uji aktivitas antiinflamasi topikal fraksi etil...

UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI TOPIKAL FRAKSI ETIL ASETAT

DARI EKSTRAK METANOL DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum Ruiz

& Pav.) PADA MENCIT DIINDUKSI KARAGENIN

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Rianti Putri Kinanthi

NIM : 138114166

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2016

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i

HALAMAN JUDUL




SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :


NIM : 138114166

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2016


ii


iii


iv


v


vi

HALAMAN PERSEMBAHAN

“ The will of God will never lead you where the Grace of God will not protect

you. Faith is trusting God even when you don’t even understand His plan”

Saya persembahkan skripsi ini untuk

Tuhan Yesus, Bunda Maria dan Para orang kudus yang selalu memberkati dan

selalu membimbing saya disetiap langkah hidup saya.

Bapak Hening, Bu Titik dan Adek Yudhi yang selalu mendukung dan

memberikan semangat berlimpah kepada saya.

Teman-teman yang selalu mendukung, memberikan semangat dan yang selalu ada

untuk saya dalam keadaan apapun.


vii

PRAKATA

Puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala berkat,

rahmat, dan karunia yang dilimpahkan sehingga penulis dapat menyelesaikan

skripsi yang berjudul “UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI TOPIKAL

FRAKSI ETIL ASETAT DARI EKSTRAK METANOL DAUN SIRIH

MERAH (Piper crocatum Ruiz & Pav.) PADA MENCIT DIINDUKSI

KARAGENIN” sebagai salah satu syarat untuk mendapatkan gelar sarjana

Farmasi (S.Farm) Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

Penyeleseaian skripsi ini tentunya tidak lepas dari bantuan berbagai

pihak, baik secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu penulis

hendak mengucapkan terimakasih kepada:

1. Ibu Aris Widayati, M.Si., Ph.D., Apt selaku dekan Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta

2. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt selaku dosen pembimbing utama atas

segala kesabaran dan waktu yang telah diberikan untuk memberi masukan,

bimbingan, dukungan, saran, dan motivasi kepada penulis dalam penelitian

dan penyusunan skripsi ini.

3. Ibu drh. Sitarina Widyarini, MP. Ph.D., selaku dosen pembimbing

pendamping atas segala kesabaran dan waktu yang telah diberikan untuk

memberi masukan, bimbingan, dukungan, saran, dan motivasi kepada

penulis dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini.

4. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt selaku dosen penguji skripsi yang

telah banyak memberi ide, saran, dan masukkan yang membangun untuk

penelitian ini.

5. Bapak Christianus Heru Setiawan, M.Sc., Apt selaku dosen penguji skripsi

yang telah banyak memberi ide, saran, dan masukkan yang membangun

untuk penelitian ini.

6. Ibu Agustina Setiawati M.Sc., Apt dan Bapak Flotentinus Dika Octa

Riswanto, M.Sc., selaku dosen pembimbing akademik penulis atas

pendampingan, pengarahan, dukungan kepada penulis selama ini.

7. Bapak Wagiran, Bapak Heru dan Bapak Parjiman selaku laboran atas segala

bantuan dan dukungan yang diberikan serta dinamika di laboratorium

selama melakukan penelitian.

8. Bapak Hening, Bu Titik, dan Adek Yudhi yang selalu memberikan

motivasi, dukungan, semangat dan kekuatan bagi penulis serta senantiasa

mendoakan dan mengingatkan sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi

ini.

9. Teman-teman seperjuangan dalam penelitian Piper crocatum: Rafaella

Daramika Dwi Esti, Ardini Angelina Papulung, Eugenia Clarisa Giastini


viii

Kerans atas kebersamaan, kerja sama, bantuan, dan semangat selama

penelitian ini berlangsung.

10. Sahabat-sahabat penulis: Inez dan Ella yang menemani dan memberi

semangat penulis selama kuliah, Cussy yang terdiri dari ayuk, nopel, oncik,

ipo, eta, dan dinta yang menjadi sahabat sejak SMA yang hanya

memberikan sedikit semangat tetapi sangat berjasa dalam pembentukan

pribadi penulis dan ikut turut serta menentukan kebahagiaan penulis.

Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna, maka

penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang membangun

sehingga bisa membuat karya yang lebih baik. Penulis mohon maaf atas segala

kesalahan dan kekurangan yang terdapat dalam skripsi ini. Akhir kata, penulis

berharap penelitian ini dapat bermanfaat bagi semua pihak.

Yogyakarta, 23 Oktober 2016

Penulis


ix

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ................................................................................... i

PERSETUJUAN PEMBIMBING ............................................................... ii

PENGESAHAN SKRIPSI BERJUDUL ...................................................... iii

HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................. iv

PRAKATA ................................................................................................... v

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ...................................................... vii

DAFTAR ISI ................................................................................................ viii

DAFTAR TABEL ........................................................................................ ix

DAFTAR GAMBAR ................................................................................... x

DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................ xi

ABSTRAK ................................................................................................... xii

ABSTRACT ................................................................................................... xiii

PENDAHULUAN ....................................................................................... 1

METODE PENELITIAN ............................................................................. 2

HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................................... 5

KESIMPULAN ............................................................................................ 9

DAFTAR PUSTAKA .................................................................................. 10

LAMPIRAN ................................................................................................. 13

BIOGRAFI PENULIS ................................................................................. 38


x

DAFTAR TABEL

Tabel I. Rata-rata AUC total tebal lipat kulit pada setiap kelompok perlakuan

beserta kontrol dengan hasil uji Tamhane ....................................... 8


xi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Hasil KLT kelima fraksi dengan standar senyawa neolignan PC-1

dan PC-2 ..................................................................................... 6

Gambar 2. Daun dan serbuk daun Piper crocatum Ruiz & Pav. (DPc) ....... 13

Gambar 3. Proses ekstraksi maserasi, remaserasi dan ekstrak kental daun

Piper crocatum Ruiz & Pav. (DPc)............................................. 13

Gambar 4. Proses fraksinasi menggunakan VLC, Monitoring fraksi dengan

KLT menggunakan fase gerak Kloroform : Metanol(9:1), Hasil

fraksinasi menggunakan 5 pelarut ............................................... 14

Gambar 5. Bulu mencit dipotong untuk mempermudah perlakuan ............ 15

Gambar 6. Pengukuran kulit normal hewan uji, penyuntikan hewan uji dengan

karagenin 3%, Pengolesan krim fraksi DPc pada kulit punggung

hewan uji yang telah terbentuk udema ........................................ 15

Gambar 7. Pengujian kadar air dengan Moisture Balance .......................... 16

Gambar 8. Uji homogenitas fraksi etil asetat dengan konsentrasi 2%, 4% dan

8% ............................................................................................... 16


xii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Proses Ektraksi Daun Piper crocatum.(DPc) ............................ 13

Lampiran 2. Proses Fraksinasi Daun Piper crocatum.(DPc) menggunakan

Vacuum Liquid Chromatography (VLC) .................................. 14

Lampiran 3. Proses Pengujian Aktivitas Antiinflamasi Fraksi Etil Asetat dari

Ekstrak Metanol Daun Piper crocatum.(DPc) ........................... 15

Lampiran 4. Pengujian Moisture Balance Serbuk DPc dan Uji Homogenitas

Krim Fraksi Etil asetat dari Ekstrak Metanol DPc ..................... 16

Lampiran 5. Surat Keterangan Determinasi Tanaman ................................... 17

Lampiran 6. Surat Ethical Clearance dari LPPT UGM ................................. 18

Lampiran 7. Surat Legalitas Penggunaan Aplikasi SPSS untuk Pengujian Data

Secara Statistik .......................................................................... 19

Lampiran 8. Surat Keterangan Kalibrasi Alat ................................................ 20

Lampiran 9. Uji Pendahuluan Karagenin ....................................................... 21

Lampiran 10. Data Rata-rata Selisih Tebal Lipat Kulit ................................. 22

Lampiran 11. Data perhitungan Area Under Curve (AUC) ........................... 23

Lampiran 12. Hasil Statistik Perhitungan Area Under Curve (AUC)............ 25

Lampiran 13. Hasil Pengujian Anova dan Post Hoc ...................................... 29

Lampiran 14. Data Perhitungan Persen Penghambatan Inflamasi (%PI) ...... 32

Lampiran 15. Perhitungan Statistik Persen Penghambatan Inflamasi ........... 34


xiii





Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta Indonesia

ABSTRAK

Inflamasi merupakan salah satu bagian dari respon biologis untuk cedera

jaringan yang ditandai dengan pelepasaan berbagai mediator inflamasi. Obat- obat

antinflamasi nonsteroid (NSAID) menghambat berbagai mediator inflamasi.

