1 besİyerlerİ ve boyalar

21.09.2010 BESİYERLERİ ve BOYALAR 1

KAYNAKLAR

• Temel ve Klinik Mikrobiyoloji

Editör: Prof. Dr. Şemsettin USTAÇELEBİ

• Temel Mikrobiyoloji ve Bağışıklık Bilimi

Editör(ler): Prof. Dr. Hakkı BİLGEHAN

• Klinik Mikrobiyolojik Tanı

Editör(ler): Prof. Dr. Hakkı BİLGEHAN

http://www.guneskitabevi.com/TR/Urun/Urun_resimli.aspx?F6E10F8892433CFFAAF6AA849816B2EFB7911711D9AD3F3A

http://www.guneskitabevi.com/TR/Urun/Urun_resimli.aspx?F6E10F8892433CFFA79D6F5E6C1B43FFEA0D16E0C69E673D

http://www.guneskitabevi.com/TR/Urun/Urun_resimli.aspx?F6E10F8892433CFFA79D6F5E6C1B43FFDA0F7D5833632EE9


• Temel ve Klinik İmmunolojiProf. Dr. Yıldız CAMCIOĞLUProf. Dr. Günnur DENİZ • Genel VirolojiProf. Dr. Şemsettin USTAÇELEBİProf. Dr. Dürdal Us• Tıbbi ParazitolojiYazar : Prof.Dr. Kürşat Altıntaş

BESİYERLERİ ve

BOYALARDoç Dr Esra KOÇOĞLU

AİBÜ Tıp Fakültesi

Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji AD


• Mikrobiyolojik tanıda morfolojik incelemeler önemlidir– Lepra “aside rezistan bakteriler”– Primer sifiliz “karanlık saha mikroskobu”

(spiralli ve hareketli bakteriler)– KUDUZ MSS dokusunda “negri cisimcikleri”


• Morfolojik incelemeye ek olarak – mikroorganizmaların üremesi, – metabolizması, – antijenik ve virülans özellikleri önem taşır


Boyasız preparatlar

• Bakteri hareketlerinin görülmesi

• Karanlık alan incelemeleri

• Materyaldeki hücrelerin incelenmesi

• Parazit yumurtalarının incelenmesi


Boyalı Preparat HazırlanmasıPreparat hazırlama

• Lam temiz olmalı• Sıvı örnekler direkt olarak lama aktarılır

• Yarı katı- katı örnekler homojenizasyonun sağlanabilmesi için serum fizyolojikle sulandırılır 1-2 cm çapında bir alana yayılır

• Hazırlanan tüm preparatlar havada kurutulur

(Ya da çok acilse etüvde tutularak kurutulur)


Tesbit yöntemleri:• Tesbit işlemi hazırlanan preparatın lama tam olarak

yapışması için yapılır• Böylece boyama işlemi sırasında yerlerinden

oynamazlar

1. Havada kurutularak tesbit (2-3 hatta 18 saat)

2. Alevde tesbit

3. Kimyasal maddelerle tesbit


• Kimyasal maddelerle tesbit:– Metil alkol ile tesbit: (saf alkolde 3 dk tutulur)– Etil alkol ile tesbit: (saf alkolde 8-10 dk tutulur)– Aseton ile tesbit. Özellikle floresan

mikroskopisi için hazırlanan preparatlar asetonda 5 dk bekletilir)


Bazik ve Asit boyalar

• Boyanma olayı, boya içindeki kimyasal maddelerin m.o. ve hücrelerin yapılarındaki madde ve parçacıklarla verdiği kimyasal ve fiziksel tepkimelere bağlı bir olaydır

• Bazik boyalar: boyayıcı kısımları katyonda bulunan tuz şeklindeki boyalar (daha çok nükleik asitlerle sıkı bileşikler yaparak boyarlar, çekirdek boyaları)

• Asit boyalar: boyayıcı kısımları anyonda bulunan tuz şeklindeki boyalar


BOYALARMikrobiyolojide kullanılan boyama yöntemleri 2 gruptur:1. Basit boyamalar: Bu tarz boyamada, preparatlardaki

mikroorganizmalar hakkında kısa süre içinde bilgi edinmek için tek boya solusyonu kullanılır. Boya, preparata bir defa uygulanır ve bakteriler boyaların karakterine göre boyanırlar. Bu amaçla karbol fuksin, kristal viyole ve metilen mavisi gibi genellikle bazik boya solusyonlarından birisi seçilir.

