Apresentadora: Ana Carolina Damião Araújo

Trichoderma asperellum: Um potencial agente de controle biológico de Pythium myriotylum, agente

causal da podridão de raiz em planta de taioba (Xanthosoma sagittifolium) em Camarões

J.B. Mbarga; G. Martijn Ten Hoopen; J. Kuaté ; A. Adiobo ; M.E.L. Ngonkeu; Z. Ambang d; A. Akoa; P.R. Tondje; B.A.D. Begoude.

Crop Protection (2012) pag. 18 a 22

MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃOSECRETARIA DE EDUCAÇÃO PROFISSIONAL E TECNOLÓGICA

INSTITUTO FEDERAL GOIANO CAMPUS URUTAÍ Curso Superior de Bacharelado em Agronomia

FITOPATOLOGIA I

INTRODUÇÃO

Taioba [Xanthosoma sagittifolium (L.) Schott ]:

• Elevados níveis de consumo em Camarões; • Alto valor nutricional e econômicos;• Produção anual aproximadamente 1.668.130 toneladas.

Reino:PlantaeDivisão:MagnoliophytaClasse:LiliopsidaOrdem:AlismatalesFamília:AraceaeGénero:Xanthosoma

Podridão da raiz (Pythium myriotylum)

• Principal doença que limita o crescimento e a produtividade da cultura;• Várias estratégias de controle (química , genética e métodos agrícolas);

Reino: ChromalveolataFilo: HeterokontophytaClasse: OomycetesOrdem: PythialesFamília:PythiaceaeGênero:Pythium

• O controle químico é o mais eficaz, porém apresenta efeitos secundários negativos: poluição do meio ambiente, prejudicial a saúde de agricultores e consumidores, aparecimento estirpes de patógenos resistentes;

• Controle biológico: “Controle de um microrganismo por outro microrganismo”.

• Controle biológico utilizando microrganismo antagônico pode ajudar a complementar as estratégias de controle de doenças convencionais;

Trichoderma sp.

• Organismos que podem ser encontrados frequentemente em materiais em decomposição bem como na rizosfera da planta;

• Simbiontes de plantas e não patogênicos, pode ser isolado e crescer facilmente em uma variedade de substratos;

• Geralmente possui funções antagônicas com base em vários mecanismos, tais como antibiose e competição;

• Induz a resistência das plantas contra alguns patógenos, promovendo o crescimento e melhorarando a atividade fotossintética.

MATERIAL E MÉTODOS

Material fúngico

• Isolado Pythium myriotylum (P60), isolado em 2005 a partir das raízes de taioba apresentando sintomas de podridão de raiz em Ekona (sudoeste Camarões), preservaqdo coleção micológica da Biotecnologia Laboratório do Centro Regional Ekona de Pesquisa Agropecuária.

• Quatro cepas de Trichoderma asperellum utilizados: PR10 (GJS 02-65 ) , PR11 ( GJS 02-64 ) , PR12 ( GJS 02-66 ) e 659-7 (GJS 02-63), provenientes do Laboratório Regional do IRAD para Controle Biológico e de Microbiologia Aplicada, originado a partir de amostras de solo de campos agrícolas.

Testes de antagonismo in vitro

• Utilizado protocolo descrito por Benhamou e Chet (1997), ligeiramente modificado;

• Cepas de T. asperellum e P. myriotylum foram cultivadas separadamente em agar de dextrose de batata (PDA) durante cinco dias;

• Discos de agar de 3 mm de diâmetro contendo as cepas (1 disco de Trichoderma e 1 disco de Pythium), foram colocados em placa de Petri contendo 15 ml de PDA, equidistante 80 milímetros uma da outra;

• Cinco placas foram utilizadas para cada confronto (P. myriotylum e T. asperellum) e três repetições para os controles;

• Placas de Petri foram incubadas durante seis dias;

• A capacidade de estirpes de T. asperellum reduzir a expansão de P. myriotylum foi avaliada determinando quando a primeirazona de inibição podia ser observada;

• A ação de concorrência de P. myriotylum por T. asperellum, foram avaliadas sob o ponto de contato entre as duas linhagens na placa.

