willow jian hua liu 4177

8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177

1/16

9.5 Analisis Kuantitatif dari Ekstrak dan Produk Herbal

Dengan perkembangan teknologi analisis modern dan peningkatan kesadarah akan

kesehatan manusia, banyak negara mendesak agar kontrol kualitas (!" men#adi

lebih ketat untuk produk $ produk herbal% kebutuhan akan analisis kuantitatif

khsusunya men#adi meningkat. &yatanya, analisis kuantitatif diaplikasikan untukherba dengan banyak alasan' untuk membandingkan kandungan senyaa utama

atau bioaktif pada suatu spesies yang tumbuh pada daerah yang berbeda atau

dikumpulkan pada aktu yang berbeda% untuk mengukur kontaminasi dari

pestisida, logam berat, dan bahan kimia toksik lainnya pada herba dan pelarut

organik pada ekstrak untuk penilaian keamanan% untuk mem)alidasi metode

ekstraksi atau prosedur pemrosesan% dan untuk mengontrol kualitas produk.


2/16


3/16

*ambar 9.+ ingerprint K- ekstrak Angelica pubescens f. biserrata dansubstitute/penggantinya. (A" K- dilihat di 01 2+5 nm% (3" K- dilihat di 01 45 nm%

(!" K- setelah disemprotkan dengan reagen anisaldehida asam sulfat (167".


4/16

*ambar 9.8 Analisis ngerprint HP-! dari ekstrak Angelica pubescens f. biserrata

dan beberapa substitutnya dengan menggunakan detektor DAD. :, Angelica

pubescens f. biserrata. 4. Angelica dahurica% 2. Angelica apaensis% . Heracleummoellendori% 5. Heracleum candicans% +. Aralia cordata.

Kun;i untuk menganalisa se;ara kuantitatif kadar bahan kimia dalam herba atau

ekstrak herbal adalah untuk menetapkan suatu sistem e)aluasi yang sesuai,

termasuk pemilihan senyaa karakteristik/khas yang akan dikuantikasi, penetapan

suatu metode preparasi sampel yang ;o;ok, dan suatu pendekatan kuantitatif yang

akurat dan tepat, serta eliminasi gangguan dari senyaa $ senyaa lain terhadap

senyaa khas yang akan dikuantikasi. 0ntuk analisis kuantikasi senyaa dalam

ekstrak herbal yang kompleks, pastikan sensti)itas dan reprodusibilitas dari

pendeteksian, dan #uga resolusi dari pun;ak analit, harus ;ukup baik. HP-!


5/16

*ambar 9.> 7pektra 01 dari senyaa sesuai

dengan pun;ak HP-! di gambar 9.8"

Kur)a standar harus dibuat untuk semua metode analisis kuantitatif untuk

memastikan hasil analisis berada dalam suatu garis lurus dari kur)a. 6dealnya,

tanpa memerhatikan metode analisa yang akan digunakan, lima hingga tu#uh

larutan dengan konsentrasi senyaa standar yang berbeda harus digunakan untuk

membuat kur)a kalibrasi saat akan menetapkan suatu analisis kuantitatif.

7ementara itu, salah satu larutan standar dengan konsentrasi berada dalam garis


6/16

linear dari kur)a kalibrasi diin#eksikan se;ara berulang tu#uh hingga 7embilan kali

untuk menge)aluasi reprodusibilitas dari sistem analisa. -arutan sampel harus

disiapkan dimana konsentrasi dari senyaa yang akan dikuantikasi harus masuk

dalam #a#aran garis linear dari kur)a kalibrasi.

7aat mengembangkan suatu metode analisis baru, sangatlah pentung untukmenge)aluasi akurasi, presisi, linearitas, spesitas, batas deteksi (-imit of

dete;tion/ -?D", dan batas kuantitas (-imit of uantitation/-?" dari metode dan

untuk membandingkan dengan metode dengan metode alternati)e yang tersedia.

7tatistika harus digunakan dalam analisis hasil.

Denisi yang terkait dengan analisis kuantitatif (misalnya akurasi, presisi, eror, rata<

rata, dan standar de)iasi", prinsip, dan metode analisis kuantitatif harus dikenal

dengan baik oleh analis yang melakukan analisis kuantikasi. 3anyak

literature/buku tersedia sebagai referensi, seperti Analytical Chemistry in a

GMPEnvironment — A Practice Guide.

7elain itu pada senyaa $ senyaa dalam herba, kontaminasi dari pestisida, logamberat dan mikroorganisme dalam ekstrak dan produk herbal #uga harus dianalisa

se;ara kuantitatif.

