zoonosi protozoarie a trasmissione idrica def

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  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    ZOONOSI

    PROTOZO RIE

    TR SMISSIONE

    IDRIC

    http://giardinaggio.efiori.com/media/image/acqua/6_acqua.jpghttp://giardinaggio.efiori.com/media/image/acqua/6_acqua.jpghttp://giardinaggio.efiori.com/media/image/acqua/6_acqua.jpghttp://giardinaggio.efiori.com/media/image/acqua/6_acqua.jpg

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    Le patologie ascrivibili ai parassitideterminano una significativa morbosità

    nell’uomo e negli animali e costi economicielevati per la comunità.

    Gli stadi infettanti di alcuni parassiti,

    escreti con le feci e le urine, possonocontaminare le risorse idriche impiegate ascopi potabili

    http://giardinaggio.efiori.com/media/image/acqua/6_acqua.jpghttp://giardinaggio.efiori.com/media/image/acqua/6_acqua.jpghttp://giardinaggio.efiori.com/media/image/acqua/6_acqua.jpghttp://giardinaggio.efiori.com/media/image/acqua/6_acqua.jpg

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     Aumento del numero di epidemie correlateal consumo di acqua potabile nei paesi

    industrializzati.

    Negli ultimi anni maggiore attenzione

    verso le problematiche connesse allapresenza di microrganismi patogeni nellerisorse idriche, anche potabilizzate.

    http://giardinaggio.efiori.com/media/image/acqua/6_acqua.jpghttp://giardinaggio.efiori.com/media/image/acqua/6_acqua.jpghttp://giardinaggio.efiori.com/media/image/acqua/6_acqua.jpghttp://giardinaggio.efiori.com/media/image/acqua/6_acqua.jpg

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    Contaminazione delle riserve idriche

    attraverso il dilavamento del terreno in

    presenza di escrementi e urine

    Principali cause di rischio

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    Reflui urbani Reflui zootecnici

     Acque di dilavamento artificiali o naturali

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    Contaminazione di vegetali con feci e

    urine infette

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     Epidemie da acque ricreazionali

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    Tra le diverse specie di protozoi la cui presenza è

    strettamente associata ad acqua ed alimenti

    contaminati da materiale fecale di origine umana

    e/o animale

    Giardia, Cryptosporidium e

    Toxoplasma 

    costituiscono gli agenti di zoonosi più importanti

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    Cryptospor id ium  e Giardia  sono considerati alivello mondiale i più diffusi protozoi idrotrasmessi;

    numerose evidenze dell’origine idrica di episodi epidemici

    sia in paesi in via di sviluppo che in quelli occidentali

    l’infezione da Toxoplasma gondi i  è correlata

    prevalentemente all’assunzione di alimenti di origine

    animale parassitati/contaminati;sono stati appurati anche in questo caso epidemie per

    idrotrasmissione.

    http://www.marvistavet.com/assets/images/cryptosporidium_oocyst.gifhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.stanford.edu/group/parasites/ParaSites2006/Toxoplasmosis/Images/T_gondii_tachy.jpg&imgrefurl=http://www.stanford.edu/group/parasites/ParaSites2006/Toxoplasmosis/index.html&usg=__8hTHEH48295Nk6MUBLzdQTZU_vQ=&h=200&w=200&sz=6&hl=it&start=8&tbnid=TpM5Kkt6vJqBWM:&tbnh=104&tbnw=104&prev=/images?q=toxoplasma&ndsp=18&hl=it&rlz=1T4SKPB_itIT209IT210&sa=Nhttp://www.wildernesstravels.co.uk/pct/images/washington/giardia.jpghttp://www.marvistavet.com/assets/images/cryptosporidium_oocyst.gifhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.stanford.edu/group/parasites/ParaSites2006/Toxoplasmosis/Images/T_gondii_tachy.jpg&imgrefurl=http://www.stanford.edu/group/parasites/ParaSites2006/Toxoplasmosis/index.html&usg=__8hTHEH48295Nk6MUBLzdQTZU_vQ=&h=200&w=200&sz=6&hl=it&start=8&tbnid=TpM5Kkt6vJqBWM:&tbnh=104&tbnw=104&prev=/images?q=toxoplasma&ndsp=18&hl=it&rlz=1T4SKPB_itIT209IT210&sa=Nhttp://www.wildernesstravels.co.uk/pct/images/washington/giardia.jpghttp://www.marvistavet.com/assets/images/cryptosporidium_oocyst.gifhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.stanford.edu/group/parasites/ParaSites2006/Toxoplasmosis/Images/T_gondii_tachy.jpg&imgrefurl=http://www.stanford.edu/group/parasites/ParaSites2006/Toxoplasmosis/index.html&usg=__8hTHEH48295Nk6MUBLzdQTZU_vQ=&h=200&w=200&sz=6&hl=it&start=8&tbnid=TpM5Kkt6vJqBWM:&tbnh=104&tbnw=104&prev=/images?q=toxoplasma&ndsp=18&hl=it&rlz=1T4SKPB_itIT209IT210&sa=Nhttp://www.wildernesstravels.co.uk/pct/images/washington/giardia.jpg

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     Alta resistenza agli agenti chimici e fisici, inparticolare alla clorazione

    Elevata sopravvivenza delle forme infettanti

    Bassa dose infettante

    Dimensione ridotta delle (oo)cisti

    Caratteristiche comuni

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    Epidemie protozoarie in Europa

    da Karanis et al ., 2007

    UK

    Svezia

    Germania

    Italia

    Olanda

    Spagna

    Francia

    81 %

    3 %5 %

    2 %2%

    5 %

    3 %

    Secondo l’OMS  negli ultimi anni circa 1 milione di casi di infezioni da

    Giardia   e Cryptospor id ium, dovute a contaminazione delle acque, sono

    avvenute in Europa 

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    Epidemie protozoarie in Italia

    In Italia, i dati sulla diffusione

    di questi parassiti

    nell’ambiente sono ancoralimitati, poiché Giardia,

    Cryptosporidium e

    Toxoplasma non hanno

    l’obbligo di monitoraggio 

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    Giardia  and Cryptospor id ium  in acque di superficie in Italia

    Region Years Type

    of

    water 

    Numberof

    samples 

    GiardiaPositive Mean cyst

    samples N/L SD 

    (%)

    Cryptosporidium  Positive Mean oocyst

    samples N/L SD 

    (%) 

    References 

    Piedmont 1997 river 22 22 (100) 1.16 0.78 22 (100) 0.19 0.08 Carraro et al., 2000 

    Lazio 2001/02 river 10 10 (100) 80 90 10 (100) 5 4 Briancesco andBonadonna, 2005

    Sicily 2003/04 river 7 7 (100) 465 413 7 (100) 9.86 6.79 Di Benedetto et al., 2005

    Sicily 2003/04 watersheds 10 1 (10) 0.12 0.36 1 (10) 0.23  0.73 Di Benedetto et al., 2005

    Lazio 2001/02 watersheds 4 2 (50) 0.006 0.009 0 0 Briancesco andBonadonna, 2005

    Apulia 2000/01 watersheds 27 0 0 4 (14.8) 0.13 0.07 Brandonisio et al., 2004

    Apulia 2001/02 watercourse 7 3 (42.9) 0.01 0.02 0 0 Briancesco andBonadonna, 2005

    Tuscany 2003/04 watercourse 16 14 (87.5) 2.05 10 (62.5) 0.19 Sacco et al., 2006

    Lazio 2001/02 lakes 3 1 (33.3) 0.28 N. I. N. I. Di Cave et al., 2005

    N/L: number of oo/cysts per liter; N. I. = not investigated 

    Giangaspero et al., 2007

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    Giardia  e Cryptospor id ium  in acqua di pozzo 

