Visoka poljoprivredna škola strukovnih studija u Šapcu

Seminarski rad

Šabac 2011.

Mentor:

prof. dr Jovica Nikolovski

Student:

Ivan Ivanović 197/3

Oblast: Zarazne bolesti izazvane virusima

Tema rada: Besnilo malih životinja

I Uvod

Tema ovog seminarskog rada je Besnilo malih životinja koju ćemo u daljem tekstu opširnije

obrazložiti, kao i neke pojmove koji su usko vezani sa ovom temom.

II Ciljni zadatak rada je pretstavljanje podataka iz nama dostupne literature.

III Metode i tehnike rada

Od materijala za pregled na prisustvo besnila, uzima se moždano tkivo: Amonovi rogovi,

pons, medulla oblongata, a kod mačaka mali mozak.Uzorkovani materijal se u letnjem

periodu konzerviše u fiziološkom rastvoru sa 50%, a zimi sa 30% glicerina da bi se sprečio

proces truljenja.

Mikroskopski pregled materijala uzetog iz moždane mase životinja na prisustvo virusa besnila

izvodi se pripremanjem "otiska" preparata na navedeni način:

1. Poželjno je da se uzorkuje komadić moždane mase veličine zrna pšenice, na prelazu

bele i sive supstancije, koji se postavlja na traku filter papira.

2. Uzeti komadić moždanog tkiva na filter papiru, zatim pritisnuti mikroskopskom

pločicom tako da na njoj ostane otisak

3. Dobijeni otisak se još nekoliko puta pritiska po suvom delu filter papira da bi se tkivni

preparat što više istanjio, zato što debeli otisci nisu podesni za pregled.

4. Preparat se zatim osuši na vazduhu i boji određenim metodama.

5. Otisak-preparat se boji najčešće po Van Gizonu Van Giesoneu) ili po Selersu (Sellers),

radi otkrivanja citoplazmatičnih inkluzija koje nastaju u neuronima kao rezultat

razmnožavanja virusa besnila.

Bojenje po Van Giesonu:

Boja se priprema tako što se dve kapi rozanilin-ljubičastog i jedna kap zasićenog

rastvora metilenskog-plavog sipaju na 10ml destilovane vode.

Preparati se najpre fiksiraju metil alkoholom, a zatim se preliju prethodno

pripremljenom bojom kojom se boje pet minuta.

Sledi ispiranje običnom bojom, sušenje filter papirom i pregledanje na prisustvo

Negrijevih telašaca (Corpora Negri), odnosno citoplazmatičnih inkluzija

crvenkaste boje sa plavičastim granulama, dok se ostali delovi ćelije oboje u plavo.

Bojenje po Sellersu:

Preparati sa otiskom tkiva se prethodno fiksira metil alkoholom tri do pet

minuta

Preparati se prelivaju rastvorom boje Sellers 1 koja stoji jedan minut.

Posle toga se na preparat nanosi Sellers 2 boja i drži se dva minuta.

Na kraju, preparati se isperu čistom vodom, osuše filter papirom i pregledaju

mikroskopom na prisustvo tamnoljubičastih inkluzija u svetlocrvenkasto ili

svetloljubičasto obojenoj citoplazmi inficiranih neurona.

Biološki ogled:

Pošto mikroskopska ispitivanja mozga mogu često da daju negativne rezultate, kod životinja

koje su uginule od besnila obavezno mora da se izvede biološki ogled na eksperimentalnim

životinjama. Najpodesniji su miševi na sisi kod kojih se za nekoliko dana razvija bolest, zatim

beli pacovi uzrasta od tri do šest nedelja, kao i kunići. Prisustvo virusa potvrđuje se takođe

metodom direktne fluoroescencije.

Pripremanje materijala za biološki ogled:

1. Suspenzija moždanog tkiva za intracerebralnu inokulaciju dobija se tako što se

materijal najpre homogenizuje u tarioniku, resuspenduje u bujonu, a zatim se

centrifuguju pripremljeni uzorci na 2500 obrtaja, deset minuta

2. Dobijenom supernatantu se dodaju antibiotici i to 2000 I.J. penicilina i 1mg

streptomicina na 1ml supernatantne tečnosti, posle toga se filtruje pripremljena

suspenzija kroz neki od bakterioloških filtera.

IV Rezultat seminarskog rada