validação de método analítico para a quantificação de
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Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1747
Artigo
Validaccedilatildeo de Meacutetodo Analiacutetico para a Quantificaccedilatildeo de
Paracetamol em Soluccedilatildeo Oral por Espectrofotometria no UV
Junior E J A G Roeder J S Oliveira K B L Ferreira M P Silva J
G
Rev Virtual Quim 2017 9 (4) 1747-1759 Data de publicaccedilatildeo na Web 26 de junho de 2017
httprvqsbqorgbr
UV Spectrophotometry Analytical Method Validation for Quantification
of Paracetamol in Oral Solution
Abstract In the present article it is described the validation of a simple precise accurate rapid and low-cost UV spectrophotometric method for quantification of paracetamol in oral solution The method was linear in the range between 64 ndash g L-1 presenting a good o elatio oeffi ie t = a d ade uate li its of ua tifi atio g L-
1 a d dete tio g L-1) Precision and analysis showed low coefficient of variation (lt 50) and a good average recovery percentual (10346 - reference and 10276 - generic) was obtained The method was applied for paracetamol determination in two oral solutions and these results are in good accordance with the declared values of manufacturer at a 95 confidence level
Keywords Paracetamol UV Spectrophotometry Pharmaceutical formulations
Resumo
O presente artigo descreve a validaccedilatildeo de um meacutetodo espectrofotomeacutetrico UV simples preciso raacutepido e de baixo custo para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral O meacutetodo foi linear na faixa de 64 - g L-1 apresentando um bom coeficiente de o elaccedilatildeo li ea = e li ites de ua tifi accedilatildeo g L-1 e dete ccedilatildeo g
mL -1) satisfatoacuterios O estudo de precisatildeo apresentou baixo coeficiente de variaccedilatildeo (lt 50) e um bom percentual meacutedio de recuperaccedilatildeo (10346 - referecircncia e 10276 - geneacuterico) foi obtido O meacutetodo foi aplicado na quantificaccedilatildeo do paracetamol em duas soluccedilotildees orais e os resultados foram concordantes com os valores declarados pelos fabricantes a um niacutevel de confianccedila de 95
Palavras-chave Paracetamol Espectrofotometria no UV formulaccedilotildees farmacecircuticas
Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia Curso de Quiacutemica QS 07 lote 01 EPCT Aacuteguas Claras CEP 71966-700 Taguatinga-DF Brasil
jonatasgyahoocombr DOI 10215771984-683520170101
Volume 9 Nuacutemero 4
Revista Virtual de Quiacutemica
ISSN 1984-6835
Julho-Agosto 2017
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Validaccedilatildeo de Meacutetodo Analiacutetico para a Quantificaccedilatildeo de
Paracetamol em Soluccedilatildeo Oral por Espectrofotometria no UV
Enock Joseacute A G Junior Jakson S Roeder Kaiky B L Oliveira Mateus P
Ferreira Jonatas G da Silva
Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia Curso de Quiacutemica QS 07 lote 01 EPCT Aacuteguas Claras CEP 71966-700 Taguatinga-DF Brasil
jonatasgyahoocombr
Recebido em 9 de maio de 2017 Aceito para publicaccedilatildeo em 21 de junho de 2017
1 Introduccedilatildeo
2 Parte Experimental
3 Resultados e Discussatildeo
4 Conclusatildeo
1 Introduccedilatildeo
O paracetamol (PAR) tambeacutem conhecido como acetaminofeno (Figura 1) eacute um faacutermaco amplamente utilizado sem prescriccedilatildeo meacutedica como antipireacutetico analgeacutesico e anti-inflamatoacuterio leve como uma alternativa a Aspirinareg sendo um agente eficaz e empregado para reduzir a febre e aliviar a dores de cabeccedila dente lombar musculares artrite e poacutes-operatoacuteria O uso controlado e limitado do PAR eacute seguro
natildeo apresentando efeito secundaacuterio prejudicial No entanto uma dose elevada ou o seu uso prolongado pode causar efeitos adversos para a sauacutede devido agrave acumulaccedilatildeo de metaboacutelitos toacutexicos podendo levar a hepatotoxicidade e nefrotoxicidade graves e agraves vezes fatais1-3 Portanto eacute importante desenvolver e validar meacutetodos analiacuteticos simples raacutepidos sensiacuteveis e precisos para a detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas gerando assim resultados confiaacuteveis no controle de qualidade na induacutestria farmacecircutica
Figura 1 Estrutura quiacutemica do paracetamol
HO
N
O
H
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Satildeo descritos na literatura para a detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas diferentes meacutetodos analiacuteticos como espectrofotomeacutetrico45 espectrofluorimeacutetrico6 cromatograacutefico7-9 e voltameacutetrico1011 Para o doseamento de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas a farmacopeia brasileira12 descreve um meacutetodo baseado em medidas espectrofotomeacutetricas como oficial No meacutetodo descrito pela farmacopeia brasileira a quantificaccedilatildeo do paracetamol em soluccedilatildeo oral eacute realizada a partir dos valores das absorbacircncias de uma uacutenica soluccedilatildeo padratildeo (com concentraccedilatildeo igual a da formulaccedilatildeo farmacecircutica) e da soluccedilatildeo oral empregando-se como solvente o metanol Enquanto que no meacutetodo proposto nesse artigo a quantificaccedilatildeo do paracetamol seraacute por meio de uma curva analiacutetica empregando-se como solvente o etanol podendo ser utilizado no controle de qualidade de induacutestrias farmacecircuticas
A espectrofotometria na regiatildeo do ultravioleta (UV) eacute amplamente aplicada na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de faacutermacos em formulaccedilotildees farmacecircuticas sendo utilizada principalmente no controle de qualidade de induacutestrias farmacecircuticas pois cumpre requisitos essenciais para as anaacutelises de rotina como rapidez baixo custo operacional e confiabilidade dos resultados1314 Satildeo encontrados na literatura alguns exemplos do emprego da espectrofotometria na regiatildeo do UV na quantificaccedilatildeo de faacutermacos como carvedilol13 efavirenz14 sinvastatina15 aciclovir16 olanzapina17 e fluoxetina18 em formulaccedilotildees farmacecircuticas
A validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos eacute necessaacuteria para gerar resultados confiaacuteveis no contexto do controle de qualidade na induacutestria farmacecircutica pois deve-se assegurar por meio de estudos experimentais que o meacutetodo atenda agraves exigecircncias analiacuteticas assegurando a confiabilidade dos resultados Para a validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico os seguintes paracircmetros (figuras analiacuteticas de meacuterito) devem ser avaliados seletividade linearidade intervalo precisatildeo limite de
detecccedilatildeo limite de quantificaccedilatildeo exatidatildeo e robustez19
Portanto a validaccedilatildeo de um meacutetodo simples preciso raacutepido e de baixo custo para a anaacutelise de rotina de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas eacute importante devido agrave grande utilizaccedilatildeo desse faacutermaco e seus efeitos adversos para a sauacutede humana Nesse contexto o presente trabalho tem como objetivo validar um meacutetodo empregando a espectrofotometria na regiatildeo do UV para a detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
2 Parte Experimental
Equipamentos
As medidas espectrofotomeacutetricas no UV foram realizadas em triplicata utilizando-se o espectrofotocircmetro UV-Vis Cary 50 (Varianreg) de duplo feixe detector de 190 a 1100 nm cubetas de quartzo de 1 cm e acoplado a um microcomputador Todas as medidas de massa foram realizadas em balanccedila analiacutetica semi- i o σ le g AUW D (Shimadzureg)
Reagentes soluccedilotildees e amostra
Todos os reagentes utilizados foram de grau analiacutetico e as soluccedilotildees foram preparadas em aacutegua ultrapura (Direct-Qreg 8 UV Smart Millipore 1 Ω O pad atildeo de PAR -101 foi adquirido da sigma-aldrich (USA) e utilizado sem purificaccedilatildeo adicional A soluccedilatildeo estoque de PAR 1 mg mL-1 foi preparada dissolvendo-se 10 mg de PAR em aacutegua ultrapura em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL O aacutecido cloriacutedrico (HCl) 37 e o etanol absoluto 998 foram adquiridos da Vetec (Brasil) A soluccedilatildeo de HCl 01 mol L-1 foi preparada por diluiccedilatildeo em aacutegua ultrapura A soluccedilatildeo oral contendo PAR foi adquirida em comeacutercio local
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Validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico
O meacutetodo proposto foi validado conforme a resoluccedilatildeo RE no 899 de 29052003 da ANVISA (Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria)19 que regulamenta a validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos e bioanaliacuteticos no Brasil e recomendaccedilotildees da ICH (The International
Conference on Harmonisation of Technical
Requirements for Registration of
Pharmaceuticals for Human Use)20 As figuras analiacuteticas de meacuterito avaliadas foram seletividade linearidade intervalo precisatildeo limite de detecccedilatildeo limite de quantificaccedilatildeo exatidatildeo e robustez O meacutetodo foi comparado estatisticamente com o valor descrito no roacutetulo da soluccedilatildeo oral contendo paracetamol
Seletividade
A seletividade do meacutetodo foi avaliada por meio de anaacutelises dos espectros UV obtidos para o PAR e os excipientes aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina
soacutedica As soluccedilotildees estoque de 1 mg mL-1 para os excipientes foram preparadas dissolvendo-se 10 mg em aacutegua ultrapura ou etanol em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL As medidas espectrofotomeacutetricas foram ealizadas as soluccedilotildees dos e ipie tes g
mL-1 e de duas misturas (1 ndash PAR g L-1 + excipientes 8 g L-1 2 ndash PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) preparadas por diluiccedilatildeo das soluccedilotildees estoque em etanol mais
L de HCl ol L-1 em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL O perfil dos espectros obtidos foram avaliados e comparados com o espectro de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1
Linearidade e intervalo
A linearidade foi determinada por meio da obtenccedilatildeo de trecircs curvas analiacuteticas no i te valo de PAR de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste)19 A equaccedilatildeo da reta (inclinaccedilatildeo e intercepto com o eixo y) foi obtida pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados e calculou-se o coeficiente de correlaccedilatildeo linear Os dados de cada niacutevel de concentraccedilatildeo foram avaliados por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA) (Tabela 1)
Tabela 1 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste de um modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados21
Fonte SQ GL MQ Fcalculado
Modelo SQreg = Σni [(ye)i - ym]2 p-1 MQreg = SQreg(p-1) MQregMQr
Residual SQr = Σ Σ [yij - (ye)i]2 n-p MQr = SQr(n-p)
Falta de ajuste SQfaj = Σni [(ye)i - yim]2 m-p MQfaj = SQfaj(m-p) MQfajMQep
Erro puro SQep = Σ Σ [ ij - yim]2 n-m MQep = SQep(n-m)
Total SQt = Σ Σ [ ij - ym]2 n-1 MQt = SQt(n-1)
SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica ni = nuacutemero de epeticcedilotildees do iacutevel i = uacute e o de iacuteveis disti tos da va iaacutevel = Σ i = nuacutemero total de
medidas p = nuacutemero de paracircmetros do modelo O iacutendice i indica o niacutevel da variaacutevel x o iacutendice j refere-se agraves medidas repetidas da variaacutevel y em um dado niacutevel de x O segundo somatoacuterio das expressotildees para SQr SQep e SQt vai de j = 1 ateacute j = ni Os outros somatoacuterios vatildeo de i = 1 ateacute i = m ym eacute a meacutedia de todos os valores de y yim eacute a meacutedia das determinaccedilotildees repetidas no niacutevel i
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Limites de detecccedilatildeo (LD) e de
quantificaccedilatildeo (LQ)
Os limites de detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo foram calculados a partir do desvio padratildeo do intercepto com o eixo y (DPa) e da inclinaccedilatildeo da curva analiacutetica (IC) Equaccedilotildees 1 e 219
LD = DPa IC
(1)
LQ = DPa IC
(2)
O desvio padratildeo do intercepto com o eixo y foi calculado pelas seguintes Equaccedilotildees22
Syx = radicΣ yi - y 2 n - 2 (3)
DPa= S radic Σ i
Σ( i - ) (4)
Precisatildeo
A repetitividade (precisatildeo intradia) foi avaliada por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo dife e tes e g L-1) contemplando o intervalo linear do meacutetodo e com trecircs reacuteplicas cada A precisatildeo intermediaacuteria (precisatildeo interdia) foi avaliada de forma semelhante agrave repetitividade no entanto as mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas foram realizadas em dois dias com analistas diferentes Calculou-se o coeficiente de variaccedilatildeo (CV) por meio da Equaccedilatildeo 5 e os resultados obtidos foram comparados com o valor maacuteximo aceitaacutevel descrito no Guia para
Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19
CV = DPCMD
(5)
Onde CV eacute o coeficiente de variaccedilatildeo DP eacute o desvio padratildeo das medidas espectrofotomeacutetricas e CMD eacute a concentraccedilatildeo meacutedia de PAR determinada
Exatidatildeo
A exatidatildeo foi avaliada por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR nas amostras de formulaccedilotildees farmacecircuticas (referecircncia e geneacuterico) e sua recuperaccedilatildeo em trecircs niacuteveis diferentes Os valores de recuperaccedilatildeo expressos em porcentagem foram obtidos por meio das medidas espectrofotomeacutetricas das soluccedilotildees finais em funccedilatildeo da quantidade teoacuterica de padratildeo adicionado As concentraccedilotildees de PAR foram determinadas por meio da curva analiacutetica obtida pela adiccedilatildeo de padratildeo
Robustez
A robustez foi avaliada por meio das mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas variando-se a marca do etanol (Vetec Reagen e Dinacircmica) e a temperatura da sala de anaacutelise (27 e 24 degC) As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica
Quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
utilizando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico
proposto
Transferiu-se 10 mL da soluccedilatildeo oral para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e o volume foi completado com etanol Em seguida
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transferiu-se 05 mL da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e completou-se o volume com etanol Apoacutes a segunda diluiccedilatildeo transferiu-se L da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL adicionou-se L de aacute ido cloriacutedrico 01 mol L-1 o volume foi completado com etanol As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica
Anaacutelises estatiacutesticas
A anaacutelise estatiacutestica dos dados foi realizada por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA fator uacutenico) testes t e f com niacutevel de confianccedila de 95 (probabilidade inferior a 5 - p lt 005) A avaliaccedilatildeo estatiacutestica dos resultados foi realizada por meio do Software MS Excelreg
3 Resultados e Discussatildeo
Inicialmente determinou-se o comprimento de onda no maacuteximo de a so ccedilatildeo max) para realizar os ensaios de validaccedilatildeo e a quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral Analisando o espectro UV (200-400 nm) da Figura 2 obtido a partir de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1 em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (descrita no meacutetodo indicado pela Farmacopeia Brasileira12) observou-se uma banda com absorccedilatildeo maacutexima em 250 nm Portanto para o desenvolvimento do meacutetodo analiacutetico optou-se realizar as medidas espectrofotomeacutetricas na regiatildeo do UV no comprimento de onda no maacuteximo de absorccedilatildeo do PAR
Figura 2 Espectro de absorccedilatildeo no UV do paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Para a validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico visando agrave quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas foi realizado o estudo de seletividade por meio de anaacutelises dos espectros UV (Figura 3) obtidos para o PAR e os excipientes presentes na soluccedilatildeo
oral (aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina soacutedica) Observou-se nos espectros UV que entre os excipientes analisados apenas o benzoato de soacutedio e a sacarina soacutedica apresentaram bandas de
200 250 300 350 400
00
02
04
06
08
10
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
max
= 250 nm
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absorccedilatildeo na faixa de comprimento de onda estudada tornando-se essas espeacutecies quiacutemicas em potenciais interferentes na quantificaccedilatildeo do PAR em soluccedilatildeo oral O espe t o UV pa a a Mistu a PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) confirma uma interferecircncia na banda de absorccedilatildeo do PAR no entanto com base no espectro UV obtido
pa a a Mistu a PAR g L-1 + excipientes g L-1) acredita-se que em baixas
concentraccedilotildees (concentraccedilatildeo de excipientes dez vezes menor que a do PAR) o benzoato de soacutedio e sacarina soacutedica natildeo satildeo potenciais interferentes na anaacutelise da soluccedilatildeo oral contendo o PAR
Figura 3 Espectros de absorccedilatildeo no UV do paracetamol e dos excipientes em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Confirmada a seletividade do meacutetodo foram obtidos os espectros de absorccedilatildeo no UV para PAR com a concentraccedilatildeo variando de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste) em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (Figura 4)
A curva analiacutetica obtida por meio do meacutetodo dos miacutenimos quadrados apresentou a equaccedilatildeo y = 00896x + 00177 e um coeficiente de correlaccedilatildeo de 09988 indicando a linearidade do meacutetodo dentro dos limites de concentraccedilotildees estudadas al de esta de a o do o o it io
iacute i o a eitaacutevel do oefi ie te de o elaccedilatildeo = des ito o Guia pa a
Validaccedilatildeo de M todos A aliacuteti os e
Bioa aliacuteti os Resoluccedilatildeo o de 2003 da ANVISA)19 Por meio da anaacutelise de variacircncia testou-se a significacircncia estatiacutestica da curva ajustada e a linearidade do meacutetodo (Tabela 2) No teste do ajuste da curva obteve-se um valor de fcalculado (1822) menor que o ftabelado (3710) comprovando-se que natildeo houve falta de ajuste na faixa de concentraccedilatildeo estudada a um niacutevel de confianccedila de 95 Em seguida a validade da regressatildeo (linearidade) foi analisada por meio da comparaccedilatildeo dos valores de f tabelado e calculado O valor de fcalculado (20259) muito maior que o ftabelado (4670) indica que o meacutetodo eacute linear a um niacutevel de confianccedila de 95
200 250 300 350 400
00
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12
16
20
Ab
so
rbacircn
cia
Comprimento de onda nm
Paracetamol Aacutecido ciacutetrico Benzoato de soacutedio Ciclamato de soacutedio Macrogol Metabissulfito de soacutedio Sacarina soacutedica Mistura 1 Mistura 2
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Figura 4 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para o paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacute ido lo iacuted i o va ia do a o e t accedilatildeo de a g L-1 Inserido Curva analiacutetica
Tabela 2 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste do modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados da curva analiacutetica obtida
Fonte SQ GL MQ fcalculado ftabelado
Modelo 0154140867 1 0154140867 20259 4670
Residual 0000989101 13 7608472 x 10-5 Curva linear
Falta de ajuste 0000349593 3 1165308 x 10-4 1822 3710
Erro puro 0000639509 10 6395088 x 10-5 Natildeo haacute falta de ajuste
Total 0155065805 14 0011076129
SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica
A partir da curva analiacutetica foram al ulados os li ites de dete ccedilatildeo de g
mL-1 e de ua tifi accedilatildeo de g L-1 assegurando-se que o meacutetodo proposto pode detectar e quantificar concentraccedilotildees baixas com seguranccedila podendo ser aplicado na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