    Region   Years 

    Number

    of

    samples 

    GiardiaPositive Mean cyst

    samples N/L SD 

    (%)

    Cryptospor id iumPositive Mean oocyst

    samples N/L SD 

    (%) 

    References 

    Lazio 2001/02 14 0 0 0 0 Briancesco and Bonadonna, 2005

     Apulia 2004/05 18 2 (11.1) 0.28 0.31 0 0 Lonigro et al ., 2006

    Sicily 2003/04 14 2 (14.3) 0.33 0.25 1 (7.1) 1.5 Di Benedetto et al., 2005

    Da Giangaspero et al., 2007

    Gi di C id i i fl i i It li

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     Region

    Typeof

    wastewater 

    Numberof

    samples Giardia

    Positive Mean/Range

    samples cyst N/L

    (%)

    Cryptosporidium  Positive Mean/Range

    Samples oocyst N/L

    (%)

    References 

    Piedmont Raw sawage 3 3 (100) 54 3 (100) 4.5 Carraro et al., 2000

    Lombardy

    Campania

    Sardinia

    Sicily

    Raw sawage 16 16 (100) 2,100 - 42,000 3 (18.75) 107 Cacciò et al., 2000

    Lazio Raw sawage 10 10 (100) 800 - 7,000 10 (100) 0.4 - 30 Briancesco and Bonadonna, 2005

    Lazio Raw sawage 5 5 (100) 3,500 –  34,000 N. I. N. I. Di Cave et al., 2005

    Sicily Primary effluent 8 8 (100) 108,00 8 (100) 702 Di Benedetto et al., 2005

    Sicily Secondary effluenta  8 8 (100) 6,160 7 (87.5) 56.9 Di Benedetto et al., 2005

    Apulia Secondary effluenta  4 4 (100) 1,800 5 (50) 56 Lonigro et al., 2006

    Apulia Tertiary effluent b  4 4 (100) 253 4 (100) 0.26 Brandonisio et al., 2000

    Apulia Tertiary effluent c 4 4 (100) 6.65 4 (100) 0.23 Brandonisio et al., 2000

    Piedmont

    Apulia

    Lazio

    Lazio

    Apulia

    Apulia

    Tertiary effluent d

    Chlorinated effluent

    Chlorinated effluent 

    Chlorinated effluent

    Chlorinated effluent

    UV-Treated effluent

    11

    14

    6

    2

    11

    10

    11 (100)

    11 (78.6)

    6 (100)

    2 (100)

    9 (81.82)

    7 (70)

    1.4

    37.5

    60

    31 –  670

    98.85

    37.8

    11 (100)

    3 (21.4)

    6 (100)

     N. I.

    4 (36.4)

    1 (10)

    0.21

    0.29

    30

     N. I.

    6.99

    2.67

    Carraro et al., 2000

    Brandonisio et al., 2000

    Briancesco and Bonadonna, 2005

    Di Cave et al., 2005

    Brandonisio et al., 2007

    Brandonisio et al., 2007

    Giardia  e Cryptospor id ium  nei reflui in Italia

    a Activated Sludge;  b Chemical Flocculation; c Chemical Flocculation followed by slow sand filtration; d Chemical dephosphorization and multilayer filtration

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    Acqua potabile e ricreazionale in Italia

    Negativo l’esame di 19 campioni di

    acqua potabile (Briancesco e Bonadonna

    2005) 

    Cryptosporidium e/o Giardia sono statirinvenuti occasionalmente nell’acquadi piscine (Bonadonna et al. 2004;Briancesco e Bonadonna 2005; Oliveri et al.

    2006)

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    Per stimare il potenziale zoonotico diuna specie/genotipo è necessariovalutare la presenza delle possibili

    varianti nei diversi ospiti e

    nell’ambiente 

    Epidemiologia molecolare:

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    Cryptospor id ium  spp.

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    Criptosporidiosi

    Patologia particolarmente grave neiruminanti neonati (vitelli e capretti inmodo particolare).

    La malattia interessa anche numerosialtri mammiferi, gli uccelli, i pesci, irettili.

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Cryptosporidium

    TASSONOMIA• Phylum: Apicomplexa

    • Famiglia:Cryptosporiididae

    • Genere:

    Cryptosporidium

    Cryptosporidium: tassonomia

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Specie (16) di Cryptospor id ium ritenute valide e relativi ospitiCryptosporidium: tassonomia

    Specie  Ospiti più frequenti  Ospiti minori 

    C. parvum bovini, pecore, capre,

    uomo 

    cervi, topi, maiali

    C. hominis uomo, scimmie dugongo, pecore

    C. muris  roditori, cammelli  uomo, irace, capra di

    montagna

    C. canis  cani uomo

    C. felis  gatti uomo , bovini

    C. suis maiale uomo 

    C. andersoni bovini, cammelli pecore

    C. bovis bovini,

    C. ryanae bovini

    C. wrairi   cavia

    C. meleagridis  tacchini, uomo pappagallo

    C. baileyi   polli, tacchini calopsitta, quaglie, struzzo,

    anatre

    C. galli   fringuelli, galline,

    beccogrosso

    C. serpentis  serpenti, lucertole

    C. saurophilum  lucertole

    C. molnari   pesci

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    Ciclo del parassita: Simile a quello dei coccidiForma infettante:oocisti ovalare,

    di ~4-5μm priva di sporocisti con 4

    sporozoiti a virgola di ~ 1μm 

    Se ingerite o inalate dall’ospite si liberano gli sporozoiti

    Può avvenire anche in sedi

    diverse dall’intestino (congiuntiva, app. resp., ovaie, testicoli)

    Gli sprozoiti prendono contatto concon la sup. luminale delle cell. epit. e

    si invaginano nella loro membrana(vacuolo parassitoforo intr acell ulare- 

    extracitoplasmatico)  poi nell’area dicontatto si hanno modificazioni che

    portano al feeder organel le  (nutrimento per pinocitosi).

    Poi diviene trofozoita

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Ciclo del parassita:

    Il trofozoita a sua volta daràorigine ad uno schizonte

    Con le fasi schizogonichesi formano i merozoiti

    Macrogameti fissi(da un macrogametocita un solo macrogamete)

    Microgameti senza flagello

    ma mobili fusiformi(da un microgametocita 14-16 microgameti)

    Si forma lo zigote(che si riveste della parete formando l’oociste)

    C. baileyi: 3 generazioni schizogonicheC. meleagridis e parvum: 2 generazioni schizogoniche

    2 tipi di oocisti (non necessitano di sporulazione sono già infettanti):- a parete spessa (di 2 strati): forme di resistenza per l’esterno eliminate con le feci - a parete sottile (un solo strato): liberano gli sporozoiti nell’intestino con auto-reinfezione

    Durata del ciclo:

    3-14 gg

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    Uccelli

    C. meleagr idis : intestino tenue eapparato respiratorio (seni

    infraorbitali, laringe, trachea,bronchi, sacchi aerei, polmoni) C. baileyi : a livello di borsa diFabrizio, cloaca e apparato

    respiratorio (trachea) e congiuntiva

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    Trachea di tacchino invasa da numerosi criptosporidi

    (da Gardiner ed al., 1988, An atlas of protozoan

     parasites in animal tissues, USDA Agriculture Handbook n°

    651)

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    SUTURE

    SPOROZOITE

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    Trasmissione

    Trasmissione oro-fecale:

    •  Acqua

    •  Alimenti Trasmissione per via aerogena

    Diretta

    -Ruolo delle madri nei ruminanti Emissione di oocisti nell’ultimo periododi gravidanza-primo periodo di lattazione

    Notevole resistenza oocisti nell’ambiente (3 mesi a 15-20 °C e più di 1anno a 4-6°C) ed ai comuni disinfettanti (sensibili solo nei confrontidell’ammoniaca a 5-50%, formalina al 10% e perossido di idrogenoal 3%).

