uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol daun ... · 13. para sahabat “kos arini 16 c”,...

UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL

DAUN BINAHONG (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) TERHADAP

JUMLAH NEUTROFIL DAN EKSPRESI SIKLOOKSIGENASE-2 PADA

PUNGGUNG MENCIT TERINDUKSI KARAGENIN

SKRIPSI

Dijalankan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Emerentio Renola

NIM: 138114056

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2017

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i

UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL

DAUN BINAHONG (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) TERHADAP

JUMLAH NEUTROFIL DAN EKSPRESI SIKLOOKSIGENASE-2 PADA

PUNGGUNG MENCIT TERINDUKSI KARAGENIN

SKRIPSI

Dijalankan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Emerentio Renola

NIM: 138114056

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2017


ii


iii


iv


v


vi

HALAMAN PERSEMBAHAN

“Satisfaction lies in the effort, not in the attainment, full effort is full

victory”

- Mahatma Gandhi -

Kupersembahkan karya ini untuk:

Tuhan Yesus dan Bunda Maria sumber kekuatan dan harapanku

Orang tuaku, Laurentius Harianja dan Lodefica Rumiyanti

atas doa dan kasih sayang yang tak terhingga

Para sahabat atas doa dan motivasinya

Almamaterku tercinta Universitas Sanata Dharma

“Janganlah takut, sebab Aku menyertai engkau, janganlah

bimbang, sebab Aku ini Allahmu; Aku akan meneguhkan, bahkan

akan menolong engkau; Aku akan memegang engkau dengan

tangan kanan-Ku yang membawa kemenangan.”

- Yesaya 41:10-


vii

PRAKATA

Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa, atas berkat, rahmat, cinta kasih

dan penyertaan-Nya kepada penulis sehingga penulis dapat menyelesaikan proses

penelitian dan penyusunan naskah skripsi yang berjudul “Uji Efek Antiinflamasi

Topikal Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis)

Terhadap Jumlah Neutrofil dan Ekspresi Siklooksigenase-2 pada Punggung Mencit

Terinduksi Karagenin”.

Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar

Sarjana Farmasi (S.Farm.) program studi Farmasi Universitas Sanata Dharma.

Penulis menyadari bahwa dalam pembuatan skripsi ini tidak terlepas dari bantuan

dan dukungan berbagai pihak. Oleh Karena itu pada kesempatan ini penulis ingin

menyampaikan terimakasih kepada:

1. Ibu Aris Widayati, M.Si., Ph.D., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

2. Ibu drh. Sitarina Widyarini, M.P., Ph.D., selaku Dosen Pembimbing Skripsi

yang dengan sabar selalu mendukung, memotivasi, membimbing dan

memberikan masukan kepada penulis selama proses penyusunan skripsi ini.

3. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt., selaku Dosen Penguji yang telah

memberi kritik dan sangat yang sangat membangun untuk penelitian ini.

4. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt., selaku Dosen Penguji yang telah

memberi kritik dan sangat yang sangat membangun untuk penelitian ini.

5. Bapak Florentinus Dika Octa Riswanto, M.Sc., selaku Dosen Pembimbing

Akademik (DPA) atas bimbingan dan motivasi yang telah diberikan kepada

penulis selama ini sehingga penulis berhasil menyelesaikan skripsi dan

memperoleh gelar sarjana strata satu.

6. Ibu Agustina Setiawati, M.Sc., Apt., selaku Kepala Penanggung Jawab

Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan izin dalam

penggunaan semua fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian.

7. Pak Andri, Pak Heru, Pak Kayat, Pak Parjiman, Pak Wagiran, Pak Sigit,

dan, selaku staf laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma

Yogyakarta yang telah membantu selama penelitian.

8. Bapak Sugiyono, Pak Lilik dan Pak Tri, selaku pihak Fakultas Kedokteran

Hewan Universitas Gadjah Mada Yogyakarta yang telah membantu selama

proses penelitian.

9. Keluarga tercinta Bapak Laurentius Harianja dan Ibu Lodefica Rumiyanti,

adik Vincentius Arsenio Vitolan Harianja serta para saudara yang selalu

memberikan doa, kasih sayang, motivasi serta dukungan secara materi


viii

maupun non-materi sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini

dengan baik.

10. Para sahabat “Galaxy Team”, Albertin Gilang, Veronika Lauren, Clara

Wina Caesaria, Debora Dian Pratiwi, Amanda Anggraini dan Liana

Yudomulyono. Kalian sahabat sekaligus rekan kerja penelitian yang luar

biasa. Terimakasih atas kebersamaan, kerjasama dan bantuannya selama ini.

11. Matius Rimawan Widiatmono yang selalu memberikan doa, motivasi,

dukungan, kritik dan saran serta perhatian kepada penulis selama proses

penelitian hingga penyusunan naskah skripsi ini.

12. Para sahabat terkasih Farmasi angkatan 2013 terutama FSM B 2013 dan

FKKB 2013. Terimakasih atas kebersamaan selama ini serta motivasi yang

diberikan kepada penulis.

13. Para sahabat “Kos Arini 16 C”, Vania Jessica Ongkers, Veronika Lauren,

Bella Fitria Tami, Mbak Tripina Putri, Mbak Yudist Latubayesian dan

Mbak Prycilia Tanjung serta penghuni lainnya. Terimakasih atas dukungan

yang diberikan dalam penyusunan skripsi, canda tawa dan kebersamaannya

selama ini.

14. Serta kepada semua pihak yang telah banyak membantu penulis dalam

menyelesaikan naskah skripsi ini, namun tidak dapat penulis sebutkan satu

persatu.

Penulis menyadari bahwa masih banyak kelemahan dan kekurangan dalam

penulisan skripsi ini. Oleh karena itu penulis mengharapkan adanya kritik dan saran

yang membangun dari semua pihak. Akhir kata, penulis berharap semoga skripsi

ini dapat bermanfaat bagi semua pihak terutama di bidang ilmu Farmasi.

Yogyakarta, 14 November 2016

Penulis


ix

INTISARI

Tanaman binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) merupakan salah

satu tanaman yang berkhasiat sebagai obat. Penelitian ini bertujuan untuk menguji

efek antiinflamasi topikal yang dibuktikan dengan adanya penurunan jumlah sel

neutrofil dan ekspresi COX-2 pada ekstrak etanol daun binahong pada kulit

punggung mencit betina galur Swiss terinduksi karagenin 3%.

