LABORATORIUM PENELITIAN TERPADU

SDM

LAB PENGUJIAN

APA TARGET KOMPETENSI?

KESESUAIAN KEBUTUHAN PASAR DI SEI MANGKEI? NASIONAL?REGIONAL?

PERALATAN

SDM

GEDUNGURGENSI

PENDIRIAN

Kualitas

PersonilPersonil PeralatanPeralatan

kualifikasi

kalibrasi

ketangguhan

kualifikasi

MetMetodaoda

sesuai

Karakteristik

dokumentasi

keterampilan

KEBUTUHAN MINIMAL LABORATORIUM PENGUJIAN BERBASIS ISO/IEC 17025

Kualitas Metoda analisis

sesuai

RuanganBBaahan han Manajemen

Kualitas

Acuan pembanding

Suhu

DukunganAnalis

keterampilan

kelembaban

Getaran waktu

Pasokan

Irradiasi

METODE DALAM ISO 17025METODE DALAM ISO 17025

SNI/ISO 17025: “5.4.5.1 Validasi adalah konfirmasi melalui pengujian dan penyediaan bukti objektif bahwa persyaratan tertentu untuk suatu maksud khusus dipenuhi”.

FDA (Guidelines for the Validation of Chemical Methods for the FDA Foods Program; Version 1.0 2/28/2012)“Method validation is the process of demonstrating or confirming that a method is suitable for its intended purpose”

METODE DALAM ISO 17025: VALIDASIMETODE DALAM ISO 17025: VALIDASI

Validation of analytical procedures is the process of determining the suitability of a given methodology for providing useful analytical data. (Guerra, Pharm. Tech. March 1986)

Validation is the formal and systematic proof that a method compiles with the requirements for testing a product when observing a defined procedures. (G. Maldener, Chromatographia, July 1989)

METODE DALAM ISO 17025: VALIDASIMETODE DALAM ISO 17025: VALIDASI

Eurachem (2014) : The Fitness for Purpose of Analytical MethodsA Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics

Eurachem (2014)Method validation is basically the process of defining an analytical

requirement, and confirming that the method under consideration has capabilities consistent with what the application requires

European and International regulatory bodies and their guidelines on different aspects of QA

Body Full name Guidance on

Eurachem Focus for Analytical Chemistry in Europe Method validation

CITAC Cooperation of International Traceability in Analytical Chemistry

Proficiency testing

Quality Assurance

EA European Cooperation for Accreditation Accreditation

CEN European Committee for Normalization Standardization

IUPAC International Union of Pure & Applied Chem. Method validation

11

IUPAC International Union of Pure & Applied Chem. Method validation

ISO International Standardization Organisation Standardisation

AOAC

ILAC

Association of Official Analytical Chemists

International Laboratory Accreditation Cooperat.

Internal qual. Control

Proficiency testing

Accreditation

FDA US Food and Drug Administration Method validation

USP United States Pharmacopoeia Method validation

ICH International Conference on Harmonization Method validation

USEPA U.S. Environmental Protection Agency Validation and Peer Review

METO

DE D

ALAM

ISO

17025

METO

DE D

ALAM

ISO

17025

METO

DE D

ALAM

ISO

17025

METO

DE D

ALAM

ISO

17025

METODE DALAM ISO 17025METODE DALAM ISO 17025

USP Data Elements Required For Assay Validation

Analytical

Performance

Parameter

Assay Category 1

Assay Category 2Assay

Category 3Quantitative Limit Tests

Accuracy Yes Yes * *

Precision Yes Yes No Yes

Specificity Yes Yes Yes *

LOD No No Yes *

LOQ No Yes No *

Linearity Yes Yes No *

Range Yes Yes * *

Ruggedness Yes Yes Yes Yes

* May be required, depending on the nature of the specific test.

