01004 acid amin.doc

8/18/2019 01004 acid amin.doc

1/37

TN phaân tích Phaân tích acid amin baèng söïchuyeån hoùa PITC

Phaàn 2

P!"#N T$C!"CI% "&IN '"(N) *+,

C!-./0N !1" PITC

I3 &-,C 4$C! T!$ N)!I/5&

6aùc 78nh tha9nh phaàn :a9 ha9m ;öt caù baèng phö

8/18/2019 01004 acid amin.doc

2/37


II3 C *J . T!-./KT C-J" P!+N) P!"P L3 Khaùi nieäm veà phöông phaùp HPLC:Phöc ;oaïi sa?c @yù co>t coù

pha 7o>ng ;a9 chaFt ;oAng3 4aây ;a9 @y thua>t phaân tích sa?c @í du9ng7eå taùch caùc ion hoaOc caùc phaân töA ho9a tan t=ong dung d8ch3Co>t !PC coù theå ;a9 co>t sa?c @yù phaân boFG sa?c @yù haFp phuïG

t=ao 7oåi ion hay ;oïc ge;3 *öï phaân taùch caùc caFu töA 7aït 7ö

8/18/2019 01004 acid amin.doc

3/37


7o>ng yeFu h

8/18/2019 01004 acid amin.doc

4/37


"cid nuc;eic

"cid höu c<

);ucid

*teo=it

ThuoFc @haùng sinhG döc toF B aatoRin D ThuoFc t=ö9 saâu Bca=bamateD ThuoFc die>t coA Phuï gia coâng nghie>p :a9 thöïc phaåm

ChaFt @ích thích

III3 !/5 T!1KN) *"C W. 1JN) C"1 "P

!/5 T!1KN) !PC *+J %-,N) L P!" 415N)L3 'nh chöùa pha 7o>ng3 f3 Wim b pha>n naïp maVu3H3 't sa?c @í3X3 1Kng daVn pha 7o>ng3 LL3 o9 oån nhie>t3\3 ;o sp;itte=3 L23 4aàu do933 4oàng hoà aùp suaFt3 LH3 &aùy ghi @eFt EuaA33 P=eco;umn3 LX3 'o> pha>n thu saAn

phaåm3

T=ang 2

8/18/2019 01004 acid amin.doc

5/37


o9 7ieàu nhie>t

!/5 T!1KN) !PC *+J %-,N) 2 P!" 415N)L3 Nguyeân taéc hoaït #oäng cua heä tho(ng HPLC )ö 'uïng

* pha #oäng: !ai pha 7o>ng " :a9 ' 7ön dung moâi3 'ttheo chöt phaân tích tPicoTag @ích thöt ;a9 si;icage; coù ga?ndaây CLf3 Coù theå tieFn ha9nh phaân tích t 7o> thö X] M \]oC3 &uoFn giö nhie>t 7o> nhö :a>y phaAi söA duïng;o9 7ieàu nhie>t3

Pha 7o>ng 7i ngang Eua se cuoFn maVu caàn phaân tích 7i theo3Whi :a9o t=ong co>t sa?c @íG chaFt na9o coù aùi ;öïc maïnh :ngse theo pha 7o>ng 7i =a t=ö pha>n 7ieàu

'nhchöùa

'nhchöùa

'o>pha>noop chích&aVu

Co>t sa?c @yùBCo>t Pico Tag HG R L\]

4aàu do9 -ZG bö

8/18/2019 01004 acid amin.doc

6/37

8/18/2019 01004 acid amin.doc

7/37


phaAi 7ön h pha>n ;aFy maVu töï 7o>ng caFu taïo tö9 mo>t :o9ng Roay hoaOcmo>t giaù 7 pha>n chính cuAa he> thoFng thieFt b8 !PCG 7où

chính ;a9 n

8/18/2019 01004 acid amin.doc

8/37


4oFi :t ;oaïi sinh :a>t na9o cung coù chöùa p=otein3 Thöïcphaåm coù nguoàn goFc tö9 sinh :a>t neân t=ong thöïc phaåm cung coùchöa p=otein3 "cid amine t=ong thöïc phaåm ít toàn taïi