A repetitividade e a precisatildeo intermediaacuteria foram avaliadas por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo
PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo diferentes em dois dias e com analistas diferentes Os resultados obtidos (Tabela 3) para a repetitividade e precisatildeo intermediaacuteria demonstram que o meacutetodo proposto apresenta boa precisatildeo com valores de CV dentro do criteacuterio de aceitaccedilatildeo (lt 5) estabelecido no Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
63 70 77 84 91 98
056
064
072
080
088
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Concentraccedilatildeo g mL-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()
64 127 -
1 1 80 144 -
96 165 -
64 093 138
2 2 80 160 161
96 176 434
CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)
Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se
recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica
Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo
As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os
valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
-08 -04 00 04 08 12 16068
072
076
080
084
088
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Concentraccedilatildeo g L-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo
g L-1)
Recuperaccedilatildeo
meacutedia plusmn DP ()
05 10955 plusmn 1007
Referecircncia 10 10334 plusmn 446
15 9745 plusmn 172
Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605
05 11997 plusmn 705
Geneacuterico 10 9459 plusmn 657
15
Meacutedia plusmn DP
9371 plusmn 675
10276 plusmn 1491
n = 3 DP = Desvio padratildeo
Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis
marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5
Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo
dia g L-1) DP CV ()
Marca do etanol absoluto
Dinacircmica 768 001 019 ANOVA
fcalculado = 395 ftabelado = 514
Reagen 718 010 147
Vetec 737 005 076
Temperatura
24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190
tcalculado = 0001 ttabelado= 4303
27degC 737 005 076
n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo
A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse
paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro
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opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O
valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas
A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV
Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
PAR (mg mL-1)
Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()
Referecircncia 200 201 plusmn 5 050
Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050
n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100
O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas
Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11
para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos
4 Conclusatildeo
O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas
Agradecimentos
Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)
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Referecircncias Bibliograacuteficas
1 Zhu W Huang H Gao X Ma H
Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical
Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of
Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced
Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical
Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD
determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of
Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science
2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual
de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and
Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova
2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova
2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo
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analiacutetico para determinaccedilatildeo do teor de sinvastatina em caacutepsulas magistrais Quiacutemica
Nova 2011 34 516 [CrossRef] 16 Barboza F M Dalla Vecchia D Pereira A V Stulzer H K Silva M A S Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico simples e raacutepido por espectroscopia UV para quantificaccedilatildeo de aciclovir em matrizes hidrofiacutelicas de liberaccedilatildeo prolongada Quiacutemica Nova 2010 33 747 [CrossRef] 17 do Recircgo J F de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo de olanzapina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria desenvolvimento e validaccedilatildeo Quiacutemica Nova
2010 33 471 [CrossRef] 18 de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo simultacircnea de olanzapina e cloridrato de fluoxetina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria derivativa Quiacutemica Nova
2012 35 627 [CrossRef] 19 Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Resoluccedilatildeo RE n
o 899 de
29052003 [Link] 20 ICH - The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human
Use Q 2B- validation of Analytical procedure
methodology 1996 [Link] 21 Pimentel M F Neto B B Calibraccedilatildeo Uma Revisatildeo para Quiacutemicos Analiacuteticos Quiacutemica Nova 1996 3 268 [Link] 22 Mendham J Denney R C Barnes J D Thomas M J K Anaacutelise Quiacutemica
Quantitativa 6a ed LTC Rio de Janeiro 2002 23 Instituto Nacional de Metrologia Normalizaccedilatildeo e Qualidade Industrial (INMETRO) Orientaccedilatildeo sobre Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo 2016 [Link] 24 Knochen M Giglio J Reis B F Flow-injection spectrophotometric determination of paracetamol in tablets and oral solutions Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis 2003 33 191 [CrossRef] [PubMed] 25 Borio V G Vinha Jr R Nicolau R A de Oliveira H P M de Lima C J Silveira Jr L Quantitative Evaluation of Acetaminophen in Oral Solutions by Dispersive Raman Spectroscopy for Quality Control Spectroscopy An International Journal 2012 27 215 [CrossRef]
- Abstract
- Resumo
- 1 Introduccedilatildeo
- 2 Parte Experimental
- 3 Resultados e Discussatildeo
- 4 Conclusatildeo
- Referecircncias Bibliograacuteficas
-
Volume 9 Nuacutemero 4
Revista Virtual de Quiacutemica
ISSN 1984-6835
Julho-Agosto 2017
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Validaccedilatildeo de Meacutetodo Analiacutetico para a Quantificaccedilatildeo de
Paracetamol em Soluccedilatildeo Oral por Espectrofotometria no UV
Enock Joseacute A G Junior Jakson S Roeder Kaiky B L Oliveira Mateus P
Ferreira Jonatas G da Silva
Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia Curso de Quiacutemica QS 07 lote 01 EPCT Aacuteguas Claras CEP 71966-700 Taguatinga-DF Brasil
jonatasgyahoocombr
Recebido em 9 de maio de 2017 Aceito para publicaccedilatildeo em 21 de junho de 2017
1 Introduccedilatildeo
2 Parte Experimental
3 Resultados e Discussatildeo
4 Conclusatildeo
1 Introduccedilatildeo
O paracetamol (PAR) tambeacutem conhecido como acetaminofeno (Figura 1) eacute um faacutermaco amplamente utilizado sem prescriccedilatildeo meacutedica como antipireacutetico analgeacutesico e anti-inflamatoacuterio leve como uma alternativa a Aspirinareg sendo um agente eficaz e empregado para reduzir a febre e aliviar a dores de cabeccedila dente lombar musculares artrite e poacutes-operatoacuteria O uso controlado e limitado do PAR eacute seguro
natildeo apresentando efeito secundaacuterio prejudicial No entanto uma dose elevada ou o seu uso prolongado pode causar efeitos adversos para a sauacutede devido agrave acumulaccedilatildeo de metaboacutelitos toacutexicos podendo levar a hepatotoxicidade e nefrotoxicidade graves e agraves vezes fatais1-3 Portanto eacute importante desenvolver e validar meacutetodos analiacuteticos simples raacutepidos sensiacuteveis e precisos para a detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas gerando assim resultados confiaacuteveis no controle de qualidade na induacutestria farmacecircutica
Figura 1 Estrutura quiacutemica do paracetamol
HO
N
O
H
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Satildeo descritos na literatura para a detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas diferentes meacutetodos analiacuteticos como espectrofotomeacutetrico45 espectrofluorimeacutetrico6 cromatograacutefico7-9 e voltameacutetrico1011 Para o doseamento de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas a farmacopeia brasileira12 descreve um meacutetodo baseado em medidas espectrofotomeacutetricas como oficial No meacutetodo descrito pela farmacopeia brasileira a quantificaccedilatildeo do paracetamol em soluccedilatildeo oral eacute realizada a partir dos valores das absorbacircncias de uma uacutenica soluccedilatildeo padratildeo (com concentraccedilatildeo igual a da formulaccedilatildeo farmacecircutica) e da soluccedilatildeo oral empregando-se como solvente o metanol Enquanto que no meacutetodo proposto nesse artigo a quantificaccedilatildeo do paracetamol seraacute por meio de uma curva analiacutetica empregando-se como solvente o etanol podendo ser utilizado no controle de qualidade de induacutestrias farmacecircuticas
A espectrofotometria na regiatildeo do ultravioleta (UV) eacute amplamente aplicada na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de faacutermacos em formulaccedilotildees farmacecircuticas sendo utilizada principalmente no controle de qualidade de induacutestrias farmacecircuticas pois cumpre requisitos essenciais para as anaacutelises de rotina como rapidez baixo custo operacional e confiabilidade dos resultados1314 Satildeo encontrados na literatura alguns exemplos do emprego da espectrofotometria na regiatildeo do UV na quantificaccedilatildeo de faacutermacos como carvedilol13 efavirenz14 sinvastatina15 aciclovir16 olanzapina17 e fluoxetina18 em formulaccedilotildees farmacecircuticas
A validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos eacute necessaacuteria para gerar resultados confiaacuteveis no contexto do controle de qualidade na induacutestria farmacecircutica pois deve-se assegurar por meio de estudos experimentais que o meacutetodo atenda agraves exigecircncias analiacuteticas assegurando a confiabilidade dos resultados Para a validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico os seguintes paracircmetros (figuras analiacuteticas de meacuterito) devem ser avaliados seletividade linearidade intervalo precisatildeo limite de
detecccedilatildeo limite de quantificaccedilatildeo exatidatildeo e robustez19
Portanto a validaccedilatildeo de um meacutetodo simples preciso raacutepido e de baixo custo para a anaacutelise de rotina de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas eacute importante devido agrave grande utilizaccedilatildeo desse faacutermaco e seus efeitos adversos para a sauacutede humana Nesse contexto o presente trabalho tem como objetivo validar um meacutetodo empregando a espectrofotometria na regiatildeo do UV para a detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
2 Parte Experimental
Equipamentos
As medidas espectrofotomeacutetricas no UV foram realizadas em triplicata utilizando-se o espectrofotocircmetro UV-Vis Cary 50 (Varianreg) de duplo feixe detector de 190 a 1100 nm cubetas de quartzo de 1 cm e acoplado a um microcomputador Todas as medidas de massa foram realizadas em balanccedila analiacutetica semi- i o σ le g AUW D (Shimadzureg)
Reagentes soluccedilotildees e amostra
Todos os reagentes utilizados foram de grau analiacutetico e as soluccedilotildees foram preparadas em aacutegua ultrapura (Direct-Qreg 8 UV Smart Millipore 1 Ω O pad atildeo de PAR -101 foi adquirido da sigma-aldrich (USA) e utilizado sem purificaccedilatildeo adicional A soluccedilatildeo estoque de PAR 1 mg mL-1 foi preparada dissolvendo-se 10 mg de PAR em aacutegua ultrapura em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL O aacutecido cloriacutedrico (HCl) 37 e o etanol absoluto 998 foram adquiridos da Vetec (Brasil) A soluccedilatildeo de HCl 01 mol L-1 foi preparada por diluiccedilatildeo em aacutegua ultrapura A soluccedilatildeo oral contendo PAR foi adquirida em comeacutercio local
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Validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico
O meacutetodo proposto foi validado conforme a resoluccedilatildeo RE no 899 de 29052003 da ANVISA (Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria)19 que regulamenta a validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos e bioanaliacuteticos no Brasil e recomendaccedilotildees da ICH (The International
Conference on Harmonisation of Technical
Requirements for Registration of
Pharmaceuticals for Human Use)20 As figuras analiacuteticas de meacuterito avaliadas foram seletividade linearidade intervalo precisatildeo limite de detecccedilatildeo limite de quantificaccedilatildeo exatidatildeo e robustez O meacutetodo foi comparado estatisticamente com o valor descrito no roacutetulo da soluccedilatildeo oral contendo paracetamol
Seletividade
A seletividade do meacutetodo foi avaliada por meio de anaacutelises dos espectros UV obtidos para o PAR e os excipientes aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina
soacutedica As soluccedilotildees estoque de 1 mg mL-1 para os excipientes foram preparadas dissolvendo-se 10 mg em aacutegua ultrapura ou etanol em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL As medidas espectrofotomeacutetricas foram ealizadas as soluccedilotildees dos e ipie tes g
mL-1 e de duas misturas (1 ndash PAR g L-1 + excipientes 8 g L-1 2 ndash PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) preparadas por diluiccedilatildeo das soluccedilotildees estoque em etanol mais
L de HCl ol L-1 em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL O perfil dos espectros obtidos foram avaliados e comparados com o espectro de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1
Linearidade e intervalo
A linearidade foi determinada por meio da obtenccedilatildeo de trecircs curvas analiacuteticas no i te valo de PAR de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste)19 A equaccedilatildeo da reta (inclinaccedilatildeo e intercepto com o eixo y) foi obtida pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados e calculou-se o coeficiente de correlaccedilatildeo linear Os dados de cada niacutevel de concentraccedilatildeo foram avaliados por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA) (Tabela 1)
Tabela 1 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste de um modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados21
Fonte SQ GL MQ Fcalculado
Modelo SQreg = Σni [(ye)i - ym]2 p-1 MQreg = SQreg(p-1) MQregMQr
Residual SQr = Σ Σ [yij - (ye)i]2 n-p MQr = SQr(n-p)
Falta de ajuste SQfaj = Σni [(ye)i - yim]2 m-p MQfaj = SQfaj(m-p) MQfajMQep
Erro puro SQep = Σ Σ [ ij - yim]2 n-m MQep = SQep(n-m)
Total SQt = Σ Σ [ ij - ym]2 n-1 MQt = SQt(n-1)
SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica ni = nuacutemero de epeticcedilotildees do iacutevel i = uacute e o de iacuteveis disti tos da va iaacutevel = Σ i = nuacutemero total de
medidas p = nuacutemero de paracircmetros do modelo O iacutendice i indica o niacutevel da variaacutevel x o iacutendice j refere-se agraves medidas repetidas da variaacutevel y em um dado niacutevel de x O segundo somatoacuterio das expressotildees para SQr SQep e SQt vai de j = 1 ateacute j = ni Os outros somatoacuterios vatildeo de i = 1 ateacute i = m ym eacute a meacutedia de todos os valores de y yim eacute a meacutedia das determinaccedilotildees repetidas no niacutevel i
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Limites de detecccedilatildeo (LD) e de
quantificaccedilatildeo (LQ)
Os limites de detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo foram calculados a partir do desvio padratildeo do intercepto com o eixo y (DPa) e da inclinaccedilatildeo da curva analiacutetica (IC) Equaccedilotildees 1 e 219
LD = DPa IC
(1)
LQ = DPa IC
(2)
O desvio padratildeo do intercepto com o eixo y foi calculado pelas seguintes Equaccedilotildees22
Syx = radicΣ yi - y 2 n - 2 (3)
DPa= S radic Σ i
Σ( i - ) (4)
Precisatildeo
A repetitividade (precisatildeo intradia) foi avaliada por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo dife e tes e g L-1) contemplando o intervalo linear do meacutetodo e com trecircs reacuteplicas cada A precisatildeo intermediaacuteria (precisatildeo interdia) foi avaliada de forma semelhante agrave repetitividade no entanto as mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas foram realizadas em dois dias com analistas diferentes Calculou-se o coeficiente de variaccedilatildeo (CV) por meio da Equaccedilatildeo 5 e os resultados obtidos foram comparados com o valor maacuteximo aceitaacutevel descrito no Guia para
Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19
CV = DPCMD
(5)
Onde CV eacute o coeficiente de variaccedilatildeo DP eacute o desvio padratildeo das medidas espectrofotomeacutetricas e CMD eacute a concentraccedilatildeo meacutedia de PAR determinada
Exatidatildeo
A exatidatildeo foi avaliada por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR nas amostras de formulaccedilotildees farmacecircuticas (referecircncia e geneacuterico) e sua recuperaccedilatildeo em trecircs niacuteveis diferentes Os valores de recuperaccedilatildeo expressos em porcentagem foram obtidos por meio das medidas espectrofotomeacutetricas das soluccedilotildees finais em funccedilatildeo da quantidade teoacuterica de padratildeo adicionado As concentraccedilotildees de PAR foram determinadas por meio da curva analiacutetica obtida pela adiccedilatildeo de padratildeo
Robustez
A robustez foi avaliada por meio das mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas variando-se a marca do etanol (Vetec Reagen e Dinacircmica) e a temperatura da sala de anaacutelise (27 e 24 degC) As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica
Quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
utilizando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico
proposto
Transferiu-se 10 mL da soluccedilatildeo oral para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e o volume foi completado com etanol Em seguida
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transferiu-se 05 mL da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e completou-se o volume com etanol Apoacutes a segunda diluiccedilatildeo transferiu-se L da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL adicionou-se L de aacute ido cloriacutedrico 01 mol L-1 o volume foi completado com etanol As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica
Anaacutelises estatiacutesticas
A anaacutelise estatiacutestica dos dados foi realizada por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA fator uacutenico) testes t e f com niacutevel de confianccedila de 95 (probabilidade inferior a 5 - p lt 005) A avaliaccedilatildeo estatiacutestica dos resultados foi realizada por meio do Software MS Excelreg
3 Resultados e Discussatildeo
Inicialmente determinou-se o comprimento de onda no maacuteximo de a so ccedilatildeo max) para realizar os ensaios de validaccedilatildeo e a quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral Analisando o espectro UV (200-400 nm) da Figura 2 obtido a partir de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1 em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (descrita no meacutetodo indicado pela Farmacopeia Brasileira12) observou-se uma banda com absorccedilatildeo maacutexima em 250 nm Portanto para o desenvolvimento do meacutetodo analiacutetico optou-se realizar as medidas espectrofotomeacutetricas na regiatildeo do UV no comprimento de onda no maacuteximo de absorccedilatildeo do PAR
Figura 2 Espectro de absorccedilatildeo no UV do paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Para a validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico visando agrave quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas foi realizado o estudo de seletividade por meio de anaacutelises dos espectros UV (Figura 3) obtidos para o PAR e os excipientes presentes na soluccedilatildeo
oral (aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina soacutedica) Observou-se nos espectros UV que entre os excipientes analisados apenas o benzoato de soacutedio e a sacarina soacutedica apresentaram bandas de