Category 1: Quantitation of major components or active ingredients Category 2: Determination of impurities or degradation products Category 3: Determination of performance characteristics

ICH Validation Characteristics

Type of Analytical

Procedure

IdentificationImpurity testing

AssayQuantitative Limit Tests

Accuracy No Yes No Yes

Precision

Repeatability No Yes No Yes

Interm. Prec. No Yes No YesInterm. Prec. No Yes No Yes

Specificity Yes Yes Yes Yes

LOD No No Yes No

LOQ No Yes No No

Linearity No Yes No Yes

Range No Yes No Yes

Eurachem (2014) : The Fitness for Purpose of Analytical MethodsA Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics

Health Canada Methods Validation Parameter Requirements for Various Types of Tests

FDA Foods Program Guidelines for Chemical Methods(Guidelines for the Validation of Chemical Version 1.0 2/28/2012)

standard levels of performance for method validation of analytical regulatory methods for chemical analytes in foods

Parameter Validasi: selektivitas/spesifivitas

Specific generally refers to a method that produces a response for a single analyteonly

Selective refers to a method which provides responses for a number of chemical entities that may or may not be distinguished from each other

Selectivitty (or specificity) : The ability of a method to determine accurately and specifically the analyte of interest in the presence of other components in a sample matrix under the stated conditions of the test (Euachem 2014 & NATA tech. Note 13)

Selectivity (in analysis):a. ‘Qualitative - the extent to which other substances interfere with the

determination of a substance according to a given procedure.’ [IUPAC determination of a substance according to a given procedure.’ [IUPAC Compendium of Chemical Terminology, 1987]

b. Quantitative - A term used in conjunction with another substantive (e.g. constant, coefficient, index, factor, number) for the quantitative characterisationof interferences.’[IUPAC Compendium of Chemical Terminology, 1987]

Parameter Validasi: selektivitas/spesifivitas

Acuan Prosedur Validasi Keberterimaan

USP/ICH:

- identifikasi Melakukan analisis terhadap bahan acuan /sampel yang mengandung analat (positif), gabungan yang positif+negatif, dan sampel yang mengadung senyawa yang secara struktur sama/berhubungan dengan analat (hasil degradasi, pengotor, atau matriks)

Selektif/spesifik jika menghasilkan mampu membedakan

- Analisis Melakukan spiking analat/produk dengan Pengotor dapat pengotor pengotor pada konsentrasi yang sesuai. ditentukan dengan

tingkat akurasi dan presisi yang baik

- Assay - Melakukan spiking analat/produk dengan pengotor /eksepien pada konsentrasi yang sesuai .

- Membandingkan dengan metode standar terhadap bahan yang mengandung pengotor/hasil degradasi

- Melakukan stress kondisi penyimpanan terhadap analat (hidrolisis, oksidasi, dll) dan dilakukan pengujiannya

Assay tidak dipengaruhioleh adanya pengotor tersebut dengan tingkat akurasi dan presisi yang baik

Forced Degradation Studies

• Temperature (50-60℃)

• Humidity (70-80%)

• Acid Hydrolysis (0.1 N HCl)

• Base Hydrolysis (0.1 N NaOH)

• Oxidation (3-30%)

• Light (UV/Vis/Fl)

Intent is to create 10 to 30 % Degradation

Parameter Validasi: selektivitas/spesifivitas

Acuan Prosedur Validasi Keberterimaan

Eurachem Melakukan analisis dari sampel dan bahan acuan dengan metode yang akan divalidasi dan metode standar. Dilakukan sekali

Metode mampu mengonfirmasi identitas analat dan mampu mengukur analat dengan akurasi dan presisi yang baik

Melakukan analisis sampel yang mengandung pengganggu. Dilakukan

Pengganggu tidak mengurangi mengandung pengganggu. Dilakukan

sekalimengurangi (menghambat) deteksi atau kuantifikasi analat

Institute of Validation Technology

Menganalisis placebo sesuai dengan metode analisis yang dikembangkan

Tidak menunjukkan hasil yang positif

IUPAC Melakukan analisis terhadap sampel blanko (placebo) dan sampel yang mengandung analat pada berbagai deret konsentrasi analat. Menentukan nilai sensitivitas indek (ban/bint)

Mampu mengukur analatdengan akurasi dan presisi yang baik & nilai indeks sensitivitas tinggi (>0.99)

Contoh penentuan selektivitas/spesifivitas

% RSD for the peak area of EPA and DHA from six replicate injections of standard solution should be not more than 10%

The placebo should not show any interference at the retention time of the EPA and DHA in the standard and sample solution.

