生命科学学院微生物学系

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教材：

《微生物学实验》沈萍等（高教出版社）

参考教材：

《农业微生物学实验技术》李阜棣 中国农业出版社 《微生物学教程》（第二版） 周德庆 《 Microbiology 》 (5th ed) Black J G. 2002 《微生物生物学》杨苏声 周俊初 科学出版社 2004 《现代微生物学》刘志恒 科学出版社 2002

微生物学实验课的目的在于加强课堂讲授的基本理论与基本知识的理解，掌握研究微生物最基本的操作技能和实验手段，培养分析问题和从事实践应用的能力。为上好实验课，必须做到：

1. 安全第一！注意水、电、门、窗安全；如有意外，及时报告2. 严守纪律！严禁迟到、喧哗，吸烟、接打电话，做与实验无

关的事情，不要随意走动。3. 认真完成实验。实验前预习，明确实验目的、原理、方法；

实验操作要细心谨慎，认真进行观察和记录，培养严谨求实的科学态度；认证完成实验报告。课上认真听讲，课后积极讨论

4. 爱惜仪器，保持秩序。每次实验之后必须清理好实验台，待实验老师检查之后才能离开。

1 、平时成绩占 70% ，期末卷面成绩占 30% 。

2 、每次实验课预习报告占 30 分，实验操作占 50 分，结果与讨论（实验报告）占 20 分；∑实验得分 /X ，为平时成绩。

3 、出现安全责任事故，实验课成绩记为不及格；无故缺课一次，本次实验为零分；迟到或早退一次，扣 20 分；逃避值日或实验后未整理实验台，扣 20 分；喧哗、接听手机、随意走动，扣 10 分。

实验考核办法：

实验内容

实验一、显微镜的使用与单染色法实验二、革兰氏染色与荚膜染色实验三、放线菌形态观察与芽孢染色实验四、霉菌形态观察与各大类微生物菌落特征实验五、酵母菌形态观察、显微计数与显微测量技术实验六、培养基的制备实验七、菌种分离纯化技术与平板菌落计数实验八、水质微生物学检测实验九、消毒与灭菌技术

实验一、显微镜的使用与单染色法

一、实验目的1 、熟练掌握显微镜的结构及使用方法2 、熟练掌握细菌涂片的制作及单染色法

二、实验材料1 、电光源双目显微镜2 、培养 24 小时的四联球菌斜面

三、试验内容

（一）显微镜的使用1 、普通光学显微镜的构造（ 1 ）机械装置： 镜座、镜臂、镜台、镜筒、物镜转换器、调焦装置等（ 2 ）光学系统： 目镜、物镜、光源等2 、显微镜的工作原理 ① N ·A = nsin （ α/2 ）

②

)2/(2nsinA2ND

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D

22nsinA2N

D

3 、油镜的使用及维护（ 1 ）反向调节（ 2 ）镜头维护： ① 4~6 层镜头纸，单向擦拭； ② 4~6 层镜头纸，沾取二甲苯，单向擦拭； ③ 4~6 层洁净镜头纸，单向擦拭；4 、其它类型的显微镜： ① 暗视野显微镜 ② 相差显微镜 ③ 荧光显微镜 ④ 电子显微镜；

（二）单染色法

1 、定义：仅使用一种染色剂使微生物着色的染色方法，只能识别微生物细胞的形状和大小。

2 、操作步骤： (1)涂片：取少量无菌水滴在干净载片上，用接种环无菌操作无菌操作取少量菌种（四联球菌）轻轻混入水中，将其铺成薄层。

(2) 固定：自然干燥后，进行热固定：把涂有细菌的一面向上，小心通过酒精等火焰烘烤 3~4 次。

固定的目的： ①杀死细胞，固定细胞结构； ② 使菌体牢固附着在玻片上，防止标本被水冲洗掉； ③改变染色剂对细胞的通透性，增强染色效果。

(3)染色：滴加石炭酸复红，覆盖整个涂片标本区，放置 20~30秒，使细胞着色。

(4)水洗：染色时间到，用细小的水流慢慢冲洗去载片上多 余的染色液；注意：避免水流直接冲在标本区。

(5) 干燥：将洗过的涂片标本晾干，或用吸水纸吸去多余水分，然后晾干或微热烘干。

(6)镜检：将干燥后的标本置于显微镜下观察。细菌、放线菌用油镜镜检。注意：务必完全干燥后再进行油镜镜检。

四、实验报告

1 、油镜的工作原理？2 、细菌涂片染色前固定的目的？3 、绘图表示所观察到的菌体形态。 要求：绘制圆形视野图，每张试验报告

纸上不多于 2份视野图；标注菌体名称，放大倍数，染色剂等信息。