Università degli Studi

di Genova

   

CORSO  DI  FORMAZIONE:  Rischio  Biologico  in  laboratorio  

 DISTAV  –  Università  degli  studi  di  Genova  

 con  la  collaborazione  del  Servizio  Prevenzione  e  Protezione  

 

         Il rischio da esposizione ad agenti biologici più o meno patogeni in ambito lavorativo si può avere per:

  emissione involontaria impianto di condizionamento, emissione di polveri organiche, ecc.

  emissione incontrollata impianto di depurazione delle acque, impianti di trattamento e smaltimento di rifiuti, ecc.

  manipolazione volontaria a seguito di impiego per diagnosi o per ricerca sperimentale in vitro” o “in vivo” di microrganismi naturali e/o geneticamente modificati, colture cellulari, endoparassiti umani e animali.

Rischio biologico

Rischio biologico nei laboratori di ricerca

è correlato all’uso di:   Agenti biologici : batteri virus lieviti muffe parassiti uni e pluricellulari colture cellulari

  Microrganismi geneticamente modificati (MOGM)

  Animali di laboratorio

RISCHIO BIOLOGICO E DANNI CONSEGUENTI

                                   può  comportare                                                                                      può  evolvere    

       Manipolazione                                                                                    RISCHIO           DANNO    BIOLOGICO      di  Agen@  biologici                                                                          BIOLOGICO    

- Contaminazione                                                                                                                                                                                                                                                                                                            all’uomo                                                          -­‐  Infezione                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                      -­‐  MalaEa                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                    -­‐  Morte    

- Diffusione  di  patogeni                                                                                                                                                                                                                                                                                                              all’ambiente                                            -­‐  Sviluppo  di  vegetali                                                                                                                                                                                                                                                                                                            non  desidera@                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                          -­‐  Perdita  di  biodiversità

Danno biologico

Il rischio biologico nell’uomo può portare a danni non solo di natura infettiva ma anche di natura:

•  allergica (soprattutto delle prime vie respiratorie e cutanea) •  Tossica (manipolazione di tossine batteriche) •  cancerogena (manipolazione di virus oncogeni e di linee cellulari tumorigene)

Prevenzione e sicurezza del lavoratore esposto

Norme Tecnico-operative

Obblighi datore di lavoro

•  valutazione del rischio •  informazione e formazione •  notifiche all’autorità competente •  sorveglianza sanitaria

Rischio biologico e sicurezza

Agenti biologici D.L. 81/2008 Titolo  X  (arJ.  266-­‐286)  

MOGM D.L. 206/2001

Normativa italiana

Gli agenti biologici definiti secondo il D.L.81/2008

     “  Qualsiasi microrganismo anche geneticamente modificato, coltura cellulare ed endoparassita umano che potrebbe provocare infezioni, allergie, intossicazioni"

Agente  biologico  di  gruppo  1  (nessuno  o  basso  rischio  individuale  e  collettivo)  

Un  agente  che  con  poca  probabilità  è  causa  di  malattie  nell’uomo  o  negli  animali.  

Bacillus  subtilis,  Staphylococcus  epidermidis  

Agente  biologico  di  gruppo  2  (moderato  rischio  individuale,  limitato  rischio  collettivo)  

Un  agente  patogeno  che  può  causare  malattie  nell’uomo  o  negli  animali,  ma  che  è  poco  probabile  che  costituisca  un  serio  pericolo  per  chi  lavora  in  laboratorio,  per  la  comunità,  per  il  bestiame  e  per  l’ambiente.  Le  esposizioni  in  laboratorio  possono  causare  patologie,  ma  sono  disponibili  trattamenti  efficaci  e  misure  preventive  e  il  rischio  di  diffusione  è  limitato.  

Staphylococcus  aereus,  Klebsiella  pneumonie,  Toxoplasma  gondii,  Candida  albicans,  Cytomegalovirus,  Herpes  simplex  virus  tipi  1,  2            

Agente  biologico  di  gruppo  3  (elevato  rischio  individuale,  basso  rischio  collettivo)  

Un  agente  patogeno  che  usualmente  causa  gravi  patologie  nell’uomo  o  negli  animali  e  costituisce  un  serio  rischio  per  i  lavoratori.  Difficilmente  si  propaga  nella  comunità  e  comunque  sono  disponibili  efficaci  misure  terapeutiche  e  preventive.  

