universidad autÓnoma de nuevo leÓnhelminto.inta.gob.ar/tesis/tesis m final elsa 2009.pdf · 2014....

1

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DETECCIÓN DE LOS CAMBIOS FENOTÍPICOS Y GENOTÍPICOS EN

PRODUCTOS DE RATAS LONG EVANS INFECTADAS CON Trichinella

spiralis Y TRATADAS CON ALBENDAZOL

Por: QFB. ELSA GABRIELA CHÁVEZ GUAJARDO.

Como requisito parcial para obtener el Grado de MAESTRÍA EN CIENCIAS Con

Especialidad En Microbiología.

Mayo del 2009

2




Comité de tesis

Dr. Mario Morales Vallarta

Director Interno de Tesis.

Dra. Ma. Alejandra Moreno García.

Director Externo de Tesis.

Dr. Feliciano Segovia Salinas.

Secretario.

Dra. Ma. De la Paz Tijerina.

Vocal.

3




Comité Académico de Maestría

Subdirector de Estudios de Posgrado

4

DEDICATORIA

Para los que cualquier palabra es insignificante por lo que representan:

A mis padres Lucia y Roberto.

A mis Hermanos y Hermanas: Oscar, Julio Cesar, Carla Alejandra, Alicia Elizabeth

y Abel

Ahora también a esas personitas que hacen entender que los momentos más difíciles no

lo son tanto:

A mis sobrinas: Marlene Deyanira, Itzel, Diniha Nayeli y Mitzya Alejandra.

A toda mi Familia.

Gracias por ser lo que son y estar cuando es necesario, pero como siempre gracias por

el apoyo y comprensión.

A quien me a dado el apoyo académico y más para dar este paso tan importante

A la Dra. en C. Alejandra Moreno García. Gracias por ser el ejemplo de trabajo a seguir.

A la Dra. en C. Claudia H. Maldonado Tapia. Gracias por el apoyo y recomendaciones para este trabajo, pero sobre todo gracias por la confianza y la

amistad que hicieron que este proceso fuera más agradable.

A mis Amigas Patricia, Araceli y Sofía. Gracias siempre por sus palabras de aliento.

5

AGRADECIMIENTOS.

Al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT) por el apoyo brindado

durante la realización de este trabajo beca registro no. 204729

A la Universidad Autónoma de Nuevo León y Autónoma de Zacatecas por permitirme

continuar con mi desarrollo académico.

Al Consejo Zacatecano de Ciencia y Tecnología, (COZCyT) gracias por el apoyo para

la divulgación de este trabajo.

A todos los docentes del Posgrado de la Facultad de ciencias Biológicas.

Al Dr. En C. Mario R. Morales Vallarta por la asesoría dedicada a este trabajo.

A la Dra. en C. María Porfiria Barron González por el tiempo y consejos brindados.

A la M. en BE. Gabriela Reveles y Al MVZ. Sergio Saldívar por la ayuda en el

desarrollo experimental de este trabajo. Gracias por el interés para llevar a buen

término este trabajo, por las atenciones y trabajo amistoso manifestado.

A la Dra. Elva Cortez y la Dra. Martha Dávila del Departamento de Genética del

Instituto de Investigación Biomédica del Noreste del Instituto Mexicano del Seguro

Social por el apoyo en la parte de citogenética de este trabajo.

Al Dr. en C. Braulio Lozano de la U. A. De Veterinaria y Zootecnia de la UAZ por el

apoyo en la parte de citogenética.

Al Dr. en C. Francisco Echevarria del INIFAP campus Calera y Al Dr. en C. Roberto

Mercado del departamento de ciencias exactas de la FCB por la asesoría en

bioestadística para este trabajo.

A todos aquellos que hicieron posible este trabajo gracias.

6

TABLA DE CONTENIDO.

Pagina

i. Dedicatoria y Agradecimientos. 1

ii. Tabla de contenido. 3

iii. Lista de figuras y tablas. 4

iv. NOMENCLATURA 7

1. RESUMEN

ABSTRACT.

8

9

2. JUSTIFICACIÓN. 10

3. INTRODUCCIÓN. 11

4. HIPÓTESIS. 13

5. OBJETIVOS. 13

4.1 Objetivo general. 13

4.2 Objetivos particulares. 13

6. ANTECEDENTES. 14

6.1 Características de Trichinella spiralis. 14

6.2 Ciclo vital de T. spiralis. 15

6.3 Cuadro clínico. 15

6.4 Epidemiología T. spiralis. 17

6.4.1 Mundial. 18

6.4.2 Nacional. 19

6.4.3 Local. 19

6.5 Tratamiento. 20

6.6 Albendazol. 21

6.7 Diagnóstico. 23

6.8 Características de los cromosomas. 24

6.8.1 Tipos de aberraciones cromosómicas. 25

6.9 Micronúcleos. 25

6.10 Características del modelo experimental. 26

6.10.1 Hígado. 27

6.10.2 Cuernos uterinos. 27

7. MÉTODOS. 27

8. RESULTADOS. 36

9. DISCUSIÓN. 60

10. CONCLUSIONES. 63

11. LITERATURA CITADA. 64

7

LISTA DE FIGURAS Y TABLAS.

Pagina.

Fig. 1. Ciclo vital del parásito Trichinella spiralis. 16

Fig. 2. Clasificación de cromosomas según la posición del centrómero. 24

Fig. 3. MIDD de suero de rata Long Evans sin líneas de precipitación. 36

Fig. 4. A) Frotis Vaginal de espermatozoides de rata Long Evans donde

se observan espermatozoides B) Rata control sana gestante con 11 crías.

37

Fig. 5. A) Cuernos uterinos con irrigación normal, B). Porción de Hígado

con su coloración normal.

37

Fig. 6. A) MIDD con líneas de precipitado característico de la reacción

Ag-Ac. B) LI obtenidas de digestión artificial. C) Compresión de tejido

donde se observan LI de T. spiralis.

38

Fig. 7. A) Parte interna de cuerno uterino donde se observan

protuberancias. B) LI en músculo de rata con 1día de Tx con ABZ.

39

Fig. 8 A) Crías del grupo con 3 días de Tx de ABZ, B) Cría del grupo

con 3 días de Tx de ABZ, donde se observan alteraciones en el tamaño de

cabeza y extremidades.

40

Fig. 9. A). Parte interna de un extremo de cuerno uterino con algunos

puntos amarillos observado con estereoscopio. B) Cuernos uterinos con

poca irrigación.

40

Fig. 10. Cuernos uterinos del grupo con 5 días de Tx observándose con

exceso de grasa y diferencias en tamaño.

41

Fig. 11. A) Crías de ratas con siete días de Tx. B) Cuernos uterinos

donde se observan mórulas no viables para el desarrollo. C) Cuernos

uterinos con ausencia total de irrigación. D) Extremo de cuerno uterino

observado con microscopio estereoscópico donde observamos mórulas

no viables para el desarrollo así como algunos puntos amarillos que

corresponden a productos no viables.

42

8

Fig. 12. A) y B). Cuernos uterinos obtenidos de ratas con 15 días de Tx.

C) Imagen posterior de rata muerta con alteraciones en columna

vertebral. D) Imagen ventral de la rata donde se observa ausencia de

órganos vitales tanto en caja torácica como cavidad abdominal.

43

Fig. 13. A) Corte de cuernos uterinos de rata sana teñida con

Hematoxilina –Eosina (H-E) donde se observan folículos ováricos bien

definidos así como el espacio entre estos. B) Tejido de cuernos uterinos

de una rata con un día de Tx con ABZ, se observa el agrandamiento de

los folículos ováricos se empieza a notar también un espaciado anormal

entre el tejido, C) Tejido con tres días de tratamiento observamos la

degeneración de los folículos ováricos e inicia la aparición de fibras de

colágena, D) Tejido de folículos ováricos de rata sometida a 5 días de

tratamiento, donde se nota la degeneración completa de los folículos

ováricos.

49

Fig. 14. A) Corte de tejido control de cuerno uterino rata sana, B). Tejido

de rata sometida a 7 días de tratamiento, C). Tejido de rata con 10 días de

tratamiento, D). Tejido de rata sometida a 15 días de tratamiento.

50

Fig. 15. A) Corte de hígado de rata sana teñido con Hematoxilina

Eosina. B) Tejido de hígado de rata sometida a un día de Tx con ABZ C)

Tejido de rata con 3 días de Tx con ABZ, D). Tejido de hígado de rata

sometida a 5 días Tx con ABZ.

51

Fig. 16. A) Corte de hígado de rata control sano teñido con hematoxilina

eosina, B) Tejido de rata sometida a 7 días de Tx con ABZ, C) Tejido de

rata sometida a 10 días de Tx con ABZ, D) Tejido de rata sometida a 15

días de Tx con ABZ.

52

Fig. 17. Gel de poliacrilamida teñido con azul de Coomassie. 54

Fig. 18. Inmunoelectrotransferencia donde se puede identificar el triplete

característico de 43, 45 y 48kD que indica la infección de T. spiralis.

55

9

Fig. 19. Inmunoelectrotransferencia que corresponde a los grupos

tratados con Albendazol.

56

Fig. 20. Cromosomas de una rata normal. 57

Fig. 21. Eritrocitos normocrómaticos y eritrocitos policromáticos, así

como también micronúcleo.

58

Tabla I. Cuadro Clínico de cada una de las fases. 17

Tabla II. Resultados generales. 43

Tabla III. Estadísticas Descriptivas. 44

Tabla IV. Rangos promedio. 46

Tabla V. Resultado de la prueba Kruskal-Wallis. Para la comparación

entre el grupo 1 y los tratamientos.