Penggunaan NSAID secara peroral menimbulkan berbagai masalah efek samping.

Berbagai tanaman di Indonesia memiliki banyak potensi untuk mengobati suatu

penyakit. Salah satu tanaman di Indonesia yang digunakan sebagai obat

tradisional adalah tanaman sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.). Tanaman

sirih merah pernah dilaporkan memiliki aktivitas antiinflamasi secara peroral.

Tujuan dari penelitian ini untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi fraksi etil

asetat dari ekstrak metanol daun sirih merah secara topikal menggunakan metode

uji pengukuran tebal lipat kulit punggung hewan uji yang dihitung sebagai edema.

Uji aktivitas antiinflamasi menggunakan dua puluh lima ekor mencit galur Swiss

yang dibagi ke dalam 5 kelompok perlakuan, meliputi kelompok kontrol negatif

(karagenin), kontrol biocream, fraksi etil asetat dari esktrak metnol DPc dengan

konsentrasi 2; 4; dan 8% . Hasil penelitian menunjukan persen penghambatan

inflamasi dari fraksi etil asetat dari esktrak metnol DPc dengan konsentrasi 2; 4;

dan 8% berturut-turut adalah 18.89 %; 32.72 %; 47.73%, dengan

penghambatan inflamasi tertinggi pada fraksi etil asetat dengan dosis 8% yakni

sebesar 47,73%.

Kata kunci: Piper crocatum Ruiz & Pav., Fraksi, Antiinflamasi, Topikal


xiv

ABSTRACT

Inflammation is one part of a biological response to tissue injury and is a

protective response involving inflammatory mediators. Non-steroid Anti-

Inflammation Drugs (NSAID) inhibit the inflammatory mediators. The use of per-

oral NSAIDs cause many problems of side effects. There are many of

Indonesian’s plants has a lot of potential effect for treating a disease. One of

Indonesian’s plants that used as a traditional medicine is the red betel plant (Piper

crocatum Ruiz & Pav.). Red Betel plant have been reported to have anti-

inflammatory activity in orally. The purpose of this study is to determine the anti-

inflammatory activity of ethyl acetate fraction of methanol extract red betel leaves

topically using skin fold thickness measurement test which is calculated as edema.

Anti-inflammatory activity test using twenty five Swiss mice that were divided

into 5 groups, including the negative control group (carageenan), control of

Biocream®, ethyl acetate fraction of metnol extract red betel with 3 different

concentration of 2; 4; and 8% b/b.The results showed inhibition percent of

inflammation of the ethyl acetate fraction of DPC methanol extract with

concentration of 2; 4; and 8% b/b is 18.89%; 32.72%; 47.73%, with the highest

inhibition of inflammation is the ethyl acetate fraction with a consentration of 8%

b/b which amounted to 47.73%. From these results showed that red betel plant has

anti-inflammatory activity.

Keywords: Piper crocatum Ruiz & Pav., Fraction, Anti-inflmmatory, Topical


1

PENDAHULUAN

Inflamasi merupakan salah satu bagian dari respon biologis untuk cedera jaringan yang

ditandai dengan pelepasaan berbagai mediator inflamasi yang menghasilkan tanda-tanda seperti

kemerahan, panas, pembengkakan (edema), nyeri dan hilangnya fungsi jaringan (Serhan et al,

2010). Obat- obat antinflamasi nonsteroid (NSAID) yang banyak beredar merupakan obat

modern yang dapat menghambat berbagai mediator inflamasi (Pinzon, 2007). Penggunaan

NSAID secara peroral menimbulkan berbagai masalah efek samping seperti masalah lesi pada

lambung dan efek trombotik pada kardiovaskular pada inhibitor selektif COX-2 (Chowdhury et

al, 2009). Oleh karena itu pemanfaatan obat antiinflamasi dari tanaman dapat dijadikan

alternatif pengobatan dengan efek samping yang relatif lebih kecil dari obat modern dan

penggunaan obat antiinflamasi secara topikal dapat dipilih untuk meminimalkan efek samping

yang ditimbulkan dari penggunaan secara peroral.

Penggunaan obat-obatan herbal menjadi popular belakangan ini karena toksisitas dan efek

samping dari obat-obat modern. Tanaman obat memainkan peran penting dalam pengembangan

agen terapi yang poten terhadap suatu penyakit (Hoareau et al, 2000). Salah satu tanaman di

Indonesia yang memiliki efek terapi adalah tanaman Sirih merah, yang memiliki aktivitas

antiinflamasi. Tanaman Sirih merah memiliki kandungan senyawa fitokimia yaitu alkaloid,

saponin, tannin dan flavonoid (Dewi et al, 2014). Selain senyawa yang telah disebutkan diatas,

beberapa lignan dan neolignan juga telah diisolasi dari genus Piper. Neolignan yang telah

diisolasi dari Piper kadsura memiliki aktivitas antiinflamasi (Kim et al, 2011).

Tanaman Sirih merah memiliki banyak manfaat untuk pengobatan penyakit. Ektrak Metanol

daun Sirih merah memiliki aktivitas antiinflamasi pada tikus yang diinduksi karagenin dengan

nilai persen reduksi radang paling tinggit erdapat pada dosis 50 mg/kg BB (Fitriyani, 2011).

Fraksi hasil VLC dari ekstrak metanol daun Sirih merah mampu meningkatkan aktivitas

fagositosis makrofag (Hartini et al, 2013). Sel fagosit apabila teraktivasi berlebihan akan

menyebabkan rangsangan merugikan seperti pengeluaran mediator–mediator inflamasi dan

produksi enzim reactive oxygen species (ROS). Penelitian Hartini et al (2014), membuktikan

bahwa peningkatan aktivitas fagositosis makrofag dari daun Sirih merah tidak disertai oleh

peningkatan produksi nitrit oksid (NO) yang dikatalisis oleh enzim induced oxide synthase

(iNOS) secara berlebihan (Hartini et al,2014). Oleh karena itu dapat dikatakan bahwa daun Sirih

merah memiliki aktivitas antiinflamasi. Fraksinasi bertujuan untuk memisahkan ekstrak yang


2

terdiri dari berbagai macam komponen campuran menjadi beberapa kelompok untuk

mendapatkan senyawa yang lebih spesifik dengan karakteristik fisiko kimia yang sama seperti

kelarutan, ukuran atau muatan suatu senyawa (Houghton and Amala,1998). Pada penelitian ini

fraksinasi menggunakan gradien pelarut dari yang bersifat nonpolar hingga polar untuk

mendapatkan pemisahan senyawa yang lebih sempurna berdasarkan tingkat polaritasnya.

Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi dari fraksi etil asetat hasil

Vacuum Liquid Chromatography (VLC) dari ekstrak metanol daun Sirih merah.