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni acak lengkap pola

searah. Dua puluh lima (25) ekor dibagi menjadi 5 kelompok, yaitu kelompok

kontrol negatif, kelompok kontrol Biocream® dan kelompok perlakuan ekstrak

etanol daun binahong konsentrasi 10; 20; dan 40% b/b dengan cara pemberian

secara topikal. Pemotongan kulit hewan uji dilakukan pada 24 jam setelah

perlakuan. Sel neutrofil diamati dengan metode pengecatan hematoksilin-eosin

(HE) kemudian dilanjutkan uji persen ekspresi COX-2 dengan imunohistokimia

(IHC) menggunakan antibodi anti-COX-2.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa sel neutrofil pada kelompok ekstrak

etanol daun binahong konsentrasi 10; 20; dan 40% b/b berturut-turut adalah 75,04;

47,68 dan 36,00. Pada konsentrasi yang sama memberikan persen ekspresi COX-2

secara berturut-turut adalah 82,07; 75,78; dan 70,85%. Kesimpulan dari penelitian

ini adalah ekstrak etanol daun binahong menunjukkan aktivitas antiinflamasi

melalui penurunan sel neutrofil dan ekspresi COX-2.

Kata kunci: daun binahong, antiinflamasi, topikal, neutrofil, ekspresi COX-2


x

ABSTRACT

Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) is a plant that has

pharmacological effect. The purpose of this study was to test the effect of topical

antiinflammatory of ethanolic extract of binahong leaves that evidenced by

reduction in the number of neutrophil cells and COX-2 expression in dorsal skin of

female mice strains Swiss induced by carrageenan 3%.

The study was pure experimental with completely randomized design

direction. Twentyfive mice were devided into five groups of five animals each,

there is negative control group carrageenan 3%, Biocream® control group, and

ethanolic extract of binahong leaves concentration 10; 20; dan 40% w/w were given

topically. Cutting animal’s skin test performed for 24 hours. The neutrophils

migration was observed using hematoxylin-eosin (HE) staining method and then

immunohistochemical (IHC) staining method using antibody anti-COX-2 observed

the COX-2 expression test.

The result showed that neuthrophil cells migrating of ethanolic extract of

binahong leaves groups at concentration 10; 20; and 40% w/w respectively were

75.04; 47.68 and 36.00. At the same of concentration ware given percent COX-2

expression respectively were 82.07; 75.78; and 70.85%. In conclusion, ethanolic

extract of binahong leaves has topical anti-inflammatory effect by reduction of

neutrophils and percent COX-2 expression.

Keywords: binahong leaves, antiinflammatory, topical, neutrophils, COX-2

expression


xi

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ........................................................................................... i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................. ii

HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ iii

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................ iv

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA .............. v

HALAMAN PERSEMBAHAN ........................................................................ vi

PRAKATA ......................................................................................................... vii

INTISARI ........................................................................................................... ix

ABSTRACT ....................................................................................................... x

DAFTAR ISI ...................................................................................................... xi

DAFTAR TABEL ............................................................................................. xiii

DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ xiv

DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xv

PENDAHULUAN ............................................................................................. 1

METODE PENELITIAN

Jenis dan Rancangan Penelitian ................................................................... 2

Alat dan Bahan ............................................................................................ 2

Penyiapan dan Determinasi Daun Binahong ............................................... 2

Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Binahong ................................................. 3

Uji Pendahuluan .......................................................................................... 3

Pengujian Aktivitas Inflamasi ..................................................................... 4

Analisis Data ............................................................................................... 5

HASIL DAN PEMBAHASAN

Penetapan Kadar Air Serbuk Daun Binahong ............................................ 5

Penetapan Rendemen Ekstrak Etanol Daun Binahong ................................ 5

Uji Pendahuluan .......................................................................................... 5

Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Binahong Terhadap Jumlah

Neutrofil ...................................................................................................... 6

Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Binahong Terhadap Ekspresi


xii

COX-2 ......................................................................................................... 8

KESIMPULAN .................................................................................................. 11

SARAN .............................................................................................................. 11

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 12

LAMPIRAN ....................................................................................................... 14

BIOGRAFI PENULIS ....................................................................................... 30


xiii

DAFTAR TABEL

Tabel I Hasil rerata dan uji Scheffe jumlah sel neutrofil pada kelompok

perlakuan beserta kontrol .................................................................. 8

Tabel II Hasil rerata dan uji Tamhane persen ekspresi protein COX-2 pada

kelompok perlakuan beserta kontrol ................................................. 10


xiv

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Kurva hasil uji pendahuluan karagenin ......................................... 6

Gambar 2. Mikrofotografi pengecatan HE untuk melihat jumlah sel neutrofil

pada kulit normal, kulit perlakuan EEDB beserta kontrol

(perbesaran 100x dan 400x) ........................................................... 7

Gambar 3. Mikrofotografi pengecatan IHC dengan antibodi anti-COX-2

Untuk mengamati ekspresi COX-2 pada kulit normal, kulit

perlakuan EEDB beserta kontrol (perbesaran 100x dan 400x) ..... 9

Gambar 4. Mencit betina galur Swiss .............................................................. 15

Gambar 5. Kulit punggung mencit setelah dilakukan pencukuran ................. 15

Gambar 6. Kulit punggung mencit terinduksi karagenin ................................ 15

Gambar 7. Kulit punggung mencit yang diberi ekstrak etanol daun binahong 15

Gambar 8. Pemotongan kulit punggung mencit .............................................. 16

Gambar 9. Pengawetan kulit mencit dengan formalin 10% ............................ 16

Gambar 10. Tanaman binahong ......................................................................... 16

Gambar 11. Daun binahong .............................................................................. 16

Gambar 12. Biocream® sebagai kontrol Biocream® dan basis ekstrak ........... 17

Gambar 13. Serbuk karagenin yang digunakan dalam penelitian ..................... 17

Gambar 14. Ekstrak etanol daun binahong yang dicampurkan dalam basis

Biocream® ..................................................................................... 17

Gambar 15. Spuit injeksi yang digunakan dalam penelitian ............................. 17

Gambar 16. Rotary Evaporator ......................................................................... 18

Gambar 17. Mikroskop cahaya (Olympus® CX21) yang digunakan dalam

pengamatan .................................................................................... 18


xv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Hewan uji yang digunakan dalam penelitian .............................. 15

Lampiran 2. Pemotongan kulit untuk histopatologi ........................................ 16

Lampiran 3. Alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian ...................... 16

Lampiran 4. Hasil determinasi tanaman daun binahong ................................. 19

Lampiran 5. Surat ethical clearance ............................................................... 20

Lampiran 6. Surat pengesahan data statistik ................................................... 21

Lampiran 7. Hasil analisis statistik perhitungan rata-rata jumlah sel-sel

neutrofil pada masing-masing kelompok ................................... 22

Lampiran 8. Hasil analisis statistik uji normalitas dengan uji Shapiro-Wilk

pada jumlah neutrofil .................................................................. 24