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    Epidemiologia

    criptosporidiosi ruminanti

    Cattle are commonly infected with four Cryptosporidium

    spp: C. parvum, C. andersoni, C. bovis, C. ryanae.

    Earlier studies in the United States indicated the existence

    of an age-related occurrence of Cryptosporidium spp.

    In dairy cattle, C. parvum is mostly found in pre-weaned

    calves, C. bovis and C. ryanae in weaned calves, and C.

    andersoni in yearlings and adult cattle

    The same pattern of infections probably also exist in beefand other breeds of cattle

    Thus, in cattle, only pre-weaned calves are major source

    of C. parvum.

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    Epidemiologia

    criptosporidiosi ruminanti C. parvum

    In USA fino al 60% degli allevamentiesaminati risulta positivo (fattori di rischioallev.)

    Fino al 50% vitelli 1-3 settimane di vita risultapositivo

    Nei vitelli con diarrea, nei vari studi nei varipaesi, dal 9 all’88% risultano infetti. Lamortalità non risulta elevata.

    Prima causa di diarrea neonatale nei vitellida solo o associato ad altri patogeni.

    In Italia molto frequente nei vitelli

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    Epidemiologia

    criptosporidiosi ruminanti

    C. parvum, C. bovis and the Cryptosporidium cervine

    genotype in sheep

    In goats, C. parvum, C. bovis, C. hominis, a

    Cryptosporidium goat genotype and a new

    Cryptosporidium genotype 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Epidemiologia criptosporidiosi

    altre specie animali

    Cryptosporidium parvum and Cryptosporidium horsegenotype in horses

    C. suis and the Cryptosporidium pig genotype II in

    pigs. Cryptosporidium parvum was only rarely seenin pigs 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Epidemiologia

    criptosporidiosi C. hominis, C. parvum, C. meleagridis, C. felis, C. canis are found in

    humans

     A few other Cryptosporidium species and genotypes are occasionally

    found in humans, including C. muris, C. suis, C. andersoni and 

    Cryptosporidium cervine, horse, rabbit genotypes C. hominis more commonly found in children and C. parvum  more in

    adults

    C. parvum and C. hominis are thus far associated with most waterborne,

    foodborne and direct contact-associated (person-to-person and animal-to-

    person) outbreaks of cryptosporidiosisIn studies conducted in Peru there were no significant differences in the

    distribution of Cryptosporidium species or genotypes between children and

    HIV+ persons,indicating that there is no preferential infection with zoonotic

    species/genotype in immunocompromised persons 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    PatogenesiLocalizzazioni intestinali:

    Diarrea emalassorbimento

    Scarso assorbimento di H2O e Na+ Liberazione di tossine enterotossicheDiminuito assorbimento zuccheri, vitamine, proteine e

    lipidiAppiattimento e necrosi degli enterociti,villi accorciati

    e fusi. Infiltrazione cellule infiammatorie(plasmacellule e linfociti)

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    PatogenesiLocalizzazioni respiratorie:

    Tosse, sternuti,rantoli, dispnea

    Scomparsa Appiattimento e necrosi dell’epitelio

    tracheale oppure ipertrofia e iperplasia epiteliorespiratorio. Ciglia ridotte o assenti. Infiltrazione

    cellule infiammatorie (istiociti e linfociti) nella mucosa.Presenza di abbondante quantità di muco in seni, primevie respiratorie e trachea.

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Sintomatologia

    • Localizzazione intestinaleforma asintomatica

    forma diarroica autolimitante

    Forma diarroica persistente

    Forma diarroica grave e mortale

    Prolasso cloaca negli uccelli

    Localizzazione respiratorie

    Tosse, sternuti, dispnea e congiuntiviti

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Diarrea

    Immunocompetenti Immunodeficienti

    Adulti

    Giovani o Neonati

    Sintomi assentio blandi e forme per lo più autolimitanti

    Grave diarrea

    Danni permanenti

    Sist. Imm.1 contatto

    Flora enterica

    Diarrea perennee non autolimitante

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Immunologia

    Sia immunità cellulare che umorale

    sembrano svolgere un ruolo importante

    per il controllo di questa parassitosi.

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Diagnosi

    Escrezione delle oocisti intermittente:

    esaminare più campioni fecali

    (almeno 3 campioni raccolti in giorninon consecutivi).

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Diagnosi:

    Colorazionidi strisci fecali

    Zihel-Nielsen modificata(oocisti come granuli rosso brillante su sfondo verde)

    Kinyoun modificata(protozoi come corpi sferici rossi su sfondo blu)

    Heine (2 gocce di feci diarroiche su vetrino, aggiungere 2 gocce di carbol-fucsina,appoggiare un secondo vetrino, separare i vetrini e farli asciugare, osservare al microscopiooocisti non assumono il colore e spiccano su sfondo rosso)

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Diagnosi

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Diagnosi

    Metodi immunoenzimatici

     Immunofluorescenza PCR 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Diagnosi:

    Colorazioni impiegateper i preparati istologici

    Ematossilina-EosinaGiemsa (oocisti di colore blu-verde)Zihel-Nielsen (oocisti rosso brillante)

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Fonte di infezione per l’uomo 

    Materiale fecale umano o

    animale contenente oocisti

    Trasmissione:

    Tra animale e uomoTra uomo e uomo(promiscuità, scarsa igiene)

    IdricaAlimentare(poco conosciuta)

    Reservoir del parassita

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Terapia

    Colostro bovino iperimmune

    Paromomicina

    Spiramicina

    Lasalocid (coccidiostatico- molto

    tossico per i ruminanti) Alofuginone (coccidiostatico)

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Profilassi:

    ANIMALI:

    Ridurre i parti distocicinei boviniStabulare madre e figli separatida altri vitelliStabulare in box singoli vitelli ecapretti per almeno 2-3 sett. o

    separarli per gruppi di età

    Nascita di animali ipossicicon acidosi metabolicaStress per la madre =

    scarsa produzione di colostro

    Altri vitelli possono assumerecolostro destinato al figlio

    Scarsa assunzione di colostroda parte del vitello, scarsa

    protezione vs Criptosporidium

    Si riduce l’esposizione al patogeno nella fase più critica

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Profilassi:

    ANIMALI:

    Distruggere i parassitinell’ambiente A fine ciclo di allevamento, farepulizia locali ed attrezzature acaldo ad alta pressione e poivuoto sanitario

    Separare eventuali malati daisani quanto primaSe il patogeno entra inallevamento attenzione all’uomo

    per la trasmissione

    Ammoniaca (5%-50%)Perossido di Idrogeno al 3%Formolo al 10%Esposizione alla luce solarediretta per 3 gg

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Profilassi:

    ANIMALI:Sterilizzare quotidianamente leattrezzatureProfilassi contro altri patogeni

    Terapia farmacologica

    RotavirusCoronavirusE. coli

    Alofuginone lattato(coccidiostatico)

    Paromicina solfato(Ab aminoglicosidico)

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    OOCISTI

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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     Epidemiologia molecolare:

    Cryptospor id ium spp. 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Negli ultimi anni sono stati ottimizzati numerosi protocolli

    per l’amplificazione  tramite PCR di differenti regioni del

    DNA di Cryptosporidium che vengono utilizzati per:

    •l’epidemiologia 

    •la filogenesi

    •l’identificazione da campioni fecali umani ed animali

    •la tassonomia

    •l’identificazione da campioni di acqua e cibo 

    R i i i h li t t di h tili t l li i

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    REGIONE GENOMICA METODICA APPLICAZIONE

    18S rDNAPCR, nested PCR, sequenziamento,

    PCR-RFLP, Real time PCR, microarray

    identificazione specie e

    genotipi, analisi filogenetica

    Heat Shock Protein 70

    (Hsp70)

    PCR, nested PCR, sequenziamento,

    PCR-RFLP, Real time PCR, microarray

    identificazione specie e

    genotipi, analisi filogenetica

    Oocyst Wall Protein

    (COWP)

    PCR, nested PCR, sequenziamento,

    PCR-RFLP, microarray

    identificazione specie e

    genotipi

    Actina PCR, nested PCR, sequenziamento. identificazione specie egenotipi

    β-tubulinaPCR, nested PCR, sequenziamento,

    PCR-RFLP

    identificazione specie e

    genotipi

    Glycoproteina 60 (GP60) PCR, nested PCR, sequenziamento.identificazione

    sottogenotipo

    Microsatelliti PCR, nested PCR, sequenziamento,PCR-RFLP, microarray, fragment typing

    identificazionesottogenotipo

    MinisatellitiPCR, nested PCR, sequenziamento,

    PCR-RFLP, microarray, fragment typing

    identificazione

    sottogenotipo

    Extra-cromosomal duoble

    stranded RNAReverse trascriptase, PCR,

    identificazione

    sottogenotipo

    Regioni genomiche analizzate, metodiche utilizzate e loro applicazione

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Identificazione di numerose specie e genotipi da molte

    specie animali domestiche, selvatiche, dall’uomo  e

    dall’ambiente.

    Epidemiologia molecolare: Cryptospor id ium

    Cryptospor id ium : specie e ospiti

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    C. andersoniC. baileyiC. bovisC. canisC. felis

    C. galli  C. hominis  C. meleagridis  C. molnariC. muris   C. parvum   C.scophthalmiC. serpentisC. suis C.varaniC. wrairi

    Cattle, Camel ………………Chicken, Turkey……………Cattle .……………………………Dog …………………………………Cat .…………………………………

    Chicken, Passeriformes Human, monkey.…………… Turkey,Human .……………Fish …………………………………Rodent .…………………………

    Cattle, Human .……………Fish …………………………………Snake .……………………………Pig ……………………………………Lizard………………………………Guinea pig .…………………… 

    Human3 Avian Orders Human-HumanHuman, Cattle

    -Dugong, SheepParrot-Human,hyrax,Mtn goat

    Rodents, Ruminants --LizardHuman, CattleSnakes -

    Specie Ospiti principali Ospiti minori

    Cryptospor id ium : specie e ospiti

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Più di 33 genotipi, differenti da un punto di vista genetico

    ma ancora non definiti vere specie

    Da Smith et al. 2007

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     Acqua contaminata

    Cibo contaminato

    Contatto diretto

    Uomo  Animali

    Epidemiologia

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Numerose le epidemie riportate tra studenti

    di Veterinaria e tra il personale a contatto

    con bovini nelle stalle e nei laboratori indiversi paesi del mondo

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    • L'acqua principale veicolodi trasmissione delle oocistila cui presenza è statarilevata sia nelle acque

    grezze, soprattutto diorigine superficiale, sianelle acque potabili

    • Le oocisti sono resistentiagli stress ambientali e aitrattamenti chimici e fisicicomunemente attuati neiprocessi di potabilizzazione

    Epidemiologia

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    http://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.mazzonigroup.com/surgelati/Frutti_di_Bosco/frutti_di_bosco2.gif&imgrefurl=http://www.mazzonigroup.com/surgelati/Frutti_di_Bosco/frutti_di_bosco.html&h=237&w=210&sz=24&tbnid=sJ3S9WRUBrsJ:&tbnh=104&tbnw=92&hl=it&start=1&prev=/images?q=frutti+di+bosco&hl=it&lr=http://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.aurorapaterno.it/images/ortaggi1.jpg&imgrefurl=http://www.aurorapaterno.it/ortaggi.htm&h=276&w=350&sz=29&tbnid=PN4IBO9aeCsJ:&tbnh=91&tbnw=115&hl=it&start=47&prev=/images?q=ortaggi&start=40&hl=it&lr=&sa=Nhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.asmmerano.it/Upload/ortaggi.jpg&imgrefurl=http://www.asmmerano.it/Pagine/Mer-36-118.asp&h=182&w=210&sz=17&tbnid=B-gAUqiYqLwJ:&tbnh=86&tbnw=99&hl=it&start=27&prev=/images?q=ortaggi&start=20&hl=it&lr=&sa=Nhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.waterforlife.ca/images/aboutuspic.jpg&imgrefurl=http://www.waterforlife.ca/stats/usage_200402.html&h=241&w=155&sz=18&tbnid=8HcFZpS3tqcJ:&tbnh=104&tbnw=67&hl=it&start=395&prev=/images?q=cryptosporidium&start=380&hl=it&lr=&sa=Nhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.anri.barc.usda.gov/awpl/images/crypto_immune1.jpg&imgrefurl=http://www.lpsi.barc.usda.gov/awpl/cryptosporidium_immune.asp&h=150&w=200&sz=3&tbnid=tv9RsT6qckEJ:&tbnh=74&tbnw=99&hl=it&start=128&prev=/images?q=cryptosporidium&start=120&hl=it&lr=&sa=Nhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.geocities.com/codadilupo_2000/mare/shell0002.jpg&imgrefurl=http://www.geocities.com/codadilupo_2000/mare/bivalvi.htm&h=446&w=430&sz=27&tbnid=laLovFRbzg4J:&tbnh=123&tbnw=119&hl=it&start=6&prev=/images?q=+bivalvi&hl=it&lr=http://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.rivm.nl/infectieziektenbulletin/bul1406/zwembad1.gif&imgrefurl=http://www.rivm.nl/infectieziektenbulletin/bul1406/art_zwembaden.html&h=351&w=400&sz=51&tbnid=Lj3bJQ-WahcJ:&tbnh=105&tbnw=120&hl=it&start=76&prev=/images?q=cryptosporidium&start=60&hl=it&lr=&sa=Nhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.watertalk.org/svwa/news/images/horse_log1.jpg&imgrefurl=http://www.watertalk.org/svwa/news/01nov15.html&h=189&w=300&sz=70&tbnid=A0SftpyuCqgJ:&tbnh=69&tbnw=110&hl=it&start=145&prev=/images?q=cryptosporidium&start=140&hl=it&lr=&sa=Nhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.gov.on.ca/OMAFRA/english/engineer/facts/04-015f3.jpg&imgrefurl=http://www.gov.on.ca/OMAFRA/english/engineer/facts/04-015.htm&h=217&w=328&sz=40&tbnid=zay4RcuVuQgJ:&tbnh=75&tbnw=113&hl=it&start=104&prev=/images?q=cryptosporidium&start=100&hl=it&lr=&sa=Nhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.gov.on.ca/OMAFRA/english/engineer/facts/04-015f2.jpg&imgrefurl=http://www.gov.on.ca/OMAFRA/english/engineer/facts/04-015.htm&h=217&w=328&sz=24&tbnid=8PBWu_oQmGEJ:&tbnh=75&tbnw=113&hl=it&start=105&prev=/images?q=cryptosporidium&start=100&hl=it&lr=&sa=Nhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.immucell.com/images/cow.jpg&imgrefurl=http://www.immucell.com/investors.php&h=167&w=234&sz=11&tbnid=zm8GcVokIesJ:&tbnh=74&tbnw=104&hl=it&start=101&prev=/images?q=cryptosporidium&start=100&hl=it&lr=&sa=N

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    La maggior parte delle segnalazioni riportate in letteratura

    di epidemie di criptosporidiosi da acqua contaminata,

    provengono dagli USA, dal Canada e dal Regno Unito.