200 250 300 350 400
00
02
04
06
08
10
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
max
= 250 nm
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absorccedilatildeo na faixa de comprimento de onda estudada tornando-se essas espeacutecies quiacutemicas em potenciais interferentes na quantificaccedilatildeo do PAR em soluccedilatildeo oral O espe t o UV pa a a Mistu a PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) confirma uma interferecircncia na banda de absorccedilatildeo do PAR no entanto com base no espectro UV obtido
pa a a Mistu a PAR g L-1 + excipientes g L-1) acredita-se que em baixas
concentraccedilotildees (concentraccedilatildeo de excipientes dez vezes menor que a do PAR) o benzoato de soacutedio e sacarina soacutedica natildeo satildeo potenciais interferentes na anaacutelise da soluccedilatildeo oral contendo o PAR
Figura 3 Espectros de absorccedilatildeo no UV do paracetamol e dos excipientes em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Confirmada a seletividade do meacutetodo foram obtidos os espectros de absorccedilatildeo no UV para PAR com a concentraccedilatildeo variando de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste) em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (Figura 4)
A curva analiacutetica obtida por meio do meacutetodo dos miacutenimos quadrados apresentou a equaccedilatildeo y = 00896x + 00177 e um coeficiente de correlaccedilatildeo de 09988 indicando a linearidade do meacutetodo dentro dos limites de concentraccedilotildees estudadas al de esta de a o do o o it io
iacute i o a eitaacutevel do oefi ie te de o elaccedilatildeo = des ito o Guia pa a
Validaccedilatildeo de M todos A aliacuteti os e
Bioa aliacuteti os Resoluccedilatildeo o de 2003 da ANVISA)19 Por meio da anaacutelise de variacircncia testou-se a significacircncia estatiacutestica da curva ajustada e a linearidade do meacutetodo (Tabela 2) No teste do ajuste da curva obteve-se um valor de fcalculado (1822) menor que o ftabelado (3710) comprovando-se que natildeo houve falta de ajuste na faixa de concentraccedilatildeo estudada a um niacutevel de confianccedila de 95 Em seguida a validade da regressatildeo (linearidade) foi analisada por meio da comparaccedilatildeo dos valores de f tabelado e calculado O valor de fcalculado (20259) muito maior que o ftabelado (4670) indica que o meacutetodo eacute linear a um niacutevel de confianccedila de 95
200 250 300 350 400
00
04
08
12
16
20
Ab
so
rbacircn
cia
Comprimento de onda nm
Paracetamol Aacutecido ciacutetrico Benzoato de soacutedio Ciclamato de soacutedio Macrogol Metabissulfito de soacutedio Sacarina soacutedica Mistura 1 Mistura 2
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Figura 4 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para o paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacute ido lo iacuted i o va ia do a o e t accedilatildeo de a g L-1 Inserido Curva analiacutetica
Tabela 2 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste do modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados da curva analiacutetica obtida
Fonte SQ GL MQ fcalculado ftabelado
Modelo 0154140867 1 0154140867 20259 4670
Residual 0000989101 13 7608472 x 10-5 Curva linear
Falta de ajuste 0000349593 3 1165308 x 10-4 1822 3710
Erro puro 0000639509 10 6395088 x 10-5 Natildeo haacute falta de ajuste
Total 0155065805 14 0011076129
SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica
A partir da curva analiacutetica foram al ulados os li ites de dete ccedilatildeo de g
mL-1 e de ua tifi accedilatildeo de g L-1 assegurando-se que o meacutetodo proposto pode detectar e quantificar concentraccedilotildees baixas com seguranccedila podendo ser aplicado na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
A repetitividade e a precisatildeo intermediaacuteria foram avaliadas por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo
PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo diferentes em dois dias e com analistas diferentes Os resultados obtidos (Tabela 3) para a repetitividade e precisatildeo intermediaacuteria demonstram que o meacutetodo proposto apresenta boa precisatildeo com valores de CV dentro do criteacuterio de aceitaccedilatildeo (lt 5) estabelecido no Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
63 70 77 84 91 98
056
064
072
080
088
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Concentraccedilatildeo g mL-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()
64 127 -
1 1 80 144 -
96 165 -
64 093 138
2 2 80 160 161
96 176 434
CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)
Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se
recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica
Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo
As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os
valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
-08 -04 00 04 08 12 16068
072
076
080
084
088
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Concentraccedilatildeo g L-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo
g L-1)
Recuperaccedilatildeo
meacutedia plusmn DP ()
05 10955 plusmn 1007
Referecircncia 10 10334 plusmn 446
15 9745 plusmn 172
Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605
05 11997 plusmn 705
Geneacuterico 10 9459 plusmn 657
15
Meacutedia plusmn DP
9371 plusmn 675
10276 plusmn 1491
n = 3 DP = Desvio padratildeo
Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis
marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5
Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo
dia g L-1) DP CV ()
Marca do etanol absoluto
Dinacircmica 768 001 019 ANOVA
fcalculado = 395 ftabelado = 514
Reagen 718 010 147
Vetec 737 005 076
Temperatura
24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190
tcalculado = 0001 ttabelado= 4303
27degC 737 005 076
n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo
A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse
paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro
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opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O
valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas
A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV
Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
PAR (mg mL-1)
Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()
Referecircncia 200 201 plusmn 5 050
Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050
n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100
O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas
Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11
para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos
4 Conclusatildeo
O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas
Agradecimentos
Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)
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Referecircncias Bibliograacuteficas
1 Zhu W Huang H Gao X Ma H
Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical
Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of
Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced
Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical
Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD
determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of
Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science
2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual
de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and
Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova
2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova
2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo
Junior E J A G et al
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analiacutetico para determinaccedilatildeo do teor de sinvastatina em caacutepsulas magistrais Quiacutemica
Nova 2011 34 516 [CrossRef] 16 Barboza F M Dalla Vecchia D Pereira A V Stulzer H K Silva M A S Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico simples e raacutepido por espectroscopia UV para quantificaccedilatildeo de aciclovir em matrizes hidrofiacutelicas de liberaccedilatildeo prolongada Quiacutemica Nova 2010 33 747 [CrossRef] 17 do Recircgo J F de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo de olanzapina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria desenvolvimento e validaccedilatildeo Quiacutemica Nova
2010 33 471 [CrossRef] 18 de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo simultacircnea de olanzapina e cloridrato de fluoxetina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria derivativa Quiacutemica Nova
2012 35 627 [CrossRef] 19 Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Resoluccedilatildeo RE n
o 899 de
29052003 [Link] 20 ICH - The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human
Use Q 2B- validation of Analytical procedure
methodology 1996 [Link] 21 Pimentel M F Neto B B Calibraccedilatildeo Uma Revisatildeo para Quiacutemicos Analiacuteticos Quiacutemica Nova 1996 3 268 [Link] 22 Mendham J Denney R C Barnes J D Thomas M J K Anaacutelise Quiacutemica
Quantitativa 6a ed LTC Rio de Janeiro 2002 23 Instituto Nacional de Metrologia Normalizaccedilatildeo e Qualidade Industrial (INMETRO) Orientaccedilatildeo sobre Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo 2016 [Link] 24 Knochen M Giglio J Reis B F Flow-injection spectrophotometric determination of paracetamol in tablets and oral solutions Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis 2003 33 191 [CrossRef] [PubMed] 25 Borio V G Vinha Jr R Nicolau R A de Oliveira H P M de Lima C J Silveira Jr L Quantitative Evaluation of Acetaminophen in Oral Solutions by Dispersive Raman Spectroscopy for Quality Control Spectroscopy An International Journal 2012 27 215 [CrossRef]
- Abstract
- Resumo
- 1 Introduccedilatildeo
- 2 Parte Experimental
- 3 Resultados e Discussatildeo
- 4 Conclusatildeo
- Referecircncias Bibliograacuteficas
-
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Satildeo descritos na literatura para a detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas diferentes meacutetodos analiacuteticos como espectrofotomeacutetrico45 espectrofluorimeacutetrico6 cromatograacutefico7-9 e voltameacutetrico1011 Para o doseamento de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas a farmacopeia brasileira12 descreve um meacutetodo baseado em medidas espectrofotomeacutetricas como oficial No meacutetodo descrito pela farmacopeia brasileira a quantificaccedilatildeo do paracetamol em soluccedilatildeo oral eacute realizada a partir dos valores das absorbacircncias de uma uacutenica soluccedilatildeo padratildeo (com concentraccedilatildeo igual a da formulaccedilatildeo farmacecircutica) e da soluccedilatildeo oral empregando-se como solvente o metanol Enquanto que no meacutetodo proposto nesse artigo a quantificaccedilatildeo do paracetamol seraacute por meio de uma curva analiacutetica empregando-se como solvente o etanol podendo ser utilizado no controle de qualidade de induacutestrias farmacecircuticas
A espectrofotometria na regiatildeo do ultravioleta (UV) eacute amplamente aplicada na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de faacutermacos em formulaccedilotildees farmacecircuticas sendo utilizada principalmente no controle de qualidade de induacutestrias farmacecircuticas pois cumpre requisitos essenciais para as anaacutelises de rotina como rapidez baixo custo operacional e confiabilidade dos resultados1314 Satildeo encontrados na literatura alguns exemplos do emprego da espectrofotometria na regiatildeo do UV na quantificaccedilatildeo de faacutermacos como carvedilol13 efavirenz14 sinvastatina15 aciclovir16 olanzapina17 e fluoxetina18 em formulaccedilotildees farmacecircuticas
A validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos eacute necessaacuteria para gerar resultados confiaacuteveis no contexto do controle de qualidade na induacutestria farmacecircutica pois deve-se assegurar por meio de estudos experimentais que o meacutetodo atenda agraves exigecircncias analiacuteticas assegurando a confiabilidade dos resultados Para a validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico os seguintes paracircmetros (figuras analiacuteticas de meacuterito) devem ser avaliados seletividade linearidade intervalo precisatildeo limite de
detecccedilatildeo limite de quantificaccedilatildeo exatidatildeo e robustez19
Portanto a validaccedilatildeo de um meacutetodo simples preciso raacutepido e de baixo custo para a anaacutelise de rotina de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas eacute importante devido agrave grande utilizaccedilatildeo desse faacutermaco e seus efeitos adversos para a sauacutede humana Nesse contexto o presente trabalho tem como objetivo validar um meacutetodo empregando a espectrofotometria na regiatildeo do UV para a detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
2 Parte Experimental
Equipamentos
As medidas espectrofotomeacutetricas no UV foram realizadas em triplicata utilizando-se o espectrofotocircmetro UV-Vis Cary 50 (Varianreg) de duplo feixe detector de 190 a 1100 nm cubetas de quartzo de 1 cm e acoplado a um microcomputador Todas as medidas de massa foram realizadas em balanccedila analiacutetica semi- i o σ le g AUW D (Shimadzureg)
Reagentes soluccedilotildees e amostra
Todos os reagentes utilizados foram de grau analiacutetico e as soluccedilotildees foram preparadas em aacutegua ultrapura (Direct-Qreg 8 UV Smart Millipore 1 Ω O pad atildeo de PAR -101 foi adquirido da sigma-aldrich (USA) e utilizado sem purificaccedilatildeo adicional A soluccedilatildeo estoque de PAR 1 mg mL-1 foi preparada dissolvendo-se 10 mg de PAR em aacutegua ultrapura em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL O aacutecido cloriacutedrico (HCl) 37 e o etanol absoluto 998 foram adquiridos da Vetec (Brasil) A soluccedilatildeo de HCl 01 mol L-1 foi preparada por diluiccedilatildeo em aacutegua ultrapura A soluccedilatildeo oral contendo PAR foi adquirida em comeacutercio local
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Validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico
O meacutetodo proposto foi validado conforme a resoluccedilatildeo RE no 899 de 29052003 da ANVISA (Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria)19 que regulamenta a validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos e bioanaliacuteticos no Brasil e recomendaccedilotildees da ICH (The International
Conference on Harmonisation of Technical
Requirements for Registration of
Pharmaceuticals for Human Use)20 As figuras analiacuteticas de meacuterito avaliadas foram seletividade linearidade intervalo precisatildeo limite de detecccedilatildeo limite de quantificaccedilatildeo exatidatildeo e robustez O meacutetodo foi comparado estatisticamente com o valor descrito no roacutetulo da soluccedilatildeo oral contendo paracetamol
Seletividade
A seletividade do meacutetodo foi avaliada por meio de anaacutelises dos espectros UV obtidos para o PAR e os excipientes aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina
soacutedica As soluccedilotildees estoque de 1 mg mL-1 para os excipientes foram preparadas dissolvendo-se 10 mg em aacutegua ultrapura ou etanol em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL As medidas espectrofotomeacutetricas foram ealizadas as soluccedilotildees dos e ipie tes g
mL-1 e de duas misturas (1 ndash PAR g L-1 + excipientes 8 g L-1 2 ndash PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) preparadas por diluiccedilatildeo das soluccedilotildees estoque em etanol mais
L de HCl ol L-1 em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL O perfil dos espectros obtidos foram avaliados e comparados com o espectro de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1
Linearidade e intervalo
A linearidade foi determinada por meio da obtenccedilatildeo de trecircs curvas analiacuteticas no i te valo de PAR de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste)19 A equaccedilatildeo da reta (inclinaccedilatildeo e intercepto com o eixo y) foi obtida pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados e calculou-se o coeficiente de correlaccedilatildeo linear Os dados de cada niacutevel de concentraccedilatildeo foram avaliados por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA) (Tabela 1)
Tabela 1 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste de um modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados21
Fonte SQ GL MQ Fcalculado
Modelo SQreg = Σni [(ye)i - ym]2 p-1 MQreg = SQreg(p-1) MQregMQr
Residual SQr = Σ Σ [yij - (ye)i]2 n-p MQr = SQr(n-p)
Falta de ajuste SQfaj = Σni [(ye)i - yim]2 m-p MQfaj = SQfaj(m-p) MQfajMQep
Erro puro SQep = Σ Σ [ ij - yim]2 n-m MQep = SQep(n-m)
Total SQt = Σ Σ [ ij - ym]2 n-1 MQt = SQt(n-1)
SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica ni = nuacutemero de epeticcedilotildees do iacutevel i = uacute e o de iacuteveis disti tos da va iaacutevel = Σ i = nuacutemero total de
medidas p = nuacutemero de paracircmetros do modelo O iacutendice i indica o niacutevel da variaacutevel x o iacutendice j refere-se agraves medidas repetidas da variaacutevel y em um dado niacutevel de x O segundo somatoacuterio das expressotildees para SQr SQep e SQt vai de j = 1 ateacute j = ni Os outros somatoacuterios vatildeo de i = 1 ateacute i = m ym eacute a meacutedia de todos os valores de y yim eacute a meacutedia das determinaccedilotildees repetidas no niacutevel i
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Limites de detecccedilatildeo (LD) e de
quantificaccedilatildeo (LQ)
Os limites de detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo foram calculados a partir do desvio padratildeo do intercepto com o eixo y (DPa) e da inclinaccedilatildeo da curva analiacutetica (IC) Equaccedilotildees 1 e 219
LD = DPa IC
(1)
LQ = DPa IC
(2)
O desvio padratildeo do intercepto com o eixo y foi calculado pelas seguintes Equaccedilotildees22
Syx = radicΣ yi - y 2 n - 2 (3)
DPa= S radic Σ i
Σ( i - ) (4)
Precisatildeo
A repetitividade (precisatildeo intradia) foi avaliada por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo dife e tes e g L-1) contemplando o intervalo linear do meacutetodo e com trecircs reacuteplicas cada A precisatildeo intermediaacuteria (precisatildeo interdia) foi avaliada de forma semelhante agrave repetitividade no entanto as mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas foram realizadas em dois dias com analistas diferentes Calculou-se o coeficiente de variaccedilatildeo (CV) por meio da Equaccedilatildeo 5 e os resultados obtidos foram comparados com o valor maacuteximo aceitaacutevel descrito no Guia para
Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19
CV = DPCMD
(5)
Onde CV eacute o coeficiente de variaccedilatildeo DP eacute o desvio padratildeo das medidas espectrofotomeacutetricas e CMD eacute a concentraccedilatildeo meacutedia de PAR determinada
Exatidatildeo
A exatidatildeo foi avaliada por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR nas amostras de formulaccedilotildees farmacecircuticas (referecircncia e geneacuterico) e sua recuperaccedilatildeo em trecircs niacuteveis diferentes Os valores de recuperaccedilatildeo expressos em porcentagem foram obtidos por meio das medidas espectrofotomeacutetricas das soluccedilotildees finais em funccedilatildeo da quantidade teoacuterica de padratildeo adicionado As concentraccedilotildees de PAR foram determinadas por meio da curva analiacutetica obtida pela adiccedilatildeo de padratildeo
Robustez
A robustez foi avaliada por meio das mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas variando-se a marca do etanol (Vetec Reagen e Dinacircmica) e a temperatura da sala de anaacutelise (27 e 24 degC) As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica
Quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
utilizando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico
proposto
Transferiu-se 10 mL da soluccedilatildeo oral para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e o volume foi completado com etanol Em seguida
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transferiu-se 05 mL da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e completou-se o volume com etanol Apoacutes a segunda diluiccedilatildeo transferiu-se L da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL adicionou-se L de aacute ido cloriacutedrico 01 mol L-1 o volume foi completado com etanol As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica
Anaacutelises estatiacutesticas
A anaacutelise estatiacutestica dos dados foi realizada por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA fator uacutenico) testes t e f com niacutevel de confianccedila de 95 (probabilidade inferior a 5 - p lt 005) A avaliaccedilatildeo estatiacutestica dos resultados foi realizada por meio do Software MS Excelreg
3 Resultados e Discussatildeo
Inicialmente determinou-se o comprimento de onda no maacuteximo de a so ccedilatildeo max) para realizar os ensaios de validaccedilatildeo e a quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral Analisando o espectro UV (200-400 nm) da Figura 2 obtido a partir de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1 em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (descrita no meacutetodo indicado pela Farmacopeia Brasileira12) observou-se uma banda com absorccedilatildeo maacutexima em 250 nm Portanto para o desenvolvimento do meacutetodo analiacutetico optou-se realizar as medidas espectrofotomeacutetricas na regiatildeo do UV no comprimento de onda no maacuteximo de absorccedilatildeo do PAR
Figura 2 Espectro de absorccedilatildeo no UV do paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Para a validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico visando agrave quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas foi realizado o estudo de seletividade por meio de anaacutelises dos espectros UV (Figura 3) obtidos para o PAR e os excipientes presentes na soluccedilatildeo
oral (aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina soacutedica) Observou-se nos espectros UV que entre os excipientes analisados apenas o benzoato de soacutedio e a sacarina soacutedica apresentaram bandas de
200 250 300 350 400
00
02
04
06
08
10
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
max
= 250 nm
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absorccedilatildeo na faixa de comprimento de onda estudada tornando-se essas espeacutecies quiacutemicas em potenciais interferentes na quantificaccedilatildeo do PAR em soluccedilatildeo oral O espe t o UV pa a a Mistu a PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) confirma uma interferecircncia na banda de absorccedilatildeo do PAR no entanto com base no espectro UV obtido
pa a a Mistu a PAR g L-1 + excipientes g L-1) acredita-se que em baixas
concentraccedilotildees (concentraccedilatildeo de excipientes dez vezes menor que a do PAR) o benzoato de soacutedio e sacarina soacutedica natildeo satildeo potenciais interferentes na anaacutelise da soluccedilatildeo oral contendo o PAR
Figura 3 Espectros de absorccedilatildeo no UV do paracetamol e dos excipientes em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Confirmada a seletividade do meacutetodo foram obtidos os espectros de absorccedilatildeo no UV para PAR com a concentraccedilatildeo variando de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste) em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (Figura 4)
A curva analiacutetica obtida por meio do meacutetodo dos miacutenimos quadrados apresentou a equaccedilatildeo y = 00896x + 00177 e um coeficiente de correlaccedilatildeo de 09988 indicando a linearidade do meacutetodo dentro dos limites de concentraccedilotildees estudadas al de esta de a o do o o it io
iacute i o a eitaacutevel do oefi ie te de o elaccedilatildeo = des ito o Guia pa a
Validaccedilatildeo de M todos A aliacuteti os e
Bioa aliacuteti os Resoluccedilatildeo o de 2003 da ANVISA)19 Por meio da anaacutelise de variacircncia testou-se a significacircncia estatiacutestica da curva ajustada e a linearidade do meacutetodo (Tabela 2) No teste do ajuste da curva obteve-se um valor de fcalculado (1822) menor que o ftabelado (3710) comprovando-se que natildeo houve falta de ajuste na faixa de concentraccedilatildeo estudada a um niacutevel de confianccedila de 95 Em seguida a validade da regressatildeo (linearidade) foi analisada por meio da comparaccedilatildeo dos valores de f tabelado e calculado O valor de fcalculado (20259) muito maior que o ftabelado (4670) indica que o meacutetodo eacute linear a um niacutevel de confianccedila de 95
200 250 300 350 400
00
04
08
12
16
20
Ab
so
rbacircn
cia
Comprimento de onda nm
Paracetamol Aacutecido ciacutetrico Benzoato de soacutedio Ciclamato de soacutedio Macrogol Metabissulfito de soacutedio Sacarina soacutedica Mistura 1 Mistura 2
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Figura 4 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para o paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacute ido lo iacuted i o va ia do a o e t accedilatildeo de a g L-1 Inserido Curva analiacutetica
Tabela 2 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste do modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados da curva analiacutetica obtida
Fonte SQ GL MQ fcalculado ftabelado
Modelo 0154140867 1 0154140867 20259 4670
Residual 0000989101 13 7608472 x 10-5 Curva linear
Falta de ajuste 0000349593 3 1165308 x 10-4 1822 3710
Erro puro 0000639509 10 6395088 x 10-5 Natildeo haacute falta de ajuste
Total 0155065805 14 0011076129
SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica
A partir da curva analiacutetica foram al ulados os li ites de dete ccedilatildeo de g
mL-1 e de ua tifi accedilatildeo de g L-1 assegurando-se que o meacutetodo proposto pode detectar e quantificar concentraccedilotildees baixas com seguranccedila podendo ser aplicado na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
A repetitividade e a precisatildeo intermediaacuteria foram avaliadas por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo
PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo diferentes em dois dias e com analistas diferentes Os resultados obtidos (Tabela 3) para a repetitividade e precisatildeo intermediaacuteria demonstram que o meacutetodo proposto apresenta boa precisatildeo com valores de CV dentro do criteacuterio de aceitaccedilatildeo (lt 5) estabelecido no Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
63 70 77 84 91 98
056
064
072
080
088
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Concentraccedilatildeo g mL-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()
64 127 -
1 1 80 144 -
96 165 -
64 093 138
2 2 80 160 161
96 176 434
CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)
Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se
recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica
Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo
As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os
valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
-08 -04 00 04 08 12 16068
072
076
080
084
088
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Concentraccedilatildeo g L-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo
g L-1)
Recuperaccedilatildeo
meacutedia plusmn DP ()
05 10955 plusmn 1007
Referecircncia 10 10334 plusmn 446
15 9745 plusmn 172
Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605
05 11997 plusmn 705
Geneacuterico 10 9459 plusmn 657
15
Meacutedia plusmn DP
9371 plusmn 675
10276 plusmn 1491
n = 3 DP = Desvio padratildeo
Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis
marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5
Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo
dia g L-1) DP CV ()
Marca do etanol absoluto
Dinacircmica 768 001 019 ANOVA
fcalculado = 395 ftabelado = 514
Reagen 718 010 147
Vetec 737 005 076
Temperatura
24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190
tcalculado = 0001 ttabelado= 4303
27degC 737 005 076
n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo
A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse
paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro
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opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O
valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas
A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV
Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
PAR (mg mL-1)
Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()
Referecircncia 200 201 plusmn 5 050
Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050
n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100
O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas
Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11
para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos
4 Conclusatildeo
O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas
Agradecimentos
Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)
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Referecircncias Bibliograacuteficas
1 Zhu W Huang H Gao X Ma H
Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical
Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of
Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced
Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical
Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD
determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of
Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science
2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual
de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and
Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova
2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova
2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo
Junior E J A G et al
Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1759
analiacutetico para determinaccedilatildeo do teor de sinvastatina em caacutepsulas magistrais Quiacutemica
Nova 2011 34 516 [CrossRef] 16 Barboza F M Dalla Vecchia D Pereira A V Stulzer H K Silva M A S Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico simples e raacutepido por espectroscopia UV para quantificaccedilatildeo de aciclovir em matrizes hidrofiacutelicas de liberaccedilatildeo prolongada Quiacutemica Nova 2010 33 747 [CrossRef] 17 do Recircgo J F de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo de olanzapina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria desenvolvimento e validaccedilatildeo Quiacutemica Nova
2010 33 471 [CrossRef] 18 de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo simultacircnea de olanzapina e cloridrato de fluoxetina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria derivativa Quiacutemica Nova
2012 35 627 [CrossRef] 19 Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Resoluccedilatildeo RE n
o 899 de
29052003 [Link] 20 ICH - The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human
Use Q 2B- validation of Analytical procedure
methodology 1996 [Link] 21 Pimentel M F Neto B B Calibraccedilatildeo Uma Revisatildeo para Quiacutemicos Analiacuteticos Quiacutemica Nova 1996 3 268 [Link] 22 Mendham J Denney R C Barnes J D Thomas M J K Anaacutelise Quiacutemica
Quantitativa 6a ed LTC Rio de Janeiro 2002 23 Instituto Nacional de Metrologia Normalizaccedilatildeo e Qualidade Industrial (INMETRO) Orientaccedilatildeo sobre Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo 2016 [Link] 24 Knochen M Giglio J Reis B F Flow-injection spectrophotometric determination of paracetamol in tablets and oral solutions Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis 2003 33 191 [CrossRef] [PubMed] 25 Borio V G Vinha Jr R Nicolau R A de Oliveira H P M de Lima C J Silveira Jr L Quantitative Evaluation of Acetaminophen in Oral Solutions by Dispersive Raman Spectroscopy for Quality Control Spectroscopy An International Journal 2012 27 215 [CrossRef]
- Abstract
- Resumo
- 1 Introduccedilatildeo
- 2 Parte Experimental
- 3 Resultados e Discussatildeo
- 4 Conclusatildeo
- Referecircncias Bibliograacuteficas
-
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Validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico
O meacutetodo proposto foi validado conforme a resoluccedilatildeo RE no 899 de 29052003 da ANVISA (Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria)19 que regulamenta a validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos e bioanaliacuteticos no Brasil e recomendaccedilotildees da ICH (The International
Conference on Harmonisation of Technical
Requirements for Registration of
Pharmaceuticals for Human Use)20 As figuras analiacuteticas de meacuterito avaliadas foram seletividade linearidade intervalo precisatildeo limite de detecccedilatildeo limite de quantificaccedilatildeo exatidatildeo e robustez O meacutetodo foi comparado estatisticamente com o valor descrito no roacutetulo da soluccedilatildeo oral contendo paracetamol
Seletividade
A seletividade do meacutetodo foi avaliada por meio de anaacutelises dos espectros UV obtidos para o PAR e os excipientes aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina
soacutedica As soluccedilotildees estoque de 1 mg mL-1 para os excipientes foram preparadas dissolvendo-se 10 mg em aacutegua ultrapura ou etanol em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL As medidas espectrofotomeacutetricas foram ealizadas as soluccedilotildees dos e ipie tes g
mL-1 e de duas misturas (1 ndash PAR g L-1 + excipientes 8 g L-1 2 ndash PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) preparadas por diluiccedilatildeo das soluccedilotildees estoque em etanol mais
L de HCl ol L-1 em balatildeo volumeacutetrico de 10 mL O perfil dos espectros obtidos foram avaliados e comparados com o espectro de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1
Linearidade e intervalo
A linearidade foi determinada por meio da obtenccedilatildeo de trecircs curvas analiacuteticas no i te valo de PAR de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste)19 A equaccedilatildeo da reta (inclinaccedilatildeo e intercepto com o eixo y) foi obtida pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados e calculou-se o coeficiente de correlaccedilatildeo linear Os dados de cada niacutevel de concentraccedilatildeo foram avaliados por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA) (Tabela 1)
Tabela 1 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste de um modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados21
Fonte SQ GL MQ Fcalculado
Modelo SQreg = Σni [(ye)i - ym]2 p-1 MQreg = SQreg(p-1) MQregMQr
Residual SQr = Σ Σ [yij - (ye)i]2 n-p MQr = SQr(n-p)
Falta de ajuste SQfaj = Σni [(ye)i - yim]2 m-p MQfaj = SQfaj(m-p) MQfajMQep
Erro puro SQep = Σ Σ [ ij - yim]2 n-m MQep = SQep(n-m)
Total SQt = Σ Σ [ ij - ym]2 n-1 MQt = SQt(n-1)
SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica ni = nuacutemero de epeticcedilotildees do iacutevel i = uacute e o de iacuteveis disti tos da va iaacutevel = Σ i = nuacutemero total de
medidas p = nuacutemero de paracircmetros do modelo O iacutendice i indica o niacutevel da variaacutevel x o iacutendice j refere-se agraves medidas repetidas da variaacutevel y em um dado niacutevel de x O segundo somatoacuterio das expressotildees para SQr SQep e SQt vai de j = 1 ateacute j = ni Os outros somatoacuterios vatildeo de i = 1 ateacute i = m ym eacute a meacutedia de todos os valores de y yim eacute a meacutedia das determinaccedilotildees repetidas no niacutevel i
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Limites de detecccedilatildeo (LD) e de
quantificaccedilatildeo (LQ)
Os limites de detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo foram calculados a partir do desvio padratildeo do intercepto com o eixo y (DPa) e da inclinaccedilatildeo da curva analiacutetica (IC) Equaccedilotildees 1 e 219
LD = DPa IC
(1)
LQ = DPa IC
(2)
O desvio padratildeo do intercepto com o eixo y foi calculado pelas seguintes Equaccedilotildees22
Syx = radicΣ yi - y 2 n - 2 (3)
DPa= S radic Σ i
Σ( i - ) (4)
Precisatildeo
A repetitividade (precisatildeo intradia) foi avaliada por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo dife e tes e g L-1) contemplando o intervalo linear do meacutetodo e com trecircs reacuteplicas cada A precisatildeo intermediaacuteria (precisatildeo interdia) foi avaliada de forma semelhante agrave repetitividade no entanto as mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas foram realizadas em dois dias com analistas diferentes Calculou-se o coeficiente de variaccedilatildeo (CV) por meio da Equaccedilatildeo 5 e os resultados obtidos foram comparados com o valor maacuteximo aceitaacutevel descrito no Guia para
Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19
CV = DPCMD
(5)
Onde CV eacute o coeficiente de variaccedilatildeo DP eacute o desvio padratildeo das medidas espectrofotomeacutetricas e CMD eacute a concentraccedilatildeo meacutedia de PAR determinada
Exatidatildeo
A exatidatildeo foi avaliada por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR nas amostras de formulaccedilotildees farmacecircuticas (referecircncia e geneacuterico) e sua recuperaccedilatildeo em trecircs niacuteveis diferentes Os valores de recuperaccedilatildeo expressos em porcentagem foram obtidos por meio das medidas espectrofotomeacutetricas das soluccedilotildees finais em funccedilatildeo da quantidade teoacuterica de padratildeo adicionado As concentraccedilotildees de PAR foram determinadas por meio da curva analiacutetica obtida pela adiccedilatildeo de padratildeo
Robustez
A robustez foi avaliada por meio das mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas variando-se a marca do etanol (Vetec Reagen e Dinacircmica) e a temperatura da sala de anaacutelise (27 e 24 degC) As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica
Quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
utilizando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico
proposto
Transferiu-se 10 mL da soluccedilatildeo oral para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e o volume foi completado com etanol Em seguida
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transferiu-se 05 mL da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e completou-se o volume com etanol Apoacutes a segunda diluiccedilatildeo transferiu-se L da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL adicionou-se L de aacute ido cloriacutedrico 01 mol L-1 o volume foi completado com etanol As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica
Anaacutelises estatiacutesticas
A anaacutelise estatiacutestica dos dados foi realizada por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA fator uacutenico) testes t e f com niacutevel de confianccedila de 95 (probabilidade inferior a 5 - p lt 005) A avaliaccedilatildeo estatiacutestica dos resultados foi realizada por meio do Software MS Excelreg
3 Resultados e Discussatildeo
Inicialmente determinou-se o comprimento de onda no maacuteximo de a so ccedilatildeo max) para realizar os ensaios de validaccedilatildeo e a quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral Analisando o espectro UV (200-400 nm) da Figura 2 obtido a partir de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1 em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (descrita no meacutetodo indicado pela Farmacopeia Brasileira12) observou-se uma banda com absorccedilatildeo maacutexima em 250 nm Portanto para o desenvolvimento do meacutetodo analiacutetico optou-se realizar as medidas espectrofotomeacutetricas na regiatildeo do UV no comprimento de onda no maacuteximo de absorccedilatildeo do PAR
Figura 2 Espectro de absorccedilatildeo no UV do paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Para a validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico visando agrave quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas foi realizado o estudo de seletividade por meio de anaacutelises dos espectros UV (Figura 3) obtidos para o PAR e os excipientes presentes na soluccedilatildeo
oral (aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina soacutedica) Observou-se nos espectros UV que entre os excipientes analisados apenas o benzoato de soacutedio e a sacarina soacutedica apresentaram bandas de
200 250 300 350 400
00
02
04
06
08
10
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
max
= 250 nm
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absorccedilatildeo na faixa de comprimento de onda estudada tornando-se essas espeacutecies quiacutemicas em potenciais interferentes na quantificaccedilatildeo do PAR em soluccedilatildeo oral O espe t o UV pa a a Mistu a PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) confirma uma interferecircncia na banda de absorccedilatildeo do PAR no entanto com base no espectro UV obtido
