USULAN PENELITIAN DOSEN

EFEK DIURESIS EKSTRAK ETANOL AKAR KEMANGI HUTAN

(Ocimum sanctum, Linn) PADA TIKUS PUTIH JANTAN

Oleh:

Apt. Yohana Krisostoma Anduk Mbulang, S.Farm., M.Farm

0813099201

UNIVERSITAS CITRA BANGSA

KUPANG

September 2020

HALAMAN PERSETUJUAN

Nama penelitian: Efek Diuresis Ekstrak Etanol Akar Kemangi Hutan (Ocimum

Sanctum, Linn) Pada Tikus Putih Jantan

Peneliti

a. Nama : apt. Yohana Krisostoma Anduk Mbulang,

S.Farm., M.Farm

b. NIDN : 0813099201

c. Jabatan Fungsional :-

d. Program Studi : Sarjana Farmasi

e. Nomor HP : 081236220863

f. Alamat Surel (email) : ayepa92@gmail.com

Bersama ini, kami menyatakan bahwa usulan penelitian ini asli dan layak untuk

diajukan dan kami menjamin terlaksananya penelitian ini.

Kupang, 07 September 2020

Menyetujui,

Ketua LPM Universitas Citra Bangsa Kepala Bidang P2M

Dr. Drs. Abdul Majid, M.Kes Vinsensius B. Lemaking, S.KM., M.Kes

Mengetahui,

Rektor Universitas Citra Bangsa

(Prof. Dr. Frans Salesman, SE., M.Kes)

HALAMAN PENGESAHAN

EFEK DIURESIS EKSTRAK ETANOL AKAR KEMANGI HUTAN (Ocimum

sanctum, LINN) PADA TIKUS PUTIH JANTAN

apt. Yohana Krisostoma Anduk Mbulang, S.Farm., M.Farm

Telah diujikan dan dipertanggung jawabkan didepan tim pakar/reviewer pada

Hari:

Mengesahkan,

Ketua LPM Universitas Citra Bangsa Kepala Bidang P2M

Dr. Drs. Abdul Majid, M.Kes Vinsensius B. Lemaking, S.KM., M.Kes

Mengetahui,

Rektor Universitas Citra Bangsa

(Prof. Dr. Frans Salesman, SE., M.Kes)

IDENTITAS DAN URAIAN UMUM

1. Judul penelitian : Efek Diuresis Ekstrak Etanol Akar Kemangi Hutan

(Ocimum Sanctum, Linn) Pada Tikus Putih Jantan

2. Tim Peneliti :

No Nama Jabatan Bidang Keahlian

1 apt. Yohana Krisostoma Anduk

Mbulang, S.Farm., M.Farm

Ketua Farmasi Sains minat

Bahan Alam

2 - - -

3. Objek Penelitian : Penelitian ini dilakukan untuk melihat efek diuresis

ekstrak etanol akar kemangi hutan (Ocimum Sanctum, Linn) Pada Tikus Putih

Jantan

4. Masa Pelaksanaan :

Mulai : September 2020

Berakhir : Februari 2020

5. Usulan Biaya Penelitian: Rp. 10.375.000,-

6. Lokasi Penelitian : Laboratorium Universitas Citra Bangsa

7. Instansi lain yang terlibat: Fakultas pertanian Agroteknologi Universitas Nusa

Cendana , Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Nusa Cendana &

Laboratorium kimia Universitas Widya Mandira Kupang

PERNYATAAN ORISINALITAS

Yang bertanda tangan dibawah ini:

Nama : apt. Yohana Krisostoma Anduk Mbulang, S.Farm., M.Farm

NIDN : 0819118802

Alamat : Perumahan Puri Cendana, TDM II

Dengan ini menyatakan:

1. Karya ini adalah asli dan belum pernah diajukan dalam penelitian manapun.

2. Karya ini adalah murni gagasan, rumusan dan penelitian sendiri.

3. Karya ini tidak terdapat karya atau pendapat yang telah ditulis atau

dipublikasikan orang lain, kecuali secara tertulis jelas dicantumkan sebagai

acuan dalam naskah dengan disebutkan nama pengarang dan judul buku asli

serta dicantumkan dalam daftar pustaka.

4. Pernyataan ini dibuat dengan sesunggunya dan tanpa paksaan dari pihak

manapun.

5. Apabila dikemudian hari terdapat penyimpangan dan ketidaksesuaian dalam

pernyataan ini maka bersedia mengembalikan dana yang telah diberikan dan

sanksi lain yang telah disepakati.

Kupang, September 2020

Peneliti

apt. Yohana Krisostoma Anduk Mbulang, S.Farm., M.Farm

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ........................................................................................ i

HALAMAN PERSETUJUAN ......................................................................... ii

HALAMAN PENGESAHAN .......................................................................... iii

IDENTITAS DAN URAIAN UMUM ............................................................ iv

HALAMAN PERNYATAAN ......................................................................... v

KATA PENGANTAR ..................................................................................... vi

DAFTAR ISI .................................................................................................... vii

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... ix

DAFTAR TABEL ............................................................................................ x

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xi

BAB I PENDAHULUAN ............................................................................. 1

1.1. Latar Belakang .......................................................................... 1

1.2. Perumusan Masalah ................................................................... 9

1.3. Tujuan Penelitian ....................................................................... 9

1.4. Manfaat Penelitian ..................................................................... 9

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ..................................................................... 10

2.1. Tanaman kemangi ........................................................................ . 10

2.1.1. Konsep kemangi hutan ...................................................... 10

2.1.2. Klasifikasi tanaman kemangi hutan .................................. 10

2.1.3. Penamaan Tanaman Kemangi hutan ................................. 11

2.1.4. Morfologi tanaman kemangi ............................................. 11

2.1.5. komponen kimia ............................................................... 14

2.1.6. Manfaat ............................................................................. 15

2.2. Senyawa metabolit sekunder ........................................................ 15

2.2.1. Alkaloid .......................................................................... 15

2.2.2. Flavonoid ......................................................................... 20

2.2.3.Saponin .............................................................................. 23

2.2.4. Tanin ................................................................................. 25

2.2.5. Triterpenoid dan Steroid ................................................... 28

2.3. Metode Ekstraksi Simplisia ........................................................... 33

2.4.1. Simplisia ........................................................................... 33

2.4.2. Ekstraksi ............................................................................ 33

2.4.3. Maserasi ............................................................................ 37

2.4.4. Pelarut ............................................................................... 37

2.5. Analisis Komponen Senyawa Kimia ............................................. 38

2.5.1. Kromatografi Lapis Tipis.................................................. 38

2.6. Diuretik .......................................................................................... 44

2.6.1. Pengertian Diuretik ........................................................... 44

2.6.2. Proses Terjadinya Diuresis ............................................... 44

2.6.3. Mekanisme Kerja Diuretik ................................................ 45

2.6.4. penggolongan Diuretik ..................................................... 46

2.6.5. Furosemid ......................................................................... 48

2.7. Hewan Uji ..................................................................................... 49

2.7.1. Morfologi Hewan Uji ........................................................ 49

2.8. Kerangka Konsep .......................................................................... 51

2.9. Hipotesis ........................................................................................ 52

BAB III. METODE PENELITIAN.................................................................. 53

3.1. Desain dan Rancangan Penelitian .............................................. 53

3.2. Populasi dan Sampel .................................................................. 53

3.2.1.Populasi .............................................................................. 53

3.2.2. Sampel .............................................................................. 53

3.2.3. Sampling ........................................................................... 54

3.3. Variabel Penelitian ...................................................................... 54

3.4 Definisi Operasional Variabel ................................................. 54

3.5. Alat, Bahan dan Hewan Uji ...................................................... 54

3.5.1. Alat .................................................................................... 54

3.5.2. Bahan ................................................................................. 55

3.5.3. Hewan Uji .......................................................................... 55

3.6. Jalannya Penelitian..................................................................... 55

3.6.1. Pengambilan Sampel ........................................................ 55

3.7. Uji Efek diuresis ......................................................................... 60

3.7.1.Pembuatan Larutan ............................................................ 60

3.7.2. Penentuan dosis Furosemid .............................................. 60

3.7.3. Penentuan dosis akar Kemangi ......................................... 60

3.7.4. perlakuan Hewan uji ......................................................... 60

3.8. Analisa Statistik ........................................................................ 61

BAB IV. BIAYA DAN JADWAL PENELITIAN .......................................... 63

A. Anggaran Biaya .......................................................................... 63

B. Jadwal Penelitian ........................................................................ 63

DAFTAR PUSTAKA…. ................................................................................. 64

LAMPIRAN ..................................................................................................... 68

DAFTAR TABEL

Nomor Judul Halaman

Tabel 2.1. Nama Kemangi Hutan Dari Beberapa Negara ............................... 68

Tabel 2.2. Nama Kemangi Hutan Dari Beberapa Daerah ...............................

DAFTAR GAMBAR

Nomor Judul Halaman

Gambar 2.1. Daun Kemangi Hutan .................................................................. 68

Gambar 2.2. Batang Kemangi Hutan ...............................................................

Gambar 2.3. Bunga Kemangi Hutan ................................................................

Gambar 2.4. Buah Kemangi Hutan ..................................................................

Gambar 2.5. Akar Kemangi Hutan ..................................................................

Gambar 2.6. Komponen Kimia Kemangi Hutan ..............................................

Gambar 2.7. Struktur Beberapa Senyawa Alkaloid .........................................

Gambar 2.8. Struktur Beberapa Jenis Senyawa Flavanoid ..............................

Gambar 2.9. Struktur Dasar Senyawa Saponin Steroid dan Triterpenoid........

Gambar 2.10. Reaksi Senyawa Saponin dan Air .............................................

Gambar 2.11. Struktur Senyawa Tanin Terhidrolisis dan

Tanin Terkondensasi .................................................................

Gambar 2.12. Reaksi Senyawa Tanin dan Gelatin ...........................................

Gambar 2.13. Struktur Senyawa Steroid dan Triterpenoid ..............................

Gambar 2.14. Reaksi Lieberman Burchard ......................................................

Gambar 2.15. Struktur Molekul Etanol ............................................................

Gambar 2.16. Struktur Kimia KLT ..................................................................

DAFTAR LAMPIRAN

Nomor Judul Halaman

Lampiran 1. Perhitungan Dosis Furosemid dan Volume Pemberiannya

Pada Tikus ................................................................................... 68

Lampiran 2. Perhitungan Variasi Dosis Ekstrak Akar Kemangi Hutan

Dan Volume Pemberian Pada Tikus ...........................................

BAB 1

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Masalah kesehatan yang terjadi pada kalangan masyarakat yang cukup

dominan diberbagai negara adalah semakin banyaknya penderita tekanan

darah tinggi atau hipertensi, khususnya pada penduduk yang tinggal di kota-

kota besar. Hal ini disebabkan karena masyarakat cenderung memilih gaya

hidup yang tidak sehat, seperti mengonsumsi makanan cepat saji, alkohol

dan merokok. Hipertensi sering disebut sebagai the silent deseases karena

tidak menimbulkan tanda dan gejala(Dalimartha et al., 2008).

Hipertensi adalah faktor risiko tersering penyebab infark miokard, stroke,

gagal jantung, fibrilasi arteri, diseksi aorta, dan penyakit arteri perifer. Ini

adalah salah satu penyakit kronis paling umum yang dihadapi dunia

(Schutte A et al., 2013) dan tetap menjadi penyebab utama kematian di

seluruh dunia dan salah satu masalah kesehatan masyarakat terbesar di

dunia.

Hipertensi merupakan kelainan yang ditandai dengan meningkatnya

tekanan darah yang mempunyai risiko tinggi yang memicu kelainan pada

jantung dan ginjal penyebab utama kejadian hipertensi biasa dipicu oleh

meningkatnya kadar natrium dalam darah. Salah satu sediaan yang

digunakan untuk menanggulangi hipertensi ialah diuretik. Salah satu

sediaan yang dapat digunakan untuk meningkatkan laju urinasi dan

meningkatkan pembentukan volume air seni. istilah diuresis mempunyai dua

pengertian, pertama menunjukkan adanya penambahan volume urine yang

diproduksi dan yang kedua menunjukkan jumlah pengeluaran (kehilangan)

zat-zat terlarut dalam air. Fungsi utama diuretik adalah memobilisasi cairan

edema yang berarti mengubah keseimbangan cairan sedemikian rupa

sehingga volume cairan ekstrasel kembali menjadi normal (Katzung 2007).

Diuretik membantu ginjal membuang garam dan air yang akan

mengurangi volume cairan diseluruh tubuh sehingga menurunkan tekanan

darah. Diuretik juga menyebabkan pelebaran pembuluh darah. Diuretik

menyebabkan hilangnya kalium melalui air kemih sehingga kadang

diberikan tambahan kalium atau obat penahan kalium (Susilo dan Wulandari

2011).

Meskipun banyak obat antihipertensi baru dengan khasiat yang lebih

baik telah diperkenalkan ke pasaran, obat tersebut masih memiliki efek

samping yang serius. Di satu sisi, nutrisi dan latihan fisik menjadi semakin

penting dalam pengobatan hipertensi. Di sisi lain, perhatian baru-baru ini

difokuskan pada sediaan herbal dan mineral yang secara tradisional

digunakan sebagai agen terapeutik potensial dalam pencegahan dan

pengelolaan penyakit kardiovaskular.

Kemangi merupakan tumbuhan tahunan yang termasuk dalam famili

Lamiaceae dan kebanyakan tumbuh di daerah tropis seperti India, Afrika,

dan Asia Selatan (Chang X et al., 2009). Dalam pengobatan tradisional,

kemangi digunakan untuk mengobati banyak gangguan seperti kecemasan,

diabetes, sakit kepala, nyeri saraf, kejang dan penyakit kardiovaskular

termasuk hipertensi (Umar A et al., 2010). Setiap bagian tanaman

digunakan sebagai obat untuk mengobati sakit kepala, batuk, diare,

sembelit, kutil, cacingan, gagal ginjal, dan masalah pencernaan (G. Tsasi et

al., 2017). Kandungan kimia yang berhasil diisolasi dari kemangi antara lain

terpenoid, alkaloid, tanin, saponin glikosida, asam askorbat dan flavonoid

(Syeda B et al., 2012. Penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Preethi G,

et al. (2013) ekstrak etanol 70% dari daun kemangi hutan (Ocimum

sanctum, Linn) pada dosis 250 mg/kg dan 500 mg/kg BB tikus terbukti

memiliki aktivitas diuresis. Hal ini diduga karena dalam kemangi terdapat

senyawa flavonoid. Flavonoid merupakan salah satu dari metabolit sekunder

yang mempunyai khasiat sebagai diuresis dengan mekanisme merangsang

aliran darah regional atau vasidilatasi awal atau menghambat reabsorbsi air

dan anion pada tubulus (Juniora, 2010). Salah satu cara untuk mendapatkan

zat tersebut adalah dengan metode ekstraksi sehingga diperoleh ekstrak

yang mengandung kadar flavonoid yang tinggi.