Brucella  abortus,  Salmonella  typhi,  Taenia  solium,  Histoplama  capsulatum,  Virus  epatite  B,  Virus  dell’  AIDS  

Agente  biologico  di  gruppo  4  (elevato  rischio  individuale  e  collettivo)  

Un  agente  patogeno  che  normalmente  provoca  gravi  patologie  nell’uomo  e  negli  animali,  costituisce  un  serio  rischio  per  i  lavoratori  e  può  propagarsi  rapidamente  nella  comunità  .  Non  sono  di  norma  disponibili  efficaci  misure  terapeutiche  e  preventive.  

Virus  Ebola,  Virus  della  febbre  emorragica  di  Crimea,  Virus  di  Marburg  

Classificazione degli agenti biologici (in base alle caratteristiche di pericolosità)

BATTERI e organismi simili NB: Per gli agenti che figurano nel presente elenco la menzione «spp» si riferisce alle altre specie riconosciute patogene per l’uomo.  

Agente biologico   Classificazione   Rilievi  

Actinobacillus actinomycetemcomitans   2    

Actinomadura madurae   2    

Actinomadura pelletieri   2    

Actinomyces gereneseriae   2    

Actinomyces israelli   2    

Actinomyces pyogenes   2    

Actinomyces spp   2    

Arcanobacterium haemolyticum (Corynebacterium haemolyticum)  

2    

Bacillus anthracis   3    

Bacteroides fragilis   2    

Bartonella bacilliformis   2    

Bartonella (Rochalimea) spp   2    

Bartonella quintana (Rochalimea quintana)  

2    

Bordetella bronchiseptica   2    

Bordetella parapertussis   2    

Bordetella pertussis   2   V  

Borrelia burgdorferi   2    

Borrelia duttonii   2    

Borrelia recurrentis   2    

Borrelia spp   2    

Brucella abortus   3    

D.L.81/2008 Allegato XLVI

D.L. 81/2008  Classificazione Agenti Biologici

Livello di rischio

Misure di contenimento (allegato XLVII)

definisce

derivano

A. Misure di contenimento   B. Livelli di contenimento     2   3   4  1. La zona di lavoro deve essere separata da qualsiasi altra attività nello stesso edificio   No   Raccomandato   Si  

2. L’aria immessa nella zona di lavoro e l’aria estratta devono essere filtrate attraverso un ultrafiltro (HEPA) o un filtro simile  

NO   SI, sull’aria estratta  

SI, sull’aria immessa e

su quella estratta  

3. L’accesso deve essere limitato alle persone autorizzate   Raccomandato   Si   Si attraverso una camera di

compensazione  

4. La zona di lavoro deve poter essere chiusa a tenuta per consentire la disinfezione   No   Raccomandato   Si  

5. Specifiche procedure di disinfezione   Si   Si   Si  

6. La zona di lavoro deve essere mantenuta ad una pressione negativa rispetto a quella atmosferica   No   Raccomandato   Si  

7. Controllo efficace dei vettori, ad esempio, roditori ed insetti   Raccomandato   Si   Si  

8. Superfici idrorepellenti e di facile pulitura   Si, per il banco di lavoro  

Si, per il banco di lavoro e il pavimento  

Si, per il banco di lavoro, l’arredo, i

muri, il pavimento e il soffitto  

9. Superfici resistenti agli acidi, agli alcali, ai solventi, ai disinfettanti   Raccomandato   Si   Si  

10. Deposito sicuro per agenti biologici   Si   Si   Si, deposito sicuro  

11. Finestra d’ispezione o altro dispositivo che permetta di vederne gli occupanti   Raccomandato   Raccomandato   Si  

12. I laboratori devono contenere l’attrezzatura a loro necessaria   No   Raccomandato   Si  

13. I materiali infetti, compresi gli animali, devono essere manipolati in cabine di sicurezza, isolatori o altri adeguati contenitori  

Ove opportuno   Si, quando l’infezione è

veicolata dall’aria  

Si  

A. Misure di contenimento   B. Livelli di contenimento  14. Inceneritori per l’eliminazione delle carcasse degli animali   Raccomandato   Si