METODE PENELITIAN

Bahan Daun Sirih merah yang diperoleh dari kebun obat “MERAPI FARMA” daerah kaliurang,

Metanol grade teknis dan grade pro analisis (pa), akuades, ekstrak, fraksi, dietil-eter pa, n-

heksan teknis, kloroform teknis, etil-asetat teknis, hewan uji berupa mencit galur swiss betina

umur sekitar 6-8 minggu dengan bobot sekitar 20-30 gram yang diperoleh dari Laboratorium

Immuno Universitas Sanata Dharma Yogyakarta, Karagenin tipe I (Sigma Chemical co.)

sebagai inflamatogen, NaCl 0,9% sebagai pelarut karagenin, Biocream® sebagai basis

krim,Veet® sebagai perontok bulu.

Alat Maserator/orbital shaker, vacuum rotary evaporator “BUCHI”, waterbath, chamber,

deteksi UV, spuit injeksi, mortir dan stamper, stopwatch, jangka sorong Digital Caliper

“TORA”, vacuum liquid chromatography , flakon, cawan porselen,

Pembuatan Ekstrak Metanol Daun Piper crocatum (DPc)

Pembuatan ekstrak metanol DPc mengacu pada jurnal penelitian Hartini et al, 2013.

Daun P. crocatum (DPc) dicuci. DPc dirajang dengan ukuran seragam dengan panjang daun

kurang lebih 1 cm. DPc yang masih basah kemudian dikeringkan. DPc kering dipisahkan dari

bahan-bahan pengotor kemudian dibuat menjadi serbuk, dilakukan pengayakan serbuk dengan

teknik manual menggunakan saringan. Serbuk simplisia DPc sebanyak 100 gram ditimbang

kemudian dimaserasi dengan pelarut metanol hingga simplisia terendam sempurna. Maserasi

dilakukan selama 24 jam pada suhu ruangan dan terlindung dari cahaya matahari langsung

sambil sesekali dilakukan penggojogan secara otomatis dengan menggunakan shaker. Setelah

24 jam dimaserasi, filtrat disaring dengan corong buchner dan ampasnya diremaserasi dengan

metanol selama 24 jam lalu disaring. Pelarut pada filtrat dihilangkan dengan cara diuapkan

dengan menggunakan vacuum rotary evaporator pada suhu 40oC. Kemudian diuapkan kembali


3

dengan menggunakan waterbath untuk diperoleh ekstrak kental DPc. Pengukuran % rendemen

dengan rumus :

% rendemen = 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑡𝑒𝑡𝑎𝑝 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘(𝑔𝑟𝑎𝑚)

𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑒𝑟𝑏𝑢𝑘 (𝑔𝑟𝑎𝑚) x 100%

Metode fraksinasi

Fraksinasi ekstrak metanolik DPc mengacu pada jurnal penelitian Hartini et al, 2013.

Sebanyak 10 gram silica gel 60 ditambahkan sedikit demi sedikit sambil diaduk dalam mortir

berisi 2 gram ekstrak DPc yang ditetesi eter sedikit demi sedikit sehingga diperoleh campuran

yang homogen- dan kering (free flowing). Pembuatan kolom dilakukan dengan memasukan

sebanyak 15 gram silica gel sedikit demi sedikit ke dalam kolom sambil divakum untuk

memperoleh massa fase diam yang kompak dan padat. Serbuk ektrak free flowing dipindahkan

sedikit demi sedikit ke dalam kolom, diatas fase diam dengan permukaan atas diusahakan rata

sambil divakum. Bagian atas ditutup dengan 2 lembar kertas saring sebesar diameter kolom.

Fraksinasi dilakukan dengan menuang pelarut secara perlahan-lahan pada permukaan kertas

saring sambil divakum. Pelarut yang digunakan berturut-turut 50 ml n-heksana, 50 ml

kloroform, 50 ml kloroform, 50 ml etil asetat, dan 100 ml metanol untuk mendapatkan fraksi I,

II, III, IV, dan V. Dilakukan pengukuran % rendemen fraksi dengan rumus :

% rendemen = 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑡𝑒𝑡𝑎𝑝 𝑓𝑟𝑎𝑘𝑠𝑖 (𝑔𝑟𝑎𝑚)

𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑡𝑟𝑎𝑘 (𝑔𝑟𝑎𝑚) x 100%

Monitoring fraksi dengan KLT

Hasil fraksinasi yang didapat kemudian diperiksa kandungan senyawa didalamnya

dengan metode KLT menggunakan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak menggunakan

kloroform : etil asetat (9:1) kemudian di deteksi dengan menggunakan UV dengan panjang

gelombang 254 nm. Kemudian fraksi yang memiliki kemiripan profil KLT dengan standar yang

akan diuji aktivitas antiinflamasi lebih lanjut. Standar yang digunakan adalah fraksi aktif hasil

penelitian Hartini et al,2013.

Pembuatan krim fraksi etil asetat dari ekstrak metanol DPc

Langkah awal adalah menentukan tiga konsentrasi fraksi hasil VLC dari ekstrak metanol

DPc dalam krim yaitu 2; 4; dan 8% 𝑏𝑏⁄ (Kumar et al, 2014). Pembuatan krim fraksi hasil VLC

dari ekstrak methanol DPc 2; 4; 8% dibuat dengan menimbang fraksi hasil VLC dari ekstrak


4

metanol DPc seberat 0,1; 0,2; dan 0,4 g kemudian dicampurkan dengan 5 g basis Biocream®

dalam cawan porselen.

Uji homogenitas krim fraksi etil asetat dari ekstrak metanol DPc

Krim fraksi hasil VLC dari ekstrak metanol DPc dioleskan pada dua keping kaca atau

bahan transparan lain yang cocok, kemudian dilakukan pengamatan dimana sediaan harus

menunjukkan susunan yang homogen dan tidak terlihat adanya butiran kasar (Panjaitan,

Awaluddin dan Djendakita, 2012).

Uji pendahuluan karagenin

Konsentrasi karagenin 1; 2 dan 3% dibuat dengan menimbang 1; 2 dan 3g karagenin tipe

I kemudian ditambahkan larutan NaCl 0,9% hingga batas tanda. Digunakan 3 kelompok mencit

dimana masing-masing kelompok terdiri dari 2 mencit. Pembagian kelompok berdasarkan

konsentrasi karagenin, yakni karagenin 1; 2 dan 3% masing-masing kelompok diinjeksikan

secara subkutan di kulit punggung mencit yang telah dicukur bulunya, kemudian diukur tebal

lipat kulit setiap 1 jam selama 6 jam. Konsentrasi karagenin yang dipilih adalah yang

menunjukan penebalan lipat kulit 2-3 kali dari tebal kulit awal.

Pengujian efek antiinflamasi

Hewan uji sebanyak 25 ekor mencit betina galur Swiss yang berumur sekitar 6-8 minggu

(2-3 bulan) dengan bobot sekitar 20-30 g yang dibagi secara acak menjadi 5 kelompok

perlakukan (masing-masing kelompok terdiri dari 5 ekor mencit). Bulu punggung hewan uji

digunting terlebih dahulu kemudian dioleskan Veet® untuk merontokkan bulu yang belum

tercukur sempurna. Kulit punggung yang telah tercukur dibiarkan selama 1 hari untuk

menghindari adanya inflamasi yang disebabkan oleh pencukuran dan pemberian Veet®.

Kelompok 1 (kontrol negatif) diinjeksikan karagenin secara subkutan dan diukur edema yang

muncul dengan jangka sorong digital setiap 1 jam selama 6 jam. Kelompok 2,3,4, dan 5 setelah

diinjeksikan karagenin maka mencit diolesi dengan Biocream®, dan krim fraksi yang hasil VLC

dari ekstrak metanol daun Sirih merah dengan konsentrasi 2; 4; dan 8% 𝑏𝑏⁄ pada area suntikan

karagenin dengan luas area 2,25 cm2 kemudian diukur tebal lipatan kulit punggung mencit

dengan jangka sorong digital setiap 1 jam selama 6 jam untuk melihat penghambatan inflamasi.