46

Tabla VI. Resultados de la prueba de Mann Whitney. 46

Tabla VII. Rangos promedio. 47

Tabla VIII. Resultado de la prueba Kruskal-Wallis. Para la comparación

entre el grupo dos y los tratamientos.

47

Tabla IX. Alteraciones histológicas en hígado y aparato reproductor en

ratas tratadas con ABZ.

53

Tabla X. Micronúcleos en crías de ratas Long Evans por mil células

Policromáticas.

58

Tabla XI. Proporción de eritrocitos normocromáticos sobre

policromáticos, en crías de rata Long Evans tratadas con ABZ.

59

10

NOMENCLATURA

ABZ Albendazol

Ac anticuerpos

Ag Antígenos

AST antígeno soluble total

ATP adenosin tri fosfato

ºC Grados Celsius

CI control infectado

CF control fecundado

CIF control infectado fecundado

cm Centímetros

CP Compresión en placa

CS control sano

DA Digestión artificial

EGPA electroforesis en gel de poliacrilamida

ELISA ensayo de inmuno adsorción ligado a enzima

g Gramos

H Horas

Kg Kilogramo

LI larva infectante

LRN larva recién nacida

L1-L4 Fases de desarrollo de la larva

M Concentración molar

mg Miligramos

µg Microgramos

MIDD Micro Inmuno difusión doble

µl Microlitros

NC Nitrocelulosa

nm Nanómetros

PBS Solución buffer de fosfatos

PI Posterior a la infección

rpm Revoluciones por minuto

Tx Tratamiento

SDS Dodesil sulfato de sodio

SNC Sistema nervioso central

11

1. RESUMEN.

El nemátodo parásito Trichinella spiralis es el agente causal de la Trichinellosis.

En México la causa principal de infección se asocia con el consumo de carne de

cerdo cruda ó mal cocida infectada con la larva infectante (LI) de T. spiralis. El

objetivo de este estudio fue detectar los cambios fenotípicos y genotípicos en

productos de ratas Long Evans infectas con T. spiralis y tratadas con Albendazol.

Para el desarrollo experimental utilizamos, ratas Long Evans en lotes divididos en

cinco grupos, cuatro de los cuales se formaron de 10 ratas cada uno que

correspondieron a los grupos control (control sano CS, control fecundado CF, control

infectado CI, control infectado y fecundado CIF) y un grupo subdividido en seis

grupos de diez ratas cada uno, con tratamiento de albendazol variando de uno a

catorce días de tratamiento. Los grupos fueron analizados de la siguiente manera,

para detectar el estro se realizaron frotis vaginales, a los grupos que correspondió se

les tomó muestra sanguínea para detectar la presencia de los parásitos mediante

técnicas indirectas y mediante técnicas directas para los animales sacrificados. Los

cambios fenotípicos en las crías obtenidas fueron observados a detalle por

microscopio estereoscópico, así como registro de talla, peso, número de crías

obtenidas en los partos. Para analizar el tratamiento en las hembras utilizamos la

técnica de Hematoxilina-Eosina en tejido de hígado y aparato reproductor, para el

genotipo se utilizó la técnica de micronúcleos. Los resultados indican que la

infección con Trichinella spiralis incide directamente en el número de crías

obtenidas, así como el tratamiento, el uso de el médicamento por más de tres días

produce alteraciones que impiden la supervivencia de las crías, a las madres les

produce alteraciones en hígado y aparato reproductor por lo que no se recomienda el

uso prolongado, el tratamiento por tres días es efectivo si la infección es detectada en

fase temprana (intestinal), con respecto al genotipo no se obtuvieron datos que

permitan dar resultados concretos.

12

ABSTRACT.

The nematode Trichinella spiralis is the causal agent of Trichinellosis. In Mexico

the main cause of infection is associated with the consumption of meat of pig

infected with infected larva (LI) of T. spiralis which is consumed crude or bad

cooked. The objective of this work was to detect the phenotype and genotypic

changes in young animals of Long Evans rats infected with T. spiralis and dealt with

Albendazol. For the experimental development we used Long Evans rats divided in

five groups, four of which were formed of 10 rats which corresponded to the control

groups (healthy control CS, fertilized control CF, infected control CI, control

infected and fertilized CIF.) and a group subdivided in six groups of ten rats each

one, with treatment of Albendazol treatment varying of one to fourteen days. The

groups were analyzed of the following way: to detect estro were realized vaginal rub,

to the groups that corresponded were bleed to detect the presence of the parasite by

indirect techniques, and direct technical were used for sacrificed animal. The

phenotypic changes in the young animals obtained were observed through detailed

examination by stereoscopic microscope. Stature, weight, number of young animals

obtained in the births was also registred. In order to analyze the treatment in the

females we used Hematoxilina-Eosin stain technique for liver and reproductive

apparatus. For the genotype we used the micronucleus technique. Results of this

work show that infection with Trichinella spiralis affects directly the number of

young animals obtained, as well as the treatment, the use of the medicament for more

of three days produces alterations that prevent the survival of the young animals, to

the adult rats produces alterations in liver and reproductive apparatus, then it’s not

recommended the prolonged use, if the infection is detected in early phase

(intestinal), the treatment by three days is effective with respect to the genotype do

not have results that allow to give concrete results.

13

2. JUSTIFICACIÓN.

La Trichinellosis es una enfermedad parasitaria que varios autores reportan como una

zoonosis reemergente ya que se ha observado un aumento en los casos tanto en

animales como en humanos, en México varios estudios demuestran la presencia

endémica de la enfermedad sin embargo por la poca información sobre el cuadro

clínico no se realiza el diagnostico adecuado y cuando se demuestra la presencia de

la enfermedad, los esquemas de tratamiento son variados debido a la poca

información o desconocimiento; sin embargo varios estudios (experimentales)

realizados sugieren que el medicamento que ha mostrado ser efectivo es Albendazol

a dosis de 15mg por kg de peso por un periodo de 15 días, en un caso clínico

reportan que el tratamiento contra la parasitosis en una mujer embarazada termino

con el aborto del producto, mencionan no saber a que se debió, si al efecto del

parasito sobre el feto o el efecto del medicamento, debido a los tres factores

mencionados: parasito considerado endémico en México, Albendazol como

medicamento efectivo con la dosis y el periodo de tiempo antes mencionado aunado

al desconocimiento de los efectos que el medicamento pueda causar durante este

periodo de administración consideramos importante el estudio de este esquema de

tratamiento bajo condiciones de gestación.

14

3. INTRODUCCIÓN.

Uno de los principales agentes causales de la enfermedad parasitaria llamada

Trichinellosis es el gusano nemátodo Trichinella spirali., este parásito afecta a una

gran variedad de mamíferos principalmente carnívoros, el ser humano también es

susceptible de contraer la infección y la causa principal es el consumo de carne cruda

o cocida de manera deficiente procedente de animales infectados con el parásito. Esta

parasitosis es considerada zoonosis endémica y de distribución mundial, en México

la causa principal de infección se asocia con el consumo de carne de cerdo infectada

con la larva infectante (LI) de T. spiralis. El Estado de Zacatecas es considerado

zona endémica desde 1976 (Fragoso et al., 1981) y en los últimos años se ha

reportado un aumento de esta enfermedad a nivel nacional y mundial (Moreno et al.,

2001). Aunque la infección típicamente cursa con dolor abdominal, diarrea, fiebre,

mialgias, artralgias, anorexia y edema periorbital, su intensidad suele ser leve o

moderada (Walsh et al., 2001). Debido a la aparente baja prevalencia de esta

parasitosis y a la también aparente inespecificidad y escasa importancia clínica de los

síntomas y signos mencionados, en un número no cuantificado de casos que se llegan

a presentar, el diagnóstico erroneamente se orienta a una fiebre tifoidea o algún otro

padecimiento más común; o bien, el paciente no acude a consulta y por tanto, la

infección no es diagnosticada. Prueba de ello podría ser el hecho de que muchas

infecciones causadas por T. spiralis solo han podido ser detectadas en estudios post

mortem. Esto sugiere que la información actual de la Trichinellosis humana no

refleja la verdadera situación epidemiológica de esta enfermedad parasitaria en

México (De la Rosa et al., 2003) de aquí la importancia de seguir estudiando esta

parasitosis y en este caso en particular se analiza el tratamiento con un antihelmíntico

común como es el Albendazol a diferentes tiempos de tratamiento, hasta el

15

momento considerado uno de los más efectivos contra la parasitosis, sin embargo con

efectos adversos para la madre y el producto o cría hasta ahora no conocidos en su

totalidad. Consideramos analizar los efectos que el tratamiento pueda causar, debido

a los períodos de tiempo de tratamiento y concentración del antihelmíntico hasta el

momento recomendados, pero que a la vez los daños orgánicos que ocurren son

desconocidos.

16

4. HIPÓTESIS:

El tratamiento con Albendazol en ratas Long Evans gestantes produce

alteraciones fenotípicas y genotípicas a la rata gestante y a sus crías.

5. OBJETIVOS.

5.1 Objetivo General:

Demostrar que el tratamiento con Albendazol en ratas Long Evans produce

alteraciones fenotípicas y genotípicas tanto a la rata gestante como a sus crías.

5.2 Objetivos Específicos:

1.- Sincronizar a los animales en etapa gestante

2.- Reproducir el ciclo vital de T. spiralis en animales gestantes.

3.- Evaluar las alteraciones fenotípicas y genotípicas de los productos de madres

infectadas con T. spiralis y tratadas con Albendazol.