(disponibile)  Si, sul posto  

15. Mezzi e procedure per il trattamento dei rifiuti   Si   Si   Si, con sterilizzazione  

16. Trattamento delle acque reflue   No   Facoltativo   Facoltativo  

Allegato XLVII: SPECIFICHE SULLE MISURE DI CONTENIMENTO E SUI LIVELLI DI CONTENIMENTO

Misure generali che devono essere comunque adottate Il datore di lavoro deve obbligatoriamente (art.272):   limitazione del numero dei lavoratori potenzialmente esposti;   minimizzazione delle emissioni tramite sicure tecniche da adottarsi in sede progettuale ed operativa   misure di protezione collettive ed individuali   misure igieniche atte ad evitare la propagazione dell'agente al di fuori del luogo di lavoro   uso del segnale di rischio biologico   elaborazione di procedure di emergenza;   sistemi per la raccolta e lo smaltimento dei rifiuti   procedure per la manipolazione ed il trasporto di agenti biologici all'interno del luogo di lavoro

Rischio  di  inoculazione   Aghi,  siringhe,  bisturi,vetreria  roMa,  sbeccata  possono  causare  tagli,  abrasioni  inoculazioni  indesiderate.  Fare  molta  aMenzione  nell’impiego  di  siringhe,  u@lizzare  gli  apposi@  contenitori  rigidi  in  plas@ca  per  raccogliere  siringhe  e  bisturi    

Rischio  Respiratorio   Omogenizzazione,  centrifugazione,  apertura  di  tappi  a  pressione  possono  creare  aereosol  biologici  che  penetrano  nel  nostro  sistema  respiratorio.  Usare  sempre  cappe  biologiche.  

Rischio  orale   Evitare  sempre  di  pipeJare  a  bocca.  Proteggere  la  bocca  con  mascherina  o  schermo  facciale.  VietaU  alimenU  e  bevande  in  laboratorio  

Rischio  oculare   Le  mucose  in  genere  ed  in  parUcolare  quelle  degli  occhi  possono  essere  punto  di  ingresso  di  contaminanU  biologici.Indossare  mascherina  proteXva  e  occhiali  proteXvi  in  caso  di  rischio  fuoriuscita  materiale  patogeno.  Evitare  di  usare  lenU  a  contaJo  in  laboratorio.  

Rischio  per  contaJo   Mantenere  sempre  pulito  e  disinfeJato  la  superficie  di  lavoro.  Indossare  indumenU  e  guanU  adeguaU.    

Rischi in laboratorio biologico

Contenimento dei microrganismi  

Poiché l'esposizione dei lavoratori è essenzialmente dipendente dal contatto diretto (o indiretto) con i microrganismi utilizzati, il

fattore essenziale da controllare è il loro contenimento. Si possono identificare due livelli principali di contenimento:

disegno dei laboratoriadozione di impianistica estrumentazione adeguata

contenimento fisico

procedure operative di esercizioprocedure di emergenzaaddestramento/ formazione

contenimento operativo

Livelli di contenimento

MEZZI DI PROTEZIONE: livelli di contenimento

Laboratori con livello di contenimento 1

Il primo livello non ha particolari esigenze, sia di progettazione che di contenimento del laboratorio. Deve avere:   livello di contenimento etichettato con il segnale di rischio biologico   Banconi lisci, facili da pulire, impermeabili ai liquidi e resistenti ad agenti chimici e ai disinfettanti.   Attrezzature per il lavaggio delle mani

MEZZI DI PROTEZIONE: livelli di contenimento

LIVELLO 1: Procedure per manipolare gli agenti biologici Procedure standard   Indossare camice e guanti   Lavarsi frequentemente le mani   Minimizzare l’aerosol   Utilizzare pipette pneumatiche   Decontaminare le superfici di lavoro giornalmente   Decontaminare i rifiuti e smaltirli negli appositi contenitori Procedure speciali NON RICHIESTE  

Il lavoro microbiologico deve essere condotto in laboratori appropriati allo scopo e il livello di contenimento di ciascun laboratorio deve essere etichettato mediante affissione sulla porta del segnale di pericolo biologico. I laboratori oltre alle caratteristiche presenti in classe 1 devono essere dotati di: Aerazione, possibilmente meccanica, che assicuri un flusso d'aria entrante senza

ricircolo. Se non esiste aerazione meccanica, le finestre devono essere apribili. Cappa di sicurezza biologica Autoclave, nel laboratorio o nell'edificio Stutture per riporre DPI all'interno del laboratorio Strutture per lavaggio mani, occhi Sistema d'inattivazione degli effluenti biologici prima dello scarico Sistemi di sicurezza, sistemi antincendio,

presidi di pronto soccorso

Laboratori con livello di contenimento 2

MEZZI DI PROTEZIONE: livelli di contenimento

Nei laboratori che trattano materiali con sospetta contaminazione da agenti biologici patogeni (sangue, fluidi corporei, tessuti) per l'uomo e nei locali destinati ad animali da esperimento possibili portatori

di tali agenti debbono essere adottate misure corrispondenti ad almeno il

secondo livello di contenimento (D.L.81/2008 art.275).