Lampiran 9. Hasil pengujian One Way ANOVA jumlah neutrofil ................... 24

Lampiran 10. Hasil pengujian uji Post hoc dengan uji Scheffe pada jumlah

neutrofil ...................................................................................... 25

Lampiran 11. Hasil analisis statistik perhitungan rata-rata persen ekspresi

COX-2 pada masing-masing kelompok ..................................... 26

Lampiran 12. Hasil analisis statistik uji normalitas dengan uji Shapiro Wilk

pada persen ekspresi COX-2 ...................................................... 28

Lampiran 13. Hasil pengujian One Way ANOVA persen ekspresi COX-2 ..... 28

Lampiran 14. Hasil pengujian uji Post hoc dengan uji Tamhane pada persen

ekspresi COX-2 .......................................................................... 29


1

PENDAHULUAN

Inflamasi adalah respon awal pada tubuh terhadap infeksi, iritasi atau luka dan

mempertimbangkan respon nonspesifik imun dengan tujuan untuk menetralkan agen

penyerang dan untuk memperbaiki jaringan yang rusak, dengan begitu dapat menyakinkan

kelangsungan hidup organisme. Gejala dari inflamasi antara lain rubor, calor, tumor, dolor

dan function laesa (Gomes dkk., 2008). Radikal bebas dapat menyebabkan kerusakan

jaringan sehingga memicu biosintesis asam arakhidonat menjadi prostaglandin sebagai

mediator inflamasi (Kumar dkk., 2010). Respon inflamasi yang berlebihan atau kerusakan

jaringan yang hebat tidak boleh dibiarkan, oleh sebab itu reaksi inflamasi perlu diatasi agar

keluhan dan gejala berkurang (Meliala dan Pinzon, 2007).

Indonesia merupakan salah satu negara tropis yang memiliki keanekaragaman

tanaman yang dapat digunakan sebagai obat herbal salah satunya yakni tanaman binahong

(Anredera cordifolia (Ten.) Steenis). Telah banyak penelitian yang menguji manfaat dari

tanaman binahong. Salah satunya penelitian oleh Kurniawan dkk. (2014) menunjukkan

adanya aktivitas antiinflamasi pada ekstrak daun binahong dengan dosis efektif 50,4 mg/200

g BB pada tikus betina galur Sprague Dawley terinduksi karagenin 1%. Penelitian yang

dilakukan oleh Kaur dkk. (2014) dimana telah dibuktikan bahwa aplikasi pasta daun

binahong secara topikal dapat mempercepat dalam proses penyembuhan luka pada tikus.

Selain itu pada penelitian yang dilakukan oleh Miladiyah dan Prabowo (2012) melaporkan

bahwa ekstrak etanol daun binahong pada konsentrasi 10; 20; dan 40% dapat memperbaiki

penyembuhan luka pada marmut. Menurut Kusumastuti dkk. (2014), pada proses

penyembuhan luka tidak akan terjadi apabila tidak ada inflamasi dan akan menjadi sumber

nyeri.

Sudah banyak penelitian yang menguji efek antiinflamasi daun binahong secara oral.

Selain hal tersebut yang menjadikan alasan dari penelitian ini untuk menggunakan sediaan

topikal yakni karena kemudahan pengaplikasian pada kulit dan memiliki efek lokal bukan

sistemik (Syamsuni, 2006). Efek obat dengan pemberian topikal akan lebih cepat

dibandingkan dengan pemberian per oral. Hal ini disebabkan karena obat topikal bekerja

langsung pada daerah inflamasi dan tidak melalui sistem pencernaan, sehingga dapat

melindungi kemungkinan kerusakan zat aktif obat akibat enzim pencernaan (Ansel, 1989).

Penelitian mengenai skrining fitokimia yang dilakukan oleh Lestari dkk. (2015) didapatkan

hasil bahwa ekstrak etanol daun binahong memiliki kandungan saponin, flavonoid, alkaloid

dan steroid/ triterpenoid. Penelitian yang dilakukan oleh Selawa dkk. (2013) dilaporkan


2

bahwa daun binahong memiliki aktivitas antioksidan dari senyawa flavonoid yang dapat

berperan sebagai agen antiinflamasi. Menurut Harbone (1973) menyatakan bahwa sifat

senyawa flavonoid larut air dan dapat diekstraksi dengan etanol 70% (Harbone, 1973). Pada

penelitian ini digunakan bagian kulit punggung pada mencit dikarenakan aplikasi sediaan

topikal pada bagian tersebut memiliki area permukaan kulit yang luas dan mudah diamati

secara mikroskopis. Inflamasi dapat ditandai dengan migrasinya sel neutrofil dari sirkulasi

darah ke daerah peradangan selama 24 jam dan banyaknya ekspresi COX-2 oleh sel neutrofil

maka dari itu untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi dapat diketahui melalui pengurangan

jumlah sel neutrofil dan ekspresi COX-2 pada area yang mengalami inflamasi (Kumar dkk.,

2010).

Berdasarkan uraian diatas, maka dilakukan penelitian ini untuk mengetahui adanya

aktivitas efek antiinflamasi topikal tanaman binahong dengan mengetahui adanya

kemampuan dalam menurunkan jumlah neutrofil dan ekspresi COX-2.

METODE PENELITIAN

Jenis dan Rancangan Penelitian

Jenis penelitian yang digunakan merupakan penelitian eksperimental murni acak

lengkap pola searah.

Alat dan Bahan

Alat yang digunakan yakni oven, waterbath, evaporator, jangka sorong, blender,

ayakan no.40, mikroskop cahaya (Olympus® CX21), spuit injeksi 1 ml, alat bedah (gunting

bedah dan pinset), alat pencukur bulu mencit, mortir dan stamper, neraca analitik, stopwatch,

karton, corong Buchner, alat-alat gelas seperti beaker glass, tabung reaksi, pipet, labu ukur,

Erlenmeyer, cawan porselin, batang pengaduk dan gelas arloji. Bahan yang digunakan yaitu

daun binahong, mencit betina galur Swiss yang berumur sekitar 2-3 bulan dengan berat 20-

30 g, etanol 70%, karagenin tipe I, NaCl 0,9%, Veet®, Biocream®, formalin 10%.

Penyiapan dan Determinasi Daun Binahong

Sampel yang digunakan adalah daun binahong yang diperoleh dari Kebun Obat

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada bulan Juli 2016. Daun binahong tersebut perlu

dilakukan determinasi terlebih dahulu, untuk mengetahui apakah tanaman yang akan

digunakan benar-benar merupakan tanaman binahong. Determinasi daun binahong

dilakukan di Laboratorium Sistematika Tumbuhan Fakultas Biologi Universitas Gadjah

Mada Yogyakarta. Berdasarkan hasil determinasi yang telah dilakukan pada lampiran 4,


3

maka terbukti bahwa tanaman yang diuji adalah benar merupakan tanaman binahong

(Anredera cordifolia (Ten.) Steenis).