9.5.: Preparasi 7ampel

7uatu analisis kuantitatif yang sukses bergantung pada banyak hal, dimulai dari

proses pengumpulan sampel, transportasi, dan penyimpanan bahan hingga

preparasi sampel, lalu metode analisa. =etode preparasi sampel yang biasa

digunakan untuk bahan herbal mentah men;akupi imersi/pen;elupan pelarut,

partisi pelarut, ektraksi re@uks, ekstraksi ultrasoni;, dan 7E. Detail dari metode $

metode ini dan prinsipnya telah diperkenalkan pada !hapter 2 dari buku ini.

ika sampel herbal untuk u#i berupa ekstrak atau produk, maka sampel tersebut

harus terlarut sempurna dalam pelarut yang sesuai tanpa ada partikel yang tak

terlarut. !artridge (pola" fase padat berukuran ke;il (7PE/small siBe solid phase"

biasanya digunakan pada preparasi sampel dengan tu#uan untuk pemisahan.

Pemilihan metode preparasi sampel utamanya berdasarkan pada kelarutan dan

kestabilan dari senyaa target yang akan dianalisa. 7enyaa target tersebut harus

diekstraksi se;ara maksimal tanpa mengubah strukturnya dan menghindari

senyaa lainnya untuk meminimalkan gangguan senyaa tak diinginkan tersebut

pada saat pendeteksian senyaa target. Keamanan, biaya, dan aktu #uga

merupakan faktor yang patut dipertimbangkan. Hal $ hal ini merupakan hal yangpenting agar memberikan suatu analisis kuantitatif yang terper;aya dan akurat.

9.5.4 =etode Analisis Kuantitatif

=etode analisis kuantitatif yang sesuai dan biasa digunakan untuk ekstrak dan

produk herbal adalah metode kromatogra dan spektroskopi, men;akupi metode

standar internal, metode standar eksternal, metode kur)a kalibrasi, metode


7/16

adisi/penambahan standar dan metode normalisasi. Di sini hanya diberikan

informasi singkat untuk beberapa metode yang biasanya digunakan% perkenalan

info yang mendetail tentang tiap metode tersedia pada banyak buku, artikel di

#urnal $ #urnal, dan eb sites.

:. =etode standar internal=etode ini adalah metode terbaik untuk kuantikasi senyaa di dalam suatu

ekstrak herbal kompleks. Pada metode ini, suatu substansi yang sesuai harus

dipilih sebagai suatu substansi standar internal dan penambahan substansi

standar se;ara kuantitatif ke dalam sampel u#i. Perhitungan kadar senyaa

ini berdasarkan rasio area pun;ak dari senyaa yang akan dianalisa dan

substansi standarnya. =etode ini khususnya berguna hanya pada saat

beberapa kadar senyaa harus dianalisa kuantitatif. =etode standar internal

merupakan metode yang ideal untuk kuantikasi dari senyaa

khas/karakteristik atau bioaktif dalam ekstrak herbal.7tandar internal yang terpilih harus memenuhi syaratberikut' standar

tersebut tidak boleh berupa senyaa yang ada di dalam sampel% pun;akkur)anya harus tampak dekat atau antara pun;ak dari substansi yang diu#i

tetapi dengan pemisahan yang sempurna% penambahan #umlah standar ke

dalam sampel tidak boleh berbeda #auh dari senyaa yang diu#i.Aplikasi dari standar internal dapat menghindari kesalahan/eror yang

diakibatkan oleh ketidakstabilan instrument, in#eksi yang tidak akurat, dan

faktor $ faktor lainnya. 0ntuk menghindari hilangnya senyaa u#i selama

prosedur pra


8/16

7edikit perbedaan )olume in#eksi dapat mengakibatkan perbedaan yang

signikan pada hasil dari metode ini. =erupakan hal yang lebih baik untuk

mengin#eksi sampel melalui suatu ;in;in kuantitatif saat metode standar

eksternal digunakan. Penggunaan sampler


9/16

bukannya ke dalam larutan murni, seperti pada metode penambahan/adisi

standar. Konsentrasi dari susbtansi dalamsuatu sampel dikalkulasi

berdasarkan perbedaan yang terukur antara sampel yang ditambahi

standar/spiked dan sampel yang tidak ditambahi standar/unspiked. =etode

ini dapat diaplikasikan untuk mayoritas analisis kromatograk dan

spektroskopik, seperti *!, AA7, dan 6!P, khususnya pada kasus #ika analisisdengan mudah diganggu oleh senyaa/komponen (matriks" di dalam sampel

kompleks yang dapat menyebabkan determinasi yang tidak tepat.