Ekstrak adalah sediaan cair, kental dan kering yang dibuat dengan

mengestraksi atau menyari simplisia nabati hewani atau nabati dengan

menggunakan penyari yang cocok, diluar pengaruh cahaya matahari.

Pembuatan sediaan ekstrak dimaksudkan agar zat berkhasiat dalam

simplisia terdapat dalam bentuk yang mempunyai kadar yang tinggi dan hal

ini memudahkan dosisnya (Anief, 2003)

Berdasarkan uraian diatas, peneliti tertarik untuk melakukan penelitian

mengenai Uji Efek ekstrak etanol akar kemangi hutan (Ocimum sanctum,

Linn) pada Tikus Putih Jantan.

1.2. Rumusan masalah

Berdasarkan latar belakang masalah tersebut di atas, maka dapat disusun

permasalahan sebagai berikut:

1. Apakah ekstrak akar kemangi hutan (Ocimum sanctum) memiliki efek

diuresis pada tikus putih jantan?

2. Pada dosis berapa dari ekstrak etanol akar kemangi hutan (Ocimum

sanctum) yang memiliki efek diuresis yang paling optimal pada tikus

putih jantan?

1.3. Tujuan penelitian

Tujuan dari penelitian ini adalah :

1. Mengetahui efek diuresis ekstrak etanol akar kemangi hutan (Ocimum

sanctum).

2. Mengetahui dosis yang paling efektif dari ekstrak etanol akar kemangi

(Ocimum sanctum) sebagai diuresis pada tikus putih jantan

1.4. Manfaat penelitian

1. Penelitian ini dapat memberikan informasi ilmiah mengenai efek

diuresis akar kemangi hutan (Ocimum sanctum)

2. Memberi informasi dosis ekstrak akar dan batang kemangi hutan

(Ocimum sanctum) yang efektif diuresis pada tikus putih jantan

3. Menjadi rujukan untuk dikembangkan pada penelitian lanjutan

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. TANAMAN KEMANGI HUTAN

2.1.1. Konsep Kemangi Hutan

Ocimum sanctum yang biasanya dikenal sebagai “Tulsi”dalam

bahasa Hindia dan “Holy Basil” dalam bahasa Inggris adalah ramuan

paling suci bagi umat Hindu di Indiadan milik keluarga (Labiatae)

(Kirtikar dan Basu 1975 : Rainaet al., 2013). Kemangi hutan adalah

tanaman asli India, Iran dan sekarang dibudidayakan di Mesir,

Prancis, Hongaria, Italia, Maroko, AS. Ocimum sanctum secara

alami ditemukan liar di daerah tropis dan subtropis di dunia. Ocimum

sanctum tumbuh subur di iklim hangat dan sedang. Kemangi adalah

ramuan aromatik, tumbuh rendah, daunnya berwarna hijau terang

sampai ungu, dan tumbuh di iklim tropis yang hangat (Khrisna et al.,

2014).

Kemangi hutan memiliki distribusi yang luas, meliputi seluruh

India hingga 1.800 m di Himalaya dan sejauh pulau Andaman

Nicobars (Kirtikar dan Basu 1975:Rainaet al., 2013). Tanaman ini

didistribusikan secara luas di Asia, dan juga ditemukan di Australia,

Afrika Barat dan beberapa negara Arab (Pistrick et al., 2001: Raina

et al., 2013).

2.1.2. Klasifikasi Tanaman Kemangi Hutan

Klasifikasi dari tanaman kemangi hutan menurut Kulkarni dan

Adavirao (2018) adalah sebagai berikut :

Regnum : Plantae

Divisio : Magnoliophyta

Classis : Magnoliopsida

Orde : Lamiales

Family : Labiatae

Genus : Ocimum

Species : Sanctum

2.1.3. Penamaan Tanaman Kemangi Hutan

Kemangi hutan mempunyai nama yang berbeda-beda di berbagai

negara dan daerah tertentu, antara lain :

Tabel 2.1 Nama Kemangi Hutan dari beberapa Negara

Asal Nama Lokal

Inggris Holy basil / sacred basil

Hindi Tulsi

Sansekerta Tulasi

Gujarati Tulsi

Sumber : Kulkarni dan Adavirao (2013: 107)

Tabel 2.2 Nama Kemangi Hutan dari beberapa Daerah

Asal Nama Lokal

Sumatera Ruku-Ruku, Ruruku

Jawa Klampes, Lampes, Kemangen, Koroko

Nusa Tenggara Uku-Uku

Sulawesi Balakama

Maluku Lufe-Lufe, Kemangiutan

Sumber : Khrisna et al. (2014)

2.1.4. Morfologi tanaman kemangi hutan

a. Daun

Daun tunggal, berhadapan, dan tersusun dari bawah keatas.

Pajang tangkai daun 0,25-3 cm dengan setiap helaian daun yang

berbentuk bulat telur sampai elips, memanjang, dan ujung

meruncing atau tumpul. Pangkal daun pasak sampai membulat,

dikedua permukaan berambut halus, Tepi daun bergerigi lemah,

bergelombang atau rata (Sudarsono dkk., 2002).

Gambar 2.1 Daun Kemangi Hutan

b. Batang

Tanaman yang banyak tumbuh didaerah tropis ini merupakan

herba tegak atau semak, tajuk membulat, bercabang banyak,

sangat harum dengan tinggi 0,3-1,5cm. batang pokoknya tidak

jelas, berwarna hijau sering keunguan, dan berambut atau tidak

(Sudarsono dkk., 2002).

Gambar 2.2 Batang Kemangi Hutan

c. Bunga

Bunga kemangi tersusun pada tangkai bunga berbentuk

menegak. Bunganya jenis hemafrodit, berwarna putih dan berbau

sedikit wangi. Bunga majemuk berkarang dan di ketiak daun

ujung terdapat daun pelindung berbentuk elips atau bulat telur

dengan panjang 0,5-1 cm. Kelopak bunga berbentuk bibir, sisi

luar berambut kelenjar, berwarna ungu atau hijau, dan ikut

menyusun buah. Mahkota bunga berwarna putih dengan benang

sari tersisip di dasar mahkota dan kepala putik bercabang dua

namun tidak sama (Sudarsono dkk., 2002).

Gambar 2.3 Bunga Kemangi Hutan

d. Buah

Buah berbentuk kotak berwarna coklat tua, tegak dan tertekan

dengan ujung membentuk kait melingkar. Panjang kelopak buah

6-9 mm. biji berukuran kecil, bertipe keras, coklat tua, dan waktu

diambil segera membengkak, tiap buah terdiri dari empat biji.

Gambar 2.4 Buah Kemangi Hutan

e. Akar

Tanaman kemangi hutan memiliki akar tunggang dan

berwarna putih kotor. (Mangoting dkk., 2005; Sudarsono dkk.,

2002)

Gambar 2.5 Akar Kemangi Hutan

2.1.5. Komponen Kimia

Komponen utama dari kemangi hutan adalah tanin (4,6%) dan

minyak atsiri (hingga 2%). Jumlah unsur utama minyak atsiri

bervariasi sesuai dengan distribusi geografis dan variasi bahan

tanaman sumber: eugenol (hingga 62%), metyleugenol (hingga

86%), dan α- dan β-caryophyllene (hingga 42%), methylchavicol,

linalool dan 1,8-cineole (WHO, 2002).

Kemangi hutan juga mengandung alkaloid, glikosida, saponin,

tanin, sejumlah besar vitamin C, asam maleat, asam sitrat dan asam

tartarat (Anggarwal and Mali, 2015).

Gambar 2.6 Komponen Kimia Kemangi Hutan

Sumber : WHO (2002)

2.1.6. Manfaat

Kemangi hutan telah digunakan selama ribuan tahun dalam

Ayurveda, dalam ilmu kedokteran Hindu, untuk khasiat

penyembuhan yang beragam (Krishna et al., 2014).

Hasil penelitian Samak dkk (2007) menunjukkan bahwa ekstrak

daun kemangi hutan dengan dosis 25, atau 50 mg/kg berat badan

dapat menurunkan LDL-Kolesterol, kolesterol dan trigliserida di

hati dan aorta pada kelinci albino jantan yang diberi kolesterol

0,5g/hari selama 45 hari.

Kemangi hutan dapat berfungsi sebagai obat dan pencegahan

untuk sindrom pernafasan akut yang parah (SARS) yang

penggunaannya dengan cara akar tanaman kemangi

hutandihancurkan kemudian direbus dengan bubuk kunyit selama

beberapa menit, setelah itu disaring. Mengkonsumsi dua sendok

ramuan ini dua kali sehari akan menyembuhkan SARS dan

mencegah tertular penyakit (Aggarwal dan Mali, 2015).

2.2. Senyawa Metabolit sekunder

2.2.1. Alkaloid

a. Konsep Alkaloid

Alkaloid merupakan senyawa yang terdapat pada berbagai

spesies tumbuhan berupa garam asam organik, seperti asam

asetat, asam malat, asam oksalat, asam suksinat, atau beberapa

asam tumbuhan spesifik lainnya (Kar, 2013: 427).

b. Sumber dan Klasifikasi Alkaloid

1) Sumber Alkaloid

Sumber utama alkaloid adalah pada tumbuhan

angiospermae dan gimnospermae.Terutama pada biji, daun,

ranting dan kulit kayunya.Kadaralkaloid yang terkandung

pada masing-masing bagian berbeda-beda. Kulit kayu adalah

bagian yang paling banyak terdapat senyawa alkaloidnya yang

mengandung 10-15% alkaloid (Robinson, 1995:283).

2) KlasifikasiAlkaloid

Alkaloid di klasifikasi menjadi 4 kelompok, antara lain:

a) Klasifikasi Biosintetis

Alkaloid ini merupakan hasil penelitian pada tumbuhan

secara biosintetis, yang dikelompokan berdasarkan

prekursor yang sama, tetapi memiliki distribusi taksonomi

dan aktifitas farmakologi berbeda.

Contoh:

a. Alkaloid indol yang diturunkan dari triptofan

b. Alkaloid piperidin yang diturunkan dari lisin

c. Alkaloid pirolidin yang diturunkan dari ornitin

d. Alkaloid feniletilamin yang diturunkan dari tirosin

e. Alkaloid imidazol yang diturunkan dari histidin

b) Klasifikasi Kimia

Alakaloid diklasifikasikan berdasarkan kriteria inti

heterosiklik utama, antara lain:

1) Alkaloid pirolidin, contohnya higrin

2) Alkaloid piperidin, contohnya lobelin

3) Alkaloid pirolizidin, contohnya senesionin

4) Alakloid tropana, contohnya atropin

5) Alakloid kuinolin, contohnya kuinin

6) Alakloid isokuinolin, contohnya morfin

7) Alakloid aporfin, contohnya boldin

8) Alakloid indol, contohnya ergometrin

9) Alakloid imidazol, contohnya pilokarpin

10) Alakloid diazosin, contohnya lupanin

11) Alakloid purin, contohnya kafein

12) Alakloid steroid, contohnya solanadium

13) Alakloid amino, contohnya efedrin

14) Alakloid diterpen, contohnya akonitin

c) Klasifikasi Farmakologis

Contoh:

1) Morfin sebagai analgestik narkotik

2) Kuinin sebagai anti malaria

3) Striknin sebagai rangsangan refleks

4) Lobelin sabagai stimulant pernapasan

5) Boldin sebagai koleretik dan laksatif

6) Akonitin sebagai neuralgia

7) Pilokarpin sebagai senyawa anti glaukoma dan miotik

8) Ergonovin sebagai oksitoksik

9) Efedrin sebagai bronkodilator

10) Narkein sebagai analgesik (narkotik) dan antitusif

d) Klasifikasi Taksonomik

Klasifikasi khusus ini berdasarkan kategori taksonomik.

Taksa yang paling umum adalah genus, subgenus, spesies,

subspesies, dan sebagainya. Klasifikasi taksonomik

mencakup banyak alkaloid khususnya berdasarkan pada

distribusi masing-masing dalam berbagai famili tumbuhan.

Beberapa contoh umum famili tumbuhan dan berbagai

spesies yaitu:

1. Alkaloid Cannabinaceae, contohnya Cannabis sativa

Linn (ganja, mariyuana)

2. Alkaloid Rubiaceae, contohnya Cinchona Sp (kinin),

Mitragyana speciosa Korth (katum, kratum, kutum)

3. Alkaloid Solananceae, contohnya Atropa belladonna L

(deadly nights head, belladona), Capsicumannum L

(cabaimanis, paprika), Mandragora officinaru L

(mandrak, tomat), Nicotiana glauca R. Grah (pohon

tembakau) (Kar, 2013: 449-450).

Beberapa struktur senyawa alkaloid disajikan pada

gambar berikut :

c. Sifat Fisika Dan Kimia Alkaloid

1) Sifat Fisika Alkaloid

Senyawa alkaloid yang telah diisolasi mempunyai sifat fisik

yang berbeda dan berupa padatan kristal garam dan titik lebur

tertentu, misalnya kokain dengan titik lebur 98°C. Ada

senyawa alkaloid yang tidak mempunyai bentuk yang teratur

(amorf) dan ada yang berupa cairan seperti nikotin dan konim.

Pada senyawa alkaloid yang lain kebanyakan tidak berwarna

tetapi ada senyawa alkaloid yang kompleks mempunyai warna

seperti aromatik, misalnya berberin berwarna kuning dan

betanin berwarnamerah.

Senyawa alkaloid mempunyai warna tertentu juga dapat

larut dalam pelarut tertentu. Pada umumnya, senyawa alkaloid

hanya dapat larut dalam pelarut organik. Meskipun beberapa

Gambar 2.7 Struktur Beberapa Senyawa Alkaloid

(Achmad, 1986: 48)

pseudoalkaloid larut dalam air.

2) Sifat Kimia Alkaloid

Senyawa alkaloid bersifat basa, tergantung adanya

pasanganelectron bebas pada atom nitrogen. Jika suatu

gugus fungsional pada posisi yang berdekatan dengan atom

nitrogen bersifat melepaskan elektron, misalnya gugus alkil,

elektron pada atom nitrogen akan menarik senyawa alkil

sehingga senyawa nitrogen lebih bersifat basa. Sebaliknya jika

suatu gugus fungsional yang berdekatan dengan atom

nitrogen bersifat menarik elektron, misalnya gugus karbonil,

maka kesediaan elektron berkurang dan pengaruh yang

ditimbulkan adalah alkaloid dapat bersifat netral atau bahkan

bersifat asam.