Perhitungan AUC selisih tebal lipat kulit punggung mencit

Nilai selisih edema tiap jam diukur dan dihitung nilai AUC dengan rumus:


5

Keterangan :

AUC0-6 = area di bawah kurva dari jam ke-0 sampai jam ke-6

(cm2.jam)

yn-1 = luas area pigmentase pada jam ke-(n-1)(cm2)

yn = luas are pigmentase pada jam ke-n (cm2)

xn = jam ke-n (jam)

xn-1 = jam ke-(n-1) (jam)

(Ikawati, Supardjan, dan Asmara, 2007).

Menghitung presentase penghambatan inflamasi

Keterangan :

(AUC0-6)0 = AUC0-6 rata-rata kontrol negatif (mm.jam)

(AUC0-6)n = AUC0-6 masing-masing mencit pada kelompok yang diberi

senyawa uji dengan konsentrasi sebesar n (mm.jam).

(Ikawati, Supardjan, dan Asmara, 2007)

Rata- rata AUC total masing-masing perlakuan kemudian dianalisis menggunakan uji

Shapiro-Wilk untuk melihat distribusi data. Jika data terdistribusi secara normal maka

dilanjutkan dengan analisis Anova dengan taraf kepercayaan 95%, jika data tidak terdistribusi

normal maka dilanjutkan dengan analisis Kruskall-Wallis. Apabila uji Kruskall-Wallis

menunjukkan paling tidak terdapat perbedaan antara dua kelompok, maka dilanjutkan dengan

analisi Post hoc Mann-Whitney (Dahlan, 2014).

HASIL DAN PEMBAHASAN

Proses Penyiapan Fraksi untuk Uji Aktivitas Antiinflamasi

Pada penelitian ini, bahan uji yang digunakan adalah tanaman Sirih merah dengan nama latin

Piper crocatum ruiz &Pav. Ekstrak metanol Daun Piper crocatum (DPc) diperoleh dari

ekstraksi daun Piper crocatum ruiz &Pav. menggunakan metode maserasi. Maserasi dipilih

karena merupakan metode yang sederhana karena alat-alat yang digunakan mudah didapatkan.

(Sarker,2006). Metode maserasi juga cocok untuk senyawa yang bersifat termolabil seperti

neolignan yang terkandung dalam sirih merah. Hasil randemen ekstrak terhadap serbuk yang

didapat sebesar 11.51%. Hasil randemen fraksi terhadap esktrak dari fraksi I hingga V berturut-

𝐴𝑈𝐶0−6 = ∑ [(𝑦𝑛−1 + 𝑦𝑛)(𝑥𝑛 − 𝑥𝑛−1)

2]

6

0

𝑃𝑒𝑛𝑔ℎ𝑎𝑚𝑏𝑎𝑡𝑎𝑛 𝑖𝑛𝑓𝑙𝑎𝑚𝑎𝑠𝑖 (%) = (𝐴𝑈𝐶0−6)0 − (𝐴𝑈𝐶0−6)𝑛

(𝐴𝑈𝐶0−6)0


6

turut adalah 1.46%, 1.72%, 5.49%, 35.39%, 35,18%. Menurut penelitian Fitriyani (2011),

ekstrak metanol daun Sirih merah dengan dosis 50 mg/kg BB memiliki efek antiinflamasi, oleh

karena itu digunakan pelarut metanol supaya senyawa yang tererkstrak memiliki aktivitas yang

sejenis. Fraksinasi dilakukan dengan metode Vacuum Liquid Chromatography (VLC) dengan

menggunakan 5 pelarut 50 ml n-heksana, 50 ml kloroform, 50 ml kloroform, 50 ml etil asetat,

dan 100 ml metanol untuk mendapatkan fraksi I, II, III, IV, dan V. Setelah didapatkan 5 fraksi

kemudian di monitoring dengan KLT dengan menggunakan standar isolat PC-1 dan PC-2 sesuai

dengan penelitian Hartini et al (2014). Penggunaan standar isolat PC-1 dan PC-2 dari Sirih

merah dikarenakan isolat tersebut mampu meningkatan aktivitas fagositosis makrofag dari daun

Sirih merah akan tetapi tidak disertai oleh peningkatan produksi nitrit oksid (NO) yang

dikatalisis oleh enzim induced oxide synthase (iNOS) secara berlebihan, sehingga diduga daun

Sirih merah memiliki aktivitas antiinflamasi.

Gambar 1. Kromatogram ke-5 fraksi dan standar PC-1dan PC-2 menggunakan fase gerak

kloroform etil asetat (9:1) dengan detektor UV 254 nm

Keterangan :

F1 = Fraksi dengan pelarut n-heksan PC-2 = Standar Isolat PC-2 DPc

F2 = Fraksi dengan pelarut Kloroform E1 & E2 = Esktrak metanol DPc

F3 = Fraksi dengan pelarut Kloroform A = Fraksi Etil asetat mengandung PC-1

F4 = Fraksi dengan pelarut Etil Asetat B = Fraksi Etil asetat mengadnung PC-2

F5 = Fraksi dengan pelarut Metanol C = Standar Isolat PC-1 dengan Rf 0,4

PC-1 = Standar Isolat PC-1 DPc D = Standar Isolat PC-2 dengan Rf 0,25


7

Pada gambar dapat dilihat bahwa fraksi yang mengandung senyawa PC-1 dan PC-2 yang

paling pekat adalah fraksi 4 dengan menggunakan pelarut etil asetat. Kemudian fraksi etil asetat

dari ekstrak metanol DPc diuji aktivitas antiinflamasi untuk membuktikan ada atau tidaknya

aktivitas antiinflamasi dari fraksi etil asetat ekstrak metanol DPc.

Proses Uji Aktivitas Antiinflamasi

Uji aktivitas antiinflamasi pada penelitian ini menggunakan metode inflammation-

associated edema dengan prinsip metode mengacu pada penelitian Widyarini et al (2001),

dengan mengukur tebal lipat kulit punggung mencit sebagai edema. Edema diinduksi

menggunakan senyawa karagenin dengan konsentrasi 3% yang telah dilakukan uji pendahuluan

sebelumnya. Tebal lipat kulit diukur dengan menggunakan jangka sorong setiap 1 jam selama 6

jam. Pengukuran dilakukan selama 6 jam karena penelitian ini menggunakan karagenin sebagai

penginduksi edema, dimana karagenin akan menginduksi edema dengan cepat maksimal 3-5

jam setelah pemberian injeksi (Utami,2012) sehingga diharapkan reaksi inflamasi berupa edema

yang terjadi merupakan pengaruh karagenin. Aktivitas antiinflamasi ditandai dengan penurunan

tebal lipat kulit punggung hewan uji setelah pemberian krim fraksi etil asetat dari ekstrak

metanol DPc.

Sebelum dilakukan uji antiinflamasi fraksi etil asetat dari ekstrak metanol terlebih

dahulu dilakukan uji pendahuluan karagenin. Uji pendahuluan dilakukan untuk menentukan

konsentrasi karagenin optimal yang dapat menyebabkan peningkatan tebal lipat kulit 2-3 kali

tebal lipat kulit normal. Konsentrasi karagenin yang paling optimal adalah 3%. Setelah

dilakukan uji pendahuluan karagenin, kemudian dilanjutkan uji aktivitas antiinflamasi fraksi etil

asetat dari ekstrak metanol DPc. Fraksi etil asetat dari ekstrak metanol DPc dibuat dalam bentuk

krim dengan cara mencampurkan tiap konsentrasi fraksi dengan Biocream® yang berfungsi

sebagai basis. Selain itu Biocream® yang dicampurkan dengan fraksi berfungsi untuk

mempermudah aplikasi fraksi pada kulit punggung mencit dan mempermudah penetrasi dari zat

aktif dalam fraksi. Fraksi dibuat dalam tiga konsentrasi yakni konsentrasi 2; 4; dan 8% 𝑏𝑏⁄ yang

bertujuan untuk mengetahui konsentrasi yang memiliki aktivitas antiinflamasi tertinggi yang

paling signifikan dalam menurunkan tebal lipat kulit punggung mencit mendekati tebal lipat

kulit punggung normal.