Selanjutnya daun binahong yang telah dikumpulkan dicuci dan dikeringkan

menggunakan oven dengan suhu 30-45oC selama 3 hari. Daun binahong yang telah kering

diserbuk menggunakan blender dan diayak dengan ayakan no. mesh 40. Pada serbuk

simplisia dengan memperkecil ukuran partikel akan memperluas permukaan area sehingga

interaksi antara sampel dan solvent dapat semakin efisien (Kumar, 2016). Setelah proses

penyerbukan, dilanjutkan dengan uji kadar air serbuk daun binahong dengan menggunakan

moisture balance.

Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Binahong

Ekstrak atau sari adalah material hasil penarikan oleh pelarut air atau pelarut organik

dari bahan yang kering atau dikeringkan (Saifudin, 2014). Metode ekstraksi yang digunakan

yaitu yaitu maserasi dengan cara merendam 150 g serbuk dalam 500 mL etanol 70%.

Maserasi dilakukan pada suhu ruangan akan mencegah terjadi kerusakan atau degradasi pada

senyawa metabolit yang tidak tahan panas (Sarker, 2006). Maserasi dilakukan selama 3 hari

dan dilanjutkan remaserasi selama 1 hari dengan jumlah volume pelarut yang sama. Tahap

remaserasi dalam penelitian ini mengacu pada Kumar (2016) dimana dilakukan sebanyak 3

kali pengulangan, agar kandungan fitokimia didalam daun binahong dapat terekstrak dengan

maksimal. Setelah proses remaserasi, maserat dikumpulkan dan dipekatkan dengan rotary

evaporator (suhu 60oC) dan waterbath sampai diperoleh eksrak kental dengan bobot tetap.

Cream (cremores) adalah bentuk sediaan setengah padat berupa emulsi yang

mengandung satu atau lebih bahan obat yang terlarut atau terdispersi dalam bahan dasar yang

sesuai dan mengandung air tidak kurang dari 60% (Syamsuni, 2006). Dalam penelitian

digunakan konsentrasi ekstrak etanol daun binahong (atau disingkat EEDB) dalam cream,

yaitu 10; 20; dan 40% b/b. Pembuatan cream dilakukan dengan menimbang EEDB seberat

0,5; 1; dan 2 g yang dilarutkan dalam 5 g basis Biocream®. Biocream® merupakan suatu

sediaan cream yang berfungsi sebagai pembawa untuk zat-zat aktif dalam pengobatan kulit.

Biocream® bersifat ambifilik artinya berkhasiat sebagai W/O atau O/W (Yanhendri, 2012).

Uji Pendahuluan

Penelitian ini telah mendapat persetujuan dari The Medical and Health Research

Ethics Committee (MHREC) Faculty of Medicine Gadjah Mada University (lampiran 5).

Pada uji pendahuluan digunakan 6 ekor mencit yang dibagi secara acak menjadi 2

kelompok yakni karagenin konsentrasi 1,5% dan 3% dimana masing-masing kelompok


4

diinjeksi sebanyak 0,1 mL secara subkutan pada kulit punggung mencit yang telah dicukur

bulunya dan didiamkan selama 2 hari. Tebal lipat kulit diukur setelah pemberian karagenin

tiap 1 jam selama 6 jam. Kelompok karagenin yang dipilih, apabila edema yang timbul

menunjukan penebalan lipatan kulit sebesar 2-3 kali dari tebal lipat kulit awal serta dapat

mempertahankan edema yang terbentuk hingga jam ke-6 (Hidayati dkk., 2008).

Pengujian Aktivitas Antiinflamasi

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi topikal

pada EEDB dengan melihat adanya penurunan jumlah sel neutrofil dan ekspresi COX-2.

Pada pengujian aktivitas antiinflamasi digunakan 25 ekor mencit yang dibagi

menjadi 5 kelompok yaitu kelompok kontrol negatif yang diinjeksikan karagenin 3%,

kelompok kontrol Biocream® yang diinjeksikan karagenin lalu dilanjutkan pemberian

Biocream® pada area injeksi dan kelompok perlakuan EEDB konsentrasi 10; 20; dan 40%

yang diinjeksikan karagenin lalu dilanjutkan pemberian sediaan cream EEDB.

Setelah 24 jam diinjeksikan karagenin 3% dan pengolesan sediaan topikal cream

EEDB, kemudian mencit dieutanasia dengan cara dislokasi tulang leher yang kemudian

diambil kulit punggung mencit pada bagian yang terdapat edema. Pengambilan kulit

dilakukan setelah 24 jam karena selama 24 jam pertama akan terjadi migrasi neutrofil dari

sirkulasi darah yang akan mendominasi area peradangan dan setelah 24 jam hingga 48 jam

akan didominasi oleh monosit (Kumar dkk., 2010). Selanjutnya, potongan kulit mencit

diletakkan pada karton tebal dan dimasukan kedalam formalin 10%.

Tahap selanjutnya yakni proses pengecatan sel neutrofil dengan metode

hematoksilin-eosin (HE) dan juga pengecatan COX-2 dengan menggunakan

imunohistokimia (IHC) antibodi anti-COX-2. Pengujian aktivitas antiinflamasi dilakukan

dengan cara mengamati dan menghitung jumlah sel neutrofil dan sel yang mengekspresikan

COX-2 pada daerah subkutan jaringan kulit punggung mencit pada 5 sudut pandang yang

berbeda di bawah mikroskop cahaya dengan perbesaran 400x. Nilai persentase ekspresi

COX-2 masing-masing kelompok dihitung dengan persamaan:

% ekspresi COX-2 = total sel hitung

× 100%

jumlah sel ekspresi COX-2

(Ikawati dkk., 2006)


5

Analisis Data

Seluruh data analisis statistik dilakukan di Pusat Kajian CE&BU dengan

menggunakan program IBM SPSS Statistics 22 Lisensi Universitas Gadjah Mada (lampiran

6). Uji statistik yang digunakan adalah uji Shapiro-Wilk untuk melihat kenormalan data,

kemudian dilanjutkan uji Levene Test untuk mengetahui homogenitas data. Selanjutnya

dilanjutkan dengan uji One Way ANOVA (taraf kepercayaan 95%) dan Post Hoc Test

dengan Scheffe Test (data homogen) atau Tamhane Test (data tidak homogen).