Kebasaan senyawa alkaloid menyebabkan senyawa

tersebut sangat mudah mengalami dekomposisi, terutama

oleh panas sinar matahari dengan adanya oksigen. Hasil

reaksi sering berupa N-oksida. Pembentukan garam dengan

senyawa organik seperti tartarat, sitrat, atau senyawa anorganik

seperti asam hidroklorida atau sulfat sering mencegah

dekomposisi (Robinson, 1995:284-285).

d. Manfaat Alkaloid

Alkaloid dapat dimanfatkan untuk mengobati penyakit asma,

mengurangi rasa sakit akibat asam urat, sebagai antibiotik (untuk

sakit tenggorokan, infeksi kulit), meningkatkan daya pikir,

menurunkan sekresi dan motilitas lambung (Robinson, 1995:283).

e. Identifikasi Alkaloid

Analisis senyawa alkaloid pada suatu ekstrak menggunakan

beberapa reagen seperti reagen Mayer, Wagner dan lain-lain

sebagai berikut:

1. Reagen Mayer

Reagen Mayer dibuat menggunakan KI 6 gram yang

dilarutkan dalam aquades sebanyak 10 mL dan HgCl2 1,358

4 (aq)

gram yang dilarutkan dalam 60 mL aquades, kemudian kedua

larutan KI dan HgCl2 dicampur dan ditambahkan aquades

hingga volume larutan 100 mL.

Reaksi kimia reagen Mayer:

4 KI(aq)+HgCl2(aq) ‹ K2HgI4(aq) +2KCl(aq)

K2HgI4(aq) 2K+

(aq) + HgI2-

Hasil reaksi menunjukan positif mengandung senyawa

alkaloid apabila terdapat endapan putih dalam suasana sedikit

asam (Mulyono, 2005:71). Reaksi alkaloid dengan reagen

Mayer sebagai berikut:

2. ReagenWagner

Reagen Wagner dibuat menggunakan KI 5 gram dan serbuk

I2 4 gram, dilarutkan dalam aquades 100 mL. Reaksi kimia

reagen Wagner sebagai berikut:

4 KI(aq) + HgCl2(aq) K2HgI4 (aq) + 2KCl(aq)

K2HgI4 (aq) 2K+(aq) + HgI4

2-(aq)

Hasil reaksi menunjukan positif mengandung senyawa

alkaloid apabila terdapat endapan coklat dalam suasana sedikit

asam (Mulyono, 2005:65). Reaksi alkaloid dengan reagen

Wagner sebagai berikut:

2.2.2. Flavonoid

a. Konsep Flavonoid

Flavonoid merupakan jenis senyawa yang mengandung fenol

yang banyak terdapat di alam pada tanaman tingkat tinggi.

Flavonoid banyak ditemukan pada bagian tumbuhan seperti

bunga, daun, ranting, buah, kayu, kulit kayu, dan akar. Golongan

flavonoid dapat digambarkan sebagai deretan senyawa C6-C3-C6.

Artinya, kerangka karbon terdiri dari dua gugus C6 (cincin

benzena tersubsitusi). Deretan senyawa ini dapat menghasilkan 3

jenis struktur yakni 1,3 diaril propana (flavonoid), 1,2 diaril

propana (isoflavonoid), dan1,1 diaril propana (neoflavonoid)

(Robinson, 1995:191; Achmad, 1986:2-3).

b. Sumber dan Klasifikasi Flavonoid

1. Sumber Flavonoid

Flavonoid terdapat pada seluruh dunia tumbuhan mulai

dari fungus sampai angiospermae. Pada tumbuhan tinggi,

flavonoid terdapat baik dalam bagian vegetatif maupun dalam

bunga (Robinson, 1995:191).

2. Klasifikasi Flavonoid

Senyawa flavonoid memiliki beberapa turunan yang

sangat bergantung pada tingkat oksidasi rantai propana

diantaranya flavonon, flavanonol, flavon, flavonol, isoflavon,

kalkon, dan sebagainya. Beberapa jenis flavonoid serta

struktur dasar masing-masing jenis disajikan pada Gambar

2.8 berikut ini :

Gambar 2.8 Struktur Beberapa Jenis Flavonoid

Sumber: (Achmad, 1986:16)

c. Sifat Fisika dan Kimia Flavonoid

1. Sifat Kimia Flavonoid

Flavonoid banyak ditemukan sebagai glikosida dan

bersifat basa apabila bereaksi dengan asam mineral

menghasilkan garam flavilium yang berwarna (Achmad,

1986:17).

2. Sifat Fisika Flavonoid

Senyawa flavonoid merupakan zat yang berwarna merah,

ungu, dan biru dan sebagian zat berwarna kuning yang

banyak ditemukan dalam tumbuhan. Flavonoid larut dalam

air, eter, kloroform dan dapat diekstraksi dengan etanol 70%

(Achmad, 1986:17).

d. Manfaat Flavonoid

Manfaat flavonoid pada tumbuhan ialah sebagai pengatur

tumbuh, pengaturan fotosintesis, kerja antimikroba dan antivirus.

Flavonoid banyak digunakan untuk pengobatan tradisional karena

memilik efek terhadap macam-macam organisme. Flavonoid

merupakan komponen aktif tumbuhan untuk mengobati gangguan

fungsi hati sebagai antioksidan dan berfungsi menetralisir radikal

bebas dan dengan demikian meminimalkan efek kerusakan pada

sel dan jaringan tubuh. Radikal bebas adalah molekul yang sangat

reaktif dan tidak stabil akibat telah kehilangan elektron

(Robinson, 1995:191, 193).

e. Idetifikasi Flavonoid

Analisis flavonoid menggunakan pereaksi-pereaksi antara lain:

1. Reagen Wilsater Sianidin

Reagen Wilsater Sianidin dibuat menggunakan larutan

HCl dan serbuk magnesium (Mg). Hasil reaksi menunjukan

positif mengandung senyawa flavonoid apabila terdapat warna

merah, kuning atau orange yang dihasilkan. Reaksi HCl dalam

air sebagai berikut:

HCl(aq) H+

(aq) + Cl-(aq)

Reaksi yang terjadi antara serbuk magnesium dengan

larutan HCl sebagai berikut:

Mg(s) + 2H+(l) Mg2+

(aq) + H2(g)

Reaksi flavonoid dengan reagen Wilstater Sianidin sebagai

berikut:

1) Jika tidak tercampur dengan pigmen lain, flavonoid dapat

dideteksi dengan uap amonia dan akan memberikan warna

spesifik untuk masing-masing golongan. Falavon dan

flavonol akan memberikan warna kuning sampai kuning

kemerahan. Antosianin berwarna merah biru sedangkan

flavononol menimbulkan warna orange dan coklat.

2) Pereaksi aluminium klorida dapat membentuk kompleks

dengan flavonoid menimbulkan warna kuning. Reaksi

antara AlCl3 dengan golongan flavonoid membentuk

kompleks antara gugus hidroksil dan keton yang

bertetangga atau dengan gugus hidroksil yang saling

bertetangga.

2.2.3. Saponin

a) Konsep Saponin

Saponin merupakan senyawa dalam bentuk glikosida yang

terikat dengan steroid atau triterpena. Senyawa saponin tersebar

luas pada tumbuhan tingkat tinggi. Saponin diberi nama demikian

karena sifatnya yang menyerupai sabun atau “sapo” (Robinson,

1995:157).

b) Sumber dan Klasifikasi Saponin

1. Sumber Saponin

Senyawa saponin banyak dijumpai pada tanaman. Saponin

juga ditemukan dalam Gymnostemma pentaphyllum (Genus

Gymnostemma, Famili Cucurbitaceae) dalam bentuk yang

disebut Gipenosida, dan ginseng (Genus Panax, Famili

Araliaceae) dalam bentuk yang disebut ginsenosida. Di dalam

keluarga-keluarga tersebut, golongan senyawa saponin

dijumpai dalam berbagai bagian tanaman antara lain daun,

batang, akar, biji, bunga dan buah (Robinson,1995:157)

2. Klasifikasi Saponin

Saponin dibedakan atas dua jenis yaitu saponin steroid dan

saponin triterpenoid. Saponin steroid tersusun atas inti steroid

(C27) dengan molekul karbohidrat. Saponin steroid dihidrolisis

menghasilkan satu aglikon yang dikenal sebagai sapogenin.

Saponin triterpenoid tersusun atas inti triterpenoid dengan

molekul karbohidrat. Dihidrolisis menghasilkan suatu aglikon

yang disebut sapogenin.

Struktur senyawa saponin dapat disajikan sebagai berikut:

(Robinson, 1995:157).

Gambar 2.9 Struktur Dasar Senyawa Saponin

Steroid dan Triterpenoid

Sumber : (Robinson, 1995:157)

c) Sifat Fisika dan Kimia Saponin

1. Sifat Kimia Saponin

Menghemolisa eritrosit, merupakan racun kuat untuk ikan

dan amfibi, membentuk persenyawaan dengan kolesterol dan

hidroksi steroid, sulit untuk dimurnikan dan diidentifikasi dan

mempunyai berat molekul relatif tinggi (Robinson, 1995:157).

2. Sifat Fisika Saponin

Saponin mempunyai rasa pahit, dalam air membentuk busa

yang stabil.

d) Manfaat Saponin

Manfaat saponin sebagai berikut:

Mengusir kolesterol di usus besar sebelum terserap ke dalam

alirandarah.

Berfungsi sebagai pembersih sekaligusantiseptik.

Mampu mengikat kolesterol dalam darah (Robinson,

1995:157).

e) Identifikasi Saponin

Uji saponin dilakukan dengan metode Forth yaitu dengan cara

memasukan sampel ke dalam tabung reaksi, ditambahkan

aquades, dikocok selama 30 detik. Diamati perubahan yang

terjadi. Apabila terbentuk busa yang mantap (tidak hilang selama

30 detik) maka identifikasi menunjukan adanya saponin.

Timbulnya busa pada uji Forth menunjukan adanya glikosida

yang mempunyai kemampuan membentuk buih dalam air yang

terhidrolisis menjadi glukosa dan senyawa lainya (Robinson,

1983: 157). Reaksinya sebagai berikut:

Gambar 2.10 Reaksi Senyawa Saponin dan Air

Sumber : (Robinson, 1983 : 158)

2.2.4. Tanin

a. Konsep Tanin

Tanin merupakan bagian yang tersebar luas dalam tanaman,

seperti daun, buah yang belum matang, batang dan kulit kayu.

Pada buah yang belum matang, tanin digunakan sebagai energi

dalam proses metabolisme dalam bentuk oksidasi tanin. Tanin

dapat dikatakan sebagai sumber asam pada buah (Robinson,

1995:71).

b. Sumber dan Klasifikasi Tanin

1. Sumber Tanin

Tanin tersebar pada seluruh bagian tumbuhan, seperti pada

daun, batang, kulit kayu, dan buah. Distribusi tanin hampir

diseluruh spesies tanaman dan biasanya ditemukan pada

gymnospermae dan angiospermae. Tanin terletak pada

vakuola atau bagian permukaan tanaman (Robinson,

1995:71).

2. Klasifikasi Tanin

Tanin diklasifikasikan sebagai tanin terhidrolisis dan tanin

terkondensasi. Tanin terhidrolisis mengandung ikatan ester

yang dapat terhidrolisis jika dididihkan dalam asam klorida

encer. Hasil hidrolisis ester adalah gula sederhana seperti

glukosa, dan asam polifenolat seperti asam kuinat, asam

fenolat dan asam galat (Robinson, 1995:71).

Tanin terkondensasi atau disebut proantosianidin,

merupakan polimer dari katekin (flavan-3-ol) dan

leukoantosianidin (flavan-3,4-diol). Senyawa-senyawa ini

termasuk kelompok senyawa flavonoid yang tersebar luas di

alam, dimana struktur senyawanya sebagai berikut:

(Robinson, 1995:193).

Gambar 2.11 Struktur Senyawa Tanin Terhidrolisis dan Tanin

Terkondensasi

Sumber : (Robinson,1995:73,193)

c. Sifat Fisika dan Kimia Tanin

1. Sifat Fisika Tanin

Sifat fisika tanin sebagai berikut:

a. Merupakan senyawa kompleks dalam bentuk campuran

polifenol yang sukar dipisahkan sehingga sukar

mengkristal.

b. Tanin dapat diidentifikasikan dengankromatografi.

c. Senyawa fenol dari tanin mempunyai aksi adstrigensia,

antiseptik dan pemberiwarna.

2. Sifat Kimia Tanin

Sifat kimia tanin sebagai berikut:

a. Apabila dilarutkan ke dalam air, tanin akan membentuk

koloid yang memiliki rasa asam dansepat.

b. Mengendapkan larutan alkaloid.

c. Larutan alkali tanin mampu mengoksidasioksigen.

d. Mengendapkan protein dari larutannya dan bereaksi

dengan protein yang tidak dipengaruhi oleh

enzimprotiolitik.

d. Manfaat Tanin

Manfaat tanin antara lain:

1. Sebagai pelindung pada tumbuhan pada saat masa

pertumbuhan bagian tertentu pada tanaman, misalnya buah

yang belum matang, pada saat matang taninnya hilang.

2. Sebagai anti hama bagi tanaman sehingga mencegah

serangga danfungi.

3. Digunakan dalam proses metabolisme pada bagian tertentu

tanaman.

4. Efek terapinya sebagai adstrigensia jaringan hidup misalnya

pada gastrointestinal kulit.

5. Efek terapi yang lain sebagai antiseptik pada jaringan luka,

misalnya luka bakar, dengan cara mengendapkan protein.

6. Sebagai pengawet dan penyamak kulit.

7. Reagensia di Laboratorium untuk deteksi gelatin, protein dan

alkaloid.