4.- Evaluar el efecto del tratamiento con Albendazol en rata Long Evans infectados

con T. spiralis.

5.- Evaluar las alteraciones histológicas en las madres infectadas con T. spiralis y

tratadas con Albendazol.

6.- Evaluar la respuesta inmune en madres infectadas con T. spiralis y tratadas con

Albendazol.

17

6. ANTECEDENTES

6.1 Características de Trichinella spiralis.

T. spiralis, se caracteriza por la presencia del esticosoma, el cual es un órgano

característico del estadio juvenil del parásito. Cada esticosito contiene antígenos (Ag)

que reaccionan con los anticuerpos (Ac) presentes en el suero del huésped

(Despommier & Muller, 1976). Hasta el momento se han identificado 11 especies o

genotipos que comprenden el género Trichinella, las cuales se clasifican en dos

grupos con características diferentes las cuales consisten principalmente en las que

presentan capsula y las que no la presentan; (Pozio et al., 2005). El que presenta

cápsula se refiere al desarrollo de una capa de colágena alrededor de la LI de T.

spiralis. Las especies con cápsula, tienen características básicas con relación a la

adquisición de nutrientes, exclusión de desechos, la estimulación antigénica de la

respuesta inmune del huésped y la transcripción de genes regulatorios, que activan la

producción de colágena tipo IV y VI (Pozio et al., 2001).

Superfamilia: Trichinellidae

Género: Trichinella

Especie: spiralis

britovi

nelsoni

nativa

murelli

pseudospiralis

papuae

zimbabwensis

T6

T8

T9

18

6.2 Ciclo Vital.

Los principales huéspedes domésticos de T. spiralis son la rata, el cerdo y el hombre.

El hombre adquiere la infección a través de la ingestión de carne de cerdo cruda o

insuficientemente cocida, con LI de T. spiralis. El ciclo vital (Fig. 1) se da en un solo

huésped donde se desarrollan los diferentes estadios del parasito. Cuando la carne es

consumida los jugos digestivos digieren la carne y las LI se liberan en intestino

delgado, penetran la mucosa intestinal y sufren tres mudas de cutícula hasta

convertirse en parásitos adultos, se diferencian en hembras y machos adultos unas 30

horas después de la infección. La cópula ocurre con los nemátodos contenidos en la

mucosa intestinal (en el lumen intestinal); Los machos son eliminados por una

reacción de hipersensibilidad inmediata y automática de la motilidad intestinal por el

huésped luego de cumplida su función fértil. Las hembras fecundadas se localizan en

el interior de la mucosa del duodeno, yeyuno e ileón y éstas son eliminadas poco

después de la liberación de las LRN. Esta expulsión se debe en parte a linfocitos Th2

e IgE. Entre el tercero y el quinto día, comienza la postura de LI. Cada hembra

coloca alrededor de 60-80 LRN. (Reveles 1999). Estas larvas miden entre 80 y 120µ,

se profundizan en la mucosa intestinal, penetran a través de los capilares linfáticos y

venosos y llegan a la circulación general, diseminándose por todo el organismo, pero

enquistándose sólo en la musculatura esquelética. Las larvas se localizan en el

interior de las fibras musculares, destruyéndolas parcialmente. Así se origina el

quiste larval, que mide entre 250 a 400 micras y que, en consecuencia, no es visible a

simple vista. Tiene un aspecto afilado o alargado (Reveles et al.1997).

19

Fig. 1. Ciclo vital del parásito T. spiralis. (Modificado por Chávez de

http://nih.go.kr/cyber-tropical/foods/pork/Trichinella-spiralis-detail.html). (Véase

descripción en el texto).

6.3 Cuadro Clínico.

La variabilidad y la intensidad de los síntomas de la Trichinellosis, dependen de

la carga parasitaria que afecte al individuo, la edad del paciente, sexo, estado

nutricional, estado hormonal, estado inmunológico (Alvarado et al., 1996) y tejido

invadido; además de la fase de la infección, también puede mimetizar muchos

síntomas clínicos lo que provoca hacer un mal diagnóstico pero hay datos tempranos

que alertan en el diagnóstico. Algunos de los síntomas característicos de la

músculo

DiseminaciónTejido

Ciclo Vital

LI

LRN

ADULTOS

LI

ADULTOS

músculo

DiseminaciónTejido

Ciclo Vital

músculo

DiseminaciónTejido

Ciclo Vital

LI

LRN

ADULTOS

LI

ADULTOS

20

Trichinellosis son diarrea y vómito, mialgias, edema facial, y eosinofilia, estos

síntomas pueden persistir hasta por dos meses después de la infección.

Tabla 1 Cuadro Clínico de cada una de las fases (Chávez et al., 2006).

6.4 Epidemiología

Se ha considerado a la Trichinellosis como una antropozoonósis entre los

carnívoros susceptibles que habitan en las regiones árticas y subárticas, de donde se

ha difundido por casi todo el mundo. La frecuencia varía según las regiones, siendo

mayores en términos generales, en las zonas templadas que en las tropicales; el

hombre se considera como un huésped accidental; la evolución del parásito, en

condiciones normales, termina cuando muere el huésped, excepto que un carnívoro

susceptible ingiera la carne parasitada.

En los últimos veinte años se han reafirmado esfuerzos por el control de Trichinella

spiralis en varios países del mundo afectados por esta parasitosis (Burell, 2000).

Algunas autoridades consideran que la Trichinellosis debe ser clasificada como una

21

enfermedad emergente/reemergente, particularmente debido al incremento en el

reporte del numero de casos de algunas áreas donde no se había presentado la

infección (Dupouy Camet, 2000). Los cambios en el ecosistema así como

socioeconómicos, la exportación de carnes procedente de países con deficiente

control sanitario contribuyen al aumento de la incidencia de la enfermedad (Pozio et

al., 2001).

6.4.1 Mundial

Se estima que once millones de personas en el mundo están infectas por

diferentes especies de Trichinella, siendo la más común la infección por T. spiralis

(Liu M. and Boireau P., 2002), se estima que en el período de 1991 a 1992 el 1.5%

de las infecciones relacionadas con alimentos fueron por Trichinellosis. (Dupouy-

Camet 2000). En Francia e Italia más de 3000 casos reportados de Trichinellosis

humana de 1975 al 2000 fue adquirida por el consumo de carne de caballo (France

ProMED-mail 2006). Los principales brotes reportados en 2007 se dieron en Francia,

Alemania (Schmiedel S. and Kramme S. 2007) y Rusia por el consumo de

salchichas y en 2007 se dieron casos en Suiza y España por el genero de T. britovi

(Gallardo et al., 2007). En 2007 también se reportaron 214 casos de Trichinellosis en

Polonia debido al consumo de salchichas de carne de cerdo contaminadas (McHugh

G. et al., 2007).

En America Latina brotes importantes se han identificado principalmente en

Argentina donde en 2005 se reportaron 80 casos de Trichinellosis a causa del

consumo de embutidos procedentes de cerdos infectados y los llamados

chanchinados que son una variedad de salchicha típica del lugar (Trichinellosis -

Argentina [La Plata] ProMED-mail 2005). Además se reporta una prevalencia de la

22

Trichineliosis del 2000 al 2002 del 5.6% en cerdos y 15.4% en roedores (Larrieu E et

al., 2004). En lo que se refiere a el continente Asiático se da por el consumo de carne

de perro y cerdo y el 94.5% de los casos es debido al consumo de este último (Shiota

T et al., 1999) el primer brote registrado debido al consumo de carne de perro se da

en 1974 (Cui J, and Wang ZQ 2001), la prevalencia humana de Trichinellosis en la

provincia de Eryuan Country en suero en 2007 fue del 58.8% del total de sueros

analizados (Steinmann et al., 2007).

6.4.2 Nacional

En cuanto a la situación actual en México en estudios hechos en carne de cerdo, en

variedades de chorizo y chuleta se reporta una positividad a infección por T. spiralis

en el 40% de muestras obtenidas de 10 Estados de la Republica Mexicana, además

se reportan casos de T. spiralis en muestras de carne obtenidas en Estados de la

Republica donde no se habían reportado, tal es el caso del Edo. de México, Hidalgo,

Michoacán y Morelos, donde la frecuencia es muy similar reportando 3.4% y 4% en

muestras analizadas de chuletas y chorizo respectivamente (Tay et al., 2004). Se

reporta 3.75% de prevalencia en carne de caballo destinada a consumo humano lo

que por técnicas de digestión artificial de músculo estriado y reacción en cadena de

polimerasa que se consideran de alta sensibilidad, por lo que se concluye que la

frecuencia de T. spiralis fue alta con algunas diferencias en la carga parasitaria

(Jiménez C. et al., 2005).

6.4.3 Local Zacatecas.

En 1976, se diagnosticó el primer caso de Trichinellosis en Zacatecas, (Martínez

Marañon et al 1979), el primer brote fue reportado por la clínica hospital del Instituto

Mexicano del Seguro Social (IMSS) (Díaz Saladaña et al., 1979). Este ocurrió en el

23

municipio de Jerez (Fragoso Uribe et al 1982) hasta 1990 se reportaron 21 brotes en

humanos en el estado (Cabral Soto et al 1990), los municipio donde se detectaron los

brotes fueron Zacatecas, Pánuco, Villanueva, Valparaíso, Jerez, Jalpa y Guadalupe.

Berumen et al., en 2002 reporta una prevalencia del 5.82% en un estudio realizado en

Perros “domésticos” de la Ciudad de Zacatecas, y al encontrarse el parásito en

perros, deducen que estos adquirieron la enfermedad a partir del consumo de de

desperdicios cárnicos crudos o inadecuadamente cocinados producidos por los

habitantes o bien por el consumo de restos de animales en vía pública o en rellenos

sanitarios (Berumen et al., 2002).