HASIL DAN PEMBAHASAN

Penetapan Kadar Air Serbuk Daun Binahong

Penetapan kadar air dilakukan menggunakan alat moisture balance di Laboratorium

Laboratorium FTS Padat Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Penetapan kadar air

dilakukan untuk mengetahui kandungan air di dalam serbuk dan menghindari pertumbuhan

jamur ataupun mikroorganisme lainnya pada serbuk. Syarat kadar air yang baik menurut

Agoes (2009) yakni ≤10%. Hasil dari uji kadar air sudah memenuhi syarat yakni sebesar

7,18%.

Penetapan Rendemen Ekstrak Etanol Daun Binahong

Setelah proses maserasi, hasil filtrat tersebut diuapkan di dalam oven hingga

didapatkan ekstrak kental dengan bobot yang tetap. Total berat ekstrak kental yang

didapatkan yakni sebanyak 28,01 gram dan rendemen ekstrak 18,67%.

Uji Pendahuluan

Penelitian ini menggunakan karagenin sebagai penginduksi inflamasi karena tidak

menimbulkan kerusakan jaringan, tidak menimbulkan bekas, memberikan respon yang

lebih peka terhadap obat antiinflamasi, dapat diamati dengan baik dan memiliki

reprodubilitas yang tinggi (Morris, 2003) (Vogel, 2002). Tujuan uji pendahuluan adalah

untuk menetapkan konsentrasi karagenin optimal yang akan digunakan pada penelitian.

Berdasarkan hasil uji pendahuluan, rata-rata tebal lipat kulit pada mencit yang

diinduksi karagenin 1,5% yakni 0,63 mm, setelah diinjeksikan karagenin pada jam pertama

tebal lipat kulit mengalami peningkatan menjadi 2,88 mm sehingga peningkatan edema

yang terjadi yakni sebesar 2,25 kali. Pada jam kedua terjadi peningkatan tebal lipat kulit

sebesar 2,78 kali dari 0,63 mm menjadi 3,41 mm. Peningkatan tebal lipat kulit berlangsung

dari jam pertama hingga jam kedua, namun dilanjutkan dengan penurunan tebal lipat kulit

yang sangat signifikan hingga jam ke-6.


6

Pada mencit yang diinduksi karagenin konsentrasi 3% terjadi peningkatan tebal lipat

kulit punggung mencit hingga 3,13 kali tebal lipat kulit awal dari 0,40 mm menjadi 3,53

mm. Peningkatan tebal lipat kulit pada kelompok karagenin 3% tersebut diikuti dengan

terjadi penurunan tebal lipat kulit pada jam berikutnya namun penurunan yang terjadi tidak

signifikan dimana karagenin 3% masih dapat mempertahankan edemanya hingga jam

keenam. Kurva hasil uji pendahuluan dapat dilihat pada gambar 1.

Gambar 1. Kurva hasil uji pendahuluan karagenin

Berdasarkan hasil uji pendahuluan maka pada penelitian ini menggunakan karagenin

konsentrasi 3% sebagai penginduksi inflamasi karena pada konsentrasi ini terjadi

peningkatan tebal lipat kulit yang mencapai lebih dari 2-3 kali tebal lipat kulit awal dan

penurunan tebal lipat kulit yang tidak signifikan sehingga dapat lebih mempertahankan

edema yang terbentuk hingga jam ke-6. Pada penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh

Utami (2015) yang melakukan uji pendahuluan konsentrasi karagenin menyatakan bahwa

karagenin 3% dipilih sebagai penginduksi inflamasi dalam penelitian tersebut.

Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Binahong Terhadap Jumlah Neutrofil

Pengujian antiinflamasi dengan metode pengecatan hematoksilin-eosin (HE)

bertujuan untuk memberikan gambaran kemampuan EEDB dalam memberikan efek

antiinflamasi yang ditandai dengan penurunan jumlah sel neutrofil pada daerah subkutan.

Hematoksilin-eosin merupakan teknik pewarnaan yang berdasarkan pada prinsip asam basa

(IHC World, 2015). Jumlah sel neutrofil diamati dari 5 sudut pandang dan dihitung secara

langsung (direct counting). Gambar mikroskopik dari kulit punggung mencit dengan

berbagai kelompok dapat dilihat pada gambar 2.

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

0 1 2 3 4 5 6 7

Ed

ema

(m

m)

Waktu (jam)

Karagenin 1,5%

Karagenin 3%


7

A.

B.

C.

D.

E.

F.

Gambar 2. Mikrofotografi pengecatan HE untuk melihat jumlah sel neutrofil pada kulit normal, kulit

perlakuan EEDB beserta kontrol (perbesaran 100x dan 400x). Keterangan: kulit normal 100x (A); kulit normal

400x (B); kulit kontrol karagenin 100x (C); kulit kontrol karagenin 400x (D); kulit EEDB 10% 100x (E); kulit

EEDB 10% 400x (F).

Hasil perhitungan jumlah neutrofil antar kelompok dianalisis menggunakan uji

Shapiro- Wilk. Uji Shapiro-Wilk pada penelitian ini didapatkan data terdistribusi secara

normal (nilai p > 0,05). Setelah itu dilanjutkan dengan uji varian dan didapatkan nilai

p=0,056 (p > 0,05) yang menandakan bahwa varian data sama. Kemudian dilanjutkan

dengan uji One Way ANOVA menggunakan Post Hoc Test dengan uji Scheffe. Hasil rerata

dan uji Scheffe masing-masing kelompok perlakuan dan kontrol dapat dilihat pada Tabel I.

Pada kontrol negatif menunjukkan rerata jumlah neutrofil yang paling besar yaitu

183,36 ± 4,19 dan pada kontrol Biocream® menunjukkan rerata yang cukup besar yakni

181,40 ± 4,44. Berdasarkan analisis statistik, kelompok kontrol karagenin berbeda tidak

bermakna dengan kelompok kontrol Biocream®. Hal tersebut berarti bahwa karagenin dapat

menyebabkan inflamasi dengan ditandai adanya peningkatan jumlah neutrofil pada daerah

subkutan kulit punggung mencit dan kontrol Biocream® tidak memiliki efek dalam

menurunkan sel neutrofil.


8

Tabel I. Hasil rerata dan uji Scheffe jumlah sel neutrofil pada kelompok perlakuan beserta kontrol.

