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Umgang mit neuen Anforderungen in der amtlichen Rückstandsanalytik auf pharmakologisch wirksame Stoffe
Vereinbarkeit von Validierung und Routine-Analytik
Dr. Alexandra HütterothFB II-2 Rückstandsanalytik/Dioxine
Futtermittel
• Abteilung II Rückstandsanalytik| Kosmetika | Bedarfsgegenstände | Futtermittel
• Analytik von Kontaminanten, Dioxinen und PCB, natürlichen Toxinen
• Rückstande von Pflanzenschutzmitteln und von Stoffen mit pharmakologischer Wirkung
• Obst | Gemüse | Pilze und Pilzerzeugnisse | Getreide
• Bedarfsgegenstande | Kosmetika | Tabak
• Futtermittel | Düngemittel
• Pflanzenschutz | Landwirtschaftliche Fragestellungen
• Chemikalien- und Gefahrstoffrecht
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LLBB Abteilung II und FB II-2 in FF(O)
Mitarbeiter im LLBB
5
Standort Mitarbeiter
LLBB Alle Standorte 520
Standorte in Frankfurt (Oder) 120
Standort Frankfurt (Oder) GNS 84
Fachbereich II-2 Rückstandsanalytik 27
Umgang mit neuen Anforderungen in der amtlichen Rückstandsanalytik auf pharmakologisch wirksame Stoffe
Vereinbarkeit von Validierung und Routine-Analytik
Dr. Alexandra HütterothFB II-2 Rückstandsanalytik/Dioxine
Gliederung
• Rückstandsanalytik auf pharmakologisch wirksame Stoffe im amtlichen Routinelabor
• Nationaler Rückstandskontrollplan
• Matrix/Analyt-Kombinationen
• Analytische Anforderungen gemäß CD 2002/657/EG
• Umsetzung im Laboralltag
• Umgang mit neuen Anforderungen
• Herausforderungen von VDRA in Ghent
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Pharmakologisch wirksame Stoffe (PWS)
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z.B. Impfstoffe, Hormone
z.B. Antibiotika
z.B. NSAIDs, Kortikosteroide
z.B. Kokzidiostatika, Anthelminika
Nationaler RückstandsKontrollPlan NRKP
• Richtlinie 96/23 (EG)
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von: Lebenden Tieren
• Ihren festen und flüssigen Ausscheidungen
• Tiergewebe
• Tierischen Erzeugnissen
• Futtermitteln
• Trinkwasser
Matrizes und Analyten in FF(O)
Spezies Matrix Analytgruppen
Antibiotika-Screening
Fisch/Shrimps Eier Makrolide
Geflügel Fett ß-Lactame-Antibiotika
Kaninchen Futtermittel Sulfonamide
Pferd Leber Tetracycline
Rind/Kuh/Kalb Milch Chinolone
Schaf/Lamm Muskel Lincosamide / Pleuromutiline
Schwein/Ferkel Niere Phenylsulfone
Wild/Zuchtwild Plasma/Blut Diaminopyrimidin-Derivate
Ziege Tränkewasser Aminoglykoside
Urin Benzimidazole
Amphenicole (CAP)
Hormone
ß-Agonisten
Nitrofurane
Nitroimidazole
NSAID
Kokzidiostatika
Dioxine
Org. Phosphorverbindungen
chemische Elemente
Triphenylmethanfarbstoffe12
© A. Hütteroth
© A. Hütteroth
© A. Hütteroth
© A. Hütteroth
Analytische Anforderungen
• Gesetzlich geregelte Rückstandshöchstmengen
• MRLs - Maximum Residue Level
• MRPLs - Maximim Residue Performance Level
• Für Methoden zur Umsetzung der RL 96/23 (EG)
Validierung nach CD 2002/657/EG Entscheidungsgrenze cc-alpha
Erfassungsvermögen cc-beta
Richtigkeit/Wiederfindung
Präzision (Wiederholbarkeit)
Selektivität/Spezifität
Robustheit/Stabilität
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CD 2002/657/EG
Validierungsstudie
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Bestätigungsvalidierung nach CD 2002 / 657 EG
Screeningvalidierungnach CRL Guideline 20/1/2010
Planung/Auswertung Intervall von QuoData Excel Tabelle
Runs 8 20 (falls CC 50% MRL)
Konz. Stufen 4 (0,5x; 1x; 1,5x; 2xMRL) 2 (0,5x; 0,75xMRL)
Kalibrierung 4 (0,4x; 1x; 1,5x; 2,5x MRL) ohne
Blank 1 1
Proben/Run 9 3
Summe Proben 72 60 (falls CC 0,5xMRL)
Ergebnisse CC;CC;WDF; RSD; Selekt.; Einflussfaktoren/Robustheit
CC; Selektivität/Spezifität
Positiver Befund abgesichertes Ergebnis zusätzliche Absicherung durch Bestätigungsmethode