• A atividade das estirpes T. asperellum avaliada usando o método de placa de pré-colonizada: Três placas idênticas, pré- colonizados com P. myriotylum, foram inoculados com uma faixa de meio BDA (1 x 6 centímetros) colonizada por um dos quatro isolados de T. asperellum.

• Foram observados diariamente para verificar se houve crescimento do Trichoderma inoculado, sendo medido como descrito por Krauss et al (1998);

• Depois de três dias de incubação, o nível de micoparasitismo e a progressão dos micoparasitas foi determinada pela presença ou ausência do crescimento de P. myriotylum indicando sua destruição pelas cepas de T. asperellum.

• Toda a experiência foi repetida duas vezes .

Testes in vivo de antagonismo

• O substrato utilizado foi fornecido pela BLERCAR, Ekona , Camarões.

• Terra preta (esterilizada duas vezes a 121 ºC durante 15 min.) misturado com perlita na proporção de 4:1 e alterada com 6 g de CaMg (CO3)2 , 320 mg de Ca (NO3)2 e 220 mg KH2PO4/kg.

• O substrato foi primeiro incubado a 60 º C para cinco dias em sacos de polietileno e depois alterado com 860 mg de Fertilizantes DCM Ecomix ( 7-7-10 ) por kg de substrato.

• Subsequentemente , o inoculo do patógeno foi incorporado no substrato na proporção de 1 ml/g de substrato. Um kg de substrato inoculado foi transferido para vasos de plástico de diâmetro de 15 cm.

• Plantas de uma variedade de taioba branca, altamente suscetíveis à podridão radicular e obtidos por micropropagação (fornecida pela BERCAR) foram utilizadas.

• Depois de crescer de seis a oito semanas em uma estufa, estes plantas foram embebidas por 24 horas em suspensão de conídios puros (106 conidios/ml) de cada uma das quatro estirpes de T. asperellum.

• Os vasos foram regados a cada três dias com 250 ml de água.

• Cada tratamento consistiu de 10 vasos e o experimento foi realizado duas vezes.

• Os efeitos dos tratamentos foram avaliados 30 dias após transplantar observando e quantificar os sintomas da doença que apareceram nas folhas.

• A severidade da doença foi caracterizada utilizando a escala de Tambong et al. (1999), que varia a partir de classe 1 e classe 5 da seguinte forma:

1 nenhum sintoma da doença no folha, 2 = início do amarelecimento da folha; 3 = pronunciado total e amarelamento de toda a folha, 4 = início da secagem da folha; 5 = total de dessecação e morte de toda a folha.

Análises estatísticas

• A percentagem de inibição do crescimento de P. myriotylum [I ( % )] por T. asperellum foi calculada pela fórmula:

em que C é a média do diâmetro das colónias na presença do antagonista (Cn) ou controle (C0).

• Velocidades micoparasitismo em mm/dia foram calculados para cada estirpe utilizando o declive da regressão linear do crescimento curva. A podridão radicular índice de gravidade (SI) foi calculada usando a fórmula:

em que Ci representa a classe sintoma e Ni o número de folhas pertencente à classe dos sintomas .

• Usando os dados obtidos, a inibição da doença em percentagem (PI) foi calculada para cada isolado de T. asperellum usando a seguinte fórmula:

PI = [(SIc SIt)/SIc] x 100

onde a SIc é o índice de severidade do controle e SIt é o índice de severidade das plantas tratadas com um dos quatro cepas de T. asperellum.

Os dados foram analisados, utilizando SAS (Statistical Analysis System , versão 9.1), através do teste comparação de médias de Duncan.

RESULTADOS

Efeito de T. asperellum sobre o crescimento de P. myriotylum in vitro

• Os quatro cepas de T. asperellum apresentou atividade antagônica contra P. myriotylum nos testes de confronto direto

• O antagonismo resultou na cessação de crescimento de P. myriotylum quando em contato com T. asperellum.

• Em comparação com o controle, a inibição percentual era cerca de 66% no sexto dia .

• A esporulação denso seguido por um crescimento excessivo de T. asperellum em P. myriotylum foi observada no sexto dia.