Rerata Jumlah

Sel Neutrofil ±

SE

Kontrol

Negatif

Kontrol

Biocream®

EEDB

10%

EEDB

20%

EEDB

40%

Kontrol

Negatif 183,36 ± 4,19 - BTB BB BB BB

Kontrol

Biocream® 181,40 ± 4,44 BTB - BB BB BB

EEDB 10% 75,04 ± 1,27 BB BB - BB BB

EEDB 20% 47,68 ± 1,55 BB BB BB - BTB

EEDB 40% 36,00 ± 0,82 BB BB BB BTB - Keterangan:

SE : Standard error

BB : Berbeda bermakna (p < 0,05)

BTB : Berbeda tidak bermakna (p > 0,05)

Berdasarkan analisis statistik pada Tabel I, didapatkan hasil bahwa masing-masing

pada kelompok kontrol karagenin dan kontrol Biocream® berbeda bermakna dengan ketiga

peringkat konsentrasi EEDB. Hal ini membuktikan bahwa ketiga kelompok konsentrasi

EEDB memiliki aktivitas antiinflamasi yang ditandai dengan penurunan jumlah sel neutrofil

yang cukup berarti. Pada kelompok perlakuan EEDB konsentrasi 10% berbeda bermakna

dengan konsentrasi 20% begitu juga dengan EEDB konsentrasi 10% berbeda bermakna

dengan konsentrasi 40%. Hal tersebut menunjukkan bahwa konsentrasi 10% besar aktivitas

penurunan jumlah sel neutrofilnya paling rendah dan aktivitas penurunan tersebut tidak

sebanding dengan konsentrasi 20% dan 40%.

Pada EEDB konsentrasi 20% memiliki rerata penurunan jumlah sel neutrofil yang

lebih kecil dibandingkan kelompok EEDB konsentrasi 40% namun hasil statistik

menunjukkan perbedaan tidak bermakna. Hal tersebut berarti bahwa antara konsentrasi 20%

dan konsentrasi 40% memiliki aktivitas penurunan sel neutrofil yang sebanding. Menurut

Katzung (2002), intensitas efek obat berbanding lurus dengan reseptor yang diduduki atau

yang diikatnya. Intensitas efek obat mencapai maksimal bila seluruh reseptor diduduki oleh

obat. Oleh karena itu peningkatan dosis ataupun konsentrasi tidak memberikan peningkatan

terhadap efek antiinflamasi.

Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Binahong Terhadap Ekspresi COX-2

Pengujian metode IHC dengan antibodi anti-COX-2 bertujuan untuk mengetahui

aktivitas antiinflamasi EEDB melalui pemeriksaan ekspresi COX-2. Prinsip metode ini

adanya pengikatan antigen pada antibodi yang dilekatkan dengan suatu penanda yang

bereaksi dengan kromogen DAB (Diaminobenzidin) sehingga menyebabkan perbedaan


9

warna yakni warna coklat untuk sel yang mengekspresikan COX-2 dan warna biru untuk

sel yang tidak mengekspresikan COX-2 (IHC, 2015). Hasil pengecatan IHC dapat dilihat

pada gambar 3.

A.

B.

C.

D.

E.

F.

Gambar 3. Mikrofotografi pengecatan IHC dengan antibodi anti-COX-2 untuk mengamati ekspresi COX-2

pada kulit normal, kulit perlakuan EEDB beserta kontrol (perbesaran 100x dan 400x). Keterangan: kulit

normal 100x (A); kulit normal 400x (B); kulit kontrol karagenin 100x (C); kulit kontrol karagenin 400x (D);

kulit EEDB 10% 100x (E); kulit EEDB 10% 400x (F).

Perhitungan persen ekspresi COX-2 diuji secara statistik. Pengujian distribusi data

rerata persen ekspresi COX-2 semua kelompok menggunakan uji Shapiro-Wilk

menunjukkan distribusi data normal (p>0,05), sehingga dilanjutkan dengan uji homogenitas

variasi dengan Levene Test. Data yang diperoleh memiliki variasi data yang tidak homogen

dengan nilai p=0,001 (p<0,05), sehingga dilanjutkan dengan uji One Way ANOVA

menggunakan Post Hoc Test dengan uji Tamhane. Hasil uji statistik ditunjukkan pada tabel

II.

Berdasarkan Tabel II menunjukkan bahwa kelompok perlakuan kontrol karagenin

dan kontrol Biocream® memiliki rerata persen ekspresi protein COX-2 paling besar

dibanding dengan kelompok lainnya yaitu 98,04 ± 0,25 dan 95,50 ± 1,26. Hasil uji statistik

antara kelompok karagenin dan Biocream® memperlihatkan hasil perbedaan tidak


10

bermakna. Hal tersebut menunjukkan bahwa pada karagenin terjadi proses peradangan yang

ditandai dengan peningkatan ekspresi protein COX-2 dan pada Biocream® tidak memiliki

efek dalam menurunkan ekspresi protein COX-2. Masing-masing pada kelompok kontrol

karagenin dan Biocream® memiliki perbedaan yang bermakna dengan ketiga kelompok

perlakuan, sehingga dapat dikatakan bahwa ketiga kelompok perlakuan memiliki efek

antiinflamasi yang ditandai dengan menurunnya ekspresi COX-2.

Tabel II. Hasil rerata dan uji Tamhane ekspresi protein COX-2 pada kelompok perlakuan beserta kontrol.

Rerata %

Ekspresi ± SE

Kontrol

Negatif

Kontrol

Biocream®

EEDB

10%

EEDB

20%

EEDB

40%

Kontrol

Negatif 98,04 ± 0,25 - BTB BB BB BB

Kontrol

Biocream® 95,50 ± 1,26 BTB - BB BB BB

EEDB 10% 82,07 ± 1,22 BB BB - BTB BTB

EEDB 20% 75,78 ± 1,84 BB BB BTB - BTB

EEDB 40% 70,85 ± 2,33 BB BB BTB BTB - Keterangan:

SE : Standard error

BB : Berbeda bermakna (p < 0,05)

BTB : Berbeda tidak bermakna (p > 0,05)

Penurunan rerata persen ekspresi COX-2 pada kelompok EEDB konsentrasi 10; 20

dan 40% secara berturut-turut 82,07 ± 1,22; 75,78 ± 1,84 dan 70,85 ± 2,33. Melalui hasil

analisis statistik menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna antara ketiga peringkat

konsentrasi EEDB. Hal tersebut berarti bahwa ketiga konsentrasi tersebut memiliki aktivitas

penurunan ekspresi COX-2 yang sebanding.

Sel neutrofil sebagai agen antiinflamasi dapat menghasilkan leukotriene B4 dari jalur

5-lipooksigenase dan PGE2 dari jalur siklooksigenase (Cadieux dkk., 2005). Hal tersebut

diduga yang menyebabkan antara jumlah neutrofil dan ekspresi COX-2 nilainya tidak

sebanding dimana tidak semua neutrofil dapat mengekspresikan COX-2 namun sel neutrofil

juga dapat mengekspresikan leukotriene B4. Selain alasan itu, ekspresi COX-2 dapat

diinduksi oleh adanya sitokin, growth factor dan stimulus lainnya berdasarkan respon

inflamasi (Meilawaty, 2013).