Retention times of EPA and DHA peaks from sample shall match to that of the peaks from standard solution.

Parameter Validasi: selektivitas/spesifivitas

Acuan Prosedur Validasi Keberterimaan

Eurachem Melakukan analisis dari sampel dan bahan acuan dengan metode yang akan divalidasi dan metode standar. Dilakukan sekali

Metode mampu mengonfirmasi identitas analat dan mampu mengukur analat dengan akurasi dan presisi yang baik

Melakukan analisis sampel yang mengandung pengganggu. Dilakukan

Pengganggu tidak mengurangi mengandung pengganggu. Dilakukan

sekalimengurangi (menghambat) deteksi atau kuantifikasi analat

Institute of Validation Technology

Menganalisis placebo sesuai dengan metode analisis yang dikembangkan

Tidak menunjukkan hasil yang positif

IUPAC Melakukan analisis terhadap sampel blanko (placebo) dan sampel yang mengandung analat pada berbagai deret konsentrasi analat. Menentukan nilai sensitivitas indek (ban/bint)

Mampu mengukur analatdengan akurasi dan presisi yang baik & nilai indeks sensitivitas tinggi (>0.99)

Parameter Validasi: PRESISI

IUPAC : the closeness of agreement between independent test results obtained under stipulated conditions

ICH: The closeness of agreement (degree of scatter) between a series of measurements obtained from multiple samplings of the same homogeneous sample.

FDA: Degree of agreement of replicate measurements under specified conditions.

USP : the degree of agreement among individual test results when the procedure is applied repeatedly to multiple samplings of a homogeneous procedure is applied repeatedly to multiple samplings of a homogeneous sample

Parameter Validasi:Presisi

Acuan Prosedur Validasi Keberterimaan

USP/ICH:

Repeatability

Standar : Melakukan pengukuran standar sebanyak 5-6 kali ulangan oleh satu analis menggunakan 1 alat pada hari yang sama dalam 1 laboratorium.Sampel :Melakukan analisis sampel sebanyak 5-6 kali ulangan, 3 matrik yang berbeda dengan 1-3 konsentrasi yang berbeda oleh satu analis menggunakan 1 alat pada hari

Nilai RSD<2/3*CV HorwithzCV horwithz := 2^(1-0.5*log C)

C= fraksi konsentrasi

berbeda oleh satu analis menggunakan 1 alat pada hari yang sama dalam 1 laboratorium.

Parameter Validasi:Presisi

Acuan Prosedur Validasi Keberterimaan

Eura-chem dan IUPAC:Repeatability,intermediet, reprodu

Standar : Melakukan pengukuran standar sebanyak 5-6 kali ulangan oleh satu analis menggunakan 1 alat pada hari yang sama dalam 1 laboratorium.Sampel :Melakukan analisis terhadap bahan acuan, atau arsipsampel, atau spiked blank sampel pada beberapa konsentrasi dalam rentang analisis. Desain percobaannya :a. Analisis oleh satu analisis dengan alat , waktu, dan di

laboratoium yang sama sebanyak 6-15 ulangan untuk

Nilai RSD<2/3*CV HorwithzCV horwithz := 2^(1-0.5*log C)C= fraksi konsentrasi

a. Nilai RSD<2/3*CV Horwithz

b. Nilai reproducibility

laboratoium yang sama sebanyak 6-15 ulangan untuk setiap bahan/sampel (repeatability)

b. Analisis oleh analis dan alat yang berbeda pada jangka waktu yang diperpanjang sebanyak 6-15 ulangan untuk setiap bahan/sampel (intermediet)