PLANTAS MEDICINALES, 2014

• As quatro cepas de T. asperellum apresentaram atividade micoparasíticas .

•O micoparasitismo necrotrófico foi confirmado pela ausência de crescimento de P. myriotylum no meio de cultura seletivo .

• A análise de variância mostrou que houve uma diferença significativa (P<0,05) entre as velocidades dos diferentes micoparasitismo de cepas T. asperellum.

• A maior taxa de crescimento foi observado com a estirpe T. asperellum PR11 (10,6 ± 10 mm/dia), seguido por PR10 (10,2 ± 0,04 mm/dia) e PR12 (10,1 ± 0,05 mm/dia).

Figura 1. Antagonismo de Trichoderma asperellum contra Pythium myriotylum após um teste de confronto direto: AeD: Zona de contato entre P. myriotylum e PR10, PR11, PR12 e 659-7, respectivamente; EeG: esporulação densa e crescimento de T. asperellum em P. myriotylum; H: crescimento da P. myriotylum; I: crescimento de T. asperellum .

Efeito do tratamento das plantas com desenvolvimento de podridão da raiz

• Depois de 30 dias de crescimento em vasos , as mudas tiveram , em média, cinco folhas.

• Não foi observada diferença significativa no número total cocoyam de folhas entre os tratamentos .

• A percentagem de folhas saudáveis (Classe 1) foi maior para PR10 , PR11 , PR12 e 659-7 tratamentos, quando comparado com o controle.

• A porcentagem de folhas doentes (classe 5) foi mais elevada para o controle, quando comparado com as plantas tratadas com os agentes de controle biológico.

• As cepas PR11 e PR10 de T. asperellum, com índices de severidade médios de 1,58 e 1,67, respectivamente, apresentou maior redução na severidade da infecção.

• A estirpe PR11 e PR10 reduziram a severidade da doença por mais de 50% , com a maior porcentagem de inibição foram obtidos para a estirpe PR11 (56,7 %).

• As estirpes PR12 e 659-7 de T. asperellum foram menos eficazes, com porcentagens de inibição de 31,0 e 43,6% , respectivamente .

Tabela 1. Efeitos de tratamentos de plantas com cepas de Trichoderma asperellum sobre a podridão da raiz de taioba.

Nota: Os valores na coluna com letras diferentes são significativamente diferentes (P <0,05) de acordo com testede Duncan de comparação de médias. aNL - Número médio NL de folhas por planta. b Índice de Severidade - SI. c Os dados apresentados a percentagem de folhas por classes: C1 - sem sintomas de doença; C2 - sintomas começando amarelecimento; C3 - folhas com total sintomas amarelados; C4 - folhas com início de secagem e C5 - deixa totalmente desidratado e morto.

DISCUSSÃO

• A caracterização do potencial antagônico de T. asperellum contra P. myriotylum é o primeiro passo para avaliar a capacidade de biocontrole desses agentes.

• Todas as cepas de T. asperellum foram antagonistas P. myriotylum e mostra ser micoparasitas agressivos .

• A análise do desenvolvimento do confronto mostrou o inibição do crescimento de P. myriotylum pouco depois de entrar em contato com as cepas de T. asperellum.

•A idéia de que micoparasitismo é uma das principais formas de Trichoderma controlar patógenos e é suportado por estudos anteriores como de John et al (2010), Hibar et al. (2005) e Tondje et al. (2007).

• Os testes in vivo mostraram que as quatro cepas de T. asperellum reduziu a gravidade de podridão radicular da taioba, com as cepas mais eficientes sendo PR11 e PR10, modo semelhante , um estudo realizado por John et al (2010).

• Este teste mostrou uma evolução direta das cepas de T. asperellum em detrimento a P. myriotylum, assemelhando-se aos resultados obtidos por Tondje et al. (2007).

• É necessário realizar ais ensaios de campo, a fim de determinar a capacidade destas estirpes para proteger as plantas de taioba contra a podridão radicular sob naturais condições, pois não basta o antagonista ser um potente agente de controle in vitro. É preciso conhecer os fatores ecológicos que podem afetar o desempenho.

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