Flavonoid memiliki aktivitas sebagai antioksidan dalam mekanisme antiinflamasi

(Gomes dkk., 2008). Flavonoid menghambat jalur lipooksigenase yang nantinya akan

melepaskan mediator inflamasi (Winarsi, 2007). Tidak hanya jalur lipooksigenase saja

namun juga memiliki mekanisme yang menghambat jalur arachidonic acid dengan

menghambat terjadinya ekspresi dari mediator inflamasi yaitu COX-2. Penurunan ekspresi


11

COX-2 ini akan mengakibatkan terjadinya penurunan jumlah dari prostaglandin yang

khususnya pada mediator pro-inflamasi seperti PGE2, sehingga respon inflamasi akan

berkurang (Gomes dkk., 2008). Pada penelitian yang dilakukan Selawa (2013), jenis

flavonoid yang dperoleh dari hasil isolasi dan identifikasi serbuk segar kering EEDB

merupakan flavonol. Golongan flavonol memiliki beberapa kandungan antara lain

quercetin, kaemferol, myricetin, isorhamnetin, rutin (Rathee dkk., 2009) (Vezza dkk.,

2016). Menurut Gomes dkk. (2008), mengatakan bahwa beberapa flavonol menghambat

produksi PGE2 yang merupakan mediator inflamasi, sehingga dengan adanya kandungan

flavonol dapat menghambat terjadinya inflamasi. Namun saat ini, belum ada penelitian

mengenai kandungan flavonol secara spesifik yang terdapat pada daun binahong dalam

aktivitas sebagai antiinflamasi.

Aktivitas anttinflamasi EEDB didukung melalui uji antiinflamasi topikal secara

makroskopik dimana parameter efek antiinflamasi dilihat dari penurunan tebal lipat kulit

punggung mencit yang diukur dengan menggunakan jangka sorong digital (Christiani,

2016).

KESIMPULAN

Ekstrak etanol daun binahong (EEDB) memiliki aktivitas antiinflamasi yang

ditunjukkan dengan penurunan jumlah neutrofil dan ekspresi COX-2 pada kulit punggung

mencit yang terinduksi karagenin 3%.

SARAN

Perlu dilakukan kembali penelitian lebih lanjut mengenai kandungan flavonol secara

spesifik yang bertanggungjawab dalam ekstrak etanol daun binahong yang berperan sebagai

antiinflamasi secara topikal maupun oral. Selain itu, perlu dilakukan penelitian mengenai uji

efek antiinflamasi EEDB dengan parameter persen ekspresi COX-2 menggunakan

konsentrasi yang lebih rendah.


12

DAFTAR PUSTAKA

Agoes, G., 2009. Teknologi Bahan Alam (serial Farmasi Industri-2). Penerbit ITB,

Bandung, 17.

Ansel, H.C., 1989. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. Edisi ke-4, UI Press, Jakarta, 96,147.

Cadieux, J.S., Leclerc, P., St-Onge, M., Dussault, A.A., Laflamme, C., Picard, S., Ledent,

dkk., 2005. Potentiation of Neutrophil Cyclooxygenase-2 by Adenosine: An Early

Anti-inflammatory Signal. Journal of Cell Science., 118 (7), 1437-1447.

Christiani, V. L., 2016. Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera

cordifolia (Ten.) Steenis) pada Tebal Lipat Kulit Punggung Mencit Terinduksi

Karagenin. Skripsi, Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

Gomes, A., Fernandes, E., Lima, J.L.F.C., Mira, L., dan Corvo, M.L., 2008. Molecular

Mechanism of Anti-Inflammatory Activity Mediated by Flavonoids. Current

Medicinal Chemistry., 15, 1586-1605.

Harbone, J. B., 1973. Phytochemical Methods a Guide to Modern Techniques of Plant

Analysis. Edisi ke-2, Chapman and Hall, New York, 55.

Hidayati, N. A., Listyawati, S. dan Setyawan, A. D., 2008. Kandungan Kimia dan Uji

Antiinflamasi Ekstrak Etanol Lantana camara L. pada Tikus Putih (Rattus

norvegicus L.) Jantan. Bioteknologi., 5 (1), 10-17.

IHC World, 2015. Hematoxylin and Eosin (H&E) Staining Protocol.

https://www.ihcworld.com/_protocols/special_stains/h&e_ellis.htm diakses pada

tanggal 3 April 2016.

Ikawati, Z., Nugroho, A. E., dan Werdhinindah, W., 2006. Efek Ekstrak Etanol Daun

Erythrina fusca Lour (Cangkring) terhadap Penekanan Ekspresi Enzim

Siklooksigenase–2 pada Kultur Sel Raji. Majalah Farmasi Indonesia., 17(2), 85 –

90.

Katzung, B. G., 2002. Farmakologi Dasar dan Klinik. Edisi ke-8, Salemba Medika, Jakarta,

459-462.

Kaur, G, Utami, N. V., dan Usman, H. A., 2014. Effect of Topical Application of Binahong

(Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) Leaf Paste in Wound Healing Process in Mice.

Althea Medical Journal., 1(1), 6-10.

Kumar, S., 2016. Analytical Techniques for Natural Product Research, CABI, Boston, 11-

17.

Kumar, V., Abbas, A.K., Fausto, N., dan Aster, J.C.A., 2010. Robbins and Cotran

Pathologic Basis of Disease. Edisi ke-8, Saunders Elsevier, 63-86.

Kurniawan, B., Carolia, N., dan Pheilia, A., 2014. The Effectiveness of Binahong Leaf

Extract (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) and Mefenamic Acid as Anti

Inflamation to White Male Rat Induced by Karagenin. Research Article JUKE., 4(8),

151-157.

Kusumastuti, E., Handajani, J., dan Susilowati, H., 2014. Ekspresi COX-2 dan Jumlah

Neutrofil Fase Inflamasi pada Proses Penyembuhan Luka Setelah Pemberian

Sistemik Ekstrak Etanolik Rosela (Hibiscus sabdariffa) (studi in vivo pada Tikus

Wistar). Maj Ked Gi, 21(1):13-19.


https://www.ihcworld.com/_protocols/special_stains/h%26e_ellis.htm

https://www.ihcworld.com/_protocols/special_stains/h%26e_ellis.htm

13

Lestari, D., Sukandar, E. Y. dan Fidrianny, I., 2015. Anredera cordifolia Leaves Extract as

Antihyperlipidemia and Endothelial Fat Content Reducer in Male Wistar Rat.

International Journal of Pharmaceutical and Clinical Research., 7(6), 435-439.