c. Analisis oleh analis dan alat yang berbeda dalam laboratorium yang sama pada jangka waktu yang diperpanjang sebanyak 6-15 group dari duplo analisis untuk setiap bahan/sampel (repeatability& intermediet)

d. Analisis oleh analis dan alat yang berbeda dalam laboratorium yang berbeda pada jangka waktu yang diperpanjang sebanyak 6-15 group dari duplo analisis untuk setiap bahan/sampel (repeatability& reproducibility)

b. Nilai RSD<2/3*CV Horwithz (antar hari)

c. Hasil analisis ANOVA

d. Hasil analisis ANOVA

Standar deviasi repeatabilty :

Parameter Validasi:Presisi

Standar deviasi repeatabilty :

Standar deviasi intermediet:

Parameter Validasi:PresisiKadar (ppm)

ulangan hari-1 hari-2 hari-3 hari-4 hari-51 2.05 1.9 2.1 2 1.952 2.1 2 2.05 2.05 2

Anova: Single FactorSUMMARY

Groups Count Sum Average VarianceColumn 1 2 4.15 2.075 0.00125Column 2 2 3.9 1.95 0.005Column 3 2 4.15 2.075 0.00125

Column 4 2 4.05 2.025 0.00125Column 4 2 4.05 2.025 0.00125Column 5 2 3.95 1.975 0.00125

ANOVA

Source of Variation SS df MS F P-value F critBetween Groups 0.026 4 0.0065 3.25 0.114094 5.192168Within Groups 0.01 5 0.002Total 0.036 9

Nilai RSD 2/3*CV HowithzSr 0.045 2.236 9.640Sbetwen 0.021

SI 0.049 2.475 9.644

P-value >0.05 Tidak berbeda (95%)

RSD<2/3*CV horwithz presisi

Parameter Validasi:Akurasi

Akurasi = mengukur kualitas hasil; akurasi = mengekspresikan ketepatan hasil terhadap satu nilai acuan (berupa true value atau konvensional value)

Akurasi memiliki 2 komponen = “trueness dan presisi “ Trueness = mengekspresikan seberapa dekat hasil terhadap nilai acuan Bias = ekspresi kuantitatif dari trueness

Konsep yang disajikan dalam eurachem dan NATA (Technical Note17) mengenai akurasi

Parameter Validasi:Akurasi

BIAS

Bias Metode

Bias laboratorium

Bias yang ditujukan pada pelaksanaan

Cara menentukan BIAS: Melakukan analisis terhadap CRM Melakukan uji recovey (spiked) Membandingkan dengan metode

yang baku Melakukan analisis terhadap bahan

acuan

Bias harus meliputi

Konsep yang disajikan dalam eurachem dan NATA (Technical Note17) mengenai Trueness

pada pelaksanaan pengukuran

Bias harus meliputi -lingkup metode dan 10 kali ulangan

- melakukan analisis dengan tipe sampel yang berbeda dan atau konsentrasi

berbeda

Center for Drug Evaluation and Research (CDER), FDABias dengan Recovery dilakukan analisis minimal 3 konsentrasi

yang berbeda dengan 3 ulangan yang berbeda

CIPAC Guidelines on method validation to be performed in support of analytical methods for agrochemical formulations

At least 4 recoveries should be done, following exactly the proposed procedure

Parameter Validasi:Akurasi Kriteria keberterimaan

AOAC manual for the Peer Verified Methods program

CIPAC:a. Hitung rerata dan RSD dari recoveinyab. Lakukan uji F (ANOVA) untuk RSD-nya untuk menyatakan repeatabilitas

bahwa tidak ada perbedaan yang signifikan c. Lakukan uji t untuk hasil recoveri dan bandingkan dengan t-tabel pada

tingkat kepercayaan 95% . Jika nilai t-hitung <t-hitung maka hasil recoveri tidak berbeda signifikan dengan true value

x = sample mean; = true value; n = no. of samples; s = standard deviation

Parameter Validasi:Akurasi Kriteria keberterimaan

n = no. of samples; s = standard deviation

Hasil uji recovery (ppm) Nilai benar 2.05 2.1 1.9 2 2.1 2.05 2 2.05 1.95 2 2.00

CONTOH:

P-value > 0.05 sehingga tidak berbeda dengan nilai true value

Parameter Validasi:IDL, MDL, LOQ Both LOD and LOQ are normally calculated by multiplying a standard deviation

(S0’) by a suitable factor. Prosedur Validasi

Eurachem: Melakukan analisis sample blanko (matrik

yang mengandung analat tak terdeteksi) atau mengukur sampel uji dengan konsentrasi analat yang rendah sebanyak 10 kali ulangan.

Jika sampel blanko tidak ada, maka dilakukan dengan mengukur blanko reagent atau blanko reagent yang dispiked dengan analat konsentrasi rendah. konsentrasi rendah.

Hitung standar deviasi (s0’), LoD =3xs0’ atau 3.3 x s0’; LoQ=5/6/10 x s0’

Cara Lain LoQ (EURACHEM) tentukan presisi untuk menghitung LoQSiapkan sampel spiked encerkan dan ukuran 6kali hitung RSD tiap konsentrasiPlot presisi vs konsentrasi loQ =konsentrasi yang diharapkan presisinya

Parameter Validasi:IDL, MDL, LOQ

Parameter Validasi:IDL, MDL, LOQ

Regression StatisticsMultiple R 0.99888R Square 0.99776Adjusted R Square 0.997312Standard Error 0.432848 Sy/x=SBObservations 7

Coefficients Standard ErrorCoefficients Standard ErrorIntercept 1.517857 0.294936001X Variable 1 1.930357 0.040900264

intercept YbRespon LoD (Yb+3*SB) 2.8164LoD (pg/mL) 0.672696

James N Miller & Jane C Miller. 2010.Statistics and Chemometrics for AnalyticalChemistry

Parameter Validasi:IDL, MDL, LOQ

critical value, xC, the minimum detectable value, xD

yD = yb + 3sb

yI = yb + 6sb

ISO 11843

IUPAC

CARA MENENTUKAN MDL Perkirakan MDL dari metode analisis, dan buatlah spiked sampel dengan

konsentrasi 2.5 atau 5 kali MDL prediksi Lakukan pengujian spiked sample konsentasi 2.5/5 kali MDL sesuai prosedur

pengujiannya, tentukan nilai recovey-nya. Jika rentang recovery berkisar 70-130%

Parameter Validasi:IDL, MDL, LOQ (EPA 40 CFR Part 136, APPENDIX B Revision 1.11)

Method Detection Limit (MDL) is the minimum concentration of a substance that can be measured and reported with 99% confidence that the analyte concentration is greater than zero, and is determined from analysis of a sample in a given matrix containing the analyte.

pengujiannya, tentukan nilai recovey-nya. Jika rentang recovery berkisar 70-130% maka lanjutkan pengujian dengan spiked sampel sebanyak 10 kali

Hitung MDL dengan Rumus: MDL = t(n-1;1-=0.99)* S

Kriteria Keberterimaan MDL: MDL<Spike level <MDLx10 MDL<regulation S/N estimasi (rerata/SD)<10 Recovery : 70-130%

sampel hasil (ug/L recovery (%)blanko <50 -sampel 1 25.4 127sampel 2 22.1 110.5sampel 3 23.6 118sampel 4 16.9 84.5sampel 5 22.3 111.5sampel 6 19.3 96.5sampel 7 23.5 117.5

Parameter Validasi:IDL, MDL, LOQ (EPA 40 CFR Part 136, APPENDIX B Revision 1.11)

Pesyaratan keterangan

MDL<spiked OK

Spiked <10*MDL OK

S/N <10 OK

Recovery =70-130 OKsampel 7 23.5 117.5spiked 20rerata 21.87 109.36SD 2.88t-student 3.143MDL 9.04LoQ 28.77S/N 7.60