6.5 Tratamiento

En humanos no existen medicamentos totalmente eficaces, sin embargo

generalmente los fármacos utilizados son los del grupo de los Benzimidazoles. En

este grupo se incluye el mebendazol, albendazol y tiabendazol. (Anadon A. et al.,

2004). Estos fármacos producen inmovilización y muerte de los parásitos intestinales

susceptibles en forma lenta, por lo que la eliminación de los parásitos destruidos se

completa en varios días. Ocurre por inhibición de la polimerización de los

microtúbulos del parásito como consecuencia de la unión del fármaco a la beta-

tubulina. Este efecto tóxico para los parásitos ocurre en concentraciones muy

inferiores a las necesarias para unirse a la beta-tubulina de las células de los

mamíferos. La resistencia de los parásitos a estos agentes se relaciona con

mutaciones que determinan la pérdida de la afinidad del fármaco a la beta-tubulina.

(Phillips et al., 2006). Otros mecanismos se relacionan con cambios bioquímicos en

los parásitos como la inhibición de la fumarato reductasa de las mitocondrias, o

reducción de moléculas esenciales y desacople de la fosforilación oxidativa.

24

(Formulario Terapéutico Nacional 2005). Pueden ser utilizados en niños menores de

dos años de edad cuando existe un nivel importante de parasitismo acompañado de

desnutrición sobre todo infantil (Davis A, et al., 1986). Los fármacos antihelmínticos

actúan solo en formas adultas de nemátodos a nivel gastrointestinal, las formas

larvarias de T. spiralis no se ven afectadas por los tratamientos que actúan a nivel

gastrointestinal. Se menciona que el albendazol y el mebendazol actúan contra las

formas intestinales de T. spiralis que surgen en etapa temprana de la infección

(Goodman y Guilman, 2002). Marinculic y colaboradores en el 2001 refieren que

el tratamiento con Flubendazol (FBZ), en su ensayo en adultos es efectivo 100% con

dosis de 8 mg/kg y 16 mg/kg por 6 y 14 días después de la infección por T. spiralis.

También se señala que el Flubendazol es más efectivo que el Albendazol, estudio

echo en ratón a dosis de 20 mg/kg por día por un periodo de 5 días para T. spiralis

en su fase adulta demostrando una efectividad de ABZ 46% Y FBZ 99.4% (Chung

et al., 2001). Pozio y colaboradores en el 2001 realizaron estudios con mebendazol

(MBZ) para el tratamiento contra la infección con T. spiralis, en fase de larva el

estudio fue realizado en ratones de laboratorio y humanos e indica que el MBZ ha

demostrando la efectividad contra la larva (L1 a L4) instaladas en el intestino

delgado lo cual corresponde a una infección de el primero hasta los 4 días

posteriores a la infección (PI), en adultos en intestino que corresponde a un período

de 5 a 28 días PI no es efectivo, se demostró también su eficacia en la fase sistémica

de la infección así como la ineficacia en la fase muscular.

6.6 Albendazol.

Es un antihelmíntico de amplio espectro, es un carbamato benzimidazol con efectos

antihelmínticos y antiprotozoarios frente a los parásitos tisulares e intestinales. El

25

albendazol muestra actividad larvicida, ovicida y vermicida, y ejerce el efecto

antihelmíntico inhibiendo la polimerización de la tubulina. (Katzung, 1998). Esto

causa la alteración del metabolismo del helminto, provocando cambios bioquímicos

en nemátodos sensibles incluyendo la disminución de energía disminuyendo sus

reservas de glucógeno y reduciendo la formación de Adenosín-tri fosfato (ATP),

produciendo la inmovilización y después la muerte del helminto. (Bennett A. and

Guyatt H. 2000).

La absorción del ABZ es variable después de haber sido ingerido, es metabolizado

rápidamente en el hígado, hasta la forma de sulfóxido de albendazol, su tiempo de

vida media es de 8 a 9 horas (Goodman y Guilman, 2002). A diferencia de los otros

benzimidazoles, el ABZ tiene pocos efectos adversos si se utiliza por poco tiempo (1

a 3 días), en tratamiento a largo plazo en ocasiones hay malestar abdominal, diarrea,

náusea, mareos y cefalea transitorios e incremento en las enzimas hepáticas

(Katzung, 2005).

Mecanismo de acción: Daña de forma selectiva los microtúbulos citoplasmáticos de

las células intestinales de los nematodos pero no del huesped, ocasionando la ruptura

de las células y la pérdida de funcionalidad secretora y absortiva. En consecuencia,

se produce una acumulación de sustancias secretoras en el aparato de Golgi del

parásito, disminuyendo la captación de glucosa y la depleción de los depósitos de

glucógeno. Como muchas de las sustancias secretoras presentes en el aparato de

Golgi son enzimas proteolíticas que se liberan intracelularmente, la consecuencia

final es la autolisis de la célula intestinal y, finalmente, la muerte del gusano (Ottesen

EA and Ismail MM, Horton J 1999).

26

Propiedades farmacocinéticas: Absorción y metabolismo: En el hombre, el

Albendazol se absorbe poco (

27

6.8 Características de los cromosomas.

Normalmente, los cromosomas son difíciles de observar, pues son pequeños y en gran

número. Pero haciendo preparaciones adecuadas pueden aislarse y fotografiarse. Su

tamaño es variable: según las células, el cromosoma de que se trate, del momento

funcional. No obstante, su tamaño oscila, aproximadamente, entre 0,2μm a 50μm de

longitud por 0,2μ a 2μ de grosor (Bendich and Drlica 2000).

Los cromosomas son organelos constantes en número, forma y características para

cada especie y los cromosomas de una célula son diferentes unos de otros. Esta

diferencia está, sobre todo, en la posición del centrómero (Amaitari 1986), que es

variable, lo que permite clasificar a los cromosomas metafásicos en metacéntricos,

submetacéntricos y acrocéntricos, según tengan el centrómero en medio, desplazado

hacia uno de los brazos a casi en el extremo, respectivamente (Figura 2).

Fig. 2. Clasificación de cromosomas según la posición del centrómero.

http://web.educastur.princast.es/proyectos/biogeo_ov/2bch/B4_INFORMACION/T407_CROMOSOMAS/diapositivas/Diapositiva7.JPGhttp://web.educastur.princast.es/proyectos/biogeo_ov/2bch/B4_INFORMACION/T407_CROMOSOMAS/diapositivas/Diapositiva7.JPG

28

6.8.1 Tipos de aberraciones cromosómicas

Las aberraciones cromosómicas son las anomalías en el conjunto cromosómico, que

pueden ser numéricas (variaciones de su número) o estructurales (modificaciones en

la forma) (Eldrige 1985). Las estructurales generalmente pueden ser deleciones, que

es cuando se pierde un segmento cromosómico, traslocación cuando el segmento

cromosómico pasa a integrarse a otro cromosoma, inversión cuando un segmento del

cromosoma cambia de sentido dentro del propio cromosoma. Las numéricas pueden

ser aneuploides, nulisomias, monosomias, trisomias y tetrasomias. (Maldonado Tapia

1993).

6.9 Micronúcleos

En las últimas décadas, la integridad genética de la población se ha visto

comprometida por la gran actividad industrial, así como también el uso de diversos

medicamentos que provoca la exposición a productos químicos y agentes

genotóxicos. Es importante, por ello, determinar qué se conoce como un nivel

“aceptable” de daño genético en una población concreta (Fenech M. 1993). Con ésta

finalidad se desarrolló el ensayo citogenético de micronúcleos, capaz de detectar

indirectamente rotura o pérdida cromosómica y que actualmente se encuentra en gran

auge dada su utilización en líneas de investigación sobre mutagénesis, para conocer

in vitro el efecto genotóxico de nuevos agentes químicos tanto a nivel ambiental con

nuevos plaguicidas y pesticidas, como en el ámbito sanitario con la utilización de

nuevas drogas en los tratamientos desde antitumorales hasta antiparasitarios como es

el caso (Kirsch-Volders and M, Fenech 2001). Los micronúcleos son fragmentos

de cromosomas o cromosomas completos que espontáneamente o por causa de

agentes que rompen cromosomas o que dañan el huso mitótico, quedan fuera

29

del núcleo durante la mitosis (Zúñiga G. et al., 2002), su forma es generalmente

redonda o almendrada, con un diámetro que varía desde 0.4 a 1.6µ (Torres. et

al., 1999). Su formación se basa en que en anafase cualquier fragmento

cromosómico que no posea centrómero no podrá integrarse a un núcleo por

carecer del elemento indispensable para orientarse en el huso acromático

(Schmid, W. 1975). Después de la telofase, los cromosomas normales, así como

los fragmentos que posean centrómeros, dan origen a los núcleos de las células

hijas; sin embargo, los elementos rezagados –que pueden ser fragmentos o

cromosomas completos– quedan incluidos en el citoplasma de las células

hijas, y una proporción de ellos se transforma en uno o varios “núcleos”

secundarios. Tales “núcleos” son mucho más pequeños que el núcleo

principal, pues son resultado de la fragmentación de cromosomas y de ahí su

nombre de “micronúcleos”

(Zúñiga-González G and Gómez Meda B. 2006).