8. Sebagai antidotum (keracunan alkaloid) dengan cara

mengeluarkan asam tamak yang tidak larut.

e. IdentifikasiTanin

Analisis tanin dilakukan mengunakan gelatin. Tanin dapat

mengendapkan gelatin (protein). Hasil reaksi menunjukkan positif

mengandung senyawa tanin apabila terdapat endapan coklat

(Harborne, 1987: 133). Reaksi senyawa tannin dan gelatin sebagai

berikut :

O

OH

HO

OH

OHOH

2-(3,4-dihydroxyphenyl)chroman-3,5,7-triol

+ NC

O

C

H

HN

H

C

O

C

H

CH3

H2N

CHO

NH

CH

CCH2

HN

O

CH2NH

CH2

C

CO

NH

NHNH2

CO

N

C

CH

CH2

CH2

C OO

OH

NHH2C C

O

N

CH

O

Gelatin

NC

O

C

H

H

N

H

C

O

C

H

CH3

H2N

CH

O

N

H

C

H

C

CH2

HN

O

CH2

NH

CH2

C

C

O

NH

NH

NH2

C

O

N

C

CH

CH2

CH2

C OO

OH

NHH2C C

O

N

CH

O

O

O

HO

OH

OHOH

H

O

OH

HO

O

OHOH

H

O

OH

HO

OH

OOH

HO

OH

HO

OH

OOH

H

Ikatan hidrogen antaratanin

dan gelatin

Ikatan hidrogen antara tanindan gelatin

Tanin mengendap

Gambar 2.12 Reaksi Senyawa Tanin dan Gelatin

Sumber: (Harborne, 1987: 133)

2.2.5. Triterpenoid dan Steroid

a. Konsep Triterpenoid dan Steroid

Triterpenoid merupakan senyawa yang kerangka karbonnya

berasal dari enam unit isoprena dan secara biosintesis

diturunkan dari hidrokarbon C30 asiklik. Senyawa ini berstruktur

siklik yang relatif kompleks, kebayakan berupa alkohol, aldehida,

atau asam karboksilat (Harborne, 1987: 174). Sterol merupakan

triterpena yang kerangka dasarnya sistem cincin siklo pentane

perhidrofenantrena (Harborne, 1987:174). Nama sterol dipakai

khusus untuk alkohol, tetapi karena semua steroid tumbuhan

berupa alkohol dengan gugus hidroksil pada C-3, maka sering kali

disebut sterol (Robinson, 1995: 154).

b. Sumber dan Klasifikasi Triterpenoid dan Steroid

1. Sumber Triterpenoid dan Steroid

Triterpenoid tersebar luas dalam damar, gabus dan kutin

tumbuhan. Triterpenoid yang penting adalah hidrokarbon

skualena, yang diisolasi untuk pertama kali dari minyak

hati ikan hiu, tetapi ditemukan juga dalam minyak nabati

(misalnya minyak zaitun). Salah satu senyawa triterpenoid

yang paling dikenal adalah lanosterol terdapat dalam

lemak wol, khamir dan beberapa senyawa tumbuhan tinggi

(Robinson, 1995: 152).

2. Klasifikasi Triterpenoid dan Steroid

Triterpenoid dapat dibagi menjadi 4 golongan senyawa

yaitu triterpen sebenarnya, steroid, saponin dan glikosida

jantung. Menurut asalnya senyawa steroid dibagi atas:

a. Zoosterol, yaitu steroid yang berasal dari hewan misalnya

kolesterol.

b. Fitosterol, yaitu steroid yang berasal dari tumbuhan

misalnya sitosterol dan stigmasterol (Harborne, 1987:148-

149).

Adapun struktur dasar steroid dan triterpenoid sebagai berikut:

Gambar 2.13 Struktur Senyawa Steroi dan Triterpenoid

(http://www.chemspider.com/Chemical-Structure.8229811.html)

c. Sifat Fisika dan sifat Kimia Triterpenoid dan Steroid

1. Sifat Fisika Triterpenoid dan Steroid

Pada temperatur kamar, triterpenoid dan steroid

merupakan cairan tidak berwarna, tetapi jika teroksidasi.

Warna triterpenoid akan berubah menjadi gelap. Triterpenoid

dan steroid mempunyai bau yang khas, indeks bias tinggi,

kebanyakan merupakan senyawa optik aktif, kerapatan lebih

kecil dari air, larut dalam pelarut organik seperti eter dan

alkohol (Sirait,2007:213).

2. Sifat Kimia Triterpenoid dan Steroid

Triterpenoid dan steroid merupakan senyawa tidak jenuh

(rantai terbuka ataupun siklik). Isoprenoid kebanyakan

bentuknya kiral dan terjadi dalam dua bentuk enantiomer

(Sirait, 2007:213).

d. Manfaat Triterpenoid dan Steroid

Senyawa triterpenoid dan steroid memiliki komponen aktif

sebagai obat yang digunakan untuk terapi penyakit diabetes,

gangguan mensturasi, patukan ular, gangguan kulit, kerusakan

hati dan malaria (Robinson, 1983:154).

e. Identifikasi Triterpenoid dan Steroid

Analisis triterpenoid dan steroid banyak digunakan ialah

reaksi Lieberman-Burchard (anhidrat asetat-H2SO4 pekat),

dengan kebanyakan triterpena dan sterol memberikan warna

hijau-biru (Sirait, 2007:213). Reaksinya sebagai berikut :

Gambar 2.14 Reaksi Lieberman-Burchard

(Sirait, 2007:213)

2.3. Sifat Fisikokimia

2.3.1. Massa Jenis

Massa jenis atau Density (ρ) didefinisikan sebagai massa persatuan

volume. Massa jenis merupakan sifat khas dari suatu zat murni. Massa

jenis rata-rata setiap benda merupakan total massa dibagi degan total

volumenya. Secara matematis dapat dituliskan sebagai berikut:

Keterangan:

: Massa jenis

m : Massa

V : Volume

Satuan internasional untuk massa jenis adalah 3m

Kg. Kadang-kadang

massa jenis dinyatakan dalam 3cm

g. Seperti yang diketahui bahwa

3

3

33

10

)100(

10001

cm

g

cm

g

m

kg

, maka massa jenis yang dinyatakan dalam

3cm

g harus dikalikan 1000 untuk memberi hasil dalam

3m

kg.

Cara mencari massa jenis dalam sistem MKS (Meter, Kilogram,

Sekon atau detik) dan cgs (sentimeter, gram, sekon atau detik) yang

merupakan sistem satuan internasional yaitu:

Dalam MKS: v

m dengan satuan )(

3m

kg

Dalam cgs: v

m dengan satuan )(

3cm

g

Massa jenis suatu zat tidak ditentukan oleh massa, volume, dan

bentuk benda, melainkan ditentukan oleh jenis zat. Massa jenis suatu

bahan obat memiliki hubungan terhap aktivitasnya di dalam tubuh

manusia. Semakin besar massa jenis suatu bahan obat menunjukan

molekul obat semakin besar, hal ini berpengaruh terhadap proses difusi

obat dalam sel tubuh semakin lama.

2.3.2. Kelarutan

Kelarutan atau solubilitas merupakan kemampuan suatu zat terlarut,

agar larut dalam suatu pelarut. Kelarutan dinyatakan dalam jumlah

maksimum zat terlarut yang larut dalam suatu pelarut pada

kesetimbangan. Larutan hasil disebut larutan jenuh. Daya larut zat

berbeda-beda, tergantung sifat zat terlarut dan pelarutnya. Ada beberapa

zat yang mudah larut dan ada pula yang sukar larut. Kelarutan dapat

dinyatakan dalam gram zat terlarut per 100 mL atau 100 gram pelarut

(Santoso, 2008:86).

Faktor-faktor yang mempengaruhi kelarutan:

a. Pengaruh Jenis Zat

Zat-zat dengan struktur kimia yang mirip umumnya dapat saling

bercampur dengan baik, sedangkan zat-zat yang struktur kimianya

berbeda umumnya kurang dapat saling bercampur. Senyawa bersifat

polar akan mudah larut dalam pelarut polar, sedangkan senyawa

nonpolar akan mudah larut dalam pelarut nonpolar. Misalnya alkohol

dan air bercampur sempurna, air dan eter bercampur sebagian,

sedangkan minyak dan air tidak bercampur (Santoso, 2008:87).

b. Pengaruh Temperatur

Kelarutan gas umumnya berkurang pada temperatur yang lebih

tinggi. Misalnya jika air dipanaskan, timbul gelembung-gelembung

gas yang keluar dari dalam air, sehingga gas yang terlarut dalam air

menjadi berkurang. Kebanyakan zat padat kelarutannya lebih besar

pada temperatur yang lebih tinggi. Ada beberapa zat padat yang

kelarutannya berkurang pada temperatur yang lebih tinggi, misalnya

natrium sulfat dan serium sulfat (Santoso, 2008:87).

c. Pengaruh tekanan pada kelarutan

Perubahan tekanan pengaruhnya kecil terhadap kelarutan zat cair

atau padat. Perubahan tekanan sebesar 500 atm hanya merubah

kelarutan NaCl sekitar 2,3% dan NH4Cl sekitar 5,1%. Kelarutan gas

sebanding dengan tekanan parsialgas itu (Santoso, 2008:88).

Kelarutan suatu kelompok senyawa obat bahan alam erat

hubungannya dengan aktivitas obat tersebut dalam tubuh manusia.

Polar atau non polarnya suatu senyawa yang masuk ke dalam tubuh

akan menentukan larutnya senyawa tersebut terhadap cairan tubuh

manusia. Apabila senyawa yang masuk ke dalam tubuh bersifat polar

maka akan larut dalam cairan tubuh yang bersifat polar, sebaliknya

apabila senyawa yang masuk ke dalam tubuh bersifat non polar

maka akan larut dalam cairan tubuh yang bersifat non polar

(Siswandono, 1998:7).

2.3.3. Titik Didih

Titik didih adalah suhu pada saat tekanan uap sama dengan tekanan

atmosfer. Titik didih cairan tergantung besarnya tekanan atmosfer.

Makin besar tekanan atmosfer, makin tinggi suhu yang diperlukan

untuk memberikan tekanan uap yang dapat menandinginya. Titik didih

pada tekanan 1 atm (760 torr) dinamakan titik didih normal. Titik didih

merupakan salah satu sifat fisika yang dapat digunakan untuk

memperkirakan secara tidak langsung kuatnya gaya tarik antarmolekul

dalam cairan. Cairan yang gaya tarik antarmolekulnya kuat memiliki

titik didih yang tinggi (Brady, 1999: 562-563).

2.4. Metode Ekstraksi Simplisia

2.4.1. Simplisia

Simplisia adalah bahan alam yang telah dikeringkan yang

digunakan untuk pengobatan dan belum mengalami pengolahan,

kecuali dinyatakan lain suhu pengeringan tidak lebih dari 60°C

(BPOM, 2014). Simplisia dibedakan menjadi simplisisa nabati,

simplisia hewani dan simplisia pelikan atau mineral.

Simplisia nabati adalah simplisia yang berupa tanaman utuh,

bagian tanaman atau eksudant tanaman.Simplisia hewani adalah

simplisia yang berupa hewan utuh, bagian hewan atau zat-zat berguna

yang diperoleh dari hewan piaraan atau hewan liar. Simplisia pelican

atau hewani adalah simplisia yang berupa bahan pelican atau mineral

yang belum diolah atau telah diolah dengan cara sederhana dan belum

berupa zat kimia murni (Endarini, 2016).

Simplisia yang aman dan berkhasiat adalah simplisia yang tidak

mengandung bahaya kimia, mikrobiologis dan bahaya fisik, serta

mengandung zat aktif yang berkhasiat. Ciri simplisia yang baik adalah

dalam kondisi kering (kadar air < 10%), untuk simplisia daun, bila

diremas bergemerisik dan berubah menjadi serpihan, simplisia bunga

bila diremas, bergemerisik dan berubah menjadi serpihan atau mudah

dipatahkan, dan simplisia buah dan rimpang (irisan) bila diremas

mudah dipatahkan. Ciri lain simplisia yang baik dalah tidak berjamur,

dan berbau khas menyerupai bahan segarnya (Herawati dkk., 2012 :

Hartini dan Wulandari, 2016).

2.4.2. Ekstrasi

Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat

larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan

pelarut cair. Simplisia yang diekstrak mengandung senyawa aktif yang

dapat larut dan senyawa yang tidak dapat larut seperti serat,

karbohidrat, protein dan lain-lain. Senyawa aktif yang terdapat dalam

berbagai simplisia dapat digolongkan ke dalam golongan minyak

atsiri, alkaloid, flavonoid dan lain-lain. Dengan diketahuinya senyawa

aktif yang dikandung simplisia akan mempermudah pemilihan pelarut

dan cara ekstraksi yang tepat. Simplisia yang lunak seperti rimpang

dan daun mudah diserap oleh pelarut, karena itu pada proses ekstraksi

tidak perlu diserbuk sampai halus. Simplisia yang keras seperti biji,

kulit kayu dan kulit akar susah diserap oleh pelarut, karena itu perlu

diserbuk sampai halus (Depkes RI, 2000).

Menurut Depkes RI (2000) ekstraksi dibagi menjadi 2 kelompok

yaitu :

1. Ekstraksi dengan menggunakan pelarut

a. Cara dingin

1. Maserasi

Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan

menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau

pengadukan pada temperatur ruangan (kamar). Secara

teknologi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode

pencapaian konsentrasi pada keseimbangan.

2. Perkolasi

Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru

sampai sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya

dilakukan pada temperatur ruangan. Proses terdiri dari

tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap

perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak), terus

menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) yang jumlahnya

1- 5 kali bahan.

b. Cara panas

1. Refluks

Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur

titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut

terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik.

Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu

pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses

ekstraksi sempurna.

2. Soxhlet

Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu

baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga

terjadi ekstraksi kontinu dengan jumlah pelarut relatif

konstan dengan adanya pendingin balik.

3. Digesti

Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan

kontinu) pada temperatur yang lebih tinggi dari temperatur

ruangan (kamar), yaitu secara umum dilakukan pada

temperatur 40 - 50°C.

4. Infus

lnfus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperature

penangas air (bejana infus tercelup dalam penangas air

mendidih, temperatur terukur 96-98°C) selama waktu tertentu

(15 - 20 menit ).

5. Dekok

Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama (~30°C)

dan temperatur sampai titik didih air.

6. Destilasi uap

Destilasi uap adalah ekstraksi senyawa kandungan

menguap (minyak atisiri) dari bahan (segar atau simplisia)

dengan uap air berdasarkan peristiwa tekanan parsial

senyawa kandungan menguap dengan fase uap air dari ketel

secara kontinu sampai sempurna dan diakhiri dengan

kondensasi fase uap campuran (senyawa kandungan menguap

ikut terdestilasi) menjadi destilat air bersama senyawa

kandungan yang memisah sempuma atau memisah sebagian.

2. Cara ekstraksi lainnya

a. Ekstraksi berkesinambungan

Proses ekstraksi yang dilakukan berulangkali dengan

pelarut yang berbeda atau resirkulasi cairan pelarut dan

prosesnya tersusun berturutan beberapa kali. Proses ini

dilakukan untuk meningkatkan efisiensi (iumlah pelarut) dan

dirancang untuk bahan dalam jumlah besar yang terbaqi

dalam beberapa bejana ekstraksi.

b. Superkritikal karbondioksida

Penggunaan prinsip superkritik untuk ekstraksi serbuk

simplisia, dan umumnya digunakan gas karbondioksida.