pa a a Mistu a PAR g L-1 + excipientes g L-1) acredita-se que em baixas
concentraccedilotildees (concentraccedilatildeo de excipientes dez vezes menor que a do PAR) o benzoato de soacutedio e sacarina soacutedica natildeo satildeo potenciais interferentes na anaacutelise da soluccedilatildeo oral contendo o PAR
Figura 3 Espectros de absorccedilatildeo no UV do paracetamol e dos excipientes em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Confirmada a seletividade do meacutetodo foram obtidos os espectros de absorccedilatildeo no UV para PAR com a concentraccedilatildeo variando de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste) em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (Figura 4)
A curva analiacutetica obtida por meio do meacutetodo dos miacutenimos quadrados apresentou a equaccedilatildeo y = 00896x + 00177 e um coeficiente de correlaccedilatildeo de 09988 indicando a linearidade do meacutetodo dentro dos limites de concentraccedilotildees estudadas al de esta de a o do o o it io
iacute i o a eitaacutevel do oefi ie te de o elaccedilatildeo = des ito o Guia pa a
Validaccedilatildeo de M todos A aliacuteti os e
Bioa aliacuteti os Resoluccedilatildeo o de 2003 da ANVISA)19 Por meio da anaacutelise de variacircncia testou-se a significacircncia estatiacutestica da curva ajustada e a linearidade do meacutetodo (Tabela 2) No teste do ajuste da curva obteve-se um valor de fcalculado (1822) menor que o ftabelado (3710) comprovando-se que natildeo houve falta de ajuste na faixa de concentraccedilatildeo estudada a um niacutevel de confianccedila de 95 Em seguida a validade da regressatildeo (linearidade) foi analisada por meio da comparaccedilatildeo dos valores de f tabelado e calculado O valor de fcalculado (20259) muito maior que o ftabelado (4670) indica que o meacutetodo eacute linear a um niacutevel de confianccedila de 95
200 250 300 350 400
00
04
08
12
16
20
Ab
so
rbacircn
cia
Comprimento de onda nm
Paracetamol Aacutecido ciacutetrico Benzoato de soacutedio Ciclamato de soacutedio Macrogol Metabissulfito de soacutedio Sacarina soacutedica Mistura 1 Mistura 2
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Figura 4 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para o paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacute ido lo iacuted i o va ia do a o e t accedilatildeo de a g L-1 Inserido Curva analiacutetica
Tabela 2 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste do modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados da curva analiacutetica obtida
Fonte SQ GL MQ fcalculado ftabelado
Modelo 0154140867 1 0154140867 20259 4670
Residual 0000989101 13 7608472 x 10-5 Curva linear
Falta de ajuste 0000349593 3 1165308 x 10-4 1822 3710
Erro puro 0000639509 10 6395088 x 10-5 Natildeo haacute falta de ajuste
Total 0155065805 14 0011076129
SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica
A partir da curva analiacutetica foram al ulados os li ites de dete ccedilatildeo de g
mL-1 e de ua tifi accedilatildeo de g L-1 assegurando-se que o meacutetodo proposto pode detectar e quantificar concentraccedilotildees baixas com seguranccedila podendo ser aplicado na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
A repetitividade e a precisatildeo intermediaacuteria foram avaliadas por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo
PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo diferentes em dois dias e com analistas diferentes Os resultados obtidos (Tabela 3) para a repetitividade e precisatildeo intermediaacuteria demonstram que o meacutetodo proposto apresenta boa precisatildeo com valores de CV dentro do criteacuterio de aceitaccedilatildeo (lt 5) estabelecido no Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
63 70 77 84 91 98
056
064
072
080
088
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Concentraccedilatildeo g mL-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()
64 127 -
1 1 80 144 -
96 165 -
64 093 138
2 2 80 160 161
96 176 434
CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)
Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se
recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica
Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo
As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os
valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
-08 -04 00 04 08 12 16068
072
076
080
084
088
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Concentraccedilatildeo g L-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo
g L-1)
Recuperaccedilatildeo
meacutedia plusmn DP ()
05 10955 plusmn 1007
Referecircncia 10 10334 plusmn 446
15 9745 plusmn 172
Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605
05 11997 plusmn 705
Geneacuterico 10 9459 plusmn 657
15
Meacutedia plusmn DP
9371 plusmn 675
10276 plusmn 1491
n = 3 DP = Desvio padratildeo
Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis
marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5
Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo
dia g L-1) DP CV ()
Marca do etanol absoluto
Dinacircmica 768 001 019 ANOVA
fcalculado = 395 ftabelado = 514
Reagen 718 010 147
Vetec 737 005 076
Temperatura
24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190
tcalculado = 0001 ttabelado= 4303
27degC 737 005 076
n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo
A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse
paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro
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opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O
valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas
A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV
Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
PAR (mg mL-1)
Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()
Referecircncia 200 201 plusmn 5 050
Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050
n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100
O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas
Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11
para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos
4 Conclusatildeo
O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas
Agradecimentos
Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)
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Referecircncias Bibliograacuteficas
1 Zhu W Huang H Gao X Ma H
Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical
Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of
Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced
Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical
Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD
determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of
Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science
2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual
de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and
Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova
2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova
2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo
Junior E J A G et al
Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1759
analiacutetico para determinaccedilatildeo do teor de sinvastatina em caacutepsulas magistrais Quiacutemica
Nova 2011 34 516 [CrossRef] 16 Barboza F M Dalla Vecchia D Pereira A V Stulzer H K Silva M A S Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico simples e raacutepido por espectroscopia UV para quantificaccedilatildeo de aciclovir em matrizes hidrofiacutelicas de liberaccedilatildeo prolongada Quiacutemica Nova 2010 33 747 [CrossRef] 17 do Recircgo J F de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo de olanzapina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria desenvolvimento e validaccedilatildeo Quiacutemica Nova
2010 33 471 [CrossRef] 18 de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo simultacircnea de olanzapina e cloridrato de fluoxetina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria derivativa Quiacutemica Nova
2012 35 627 [CrossRef] 19 Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Resoluccedilatildeo RE n
o 899 de
29052003 [Link] 20 ICH - The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human
Use Q 2B- validation of Analytical procedure
methodology 1996 [Link] 21 Pimentel M F Neto B B Calibraccedilatildeo Uma Revisatildeo para Quiacutemicos Analiacuteticos Quiacutemica Nova 1996 3 268 [Link] 22 Mendham J Denney R C Barnes J D Thomas M J K Anaacutelise Quiacutemica
Quantitativa 6a ed LTC Rio de Janeiro 2002 23 Instituto Nacional de Metrologia Normalizaccedilatildeo e Qualidade Industrial (INMETRO) Orientaccedilatildeo sobre Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo 2016 [Link] 24 Knochen M Giglio J Reis B F Flow-injection spectrophotometric determination of paracetamol in tablets and oral solutions Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis 2003 33 191 [CrossRef] [PubMed] 25 Borio V G Vinha Jr R Nicolau R A de Oliveira H P M de Lima C J Silveira Jr L Quantitative Evaluation of Acetaminophen in Oral Solutions by Dispersive Raman Spectroscopy for Quality Control Spectroscopy An International Journal 2012 27 215 [CrossRef]
- Abstract
- Resumo
- 1 Introduccedilatildeo
- 2 Parte Experimental
- 3 Resultados e Discussatildeo
- 4 Conclusatildeo
- Referecircncias Bibliograacuteficas
-
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Limites de detecccedilatildeo (LD) e de
quantificaccedilatildeo (LQ)
Os limites de detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo foram calculados a partir do desvio padratildeo do intercepto com o eixo y (DPa) e da inclinaccedilatildeo da curva analiacutetica (IC) Equaccedilotildees 1 e 219
LD = DPa IC
(1)
LQ = DPa IC
(2)
O desvio padratildeo do intercepto com o eixo y foi calculado pelas seguintes Equaccedilotildees22
Syx = radicΣ yi - y 2 n - 2 (3)
DPa= S radic Σ i
Σ( i - ) (4)
Precisatildeo
A repetitividade (precisatildeo intradia) foi avaliada por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo dife e tes e g L-1) contemplando o intervalo linear do meacutetodo e com trecircs reacuteplicas cada A precisatildeo intermediaacuteria (precisatildeo interdia) foi avaliada de forma semelhante agrave repetitividade no entanto as mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas foram realizadas em dois dias com analistas diferentes Calculou-se o coeficiente de variaccedilatildeo (CV) por meio da Equaccedilatildeo 5 e os resultados obtidos foram comparados com o valor maacuteximo aceitaacutevel descrito no Guia para
Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19
CV = DPCMD
(5)
Onde CV eacute o coeficiente de variaccedilatildeo DP eacute o desvio padratildeo das medidas espectrofotomeacutetricas e CMD eacute a concentraccedilatildeo meacutedia de PAR determinada
Exatidatildeo
A exatidatildeo foi avaliada por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR nas amostras de formulaccedilotildees farmacecircuticas (referecircncia e geneacuterico) e sua recuperaccedilatildeo em trecircs niacuteveis diferentes Os valores de recuperaccedilatildeo expressos em porcentagem foram obtidos por meio das medidas espectrofotomeacutetricas das soluccedilotildees finais em funccedilatildeo da quantidade teoacuterica de padratildeo adicionado As concentraccedilotildees de PAR foram determinadas por meio da curva analiacutetica obtida pela adiccedilatildeo de padratildeo
Robustez
A robustez foi avaliada por meio das mediccedilotildees espectrofotomeacutetricas variando-se a marca do etanol (Vetec Reagen e Dinacircmica) e a temperatura da sala de anaacutelise (27 e 24 degC) As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica
Quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
utilizando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico
proposto
Transferiu-se 10 mL da soluccedilatildeo oral para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e o volume foi completado com etanol Em seguida
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transferiu-se 05 mL da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e completou-se o volume com etanol Apoacutes a segunda diluiccedilatildeo transferiu-se L da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL adicionou-se L de aacute ido cloriacutedrico 01 mol L-1 o volume foi completado com etanol As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica
Anaacutelises estatiacutesticas
A anaacutelise estatiacutestica dos dados foi realizada por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA fator uacutenico) testes t e f com niacutevel de confianccedila de 95 (probabilidade inferior a 5 - p lt 005) A avaliaccedilatildeo estatiacutestica dos resultados foi realizada por meio do Software MS Excelreg
3 Resultados e Discussatildeo
Inicialmente determinou-se o comprimento de onda no maacuteximo de a so ccedilatildeo max) para realizar os ensaios de validaccedilatildeo e a quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral Analisando o espectro UV (200-400 nm) da Figura 2 obtido a partir de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1 em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (descrita no meacutetodo indicado pela Farmacopeia Brasileira12) observou-se uma banda com absorccedilatildeo maacutexima em 250 nm Portanto para o desenvolvimento do meacutetodo analiacutetico optou-se realizar as medidas espectrofotomeacutetricas na regiatildeo do UV no comprimento de onda no maacuteximo de absorccedilatildeo do PAR
Figura 2 Espectro de absorccedilatildeo no UV do paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Para a validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico visando agrave quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas foi realizado o estudo de seletividade por meio de anaacutelises dos espectros UV (Figura 3) obtidos para o PAR e os excipientes presentes na soluccedilatildeo
oral (aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina soacutedica) Observou-se nos espectros UV que entre os excipientes analisados apenas o benzoato de soacutedio e a sacarina soacutedica apresentaram bandas de
200 250 300 350 400
00
02
04
06
08
10
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
max
= 250 nm
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absorccedilatildeo na faixa de comprimento de onda estudada tornando-se essas espeacutecies quiacutemicas em potenciais interferentes na quantificaccedilatildeo do PAR em soluccedilatildeo oral O espe t o UV pa a a Mistu a PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) confirma uma interferecircncia na banda de absorccedilatildeo do PAR no entanto com base no espectro UV obtido
pa a a Mistu a PAR g L-1 + excipientes g L-1) acredita-se que em baixas
concentraccedilotildees (concentraccedilatildeo de excipientes dez vezes menor que a do PAR) o benzoato de soacutedio e sacarina soacutedica natildeo satildeo potenciais interferentes na anaacutelise da soluccedilatildeo oral contendo o PAR
Figura 3 Espectros de absorccedilatildeo no UV do paracetamol e dos excipientes em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Confirmada a seletividade do meacutetodo foram obtidos os espectros de absorccedilatildeo no UV para PAR com a concentraccedilatildeo variando de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste) em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (Figura 4)
A curva analiacutetica obtida por meio do meacutetodo dos miacutenimos quadrados apresentou a equaccedilatildeo y = 00896x + 00177 e um coeficiente de correlaccedilatildeo de 09988 indicando a linearidade do meacutetodo dentro dos limites de concentraccedilotildees estudadas al de esta de a o do o o it io
iacute i o a eitaacutevel do oefi ie te de o elaccedilatildeo = des ito o Guia pa a
Validaccedilatildeo de M todos A aliacuteti os e
Bioa aliacuteti os Resoluccedilatildeo o de 2003 da ANVISA)19 Por meio da anaacutelise de variacircncia testou-se a significacircncia estatiacutestica da curva ajustada e a linearidade do meacutetodo (Tabela 2) No teste do ajuste da curva obteve-se um valor de fcalculado (1822) menor que o ftabelado (3710) comprovando-se que natildeo houve falta de ajuste na faixa de concentraccedilatildeo estudada a um niacutevel de confianccedila de 95 Em seguida a validade da regressatildeo (linearidade) foi analisada por meio da comparaccedilatildeo dos valores de f tabelado e calculado O valor de fcalculado (20259) muito maior que o ftabelado (4670) indica que o meacutetodo eacute linear a um niacutevel de confianccedila de 95
200 250 300 350 400
00
04
08
12
16
20
Ab
so
rbacircn
cia
Comprimento de onda nm
Paracetamol Aacutecido ciacutetrico Benzoato de soacutedio Ciclamato de soacutedio Macrogol Metabissulfito de soacutedio Sacarina soacutedica Mistura 1 Mistura 2
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Figura 4 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para o paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacute ido lo iacuted i o va ia do a o e t accedilatildeo de a g L-1 Inserido Curva analiacutetica
Tabela 2 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste do modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados da curva analiacutetica obtida
Fonte SQ GL MQ fcalculado ftabelado
Modelo 0154140867 1 0154140867 20259 4670
Residual 0000989101 13 7608472 x 10-5 Curva linear
Falta de ajuste 0000349593 3 1165308 x 10-4 1822 3710
Erro puro 0000639509 10 6395088 x 10-5 Natildeo haacute falta de ajuste
Total 0155065805 14 0011076129
SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica
A partir da curva analiacutetica foram al ulados os li ites de dete ccedilatildeo de g
mL-1 e de ua tifi accedilatildeo de g L-1 assegurando-se que o meacutetodo proposto pode detectar e quantificar concentraccedilotildees baixas com seguranccedila podendo ser aplicado na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
A repetitividade e a precisatildeo intermediaacuteria foram avaliadas por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo
PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo diferentes em dois dias e com analistas diferentes Os resultados obtidos (Tabela 3) para a repetitividade e precisatildeo intermediaacuteria demonstram que o meacutetodo proposto apresenta boa precisatildeo com valores de CV dentro do criteacuterio de aceitaccedilatildeo (lt 5) estabelecido no Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
63 70 77 84 91 98
056
064
072
080
088
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Concentraccedilatildeo g mL-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()
64 127 -
1 1 80 144 -
96 165 -
64 093 138
2 2 80 160 161
96 176 434
CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)
Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se
recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica
Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo
As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os
valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
-08 -04 00 04 08 12 16068
072
076
080
084
088
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Concentraccedilatildeo g L-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo
g L-1)
Recuperaccedilatildeo
meacutedia plusmn DP ()
05 10955 plusmn 1007
Referecircncia 10 10334 plusmn 446
15 9745 plusmn 172
Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605
05 11997 plusmn 705
Geneacuterico 10 9459 plusmn 657
15
Meacutedia plusmn DP
9371 plusmn 675
10276 plusmn 1491
n = 3 DP = Desvio padratildeo
Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis
marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5
Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo
dia g L-1) DP CV ()
Marca do etanol absoluto
Dinacircmica 768 001 019 ANOVA
fcalculado = 395 ftabelado = 514
Reagen 718 010 147
Vetec 737 005 076
Temperatura
24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190
tcalculado = 0001 ttabelado= 4303
27degC 737 005 076
n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo
A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse
paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro
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opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O
valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas
A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV
Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
PAR (mg mL-1)
Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()
Referecircncia 200 201 plusmn 5 050
Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050
n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100
O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas
Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11
para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos
4 Conclusatildeo
O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas
Agradecimentos
Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)
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Referecircncias Bibliograacuteficas
1 Zhu W Huang H Gao X Ma H
Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical
Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of
Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced
Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical
Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD
determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of
Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science
2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual
de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and
Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova
2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova
2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo
Junior E J A G et al
Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1759
analiacutetico para determinaccedilatildeo do teor de sinvastatina em caacutepsulas magistrais Quiacutemica
Nova 2011 34 516 [CrossRef] 16 Barboza F M Dalla Vecchia D Pereira A V Stulzer H K Silva M A S Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico simples e raacutepido por espectroscopia UV para quantificaccedilatildeo de aciclovir em matrizes hidrofiacutelicas de liberaccedilatildeo prolongada Quiacutemica Nova 2010 33 747 [CrossRef] 17 do Recircgo J F de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo de olanzapina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria desenvolvimento e validaccedilatildeo Quiacutemica Nova
2010 33 471 [CrossRef] 18 de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo simultacircnea de olanzapina e cloridrato de fluoxetina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria derivativa Quiacutemica Nova
2012 35 627 [CrossRef] 19 Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Resoluccedilatildeo RE n
o 899 de
29052003 [Link] 20 ICH - The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human
Use Q 2B- validation of Analytical procedure
methodology 1996 [Link] 21 Pimentel M F Neto B B Calibraccedilatildeo Uma Revisatildeo para Quiacutemicos Analiacuteticos Quiacutemica Nova 1996 3 268 [Link] 22 Mendham J Denney R C Barnes J D Thomas M J K Anaacutelise Quiacutemica
Quantitativa 6a ed LTC Rio de Janeiro 2002 23 Instituto Nacional de Metrologia Normalizaccedilatildeo e Qualidade Industrial (INMETRO) Orientaccedilatildeo sobre Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo 2016 [Link] 24 Knochen M Giglio J Reis B F Flow-injection spectrophotometric determination of paracetamol in tablets and oral solutions Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis 2003 33 191 [CrossRef] [PubMed] 25 Borio V G Vinha Jr R Nicolau R A de Oliveira H P M de Lima C J Silveira Jr L Quantitative Evaluation of Acetaminophen in Oral Solutions by Dispersive Raman Spectroscopy for Quality Control Spectroscopy An International Journal 2012 27 215 [CrossRef]
- Abstract
- Resumo
- 1 Introduccedilatildeo
- 2 Parte Experimental
- 3 Resultados e Discussatildeo
- 4 Conclusatildeo
- Referecircncias Bibliograacuteficas
-
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transferiu-se 05 mL da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL e completou-se o volume com etanol Apoacutes a segunda diluiccedilatildeo transferiu-se L da soluccedilatildeo resultante para balatildeo volumeacutetrico de 10 mL adicionou-se L de aacute ido cloriacutedrico 01 mol L-1 o volume foi completado com etanol As anaacutelises foram realizadas em triplicata e as concentraccedilotildees de PAR foram obtidas por meio da curva analiacutetica
Anaacutelises estatiacutesticas
A anaacutelise estatiacutestica dos dados foi realizada por meio de anaacutelise de variacircncia (ANOVA fator uacutenico) testes t e f com niacutevel de confianccedila de 95 (probabilidade inferior a 5 - p lt 005) A avaliaccedilatildeo estatiacutestica dos resultados foi realizada por meio do Software MS Excelreg
3 Resultados e Discussatildeo
Inicialmente determinou-se o comprimento de onda no maacuteximo de a so ccedilatildeo max) para realizar os ensaios de validaccedilatildeo e a quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral Analisando o espectro UV (200-400 nm) da Figura 2 obtido a partir de uma soluccedilatildeo de PAR g L-1 em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (descrita no meacutetodo indicado pela Farmacopeia Brasileira12) observou-se uma banda com absorccedilatildeo maacutexima em 250 nm Portanto para o desenvolvimento do meacutetodo analiacutetico optou-se realizar as medidas espectrofotomeacutetricas na regiatildeo do UV no comprimento de onda no maacuteximo de absorccedilatildeo do PAR
Figura 2 Espectro de absorccedilatildeo no UV do paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Para a validaccedilatildeo do meacutetodo analiacutetico visando agrave quantificaccedilatildeo de PAR em formulaccedilotildees farmacecircuticas foi realizado o estudo de seletividade por meio de anaacutelises dos espectros UV (Figura 3) obtidos para o PAR e os excipientes presentes na soluccedilatildeo
oral (aacutecido ciacutetrico benzoato de soacutedio ciclamato de soacutedio macrogol metabissulfito de soacutedio e sacarina soacutedica) Observou-se nos espectros UV que entre os excipientes analisados apenas o benzoato de soacutedio e a sacarina soacutedica apresentaram bandas de
200 250 300 350 400
00
02
04
06
08
10
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
max
= 250 nm
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absorccedilatildeo na faixa de comprimento de onda estudada tornando-se essas espeacutecies quiacutemicas em potenciais interferentes na quantificaccedilatildeo do PAR em soluccedilatildeo oral O espe t o UV pa a a Mistu a PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) confirma uma interferecircncia na banda de absorccedilatildeo do PAR no entanto com base no espectro UV obtido
pa a a Mistu a PAR g L-1 + excipientes g L-1) acredita-se que em baixas
concentraccedilotildees (concentraccedilatildeo de excipientes dez vezes menor que a do PAR) o benzoato de soacutedio e sacarina soacutedica natildeo satildeo potenciais interferentes na anaacutelise da soluccedilatildeo oral contendo o PAR
Figura 3 Espectros de absorccedilatildeo no UV do paracetamol e dos excipientes em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Confirmada a seletividade do meacutetodo foram obtidos os espectros de absorccedilatildeo no UV para PAR com a concentraccedilatildeo variando de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste) em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (Figura 4)
A curva analiacutetica obtida por meio do meacutetodo dos miacutenimos quadrados apresentou a equaccedilatildeo y = 00896x + 00177 e um coeficiente de correlaccedilatildeo de 09988 indicando a linearidade do meacutetodo dentro dos limites de concentraccedilotildees estudadas al de esta de a o do o o it io
iacute i o a eitaacutevel do oefi ie te de o elaccedilatildeo = des ito o Guia pa a
Validaccedilatildeo de M todos A aliacuteti os e
Bioa aliacuteti os Resoluccedilatildeo o de 2003 da ANVISA)19 Por meio da anaacutelise de variacircncia testou-se a significacircncia estatiacutestica da curva ajustada e a linearidade do meacutetodo (Tabela 2) No teste do ajuste da curva obteve-se um valor de fcalculado (1822) menor que o ftabelado (3710) comprovando-se que natildeo houve falta de ajuste na faixa de concentraccedilatildeo estudada a um niacutevel de confianccedila de 95 Em seguida a validade da regressatildeo (linearidade) foi analisada por meio da comparaccedilatildeo dos valores de f tabelado e calculado O valor de fcalculado (20259) muito maior que o ftabelado (4670) indica que o meacutetodo eacute linear a um niacutevel de confianccedila de 95
200 250 300 350 400
00
04
08
12
16
20
Ab
so
rbacircn
cia
Comprimento de onda nm
Paracetamol Aacutecido ciacutetrico Benzoato de soacutedio Ciclamato de soacutedio Macrogol Metabissulfito de soacutedio Sacarina soacutedica Mistura 1 Mistura 2
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Figura 4 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para o paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacute ido lo iacuted i o va ia do a o e t accedilatildeo de a g L-1 Inserido Curva analiacutetica
Tabela 2 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste do modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados da curva analiacutetica obtida
Fonte SQ GL MQ fcalculado ftabelado
Modelo 0154140867 1 0154140867 20259 4670
Residual 0000989101 13 7608472 x 10-5 Curva linear
Falta de ajuste 0000349593 3 1165308 x 10-4 1822 3710
Erro puro 0000639509 10 6395088 x 10-5 Natildeo haacute falta de ajuste
Total 0155065805 14 0011076129
SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica
A partir da curva analiacutetica foram al ulados os li ites de dete ccedilatildeo de g
mL-1 e de ua tifi accedilatildeo de g L-1 assegurando-se que o meacutetodo proposto pode detectar e quantificar concentraccedilotildees baixas com seguranccedila podendo ser aplicado na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
A repetitividade e a precisatildeo intermediaacuteria foram avaliadas por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo
PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo diferentes em dois dias e com analistas diferentes Os resultados obtidos (Tabela 3) para a repetitividade e precisatildeo intermediaacuteria demonstram que o meacutetodo proposto apresenta boa precisatildeo com valores de CV dentro do criteacuterio de aceitaccedilatildeo (lt 5) estabelecido no Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
63 70 77 84 91 98
056
064
072
080
088
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Concentraccedilatildeo g mL-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()
64 127 -
1 1 80 144 -
96 165 -
64 093 138
2 2 80 160 161
96 176 434
CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)
Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se
recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica
Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo
As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os
valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
-08 -04 00 04 08 12 16068
072
076
080
084
088
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Concentraccedilatildeo g L-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo
g L-1)
Recuperaccedilatildeo
meacutedia plusmn DP ()
05 10955 plusmn 1007
Referecircncia 10 10334 plusmn 446
15 9745 plusmn 172
Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605
05 11997 plusmn 705
Geneacuterico 10 9459 plusmn 657
15
Meacutedia plusmn DP
9371 plusmn 675
10276 plusmn 1491
n = 3 DP = Desvio padratildeo
Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis
marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5
Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo
dia g L-1) DP CV ()
Marca do etanol absoluto
Dinacircmica 768 001 019 ANOVA
fcalculado = 395 ftabelado = 514
Reagen 718 010 147
Vetec 737 005 076
Temperatura
24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190
tcalculado = 0001 ttabelado= 4303
27degC 737 005 076
n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo
A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse
paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro
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opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O
valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas
A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV
Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
PAR (mg mL-1)
Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()
Referecircncia 200 201 plusmn 5 050
Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050
n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100
O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas
Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11
para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos
4 Conclusatildeo
O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas
Agradecimentos
Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)
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Referecircncias Bibliograacuteficas
1 Zhu W Huang H Gao X Ma H
Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical
Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of
Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced
Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical
Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD
determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of
Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science
2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual
de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and
Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova
2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova
2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo
Junior E J A G et al
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analiacutetico para determinaccedilatildeo do teor de sinvastatina em caacutepsulas magistrais Quiacutemica
Nova 2011 34 516 [CrossRef] 16 Barboza F M Dalla Vecchia D Pereira A V Stulzer H K Silva M A S Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico simples e raacutepido por espectroscopia UV para quantificaccedilatildeo de aciclovir em matrizes hidrofiacutelicas de liberaccedilatildeo prolongada Quiacutemica Nova 2010 33 747 [CrossRef] 17 do Recircgo J F de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo de olanzapina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria desenvolvimento e validaccedilatildeo Quiacutemica Nova
2010 33 471 [CrossRef] 18 de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo simultacircnea de olanzapina e cloridrato de fluoxetina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria derivativa Quiacutemica Nova
2012 35 627 [CrossRef] 19 Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Resoluccedilatildeo RE n
o 899 de
29052003 [Link] 20 ICH - The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human
Use Q 2B- validation of Analytical procedure
methodology 1996 [Link] 21 Pimentel M F Neto B B Calibraccedilatildeo Uma Revisatildeo para Quiacutemicos Analiacuteticos Quiacutemica Nova 1996 3 268 [Link] 22 Mendham J Denney R C Barnes J D Thomas M J K Anaacutelise Quiacutemica
Quantitativa 6a ed LTC Rio de Janeiro 2002 23 Instituto Nacional de Metrologia Normalizaccedilatildeo e Qualidade Industrial (INMETRO) Orientaccedilatildeo sobre Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo 2016 [Link] 24 Knochen M Giglio J Reis B F Flow-injection spectrophotometric determination of paracetamol in tablets and oral solutions Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis 2003 33 191 [CrossRef] [PubMed] 25 Borio V G Vinha Jr R Nicolau R A de Oliveira H P M de Lima C J Silveira Jr L Quantitative Evaluation of Acetaminophen in Oral Solutions by Dispersive Raman Spectroscopy for Quality Control Spectroscopy An International Journal 2012 27 215 [CrossRef]
- Abstract
- Resumo
- 1 Introduccedilatildeo
- 2 Parte Experimental
- 3 Resultados e Discussatildeo
- 4 Conclusatildeo
- Referecircncias Bibliograacuteficas
-
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absorccedilatildeo na faixa de comprimento de onda estudada tornando-se essas espeacutecies quiacutemicas em potenciais interferentes na quantificaccedilatildeo do PAR em soluccedilatildeo oral O espe t o UV pa a a Mistu a PAR g L-1 + e ipie tes g L-1) confirma uma interferecircncia na banda de absorccedilatildeo do PAR no entanto com base no espectro UV obtido
pa a a Mistu a PAR g L-1 + excipientes g L-1) acredita-se que em baixas
concentraccedilotildees (concentraccedilatildeo de excipientes dez vezes menor que a do PAR) o benzoato de soacutedio e sacarina soacutedica natildeo satildeo potenciais interferentes na anaacutelise da soluccedilatildeo oral contendo o PAR
Figura 3 Espectros de absorccedilatildeo no UV do paracetamol e dos excipientes em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Confirmada a seletividade do meacutetodo foram obtidos os espectros de absorccedilatildeo no UV para PAR com a concentraccedilatildeo variando de a g L-1 (de 80 ndash 120 da concentraccedilatildeo teoacuterica do teste) em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico (Figura 4)
A curva analiacutetica obtida por meio do meacutetodo dos miacutenimos quadrados apresentou a equaccedilatildeo y = 00896x + 00177 e um coeficiente de correlaccedilatildeo de 09988 indicando a linearidade do meacutetodo dentro dos limites de concentraccedilotildees estudadas al de esta de a o do o o it io
iacute i o a eitaacutevel do oefi ie te de o elaccedilatildeo = des ito o Guia pa a
Validaccedilatildeo de M todos A aliacuteti os e
Bioa aliacuteti os Resoluccedilatildeo o de 2003 da ANVISA)19 Por meio da anaacutelise de variacircncia testou-se a significacircncia estatiacutestica da curva ajustada e a linearidade do meacutetodo (Tabela 2) No teste do ajuste da curva obteve-se um valor de fcalculado (1822) menor que o ftabelado (3710) comprovando-se que natildeo houve falta de ajuste na faixa de concentraccedilatildeo estudada a um niacutevel de confianccedila de 95 Em seguida a validade da regressatildeo (linearidade) foi analisada por meio da comparaccedilatildeo dos valores de f tabelado e calculado O valor de fcalculado (20259) muito maior que o ftabelado (4670) indica que o meacutetodo eacute linear a um niacutevel de confianccedila de 95
200 250 300 350 400
00
04
08
12
16
20
Ab
so
rbacircn
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Comprimento de onda nm
Paracetamol Aacutecido ciacutetrico Benzoato de soacutedio Ciclamato de soacutedio Macrogol Metabissulfito de soacutedio Sacarina soacutedica Mistura 1 Mistura 2
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Figura 4 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para o paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacute ido lo iacuted i o va ia do a o e t accedilatildeo de a g L-1 Inserido Curva analiacutetica
Tabela 2 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste do modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados da curva analiacutetica obtida
Fonte SQ GL MQ fcalculado ftabelado
Modelo 0154140867 1 0154140867 20259 4670
Residual 0000989101 13 7608472 x 10-5 Curva linear
Falta de ajuste 0000349593 3 1165308 x 10-4 1822 3710
Erro puro 0000639509 10 6395088 x 10-5 Natildeo haacute falta de ajuste
Total 0155065805 14 0011076129
SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica
A partir da curva analiacutetica foram al ulados os li ites de dete ccedilatildeo de g
mL-1 e de ua tifi accedilatildeo de g L-1 assegurando-se que o meacutetodo proposto pode detectar e quantificar concentraccedilotildees baixas com seguranccedila podendo ser aplicado na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
A repetitividade e a precisatildeo intermediaacuteria foram avaliadas por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo
PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo diferentes em dois dias e com analistas diferentes Os resultados obtidos (Tabela 3) para a repetitividade e precisatildeo intermediaacuteria demonstram que o meacutetodo proposto apresenta boa precisatildeo com valores de CV dentro do criteacuterio de aceitaccedilatildeo (lt 5) estabelecido no Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
63 70 77 84 91 98
056
064
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Ab
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Concentraccedilatildeo g mL-1
Ab