    L’incidenza di queste patologie idrodiffuse rimane ancora

    sottostimata, vista l’assenza di un sistema di sorveglianza

    nazionale specifico con l’eccezione degli Stati Uniti (attivo

    già dal 1971) e del Regno Unito.

    APRIL 19,1993Epidemie da consumo di acqua potabile

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    p q p

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    Gli studi in Italia

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Gli studi in Italia

    C. parvum è la specie identificatapiù frequentemente (85.7%)

    nell’uomo, negli animali, nelle

    acque

    112 isolati tipizzati

    C. parvum  n=96 (85.7%)

    C. hominis  n=1 (0.8%)

    C. felis  n=1 (0.8%)

    C. canis  n=2 (1.7%)C. suis n=8 (7.1%)

    Pig genotype II n=4 (3.5%) 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Ruolo degli animali nella

    trasmissione di Cryptosporidium all’uomo 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Epidemiologia molecolare: gli animali 

    La prevalenza del 100% di C.

     parvum quale agente di

    criptosporidiosi nei vitelli

    conferma il ruolo dei bovini

    quali possibili reservoir perl’infezione umana.

    L’infezione da C. felis in un

    paziente HIV-positivosottolinea il possibile impatto

    sulla salute pubblica di altre

    specie di Cryptosporidium.

    http://www.naturamediterraneo.com/Public/data6/steve72/gatto_MG_2586_.jpg_20071015211141_gatto_MG_2586_.jpghttp://eleonoraformisani.files.wordpress.com/2008/08/mucca.gifhttp://eleonoraformisani.files.wordpress.com/2008/08/mucca.gifhttp://www.tantasalute.it/img/gatto2.jpghttp://www.tantasalute.it/img/gatto2.jpghttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://mariodomina.files.wordpress.com/2007/04/acqua-5.jpg&imgrefurl=http://mariodomina.wordpress.com/2007/04/27/acqua-principio-di-tuttecose/&usg=__ek3fNdAn3d-v-b0FxhvCTPTKles=&h=370&w=500&sz=57&hl=it&start=23&tbnid=3eo7Nv8cW7pDeM:&tbnh=96&tbnw=130&prev=/images?q=acqua&start=20&gbv=2&ndsp=20&hl=it&sa=Nhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://mariodomina.files.wordpress.com/2007/04/acqua-5.jpg&imgrefurl=http://mariodomina.wordpress.com/2007/04/27/acqua-principio-di-tuttecose/&usg=__ek3fNdAn3d-v-b0FxhvCTPTKles=&h=370&w=500&sz=57&hl=it&start=23&tbnid=3eo7Nv8cW7pDeM:&tbnh=96&tbnw=130&prev=/images?q=acqua&start=20&gbv=2&ndsp=20&hl=it&sa=Nhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://mariodomina.files.wordpress.com/2007/04/acqua-5.jpg&imgrefurl=http://mariodomina.wordpress.com/2007/04/27/acqua-principio-di-tuttecose/&usg=__ek3fNdAn3d-v-b0FxhvCTPTKles=&h=370&w=500&sz=57&hl=it&start=23&tbnid=3eo7Nv8cW7pDeM:&tbnh=96&tbnw=130&prev=/images?q=acqua&start=20&gbv=2&ndsp=20&hl=it&sa=N

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Un’unica epidemia idrodifffusa in Emilia Romagna in una

    comunità per il recupero di tossicodipendenti (gennaio 1995).

    Prevalenze del 13,6% tra gli individui HIV negativi e del

    30,7% tra i sieropositivi, alcuni casi fatali.

    Pur non essendo stata effettuata la ricerca delle oocisti

    nell’acqua potabile, alcuni campioni di sedimento dai

    serbatoi di raccolta dell’acqua sono risultati contaminati daoocisti di Cryptosporidium.

    http://images.google.it/imgres?imgurl=http://mariodomina.files.wordpress.com/2007/04/acqua-5.jpg&imgrefurl=http://mariodomina.wordpress.com/2007/04/27/acqua-principio-di-tuttecose/&usg=__ek3fNdAn3d-v-b0FxhvCTPTKles=&h=370&w=500&sz=57&hl=it&start=23&tbnid=3eo7Nv8cW7pDeM:&tbnh=96&tbnw=130&prev=/images?q=acqua&start=20&gbv=2&ndsp=20&hl=it&sa=Nhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://mariodomina.files.wordpress.com/2007/04/acqua-5.jpg&imgrefurl=http://mariodomina.wordpress.com/2007/04/27/acqua-principio-di-tuttecose/&usg=__ek3fNdAn3d-v-b0FxhvCTPTKles=&h=370&w=500&sz=57&hl=it&start=23&tbnid=3eo7Nv8cW7pDeM:&tbnh=96&tbnw=130&prev=/images?q=acqua&start=20&gbv=2&ndsp=20&hl=it&sa=Nhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://mariodomina.files.wordpress.com/2007/04/acqua-5.jpg&imgrefurl=http://mariodomina.wordpress.com/2007/04/27/acqua-principio-di-tuttecose/&usg=__ek3fNdAn3d-v-b0FxhvCTPTKles=&h=370&w=500&sz=57&hl=it&start=23&tbnid=3eo7Nv8cW7pDeM:&tbnh=96&tbnw=130&prev=/images?q=acqua&start=20&gbv=2&ndsp=20&hl=it&sa=N

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    Giardia

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    Giardia è un protozoo flagellato intestinale che

    infetta un ampio numero di ospiti vertebrati

    EukaryotaPhylum Metamonada

    Classe ZoomastigophoreaOrdine DiplomonadidaFamiglia Hexamitidae

    Genere Giardia

    iardia

    http://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.yosemite.org/naturenotes/images/Giardia.jpg&imgrefurl=http://www.yosemite.org/naturenotes/Giardia.htm&h=250&w=319&sz=7&tbnid=rx4WGiNukj4J:&tbnh=88&tbnw=112&start=25&prev=/images?q=giardia&start=20&hl=it&lr=&ie=UTF-8&sa=N

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Tassonomia

    G. duodenalis  (sin.  Giardia intestinalis, G.lamblia)  che interessa numerose specie dimammiferi incluso l’uomo: è l’unica 

    specie isolata nell’uomo  G. agilis (anfibi)

    G. muris (roditori, uccelli ,rettili)

    G. psittaci  (pappagallini ondulati)

    G. ardeae (airone)

    G. microti

    La specie Giardia duodenalis 

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    p

    G. duodenalis è l’agente eziologico della giardosi erappresenta uno dei più comuni protozoi grastrointestinalicausa di diarrea di origine non batterica e virale nel mondo.