Dengan variabel tekanan dan temperatur akan diperoleh

spesifikasi kondisi polaritas tertentu yang sesuai untuk

melarutkan golongan senyawa kandungan tertentu.

Penghilangan cairan pelarut dengan mudah dilakukan karena

karbondioksida menguap dengan mudah, sehingga hampir

langsung diperoleh ekstrak .

c. Ekstraksi Ultrasonik

Getaran ultrasonik (> 20.000 Hz.) memberikan efek

pada proses ekstrak dengan prinsip meningkatkan

permiabilitas dinding sel, menimbulkan gelembung spontan

(cavitation) sebagai stres dinamik sertamenimbulkan fraksi

interfase. Hasil ekstraksi tergantung pada frekuensi getaran,

kapasitas alat dan lama proses ultrasonikasi.

d. Ekstraksi energi listrik

Energi listrik digunakan dalam bentuk medan listrik, medan

magnet serta "electric-discharges" yang dapat mempercepat

proses dan meningkatkan hasil dengan prinsip menimbulkan

gelembung spontan dan menyebarkan gelombang tekanan

berkecepatan ultrasonik.

2.4.3. Maserasi

Maserasi berasal dari bahasa latin “macerate” yang berarti

merendam, sehingga maserasi adalah suatu sediaan cair yang dibuat

dengan cara merendam bahan nabati menggunakan pelarut bukan air

atau pelarut setengah air seperti etanol ecer selama waktu tertentu

(Marjoni, 2016).

Maserasi dibuat dengan cara merendam bagian tanaman secara

utuh atau yang sudah digiling kasar dengan pelarut dalam bejana

tertutup pada suhu kamar selama sekurang-kurangnya 3 hari dengan

pengadukan berkali-kali sampai semua bagian tanaman yang dapat

larut melarut dalam cairan pelarut. Campuran ini kemudian disaring

dan ampas yang diperoleh dipres untuk memperoleh bagian cairnya

saja. Kemudian cairan yang diperoleh dijernihkan dengan penyaringan

atau dekantasi setelah dibiarkan selama waktu tertentu (Endarini,

2016).

2.4.4. Pelarut

Pelarut adalah zat yang berada pada larutan dalam jumlah yang

besar, sedangkan zat lainnya dianggap sebagai zat terlarut. Pelarut

yang digunakan pada proses ekstraksi haruslah merupakan pelarut

terbaik untuk zat aktif yang terdapat dalam sampel atau simplisia,

sehingga zat aktif dapat dipisahkan dari simplisia dan senyawa lainnya

yang ada dalam simplisia tersebut. Hasil akhir dari ekstraksi ini adalah

didapatkannya ekstrak yang hanya mengandung sebagian besar dari

zat aktif yang diinginkan. Pelarut yang digunakan dalam proses

ekstraksi memiliki beberapa sifat penting, antara lain: kemampuan

melarutkan, kecepatan menguap, trayek didih, berat jenis dan

flashpoint (Marjoni, 2016).

Etanol merupakan pelarut yang bersifat polar. Etanol dapat

melarutkan berbagai macam zat aktif seperti alkaloid, glikosida, dan

minyak atsiri. Selain itu, etanol juga dapat berfungsi sebagai

antimikroba dengan menghambat kerja dari enzim, menghalangi

pertumbuhan jamur dan bakteri. Keuntungan dari penggunaan etanol

sebagai pelarut adalah ekstrak yang dihasilkan lebih spesifik, dapat

bertahan lama, karena selain sebagai pelarut etanol juga berfungsi

sebagai pengawet (Marjoni, 2016).

Gambar Struktur Molekul Etanol

Sumber : Wusnah dkk. (2016)

2.5. Analisis Komponen Senyawa Kimia

2.5.1. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Kromatografi lapis tipis (KLT) merupakan metode pemisahan

campuran analit degan mengelusi analit melalui lempeng kromatografi

lalu melihat komponen/analit yang tepisah denganpenyemprotan atau

pengecatan. Dalam bentuk yang sederhana, lempeng-lempeng

kromatografi lapis tipis dapat disiapkan di laboratoium, lalu lempeng

diletakan pada wadah dengan ukuran yang sesuai. Selanjutnya

kromatogram hasil dapat discanning secara visual. Dalam bentuk yang

lebih canggih, terdapat berbagai jenis lempeng kromatografi lapis

tipis. Tektik penotolan sampel, termasuk alat penotolan sampel yang

diotomatisasi, tempat pengembangan, alat pendeteksi, serta penyerap

(fase diam). Pada kromatografi lapis tipis fase diam berupa lapisan

yang seragam (uniform) pada permukaan bidang datar yang didukung

oleh lempeng kaca, aluminium, atau lepeng plastik. Fase gerak

sebagai pelarut pengembang akan bergerak sepanajng fase diam

karena pengaruh kapiler pada pengembangan secara mekanik, atau

karena pengaruh gravitasi pada pengembangan secara menurun.

Beberapa keuntungan kromatografi lapis tipis sebagai berikut :

1. Kromatografi lapis tipis banyak digunakan untuk tujuan analisis.

2. Identifikasi pemisahan komponen dapat dilakukan dengan preaksi

warna, fluoresensi, atau dengan cara radiasi menggunakan sinar

UV.

3. Dapat dilakukan elusi secara menaik, menurun, atau dengan cara

elisi dua dimensi.

4. Ketepatan penentuan kadar akan lebih baik karena komponen yang

akan ditentukan merupakan bercak yang tidak bergerak (Gandjar

dan Rhoman, 2012: 329).

Struktur kimia KLT dapat dilihat pada gambar dibawah ini:

Gambar 2.15Struktur Kimia KLT

Sumber :(Gandjar dan Rhoman, 2012: 329)

Komponen-komponen yang terdapat dalam kromatografi lapis tipis

antara lain:

a. Fase diam atau penjerap

Fase diam yang digunakan dalam kromatografi lapis tipis (KLT)

merupakan penyerap berukuran kecil dengan diameter partikel 10-

30 µm, semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase diam dan

semakin sempit kisaran fase diam, maka semakin baik kinerja

kromatografi lapis tipis dalam hal efisiensi dan resolusinya.

Penjerap yang paling sering digunakan adalah silika, serbuk

selulosa, sementara mekanisme sorpsi yang utama pada

kromatografi lapis tipis adalah partisi dan adsorbsi. Lempeng

kromatografi lapis tipis telah tersedia di pasaran dengan berbagai

ukuran dan telah ditambah dengan reagen fluoresen untuk

memfasilitasi deteksi bercak solut (Gandjar dan Rohman,

2012:334). Beberapa fase diam yang sering digunakan dalam KLT

(Gandjar dan Rohman, 2012:335-341) antara lain :

1) Silica gel

Silica gel merupakan penyerap yang paling sering digunakan

dalam kromatografi lapis tipis. Silica gel disiapkan dengan

hidrolisis natrium silikat dengan asam polisilikat yang

mengalami kondensasi dan polimerisasi lebih lanjut

menghasilkan bahan silica gel.

Daya pisah dan efisiensi pemisahan yang diperoleh

tergantung pada ukuran dan distribusi ukuran partikel. Daya

pisah akan meningkat seiring dengan semakin seragam dan

kecilnya ukuran partikel. Lempeng kromatografi lapis tipis silica

gel yang beredar di pasaran mempunyai rata-rata ukuran partikel

10 m dengan kisaran ukuran partikel yang lebih sempit.

Lempeng-lempeng kromatografi lapis tipis tersedia dengan

indikator fluoresen (bahan yang berfluoresensi atau berpendar),

yang biasanya berupa seng silikat atau fosfor yang diaktivasi

oleh mangan, yang akan mengemisikan suatu fluoresensi hijau

ketika diradiasi/disinari dengan lampu UV pada panjang

gelombang 254 nm. Senyawa-senyawa yang mampu menyerap

sinar UV akan muncul sebagai bercak-bercak.

2) Keiselguhr (Celit)

Keislguhr (Celit) merupakan tanah yang tersusun atas

organisme laut mikroskopik yang kaya akan silica dan disebut

dengan diatom. Bahan ini mempunyai polaritas dan luas

permukaan yang besar. Keiselguhr sendiri tidak mempunyai

sifat absorptive yang kuat, tetapi keiselguhr dapat dilapiskan

pada fase diam cair berlilin; karena alasan inilah maka bahan ini

digunakan sebagai pendukung fase diam dalam kromatografi

partisi. Keislguhr (Celit) yang dilapiskan dengan cairan paraffin

digunakan dalam uji farmakope untuk trigliserida dan asam-

asam lemak dalam minyak.

3) Alumina

Alumina (aluminium oksida) merupakan penyerap yang kuat

dan dapat beerfungsi sebagai penukar ion amfoterik, tergantung

pada sifat permukaan dan pelarut yang digunakan.

4) Serbuk selulosa

Lapisan-lapisan serbuk selulosa merupakan agregasi partikel-

partikel dengan ukuran yang sangat kecil sehingga diperlukan

aliran fase gerak yang lebih banyak dengan difusi senyawa-

senyawa terlarut yang kecil. Selulosa mengandung air yang

teradsorbsi yang tertahan pada struktur glukopiranosa dengan

ikatan hidrogen. Dengan demikian pemisahan terjadi melalui

mekanisme partisi. Bahan-bahan selulosa hamper digunakan

secara eksklusif untuk pemisahan senyawa-senyawa hidrofilik

seperti asam amino dan gula.

b. Fase gerak atau pelarut pengembang

Fase gerak merupakan medium angkut yang terdiri atas satu

atau beberapa pelarut. Fase gerak bergerak di dalam fase diam,

yaitu suatu lapisan berpori, karena ada gaya kapiler. Profil pada

pemisahan kromatografi lapis tipis dapat dimodifikasi dengan

mengubah rasio distribusi, mengubah komposisi fase gerak,

memperhatikan polaritas dan kekuatan elusinya.

Sistem yang paling sederhana adalah campuran dua pelarut

organik karena daya elusi campuran kedua pelarut tersebut dapat

mudah diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi

secara optimal. Pelarut/fase gerak yang digunakan harus cukup

murah dan mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena

kromatografi lapis tipis merupakan teknik yang sensitif. Daya elusi

fase gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf terletak

antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan (Gandjar dan

Rohman, 2012: 342).

c. Aplikasi (penotolan) sampel

Suatu sampel ditotolkan pada lempeng kromatografi lapis tipis.

Lempeng kromatografi lapis tipis tidak boleh rusak selama

penotolan sampel.Biasanya ditotolkan 1-10 µl larutan. Untuk

menotolkan disarankan agar menggunakan mikropipet berujung

runcing, khusus berskala 1 µl dan bervolume 10 µl (Stahl, 1985 :

10). Pemisahan pada kromatografi lapis tipis akan lebih optimal

jika sampel yang ditotolkan berada dalam bercak yang sekecil dan

sesempit mungkin. Apabila sampel yang ditotolkan terlalu banyak

maka akan menurunkan resolusi (Gandjar dan Rohman, 2012:345).

d. Pengembangan kromatografi lapis tipis

Pengembangan adalah proses pemisahan senyawa akibat pelarut

pengembang merambat naik dalam lempeng kromatografi lapis

tipis. Pemisahan senyawa dilakukan dalam suatu bejana

kromatografi (chamber) yang telah dijenuhkan dengan uap eluen.

Tujuan penjenuhan bejana kromatografi adalah untuk memperoleh

homogenitas atmosfer dalam bejana, sehingga dapat meminimalisir

penguapan pelarut pada lempeng kromatografi lapis tipis selama

dalam pengembangan (Stahl, 1985:11).

Bejana kromatografi harus dalam keadaan tertutup setelah eluen

dimasukkan dan saat lempeng kromatografi lapis tipis dimasukkan

setelah penotolan, bejana tidak boleh dibiarkan terbuka terlalu

lama, karena jika terbuka lama maka dapat menyebapkan

penyebaran elusi tidak merata atau tidak horisontal. Pada saat

dimasukkan ke dalam bejana, lempeng kromatografi lapis tipis

yang telah ditotoli harus tercelup kurang lebih 0,5-1 cm. Tinggi

eluen dalam bejana harus berada di bawah totolan pada lempeng

kromatografi lapis tipis (Gandjar dan Rohman, 2012:346).

e. Deteksi bercak/noda

Bercak pemisahan pada kromatografi lapis tipis umumnya

merupakan bercak yang tidak berwarna, sehingga untuk

penentuannya dapat dilakukan dengan cara kimia maupun fisika.

Secara kimia dapat dilakukan dengan mereaksikan bercak dengan

suatu pereaksi tertentu melalui penyemprotan sehingga bercak

menjadi jelas menujukkan adanya suatu kelompok senyawa

tertentu. Cara fisika yang dilakukan adalah engan proses radioaktif

dan fluorensi dibawa sinar ultra violet (UV) dengan panjang

gelombang 254 atau 366 nm (Gandjar dan Rohman, 2012:351).

Dalam kromatografi lapis tipis dan kromatografi kertas, hasil

yang diperoleh digambarkan dengan mencantumkan nilai Rf yang

merujuk pada migrasi relatif analit terhadap ujung depan fase gerak

atau eluen. Nilai Rf dapat didifenisikan sebagai:

(Gandjar dan Rohman, 2012: 330)

Pemisahan kromatografi lapis tipis dikendalikan oleh rasio

distribusi komponen dalam sistem fase diam/ penyerap dan elen

tertentu. Pemisahan pada kromatografi lapis tipis dapat

dimodifikasi dengan mengubah rasio disribusi dengan mengubah

kompoen fase gerak dengan memperhatikan polaritas dan kekuatan

elusinya. Berikut adalah beberapa petunjuk dalam memilih dan

mengoptimalisasi fase gerak:

1. Fase gerak harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi

karena kromatografi lapis tipis merupakan teknik yang sensitif.

2. Daya elusi gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga

Rf terletak antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan.

3. Untuk pemisahan dengan menggunakan fase diam polar seperti

silika gel, polarisasi fase gerak akan menentukan keceparan

mugrasi solut yang berarti juga menentukan nilai Rf.

Penambahan pelarut yang bersifat sedikit polar seperti dietil

eter ke dalam pelarut non polar seperti metil benzena akan

meningkatkan harga Rf secara signifikan.

Solut-solut ionik dan solut-solut polar lebih baik digunakan

campuran pelarut sebgai fase geraknya seperti campuran air dan

metanol dengan perbandingan tertentu. Penambahan sedikit asam

etanoat atau amonia masing-masing akan meningkatkan solut-solut

bersifat basa dan asam (Gandjar dan Rohman, 2012: 342).