Pada uji aktivitas antiinflamasi, mencit dibagi ke dalam 5 kelompok dengan masing-

masing kelompok terdiri dari 5 ekor mencit. Pada masing-masing kelompok, mencit


8

diinjeksikan dengan karagenin 3% sebagai agen penginduksi edema, kelompok I merupakan

kontrol negatif karagenin, pada kelompok II mencit dioleskan dengan Biocream® untuk

mengetahui apakah Biocream® akan memberikan efek antiinflamasi atau tidak, pada kelompok

III,IV dan V mencit dioleskan dengan Biocream® yang telah dicampurkan dengan fraksi

konsentrasi 2; 4; dan 8% 𝑏 𝑏⁄ . Pengukuran dilakukan setiap 1 jam selama 6 jam dengan perbedaan

mediator inflamasi yang dilepaskan setiap jam. Setelah injeksi karagenin pada setiap jam terjadi

pengeluaran mediator-mediator inflamasi, pada dua jam pertama terjadi pelepasan histamine

dan serotonin, kemudian dilanjutkan dengan pelepasan bradikinin dan prostaglandin yang

dimulai pada jam ketiga hingga jam kelima (Suralkar,2008).

Analisis data hasil pengukuran aktivitas antiinflamasi fraksi etil asetat dilakukan dengan

menghitung rata-rata AUC total dari masing-masing kelompok. Rata-rata AUC total merupakan

luas area dibawah kurva yang menunjukan rata-rata selisih tebal lipat kulit dari jam ke 0 hingga

jam ke 6. Data hasil rata-rata AUC total kemudian dianalisis secara statistika menggunakan uji

Shapiro-Wilk. Kemudian didapatkan nilai p > 0,05 yang menunjukan data terdistribusi normal.

Kemudian dilanjutkan dengan uji anova dengan taraf kepercayaan 95% dan didapatkan p < 0,05,

setelah itu dilanjutkan uji Post Hoc Tamhane untuk mengetahui perbedaan masing-masing

kelompok berbeda bermakna (p<0,05) atau berbeda tidak bermakna (p>0,05).

Tabel I. Rata-rata AUC total pada setiap kelompok perlakuan beserta kontrol dengan hasil uji Tamhane

Kelompok Rata-rata AUC total

tebal kulit

I II III IV V %PI±SE

I 26.18 ± 1.18 - BTB BTB BB BB -0.02 ± 4.50

II 29.41 ± 1.12 BTB - BB BB BB -12.38 ± 4.27

III 21.23 ± 0.59 BTB BB - BB BB 18.89 ± 2.25

IV 17.61 ± 0.57 BB BB BB - BB 32.72 ± 2.19

V 13.48 ± 0.29 BB BB BB BB - 47.73 ± 1.68

Keterangan :

I : Kontrol Negatif

II : Kontrol Biocream

III : Fraksi etil asetat ekstrak metanol DPc Konsentrasi 2%

IV : Fraksi etil asetat ekstrak metanol DPc Konsentrasi 4%

V : Fraksi etil asetat ekstrak metanol DPc Konsentrasi 8%

Pada analisis data diatas menunjukan bahwa kelompok kontrol negatif berbeda tidak

bermakna dengan kelompok kontrol Biocream® dengan persen penghambatan inflamasi


9

masing-masing kelompok adalah -0,02 dan -12,38. Nilai dari persen penghambatan inflamasi

yang <0 menunjukan bahwa baik kontrol negatif dan kontrol Biocream® tidak memiliki

aktivitas antiinflamasi. Fraksi etil asetat dari ekstrak metanol DPc konsentrasi 4 dan 8%

menunjukan perbedaan yang bermakna dengan kontrol negatif, yang menunjukan bahwa fraksi

etil asetat dari ekstrak metanol DPc konsentrasi 4 dan 8% memiliki aktivitas antiinflamasi, akan

tetapi fraksi etil asetat dari ekstrak metanol DPc konsentrasi 2% menunjukan hasil yang berbeda

tidak bermakna dengan kontrol negatif, yang menunjukan bahwa fraksi etil asetat dari ekstrak

metanol DPc konsentrasi 2% memiliki aktivitas sebanding dengan kontrol negatif. Hal tersebut

dapat terjadi karena fraksi etil asetat dari ekstrak metanol DPc konsentrasi 2% belum cukup

memberikan efek antiinflamasi secara signifikan bila dibandingkan dengan kontrol negatif.

Kemudian pada kelompok fraksi etil asetat dari ekstrak metanol DPc konsentrasi 2%

menunjukan perbedaan yang bermakna dengan Fraksi etil asetat dari ekstrak metanol DPc

konsentrasi 4 dan 8% yang artinya aktivitas antiinflamasi dari ketiga konsentrasi berbeda secara

signifikan yang ditunjukan dengan nilai rata-rata % penghambatan inflamasi berturut turut

18,89; 32,72 dan 47,73. Data tersebut menunjukan peningkatan yang linier dari rata-rata %

penghambatan inflamasi, dimana semakin tinggi konsentrasi fraksi etil asetat dari ekstrak

metanol maka semakin tinggi pula % penghambatan inflamasi yang menunjukan besarnya

aktivitas antiinflamasi. Fraksi etil asetat dari ekstrak metanol DPc konsentrasi 8% memiliki

aktivitas antiinflamasi yang paling tinggi dibandingkan konsentrasi 2 dan 4%. Pada penelitian

yang pararel yang dilakukan oleh Daramika 2016 mengenai uji aktivitas antiinflamasi

menggunakan ekstrak metanol daun Piper crocatum Ruiz & Pav. didapatkan persen

penghambatan inflamasi pada konsentrasi 2, 4 dan 8% berturut-turut 30,79%, 29,83%, dan

36,45%, dimana persen penghambatan tertingi pada konsentrasi 8% sebesar 36,45%.

Kesimpulan dari data tersebut adalah fraksi etil asetat dari ekstrak metanol DPc memiliki

aktivitas antiinflamasi yang lebih besar dibandingkan ekstrak metanol DPc bila dilihat dari

persen penghambatan inflamasi yakni sebesar 47,73%.

Efek antiinflamasi fraksi etil asetat dari ekstrak metanol DPc konsentrasi 8%

dikarenakan adanya kandungan senyawa Pc-1 dan Pc-2 yang termasuk dalam golongan senyawa

neolignan, dibuktikan dengan uji KLT menggunakan fase gerak kloroform : etil asetat (9:1)

(Gambar 1). Pemilihan fase gerak mengacu pada penelitian Hartini et al (2014), dimana dengan

fase gerak tersebut dapat menghasilkan fraksi yang mengandung isolat Pc-1 dan Pc-2. Senyawa


10

neolignan dapat menghambat produksi dari Nitrit Oxide (NO) yang dikatalisis oleh enzim

induced oxide synthase (iNOS) (Konishi et al,2005). Peningkatan ekspresi NO dan iNOS dalam

jaringan menunjukkan adanya proses peradangan pada jaringan tersebut (Lukiati, 2012).

Sehingga dapat disimpulkan bawhwa neolignan dapat menghambat proses peradangan dan

memiliki aktivitas antiinflamasi.