Per i locali destinati ad alloggiare animali da esperimento debbono in parallelo essere

applicati i disposti del D.L116/92.

LIVELLO 2: Procedure per manipolare gli agenti biologici

Procedure standard   rimangono valide le indicazioni date per il livello 1   Lavorare sotto Cappa biologica di classe II Procedure speciali   Usare contenitori per aghi e taglienti   Usare plasticheria   Sottoporsi a vaccinazioni   Tenere registro degli incidenti e delle contaminazioni accidentali   Sorveglianza sanitaria

TIPO DICAPPA CARATTERISTICHE GENERALI PROTEZIONE IMPIEGHI

FLUSSOLAMINAREORIZZONTALE

Area frontale aperta; l’aria filtrataattraverso il filtro HEPA posto dietrola parete di fondo si muoveorizzontalmente parallela al piano dilavoro verso l’apertura frontale cioèverso l’operatore

campione preparazioni sterili, es.terreni per microbiologia

FLUSSOLAMINAREVERTICALE

Area frontale aperta; l’aria filtrataattraverso il filtro HEPA si muoveverticalmente dall’alto verso il bassocioè verso il piano di lavoro doveviene in parte espulsa e in partericircolata, il flusso laminare verticaleproduce una aspirazione di aria esternache crea una barriera di protezione perl’operatore ed impedisce lacontaminazione del campione

operatorecampione

materiale non patogeno,colture cellulari

Cappe biologiche

MEZZI DI PREVENZIONE: adeguate attrezzature

CLASSE   aria  in  ricircolo   CARATTERISTICHE   IMPIEGHI   PROTEZIONE  

%   operatore   ambiente   campione  

                         I  

apertura  frontale,  il  contenimento  è  dato  dall’aria  esterna  richiamata  dall’apertura  frontale,  filtro  HEPA  sull’aria  in  uscita  

basso  rischio;  microrganismi  di  gruppo  1-­‐2    

buona   oXma   scarsa  

Cappe di sicurezza biologica classe 1

MEZZI DI PREVENZIONE: adeguate attrezzature

CLASSE  aria  in  ricircolo  

CARATTERISTICHE   IMPIEGHI   PROTEZIONE  

%   operatore   ambiente   campione  II  A   70  

apertura  frontale  che  permeJe  l’ingresso  dell’aria,  flusso  laminare  verUcale  nell’area  di  lavoro  filtro  HEPA  sull’aria  in  ingresso  ed  in  uscita  se  oltre  al  campione  biologico  sono  presenU  sostanze  mutagene,  cancerogene,  radioaXve  l’aria  espulsa  deve  essere  convogliata  all’esterno  

medio  rischio  microrganismi  di  gruppo  2-­‐3    

buona   oXma   oXma  

II  B1   30  

II  B2   0  

Cappe di sicurezza biologica classe 2

MEZZI DI PREVENZIONE: adeguate attrezzature

MEZZI DI PREVENZIONE: adeguate attrezzature

Cappe di sicurezza biologica classe 3

CLASSE  aria  in  ricircolo  

CARATTERISTICHE   IMPIEGHI   PROTEZIONE  

III  

chiusura  ermeUca,  funzionano  in  pressione  negaUva,  accesso  consenUto  da  guanU;  filtro  HEPA  sull’aria  in  ingresso,  

doppio  filtro  HEPA  sull’aria  in  uscita  

alto  rischio;  microrganismi  di  

gruppo  4    oXma   oXma   buona  

Dispositivi di Protezione Individuale

I camici proteggono dalla contaminazione gli abiti da lavoro e devono essere indossati quando si svolgono attività con agenti infettivi, sangue o altri liquidi organici o materiali biologici. Devono essere sempre indossati prima di accedere ai laboratori e riposti prima di uscire. Essi devono avere le seguenti caratteristiche:

  essere sufficientemente aerati   avere l'apertura dietro e i polsini elastici per garantire una protezione adeguata   essere in cotone per poter essere sterilizzabili   effettuare un cambio giornaliero quando si opera con microrganismi particolarmente pericolosi   utilizzare tute monouso testate al ΦXI74, copriscarpe, cuffia,   mascherina e occhiali quando si compiono operazioni in laboratori con livello di contenimento 3