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Comprimento de onda nm
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Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()
64 127 -
1 1 80 144 -
96 165 -
64 093 138
2 2 80 160 161
96 176 434
CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)
Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se
recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica
Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo
As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os
valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
-08 -04 00 04 08 12 16068
072
076
080
084
088
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Concentraccedilatildeo g L-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo
g L-1)
Recuperaccedilatildeo
meacutedia plusmn DP ()
05 10955 plusmn 1007
Referecircncia 10 10334 plusmn 446
15 9745 plusmn 172
Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605
05 11997 plusmn 705
Geneacuterico 10 9459 plusmn 657
15
Meacutedia plusmn DP
9371 plusmn 675
10276 plusmn 1491
n = 3 DP = Desvio padratildeo
Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis
marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5
Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo
dia g L-1) DP CV ()
Marca do etanol absoluto
Dinacircmica 768 001 019 ANOVA
fcalculado = 395 ftabelado = 514
Reagen 718 010 147
Vetec 737 005 076
Temperatura
24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190
tcalculado = 0001 ttabelado= 4303
27degC 737 005 076
n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo
A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse
paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro
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opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O
valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas
A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV
Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
PAR (mg mL-1)
Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()
Referecircncia 200 201 plusmn 5 050
Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050
n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100
O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas
Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11
para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos
4 Conclusatildeo
O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas
Agradecimentos
Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)
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Referecircncias Bibliograacuteficas
1 Zhu W Huang H Gao X Ma H
Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical
Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of
Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced
Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical
Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD
determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of
Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science
2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual
de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and
Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova
2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova
2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo
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analiacutetico para determinaccedilatildeo do teor de sinvastatina em caacutepsulas magistrais Quiacutemica
Nova 2011 34 516 [CrossRef] 16 Barboza F M Dalla Vecchia D Pereira A V Stulzer H K Silva M A S Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico simples e raacutepido por espectroscopia UV para quantificaccedilatildeo de aciclovir em matrizes hidrofiacutelicas de liberaccedilatildeo prolongada Quiacutemica Nova 2010 33 747 [CrossRef] 17 do Recircgo J F de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo de olanzapina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria desenvolvimento e validaccedilatildeo Quiacutemica Nova
2010 33 471 [CrossRef] 18 de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo simultacircnea de olanzapina e cloridrato de fluoxetina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria derivativa Quiacutemica Nova
2012 35 627 [CrossRef] 19 Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Resoluccedilatildeo RE n
o 899 de
29052003 [Link] 20 ICH - The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human
Use Q 2B- validation of Analytical procedure
methodology 1996 [Link] 21 Pimentel M F Neto B B Calibraccedilatildeo Uma Revisatildeo para Quiacutemicos Analiacuteticos Quiacutemica Nova 1996 3 268 [Link] 22 Mendham J Denney R C Barnes J D Thomas M J K Anaacutelise Quiacutemica
Quantitativa 6a ed LTC Rio de Janeiro 2002 23 Instituto Nacional de Metrologia Normalizaccedilatildeo e Qualidade Industrial (INMETRO) Orientaccedilatildeo sobre Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo 2016 [Link] 24 Knochen M Giglio J Reis B F Flow-injection spectrophotometric determination of paracetamol in tablets and oral solutions Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis 2003 33 191 [CrossRef] [PubMed] 25 Borio V G Vinha Jr R Nicolau R A de Oliveira H P M de Lima C J Silveira Jr L Quantitative Evaluation of Acetaminophen in Oral Solutions by Dispersive Raman Spectroscopy for Quality Control Spectroscopy An International Journal 2012 27 215 [CrossRef]
- Abstract
- Resumo
- 1 Introduccedilatildeo
- 2 Parte Experimental
- 3 Resultados e Discussatildeo
- 4 Conclusatildeo
- Referecircncias Bibliograacuteficas
-
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Figura 4 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para o paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacute ido lo iacuted i o va ia do a o e t accedilatildeo de a g L-1 Inserido Curva analiacutetica
Tabela 2 Tabela de anaacutelise de variacircncia para o ajuste do modelo pelo meacutetodo dos miacutenimos quadrados da curva analiacutetica obtida
Fonte SQ GL MQ fcalculado ftabelado
Modelo 0154140867 1 0154140867 20259 4670
Residual 0000989101 13 7608472 x 10-5 Curva linear
Falta de ajuste 0000349593 3 1165308 x 10-4 1822 3710
Erro puro 0000639509 10 6395088 x 10-5 Natildeo haacute falta de ajuste
Total 0155065805 14 0011076129
SQ = Soma Quadraacutetica GL = Graus de Liberdade MQ = Meacutedia Quadraacutetica
A partir da curva analiacutetica foram al ulados os li ites de dete ccedilatildeo de g
mL-1 e de ua tifi accedilatildeo de g L-1 assegurando-se que o meacutetodo proposto pode detectar e quantificar concentraccedilotildees baixas com seguranccedila podendo ser aplicado na detecccedilatildeo e quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral
A repetitividade e a precisatildeo intermediaacuteria foram avaliadas por meio de medidas espectrofotomeacutetricas de soluccedilotildees contendo
PAR em trecircs niacuteveis de concentraccedilatildeo diferentes em dois dias e com analistas diferentes Os resultados obtidos (Tabela 3) para a repetitividade e precisatildeo intermediaacuteria demonstram que o meacutetodo proposto apresenta boa precisatildeo com valores de CV dentro do criteacuterio de aceitaccedilatildeo (lt 5) estabelecido no Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
63 70 77 84 91 98
056
064
072
080
088
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Concentraccedilatildeo g mL-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()
64 127 -
1 1 80 144 -
96 165 -
64 093 138
2 2 80 160 161
96 176 434
CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)
Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se
recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica
Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo
As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os
valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
-08 -04 00 04 08 12 16068
072
076
080
084
088
Ab
so
rbacirc
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Concentraccedilatildeo g L-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo
g L-1)
Recuperaccedilatildeo
meacutedia plusmn DP ()
05 10955 plusmn 1007
Referecircncia 10 10334 plusmn 446
15 9745 plusmn 172
Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605
05 11997 plusmn 705
Geneacuterico 10 9459 plusmn 657
15
Meacutedia plusmn DP
9371 plusmn 675
10276 plusmn 1491
n = 3 DP = Desvio padratildeo
Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis
marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5
Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo
dia g L-1) DP CV ()
Marca do etanol absoluto
Dinacircmica 768 001 019 ANOVA
fcalculado = 395 ftabelado = 514
Reagen 718 010 147
Vetec 737 005 076
Temperatura
24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190
tcalculado = 0001 ttabelado= 4303
27degC 737 005 076
n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo
A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse
paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro
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opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O
valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas
A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV
Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
PAR (mg mL-1)
Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()
Referecircncia 200 201 plusmn 5 050
Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050
n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100
O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas
Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11
para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos
4 Conclusatildeo
O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas
Agradecimentos
Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)
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Referecircncias Bibliograacuteficas
1 Zhu W Huang H Gao X Ma H
Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical
Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of
Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced
Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical
Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD
determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of
Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science
2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual
de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and
Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova
2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova
2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo
Junior E J A G et al
Rev Virtual Quim |Vol 9| |No 4| |1747-1759| 1759
analiacutetico para determinaccedilatildeo do teor de sinvastatina em caacutepsulas magistrais Quiacutemica
Nova 2011 34 516 [CrossRef] 16 Barboza F M Dalla Vecchia D Pereira A V Stulzer H K Silva M A S Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico simples e raacutepido por espectroscopia UV para quantificaccedilatildeo de aciclovir em matrizes hidrofiacutelicas de liberaccedilatildeo prolongada Quiacutemica Nova 2010 33 747 [CrossRef] 17 do Recircgo J F de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo de olanzapina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria desenvolvimento e validaccedilatildeo Quiacutemica Nova
2010 33 471 [CrossRef] 18 de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo simultacircnea de olanzapina e cloridrato de fluoxetina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria derivativa Quiacutemica Nova
2012 35 627 [CrossRef] 19 Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Resoluccedilatildeo RE n
o 899 de
29052003 [Link] 20 ICH - The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human
Use Q 2B- validation of Analytical procedure
methodology 1996 [Link] 21 Pimentel M F Neto B B Calibraccedilatildeo Uma Revisatildeo para Quiacutemicos Analiacuteticos Quiacutemica Nova 1996 3 268 [Link] 22 Mendham J Denney R C Barnes J D Thomas M J K Anaacutelise Quiacutemica
Quantitativa 6a ed LTC Rio de Janeiro 2002 23 Instituto Nacional de Metrologia Normalizaccedilatildeo e Qualidade Industrial (INMETRO) Orientaccedilatildeo sobre Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo 2016 [Link] 24 Knochen M Giglio J Reis B F Flow-injection spectrophotometric determination of paracetamol in tablets and oral solutions Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis 2003 33 191 [CrossRef] [PubMed] 25 Borio V G Vinha Jr R Nicolau R A de Oliveira H P M de Lima C J Silveira Jr L Quantitative Evaluation of Acetaminophen in Oral Solutions by Dispersive Raman Spectroscopy for Quality Control Spectroscopy An International Journal 2012 27 215 [CrossRef]
- Abstract
- Resumo
- 1 Introduccedilatildeo
- 2 Parte Experimental
- 3 Resultados e Discussatildeo
- 4 Conclusatildeo
- Referecircncias Bibliograacuteficas
-
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Tabela 3 Resultados de repetitividade e de precisatildeo intermediaacuteria obtidos por meio de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Dia Analista Co e t accedilatildeo g L-1) CV () CV ()
64 127 -
1 1 80 144 -
96 165 -
64 093 138
2 2 80 160 161
96 176 434
CV = Coeficiente de variaccedilatildeo repetitividade (n = 3) precisatildeo intermediaacuteria (n = 6)
Apoacutes a determinaccedilatildeo da precisatildeo foram realizados ensaios para a determinaccedilatildeo da exatidatildeo por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo de PAR (Figura 5) obtendo-se
recuperaccedilotildees para trecircs niacuteveis diferentes de PAR e g L-1) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica
Figura 5 Espectros de absorccedilatildeo no UV obtidos para a amostra de soluccedilatildeo oral com adiccedilotildees sucessivas das soluccedilatildeo padratildeo de paracetamol em soluccedilatildeo etanoacutelica de aacutecido cloriacutedrico
Inserido Curva de adiccedilatildeo de padratildeo
As recuperaccedilotildees meacutedias para trecircs niacuteveis diferentes de PAR (Tabela 4) nas soluccedilotildees orais de referecircncia e geneacuterica satildeo iguais a 10345 plusmn 605 e 10276 plusmn 1491 respectivamente Os valores de tcalculado (0987 ndash referecircncia 0320 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os
valores de recuperaccedilatildeo meacutedios encontrados satildeo estatisticamente iguais a 100 a um niacutevel de confianccedila de 95 confirmando que natildeo haacute interferecircncia significativa da matriz (excipientes) nas amostras de soluccedilotildees orais analisadas (referecircncia e geneacuterico) e que o meacutetodo proposto apresenta boa exatidatildeo
240 270 300 330 360 390
00
02
04
06
08
10
-08 -04 00 04 08 12 16068
072
076
080
084
088
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Concentraccedilatildeo g L-1
Ab
so
rbacirc
nc
ia
Comprimento de onda nm
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Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo
g L-1)
Recuperaccedilatildeo
meacutedia plusmn DP ()
05 10955 plusmn 1007
Referecircncia 10 10334 plusmn 446
15 9745 plusmn 172
Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605
05 11997 plusmn 705
Geneacuterico 10 9459 plusmn 657
15
Meacutedia plusmn DP
9371 plusmn 675
10276 plusmn 1491
n = 3 DP = Desvio padratildeo
Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis
marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5
Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo
dia g L-1) DP CV ()
Marca do etanol absoluto
Dinacircmica 768 001 019 ANOVA
fcalculado = 395 ftabelado = 514
Reagen 718 010 147
Vetec 737 005 076
Temperatura
24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190
tcalculado = 0001 ttabelado= 4303
27degC 737 005 076
n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo
A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse
paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro
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opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O
valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas
A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV
Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
PAR (mg mL-1)
Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()
Referecircncia 200 201 plusmn 5 050
Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050
n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100
O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas
Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11
para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos
4 Conclusatildeo
O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas
Agradecimentos
Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)
Junior E J A G et al
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Referecircncias Bibliograacuteficas
1 Zhu W Huang H Gao X Ma H
Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical
Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of
Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced
Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical
Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD
determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of
Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science
2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual
de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and
Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova
2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova
2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo
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analiacutetico para determinaccedilatildeo do teor de sinvastatina em caacutepsulas magistrais Quiacutemica
Nova 2011 34 516 [CrossRef] 16 Barboza F M Dalla Vecchia D Pereira A V Stulzer H K Silva M A S Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico simples e raacutepido por espectroscopia UV para quantificaccedilatildeo de aciclovir em matrizes hidrofiacutelicas de liberaccedilatildeo prolongada Quiacutemica Nova 2010 33 747 [CrossRef] 17 do Recircgo J F de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo de olanzapina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria desenvolvimento e validaccedilatildeo Quiacutemica Nova
2010 33 471 [CrossRef] 18 de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo simultacircnea de olanzapina e cloridrato de fluoxetina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria derivativa Quiacutemica Nova
2012 35 627 [CrossRef] 19 Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Resoluccedilatildeo RE n
o 899 de
29052003 [Link] 20 ICH - The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human
Use Q 2B- validation of Analytical procedure
methodology 1996 [Link] 21 Pimentel M F Neto B B Calibraccedilatildeo Uma Revisatildeo para Quiacutemicos Analiacuteticos Quiacutemica Nova 1996 3 268 [Link] 22 Mendham J Denney R C Barnes J D Thomas M J K Anaacutelise Quiacutemica
Quantitativa 6a ed LTC Rio de Janeiro 2002 23 Instituto Nacional de Metrologia Normalizaccedilatildeo e Qualidade Industrial (INMETRO) Orientaccedilatildeo sobre Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo 2016 [Link] 24 Knochen M Giglio J Reis B F Flow-injection spectrophotometric determination of paracetamol in tablets and oral solutions Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis 2003 33 191 [CrossRef] [PubMed] 25 Borio V G Vinha Jr R Nicolau R A de Oliveira H P M de Lima C J Silveira Jr L Quantitative Evaluation of Acetaminophen in Oral Solutions by Dispersive Raman Spectroscopy for Quality Control Spectroscopy An International Journal 2012 27 215 [CrossRef]
- Abstract
- Resumo
- 1 Introduccedilatildeo
- 2 Parte Experimental
- 3 Resultados e Discussatildeo
- 4 Conclusatildeo
- Referecircncias Bibliograacuteficas
-
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Tabela 4 Resultados de recuperaccedilatildeo obtidos por meio do teste de adiccedilatildeo de padratildeo e de medidas espectrofotomeacutetricas no UV de soluccedilotildees contendo PAR em trecircs niacuteveis de o e t accedilatildeo dife e tes e g L-1)
Soluccedilatildeo oral Concentraccedilatildeo
g L-1)
Recuperaccedilatildeo
meacutedia plusmn DP ()
05 10955 plusmn 1007
Referecircncia 10 10334 plusmn 446
15 9745 plusmn 172
Meacutedia plusmn DP 10345 plusmn 605
05 11997 plusmn 705
Geneacuterico 10 9459 plusmn 657
15
Meacutedia plusmn DP
9371 plusmn 675
