利用聚合酶鏈反應進行 fmr1基因剔除斑馬魚之基因型篩選

Genotyping of fmr1 knock out zebrafish by PCR

作者：張佑邦、王秋涵、張茜茜指導教授：師大生命科學系 呂國棟教授指導老師：吳曜如老師、朱哲民老師

動機

研究「 X 染色體脆折症」

FXS

使用魚種─斑馬魚1) 本魚分布於熱帶溪流的中上游2) 卵直接產出並沈於水中3) 屬雜食性，以昆蟲、小型甲殼類等為主食4) 性情溫和，喜群游，通常數尾成一群5) 具垂直紋路，與真實的斑馬不同

原 理

核

膜

FXS 疾病成因、症狀

• 成因 : CGG 過度重複• 症狀 : 腦部和生理構造異常

外顯子

內含子

離心機 乾浴槽

PCR 機器

滅菌過之二次水 微量離心管 微量滴管

注意事項• 注意放置的時間……

• 注意抽取的速度……

• 滅菌且隨時替換……

實驗步驟 1• 切尾鰭取組織

電子秤 MS-222

手術刀尖鑷

化妝棉

異丙醇

蛋白酶萃取液

蛋白沉澱液

實驗步驟 2

實驗步驟 2• 抽 DNA

實驗步驟 3• 定量 DNA

實驗步驟 4• 檢測 DNA 純度與濃度

實驗步驟 5

• 進行 PCR ，基因放大

Taq polymerase( 聚合酶 )

10 nM dNTP( 去氧核糖核苷

酸 )Primer( 引子 )

Taq buffer( 緩衝溶液 )

primer原本為粉末狀溶於水使用

二次水

實驗步驟 6• 第一階段電泳 - 測驗• DNA 限制酶切割• 第二階段電泳• 結果

結果

野生型Wild type

異型合子Hetero zygote

★★★★心得★★★★

謝謝大家