Senyawa lain yang terdapat dalam fraksi etil asetat ekstrak metanol DPc adalah

flavonoid. Etil asetat sendiri merupakan pelarut yang bersifat semi polar sehingga dapat menarik

golongan flavonoid baik yang bersifat polar maupun semi polar dengan menggunakan metode

yang sama yakni dengan kromatografi cair vakum (KCV) (Kanifah, 2015). Selain itu fraksinasi

menggunakan metode kromatografi cair vakum (KCV) dengan pelarut etil asetat juga mampu

untuk menarik senyawa golongan alkaloid (Azzahra et al, 2015). Senyawa flavonoid memiliki

aktivitas antiinflamasi, mekanisme senyawa flavonoid sebagai antiinflamasi adalah dengan

menghambat COX dan lipooksigenase sehingga dapat menghambat sintesis leukotrien dan

prostaglandin yang merupakan mediator-mediator inflamasi (Riansyah, 2015). Sehingga dapat

disimpulkan bahwa fraksi etil asetat dari ekstrak metanol DPc dengan konsentrasi 8% memiliki

aktivitas antiinflamasi yang cukup menjanjikan dikarenakan adanya beberapa golongan

senyawa yang memiliki aktivitas antiinflamasi.

KESIMPULAN

Berdasarkan penelitian yang sudah dilakukan dapat disimpulkan bahwa fraksi etil asetat

dari ekstrak metanol DPc dengan konsentrasi 8% memiliki aktivitas antiinflamasi dengan %

penghambatan inflamasi sebesar 47,73% pada mencit galur Swiss yang diinduksi karagenin 3%.

SARAN

Diperlukan adanya penelitian lebih lanjut mengenai senyawa yang bertanggung jawab

terhadap aktivitas antiinflamasi dari daun Sirih merah. Selain itu diperlukan skrining fitokimia

lebih lanjut untuk mengetahui jenis senyawa dan kadar senyawa yang terkandung dalam fraksi

etil asetat dari ekstrak metanol daun Sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.)


11

DAFTAR PUSTAKA

Azzahra,F., Yani L., dan Esti R.S., 2015, Isolasi dan Karakteristik Alkaloid dari Daun Sirih

Merah, Prosiding Penelitian SPesSIA Unisba, hal 45-52.

Chowdhury M.A., Abdellatif K.R.A.,, Dong Y., Das D., Suresh M.R., Knaus E.E., 2009.

Synthesis of celecoxib analogues possessing a N-difluoromethyl-1,2-dihydropyrid-2-

one, 5-lipoxygenase pharmacophore:biological evaluation as dual inhibitors of

cyclooxygenases and 5-lipoxygenase with anti-inflammatory activity, Journal

Medicinal Chemistry, 52, 1525-1529.

Dahlan, M.S., 2014, Statsistik untuk Kedokteran dan Kesehatan, Epidemiologi Indonesia,

Jakarta : Salemba Medika, hal 92-135.

Dewi, Y.F., Anthara M.S., Dharmayudha G.O., 2014, Efektifitas Ekstrak Daun Sirih Merah

(Piper crocatum) terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah Tikus Putih Jantan (Rattus

novergicus) yang di Induksi Aloksan, Buletin Veteriner Udayana, 6(1), 73-79.

Fitriyani A., Winarti, L., Muslichah, S., Siti, 2011, uji Antiinflamasi Ekstrak methanol Daun

Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) pada Tikus Putih, Majalah Obat Tradisional,

16(1), 34-42

Hartini, Y, S.Subagus,W. Sitarina,W. Agustinus, Y., 2013, Uji Aktivitas Fagositosis Makrofag

Fraksi-fraksi dari ekstrak Metanol Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav)

Secara In Vitro, Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia, 11(2), 108-115.

Hartini, Y, S.Subagus,W. Sitarina,W. Agustinus, Y., 2014, In vivo Immunomodulatory Effect

and Histopathological Features of Mouse Liver and Kidney Treated with Neolignans

Isolated from Red Betel (Piper crocatum Ruiz & Pav) Leaf, Tropical Journal of

Pharmaceutical Research, (10), 1609-1614.

Hoareau L., and Edgar J.D., 2000, Medicinal plants : a re-emerging health aid, Electronic

Journal of Biotechnology 2(2),56-70.

Houghton P.J., Amala R., 1998, Laboratory Handbook for the Fractionation of Natural

Extracts, 1st ed., Chapman and Hall, p 8.

Ikawati, Z., Supardjan, A.M., Asmara, L.S., 2007, Pengaruh Senyawa Heksagamavunon-1

(HGV-1) Terhadap Inflamasi Akut Akibat Reaksi Anafilaksis Kutaneus Aktif Pada

Tikus Wistar Jantan Terinduki Ovalbumin, Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada,

Yogyakarta


12

Kanifah U., Mosthofa L., Bambang S., 2015, Karakterisasi Ekstrak Daun Sirih Merah dengan

Metode Estraksi Non-Thermal berbantukan Ultrasonik (Kajian Perbandingan Jenis

Pelarut dan Lama Ekstraksi), Jurnal Bioproses Komoditas Tropis, 3(1), 73-79.

Kumar P R., et al., 2014, Development and Evaluation of Topical Formulation with Chloroform

Extract of Pisonia grandis leaves for Antiinflammatory effect, International Journal of

ChemTech Research, Vol.6, No.5, pp 2660-2667.

Konishi T., Takao K., Akihiro D,and Susumu K., 2005, Neolignans from Piper futokadsura and

Their Inhibition of Nitric Oxide Production, Chem. Pharm. Bull, 53(1), 121-124.

Lukiati, B. Aulanni’am. Win,D., 2012, Profil Distribusi INOS Dan Kadar NO Pankreas Tikus

Diabetes Melitus Hasil Induksi Mld-Stz Pasca Pemberian Ekstrak Etanol Temugiring

(Curcuma heyneana), Jurnal Kedokteran Hewan, 6(2), 120.

Panjaitan, Ester Natalia, Awaluddin S., dan Djendakita P., 2012, Formulasi Gel Dari Ekstrak

Rimpang Jahe Merah (Zingiber officinale Roscoe), Journal of Pharmaceutics and

Pharmacology, 2012 Vol. 1 (1): 9-20.

Pinzon, R., Lucas M., 2007, Breakthrough in Management of Acute Pain, Jurnal Kedokteran

dan Farmasi, 20(4), 151-155.

Riansyah Y., Lanny M., dan Ratu C., 2015, Uji Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun

Ubi Jalar Ungu (Ipomoea batatas (L.) Lamk) terhadap Tikus Wistar Jantan, Prosiding

Penelitian SPeSIA Unisba, hal 630-636.

Sarker, S.D., et al, 2006, Methods in Biotechnology : Natural Products Isolation, 2nd ed.,

Humana Press : New Jersey, pp 7-8, 32.

Serhan, C.N., Ward, P.A., Gilroy, D.W., 2010, Fundamentals of Inflammation, Cambridge

University Press, New York, p 17.

Suralkar, A.A., Sarda, P.S., Ghaiss, M.M., 2008, In-vivo Animal Models for Evaluation of

Antiinflammatory Activity, Vol 6. Article Review, Issue 2.

Utami, E.T., Kuncoro, R.A., Hutami, I.R., Sari F.T., dan Handajani,J., 2011, Efek Antiinflamasi

Ekstrak Daun Sembukan (Paederia scandens) pada Tikus Wistar, Majalah Obat

Tradisional, 16(2),95-100.

Widyarini, S., Spinks N., Husband, A.J., Reeve, V.E., 2001, Isoflavonoid Compounds from Red

Clover (Trifolium pretense) Protect from Inflammation and Immune Suppresion Induced

by UV Radiation, Photochemistry and Photobiology, 74(3), 465-470.


13

LAMPIRAN

Lampiran 1. Proses ektraksi daun Piper crocatum Ruiz & Pav. (DPc)

Gambar 1. Daun dan serbuk daun Piper crocatum Ruiz & Pav. (DPc)

Gambar 2. Proses ekstraksi maserasi, remaserasi dan ekstrak kental daun Piper

crocatum Ruiz & Pav. (DPc)


14

Lampiran 2. Proses fraksinasi daun Piper crocatum Ruiz & Pav. (DPc)

menggunakan Vacuum Liquid Chromatography (VLC)

(a) (b)

(c)

Gambar 3. a Proses fraksinasi menggunakan vacuum liquid

chromatography (VLC), b. Monitoring fraksi dengan KLT

menggunakan fase gerak Kloroform : Metanol (9:1), c. Hasil

Fraksinasi menggunakan 5 pelarut.


