udviklingsgenetik molekylær embryologi · molekylærbiologi: ja molekylær medicin: ja...
TRANSCRIPT
Molekylærbiologi: JaMolekylær medicin: JaBioteknologi:
Baggrund: Den molekylære embryologi gruppe er interesseret igenetisk regulering af embryonal og cellulær differentiering.Funktionen af enkelte gener er typisk undersøgt ved mutationelanalyse – ofte i knock out (KO) eller knock in (KI) mus. Ikkeoverraskende er mange gener, som er involveret i udvikling, ogsåassocieret med postnatale sygdomme, oftest cancer.Metodisk arbejder vi meget med fuktionelle analyser i celle kulturog med histologiske undersøgelser. Mutagenesen forgå mest medCRISPR/Cas9, enten i ES celler elller i befrugtede muse æg.
Hovedemner i vores forskning er:
- Twist1, en bHLH transkriptionsfaktor, som fungerer som en tran-skriptionel aktivator og repressor. Fostre, som er homozygot mute-ret i Twist1 dør omkring dag 10 i fosterudviklingen. Twist1 inhibererprogrammeret celledød og differentiering, fremmer epithel-mesen-kym overgang og har vist sig at være et vigtig proto-onkogen.
- Sept9 – som er medlem af Septin familien. Septiner er GTP bin-dende proteiner, som interagerer med cytoskelettet (aktin og tubu-lin). Meget tyder på, at Sept9, som udtrykker mange forskelligesplicevarianter, kan virke både som et proto-onkogen og en tumor-supressor. Fostre, som er homozygot muteret i Sept9, dør omkringdag 10 i fosterudviklingen.
- Hvis man er mere teknisk interesseret kan man bidrage tilfremstilling af genetisk modificerede mus fx med at klone targetingvektorer eller analysere genetisk modificerede embryonalestamceller.
UdviklingsgenetikMolekylær Embryologi
Ernst-Martin Fü[email protected], 28992238, 1130-207
Øvrige medarbejdere: 1 AC-TAP, 1 TAP, 2 bachelor studerende, 1 ERASMUS student
Septin9
Twist1
Ja
Figure 2
A
B
C
D
12
3
4
12
3
4
5’UTR CDS 3’UTR Twist1+
5’UTR lacZ 3’UTR Twist1lacZ
5’UTR CDS 3’UTR Twist1+5’UTR CDS 3’UTR Twist1+
5’UTR lacZ 3’UTR Twist1lacZ5’UTR lacZ 3’UTR Twist1lacZ
0
5
10
15
20
somites neural tube lateral plate 1st branchialarch
Nor
mal
ized
Twist1
mR
NA
expr
essi
on (Twist1
/Hprt)
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
somites neural tube lateral plate 1st branchialarchN
orm
aliz
ed T
wis
t1 p
rote
in e
xpre
ssio
n (X
-gal
/tota
l pro
tein
)
Figure 2
A
B
C
D
12
3
4
12
3
4
5’UTR CDS 3’UTR Twist1+
5’UTR lacZ 3’UTR Twist1lacZ
5’UTR CDS 3’UTR Twist1+5’UTR CDS 3’UTR Twist1+
5’UTR lacZ 3’UTR Twist1lacZ5’UTR lacZ 3’UTR Twist1lacZ
0
5
10
15
20
somites neural tube lateral plate 1st branchialarch
Nor
mal
ized
Twist1
mR
NA
expr
essi
on (Twist1
/Hprt)
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
somites neural tube lateral plate 1st branchialarchN
orm
aliz
ed T
wis
t1 p
rote
in e
xpre
ssio
n (X
-gal
/tota
l pro
tein
)
Figure 2
A
B
C
D
12
3
4
12
3
4
5’UTR CDS 3’UTR Twist1+
5’UTR lacZ 3’UTR Twist1lacZ
5’UTR CDS 3’UTR Twist1+5’UTR CDS 3’UTR Twist1+
5’UTR lacZ 3’UTR Twist1lacZ5’UTR lacZ 3’UTR Twist1lacZ
0
5
10
15
20
somites neural tube lateral plate 1st branchialarch
Nor
mal
ized
Twist1
mR
NA
expr
essi
on (Twist1
/Hprt)
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
somites neural tube lateral plate 1st branchialarchN
orm
aliz
ed T
wis
t1 p
rote
in e
xpre
ssio
n (X
-gal
/tota
l pro
tein
)
Figure 2
A
B
C
D
12
3
4
12
3
4
5’UTR CDS 3’UTR Twist1+
5’UTR lacZ 3’UTR Twist1lacZ
5’UTR CDS 3’UTR Twist1+5’UTR CDS 3’UTR Twist1+
5’UTR lacZ 3’UTR Twist1lacZ5’UTR lacZ 3’UTR Twist1lacZ
0
5
10
15
20
somites neural tube lateral plate 1st branchialarch
Nor
mal
ized
Twist1
mR
NA
expr
essi
on (Twist1
/Hprt)
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
somites neural tube lateral plate 1st branchialarchN
orm
aliz
ed T
wis
t1 p
rote
in e
xpre
ssio
n (X
-gal
/tota
l pro
tein
)
Figure 2
A
B
C
D
12
3
4
12
3
4
5’UTR CDS 3’UTR Twist1+
5’UTR lacZ 3’UTR Twist1lacZ
5’UTR CDS 3’UTR Twist1+5’UTR CDS 3’UTR Twist1+
5’UTR lacZ 3’UTR Twist1lacZ5’UTR lacZ 3’UTR Twist1lacZ
0
5
10
15
20
somites neural tube lateral plate 1st branchialarch
Nor
mal
ized
Twist1
mR
NA
expr
essi
on (Twist1
/Hprt)
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
somites neural tube lateral plate 1st branchialarchN
orm
aliz
ed T
wis
t1 p
rote
in e
xpre
ssio
n (X
-gal
/tota
l pro
tein
)
A: Reporter (lacZ) allel i Twist1 genet. B: Expression af reporter protein(til højre) svaret ikke helt til mRNA ekspression (til venstre).Kvantificering af mRNA (C) og protein (D) in isolerede dele af embryo.
Mammalian septin subgroups:
Septin 2 group (septins 1, 2, 4, and 5)
Septin 3 group (septins 3, 9, and 12)
Septin 6 group (septins 6, 8, 10, 11, and 14)
Septin 7 group (septin 7)
A
B
C
D
Septin filmenter er hyppig associeret med enten stress fibres (actin filamenter) som vist i de øverste to billeder eller med mikrotubuli som vist I de nederste to billeder.Forskel kan være cellens fysiologisk tilstand, isoform af Sept9, men placering af markør kan også har en betydning.
Humane fibroblaster transficiret med Sept9 isoform a markeret med EGFP (grøn) eller mCherry (rød) eneten på N-terminus (øverst) eller på C-terminus (nederst).
mCherry-Sept9_ia
Sept9_ia-mCherrySept9_ia-EGFP
EGFP-Sept9_ia
Oversigt over septin filamenter som er dannet af palindromiske oktamere. Hver septin gruppe har sin position I filamentet. Forskellige medlemmer af en gruppe kan erstatte hinanden.
9 7 6 22 6 7 9
3
12 8
10
11
14
1
4
5
A
B
C
D