8/18/2019 01004 acid amin.doc

9/37


T=eân theF gi

8/18/2019 01004 acid amin.doc

10/37


a) -aá$ maãu:&aVu 7em phaân tích ;uoân phaAi 7oàng nhaFt :a9 mang tính 7aïi die>nneân :ie>c 7oàng nhaFt maVu t=ö

8/18/2019 01004 acid amin.doc

11/37


*au 7où t=o>n 7eàu maVu 7a ;aFy 7eå tieFn ha9nh ;aFy maVu thöA

t=ung bnh3b) hua.n b/ thuoác thöû: Dung &/ch pheno, 01:

Tö9 pheno; daïng tinh theå nga>m nöt chính Raùc3

Dung &/ch H, 2+: Tö9 bnh dung d8ch !C; L2NG pha theo tyA ;e> Z!C; Z!21 ^ LLG cuï theå

;aFy Z!C; ^ Z!21 ^ L]]m;G ta 7ön : !C; L2N coù @haA naUng bay h

8/18/2019 01004 acid amin.doc

12/37


P=otein ^ N toång soF G2\P=otein thoâ chieFm \] maVu3 Za>y ;öt caù ;aFy

phaân tích ;a9

caùbo>tmg L2\\] \]

NitRNitt

7uoåi @hí 12 ;a9 taùc nhaân gaây oRy hoùa acid amin @hi tieFn ha9nhthuAy phaân p=otein t=ong moâi t=ö cao3 Neân suïc@hí :a9o tha9nh bnhG @hoâng 7aâm thaqng :a9o dung d8ch 7eå t=aùnh@hí ;a9m :aUng dung d8ch =a ngoa9i3 Z Euaù t=nh 7uoåi 12 @hoâng 7aAmbaAo hoa9n toa9n neân ta cho theâm pheno; :a9o cung ;a9 taùc nhaânchoFng oRy hoùa3

&) 8huû$ g*aû*:

4oFt noùng ;o9 L]\ M LL2oC t=ong 2] H] phuùt t=ö mong muoFn mn phaAn öùng thuAy giaAi b oån 78nh3 Tht 7o> chöa 7aït th Euaù t=nh thuAyphaân RaAy =a @hoâng hoa9n toa9n3

4aOt maVu :a9o ;o9 :a9 thuAy giaAi

8/18/2019 01004 acid amin.doc

13/37


37 ;u$ tt sa?c @í @hoâng b8 phaù hoAng do co>t

sa?c @í ch_ ch8u 7ö

8/18/2019 01004 acid amin.doc

14/37


hua.n ;a9 dung d8ch goàm L acid amin coù noàng 7o> 78nh t=öaá$ #hoâ:

4em saFy @hoâ maVu baèng bnh huùt aåm chaân @hoâng 7eå ;oaïiboA hoa9n toa9n N!H :a9 caùc dung moâi @haùc t=ong maVu nhaèm ;a9mhaïn cheF toFi thieåu söï coù maOt cuAa caùc chaFt na9y gaây nhieVupea@ sa?c @í3

?eâu ca(u bnh huùt aåm chaân @hoâng phaAi saïch se :a9@hoâng co9n ;aVn aåm t=ong bnh3

&aVu sau @hi 7ö

8/18/2019 01004 acid amin.doc

15/37


&) a%ch t*eán haønh: Chuaån b8 dung d8ch taïo daVn RuaFt goàm /thano;T/"nö LLL3

%ung d8ch daVn RuaFt na9y ;uoân 7ö

8/18/2019 01004 acid amin.doc

16/37


!e> thoFng ;oïc chaân @hoâng aùp suaFt thaFp3 )iaFy ;oïc B]GX\µmD3 Caân phaân tích chính Raùc tn cöïc cuAa maùy 7o p! :a9o bnh dung d8ch B:aVn 7ang7aOt t=eân maùy @huaFy tö9D 7eå 7o p! Bp! ^ L]Gf\ t 7o> t ^2XGHoCD3