15

Lampiran 3. Proses pengujian aktivitas antiinflamasi fraksi Etil asetat dari

ekstrak metanol DPc

Gambar 4. Kulit Punggung hewan uji dipotong untuk mempermudah

perlakuan.

(a) (b) (c)

Gambar 5. a. Pengukuran kulit normal hewan uji, b. penyuntikan hewan uji

dengan karagenin 3%, c. Pengolesan krim fraksi DPc pada kulit punggung

hewan uji yang telah terbentuk udema.


16

Lampiran 4. Pengujian moisture balance serbuk DPc dan Uji homogenitas krim

fraksi Etil asetat dari ekstrak metanol DPc

Gambar 6. Pengujian kadar air dengan Moisture balance

Gambar 7. Uji homogenitas fraksi etil asetat dari konsentrasi 2%, 4% dan 8%


17

Lampiran 5. Surat keterangan determinasi tanaman


18

Lampiran 6. Surat Ethical Clearance dari LPPT UGM


19

Lampiran 7. Surat legalitas penggunaan aplikasi SPSS untuk pengujian data

secara statistic


20

Lampiran 8. Surat keterangan kalibrasi alat (Jangka sorong)


21

Lampiran 9. Uji Pendahuluan Karagenin

Uji pendahuluan dilakukan untuk menentukan konsentrasi karagenin optimal

yang dapat menyebabkan peningkatan tebal lipat kulit 2-3 kali tebal lipat kulit normal.

Konsentrasi yang digunakan adalah 1;2 dan 3%. Gambar diatas menunjukan kenaikan

edema tiap konsentrasi karagenin. Konsentrasi yang memberikan peningkatan tebal

lipat kulit 2-3 kali lipat adalah konsentrasi 2 dan 3%, akan tetapi dipilih yang 3% karena

konsentrasi tersebut relatif dapat mempertahankan ketabalan lipat kulit lebih lama.

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

4

4.5

5

0 1 2 3 4 5 6 7

Ket

ebala

n K

uli

t M

enci

t (m

m)

Jam ke-

Kurva Uji pendahuluan Konsentrasi Karagenin

Kons 1%

Kons 2%

Kons 3%


22

Lampiran 10. Data rata-rata selisih tebal lipat kulit

Keterangan :

K negatif = Kontrol negatif (Karagenin 3%)

K biocream= Kontrol biocream

Kons 2% = Fraksi Etil asetat konsentrasi 2 %

Kons 4% = Fraksi Etil asetat konsentrasi 4%

Kons 8% = Fraksi Etil asetat konsentrasi 8%

6, 3.436, 3.73

6, 1.836, 1.846, 1.59

0.00

1.00

2.00

3.00

4.00

5.00

6.00

0 1 2 3 4 5 6 7

Rat

a-ra

ta s

elis

ih t

ebal

lip

at k

ulit

(m

m)

waktu pengamatan

Kurva Rata-rata Selisih Tebal Kulit Punggung Mencit Dari Waktu Pengukuran

1 Jam Hingga 6 Jam

K negatif

K biocream

Kons 2%

Kons 4%

Kons 8%


23

Lampiran 11. Data Perhitungan Area Under Curve (AUC)

HASIL EDEMA KONTROL NEGATIF KARAGENIN

Jam/Mencit 1 2 3 4 5

0 0 0 0 0 0

1 2.385 2.25 2.905 2.77 2.82

2 3.945 3.94 5.005 4.905 5

3 4.25 4.33 5.205 5.28 5.265

4 4.36 4.47 5.245 5.32 5.235

5 4.155 4.395 5.055 5.165 4.875

6 3.97 4.18 4.9 4.92 4.365

AUC TOTAL 23.065 23.565 28.315 28.36 27.56

HASIL EDEMA KONTROL BIOCREAM

JAM KE- 1 2 3 4 5

0 0 0 0 0 0

1 3.25 2.365 3.065 2.5 2.74

2 5.89 4.775 5.82 4.73 5.05

3 6.455 5.635 6.35 5.5 5.58

4 6.08 5.16 6.095 5.49 5.585

5 5.4 4.285 5.505 5.03 5.21

6 4.815 3.93 5.035 4.73 5

AUC total 31.89 26.15 31.87 27.98 29.165

HASIL EDEMA FRAKSI DPc KONSENTRASI 2%

Jam ke- 1 2 3 4 5

0 0 0 0 0 0

1 2.89 2.97 2.91 2.67 2.84

2 4.60 4.82 4.72 4.22 4.58

3 4.17 4.33 4.20 3.73 4.06

4 3.82 3.76 3.71 3.3 3.61

5 3.51 3.32 3.26 2.75 3.21

6 3.18 2.92 2.93 2.32 2.91

AUC total 22.16 22.10 21.71 18.97 21.19


24


Jam ke- 1 2 3 4 5

0 0 0 0 0 0

1 2.77 2.52 2.47 2.83 2.40

2 4.21 3.90 3.88 4.44 3.70

3 3.42 3.28 3.31 3.78 3.25

4 2.88 2.78 2.82 3.37 2.86

5 2.47 2.42 2.44 2.99 2.43

6 2.09 2.04 2.06 2.34 1.96

AUC total 17.83 16.92 16.96 19.74 16.58


JAM KE- 1 2 3 4 5

0 0 0 0 0 0

1 2.22 1.89 2.16 2.08 2.20

2 3.28 2.80 3.3 2.99 3.22

3 2.86 2.34 2.68 2.43 2.74

4 2.34 1.92 2.14 2.03 2.28

5 1.85 1.86 1.76 1.82 1.93

6 1.62 1.91 1.38 1.65 1.79

AUC total 14.15 12.70 13.41 13.00 14.14


25

Lampiran 12. Hasil Statistik Perhitungan Area Under Curve (AUC)

Case Processing Summary

Kelompok

Cases

Valid Missing Total

N Percent N Percent N Percent

AUC Kontrol Negatif 5 100.0% 0 0.0% 5 100.0%

Kontrol Biocream 5 100.0% 0 0.0% 5 100.0%

Fraksi DPc Konsentrasi 2% 5 100.0% 0 0.0% 5 100.0%



Descriptives

Kelompok Statistic Std. Error

AUC Kontrol Negatif Mean 26.1760 1.17730

95% Confidence Interval for

Mean

Lower Bound 22.9073

Upper Bound 29.4447

5% Trimmed Mean 26.2272

Median 27.5600

Variance 6.930

Std. Deviation 2.63251

Minimum 23.07

Maximum 28.36


26

Range 5.29

Interquartile Range 5.02

Skewness -.565 .913

Kurtosis -3.140 2.000

Kontrol Biocream Mean 29.4120 1.11651


Mean

Lower Bound 26.3121

Upper Bound 32.5119


Median 29.1700

Variance 6.233


Minimum 26.15

Maximum 31.89

Range 5.74


Skewness -.203 .913

Kurtosis -1.834 2.000

Fraksi DPc Konsentrasi 2% Mean 21.2260 .58997


Mean

Lower Bound 19.5880

Upper Bound 22.8640


Median 21.7100


27

Variance 1.740


Minimum 18.97

Maximum 22.16

Range 3.19


Skewness -1.794 .913

Kurtosis 3.268 2.000



Mean

Lower Bound 16.0177

Upper Bound 19.1943


Median 16.9600

Variance 1.636


Minimum 16.58

Maximum 19.74

Range 3.16


Skewness 1.604 .913




28


Mean

Lower Bound 12.6638

Upper Bound 14.2962


Median 13.4100

Variance .432

Std. Deviation .65731

Minimum 12.70

Maximum 14.15

Range 1.45


Skewness .004 .913

Kurtosis -2.546 2.000

Uji Normalitas

Tests of Normality

Kelompok

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

AUC Kontrol Negatif .300 5 .159 .784 5 .060

Kontrol Biocream .238 5 .200* .906 5 .447

Fraksi DPc Konsentrasi 2% .289 5 .200 .786 5 .063


Fraksi DPc Konsentrasi 8% .242 5 .200* .888 5 .348


29

Lampiran 13. Hasil Pengujian Anova dan Post Hoc

Test of Homogeneity of Variances

AUC

Levene Statistic df1 df2 Sig.