6.10 Características del modelo experimental.

Los adultos poseen cuerpo robusto con 18 a 25 cm de longitud pudiendo pesar de

250 a 600 gramos, con pelos ásperos, orejas pequeñas y redondeadas, los ojos son de

tamaño pequeño en relación al resto de la cabeza. Las patas poseen callos lisos y

membranas interdigitales. La cola es gruesa y mide de 15 a 21 cm. Poseen una vida

media de 2 años siendo sexualmente maduro entre los 60-90 días de edad. La

gestación de la hembra dura 21 días aproximadamente, Número de cromosomas (2n)

= 42 (Subcommittee on Laboratory Animal Nutrition, NRC 1995) (Bendich and

Drlica. 2000).

30

6.10.1 Hígado.

Es una glándula mixta con funciones endocrinas y exocrinas; esta formado por células

hepáticas o hepatocitos, los cuales se agrupan formando lobulillos hepáticos que son la

unidad morfológica del hígado, cada lobulillo es una masa poligonal de tejido hepático

separada de las demás por los espacios de Kiernan (Bustos 2008). El hepatocito posee

forma poligonal y un núcleo redondo en posición central, en cuyo citoplasma se

observan granos gruesos de glucógeno (Viloria 2000)

6.10.2 Cuernos uterinos.

El cuerpo del útero se encuentra a continuación del cuello, es corto, de

aproximadamente 0.7 a 1 cm. Luego se bifurca dando origen a los cuernos uterinos

(derecho e izquierdo). La pared muscular del útero es muy delgada. La consistencia

de los cuernos varía de acuerdo con los niveles hormonales del animal. Es el sitio de

pasaje de los espermatozoides, en los cuernos uterinos ocurre la implantación del

embrión y donde transcurre la preñez (Viloria 2000), (Gartner and Hiatt 2008).

7. MÉTODOS.

Del modelo experimental utilizado.

Cien ratas de dos meses y medio de edad de la cepa Long Evans. Los animales se

mantuvieron en condiciones constantes de temperatura y luz, con acceso libre a

alimento y agua dentro del bioterio de la Unidad Académica de Biología

Experimental (UABE) de la UAZ, fueron divididas en cinco grupos de los cuales

cuatro fueron de 10 animales y uno de 60 animales de la manera siguiente:

31

Grupo 1.- Control sano hembras, 10 animales.

Grupo 2.- Control hembras gestantes, 10 animales.

Grupo 3.- Hembras infectadas con T. spiralis, 10 animales.

Grupo 4.- Hembras gestantes e infectadas con T. spiralis, 10 animales.

Grupo 5.- Seis sub-grupos de 10 hembras gestantes cada uno, infectadas con T.

spiralis, y tratadas (TX) con Albendazol.

Subgrupo 1’ Hembras gestantes e infectadas, TX de 1 día con Albendazol.

Subgrupo 2’ Hembras gestantes e infectadas TX de 3 días con Albendazol.


Subgrupo 4’ Hembras gestantes e infectadas TX de 7 días con Albendazol



Para sincronizar a los animales a gestación las ratas hembras en etapa de estro o pro-

estro fueron cruzadas con un macho sano. Y teniendo en cuenta que el ciclo estral es

de 4 a 6 días en donde el estro dura solamente un día se realizaron frotis vaginales

para la detección del estro y el posible día de la monta de acuerdo a la metodología

propuesta por López en 2002.

La infección de los animales también fue sincronizada con la gestación y los

tratamientos por lo que fueron infectadas con 500 LI de T. spiralis vía oral.

32

Grupo 1 Control sangrado al inicio del experimento y final del experimento y se

aplicó la metodología de los grupos de estudio: detección por medio de técnicas

directas e indirectas del parasito.

Grupo 2 Al termino de la gestación se evaluó el número de crías obtenidas.

Grupo 3 Hembras adultas se sacrificaron a las 4 semanas para evaluación de carga

parasitaria y respuesta inmune. Por medio de las técnicas directas e indirectas.

Grupo 4 Hembras gestantes e infectadas. Se evaluó el número de crías y sus

características físicas así mismo se aplicaron técnicas directas e indirectas, se tomo

tejido de hígado y aparato reproductor para realizar estudio histológico.

Grupo 5 Hembras gestantes, infectadas y TX con el medicamento, fueron

sacrificadas a los 30 días después de cada tratamiento se verificaron las

características fenotípicas de las crías obtenidas y se realizara un cariotipo para

verificar si existen alteraciones genotípicas, se realizó la técnica de hematoxilina-

eosina para observar tejido de hígado y aparato reproductor en las ratas adultas. Para

verificar la Infección y la efectividad del TX en la madre se aplicaron las técnicas

directas de digestión artificial y observación directa al microscopio y las técnicas

indirectas de MIDD.

Técnicas a emplear:

Para reproducir el ciclo biológico de T. spiralis:

La fuente de LI para las diferentes pruebas en el presente estudio fueron a partir de

la cepa que se ha conservando en diferentes modelos experimentales en el Bioterio

de la Unidad Académica de Biología Experimental, desde el primer brote de

33

Trichinellosis reportado en el Estado de Zacatecas, en Laguna del Carretero, en el

municipio de Villanueva. Los animales utilizados tanto para preparar el inóculo, así

como los empleados para experimentación fueron proporcionados por el Bioterio de

la misma institución, la cual pertenece a la Universidad Autónoma de Zacatecas

México.

Se obtuvo carne infectada de los músculos de ratas infectadas, posteriormente se

analizó la carga parasitaria mediante la técnica de compresión en placa, se llevó a

cabo el conteo de larvas para así obtener el tamaño de muestra (en peso) con el que

se infectó al modelo de experimentación.

Para verificar la infección (presencia del parasito) se utilizaron las siguientes

técnicas:

Se obtuvieron muestras de tejido del modelo experimental y se aplicaron las

siguientes técnicas:

Técnica de compresión (CP).

Al sacrificio del modelo experimental (ratas Long Evans) se obtiene la carne de los

tejidos, se hace una mezcla homogénea (si es el caso) de los tejidos de diafragma,

macetero, lengua, pierna, (o se observan por separado cada uno de los tejidos) se

observa 0.5 g de la muestra, se coloca en una laminilla de vidrio con otra laminilla

se comprime, se observa al microscopio de luz con objetivo 10X (Rossignol et al.,

2001). Verificando así la presencia o ausencia de LI en músculo estriado.

34

Técnica de digestión artificial (DA).

El proceso se lleva a cabo a 37º C por 24 horas según el método descrito por Del

Río y colaboradores en 1986 con algunas modificaciones, donde se colocan 60 g de

tejido infectado triturado, en un tamiz de tul, en forma de saco; suspendido en una

solución al 0.03 % de pepsina (10,000 U) y HCl al 37 % (0.2M) en un litro de agua

en un embudo de separación; transcurridas las 24 horas se procede a separar las LI

que se depositaron en el fondo del embudo de separación.

Para modelos experimentales vivos utilizamos las siguientes técnicas:

Se obtiene suero de los animales mediante la extracción de sangre y posteriormente

aplicamos las siguientes técnicas:

Micro Inmuno Difusión Doble (MIDD).

Se elaboró un gel de bactoagar al 1 % en solución Buffer de fosfatos (PBS) con 0.01

g de azida de sodio; se coloca 4.5 ml de la solución liquida (50°C) sobre una

laminilla de vidrio, una vez en forma sólida, se procede a formar la roseta, a una

distancia de 0.5 cm. entre pozo y pozo, se coloca el antígeno soluble total en una

cantidad de 20 L (18 g ) en el centro y en torno a éste los sueros problema,

ocupando siempre un suero control positivo y un negativo, se deja a temperatura

ambiente en cámara húmeda de 24 a 48 horas hasta la presencia de líneas de

precipitación entre el suero control positivo y el antígeno (Oucherlony O. 1958).

Obtención del antígeno soluble total de T. spiralis.

Se inicia su obtención con la digestión artificial, posterior de la obtención de las LI

se someten a varios lavados con solución buffer de fosfatos (PBS), se separa el

35

paquete larvario se adiciona nitrógeno liquido y se tritura. Una vez rotas las larvas se

centrifuga, el sobrenadante obtenido contiene el antígeno soluble total (AST) de T.

spiralis mismo que se usa como antígeno para las diferentes pruebas en el modelo

experimental murino (Muñoz et al., 2007).

Determinación de proteínas.

Se realizó una curva estándar usando Albúmina Sérica Bovina (BSA), según la

metodología propuesta por Bradford (Bradford and Laccetti. 1976), la medición de

concentración de proteínas se llevó a cabo a una longitud de onda de 595 nm. Cada

muestra se preparó con BSA con concentraciones crecientes y se agregó NaCl.

0.14M y Solución Bradford en la misma cantidad a cada una de las muestras.

Al tener el valor de Absorbancia del antígeno soluble total (AST) se interpoló en la

Curva estándar de albúmina y se registró la concentración de proteínas contenidas en

el AST.

Corrimiento electroforético en gel de poliacrilamida (EGPA).

Se usaron geles de 8 X 10 cm., preparados con dodesil sulfato de sodio (DSS),

según lo propuesto por Laemmli con una concentración al 12% del gel separador el

cual se preparó como sigue: 3.84 ml de Acrilamida-BisAcrilamida, 2.4ml de Tris 1.5

M pH 8.8, 3.2 ml de agua destilada, 100 l de DSS al 10%, 5 L de Temed y 50 L

de persulfato de amonio al 10 %. El gel del 4%, concentrador, se preparo con 1.33

ml de Acrilamida-BisAcrilamida, 2.5 ml de Tris 0.5 M pH 6.8, 6.1 ml de agua

destilada, 100 L de DSS al 10 %, 16 L de Temed y 80 L de persulfato de amonio

al 10 %. A cada carril se le colocó la cantidad correspondiente según lo obtenido de

la curva estándar del antígeno. El corrimiento se realizó en una cámara de Protean II

36

xi Cell (Bio- Rad), utilizando un buffer de corrimiento preparado con 12 g de Tris,

57.6 g de Glicina, 40 ml de DSS al 10 %, y agua destilada la necesaria para aforar a 1

L. Se dejó correr por espacio de dos horas, usando 100 mA por gel. Se continuó con

la tinción de uno de los geles con el colorante azul de Coomassie G- 250 y su secado

en membranas de celofán, el otro gel se usó para llevar a cabo

Inmnoelectrotransferencia (Towbin, H., et al 1979).