    Giardia duodenalis (sin: Giardia intestinalis, Giardia lamblia) èla sola specie trovata nell’uomo e in molti ospiti vertebrati 

    La specie Giardia duodenalis 

    http://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.yosemite.org/naturenotes/images/Giardia.jpg&imgrefurl=http://www.yosemite.org/naturenotes/Giardia.htm&h=250&w=319&sz=7&tbnid=rx4WGiNukj4J:&tbnh=88&tbnw=112&start=25&prev=/images?q=giardia&start=20&hl=it&lr=&ie=UTF-8&sa=N

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     Il parassita presenta due morfotipi: il trofozoita o stadiovegetativo e la cisti o stadio di disseminazione ambientale

    p

    La specie Giardia duodenalis 

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     • La forma cistica di resistenza

    (nell’ambiente) e infettante ha forma

    ovale

    • Misura 8 –14 x 5-8 μm 

    • contiene 4 nuclei (nelle cisti

    immature 2)

    •mostra 2 assostili, fibrille corte e

    ricurve disposte a gruppi di 4

    elementi (residui dei flagelli), 2 corpiparabasali mediani ed una parete

    proteico-fibrosa spessa 0.3µm

    p

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    •Il trofozoita, piriforme, è dotato di simmetria bilaterale•Misura 12-15 x 6-8 μm•Presenta:una superficie convessa (dorsale)una superficie concava (ventrale) con la quale aderisce alla

    parete intestinale (disco adesivo)La concavità ventrale conferisce ai trofozoiti la caratteristicaforma “a cucchiaio” quando visti di profilo.

    La specie Giardia duodenalis 

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    La specie Giardia duodenalis 

    La specie Giardia duodenalis 

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    Trofozoita

    http://www.promiselandhealth.com/parasites/Giardia_LifeCycle.gif

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    •Sviluppa nell’intestinotenue•Il trofozoita si moltiplicaper scissione binaria sullasuperficie della mucosaintestinale•attraversa l’intestino e siincista•le cisti vengono emessecon le feci

    CICLO BIOLOGICO

    La specie Giardia duodenalis 

    La specie Giardia duodenalis 

    http://www.promiselandhealth.com/parasites/Giardia_LifeCycle.gif

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    CICLO BIOLOGICO

    La specie Giardia duodenalis 

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    DISINCISTAMENTO

    La specie Giardia duodenalis 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    CICLO BIOLOGICO

    I trofozoiti si moltiplicano con unavelocità che dipende dal ceppo delprotozoo e da fattori legati all’ospite: 

    • Stato immunitario/malattie intercorrenti• Stato di nutrizione• Giovane età

    I trofozoiti si incistano nell’ileo e la paretecistica si completa in 44-70h

    La specie Giardia duodenalis 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    CICLO BIOLOGICO

    Le cisti emesse nell’ambiente sono già

    infettanti

    Una volta ingerite da un altro ospite laproduzione di nuove cisti inizia dopo

    circa 4-15gg

    La specie Giardia duodenalis 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    RESISTENZA/SENSIBILITA’ Cisti  

    Resistenti a -20C° x 10 ore

     +4C° x 2 mesi

     +37C° x 4gg

    Sensibili a  essiccamento

     calore (50C°) formaldeide (2-5%)

     fenolo e cresolo (5%)

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    GI RDIOSI

    Malattia nota dalla finedell’800 ma studiata con più

    attenzione con l’avvento

    delle patologieimmunodepressive

    La specie Giardia duodenalis 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Come si diffonde?

    •Giardia vive nell’intestino di animali e uomini infetti cherilasciano nell’ambiente il parassita.

    •Può trovarsi nel terreno, nel cibo nell’acqua e su tutte lesuperfici contaminate con feci emesse da animali o uomini

    infetti.

    vie di tr smissione

     

    La specie Giardia duodenalis 

    vie di tr smissione

     

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Uomo-uomo – trasmissione antroponotica: Eterosessuali/omosessuali

    Animali-uomo e viceversa– trasmissionezoonotica:da animali da reddito, animali da compagnia,animali selvatici

    Animale-animale

    ORO-FECALE

    La specie Giardia duodenalis 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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     Acqua contaminata

    Cibo contaminato

    Contatto diretto

    Uomo  Animali

    vie di tr smissione

     

    La specie Giardia duodenalis

     

    Giardia duodenalis epidemiologia

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Nella trasmissione del parassita è attribuitagrande importanza all’acqua destinata al

    consumo potabile.

    Acque oggetto di attività ricreativa (acquetermali e piscine)

    Acque destinate all’irrigazione checontaminano i vegetali destinati al consumoumano.

    Acque reflue depurate destinate ad usidomestici, industriali, pubblici(innaffiamento di zone verdi pubbliche,lavaggio delle strade, ecc.), e perl’irrigazione in agricoltura. 

     Acque di dilavamento artificiali o naturali

    Giardia duodenalis epidemiologia

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Dose infettanteLa dose media infettante calcolata è pari

    a 10 e 25 cisti

    Giardia duodenalis epidemiologia

    Giardia duodenalis epidemiologia

    http://images.google.it/imgres?imgurl=http://www.math.ut.ee/~lauriesk/maksalutikas.jpg&imgrefurl=http://www.math.ut.ee/~lauriesk/veereostus.html&h=175&w=282&sz=7&tbnid=u46zLqBrWTUJ:&tbnh=68&tbnw=109&start=15&prev=/images?q=giardia+intestinalis&hl=it&lr=&ie=UTF-8

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    L’infezione umana ha una distribuzione cosmopolita.Circa 200 milioni di persone in Asia, Africa e AmericaLatina presentano giardosi sintomatica (con circa 500.000

    nuovi casi per anno) (World Health Organisation, 1996).

    E’ più diffusa nelle regioni a clima caldo e nei bambini. 

    Nei paesi industrializzati è considerato un parassita

    riemergente a causa del suo frequente ruolo in casiepidemici di diarrea.

    Giardia duodenalis epidemiologia

    La specie Giardia duodenalis 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    EPIDEMIOLOGIA

    E’ una zoonosi 

     l’uomo (++ i bambini) è un importante

    serbatoio Ruolo degli animali  contaminazione

    acque e verdure

    Le cisti sono resistenti a basseconcentrazioni di cloro

    La specie Giardia duodenalis 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    EPIDEMIOLOGIA

    Cosmopolita

    Più frequente in bovini da latte e neimesi più freddi dell’anno 

    Ruminanti  infezione a 1-10 sett. Ma inCanada e USA isolato nel 20% di boviniadulti asintomatici e quasi nel 100% deivitelli con diarrea

    L’eliminazione delle cisti è intermittente 

    Il colostro non è protettivo

    La specie Giardia duodenalis 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    EPIDEMIOLOGIA

    Cavallo  infezione a 22 sett. mafrequente anche nei puledri neonati enelle madri con e senza diarrea

    Cane e gatto  infezioni frequenti sianei giovani animali che negli adulti,forme sintomatiche più frequenti neigiovani animali o negli animali sottoposti

    a fattori stressanti

    La specie Giardia duodenalis 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    EPIDEMIOLOGIA

    Fonti di infezione:

    • Trasmissione oro-fecale di forme cistiche• Trasmissione oro-fecale di Trofozoiti (++

    lattanti)

     Animali giovani escrezione > n° di cisti

    Madri escrezione cisti nell’ultimo periodo

    di gravidanza e nel primo di lattazione

    La specie Giardia duodenalis 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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     ADESIONE ALL’OSPITE  

    La specie Giardia duodenalis 

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     ADESIONE ALL’OSPITE  

    La specie Giardia duodenalis 

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    La specie Giardia duodenalis 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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     AZIONE PATOGENA

    Invasione della mucosa:• Rigonfiamento degenerativo delle cell. epit.• Atrofia villare e iperplasia delle cripte

    • Edema e infiltrazione linfocitaria• Erosioni dell’epitelio del duodeno 

    Competizione per i nutrienti

    La specie Giardia duodenalis 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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     AZIONE PATOGENA

    aumento enterociti immaturi

    diminuzione enzimi digestivi

    (disaccaridasi, maltasi, lattasi esaccarasi)

    fenomeni allergici per assorbimento di

     Ag intestinali

    Diarrea e malassorbimento

    La specie Giardia duodenalis 

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    ISTOLOGIA

    La specie Giardia duodenalis 

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    SINTOMATOLOGIA

    Diarrea: spesso intermittente e che sirisolve spontaneamente; a volte diarreatransitoria oppure forme croniche con

    dimagramento e letargia. Consistenzafeci da pastose a liquide spessomaleodoranti

    Ritardo nella crescita

    Dimagramento

    Forme asintomatiche

    La specie Giardia duodenalis 

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    PATOGENESI DIARREA

    Carenza di disaccaridasi: alterato

    assorbimento di glucosio, ioni sodio e

    cloro, acqua.