9.5.2 Analisis dengan HP-!

HP-! dapat dipasangkan dengan banyak #enis dete;tor, seperti dete;tor 01, DAD,

dete;tor kondukti)itas elektrik, dete;tor @uorosens, dete;tor indeks refraktif, dan

dete;tor spektrometri massa yang lebih ma#u. Di antara dete;tor


10/16

;ahaya 01 yang ditransmisikan melalui sel dan konsentrasi dari solut didalamnya

mengikuti Hukum 3eer.

Detektor 01 dengan pan#ang gelombang yang telah ditentukan menggunakan

;ahaya dengan pan#ang gelombang tunggal yang dihasilkan oleh suatu #enis lampu

dis;harge (lampu/perangkat yang menghasilkan ;ahaya dengan ;ara mengalirkanlistrik internal antara elektroda dalam suatu gas" spesik. Pan#ang gelombang yang

paling sering digunakan adalah 45 nm, dihasilkan dari suatu lampu uap merkuri

bertekanan rendah. Analisis kuantitatif menggunakan detektor ini terbatas hanta

untuk senyaa yang memiliki absorpsi yang baik pada pan#ang gelombang yang

tersedia.

Detektor multi"avelength menggunakan suatu sumber ;ahaya yang meman;arkan

;ahaya dengan berbagai pan#ang gelombang. Dengan detektor ini, ;ahaya dengan

pan#ang gelombanf tertentu dapat dipilih untuk deteksi. 7uatu absorpsi maksimum

biasanya dipilih untuk mendapatkan sensiti)itas maksimal. 7ementara itu, spektra

absorpsi dari senyaa terisolasi dalam elute #uga bisa didapatkan untuk identikasidengan ;ara dipindai pada suatu kisaran/#a#aran pan#ang gelombang. erdapat dua

tipe dasar/utama dari detektor multia)elength, detektor dispersi dan DAD, tetapi

DAD merupakan #enis detektor yang lebih popular.

DAD menggunakan suatu lampu deuterium (H4" atau enon yang meman;arkan

;ahaya meleati #arak spektrum 01. !ahaya dari lampu difokuskan melalui suatu

lensa akromatik melalui sel sampel dan diarahkan ke atas suatu #eru#i/kisi


11/16

HP-!


12/16

Preparasi sampel untuk metode HP-!


13/16

7uatu sampel herbal untuk *!


14/16

$. Metode urva standar digunakan dengan membuat suatu kelompok larutan

sampel standar dengan konsentrasi yang berbeda


15/16

AA7 biasanya digunakan untuk mengukur residu logam berat dalam tanaman.

=etode ini memiliki karakteristik seperti akurasi yang tinggi, sensiti)itas yang

tinggi, dan selekti)itas yang baik.

7ampel u#i harus disiapkan dalam bentuk larutan, baik dengan ;ara dilarutkan

dalam pelarut atau dilelehkan pada suhu tinggi.

-arutan standar dan sampel harus disiapkan pada konsentrasi dimana absorbansisampel u#i akan berkisar antara G.4 dan G.8.

Kuantikasi AA7 dapat dilakukan dipengaruhi oleh beberapa gangguan, antara lain'

:. *angguan ionisasi ' menga;u pada gangguan yang diakibatkan ionisasi atom

dan dapat dengan efektif ditekan dan dieliminasi dengan menambahkan

agen deionisasi.4. *angguan sik ' menga;u pada penurunan absorbansi sampel akibat

perubahan karakteristiksik sampel saat pemindahan/transfer,

e)aporasi/penguapan, dan atomisasi. =etode yang paling umum digunakan

untuk mengeliminasi gangguan ini adalah harus memiliki suatu substansi

a;uan/pembanding yang memiliki komposisi serupa dengan sampel u#i, atau

yang menggunakan metode penambahan/adisi standar.2. *angguan optikal' biasanya men;akupi gangguan pada garis spektral dan

garis non


16/16

=etode kuantitatif yang umum men;akupi metode standar eksternal, metode

standar internal, metode adisi/penambahan standar, dan metode dilusi isotop. Pada

metode dilusi/pengen;eran isotop, suatu kuantitas radioisotope yang telah

diketahui atau isotop stabil yang langka ditambahkan (spiked" ke dalam sampel.

willow jian hua liu 4177

Documents