Inmunoelectrotransferencia (IET).

El producto que se obtuvo del corrimiento en gel de Poliacrilamida se transfirió a

papel de NC, de acuerdo a lo descrito por Towbin (Towbin et al.1979), utilizando un

buffer de transferencia preparado de la siguiente manera: 6.05 g de Tris 0.025 M,

28.8 g de Glicina 0.19M, 200 ml de metanol al 20% y agua destilada la necesaria

para aforar a 1 L. Utilizando la cámara de Transblot- Cell (Bio–Rad.) a 35V,

durante toda la noche a 4 °C.

El papel de Nitrocelulosa (NC) se tiñó con fast green (verde rápido) por 5 min. Con

agitación constante, se retiro el colorante y se decoloró para verificar la transferencia

de las proteínas, se deja secar y se cortan las tiras del ancho aproximado de cada

carril. Posteriormente, se procedió a cubrir cada tira con una solución de PBS- leche

descremada al 3% y azida de sodio al 0.15% a 4°C, con agitación constante durante

toda la noche. Transcurrido el tiempo se lavó tres veces por 10 min con PBS, se

continuó con la incubación por 1.5 hrs. con los sueros problemas en una dilución de

1:100 en PBS- leche en polvo al 3% a temperatura ambiente con agitación constante;

enseguida se lavaron dos ocasiones con PBS- Tween 20 al 0.3% por 10 min. y tres

más con PBS por 10 min. Posteriormente se incubó con el segundo anticuerpo Anti-

IgG de murino, conjugado con peroxidasa 1: 2000 PBS- leche en polvo al 3% por

37

una hora a temperatura ambiente, con agitación; después se lavó dos veces con PBS-

Tween 20 al 3% y se enjuagó con PBS por 10 min.

El patrón de Bandeo de cada tira se reveló con 3,3-Di-Amino Bencidina, 50 mg. en

100 ml de PBS, usando, como sustrato, peróxido de hidrógeno al 37%.

Para determinar el efecto del ABZ en las ratas se utilizó la siguiente técnica:

Tinción Hematoxilina–Eosina (H-E).

Se tomaron las muestras de hígado y cuernos uterinos de rata, controles y

tratamiento. Se fijaron los tejidos en formol amortiguado al 10% por 24-48 horas.

Posteriormente se pasaron a alcohol etílico al 70% para su procesamiento automático

por aproximadamente 12 horas en dos pasos de OH al 70%, OH al 80%, OH al 96%,

OH al 100% y xilol. De éste último paso se sacaron las muestras y se embebieron en

parafina formando bloques de soporte para la realización de cortes histológicos de 5-

8µm de espesor en un microtomo Leica Modelo 820. los cortes se colocaron en un

baño de flotacion a 50 °C y se levantaron en un portaobjetos para dejarse secar,

desparafininarze por una hora en una estufa y pasar al proceso de tinción con la

técnica Hematoxilina y Eosina según el criterio de Viloria (2000).

Cariotipo

Para realizar el cariotipo de crías obtenidas de ratas infectadas y tratadas con el

medicamento se utilizo la siguiente técnica: Se tomó una muestra de sangre

periférica de las ratas (aproximadamente 1ml.) se adicionó anticoagulante EDTA. Se

colocó en un tubo de ensaye 5 ml de medio MC Coy, se agregó 100 U de penicilina y

se incubó durante 70 h a 37ºC. Al término de la incubación se agregó 10U de

38

Demecolcine® y se incubó nuevamente por 2 h. Transcurrido este tiempo se

procedió a centrifugar por 10 min a 1200 rpm. Se decantó el sobrenadante y al

precipitado se le agregó KCl 0.075M se incubó durante 20 minutos, se centrifugó y

se decantó nuevamente. Al sedimento se le agregó solución fijadora de metanol-ac.

Acético (3:1) y se dejó reposar 10min. Posteriormente se centrifugó durante 10 min a

1200 rpm, se decantó y el sedimento se fijó en las laminillas de vidrio, se tiñeron con

colorante Giemsa al 10% y se observaron en el microscopio de luz con el objetivo de

100 X (Maldonado Tapia 1993).

Micronúcleos.

Se realizó la técnica in Vivo, se sacrificó a la rata, se le extrajo el fémur de ambas

extremidades, se limpiaron con solución, se cortaron ambas extremidades, se extrajo

la médula ósea recolectándola en un tubo cónico con suero fetal bovino y heparina,

se llevó a cabo la resuspensión del contenido, se centrifugó por diez minutos a 1500

rpm, se decantó el sobrenadante y se procedió a realizar los frotis en laminillas de

vidrio previamente marcadas, se fijaron a temperatura ambiente y se tiñeron con el

colorante naranja de acridina. El conteo de células se llevó a cabo con el microscopio

de fluorescencia con el objetivo a 100X.

39

8. RESULTADOS.

Grupo 1. Control sano

El suero obtenido de ratas Long Evans control sin infección sometido a la técnica

indirecta de MIDD resultó negativo en todos los casos (figura 3). Para la técnica de

H-E resultaron características normales tanto en hígado como en aparato reproductor

como se observa en la fig. 13 A

Fig. 3 MIDD de rata Long Evans. Donde no se observan líneas de precipitación

características de la interacción Ag-Ac. Por lo que se interpreta como negativa. En

los pozo del centro (A) AST y en los periféricos suero problema, C+ control positivo,

C- control negativo.

Grupo 2. Control gestante con el suero obtenido se realizó MIDD resultando

negativa, de los frotis vaginales se observaron espermatozoides y se dio seguimiento

al desarrollo de la gestación resultando partos con un promedio de 10 crías con un

promedio en peso de 5.2 gramos y longitud de 6.4 cm. (Figura 4). Al sacrificio se

tomó muestra de hígado y cuernos uterinos y el análisis macroscópico mostró

características normales de ambos tejidos, los cuernos uterinos se encontraron

irrigados de manera normal, su consistencia era laxa y a la vez firme, su coloración

rosada su extensión de alrededor de 2.30 cm; el hígado tenía su forma lisa y su

coloración marrón sin ningún cambio significativo de coloración. (Figura 5).

A

C+

C-

A

C+

C-

A

C+

C-

40

Fig. 4 A) Espermatozoides resultado del frotis vaginal, se observan con microscopio

de luz X100, B) rata control sana gestante con 11 crías.

Fig. 5. A). Aparato reproductor con irrigación normal. B). porción de Hígado con su

coloración normal. Observados macroscópicamente ambos obtenidos de rata control

sin tratamiento.

Grupo 3. Hembras infectadas con T. spiralis, al sacrificarlas se recuperó músculo

(lengua, macetero, diafragma, pierna) y se sometió a las técnicas de compresión en

placa y digestión artificial, resultando positivas. Al hígado y aparato reproductor

41

resultaron sin cambios significativos. Se aplicó MIDD resultando en todos los casos

líneas de precipitación lo que indica interacción Ag-Ac (Figura 6),

Fig. 6 A) compresión de tejido donde se observan LI de T. spiralis observadas al

microscopio de luz con el objetivo de x100.B) LI obtenidas de digestión artificial. C)

MID donde se observa un precipitado característico de la reacción Ag-Ac.

Grupo 4. Hembras gestantes e infectadas, al detectar presencia de

Espermatozoides se infectaron con T. spiralis se dio seguimiento al desarrollo de la

gestación resultando un promedio de 2 crías, con un promedio en peso de 4.5gr. y

5.2 cm. de longitud. De las características de extremidades y cabeza no se observó

ninguna alteración, las técnicas directas después del sacrificio de las ratas adultas

resultaron positivas, en el hígado como el aparato reproductor no se observaron

cambios con respecto al control.

Grupo 5. Hembras gestantes, infectadas y tratadas con Albendazol (ABZ) se

procedió de la misma forma que el grupo cuatro y 24 h después de la infección inició

el tratamiento con ABZ. Se dio seguimiento al desarrollo de la gestación.

Resultando:

Grupo1’ con 1 día de Tx. ABZ. Se obtuvieron Partos con un promedio de 4 Crías

con un promedio en peso de 4.8gr. y 5.3cm de longitud.

42

30 días posteriores a la infección se sacrificaron las madres se obtuvieron tejidos

(lengua, macetero, pierna y diafragma) resultado estas con presencia de LI de T.

spiralis. Se extrajeron cuernos uterinos e hígado y se sometieron a examen

macroscópico resultando con variabilidad de características morfológicas como es el

caso de cuerpos amarrillos que corresponden a reabsorciones de posibles productos.

(Figura 7).

Fig. 7. A) parte interna de cuerno uterino donde se observan protuberancias

amarillentas. B) LI en músculo de rata con 1día de Tx con ABZ observadas al

microscopio de luz a x100.