Meilawaty, Z., 2013. Efek Ekstrak Daun Singkong (Manihot utilissima) Terhadap Ekspresi

COX-2 pada Monosit yang Dipapar LPS E.coli. Dental Journal., 46 (4), 196-201.

Meliala, L., dan Pinzon, R., 2007. Breakthrough in Management of Acute Pain. Dexa Media

Jurnal Kedokteran dan Farmasi., 4(20), 151-155.

Miladiyah, I., dan Prabowo, B. R., 2012. Ethanolic Extract of Anredera cordifolia (Ten.)

Steenis Leaves Improved Wound Healing in Guinea Pigs. Universa Medicina.,

31(1), 4-9.

Morris, C. J., 2003. Carragenin Induced Paw Edema in The Rat An Mouse Inflammation

Protocols. Method in Molecular Biology., 2, 115-122.

Rathee, P., Chaudhary, H., Rathee, S., Rathee, D., Kumar, V., Kohli, K., 2009. Mechanism

of Action of Flavonoids as Anti-inflammatory Agents: A Review. Bentham Science,

8, 229-235.

Saifudin, A., 2014. Senyawa Alam Metabolit Sekunder Teori, Konsep, dan Teknik

Pemurnian. Edisi ke-1, Deepublish Publisher, Yogyakarta, 46.

Sarker, S. A., Latif, Z., dan Gray, A. I., 2006. Natural Products Isolation. Edisi ke-2,

Humana Press, New Jersey, 32.

Selawa, W., Runtuwene, M. R. J., dan Citraningtyas, G., 2013. Kandungan Flavonoid dan

Kapasitas Antioksidan Total Ekstrak Etanol Daun Binahong (Anredera cordifolia

(Ten.) Steenis). Pharmacon., 2(1), 18-22.

Syamsuni, H., 2006. Farmasetika Dasar dan Hitungan Farmasi. Penerbit Buku Kedokteran

EGC, Jakarta, 102.

Utami, R. H. T., 2015. Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Trengguli (Cassia

fistula L.) secara Topikal terhadap Neutrofil dan Siklooksigenase-2 (COX-2) pada

Mencit Terinduksi Karagenin, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma,

Yogyakarta, 48-50.

Vezza, T., Rodriguez-Nogales, A., Algieri, F., Utrilla, M. P., Rodriguez-Cabezas, M. E.,

Galvez, J., 2016. Flavonoids in Inflammatory Bowel Disease: A Review. Nutrient,

8, 211.

Vogel, H.G., 2002. Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays. Springer,

German, 1047-1109.

Winarsi, H., 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Kanisius, Yogyakarta, 186.

Yanhendri, S. W. Y., 2012. Berbagai Bentuk Sediaan Topikal dalam Dermatologi. CDK-

194., 39 (6), 423-430.


14

LAMPIRAN


15

Lampiran 1. Hewan uji yang digunakan dalam penelitian

Gambar 4. Mencit betina galur

Swiss

Gambar 5. Kulit punggung mencit

setelah dilakukan pencukuran


terinduksi karagenin


yang diberi ekstrak etanol daun

binahong


16

Lampiran 2. Pemotongan kulit untuk histopatologi

Gambar 8. Pemotongan kulit punggung

mencit

Gambar 9. Pengawetan kulit mencit

dengan formalin 10%

Lampiran 3. Alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian

Gambar 10. Tanaman binahong Gambar 11. Daun binahong


17

Gambar 12. Biocream® sebagai kontrol

Biocream® dan basis ekstrak

Gambar 13. Serbuk karagenin yang

digunakan dalam penelitian

Gambar 14. Ekstrak etanol daun binahong

yang dicampurkan dalam basis Biocream®

Gambar 15. Spuit injeksi yang digunakan

dalam penelitian


18

Gambar 16. Rotary Evaporator

Gambar 17. Mikroskop cahaya (Olympus® CX21) yang digunakan dalam pengamatan


19

Lampiran 4. Hasil determinasi tanaman daun binahong


20

Lampiran 5. Surat ethical clearence


21

Lampiran 6. Surat pengesahan data statistik


22

Lampiran 7. Hasil analisis statistik perhitungan rata-rata jumlah sel-sel

neutrofil pada masing-masing kelompok


23

Keterangan:

EEDB : Ekstrak Etanol Daun Binahong


24


pada jumlah neutrofil

Lampiran 9. Hasil pengujian One Way ANOVA jumlah neutrofil


25

Lampiran 10. Hasil pengujian uji Post-Hoc dengan uji Scheffe pada jumlah

neutrofil


26

Lampiran 11. Hasil analisis statistik perhitungan rata-rata persen ekspresi

COX-2 pada masing-masing kelompok


27


28


pada persen ekspresi COX-2

Lampiran 13. Hasil pengujian One Way ANOVA persen ekspresi COX-2


29

Lampiran 14. Hasil pengujian uji Post-Hoct dengan uji Tamhane pada persen

ekspresi COX-2


30

Biografi Penulis

Penulis skripsi dengan judul “Uji Efek

Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Daun Binahong

(Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) Terhadap Jumlah

Neutrofil dan Ekspresi Siklooksigenase-2 pada

Punggung Mencit Terinduksi Karagenin” memiliki

nama lengkap Emerentio Renola, merupakan anak

pertama dari keluarga Bapak Laurentius Harianja dan

Ibu Lodefica Rumiyanti. Penulis lahir di Jakarta pada

tanggal 8 April 1995. Pendidikan formal yang telah

ditempuh yaitu mengawali masa pendidikan di TK Santo Lukas Jakarta (1999-

2001), kemudian melanjutkan pendidikan Sekolah Dasar (SD) di Santo Lukas

Jakarta (2001) dan melanjutkan studi di SD Marsudirini Bekasi (2002-2007).

Pendidikan Sekolah Menengah Pertama (SMP) di SMP Marsudirini Bekasi (2007-

2010), kemudian melanjutkan pendidikan tingkat menengah atas di SMA

Marsudirini Bekasi (2010-2013). Penulis kemudian melanjutkan pendidikan

sarjana farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada

tahun 2013.

Selama masa studi, penulis pernah bergabung dalam kepengurusan

organisasi Jaringan Mahasiswa Kesehatan Indonesia (JMKI) periode 2014/2015

hingga 2015/2016. Selain itu penulis juga pernah mengikuti beberapa kepanitiaan

seperti menjadi Divisi Dekorasi Desa Mitra I (2015), Divisi Acara Pharmacy 3On3

(2014 dan 2015) dan Divisi Humas Tiga Hari Temu Akrab Farmasi (2014 dan

2015).


uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol daun ... · 13. para sahabat “kos arini 16 c”,...

Documents