&o>t tay giö 7ie>n cöïc t=ong bnh :a9 mo>t tay du9ng oFng huùt7eå ;aFy acid acetic ;oang cho tö9 tö9 :a9o bnh :

8/18/2019 01004 acid amin.doc

17/37


4ong X]m; dung d8ch :ö9a ;oïc 7em pha :t 1N3

'aFm nuùt Ca; 2 ;aàn M ma9n hnh RuaFt hie>n tL3

tL chuaån @y thua>t p! ^ G]]3

Chn p! ^G]]3

aFy 7ie>n cöïc =aG =öAa baèng nön giaù t=8 p! ^XG]] BhoaOc p! ^L]G]]D3

Ch

8/18/2019 01004 acid amin.doc

18/37


YöAa 7ie>n cöïc baèng nön cöïc :a9o maVu 7o3

'a>t nuùt 1N3

4oïc giaù t=8 p! t=eân ma9n hnh :a9 ghi giaù t=8 p! cuAa maVu3

'aFm nuùt 1 Bsau @hi 7a ;aFy 7ie>n cöïc =a @hoAi maVuD3

YöAa 7ie>n cöïc baèng nöt 7o> ;o9 XHoC 4ieàu ch_nh möùc nhie>t 7o> ca9i 7aOt t 7o> cho ;o93

Cho pha 7o>ng "G ' chaïy Eua he> thoFng b thoFng :a>n ha9nh3

Ca9i 7aOt bö in

hay @hoângG @ích thön t=eân sa?c @í 7oàG 7o> nhaïyG :a>n toFcchaïyG[

NhaFn /Rit

→ choïn \ ca9i 7aOt teân caùc ta>p tin 7eå ;öu t=ong oå 7Qacho caùc ;aàn chaïy theo nguyeân ta?c T/#N3C :t soF baFt @3 /67N ;a9 phaàn 7eå phaân bie>t caùc ta>p tin 7a 7öu 7a nha>p t=ön 1v

:a9 aFn tieFp /NT/Y 7eå hie>n Z"-/ =oài nha>p giaù t=8 ;öu;öp thp giaù t=8 '3 *au7où aFn tieFn /NT/Y 7eå ;öu ;aïi giaù t=8 ' :ö9a nha>p3

\3 a>p ;aïi 2 bö

8/18/2019 01004 acid amin.doc

19/37


3 "Kn nha>p L moFc th

8/18/2019 01004 acid amin.doc

20/37


;aän to(c 'ong 'ung '8ch 9 theo thôi gian

7G aø* ñaJt ma%$ v* tính EMNG7):

NhaFn fG :a9o L 7eå nha>p giaù t=8 nga9yG thaùngG[ sau 7où/Rit3

Za9o \ 7eå 7aOt teân cho ;aàn 7o maVu3 Zí duï 2//3CXX70 Bôm chua.n vaø maãu vaøo ma%$:

%u9ng @im chích 7eå bm phaAi ;aFy maVu ;ng 7i theo 7ön cu9ng :

8/18/2019 01004 acid amin.doc

21/37


LH3 &ethionineL\3 Iso;eucineL3 eucineL3 Pheny;a;anineLf3 ysine

L3 /0nh noàng #oä aci' amin t2ong 'ung '8ch chua$n #em #i#o:

aFy ;aàn ;ö CD x dung d8ch saFy @hoâ → sau 7où 7em 7itaïo daVn RuaFt :n tích pea@ chuaån *chuaån → ta döïng 7ö

8/18/2019 01004 acid amin.doc

22/37

TN phaân tích Phaân tích acid amin baèng söï chuyeån hoùa PITC

ZII3 W/KT j-"J T$N! T1"N

g?mol

C>mmol?

mlCaa chua$n #em #i

#o

<chua$n

<ma,u

Caa ma,u #em #i#o> g?ml

Caa ma,u@an #aàu>

g?3g

L "spa=tic"cid LHH3L 23\

] ]