Grupo 2’ con 3 días de Tx ABZ. Se obtuvo como resultado de los partos un

promedio de 2 crías con un promedio en peso 6.2 gr. y longitud 6.7cm. al

seguimiento de los productos se observaron alteraciones fenotípicas de cabeza y

extremidades solo en algunas de las crías que es importante mencionar que a los

primeros días de desarrollo no se identificaron (Figura 8). Se sacrificaron las ratas se

analizaron tejidos (lengua, diafragma, masetero y pierna) por técnicas directas CP y

DA resultando ambas negativas a la presencia de LI de T. spiralis; se extrajeron los

cuernos uterinos e hígado en los cuales por análisis macroscópico se observaron

anomalías en el tejido de los cuernos uterinos (figura 9).

43

Fig.8 A) crías del grupo con 3 días de Tx de ABZ. B) cría del grupo con 3 días de

Tx de ABZ, donde se observan alteraciones en el tamaño de cabeza y extremidades.

Fig. 9 A) parte interna de un extremo del cuerno uterino con algunos gránulos lo que

corresponde a posibles productos no viables observado con microscopio

estereoscópico. En B) observamos los mismos cuernos uterinos con poca irrigación.

Grupo 3’ con 5 días de Tx con ABZ. No se obtuvo ninguna cría, al término del

período de gestación se extrajeron cueros uterinos resultando con malformaciones

macroscópicas diversas como lo es tamaño, irrigación y la consistencia, que era muy

rígida con respecto al control. (Figura 10). La digestión artificial y compresión en

placa de los tejidos de elección de T. spiralis resultaron todos negativos.

44

Fig. 10. Cuernos uterinos del grupo con 5 días de Tx observándose con exceso de

grasa y diferencias en tamaño.

Grupo 4’ con 7días de Tx con ABZ. Se obtuvieron partos con un promedio de 1 cría

y con un promedio en peso 5.1gr y 5.2cm de longitud, las ratas donde no se

obtuvieron crías fueron sacrificadas, se recolectaron las distintas muestras de tejidos

para llevar a cabo técnicas directas, resultando negativas. También se extrajeron los

cuernos uterinos observándose varias anomalías morfológicas en análisis

macroscópico (figura 11).

En el grupo 5’ de 10 días de Tx no se obtuvieron crías, sin embargo en el grupo 6’

con 14 días de Tx se obtuvieron crías pero todas muertas, con distintas alteraciones

morfológicas, de igual manera se extrajeron los cuernos uterinos observándose

también con alteraciones (figura 12).

45

Fig. 11. A). Crías de ratas con siete días de Tx. B).cuernos uterinos donde se

observan mórulas no viables para el desarrollo. C). cuernos uterinos con ausencia

total de irrigación. D). extremo de cuerno uterino observado con estereoscopio donde

observamos mórulas no viables para el desarrollo así como algunos puntos amarrillos

que corresponden de igual maneara a productos no viables.

46

Fig. 12. A y B). Cuernos uterinos obtenidos de ratas con 14 días de Tx. C) imagen

de rata muerta con alteraciones en columna vertebral y piel en extremo deshidratada

y laxa. D) imagen ventral de rata donde se observa ausencia de órganos vitales tanto

en cavidad torácica como abdominal.

Tabla II. Resultados generales.

(+) Presencia, (-) ausencia.

Grupo No. De crías en

promedio

Alteraciones fenotípicas

de las crías

fecundado sano 1O -

Fecundado e infectado 2 -

Tx 1 día ABZ 4 -

Tx 3 día ABZ 2 +

Tx 5 día ABZ 0 -

Tx 7 día ABZ 1 +

Tx 10 día ABZ 0 -

Tx 14 día ABZ 1 +

47

Del Análisis estadístico.

Se realizó la prueba no paramétrica de Kolmogorov-smirnov para determinar la

normalidad de la variable no. De crías, encontrando que Z=3.615 y P

48

Grafica 1. Medias, ± desviación estándar de cada grupo analizado.

Debido a que en los grupos 5 y 7 no se obtuvieron crías estos se eliminaron de los

análisis estadísticos y se realizó una comparación entre el grupo de control sano

contra tratamiento. La tabla IV muestra los rangos promedio de la variable número

de crías por grupo en la prueba de Kruskal-Wallis. En la tabla V se muestra el

resultado de la prueba Kruskal-Wallis donde se observa que el valor de chi-cuadrada

(18.173) produce una diferencia altamente significativa entre los grupos analizados

(P=0.001), lo que confirma una clara diferencia significativa entre el control sano y

los tratamientos. En la tabla VI se muestra el resultado de la prueba Mann Whitney

para la comparación entre grupos los resultados muestran que existe diferencia

significativa entre el grupo uno y tres con al menos 95% de confianza y que existe

una alta diferencia significativa entre el grupo uno y los grupos cuatro, seis y ocho

con al menos 99% de confianza. Entre los grupos restantes no se muestra diferencia

significativa por lo que podemos decir que el efecto del medicamento por lo menos

1 2 3 4 5 6 7 8

Grupo

-6

-4

-2

0

2

4

6

8

10

12

14

16

Cri

as

49

hasta tres días no incide en el número de crías, en los tratamientos posteriores afecta

directamente al número de crías.

Tabla IV. Rangos promedio.

Grupo N Mean Rank

Crías Control sano 10 39.75

Tratamiento 1 día 10 27.45

Tratamiento 3 días 10 23.05



Total 50

Tabla V. Resultado de la prueba Kruskal-Wallis. Para la comparación entre el grupo

1 y los tratamientos.

Crías

Chi-Square 18.173

df 4

Asymp. Sig. .001

Tabla VI. Resultados de la prueba de Mann Whitney.

Grupos comparados U P

1 vs. 3 18.50 0.015

1 vs. 4 14.15 0.005

1 vs. 6 13.00 0.004

1 vs. 8 11.50 0.002

3 vs. 4 37.00 0.353

3 vs. 6 32.50 0.190

3 vs. 8 29.50 0.123

50

4 vs. 6 39.50 0.436

4 vs. 8 36.50 0.315

6 vs. 8 41.50 0.529

Para ver si existía diferencia significativa entre el control infectado y cada

tratamiento se realizó la misma prueba Kruskal-Wallis y los resultados de Chi-

Cuadrada (5.590) indican que no existe diferencia significativa, (P=0.232) entre

estos grupos lo que nos indica que el efecto de la infección y el efecto del

medicamento no presentan diferencias. Tablas VII y VIII.

Tabla VII. Rangos promedio.

Grupo N Mean Rank

Crías Control infectado 10 25.60

Tratamiento 1 día 10 32.10




Total 50

Tabla VIII. Resultado de la prueba Kruskal-Wallis. Para la comparación entre el

grupo dos y los tratamientos.

Crías

Chi-Square 5.590

df 4

Asymp. Sig. .232

Para las variables peso y talla los resultados se comportaron de manera similar ya

que muestra diferencia significativas entre el control sano y los tratamientos cuando

hacemos una comparación entre ellos y no así entre el control infectado y los

tratamientos. Para peso P

51

existe diferencia significativa entre el control sano y cada uno de los tratamientos

incluido el control infectado, al hacer una comparación entre grupos con respecto al

control el grupo que más se asemeja es el tres que corresponde al tratado con un día

con el medicamento. Con respecto a la talla P

52

Fig. 13. A) Corte de cuernos uterinos de rata sana teñida con Hematoxilina–Eosina

donde se observan los folículos ováricos bien definidos (flecha) así como el espacio

entre estos. B). Tejido de cuernos uterinos de una rata con un día de Tx con ABZ, se

observa el agrandamiento de los folículos ováricos se empieza a notar también un

espaciado anormal en el tejido (flechas). C) Tejido con tres días de tratamiento se

observa la degeneración de los folículos ováricos e inicia la aparición de fibras de

colágena (azul). D) Tejido ovárico de rata sometida a 5 días de tratamiento donde se

nota la degeneración completa de los folículos ováricos (Flecha). Todos a x200.

53

Fig. 14. Cortes de cuernos uterinos de ratas tratadas con ABZ A) control, B) tratado

por 7 días. C) tratadas por diez días. D) tratadas por quince días se observa la gran

diferencia con el control la alteración total de los folículos ováricos y se pierde

también la definición de las fibras del tejido. Todos a x200.

A) control, B) tratado por 7 días. C) tratadas por diez días. D) tratadas por catorce días se observa la gran diferencia con el control la alteración total de los folículos ováricos y se pierde también la definición de las fibras del tejido.

54

Fig.15 A) Corte de hígado de rata sana teñido con hematoxilina eosina donde se

observan láminas hepáticas de forma definida, los núcleos de tamaño normal (negro),

sinusoides y espacio perisinusoidal bien definido (Azul). B) tejido de hígado de rata

sometido a un día de Tx con ABZ. Se observa el ligero crecimiento de los sinusoides.

C) Tejido de rata sometido a 3 días de Tx con ABZ las láminas hepáticas se observan

con pérdida de forma, los núcleos de éstas se observan disminuidos de tamaño

(negro) y los espacios perisinusoidales son de mayor tamaño con respecto al control.

(Azul) D) Tejido de hígado de rata sometida a 5 días Tx con ABZ las láminas

hepáticas carecen de contorno definido. Todos a x200)

55

Fig.16. A) corte de hígado de rata control sano teñido con Hematoxilina- Eosina. B)

Tejido de rata sometida a 7 días de Tx con ABZ. Nótese la modificación en los

núcleos de las láminas hepáticas. C) Tejido de rata sometida a 10 días de Tx con

ABZ se observa la degeneración de las láminas hepáticas así como sus núcleos, los

sinusoides se notan de tamaño más grande. D) Tejido de rata sometida a 14 días de

Tx con ABZ las láminas hepáticas ya no están definidas, los núcleos están

modificados así como el citoplasma y el espacio perisinusoidal muy modificado.