4.670 4 20 .008

ANOVA

AUC

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 819.957 4 204.989 60.391 .000

Within Groups 67.887 20 3.394

Total 887.844 24

Post Hoc Tests

Multiple Comparisons

Dependent Variable: AUC

Tamhane

(I) Kelompok (J) Kelompok

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig.

Kontrol Negatif Kontrol Biocream -3.23600 1.62254 .572

Fraksi DPc Konsentrasi 2% 4.95000 1.31685 .093


30

Fraksi DPc Konsentrasi 4% 8.57000* 1.30892 .007


Kontrol Biocream Kontrol Negatif 3.23600 1.62254 .572




Fraksi DPc Konsentrasi 2% Kontrol Negatif -4.95000 1.31685 .093

Kontrol Biocream -8.18600* 1.26280 .006

Fraksi DPc Konsentrasi 4% 3.62000* .82177 .023


Fraksi DPc Konsentrasi 4% Kontrol Negatif -8.57000* 1.30892 .007


Fraksi DPc Konsentrasi 2% -3.62000* .82177 .023


Fraksi DPc Konsentrasi 8% Kontrol Negatif -12.69600* 1.21344 .003




Multiple Comparisons

Dependent Variable: AUC

Tamhane

(I) Kelompok (J) Kelompok 95% Confidence Interval


31

Lower Bound Upper Bound

Kontrol Negatif Kontrol Biocream -9.4342 2.9622

Fraksi DPc Konsentrasi 2% -.7590 10.6590

Fraksi DPc Konsentrasi 4% 2.8458 14.2942


Kontrol Biocream Kontrol Negatif -2.9622 9.4342




Fraksi DPc Konsentrasi 2% Kontrol Negatif -10.6590 .7590

Kontrol Biocream -13.5794 -2.7926

Fraksi DPc Konsentrasi 4% .4828 6.7572


Fraksi DPc Konsentrasi 4% Kontrol Negatif -14.2942 -2.8458


Fraksi DPc Konsentrasi 2% -6.7572 -.4828


Fraksi DPc Konsentrasi 8% Kontrol Negatif -18.8724 -6.5196


Fraksi DPc Konsentrasi 2% -10.6083 -4.8837

Fraksi DPc Konsentrasi 4% -6.8946 -1.3574

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.


32

Lampiran 14. Data Perhitungan Persen Penghambatan Inflamasi (%PI)

KONTROL NEGATIF

Mencit AUC K.NEG NILAI AUC %PI

1 26.17 23.07 11.85

2 26.17 23.57 9.94

3 26.17 28.32 -8.22

4 26.17 28.36 -8.37

5 26.17 27.56 -5.31

KONTROL BIOCREAM


1 26.17 31.89 -21.86

2 26.17 26.15 0.08

3 26.17 31.87 -21.78

4 26.17 27.98 -6.92

5 26.17 29.165 -11.44

% PI FRAKSI DPc KONSENTRASI 2%


1 26.17 22.16 15.32

2 26.17 22.10 15.55

3 26.17 21.71 17.04

4 26.17 18.97 27.51

5 26.17 21.19 19.03


33



1 26.17 17.83 31.87

2 26.17 16.92 35.35

3 26.17 16.96 35.19

4 26.17 19.74 24.57

5 26.17 16.58 36.65



1 26.17 15.15 42.11

2 26.17 12.70 51.47

3 26.17 13.41 48.76

4 26.17 13.00 50.32

5 26.17 14.14 45.97


34

Lampiran 15. Perhitungan Statistik Persen Penghambatan Inflamasi dan hasil

uji normalitas

Case Processing Summary

Kelompok

Cases

Valid Missing Total

N Percent N Percent N Percent

PI Kontrol Negatif 5 100.0% 0 0.0% 5 100.0%

Kontrol Biocream 5 100.0% 0 0.0% 5 100.0%




Descriptives

Kelompok Statistic Std. Error

PI Kontrol Negatif Mean -.0220 4.50025


Mean

Lower Bound -12.5167

Upper Bound 12.4727

5% Trimmed Mean -.2178

Median -5.3100

Variance 101.261


Minimum -8.37

Maximum 11.85


35

Range 20.22


Skewness .565 .913

Kurtosis -3.140 2.000

Kontrol Biocream Mean -12.3840 4.26718


Mean

Lower Bound -24.2316

Upper Bound -.5364

5% Trimmed Mean -12.5500

Median -11.4400

Variance 91.044


Minimum -21.86

Maximum .08

Range 21.94


Skewness .201 .913

Kurtosis -1.835 2.000

Fraksi DPc Konsentrasi 2% Mean 18.8900 2.25441


Mean

Lower Bound 12.6308

Upper Bound 25.1492


Median 17.0400


36

Variance 25.412


Minimum 15.32

Maximum 27.51

Range 12.19


Skewness 1.794 .913




Mean

Lower Bound 26.6556

Upper Bound 38.7964


Median 35.1900

Variance 23.902


Minimum 24.57

Maximum 36.65

Range 12.08


Skewness -1.604 .913




37


Mean

Lower Bound 43.0620

Upper Bound 52.3900


Median 48.7600

Variance 14.110


Minimum 42.11

Maximum 51.47

Range 9.36


Skewness -.877 .913

Kurtosis -.169 2.000

Hasil Uji Normalitas % PI

Tests of Normality

Kelompok

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

PI Kontrol Negatif .300 5 .159 .784 5 .060

Kontrol Biocream .238 5 .200* .906 5 .447





38

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi dengan judul “Uji Aktivitas Antiinflamasi

Fraksi Hasil VLC dari Esktrak Metanol Daun Sirih Merah

(Piper crocatum Ruiz & Pav.) Pada Mencit Diinduksi

Karagenin ” memiliki nama lengkap Rianti Putri Kinanthi,

merupakan anak pertama dari dua bersaudara pasangan

Roekmyandaroeadi Tjipto Hening Wasono Poetro dan

Cecilia Titik Yunarti. Penulis dilahirkan di Yogyakarta, 24

Oktober 1995

Pendidikan formal yang telah ditempuh, yaitu TK

Kanisius Kotabaru Yogyakarta (1998-2001), kemudian

melanjutkan pendidikan tingkat Sekolah Dasar di SD

Kanisius Kotabaru Yogyakarta (2001-2007). Pendidikan Sekolah Menengah Pertama

ditempuh oleh penulis di SMP Pangudi Luhur I Yogyakarta (2007-2010), kemudian

melanjutkan pendidikan Sekolah Menengah Atas di SMA N 8 Yogyakarta (2010-

2013). Penulis kemudian melanjutkan pendidikan sarjana di Fakultas Farmasi,

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2013. Semasa menempuh kuliah,

penulis cukup aktif dalam berbagai kegiatan kepanitiaan di dalam fakultas. Penulis

pernah menjadi Koordinator Divisi Dekorasi dan dokumentasi “TITRASI 2015”,

Koordinator Divisi Publikasi, dekorasi dan dokumentasi “Pharmacy 3 ON 3 Basketball

Competition 2015”, Kesekretariatan “Pelepasan Wisuda II Fakultas Farmasi 2014”,

Divisi Dekorasi dan Dokumentasi “TITRASI 2014”.


uji aktivitas antiinflamasi topikal fraksi etil...

Documents