LX\fX 23X2/] 3X\X

ChuaånHBg`

m;D

3f/

]

fH

]Chuaån\Bg`m;D

L3/]

LLH\L]

ChuaånL]Bg`m;D

H3HH/]

L]\

2 );utamic"cid

LX3L 23\

] ]

H2L]f

H3]/] L2L322f

ChuaånHBg`m;D

L3L]/]

L2]]H

Chuaån\Bg`m;D

L3fX/]

Lf]X]

ChuaånL]Bg`m;D

H3f/]

H\]2

H *e=ine L]\3L 23\

] ]

LH\X2 f3]\/] 23X]

ChuaånHBg`m;D

3ff/]

LXX]

Chuaån\Bg`m;D

L3HL/]

2HLfHL

ChuaånL]Bg`m;D

23H/]

XHL]

X );ycine \3] 23\ ] ] 2f2X

f3/]f 23fXfChuaånHBg`m;D

\3H/]

LHX]

T=ang XX

8/18/2019 01004 acid amin.doc

23/37


Chuaån\Bg`m;D

3Hf/]

H]\XH

ChuaånL]Bg`m;D

L3ff/]

\2

"=ginine LX32 23\

] ]

LLLH 3X\/] H]3H

ChuaånHBg`m;D

L3HL/]

LH]\X

Chuaån\Bg`

m;D

23Lf/

]

22f

f2ChuaånL]Bg`m;D

X3H/]

\]Lf

Th=eonine LL3L 23\

] ]

L]\]\

3L\/] 2]3L]

ChuaånHBg`m;D

f3H/]

L\f]\

Chuaån\Bg`m;D

L3X/]

2\Xf2

ChuaånL]Bg`m;D

23f/]

\]]\]

f ";anine f3] 23\

] ]

L\H

3X2/] H]3ffX

ChuaånHBg`m;D

3f/]

LH]

Chuaån\Bg`

m;D

L3LL/

]

22L

XXChuaånL]Bg`m;D

232H/]

X\X\

P=o;ine LL\3L 23\ ] ] 2HfX]

f3XX/] 23]ChuaånHBg`m;D

f3H/]

2f]2

Chuaån\Bg`m;D

L3XX/]

X\LXX

T=ang X\

8/18/2019 01004 acid amin.doc

24/37


ChuaånL]Bg`m;D

23ff/]

HffL

LL Ty=osine LfL32 23\

] ]

\]H H3]/]f L32L2

ChuaånHBg`m;D

L3H/]

2HX\H

Chuaån\Bg`m;D

232/]

HHHL

ChuaånL]Bg

`m;D

X3\H/

]

L2L

X

L2 Za;ine LL32 23\

] ]

L2\f2

3/] 2\3\\H

ChuaånHBg`m;D

f3/]

L\]2H

Chuaån\Bg`m;D

L3X/]

22ff\

ChuaånL]Bg`m;D

23H/]

XHL

LH &ethionine LX32 23\

] ]

\]X2 H3LH/] L]32\X

ChuaånHBg`m;D

L3L2/]

LH]

Chuaån\Bg`m;D

L3f/]

2f]LX

ChuaånL]Bg

`m;D

H3H/

]

L\\

H

L\ Iso;eucine LHL32 23\

] ]

fLHf 3X/] 2L322]

ChuaånHBg`m;D

3fX/]

LHL

Chuaån\Bg`m;D

L3X/]

22L2f

ChuaånL]Bg`m;D

H32f/]

XX]]H\

T=ang X

8/18/2019 01004 acid amin.doc

25/37


L eucine LHL32 23\

] ]

2\\]L

L3fX/] ]3LfX

ChuaånHBg`m;D

3fX/]

LHf]

Chuaån\Bg`m;D

L3X/]

2HX

ChuaånL]Bg`m;D

H32f/]

X\]fL

L

Pheny;a;anine

L\32 23\

] ]

L\H\\ 3f\/] H232L

ChuaånHBg`m;D

L32X/]

2LLfX

Chuaån\Bg`m;D

23]/]

HHL2L\

ChuaånL]Bg`m;D

X3LH/]