2.6. Diuretik

2.6.1. Pengertian Diuretik

Diuretik adalah obat yang dapat menambah kecepatan

pembentukan urin. istilah diuresis mempunyai dua pengertian,

pertama menunjukkan adanya penambahan volume urin yang

diproduksi dan yang kedua menunjukkan jumlah pengeluaran

(kehilangan) zat-zat terlarut dan air. Fungsi utama diuretik adalah

untuk memobilisasi cairan edema, yang berarti mengubah

keseimbangan cairan sedemikian rupa sehingga volume cairan

ekstrasel kembali menjadi normal.

Diuretik berperan dalam penurunan tekanan darah yang terjadi

setelah penggunaan senyawa ini berlangsung 2 fase. Penurunan

tekanan darah mula-mula terjadi akibat peningkatan eksresi natrium.

Konsentrasi ion natrium terjadi penurunan akibatnya volume plasma

dan volume menit jantung akan turun, sebaliknya tekanan perifer

(secara reflektoris) agak naik. Pada fase kedua, volume plasma akan

dinormalkan kembali dan eksresi natrium akan hampir sama dengan

harga awal terapi. Penurunan tekanan darah pada fase ini

kemungkinan terutama disebabkan oleh kurangnya kandungan

natrium dalam dinding pembuluh (Nurihardiyanti et al., 2015).

2.6.2. Proses Terjadinya Diuresis

Proses diuresis dimulai dengan mengalirnya darah kedalam

glomeruli (gumpalan kapiler), yang terletak dibagian luar ginjal.

Dinding glomeruli inilah yang bekerja sebagai saringan halus yang

secara pasif dapat dilintasi air, garam dan glukosa. Ultrafiltrat yang

diperoleh dari filtrasi dan mengandung banyak air serta elektrolit

ditampung di wadah, yang mengelilingi setiap glomerulus seperti

corong (kapsul Bowman) dan kemudian disalurkan ke pipa kecil.

Tubuli ini terdiri dari bagian proksimal dan distal, yang letaknya

masing-masing dekat dan jauh dari glomerulus, kedua bagian ini

dihubungi oleh sebuah lengkungan (Henle’s loop). Di sini terjadi

penarikan kembali secara aktif dari air dan komponen yang sangat

penting bagi tubuh, seperti glukosa dan garam-garam, antar lain ion

Na+. Zat–zat ini dikembalikan pada darah melalui lapiler yang

mengelilingi tubuli. Sisanya yang tak berguna seperti “sampah”

perombakan metabolisme protein untuk sebagian besar tidak diserap

kembali.

Akhirnya filtrat dari semua tubuli ditampung di suatu saluran

pengumpul (ductus colligens), di mana terutama berlangsung

penyerapan air kembali. Filtrat akhir disalurkan ke kandung kemih

dan ditimbun sebagai urin. Dengan demikian ultrafiltrat yang setiap

harinya dihasilkan rata-rata 180 liter oleh seorang dewasa,

dipekatkan sampai hanya lebih kurang 1 liter air kemih. Sisanya,

lebih dari 99% direabsorbsi dan dikembalikan pada darah. Dengan

demikian suatu obat yang cuma sedikit mengurangi reabsorbsi

tubuler, misalnya dengan 1% mampu melipatgandakan volume

kemih (Tjay et al., 2007).

2.6.3. Mekanisme Kerja Diuretik

Menurut Tjay et al (2007) kebanyakan diuretika bekerja dengan

cara mengurangi natrium dan air sehingga pengeluarannya lewat

kemih. Obat-obat ini bekerja khusus terhadap tubuli, tetapi juga di

tempat lain, yaitu :

a. Tubuli Proksimal

Ultrafiltrat mengandung sejumlah besar garam yang di sini

direabsorbsi secara aktif untuk kurang lebih 70%, antara lain ion

Na+ dan air, begitu pula glukosa dan ureum. Karena reabsorbsi

berlangsung secara proporsional, maka susunan filtrat tidak

berubah dan tetap isotonis terhadap plasma. Diuretika osmosis

(manitol, sorbitol) bekerja di sini dengan merintangi reabsorbsi

air dan juga natrium.

1) Lengkungan Henle

Di bagian atas dari henle’s loop ini 25% dari semua ion

Cl- yang telah difiltrasi direabsorbsi secara aktif, disusul

dengan reabsorbsi pasif dari Na+ dan K+ tetapi tanpa air,

hingga filtrat menjadi hipotonis. Diuretika lengkungan

seperti furosemida, bumetida dan etakrinat, bekerja

terutama di sini dengan merintangi transpor Cl- dan

demikian reabsorbsi Na+. Pengeluaran K+ dan air juga

diperbanyak.

2) Tubuli Distal

Di bagian pertama segmen ini Na+ direabsorbsi secara

aktif pula tanpa air hingga filtrat menjadi lebih cair dan

lebih hipotonis. Senyawa thiazida dan klortalidon bekerja di

tempat ini dengan memperbanyak ekskresi Na+ dan Cl-

sebesar 5-10%. Di bagian kedua segmen ini, ion Na+

ditukarkan dengan ion K+ atau NH4+, proses ini

dikendalikan oleh hormon anak ginjal aldosteron. Antagonis

aldosteron (spironolakton) dan zat-zat pengehmat kalium

(amilorida triamteren) bertitik kerja di sini, dengan

mengakibatkan eksresi Na+ dan retensi K+.

3) Saluran Pengumpul

Hormon antidiuretik ADH (vasopresin) dari hipofisis

bertitik kerja di sini dengan jalan mempengaruhi

permeabilitas bagi air dan sel-sel saluran ini.

2.6.4. Penggolongan Diuretik

Menurut Tjay et al. (2007) pada umumnya diuretika dibagi

menjadi beberapa golongan, yaitu :

a. Diuretika Lengkungan: Furosemida, bumetanida dan

etakrinat

Obat-obat ini berkhasiat kuat dan pesat tetapi agak singkat

(4-6 jam). Banyak digunakan pada keadaan akut, misalnya

udema otak dan paru-paru. Obat-obat ini memperlihatkan kurva

dosis efek curam, artinya apabila dosis dinaikkan efeknya akan

bertambah.

b. Derivat Thiazida: hidroklorothiazida, klortalidon,

mefrusida, indapamida dan klopamida

Efek dari obat-obat ini lebih lemah dan lambat, tetapi

bertahan lebih lama (6-48 jam) dan terutama digunakan pada

terapi pemeliharaan hipertensi dan kelemahan jantung. Obat-

obat ini memiliki kurva dosis efek yang datar, artiya apabila

dosis optimal dinaikkan lagi efeknya (diuresis) tidak bertambah.

c. Diuretika Penghemat Kalium: antagonis aldosteron

(sprionolakton, kanrenoat, amilorida dan triamteren)

Efek dari obat-obat ini hanya lemah dan khusus digunakan

terkombinasi dengan diuretika lainnya guna menghemat eksresi

kalium. Aldosteron menstimulasi reabsorbsi Na+ dan eksresi K+,

proses ini dihambat secara kompetitif (saingan) oleh obat-obat

lain. Amilorida dan triamteren dalam keadaan normal hanya

lemah dan efek eksresinya mengenai Na+ dan K+. Tetapi pada

penggunaan diuretika lengkungan dan thiazida terjadi eksresi

kalium dengan kuat, maka pemberian bersama dari penghemat

kalium ini menghambat eksresi K+ dengan kuat pula. Mungkin

juga eksresi dari magnesium dihambat.

d. Diuretik Osmotis: manitol dan sorbitol

Obat-obat ini hanya direabsorbsi sedikit oleh tubuli, hingga

reabsorbsi air juga terbatas. Efeknya adalah diuresis osmotis

dengan eksresi air kuat dan reatif sedikit eksresi Na+. Terutama

manitol, yang hanya jarang digunakan sebagai infus intravena

untuk mengeluarkan cairan dan menurunkan tekanan intraokuler

(pada glaucom), juga untuk menurunkan volume CCS (cairan

cerebrospinal) dan tekanan intracranial (dalam tengkorak).

e. Perintang Karbonanhidrase: asetazolamida

Zat ini merintangi enzim karbonanhidrase di tubuli

proksimal, sehingga di samping karbonat, juga Na+ dan K+

dieksresikan lebih banyak, bersamaan dengan air. Khasiat

diuretiknya hanya lemah, setelah beberapa hari terjadi

tachyflylaxine, maka perlu digunakan secara selang-seling.

2.6.5. Furosemid

Gambar Struktur Furosemid

Sumber : Ganiswarna (2001)

Diuretik kuat mempunyai mula kerja dan lama kerja yang lebih

pendek dari tiazid. Diuretik kuat bekerja dengan cara menghambat

reabsorpsi elektrolit di ansa Henle asendens bagian epitel tebal,

tempat kerjanya di permukaan sel epitel bagian luminal (yang

menghadap ke lumen tubuli). Pada pemberian secara lV obat ini

cenderung meningkatkan aliran darah ginjal tanpa disertai

peningkatan filtrasi glomerulus. Perubahan hemodinamik ginjal ini

mengakibatkan menurunnya reabsorpsi cairan dan elektrolit di tubuli

proksimal serta meningkatnya efek awal diuresis. Peningkatan aliran

darah ginjal ini relatif hanya berlangsung sebentar. Dengan

berkurangnya cairan ekstrasel akibat diuresis, maka aliran darah

ginjal menurun dan hal ini akan mengakibatkan meningkatnya

reabsorpsi cairan dan elektrolit di tubuli proksimal.

Furosemid dan bumetanid mempunyai daya hambat enzim

karbonik anhidrase karena keduanya merupakan derivat sulfonamid,

seperti juga tiazid dan asetazolamid, tetapi aktivitasnya terlalu lemah

untuk menyebabkan diuresis di tubuli proksimal. Bioavailabilitas

furosemid 65%.

Diuretik kuat terikat pada protein plasma secara ekstensif,

sehingga tidak difiltrasi di glomerulus tetapi cepat sekali disekresi

melalui sistem transport asam organik di tubuli proksimal. Dengan

cara ini obat terakumulasi di cairan tubuli dan mungkin sekali di

tempat kerja di daerah yang lebih distal lagi.

Sebagian besar furosemid diekskresi melalui ginial dalam bentuk

utuh dan dalam konjugasi dengan senyawa sulfhidril terutama sistein

dan N-asetilsistein, sebagian kecil dalam bentuk glukuronid.

Furosemid lebih banyak digunakan daripada asam etakrinat,

karena gangguan saluran cerna yang lebih ringan dan kurva dosis

responsnya kurang curam. Diuretik kuat merupakan obat efektif

untuk pengobatan udem akibat gangguan jantung, hati atau ginjal.

Sebaiknya diberikan secara oral, kecuali bila diperlukan diuresis

yang segera, maka dapat diberikan secara lV atau lM. Pemberian

parenteral ini diperlukan untuk mengatasi udem paru akut. Pada

keadaan ini perbaikan klinik dicapai karena terjadi perubahan

hemodinamik dan penurunan volume cairan ekstrasel dengan cepat,

sehingga alir balik vena dan curah ventrikel kanan berkurang. Untuk

mengatasi udem refrakter, diuretik kuat biasanya diberikan bersama

diuretik lain, misalnya tiazid atau diuretik hemat K+. Pemakaian dua

macam obat diuretik kuat secara bersamaan merupakan tindakan

yang tidak rasional.

Obat furosemid ini tersedia dalam bentuk tablet 20, 40, 80 mg

dan preparat suntikan. Umumnya pasien membutuhkan kurang dari

600 mg/hari. Dosis anak 2 mg/kgBB, bila perlu dapat ditingkatkan

menjadi 6 mg/kgBB.

2.7. Hewan Uji

2.7.1. Morfologi Hewan Uji

Tikus termasuk binatang pengerat yang merugikan dan termasuk

hama terhadap tanaman petani. Sekali beranak tikus dapat

menghasilkan sampai 15 ekor, namun rata-rata 9 ekor. Nama lain

hewan ini di berbagai daerah di Indonesia antara lain di

Minangkabau orang menyebutnya menit, sedangkan orang Sunda

menyebutnya beurit. Tikus albino (tikus putih) banyak digunakan

sebagai hewan percobaan di laboratorium (Akbar, 2010: 4).

2.7.2. Klasifikasi Hewan Uji

Klasifikasi tikus putih adalah sebagai berikut (Akbar, 2010: 4-5) :

Kingdom : Animalia

Filum : Chordata

Kelas : Mammalia

Ordo : Rodentia

Subordo : Odontoceti

Familia : Muridae

Genus : Rattus

Spesies : Rattus norvegicus

Gambar 2.21. Tikus Putih

Sumber : Akbar (2010)

2.7.3. Karakteristik Hewan Uji

Tikus putih memiliki beberapa sifat yang menguntungkan sebagai

hewan uji penelitian diantaranya perkembangbiakannya cepat,

mempunyai ukuran yang lebih besar dari menit, mudah dipelihara

dalam jumlah yang banyak. Tikus putih juga memiliki ciri-ciri

morfologis seperti albino, kepala kecil, dan ekor yang lebih panjang

dibandingkan badannya, pertumbuhannya cepat, temperamennya

baik, kemampuan laktasi tinggi, dan tahan terhadap arsenik tiroksid

(Akbar, 2010: 5).

2.8. Kerangka Konsep

Diuretik

Obat Herbal Obat Sintetik

Diuretika

Lengkungan

Diuretik thiazida

Diuretik hemat

kalium

Diurettik osmotis

Diuretik

Karbonanhidrase

EFEK DIURESIS EKSTRAK ETANOL AKAR

KEMANGI HUTAN (Ocimum sanctum, Linn) PADA

TIKUS PUTIH JANTAN

Tikus 25 ekor Sampel akar kemangi hutan

(Ocimum sanctum)

Dibagi dalam 5 kelompok yang

terdiri dari 5 ekor

Variasi dosis ekstrak akar

kemangi hutan

Kontrol normal

aquadest 0,2 ml

Kontrol positif

Diberi

furosemid

0,104 mg/g BB

Kelompok III

Diberi ekstrak

etanol akar

kemangi hutan

35 mg/g BB

Kelompok III

Diberi ekstrak

etanol akar

kemangi hutan

70 mg/g BB

Kelompok III

Diberi ekstrak

etanol akar

kemangi hutan

105 mg/g BB

Pengujian aktivitas diuresis

Analisis data

2.9. Hipotesis

Hipotesis yang ditarik dari penelitian ini adalah sebagai berikut:

1. Ekstrak akar kemangi hutan ocimum sanctum memiliki efek diuresis

2. Dosis yang paling optimal dalam memberikan efek diuresis adalah

dosis 105mg/g BB tikus

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1. Desain dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan desain post

test-only control design. Hewan uji dalam penelitian ini dibagi dalam 2

kelompok, yaitu kelompok kontrol dan kelompok uji yang dipilih secara acak.