10276 plusmn 1491
n = 3 DP = Desvio padratildeo
Visando a avaliaccedilatildeo da robustez capacidade do meacutetodo proposto em resistir a pequenas variaccedilotildees dos paracircmetros analiacuteticos verificou-se o comportamento dos resultados em relaccedilatildeo a duas variaacuteveis
marca do etanol absoluto e a temperatura do laboratoacuterio onde as medidas espectrofotomeacutetricas foram realizadas Os resultados experimentais obtidos para a robustez satildeo apresentados na Tabela 5
Tabela 5 Resultados relativos agrave robustez do meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
Paracircmetros variados Concentraccedilatildeo
dia g L-1) DP CV ()
Marca do etanol absoluto
Dinacircmica 768 001 019 ANOVA
fcalculado = 395 ftabelado = 514
Reagen 718 010 147
Vetec 737 005 076
Temperatura
24degC 737 012 171 fcalculado = 576 ftabelado = 190
tcalculado = 0001 ttabelado= 4303
27degC 737 005 076
n = 3 DP = Desvio padratildeo CV = Coeficiente de variaccedilatildeo
A anaacutelise estatiacutestica dos dados obtidos variando a marca do solvente realizada por meio da ANOVA demonstrou que ocorre uma influecircncia significativa nos resultados a um niacutevel de confianccedila de 95 portanto o meacutetodo proposto natildeo foi robusto nesse
paracircmetro avaliado No entanto essa variaccedilatildeo natildeo afeta nos resultados das anaacutelises em soluccedilotildees orais e segundo a orientaccedilatildeo sobre validaccedilatildeo de meacutetodos analiacuteticos (DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo INMETRO)23 a robustez eacute um paracircmetro
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opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O
valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas
A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV
Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
PAR (mg mL-1)
Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()
Referecircncia 200 201 plusmn 5 050
Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050
n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100
O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas
Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11
para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos
4 Conclusatildeo
O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas
Agradecimentos
Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)
Junior E J A G et al
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Referecircncias Bibliograacuteficas
1 Zhu W Huang H Gao X Ma H
Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical
Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of
Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced
Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical
Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD
determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of
Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science
2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual
de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and
Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova
2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova
2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo
Junior E J A G et al
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analiacutetico para determinaccedilatildeo do teor de sinvastatina em caacutepsulas magistrais Quiacutemica
Nova 2011 34 516 [CrossRef] 16 Barboza F M Dalla Vecchia D Pereira A V Stulzer H K Silva M A S Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico simples e raacutepido por espectroscopia UV para quantificaccedilatildeo de aciclovir em matrizes hidrofiacutelicas de liberaccedilatildeo prolongada Quiacutemica Nova 2010 33 747 [CrossRef] 17 do Recircgo J F de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo de olanzapina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria desenvolvimento e validaccedilatildeo Quiacutemica Nova
2010 33 471 [CrossRef] 18 de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo simultacircnea de olanzapina e cloridrato de fluoxetina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria derivativa Quiacutemica Nova
2012 35 627 [CrossRef] 19 Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Resoluccedilatildeo RE n
o 899 de
29052003 [Link] 20 ICH - The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human
Use Q 2B- validation of Analytical procedure
methodology 1996 [Link] 21 Pimentel M F Neto B B Calibraccedilatildeo Uma Revisatildeo para Quiacutemicos Analiacuteticos Quiacutemica Nova 1996 3 268 [Link] 22 Mendham J Denney R C Barnes J D Thomas M J K Anaacutelise Quiacutemica
Quantitativa 6a ed LTC Rio de Janeiro 2002 23 Instituto Nacional de Metrologia Normalizaccedilatildeo e Qualidade Industrial (INMETRO) Orientaccedilatildeo sobre Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo 2016 [Link] 24 Knochen M Giglio J Reis B F Flow-injection spectrophotometric determination of paracetamol in tablets and oral solutions Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis 2003 33 191 [CrossRef] [PubMed] 25 Borio V G Vinha Jr R Nicolau R A de Oliveira H P M de Lima C J Silveira Jr L Quantitative Evaluation of Acetaminophen in Oral Solutions by Dispersive Raman Spectroscopy for Quality Control Spectroscopy An International Journal 2012 27 215 [CrossRef]
- Abstract
- Resumo
- 1 Introduccedilatildeo
- 2 Parte Experimental
- 3 Resultados e Discussatildeo
- 4 Conclusatildeo
- Referecircncias Bibliograacuteficas
-
Junior E J A G et al
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opcional dentro dos estudos de validaccedilatildeo O teste f foi aplicado para comparar as precisotildees obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico proposto em duas temperaturas diferentes do local da anaacutelise resultando em um valor de fcalculado menor que o valor de ftabelado para as temperaturas 24 degC e 27 degC indicando que natildeo existe diferenccedila significativa entre as precisotildees das duas anaacutelises a um niacutevel de confianccedila de 95 possibilitando a aplicaccedilatildeo do teste t O
valor de tcalculado eacute menor que o ttabelado indicando que natildeo existem diferenccedilas significativas a um niacutevel de confianccedila de 95 entre as meacutedias dos resultados obtidos nas duas temperaturas (24 degC e 27 degC) estudadas
A Tabela 6 apresenta os resultados obtidos na quantificaccedilatildeo de PAR nas soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV
Tabela 6 Resultados obtidos nas anaacutelises de PAR em soluccedilotildees orais empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico no UV proposto
PAR (mg mL-1)
Soluccedilatildeo oral Roacutetulo Meacutetodo espectrofotomeacutetrico Erro relativo ()
Referecircncia 200 201 plusmn 5 050
Geneacuterico 200 199 plusmn 3 -050
n = 3 Erro relativo = [(Meacutetodo espectrofotomeacutetrico ndash valor no roacutetulo) valor no roacutetulo] x 100
O teste t foi aplicado para comparar as meacutedias obtidas empregando-se o meacutetodo espectrofotomeacutetrico com os valores descritos nos roacutetulos das soluccedilotildees orais analisadas Os valores de tcalculado (03464 ndash referecircncia 05773 - geneacuterico) satildeo menores que o ttabelado (4303) indicando que os valores das meacutedias obtidas por esse meacutetodo satildeo estatisticamente iguais a 200 mg mL-1 (p lt 005) demostrando que o meacutetodo proposto eacute uma excelente alternativa na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral nas anaacutelises de rotina de controle de qualidade de formulaccedilotildees farmacecircuticas
Satildeo descritos na literatura dois meacutetodos para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em soluccedilatildeo oral utilizando a anaacutelise em fluxo com determinaccedilatildeo espectrofotomeacutetrica24 e a espectroscopia Raman dispersiva25 visando a utilizaccedilatildeo em anaacutelises de rotina de controle de qualidade No entanto o meacutetodo proposto nesse artigo apresentou algumas vantagens em relaccedilatildeo aos meacutetodos descritos anteriormente a os cromatograacuteficos como por exemplo o baixo custo a simplicidade e a rapidez Eacute importante ressaltar que existem outros meacutetodos descritos na literatura4-11
para a quantificaccedilatildeo de paracetamol em formulaccedilotildees farmacecircuticas poreacutem na forma de comprimidos
4 Conclusatildeo
O meacutetodo espectrofotomeacutetrico na regiatildeo do UV proposto validado de acordo com a Guia para Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos e Bioanaliacuteticos (Resoluccedilatildeo no 899 de 2905 2003 da ANVISA)19 apresentou a confiabilidade requerida permitindo o seu emprego na quantificaccedilatildeo de PAR em soluccedilatildeo oral em anaacutelises de rotina de controle de qualidade pois eacute um meacutetodo simples raacutepido seguro e de baixo custo em comparaccedilatildeo com as teacutecnicas cromatograacuteficas
Agradecimentos
Ao apoio financeiro da Universidade Catoacutelica de Brasiacutelia (UCB)
Junior E J A G et al
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Referecircncias Bibliograacuteficas
1 Zhu W Huang H Gao X Ma H
Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical
Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of
Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced
Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical
Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD
determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of
Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science
2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual
de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and
Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova
2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova
2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo
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analiacutetico para determinaccedilatildeo do teor de sinvastatina em caacutepsulas magistrais Quiacutemica
Nova 2011 34 516 [CrossRef] 16 Barboza F M Dalla Vecchia D Pereira A V Stulzer H K Silva M A S Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico simples e raacutepido por espectroscopia UV para quantificaccedilatildeo de aciclovir em matrizes hidrofiacutelicas de liberaccedilatildeo prolongada Quiacutemica Nova 2010 33 747 [CrossRef] 17 do Recircgo J F de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo de olanzapina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria desenvolvimento e validaccedilatildeo Quiacutemica Nova
2010 33 471 [CrossRef] 18 de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo simultacircnea de olanzapina e cloridrato de fluoxetina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria derivativa Quiacutemica Nova
2012 35 627 [CrossRef] 19 Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Resoluccedilatildeo RE n
o 899 de
29052003 [Link] 20 ICH - The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human
Use Q 2B- validation of Analytical procedure
methodology 1996 [Link] 21 Pimentel M F Neto B B Calibraccedilatildeo Uma Revisatildeo para Quiacutemicos Analiacuteticos Quiacutemica Nova 1996 3 268 [Link] 22 Mendham J Denney R C Barnes J D Thomas M J K Anaacutelise Quiacutemica
Quantitativa 6a ed LTC Rio de Janeiro 2002 23 Instituto Nacional de Metrologia Normalizaccedilatildeo e Qualidade Industrial (INMETRO) Orientaccedilatildeo sobre Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo 2016 [Link] 24 Knochen M Giglio J Reis B F Flow-injection spectrophotometric determination of paracetamol in tablets and oral solutions Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis 2003 33 191 [CrossRef] [PubMed] 25 Borio V G Vinha Jr R Nicolau R A de Oliveira H P M de Lima C J Silveira Jr L Quantitative Evaluation of Acetaminophen in Oral Solutions by Dispersive Raman Spectroscopy for Quality Control Spectroscopy An International Journal 2012 27 215 [CrossRef]
- Abstract
- Resumo
- 1 Introduccedilatildeo
- 2 Parte Experimental
- 3 Resultados e Discussatildeo
- 4 Conclusatildeo
- Referecircncias Bibliograacuteficas
-
Junior E J A G et al
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Referecircncias Bibliograacuteficas
1 Zhu W Huang H Gao X Ma H
Electrochemical behavior and voltammetric determination of acetaminophen based on glassy carbon electrodes modified with poly(4-aminobenzoic acid)electrochemically reduced graphene oxide composite films Materials Science and Engineering C 2014 45 21 [CrossRef] 2 Devaraj M Deivasigamani R K Jayadevan S Controlled growth and molecular self-assembly of Au nanoparticles to Au nanochains application towards enhancement for the electrochemical determination of paracetamol Analytical
Methods 2013 5 3503 [CrossRef] 3 Devkar S T Kandhare A D Zanwar A A Jagtap S D Katyare S S Bodhankar S L Hegde M V Hepatoprotective effect of withanolide-rich fraction in acetaminophen-intoxicated rat decisive role of TNF-α IL- β COX-II and iNOS Pharmaceutical Biology 2016 54 1 [CrossRef] [PubMed] 4 Pandya E J Kapupara P Shah K V Development and validation of simultaneous estimation of diclofenac potassium Paracetamol and serratiopeptidase by first order derivative UV spectroscopy method in pharmaceutical formulation Journal of
Chemical and Pharmaceutical Research 2014 6 912 [Link] 5 Khanage S G Mohite P B Jadhav S Development and validation of UV-visible spectrophotometric method for simultaneous determination of eperisone and paracetamol in solid dosage form Advanced
Pharmaceutical Bulletin 2013 3 447 [CrossRef] 6 Moreira A B Dias I L T Neto G O Zagatto E A G Kubota L T Simultaneous spectrofluorimetric determination of paracetamol and caffeine in pharmaceutical preparations in solid-phase using partial least squares multivariate calibration Analytical
Letters 2006 39 349 [CrossRef] 7 Dewani A P Bakal R L Shelke P G Chandak M Patra S Farooqui S Chandewar A V An gradient HPLC-DAD
determination of phenylepherine paracetamol ambroxol and levocetrizine in pharmaceutical formulation Indian Journal of
Chemical Technology 2016 23 419 [Link] 8 Topkafa M Ayyildiz H F Memon F N Kara H New potential humic acid stationary phase toward drug components Development of a chemometric-assisted RP-HPLC method for the determination of paracetamol and caffeine in tablet formulations Journal of Separation Science
2016 39 2451 [CrossRef] 9 Clausen D N Oliveira F M Casarin J Sartori E R Tarley C R T Development of HPLC method for quantification of orphenadrine paracetamol and caffeine in pharmaceutical formulations Revista Virtual
de Quiacutemica 2015 7 2066 [CrossRef] 10 Sipa K Socha E Skrzypek S Krzyczmonik P Electrodes modified with composite layers based on poly(34-ethylenedioxythiophene) as sensors for paracetamol Analytical Sciences 2017 33 287 [CrossRef] 11 Kalambate P K Srivastava A K Simultaneous voltammetric determination of paracetamol cetirizine and phenylephrine using a multiwalled carbon nanotube-platinum nanoparticles nanocomposite modified carbon paste electrode Sensors and
Actuators B Chemical 2016 233 237 [CrossRef] 12 Fa a opeia B asilei a Ag ia Na io al de Vigila ia Sa itaacute ia B asiacutelia p 63 [Link] 13 Borba P A A Riekes M K Pereira R N Stulzer H K Dalla Vecchia D Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico por espectrofotometria UV para quantificaccedilatildeo de carvedilol Quiacutemica Nova
2013 36 582 [Link] 14 Alves L D S Rolim L A Fontes D A F Rolim-Neto P J Soares M F de L R Sobrinho J L S Desenvolvimento de meacutetodo a aliacuteti o pa a ua tifi accedilatildeo do Efavi e z po espectrofotometria no UV-VIS Quiacutemica Nova
2010 33 1967 [CrossRef] 15 Polonini H C dos Santos F C Vaz U P Brandatildeo M A F Raposo N R B Desenvolvimento e validaccedilatildeo de meacutetodo
Junior E J A G et al
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analiacutetico para determinaccedilatildeo do teor de sinvastatina em caacutepsulas magistrais Quiacutemica
Nova 2011 34 516 [CrossRef] 16 Barboza F M Dalla Vecchia D Pereira A V Stulzer H K Silva M A S Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico simples e raacutepido por espectroscopia UV para quantificaccedilatildeo de aciclovir em matrizes hidrofiacutelicas de liberaccedilatildeo prolongada Quiacutemica Nova 2010 33 747 [CrossRef] 17 do Recircgo J F de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo de olanzapina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria desenvolvimento e validaccedilatildeo Quiacutemica Nova
2010 33 471 [CrossRef] 18 de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo simultacircnea de olanzapina e cloridrato de fluoxetina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria derivativa Quiacutemica Nova
2012 35 627 [CrossRef] 19 Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Resoluccedilatildeo RE n
o 899 de
29052003 [Link] 20 ICH - The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human
Use Q 2B- validation of Analytical procedure
methodology 1996 [Link] 21 Pimentel M F Neto B B Calibraccedilatildeo Uma Revisatildeo para Quiacutemicos Analiacuteticos Quiacutemica Nova 1996 3 268 [Link] 22 Mendham J Denney R C Barnes J D Thomas M J K Anaacutelise Quiacutemica
Quantitativa 6a ed LTC Rio de Janeiro 2002 23 Instituto Nacional de Metrologia Normalizaccedilatildeo e Qualidade Industrial (INMETRO) Orientaccedilatildeo sobre Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo 2016 [Link] 24 Knochen M Giglio J Reis B F Flow-injection spectrophotometric determination of paracetamol in tablets and oral solutions Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis 2003 33 191 [CrossRef] [PubMed] 25 Borio V G Vinha Jr R Nicolau R A de Oliveira H P M de Lima C J Silveira Jr L Quantitative Evaluation of Acetaminophen in Oral Solutions by Dispersive Raman Spectroscopy for Quality Control Spectroscopy An International Journal 2012 27 215 [CrossRef]
- Abstract
- Resumo
- 1 Introduccedilatildeo
- 2 Parte Experimental
- 3 Resultados e Discussatildeo
- 4 Conclusatildeo
- Referecircncias Bibliograacuteficas
-
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analiacutetico para determinaccedilatildeo do teor de sinvastatina em caacutepsulas magistrais Quiacutemica
Nova 2011 34 516 [CrossRef] 16 Barboza F M Dalla Vecchia D Pereira A V Stulzer H K Silva M A S Desenvolvimento e validaccedilatildeo de um meacutetodo analiacutetico simples e raacutepido por espectroscopia UV para quantificaccedilatildeo de aciclovir em matrizes hidrofiacutelicas de liberaccedilatildeo prolongada Quiacutemica Nova 2010 33 747 [CrossRef] 17 do Recircgo J F de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo de olanzapina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria desenvolvimento e validaccedilatildeo Quiacutemica Nova
2010 33 471 [CrossRef] 18 de Moura J I Moita G C Determinaccedilatildeo simultacircnea de olanzapina e cloridrato de fluoxetina em formulaccedilotildees farmacecircuticas por espectrofotometria derivativa Quiacutemica Nova
2012 35 627 [CrossRef] 19 Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria (ANVISA) Resoluccedilatildeo RE n
o 899 de
29052003 [Link] 20 ICH - The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human
Use Q 2B- validation of Analytical procedure
methodology 1996 [Link] 21 Pimentel M F Neto B B Calibraccedilatildeo Uma Revisatildeo para Quiacutemicos Analiacuteticos Quiacutemica Nova 1996 3 268 [Link] 22 Mendham J Denney R C Barnes J D Thomas M J K Anaacutelise Quiacutemica
Quantitativa 6a ed LTC Rio de Janeiro 2002 23 Instituto Nacional de Metrologia Normalizaccedilatildeo e Qualidade Industrial (INMETRO) Orientaccedilatildeo sobre Validaccedilatildeo de Meacutetodos Analiacuteticos DOQ-CGCRE-008 5a revisatildeo 2016 [Link] 24 Knochen M Giglio J Reis B F Flow-injection spectrophotometric determination of paracetamol in tablets and oral solutions Journal of Pharmaceutical and Biomedical
Analysis 2003 33 191 [CrossRef] [PubMed] 25 Borio V G Vinha Jr R Nicolau R A de Oliveira H P M de Lima C J Silveira Jr L Quantitative Evaluation of Acetaminophen in Oral Solutions by Dispersive Raman Spectroscopy for Quality Control Spectroscopy An International Journal 2012 27 215 [CrossRef]
- Abstract
- Resumo
- 1 Introduccedilatildeo
- 2 Parte Experimental
- 3 Resultados e Discussatildeo
- 4 Conclusatildeo
- Referecircncias Bibliograacuteficas
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