Parameter Validasi:LINIERITAS & RENTANG

Prosedur (eurachem)

Mengukur blanko dan standar 2-3 kali dari konsentrasi terendah dan tertinggi sebanyak 6-10 konsentrasi dalam kisran linier dan dilakukan 1 kali

Prosedur (FDA – CDER)

Mengukur blanko dan standar kalibrasi dengan penambahan konsentrasi terkecil dan terbesar ±10 atau ± 20 %; misalnya indicates from 0.8to 120 mg/L jika tanget rentang 1-100 mg/L

Mengukur 10 atau ± 20 % dari target konsentrasi klaim dai sampel, linier dan rentang jika nilai r2=0.999

ICH :• Assay : 80-120% of the theoretical content of active• Content Uniformity: 70-130%• Dissolution: ±20% of limits; eg if limits cover from 20% to 90% l.c. (controlled

release), linearity should cover 0-110% of l.c.• Impurities: reporting level to 120% of shelf life limit• Assay/Purity by a single method: reporting level of the impurities to 120% of assay

limit• Correlation coefficient (r) : API: ≥ 0.998; Impurities: ≥ 0.99

United nations office on drug and crime (UNODC):Linier : correlation coefficient = 0.99

Parameter Validasi:LINIERITAS & RENTANG

Standar Sampel

Cara lain menentukan:LINIERITAS & RENTANG

Parameter Validasi:RUGGEDNESS & ROBUSTNESS

USP : Ruggedness as defined in USP XXll < I225>, 1990 incorporates the concepts described under the terms "intermediate precision", reproducibility" and "robustness" of this guide

Robustness tests examine the effect operational parameters have on the analysis results.

For the determination of a method’s robustness a number of chromatographic parameters, for example, : flow rate, column temperature, injection volume, injection volume, detection wavelength or mobile phase composition are varied within a

realistic range and the quantitative influence of the variables is determine

Robustness may be determined during development of the analytical procedure.

FORMAT PROTOKOL DAN PELAPORAN DALAM VALIDASI

COVER

VALIDATION REPORT TITLELogo (optional)

Document Prepared By (individual or entity)Contact Information (optional)

Project Title Name of project

Version Version number of this validation report

Report ID Identification number of this document

Report Title Title of this validation report

Client Client for whom the report was prepared

Pages Number of pages of this report

Date of Issue DD-Month-YYYY report issued

Prepared By Validation/verification body that prepared this report

Contact Physical address, telephone, email, websiteContact Physical address, telephone, email, website

Approved By Individual at the validation/verification body who approved this validation report

Work Carried Out

By

Individuals who conducted this validation

Summary:

Provide a brief summary of the following:

A brief description of the validation and the project

The purpose and scope of validation

The method and criteria used for validation

The number of findings raised during validation

Any uncertainties associated with the validation

Summary of the validation conclusion

FORMAT PROTOKOL DAN PELAPORAN DALAM VALIDASI

KOMPONEN DALAM IK PROTOKOL DAN PELAPORAN VERIFIKASI/VALIDASI: TUJUAN : penjelasan singkat mengenai apa yang akan dilakukan dalam

verifikasi/validasi dan menjelaskan lingkup metode, komoditi, dan parameternya RINGKASAN : deskipsi umum tentang metode, identifikasi jenis metode dan acuan

validasi, aplikasi metode uji dan protokol validasi,...... SUMBER DAYA : mengidientifikasi bagian yang akan menggunakan metode ini,

peralatan, bahan, dan instruksi khusus untuk penanganan, stabillitas, dan penyimpanan setiap bahan

PROSES DAN HASIL VALIDASIa. Spesifisitas/selektivitas:a. Spesifisitas/selektivitas:

a.1. Prosedur:a.2. Dokumen a.3. Keberterimaan

b. Linieritasb.1. Prosedur:b.2. Dokumen c.3. Keberterimaan

DEVIASI DARI METODE KESIMPULAN LAMPIRAN