre les 2 tubes.

-Attendre que l'échantillon contrôle atteigne 100% d'activité cholinestérasique

en lisant contre l'échantillon blanc dans le compartiment gauche. Le temps

d'incubation dépend de la température ambiante et varie en général entre 18 et

30 minutes.


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Pr. YAHYA CHERRAH

-Lire chaque échantillon des personnes à tester à 1 minute d'intervalle.

-Noter le pourcentage d'activité cholinestérasique.

Interprétation des résultats

% Activité cholinestérasique Interprétation et mesure à prendre

100% -75% Aucune action à prendre Refaire ultérieurement l'analyse dans un proche avenir

75% - 50% Exposition probable Si le taux est confirmé, écarter le sujet exposé de tout travail en contact avec les pesticides

50% - 25% Surexposition grave Refaire le test si confirmé, suspendre impérativement tout travail en contact avec les pesticides, un suivi médical et éventuellement un traitement sera instauré

25%- 0% Surexposition sévère et dangereuse Refaire le test, si confirmé : Arrêt impérativement immédiat de tout contact avec les pesticides. Envoi immédiat du sujet dans un centre hospitalier.


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Pr. YAHYA CHERRAH

RECHERCHE TOXICOLOGIQUE DES CHLORATES

I- Introduction :

Les chlorates utilisées comme herbicides peuvent donner lieu à des intoxications

accidentelles chez les animaux domestiques et sauvages. Ce sont des herbicides

totaux.

La recherche toxicologique se fait dans les urines et dans les viscères.

II- Principes :

Les chlorates sont extraits par des solvants organiques notamment l’alcool qui

flocule les protéines et solubilise CLO3-

III- Matériel et réactifs

Matériel :

• Béchers

• Pipette graduées

• Tubes à essai

Réactifs :

• Chlorates de potassium

• Aniline

• Acide chlorhydrique concentré

• Solution d’indigo-sulfonate

• Acide sulfurique concentré

• Sulfite neutre de sodium (solution diluée)

Mode opératoire :

Dans 4 tubes à essai contenant respectivement es 4 échantillons, faites les

réactions de caractérisations suivantes :


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Pr. YAHYA CHERRAH

ü Réaction 1 : (chimique) • 1ml de l’échantillon • Ajouter 2,5ml de solution d’aniline • Ajouter 3 ml d’HCL

Si une coloration rose virant au bleu se développe, présence de chlorates.

ü Réaction 2 : (électrochimique)

• 2ml d’échantillon

• Ajouter 2 gouttes de solution d’indigo sulfonate (coloration bleu)

• Ajouter 1 ml de sulfite neutre de sodium

Si décoloration immédiate, présence de chlorates.

Résultats et discussion

1- Donner les réactions chimiques et électrochimiques qui sont mises en jeu

pour la caractérisation des ions chlorates

2- Exprimer vos résultats sous forme de tableau clair et lisible

3- Interpréter et conclure


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