Kelompok kontrol terdiri dari kelompok kontrol positif dan kelompok kontrol

negatif. Sedangkan kelompok uji terdiri dari kelompok uji I, kelompok uji II

dan kelompok uji III.

Rancangan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut:

1. Kelompok kontrol negatif (-), diberikan suspensi Na CMC 0,5 %.

2. Kelompok positif (+), akan diberikan furosemid dengan dosis 5,2 mg/kg

BB

3. Kelompok uji I, diberikan ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan dengan

dosis 35 mg/g BB

4. Kelompok uji II, diberikan ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan dengan

dosis 70 mg/g BB

5. Kelompok uji III, diberikan ekkstrak etanol 70% akar kemangi hutan

dengan dosis 105 mg/g BB

3.2. Populasi, Sampel dan Sampling

3.2.1. Populasi

Populasi adalah wilayah generalisasi yang terdiri atas obyek dan

subyek yang mempunyai kualitas dan karakterisik tertentu yang

ditetapkan oleh peneliti untuk mempelajari dan kemudian ditarik

kesimpulannya (Sugiyono, 2013). Populasi yang digunakan dalam

penelitian ini adalah tanaman kemangi hutan (Ocimum sanctum) yang

diambil secara acak di Desa Hoanoa Kecamatan Noelbaki Kabupaten

Kupang.

3.2.2. Sampel

Sampel adalah bagian dari jumlah dan karakterisik yang dimiliki

oleh populasi tersebut (Sugiyono, 2013). Sampel yang digunakan dalam

penelitian ini adalah akar dan batang kemangi hutan.

3.2.3. Sampling

Teknik pengambilan sampel dalam penelitian ini adalah simple

random sampling yaitu sampel diambil secara acak tanpa

memperhatikan strata yang ada dalam populasi itu (Sugiyono, 2013).

3.3. Variabel Penelitian

Variabel utama dalam penelitian ini adalah ekstrak akar kemangi hutan

yang diduga memiliki aktivitas analgesik.

3.3.1. Variabel bebas

Dalam penelitian ini, yang menjadi variabel bebas adalah ekstrak etanol

akar kemangi hutan (Ocimum sanctum).

3.3.2. Variabel terikat

Dalam penelitian ini, yang menjadi variabel terikat adalah efek diuresis

ektrak etanol akar kemangi hutan

3.3.3. Variabel Terkendali

Dalam penelitian ini, yang menjadi variabel terkendali adalah kondisi

fisik dari tikus yaitu berat badan dan jenis kelamin.

3.4. Definisi Operasional.

a. Akar kemangi hutan adalah bagian dari tanaman kemangi hutan yang

tumbuh di sekitar Desa Hoanoa, Kecamatan Noelbaki Kabupaten

Kupang.

b. Ekstrak etanol akar kemangi hutan adalah ekstrak kental yang diperoleh

dari proses ekstraksi akar kemangi hutan dengan metode maserasi

menggunakan pelarut etanol 70%.

c. Efek diuresis dihitung dari jumlah urin yang sudah tampung setiap 6 jam

selama 24 jam.

3.5. Alat, Bahan, dan Hewan Uj

1. Alat

Alat yang digunakan untuk maserasi yaitu botol yang berwarna gelap

ukuran 1000 ml tertutup, kain flanel, corong, gelas, mortir dan stamper,

oven, alat penimbang digunakan timbangan listrik AEG-120 Shimadu,

vaccum rotary evaporator, alat timbang tikus , alat suntik oral tikus , alat

yang digunakan untuk uji diuresis adalah jarum sonde lambung, botol

penampung urine, alat pengukur waktu (stopwatch). Alat untuk persiapan

dosis yaitu pipet tetes, labu erlenmeyer, beaker glass, mortar, stamper,

neraca analitik.

2. Bahan

a. Bahan sampel

Bahan sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah akar

kemangi hutan (Ocimum sanctum) yang diambil di Desa Hoanoa

Kecamatan Noelbaki Kabupaten Kupang.

b. Bahan kimia

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah akar dan batang

kemangi hutan (Ocimum sanctum), etanol 70%, HCl 2N, pereaksi

Mayer, pereaksi Wagner, pita Mg, HCl pekat, NaOH 1M, kloroform,

asam asetat glasial, H2SO4 pekat, FeCl3, Na CMC 0,5%, furosemid,

aquadest.

3. Hewan Uji

Hewan uji yang digunakan adalah tikus jantan galur wistar yang berumur

1-1,5 bulan dengan berat badan 150-200 g yang sehat dan tidak cacat, yang

diperoleh dari Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Nusa Cendana

Kupang.

3.6. Jalannya Penelitian

3.6.1 Pengambilan sampel

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah akar kemangi

hutan yang diperoleh dari desa Hoanoa, Kecamatan Noelbaki,

Kabupaten Kupang.

3.6.2 Determinasi Tanaman Kemangi Hutan

Determinasi tanaman dalam tahap penelitian adalah menetapkan

kebenaran sampel kemangi hutan (Ocimum sanctum) yang berkaitan

dengan ciri-ciri makroskopis dan mencocokan morfologis yang ada

dalam tanaman yang akan diteliti. Determinasi dilakukan di Fakultas

Pertanian Jurusan Agroteknologi, Universitas Nusa Cendana Kupang.

3.6.3 Pengeringan Tanaman Kemangi Hutan

Akar kemangi hutan yang sudah diambil dibersihkan dengan air

suling kemudian dikeringkan dengan oven pada suhu 40°C selama ± 4

hari dengan parameter kadar air kurang dari 10%. Pengeringan ini

bertujuan untuk mengurangi bekerjanya enzim dan perubahan kimia

yang dapat menurunkan mutu serta memudahkan dalam proses

penyerbukan.

3.6.4 Pembuatan serbuk akar kemangi hutan

Akar kemangi hutan yang sudah kering kemudian digiling sampai

menjadi serbuk halus, lalu diayak dengan ayakan nomor 20.

Gambar 3. Skema pembuatan serbuk

3.6.5 Pembuatan Ekstrak Etanol 70% Akar Kemangi Hutan

1. Timbang 250 g akar kemangi hutan yang sudah dihaluskan

2. Masukkan akar kemangi hutan yang sudah dihaluskan kedalam

labu erlenmeyer 5000 mL.

3. Tambahkan 2500 mL etanol 70%, sampai menutupi seluruh bagian

serbuk simplisia.

4. Tutup rapat labu erlenmeyer dengan aluminium foil, kocok

campuran hingga merata.

Dicuci, kemudian dikeringkan

Akar kemangi hutan

Bahan kering

Serbuk kering akar kemangi hutan

Diserbuk dan diayak dengan pengayak nomor 20

5. Ekstrak disimpan selama 3 hari terhindar dari cahaya matahari dan

diletakan pada suhu ruangan serta sesekali digojok.

6. Rendaman simplisia disaring menggunakan corong dan kertas

saring.

7. Filtrat diuapkan menggunakan evaporator, untuk mendapatkan

ekstrak kental.

8. Ekstrak siap digunakan untuk identifikasi fitokimia antara lain:

alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, triterpenoid dan steroid serta uji

aktivitas ekstrak pada tikus.

3.6.6 Uji Susut Pengeringan Ekstrak Etanol 70% Akar Kemangi Hutan

Penentuan susut pengeringan pada ekstrak bertujuan untuk

memberikan batasan maksimal atau rentang tentang besarnya senyawa

yang hilang pada proses pengeringan. Pengujian susut pengeringan

ekstrak akar kemangi hutan dilakukan dengan menggunakan metode

susut pengeringan (Depkes RI, 2000):

1. Panaskan botol timbang dangkal tertutup pada suhu 105 ºC selama

30 menit

2. Masukkan ±1-2 g ekstrak akar kemangi hutan kedalam botol

timbang yang sudah dipanaskan

3. Keringkan pada suhu 105 ºC dengan alat desikator

4. Lanjutkan pengeringan dan timbang pada jarak 1 jam sampai

perbedaan antara 2 penimbangan berturut-turut tidak lebih dari

0,25%

3.6.7 Analisis Komponen Fitokimia Ekstrak Etanol 70% Akar Kemangi

Hutan

1. Analisis Flavonoid

a. Masukkan 2 mL ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan dalam

tabung reaksi dan di panaskan.

b. Tambahkan serbuk magnesium dan tambahkan HCl 1 mL

c. Jika terbentuk larutan warna berwarna merah menunjukkan

adanya flavonoid (Simaremare, 2014).

2. Analisis Triterpenoid dan Steroid

a. Masukkan 1 mL ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan dalam

tabung reaksi.

b. Tambahkan 0,5 mL kloroform, dan tambahkan 0,5 mL asam

asetat anhidrida.

c. Campuran tersebut ditetesi 2 mL asam sulfat pekat melalui

dinding tabung tersebut.

d. Bila terbentuk warna hijau kebiruan menunjukkan adanya

steroid. Bila terbentuk cincin kecoklatan atau violet

menunjukkan adanya triterpenoid (Simaremare, 2014).

3. Analisis Saponin

a. Masukkan 1 mL ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan

kedalam tabung reaksi.

b. Tambahkan 10 mL aquadest.

c. Setelah itu kocok kuat selama 30 detik.

d. Jika terbentuk busa tidak hilang selama 30 detik, maka

menunjukan adanya saponin.

4. Analisis Tanin

a. Masukkan 0,01 mg ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan ke

dalam tabung reaksi, tambahkan 10 mL aquadest, aduk sampai

homogen.

b. Tambahkan sedikit gelatin.

c. Apabila terdapat endapan coklat maka ekstrak positif

mengandung tanin.

5. Analisis Alkaloid

a. Siapkan reagen Mayer.

1. Larutan A: larutkan 1,358 g HgCl2 dalam 60 mL aquadest.

2. Larutan B: larutkan 3 g KI dalam 10 mL aquadest. Tuang

larutan A dalam larutan B, encerkan dengan aquadest

sampai volume larutan menjadi 100 mL.

b. Siapkan reagen Wagner.

1. Larutkan 6 g KI dalam 100 mL aquadest.Tambahkan 2 g I2

dan aduk hingga campuran homogen.

2. Siapkan 2 buah tabung reaksi yang bersih. Beri label A dan

B pada setiap tabung.

c. Masukkan 0,01 mg ekstrak etanol 70% akar dan batang kemangi

hutan ke dalam masing-masing tabung A dan B.

d. Tambahkan 0,5 mL HCl 2% pada tabung A. Kocok campuran

hingga homogen.

e. Tambahkan 2-3 tetes reagen Mayer ke dalam tabung A.

f. Tambahkan 2-3 tetes reagen Wagner ke dalam tabung B.

g. Jika pada tabung A terbentuk endapan putih dan tabung B

terbentuk endapan coklat maka ekstrak positif mengandung

alkaloid.

3.6.8 Analisis Komponen Senyawa Kimia Ekstrak Etanol 70% Akar

Kemangi Hutan

a. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Ekstrak Etanol 70% Akar

Kemangi Hutan

1. Plat kromatografi lapis tipis (KLT) dipanaskan dalam oven

pada suhu 100 0C selama 30 menit.

2. Plat KLT didinginkan di udara terbuka selama 1 jam

3. Potong plat kromatografi lapis tipis (KLT), dengan panjang 5

cm dan lebar 2 cm.

4. Beri garis batas bawah 1 cm dan batas atas 0,5 cm dengan

pensil.

5. Masukkan 8 mL metanol dan 2 mL aseton ke dalam botol

chamber, ditutup, dan diaduk sehingga homogen.

6. Biarkan beberapa menit. Campuran metanol-aseton digunakan

sebagai eluen atau fase geraknya.

7. Larutkan 0,01 mg ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan

dalam tabung reaksi kecil dan tambahkan 5 mL metanol dalam

tabung reaksi tersebut.

8. Campurkan ekstrak dan etanol hingga homogen.

9. Totolkan campuran ekstrak etanol 70% akar kemangi hutan

pada plat kromatografi lapis tipis (KLT) pada batas bawah, lalu

keringkan beberapa menit

10. Masukkan plat kromatografi lapis tipis (KLT) ke dalam botol

chamber yang telah berisi fase gerak

11. Biarkan beberapa menit, sampai ekstrak yang dibawa oleh fase

gerak mendekati batas atas pada plat kromatografi lapis tipis

(KLT).

12. Angkat kertas kromatografi lapis tipis (KLT) dari botol

chamber.

13. Biarkan beberapa menit.

14. Amati noda hasil pada plat kromatografi lapis tipis (KLT)

menggunakan lampu UV pada panjang gelombang 254 nm.

15. Buatlah lingkaran noda pada plat kromatografi lapis tipis

(KLT).

16. Amati warna noda.

3.6.9 Uji Efek Diuresis

1. Pembuatan larutan

Larutan stok yaitu suspensi CMC 0,5%. Serbuk CMC ditimbang

500 mg kemudian dilarutkan dalam air suling panas sambil diaduk

pada volume 100 ml.

2. Penentuan dosis furosemid

Penetapan ini didasarkan pada dosis terapi manusia. Untuk

manusia (70 kg) sekali minum = 40 mg. Berdasarkan rasio luas

permukaan badan tikus dan manusia didapat angka konversi

sebesar 0,0018. Maka konversi dosis manusia ke tikus dengan berat

200 g adalah = 0,0018 x 40 mg = 0,72 mg/ 200 g BB. Furosemid

yang diberikan pada kelompok tikus yang merupakan kontrol

tunggal adalah 0,72 mg/200 g BB.

3. Penentuan dosis ekstrak akar kemangi

Dosis ekstrak akar kemangi pada tikus yang digunakan pada

penelitian sebelumnya yaitu dosis 250 mg/kg BB tikus (Pai Preethi

et al.,2013). Variasi dosis yang digunakan adalah dosis I (35

mg/200 g BB), dosis II (70 mg/200 g BB), dosis III (105 mg/200 g

BB). Ekstrak akar kemangi ditimbang dan dibuat suspensi dengan

CMC0,5% kemudian siap untuk diujikan pada hewan uji.

4. Perlakuan hewan uji

Hewan uji yang digunakan adalah tikus putih dengan berat rata-

rata 200-250 gram. Jenis kelamin yang dipilih adalah jantan. Tikus

ditimbang dan masing-masing diberi tanda pengenal selanjutnya

tikus dipuasakan terlebih dahulu selama 48 jam.