Laboralltag im Labor für TAM-Rückstände
• Überwiegend LC-MSMS-Methoden
• Überwiegend Validierung als Be-stätigungsmetode
• Routinemessung von ca. 3000 Probenmessungen/Jahr
• Davon 23 Absicherungen Überwiegend Hormone (natürliches Vorkommen)
Futtermittelverschleppung
• Lediglich 1 Beanstandung in 2017: Leuco-Malachitgrün Befund
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Voraussetzungen:
Leistungsstarke Methoden
Effektive Methodenerweiterungen
Umgang mit neuen Anforderungen
• Screeningvalidierung aus Routinemessungen
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Voraussetzungen:
- Erweiterung einer validierten Methode
- ohne zusätzliche Methodenoptimierung
- ja/nein Entscheidung ausreichend
- ausreichend Vorlaufzeit
Durchführung:
Bei neuen Analyten:
- Routine-Dotierlösung um Analyt erweitern
oder bei neuer Matrix
- zusätzliche Matrix integrieren
oder bei Senkung der Höchstmenge
- zusätzlichen Kali-Punkt integrieren
- Routineaufarbeitung:
3-Pkt-Matrixkali; Blankproben
Ergebnisse: 20 3-Pkt-Matrixkalibrierungen Kal 1 ≤ 0,5 x MRL (RC) Positivkontrolle20 Blankproben Negativkontrolle
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Beispiel zusätzliche Makrolide
• Seit 2016 neu im NRKP: Tildipirosin und Gamithromycin Kalibrierung 0,4x; 2x und 4xMRL; Blank
0
50
100
150
200
250
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19
Re
spo
nse
Gamithromycin
Blank Dotierung - 0,4xMRL
Blank-Maximum
0
50
100
150
200
250
300
350
400
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19R
esp
on
se
Tildipirosin
Blank Dotierung - 0,4xMRL
Blank-Maximum
18
Beispiel beta-Agonisten
• Neue Beta-Agonisten: Salmeterol, Phenylethanolamin A Recommended Concentrations 2 µg/kg Leber
0
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
0,07
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1011121314151617181920
Re
spo
nse
Phenylethanolamin A
Blank Dotierung - 0,1 x RC
Blank-Maximum
0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,1
0,12
0,14
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1011121314151617181920
Re
spo
nse
Salmeterol
Blank Dotierung - 0,1 x RC
Blank-Maximum
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Beispiel beta-Agonisten
• Verbotene Stoffe - so niedrig wie analytisch möglich RC Recommended Concentration
• Derzeit Quattro Premier XE Konzentrationen:0,2 – 10 µg/kg in Leber
• EURL überprüft nach Stand der Technik auf
Senkung umFaktor 2,5 – 50je nach Analyt und Matrix
Quattro Premier XE – Stand der Technik ???
Herausforderungen vom VDRA in Ghent
• Antibiotika Screening – Resistenzproblematik
@ kleine Konzentrationen (<< ½ MRL)
@ weites Analytspektrum ( z.B. AMG, Polymyxine, Penicilline)
@ Umweltmatrizes (z.B. Gülle, Böden)
@ unbekannte Antibiotika
@ Kopplung antibiotischer Effekt (Bioassay-LC/MSMS)
• Rückstände in lebenden Tieren
@ in-vivo SPME im Gewebe
@ dried blood spot
• Metaboliten Screening
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Zusammenfassung
• Pharmakologisch wirksame Stoffe (PWS) werden nach dem nationalen Rückstandskontrollplan (NRKP) entlang der gesamten Lebensmittelkette untersucht.
• Die Anforderungen an die Analytik sind mit CD 2002/657/EG festgelegt
• Zugelassen Arzneimittel werden am MRL validiert
• Verbotene Stoffe werden so niedrig wie analytisch möglich validiert
• Ursachen für Methodenerweiterungen sind: neue Analyte, Absenkung der Höchstmenge bzw. der Recomended Concentration,
neue Matrix
• Für bestehende Methoden bietet sich zunächst eine Screening-validierung im Routinebetrieb an
• Weitere Herausforderungen zeichnen sich unter anderem auf dem Gebiet der Umweltanalytik, dem unbekannten-Screening und der Probengenerierung im lebenden Bestand auf
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