HH]H

Lf ysine LX32 23\ ] ] 2]fL\

H3fL/] 2\3L2ChuaånHBg`

m;DL3L]/

]2XL

LChuaån\Bg`m;D

L3fH/]

X]]\X

ChuaånL]Bg`m;D

H3/]

ff

Toång ;öt caù \L\3L

T=ang X

8/18/2019 01004 acid amin.doc

26/37


T=ang Xf

8/18/2019 01004 acid amin.doc

27/37


T=ang X

8/18/2019 01004 acid amin.doc

28/37


T=ang \]

8/18/2019 01004 acid amin.doc

29/37


T=ang \L

8/18/2019 01004 acid amin.doc

30/37


T=ang \2

8/18/2019 01004 acid amin.doc

31/37


ZIII3 '"lN -"5N;a(n #eà -: =oät )o( va(n #eà caàn löu yù 3hi tie(n hanh phaânt0ch aci' amin

Taïp chaFt ;uoân ;uoân ;a9 mo>t :aFn 7eà Euan taâm ha9ng 7aàu

t=ong phaân tích acid amin3 Caùc chaFt hoùa hoïc coù 7o> tinh thieFt cao;a9 mo>t yeâu caàu Euan t=oïng B:í duïG acid !C; coù 7o> tinh @hieFt thaFpcoù theå ;a9m nhieVm g;ycineD3

%ung moâi söA duïng t=ong phaân tích !PC phaAi tha>t tinh @hieFt3Caùc taïp chaFt cung nhö :i sinh :a>t nhieVm :a9o t=ong dung moâi coùtheå ;a9m saïch baèng caùch ;oïc dung moâi t=öy@ín caùc bnh chöùa dung moâi :a9 @hoâng 7aOt caùc duïng cuï :a9 thieFtb8 du9ng t=ong phaân tích acid amin t=öïc tieFp döm cung se EuyeFt 78nh 7eFn chaFt ;öc phaân tích acid amin

4aOt caùc duïng cuï thí nghie>m taïi np @ínG @hoâng neâncaàm 7aàu pipet baèng tay3 Neân 7eo bao tay @hi ;a9m thí nghie>m3

!aïn cheF thngC baèng acid phospho=ic3

Neân söA duïng caùc acid t=eân

8/18/2019 01004 acid amin.doc

32/37


Whi ;oïc pha 7o>ng baèng giaFy ;oïcG ta phaAi söA duïng he> thoFngtaïo chaân @hoâng aùp suaFt thaFp 7eå Euaù t=nh ;oïc tieFn ha9nh nhanh:a9 thua>n ;

8/18/2019 01004 acid amin.doc

33/37


7ieàu @hieån chính Raùc3 Noù thích hc thuAy phaân caùcpeptid h

8/18/2019 01004 acid amin.doc

34/37


T=ang \

8/18/2019 01004 acid amin.doc

35/37


T=ang \

8/18/2019 01004 acid amin.doc

36/37


;a(n #eà : Caùc @ie$u hieän Ja(u 3hi chaïy )aéc 3yù va caùch3haéc phuïc

89nh peak &: tu;, kho%n nho$n ;öt EuaùnhieàuG caàn giaAm noàng 7o> baèng caùch pha ;oang3

89nh peak &: cheû coù nhieàu taïp chaFt3 Taïp chaFt coù theå doco>t b8 baånG phaAi =öAa ;aïi co>t baèng caùc he> dung moâi coù 7o>phaân cöïc taUng daàn3 Nhöng @hi phaân tích caùc maVu töï nhieân ththöng ;a9 dung moâi höu c< :a9 giaFyD 7eå taùch chuùng3

T=ong sa?c @yù phaân boF chuyeån 7o>ng cuAa caùc chaFt t=ong hoVnh

8/18/2019 01004 acid amin.doc

37/37


Nhöu suaFt phaân tích @hoâng cao3

'/nh ,öôïng aa baOng phöông pha%p !a"c #$% baûn moûngNguyeân ;yù töt thích h

01004 acid amin.doc

Documents