Hewan uji dibagi dalam 5 kelompok dimana masing – masing

kelompok terdiri atas 5 ekor tikus. Skema pengujian dapat dilihat di

gambar 5.

Kelompok I : Diberi aquadest 1 ml sebagai kontrol normal

Kelompok II : Diberi furosemid sebagai kontrol positif 0,104

mg/g BB

Kelompok III : Diberi ekstrak etanol akar kemangi hutan 35 mg/g

BB

Kelompok IV : Diberi ekstrak etanol akar kemangi hutan 70 mg/g

BB

Kelompok V : Diberi ekstrak etanol akar kemangi hutan 105

mg/gBB

3.7. Analisa statistik

Tahap pertama adalah uji mengetahui ada tidaknya perbedaan bermakna

pada parameter antara kelompok perlakuan dengan berbagai perbandingan

dosis. Urutan uji yang dilakukan pertama-tama adalah uji distribusi normal

dengan menggunakan informasi dari uji kolmogorov-smirnov. Data memiliki

distribusi normal jika nilai p > 0,05 dan memiliki distribusi yang tidak normal

jika p < 0,05.

Jika data terdistribusi normal pengujian dilanjutkan dengan uji

homogenitas varian untuk mengetahui kesamaan varian data. Varian data

sama jika p > 0,05, sedangkan tidak sama jika p > 0,05. Ketika varian data

dinyatakan sama berarti uji selanjutnya yang sudah dilakukan sudah valid

untuk menggunakan uji parametrik.

Langkah selanjutnya dilakukan uji uji Anova satu jalan. Dari uji akan

didapatkan informasi ada tidaknya perbedaan bermakna antara kelompok

Gambar 5. Skema prosedur perlakuan hewan uji

Analisa data

Penampungan urin selama 6 jam

Kelompok tikus (25 ekor)

Adaptasi selama 7 hari

Dipuasakan seama 48 jam, tetap diberi minum

kontrol normal

aquadest 1 ml

5 ekor tikus

Kontrol positif

Diberi

furosemid

sebagai kontrol

positif 0,104 mg/g BB

5 ekor tikus

Kelompok III

Diberi ekstrak

etanol akar

kemangi hutan 35

mg/g BB

Kelompok IV

Diberi ekstrak

etanol akar

kemangi hutan 70

mg/g BB

Kelompok V

Diberi ekstrak

etanol akar

kemangi hutan

105 mg/g BB

Pengukuran volume urin tiap 6 jam, selama 24 jam

perlakuan. Bila p < 0,05 memiliki arti bahwa terdapat perbedaan bermakna

antara kelompok, sedangkan jika p > 0,05 memiliki arti bahwa tidak terdapat

perbedaan bermakna antar kelompok apapun. Apabila terdapat perbedaan

bermakna maka dilakukan uji Tukey post hoc test untuk mengetahui

sebenarnya kelompok-kelompok mana yang memilki perbedaan itu.

BAB IV

BIAYA DAN JADWAL PENELITIAN

4.1. Anggaran biaya

No. Jenis Pengeluaran Biaya yang Diusulkan

1. Honorarium untuk pelaksana, petugas

laboratorium, pengumpul data, pengolah data,

penganalisis data, honor operator, dan honor

pembuat system (maksimum 30% dan

dibayarkan sesuai ketentuan)

Rp. 1.000.000

2. Pembelian bahan habis pakai untuk ATK,

fotocopy, surat menyurat, penyusunan

laporan, cetak, penjilidan laporan, publikasi,

pulsa, internet, bahan laboratorium (pellarut,

reagen), plat KLT, hewan uji, langganan

jurnal (maksimum 60%)

Rp. 6 .375.000

3. Perjalanan untuk biaya survey/sampling data,

seminar/workshop DN-LN, biaya akomodasi-

konsumsi, perdiem/lumpsun, transport

(maksimum 40%)

Rp. 500.000

4. Sewa untuk peralatan/mesin/ruang

laboratorium, kendaraan, kebun percobaan,

peralatan penunjang penelitian lainnya

(maksimum 40%)

Rp. 1.500.000

Jumlah Rp. 9.375.000

4.2. Jadwal Penelitian

Tabel 2. Jadwal Penelitian

No Uraian Percapaian per Bulan

Sep Okt Nov Feb

1 Persiapan

2 Pelaksanaan

3 Pengolahan dan Analisa Data

4 Pembuatan Laporan

5 Seminar Hasil

6 Laporan Akhir dan Publikasi

DAFTAR PUSTAKA

1. Chang X, Alderson PG, Wright CJ. Enhanced UV-B radiation alters basil

(Ocimum basilicum L.) Growth and stimulates the synthesis of volatile oils. J

Horticulture Forestry. 2009;1(2):27–31. [Google Scholar]

2. Schutte A, Van Rooyen J, Huisman H, Krunger H, De Malan NT, Ridder JH.

Dietary risk markers that contribute to the aetiology of hypertension in black

South African childerens. The THUSA BAMMA study. J Hum Hypertens.

2003;17:29–35. doi: 10.1038/sj.jhh.1001508. [PubMed] [CrossRef] [Google

Scholar]

3. Umar A, Imam G, Yimin W, Kerim P, Tohti I, Berke B, et al.

Antihypertensive effects of Ocimum basilicum L. (OBL) on blood pressure in

renovascular hypertensive rats. Hypertens Res. 2010;33(7):727–30. doi:

10.1038/hr.2010.64. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

4. G. Tsasi, T. Mailis, A. Daskalaki et al., “The effect of harvesting on the

composition of essential oils from five varieties of Ocimum basilicum L.

cultivated in the Island of Kefalonia, Greece,” Plants, vol. 6, no. 3, 2017.

View at: Google Scholar

5. S. Khair-ul-Bariyah, D. Ahmed and M. Ikram. Ocimum Basilicum: A Review

on Phytochemical and Pharmacological Studies. 2012. Pakistan Journal of

Chemistry 2(2):78-85.

6. S. K. Marwat, M. S. Khan, S. Ghulam, N. Anwar, G. Mustafa, and K. Usman,

“Phytochemical constituents and pharmacological activities of sweet Basil-

Ocimum basilicum L. (Lamiaceae),” Asian Journal of Chemistry, vol. 23, no.

9, pp. 3773–3782, 2011. View at: Google Scholar

7. A Kumar, A Rahal , S Chakraborty, R Tiwari, S K Latheef , K Dhama,

Ocimum sanctum (Tulsi): a miracle herb and boon to medical science – A

Review. International Journal of Agronomy and Plant Production, 2013;

4(7): 1580-1589

8. R Miller, S Miller, Tulsi Queen of Herbs India’s Holy Basil, 2003.

9. Dalimartha, S. 2014. Tumbuhan Sakti Atasi Asam Urat. Jakarta: Penebar

Swadaya.

10. [Depkes RI] Ditjen POM. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta:

Departemen Kesehatan RI. Halaman 157

11. Ditjen POM. 2014. Farmakope Herbal Indonesia. Edisi V. Jakarta:

Departemen Kesehatan RI.

12. Akbar, Budhi. (2010). Tumbuhan Dengan Kandungan Senyawa Aktif yang

Berpotensi Sebagai Bahan Antifertilitas. Jakarta: Adabia Press. Hal. 4, 5

13. Sugiyono. (2017). Metode Penelitian Kuantitatif, Kualitatif dan R & D.

Bandung : Alfabeta.

14. Raina, Archana et al. (2013). Chemical Characterization of ROMA

Compounds in Essential Oil Isolated From “Holy Basil” (Ocimum

tenoiflorum L.) Groown in India. Genet Resour Crop Evol, 60(2013):1727.

15. Khrisna, Sai et al. (2014). “Tulsi”-The Wonder Herb (Pharmacological

Activities of Ocimum sanctum). American Journal of Ethnomedicine,

1(1):89-90.

16. Kulkarni, Kaushik & Adavirao, Belvotagi. (2018). A review on: Indian

traditional shrub Tulsi (ocimum sanctum): The unique medicinal Plan.

Journal of Medicinal Plants Studies, 6(2):106-107.

17. Sudarsono dkk. (2002). Dalam Tumbuhan Obat II. Yogyakarta: Universitas

Gajah Mada Sekip Utara. Hal. 41

18. Mangoting, Daniel et. al. (2005). Tanaman Lalapan Berkhasiat Obat.

Penebar Swadaya. Jakarta.

19. World Health Organization. (2002). WHO Monographs on Selected

Medicinal Plants. Volume 2. World Health Organization Geneva. Halaman:

209.

20. Anggarwal, Ankur & Mali, Rakesh. (2015). Ocimum tenuiflorum – A

Medicinal Plants with its versatile uses. .International Journal of Recent

Advancesin Science and Technology, 2(2) : 1, 2.

21. Samak, Geetha et al. (2007). Hypolipidemic Efficacy Of Ocimum Sanctum In

The Prevention Of Atherogenesis In Male Albino Rabbits. Pharmacology

online, 2(2007):124

22. Kar, Ashutosh. (2013). Farmakognosi dan Farmakobioteknologi. Jakarta.

EGC. Hal. 427, 449, 450

23. Robinson, T., 1995, Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi, Edisi IV,

Diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, ITB, Bandung. Hal : 71, 73, 152,

154, 157, 158, 191, 193, 283, 284, 285

24. Achmad, S. A. 1986. Kimia Organik Bahan Alam, Materi 4 : Ilmu Kimia

Flavanoid. Karunika Universitas Terbuka. Jakarta. Hal : 2, 3, 16,17, 48

25. Mulyono. (2005). Membuat Reagen Kimia di Laboratorium. Jakarta. Bumi

Aksara. Hal : 65, 71

26. Harborne, J. B. (1987). Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern

Menganalisa Tumbuhan. Penerbit ITB. Bandung. Hal. 133, 148, 149, 174

27. Sirait M. (2007). Penuntun Fitokimia Dalam Farmasi. Bandung : Intitut

Twknologi Bandung. Hal. 213

28. Santoso B. (2008). Fisiologi dan Biokimia Pada Komoditi Panenan

Hortikultura. Yogyakarta: Kanisius. Hal. 86, 87, 88,

29. Siswandono, Bambang, S. (1998). Prinsip-Prinsip Rancangan Obat.

Surabaya: Airlangga University Press. Hal. 7

30. Brady, J. E dan Humiston. (1999). General Chemistery Principle and

Structure, 4th Edition, New York : John Willey & Sons, Inc. Hal. 562, 563

31. Hartini dan Wulandari. (2016). Buku Panduan Praktikum Farmakognosi dan

Fitokimia. Yogyakarta: Universitas Sanata Dharma. Hal : 7

32. Depkes RI. 2000. Farmakope Herbal Indonesia Edisi 1. Jakarta: Departemen

Kesehatan Republik Indonesia. Hal xxv, xxvi, 172, 174 175.

33. Endarini, Lully. (2016). Farmakognosi dan Fitokimia. Jakarta: Kementrian

Kesehatan Republik Indonesia. Hal. 11, 13 dan 145

34. Marjoni. (2016). Dasar-Dasar Fitokimia untuk Diploma III Farmasi. Jakarta

: Trans Info Media. Hal. 29, 30, 31, 39.

35. Wusnah dkk. (2016). Proses Pembuatan Bioetanol Dari Kulit Pisang Kepok

(Musa acuminata B.C) Secara Fermentasi. Jurnal Teknologi Kimia Unimal,

5(1):59.

36. Gandjar, I.G & Rohman, A., (2012). Analisis Obat Secara Spektroskopi dan

kromatografi. Yogyakarta: Pustaka Pelajar : 329, 330, 335, 336, 337, 338,

339, 340, 341, 342, 345,346, 351,

37. Sthal, E., (1985). Anallisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi,

diterjemahkan Oleh Kosasih Padwinata dan Iwang Soediro, 3-17, ITB,

Bandung.

38. Nurihardiyanti et al. (2015). Aktivitas Diuretik Kombinasi Ekstrak Biji

Papaya (Caricca papaya L.) dan Biji Salak (Salacca zalacca varietas zalacca

(Gaert) Voss) Pada Tikus Jantan Galir Wistar. 1;(2).

39. Ganiswara, R., Setyabudy, R., Suyanto, F. & Nafrialdi, P., (2001),

Farmakologi dan Terapi, Edisi 4. Jakarta, Bagian Farmakologi UI, Gaya

Baru.

40. Tikus Putih Penelitian. Hewan Percobaan. http://tikusputihpenelitian.com/

hewan-percobaan/ (diakses 7 September 2020)

LAMPIRAN

Lampiran 1. Perhitungan dosis furosemid dan volume pemberian pada tikus

Dosis maksimal orang dewasa dengan berat badan 70 kg dari obat furosemid

adalah 40 mg, dikonversikan ke tikus yang berat badannya 200 gram, dengan

menggunakan faktor konversi tikus yaitu 0,0018.

Dosis pemberian = 40 mg x 0,0018

= 0,72 mg/200 gr BB

Berat obat total = x

Contoh :

Tabel 1. Volume pemberian pada tikus dosis furosemid

No Berat Badan Tikus (gram) Volume Oral (mL)

1 X

2 X

3 X

4 X

5 X

Lampiran 2. Perhitungan variasi dosis ekstrak akar kemangi hutan dan volume

pemberian pada tikus

Perhitungan dosis

Dari hasil penelitian sebelumnya bahwa dosis 250 mg/kg BB tikus (Pai Preethi et

al.,2013).

5. Perhitungan sediaan ekstrak akar kemangi hutan dosis I :

Dosis I = 35 mg/g BB

Dosis ekstrak akar kemangi hutan dalam 10 mL larutan stok :

Contoh :

Tabel 2. Volume pemberian pada tikus ekstrak I

No Berat Badan Tikus (gram) Volume Oral (mL)

1 X

2 X

3 X

4 X

5 X

6. Perhitungan sediaan ekstrak akar kemangi hutan dosis I :

Dosis II = 70 mg/g BB

Dosis ekstrak akar kemangi hutan dalam 10 mL larutan stok :

Contoh :

Tabel 2. Volume pemberian pada tikus ekstrak II

No Berat Badan Tikus (gram) Volume Oral (mL)

1 X

2 X

3 X

4 X

5 X

7. Perhitungan sediaan ekstrak akar kemangi hutan dosis III :

Dosis III = 105 mg/g BB

Dosis ekstrak akar kemangi hutan dalam 10 mL larutan stok :

Contoh :

Tabel 2. Volume pemberian pada tikus ekstrak III

No Berat Badan Tikus (gram) Volume Oral (mL)

1 X

2 X

3 X

4 X

5 X