     Appiattimento dei villi: inibizione attività

    enzimatica e trasporto delle sostanze

    nutritive.

    Enterotossine??

    La specie Giardia duodenalis 

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    RISPOSTA IMMUNITARIA

    Locale (++)  tessuto linfoide dellamucosa intestinale che coinvolge sial’immunità umorale che cellulare 

    Umorale  IgG, IgM e +++ IgAsecretorie: rottura della parete deltrofozoita e < resistenza della cisti

    Cellulare

     linfociti T, macrofagi, IFNγ eneutrofili

    La specie Giardia duodenalis 

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    DIAGNOSI

    Esame delle feci (3 campioni di 3 giorni nonconsecutivi):•  A fresco

    • Flottazione (soluzione satura di NaCl – solfato diZn al 33%)• Formol-etere centrifugazione (se poche cisti)• Colorazione strisci fecali• Colorazione delle cisti con sostanze fluorescenti

    Elisa

    Immunofluorescenza diretta

    PCR

    La specie Giardia duodenalis 

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    TERAPIA

    Furazolidone: blocco replicazione DNA(molto tossico e cancerogeno)

    Quinacrina: blocco replicazione DNA

    (molto tossico) Nitroimidazoli: blocco attività enzimatica

    (tossici e cancerogeni)

    Molti Paesi vietano l’uso di questifarmaci negli animali in produzionezootecnica

    La specie Giardia duodenalis 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    TERAPIA

    Benzimidazolici: blocco e distruzione dei

    microtubuli. Il più usato è l’Albendazolo 

    Spesso si verificano forme di resistenzaai farmaci

    La specie Giardia duodenalis 

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    PROFILASSI

    Conoscere l’epidemiologia per eliminare

    i fattori di rischio soprattutto per i giovani,

    più sensibili all’infezione ed agli effetti

    patogeni del protozoo

    Migliorare l’igiene ambientale 

    Impedire contaminazione ambientale

    Epidemiologia molecolare

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Giardia

    Epidemiologia molecolare

    Epidemiologia molecolare: Giardia

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    Epidemiologia molecolare: Giardia

    PCR targets 

    Gdh (glutamate dehydrogenase): identificazione

    specie/genotipo

    Tpi (triose phosphatase isomerase):identificazione

    specie/genotipo

    EF-1 α (elongation factor-1α): identificazione specie/genotipo

    SSU rDNA (small subunit rDNA): identificazionespecie/genotipo

    β-Giardin: identificazione del genotipo

    Epidemiologia molecolare: il genere Giardia

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    Epidemiologia molecolare: il genere Giardia

    • G. agilis - anfibi• G. muris - roditori• G. duodenalis - mammiferi e uomo 

    • G. psittaci  - uccelli•  G. ardeae - uccelli• G. microti  - roditori

    La caratterizzazione molecolare di isolati di Giardia da differenti ospiti ha confermato l’esistenza di seidistinte specie:

    Epidemiologia molecolare: il genere Giardia

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     Epidemiologia molecolare:

    la specie G.duodenal is

    Epidemiologia molecolare: la specie G. duodenal is

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     G. duodenalis presenta alcune varianti

    genetiche definite assemblaggi o genotipi

     Attualmente se ne riconoscono sette (da A a G)

     Alcuni Assemblaggi sembrano presentare una

    evidente specificità per l’ospite altri invecemostrano un più ampio “host range” 

    p de o og a o eco a e la specie G duode a s

    Epidemiologia molecolare: la specie G. duodenal is

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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     ASSEMBLAGGIO OSPITE

     Auomo,  bestiame, cane, gatto,

    castoro, cavie, tardigradi,

    B

    uomo,  tardigradi, cincillà, cane,

    castoro, ratto, gibbone

    C cane

    D cane

    Ebestiame (bovini, capre, maiali,

    pecore, alpaca)F gatto

    G topo muschiato, topo campagnolo

    G. duodenalis: un complesso di specie?

    p g p

    Epidemiologia molecolare: la specie G. duodenal is

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    ASSEMBLAGGIO SUB- ASSEMBLAGGIO

    A

    Gruppo AI – uomo e animali

    Gruppo AII – uomo

    BGruppo BIII – uomoGruppo BIV - uomo/animali

    p g p

    Epidemiologia molecolare: la specie G. duodenal is

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     Per stimare il potenziale zoonotico è necessario valutare la presenza degli Assemblaggi A e B nei diversi ospiti e nell’ambiente 

    p g p

    Gli studi in Italia

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Gli studi in Italia

    Gli studi in Italia

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    Gli studi in Italia

    352 isolati tipizzati

    Ass A n=177 (50.3%)Ass B n=49 (13.9%)Ass C n=29 (8.2%)

    Ass D n=43 (12.2%)Ass E n=17 (4.8%)Ass F n=1 (0.5%)

     Ass. A (zoonotico) piùdiffuso con alte prevalenze

    nell’uomo, negli animali e

    nell’acqua 

    Reflui e Molluschi bivalvi marini in Italia

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

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    Parasitol Int. 2009 Mar;58(1):12-7. Epub 2008 Aug 7.

    Giardia and Cryptosporidium in inflowing water and harvested

    shellfish in a lagoon in Southern Italy.

    Giangaspero A, Cirillo R, Lacasella V, Lonigro A, Marangi M, Cavallo

    P, Berrilli F, Di Cave D, Brandonisio O.

    Wastewaters carrying Giardia and Cryptosporidium (oo)cysts aredischarged into the Lagoon; however, the shellfish harvested in the

    same environment were found to be unaffected, thus suggesting that

    physical, ecological and climatic conditions may prevent contamination

    of harvested shellfish.

    Parasitol Res. 2007 Oct;101(5):1169-82. Epub 2007 Jun 26.

    Giardia and Cryptosporidium and public health: the epidemiological scenario from the

    Italian perspective.

    Giangaspero A, Berrilli F, Brandonisio O.

    Source

    Dipartimento di Scienze delle Produzioni, dell'Ingegneria e della Meccanica e dell'Economia

     Applicate ai Sistemi Agro-Zootecnici, University of Foggia, 71100, Foggia, Italy.

    Abstract

    This review gives ample information concerning the epidemiology of these parasites in Italy,i.e. prevalence data in humans, farm and pet animals, shellfish and aquatic environment.

    Moreover, it reports genotyping results obtained from different isolates, with particular

    emphasis on the spread of host-specific and zoonotic species/genotypes of various origin,

    and on molecular data that make the Italian situation different from that of other countries.