Protezione della persona:camici

Protezione di viso e occhi.Nei laboratori di ricerca, poiché si manipolano sia agenti biologici che agenti chimici, èopportuno utilizzare DPI per gli occhi ed il viso che proteggano le mucose e la pelle daeventuali schizzi, aerosol ed esposizione a radiazioni. Gli occhiali per la protezione degliocchi per legge devono proteggere:dal rischio meccanico (resistenti all’impatto),dal rischio di radiazioni (filtri per UV, IR)dal rischio chimico. Le lenti antiurto e antigraffio sono generalmente in policarbonato (molto leggere), acetato, vetro temperato (buona resistenza ai prodotti chimici).

Per la protezione del viso da schizzi, aerosol,polveri, si possono utilizzare visiere faccialicostituite da calotte a cui viene applicato unoschermo incolore.

I DPI per la protezione degli occhi e del viso devono avere marcatura EN166.

I DPI delle vie respiratorie sono:

1) le mascherine protettive in fibra, che racchiudono un filtro monouso della tipologia desiderata, si adattano facilmente al viso, non formano condensa, sono le più semplici e meno costose

2) le maschere facciali (naso-bocca o per il viso), che possono montare filtri di varie tipologie

I filtri, delle mascherine monouso e delle mascherefacciali, vengono classificati in base al potere filtrante in filtri: P1, per particelle inerti che non presentano tossicità P2S, per particelle solide di sostanze tossiche nocive P2SL, per particelle solide-liquide di sostanze tossico-nocive P3S, per particelle solide di sostanze molto tossiche P3SL, per particelle solide-liquide di sostanze moto tossiche.

Questo filtro è quello consigliato per la manipolazione di microrganismi (EN149-2001).

3) autorespiratori, da utilizzarsi solo in condizioni lavorative estreme, costituiti da una maschera facciale che riceve aria respirabile che

può essere, o contenuta in una bombola indossata dall’operatore, oppure essere prelevata tramite una tubazione in un ambiente non

inquinato

È importante segnalare che fino ad oggi non esistono guanti capaci di dare una protezione assoluta. I guanti monouso per rischio biologico devono:   avere marcatura EN374 (guanti testati alla permeabilità del microrganismo ФX174 che è il microrganismo di riferimento per i test relativi la permeabilità biologica)   non essere indossati per un tempo superiore a 30'

  essere scartati se presentano difetti visibili ad occhio nudo

  non devono mai essere lavati e/o riutilizzati Procedura per rimuovere i guanti

Protezione della persona: GUANTI

Protezione della persona: GUANTI

Precauzioni Lavare le mani accuratamente e immediatamente se

si verifica un contatto accidentale con sangue o fluidi

corporei, anche se l’operatore ha indossato i guanti.

Quando si opera con prodotti ad alto rischio è

opportuno prendere alcune precauzioni:

- Indossare un doppio paio di guanti, il primo paio

di guanti deve essere al di sotto del polsino del

camice, il secondo paio deve essere al di sopra

- Rimuovere sempre il paio di guanti esterni ed

eliminarli ogni volta che si tolgono le mani dal

piano di lavoro o si verifica uno spargimento di

materiale

Divieti

Disinfezione in laboratorio Uso generale

Soluzione di ipoclorito di sodio   Grosso versamento/elevata carica batterica soluzione indiluita   Piccolo versamento/inattivazione dei virus soluzione al 10 % (1:9)   Disinfezione generale delle superfici soluzione all’ 1% (1:99)

Raccolta dei rifiuti sanitari a rischio infettivo: imballaggi

I rifiuti sanitari a rischio infettivo devono essere raccolti già nel luogo di produzione (reparto o laboratorio) in appositi imballaggi a perdere recanti la scritta “Rifiuti sanitari pericolosi a rischio infettivo” e il simbolo del rischio biologico

Rischio biologico

Raccolta dei rifiuti sanitari a rischio infettivo: imballaggi

Nel caso possano essere presenti materiali taglienti (es. siringhe, lame, …) devono essere utilizzati imballaggi rigidi a perdere, resistenti alla puntura, recanti la scritta “Rifiuti sanitari pericolosi a rischio infettivo”.