56

Tablas IX Alteraciones histológicas en hígado y aparato reproductor en ratas

tratadas con ABZ.

Grupo Carga

parasitaria

Histología

IET Hígado Aparato

reproductor

fecundado sano - N N -

Fecundado e infectado + N N +

Tx 1 día ABZ + M M +

Tx 3 día ABZ - M M +*


Tx 7 día ABZ - M M -



(+) Presencia, (-) ausencia, (+* patrón de bandeo modificado), (N) normal (M)

modificado.

Determinación de proteínas (western blot).

Se llevó a cabo la EGPA dando como resultado la separación por peso molecular de

las proteínas del AST de T. spiralis (figura 17), de la inmuno electro transferencia

resultó el triplete característico de 43, 45 y 48 kD que nos indica la presencia de

proteínas del parásito T. spiralis descrito por Herrera y Colaboradores en 1986

(figura 18), para los grupos con Tx con ABZ se obtuvo un patrón de bandeo

modificado así como de algunas crías (figura 19).

57

200 kDa

116.3 kDa

97.4 kDa

66.2 kDa

45 kDa

31 kDa

48

45

43

200 kDa

116.3 kDa

97.4 kDa

66.2 kDa

45 kDa

31 kDa

48

45

43

Fig.17. Gel de poliacrilamida teñido con azul de Coomassie. A corresponde a los

cinco primeros carriles que indica el desdoblamiento de las proteínas del AST de T.

spiralis, B indica el marcador de peso molecular.

58

Fig.18. Inmunoelectrotransferencia donde se puede identificar el triplete

característico de 43, 45 y 48kD que indica la infección de T. spiralis. Del carril 1 al 8

corresponde al grupo control infectado, 9 control sano, 10 control infectado y los

restantes control positivo y negativo. El marcador de peso molecular es el mismo

que se observa en la fig. 17.

48

45

43

48

45

43

59

Figura no.19 inmunoelectrotransferencia que corresponde a los grupos tratados con

Albendazol, el carril 7 corresponde al control positivo y el 8 al negativo, el 1 al Tx

1dia con ABZ, el 2 a 3 días de Tx, el 3 a 5 días de Tx, carril 4 a 7 días de Tx, carril 5

a 10 días de Tx y el carril 6 a 14 días de Tx con ABZ, nótese la modificación en el

bandeo conforme aumenta el tratamiento, esto con respecto al control positivo que se

muestran en el carril no. 7.

48

45

43

48

45

43

60

Cariotipo.

Se realizó la técnica antes descrita en la metodología y se obtuvieron los cromosomas

que conforman el cariotipo de la rata (figura. 20). Sin embargo dado el objetivo

específico número tres que fue determinar las alteraciones genotípicas nos dimos

cuenta que esta técnica no es significativa para determinar si existen o no dichas

alteraciones a nivel genético por lo que se realizó la técnica y se complementó con la

técnica de micronúcleos.

Fig. 20 Cromosomas de una rata normal observada con el objetivo de inmersión del

microscopio de luz a x100.

Análisis de Micronúcleos

Se llevó a cabo la técnica descrita en la metodología para la obtención de

micronúcleos (fig. 21) con la siguiente relación (tabla X):

61

Tabla X. micronúcleos en crías de ratas Long Evans por mil células Policromáticas.

Rata/Tratamiento Micronúcleos/1000

eritrocitos polycromáticos

1 control sano 2/1000

2 infectado 3/1000

TX 1 día 5/1000

TX 3dias 3/1000

TX 7 días 6/1000

Figura 21. Se observan eritrocitos normocrómaticos (verde), y eritrocitos

policromáticos naranja así como también micronúcleo en amarillo (indicado con la

flecha). Observado con el microscopio de fluorescencia a x100.

El resultado preliminar del análisis muestra de acuerdo a la proporción obtenida de

micronúcleos sobre mil eritrocitos policromáticos que el medicamento no tiene

62

efecto mutagénico sobre los animales evaluados. Evaluado por la técnica de

micronucleos in vivo.

También se obtuvo por esta misma técnica la siguiente proporción de células (Tabla

XI):

Tabla XI proporción de eritrocitos normocromático sobre policromáticos.

Rata/Tratamiento Eritrocitos

normocromático/polycromáticos

1 control sano 1000/100

2 infectado 1000/340

TX 1 día 1000/400

TX 3dias 1000/400

TX 7 días 1000/700

Lo que nos puede dar indicios de un posible efecto negativo sobre la eritropoyesis a

causa del medicamento.

63

9. Discusión.

Se utilizó como modelo experimental ratas de la cepa Long Evans y en este modelo

se implementó que a la observación de espermatozoides se dio la fecundación y el

parto a los veintiún días aproximados posteriores a la observación. Los resultados

obtenidos indican que la infección tiene efecto sobre el número de crías ya que

disminuyó considerablemente del grupo control infectado con respecto al control

sano, Rau indicó que la infección con T. spiralis es un factor de estrés suficiente para

modificar el desarrollo del embarazo (Rau 1985), así como también el tratamiento,

ya que conforme se aumenta el tiempo de tratamiento el promedio de crías

disminuye de manera inversamente proporcional, esto concuerda con los resultados

obtenidos por Moreno y colaboradores donde indican que la infección incide

directamente en la disminución del número de crías (Moreno et al., 2008). La

observación de las características fenotípicas de las crías indican que existen cambios

a partir de tres días de tratamiento con el medicamento, y estos cambios se observan

exacerbados en las crías obtenidas de las ratas que se les trato durante 15 días con el

medicamento ya que se observaron alteraciones anatómicas principalmente en

columna vertebral así como en cabeza carecen de fosas nasales y orejas, en la parte

interna carecen de órganos vitales tanto en cavidad abdominal como cavidad

torácica, lo cual nos indica que el medicamento es altamente tóxico. Estos resultados

coinciden con un estudio preliminar realizado por Moreno y colaboradores donde

indican que al tratar por diez días con Albendazol se encontraron múltiples

malformaciones congénitas (Moreno et al., 2004), así como también lo reportado por

Dubinski y colaboradores donde reportan que el tratamiento con Mebendazol durante

un periodo de diez días a una mujer embarazada a la cual se le diagnosticó

trichinellosis y ante los posibles efectos adversos al feto se llevó a cabo un aborto y

64

al revisar el feto se encontró que este ya tenía malformaciones que probablemente

impedirían su desarrollo (Dubinski et al., 2001). Con respecto al tratamiento de

acuerdo a los resultados, la dosis administrada (15mg/kg de peso) es efectiva a partir

de tres días de tratamiento ya que se observó la ausencia de larvas a partir de este

periodo de tiempo, Chávez y colaboradores indicaron que al realizar un estudio

comparativo de tres antiparasitarios entre ellos el Albendazol, éste es efectivo en el

tratamiento contra T. spiralis en fase intestinal, el estudio se llevó a cabo tanto en

modelo murino como suino (Chavez et al., 2006), coincide también con estudios

llevados a cabo por Siriyasatien donde indican que 20mg/kg por 7 días de ABZ

disminuye al 100% las LI, esto en la fase temprana de la infección (Siriyasatien et

al., 2003) . Al realizar el western Blot de los grupos se observó una ligera

modificación en las bandas de reconocimiento esto debido probablemente al

tratamiento al que fueron sometidos cada uno de los grupos. También se corroboró el

paso de anticuerpos anti-T. spiralis de la madre al producto como lo muestra el

patrón de bandeo presentado en los resultados respectivos, esto corrobora los

resultados publicados por Moreno y colaboradores donde indican que existe el paso

de Ac. Anti T. spiralis de la madre al producto y estos tienen una permanencia hasta

por ocho meses (Moreno et al., 2008); existe una correspondencia también con lo

publicado por Núñez y colaboradores donde indican que incluso el paso

transplacentario de LRN de T. spiralis es posible (Núñez et al., 2002). Con respecto

al efecto del medicamento sobre la madre, los resultados indican daño

histopatológico con degeneración progresiva conforme aumenta el tratamiento tanto

en hígado como en aparato reproductor lo que nos indica los efectos negativos que

tiene el largo período de tratamiento a la dosis antes mencionada, sobre estos

resultados no existen datos publicados, sin embargo Carrara y colaboradores

65

realizaron un estudio sobre el efecto de ABZ en Hígado de feto de rata e indican

diversas modificaciones, entre ellas alteraciones hepáticas, siendo una de ellas el

tamaño de los núcleos de los hepatocitos (Carrara et al., 2005). Con respecto a los

efectos genotípicos sobre las crías el análisis muestra que no existen dichos efectos,

sin embargo se debe recalcar que se trata de un estudio preliminar ya que no se

utilizó un número de muestra significativo debido a que se tenía contemplado otro

estudio, que en el desarrollo del experimento se evidenció que no era lo

suficientemente sensible como para determinar daños a nivel cromosómico.

66

10. Conclusiones.

El Albendazol es efectivo contra la infección por Trichinella spiralis a nivel

intestinal a partir de los tres días de tratamiento, la infección tiene efecto directo

negativo sobre el número de crías así como también el tratamiento.

Las características fenotípicas en las crías indican que el uso de este medicamento

produce alteraciones que no permiten la supervivencia de las crías, así como daños

severos en la madre tanto en el hígado como en el aparato reproductor, por lo que no

se recomienda el uso prolongado de este medicamento.

Para que el estudio de micronúcleos sea significativo se deben utilizar por lo menos

cuatro animales de cada grupo experimental por lo que se acepta que éste resultado

es preliminar.

67

11. Literatura Citada.

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