    Finally, possible explanations are given for the infrequent reports of Giardia andCryptosporidium spp. outbreaks, despite widespread faecal contamination by these

    parasites.

    http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Berrilli%20F%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Giangaspero%20A%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Cirillo%20R%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Lacasella%20V%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Lonigro%20A%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Marangi%20M%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Cavallo%20P%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Cavallo%20P%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Berrilli%20F%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Di%20Cave%20D%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Brandonisio%20O%22[Author]http://images.google.it/imgres?imgurl=http://mariodomina.files.wordpress.com/2007/04/acqua-5.jpg&imgrefurl=http://mariodomina.wordpress.com/2007/04/27/acqua-principio-di-tuttecose/&usg=__ek3fNdAn3d-v-b0FxhvCTPTKles=&h=370&w=500&sz=57&hl=it&start=23&tbnid=3eo7Nv8cW7pDeM:&tbnh=96&tbnw=130&prev=/images?q=acqua&start=20&gbv=2&ndsp=20&hl=it&sa=Nhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Giangaspero%20A%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Berrilli%20F%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Brandonisio%20O%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Brandonisio%20O%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Brandonisio%20O%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Brandonisio%20O%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Berrilli%20F%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Berrilli%20F%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Berrilli%20F%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Giangaspero%20A%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Giangaspero%20A%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Giangaspero%20A%22[Author]http://images.google.it/imgres?imgurl=http://mariodomina.files.wordpress.com/2007/04/acqua-5.jpg&imgrefurl=http://mariodomina.wordpress.com/2007/04/27/acqua-principio-di-tuttecose/&usg=__ek3fNdAn3d-v-b0FxhvCTPTKles=&h=370&w=500&sz=57&hl=it&start=23&tbnid=3eo7Nv8cW7pDeM:&tbnh=96&tbnw=130&prev=/images?q=acqua&start=20&gbv=2&ndsp=20&hl=it&sa=Nhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://mariodomina.files.wordpress.com/2007/04/acqua-5.jpg&imgrefurl=http://mariodomina.wordpress.com/2007/04/27/acqua-principio-di-tuttecose/&usg=__ek3fNdAn3d-v-b0FxhvCTPTKles=&h=370&w=500&sz=57&hl=it&start=23&tbnid=3eo7Nv8cW7pDeM:&tbnh=96&tbnw=130&prev=/images?q=acqua&start=20&gbv=2&ndsp=20&hl=it&sa=Nhttp://images.google.it/imgres?imgurl=http://mariodomina.files.wordpress.com/2007/04/acqua-5.jpg&imgrefurl=http://mariodomina.wordpress.com/2007/04/27/acqua-principio-di-tuttecose/&usg=__ek3fNdAn3d-v-b0FxhvCTPTKles=&h=370&w=500&sz=57&hl=it&start=23&tbnid=3eo7Nv8cW7pDeM:&tbnh=96&tbnw=130&prev=/images?q=acqua&start=20&gbv=2&ndsp=20&hl=it&sa=Nhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Brandonisio%20O%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Brandonisio%20O%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Brandonisio%20O%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Di%20Cave%20D%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Di%20Cave%20D%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Di%20Cave%20D%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Di%20Cave%20D%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Di%20Cave%20D%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Berrilli%20F%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Berrilli%20F%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Berrilli%20F%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Cavallo%20P%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Cavallo%20P%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Cavallo%20P%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Marangi%20M%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Marangi%20M%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Marangi%20M%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Lonigro%20A%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Lonigro%20A%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Lonigro%20A%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Lacasella%20V%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Lacasella%20V%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Lacasella%20V%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Cirillo%20R%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Cirillo%20R%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Cirillo%20R%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Giangaspero%20A%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Giangaspero%20A%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Giangaspero%20A%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Berrilli%20F%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Berrilli%20F%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Berrilli%20F%22[Author]http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=%22Berrilli%20F%22[Author]

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

    127/134

    Ruolo degli animali nella

    trasmissione di Giardia all’uomo? 

    Epidemiologia molecolare: gli animali 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

    128/134

    Negli animali, assemblaggi

    zoonotici e non-zoonotici sono

    associati all’infezione.

    In Italia, nei cani  gli assemblaggispecifici (C/D non zoonotici)

    sembrano prevalenti rispetto a

    quelli zoonotici (A).

    La trasmissione di Giardia  tra

    uomo e cane sembra essere, inItalia, poco probabile seppure

    possibile

    p g g

    Epidemiologia molecolare: gli animali 

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

    129/134

     Altre specie, quali il gatto, i

    vitelli evidenziano

    maggiore prevalenza dell’

     Assemblaggio zoonotico A. 

    Questi ospiti possono

    essere fonte di infezione

    per l’uomo.

    In Italia, trasmissione zoonotica o antroponotica??

    http://eleonoraformisani.files.wordpress.com/2008/08/mucca.gifhttp://www.naturamediterraneo.com/Public/data6/steve72/gatto_MG_2586_.jpg_20071015211141_gatto_MG_2586_.jpghttp://eleonoraformisani.files.wordpress.com/2008/08/mucca.gifhttp://eleonoraformisani.files.wordpress.com/2008/08/mucca.gifhttp://www.tantasalute.it/img/gatto2.jpghttp://www.tantasalute.it/img/gatto2.jpg

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

    130/134

    I dati disponibili per l’ Italia indicano una contaminazione fecale

    diffusa da Giardia e Cryptosporidium rinvenute in animali domestici

    e selvatici, nei molluschi, nelle acque e nell’uomo.

    In Italia, trasmissione zoonotica o antroponotica??

    Molte specie presentano specie/genotipi zoonotici(Assemblaggio A G. duodenalis e C. parvum) piuttosto che

    specie-specifici.

    In Italia il ruolo degli animali può essere significativo per la

    trasmissione dell’infezione umana a causa della elevata

    circolazione dell’ Assemblaggio A di Giardia  e di C. parvum . 

    In Italia, trasmissione zoonotica o antroponotica??

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

    131/134

    I dati disponibili supportano l’ipotesi che la trasmissione

    di Giardia e Cryptosporidium nel nostro paese avvenga

    con un ciclo animale-uomo e viceversa.

    L’assenza di epidemie idrodiffuse di criptosporidiosi e

    giardiosi suggerisce che la trasmissione attraverso le

    acque potabili e/o ricreazionali è poco probabile.

    In Italia, trasmissione zoonotica o antroponotica??

    CONCLUSIONI

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

    132/134

    CONCLUSIONI 

    L’applicazione delle tecniche

    molecolari per lo studio della

    struttura e della variabilità genetica

    dei parassiti è dunque un obiettivo

    irrinunciabile 

    CONCLUSIONI

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

    133/134

    L’esatta identificazione degli strains

    rappresenta un requisito fondamentale

    per una migliore comprensione

    dell'epidemiologia delle parassitosi perpianificare effettivi programmi di

    controllo

    CONCLUSIONI 

    Università di Pisa

    Facoltà di Medicina Veterinaria

  • 8/17/2019 Zoonosi Protozoarie a Trasmissione Idrica Def

    134/134

    I METODI MOLECOL RI COME STRUMENTO

    PER L’EPIDEMIOLOGI E L PREVENZIONE

    DELLE ZOONOSI TR SMISSIONE IDRIC

    Federica Berrilli

    Dipartimento di Sanità Pubblica e Biologia Cellulare,

    Università di Roma Tor Vergata 

    Facoltà di Medicina Veterinaria

    Prof.ssa Stefania PerrucciUNIVERSITÀ DI PISA

    GRAZIE