2. Bileşik boyamalar: Birden fazla boyanın iştiraki ile yapılan boyama yöntemleridir. Bunlar arasında:

a) Diferensiyel boyamalar: Mikroorganizmaları birbirinden ayırmada kullanılır (Gram, Ziehl-Neelsen).

b) Structural boyamalar: Bakterilerin iç ve dış yapıları hakkında bilgi edinmek için kullanılan bileşik boyama yöntemleridir (spor, kapsül, flagella, çekirdek, lipid, v.s.).

Basit Boyamalar


Metilen mavisi ile boyama

• Preparat tesbit edilir

• Üstüne boya dökülür

• 30-60 sn bekletilir, musluk suyu ile yıkanır

• Kurutulur, immersiyon objektifi ile incelenir

• Görünüm: Preparatta bulunan herşey mavi renge boyanmıştır

• Corynebacteriumlardaki metakromatik cisimcikler daha koyu mavi olarak boyanır


Sulu Fuksin ile Boyama

• Preparat tesbit edilir

• Üstüne boya dökülür

• 20-30 sn bekletilir, musluk suyu ile yıkanır

• Kurutulur, immersiyon objektifi ile incelenir

• Görünüm: Preparatta bulunan herşey pembe-kırmızı renge boyanmıştır


Negatif preparat

• Bu yöntemde boyanması zor olan m.o ların görülebilmesi için lam boyanır ve mikroskopta boyasız mo ların izdüşümleri izlenir

– Çini mürekkebi (koruyucu olarak %0.03 trikrezol)– Nigrosin eriyiği (koruyucu olarak %40 formalin)Prosedür: 1. İncelenecek materyal lam üzerine konur2. Hemen yanına boya damlatılır3. Lamel yardımıyla ince bir tabaka olacak şekilde

yayılır4. Zeminde renksiz boşluklar izlenir


Negatif boyamaNegatif boyama


İyot boyama• Barsak protozoonları ve helmint yumurtaları

iyot boyama ile incelenir• İyot, nükleusları ve intrasitoplazmik organelleri

boyar• Hareketleri durdurur

Prosedür:1. Lam üzerine bir damla iyot eriyiği bırakılır

2. Az miktarda dışkı bu damla içinde ezdirilerek yayılır

3. Üzerine lamel kapatılır

4. Mikroskopta incelenir

Bileşik Boyamalar


• Peptidoglikan: Gram pozitif mikroorganizmalarda miktarca çok fazla, Gram negatiflerde ise çok azdır

• Gram pozitiflerde hücre duvarında teikoik asit vardır


Gram tekniği, mikrobiyolojide çok kullanılan bir boyama yöntemi olup mikroorganizmaların klasifikasyonunda ve identifikasyonunda da yararlanılır:

• Gram pozitif mikroorganizmalar

• Gram negatif mikroorganizmalar


Gram Boyama Tekniği

a) Preparat hazırlanır, kurutulur ve tespit edilirb) Kristal violet (veya metil violet) solusyonu ile 1 dk

boyanır.c) Boya dökülür ve preparat üzerine lugol solusyonu

konarak 1 dk beklenir. Lugol solusyonu dökülür.d) Alkolde dekolore edilir (alkol renksiz akıncaya dek).e) Su ile yıkanır.f) Safranin (veya eosin, sulu fuksin) ile 15 sn boyanır.g) Su ile yıkanarak boya giderilir.h) Kurutma kağıdında (veya havada) kurutulur. i) İmmersiyon objektifi ile incelenir.*Bu yöntemle mor görülen mikroorganizmalar Gram pozitif

ve pembe görülenler de Gram negatif olarak değerlendirilirler.


Asidorezistans Etkenleri Boyama Tekniği

• Tuberküloz etkenleri boyamak için önceleri kullanılan Ehrlich (1882) metodu sonradan Ziehl-Neelsen tarafından değiştirilmiştir.

• Mikroorganizmaların etrafında balmumu tabakası var. Kolay boyanmaz....– Bu nedenle boya içine fenol konur ve alttan hafifçe

ısıtılarak balmumu tabakası yumuşatılır.

• Böylece boyayı kolayca alan balmumu tabakası, asit-alkolde dekolore olmaz ve boyayı bırakmaz.


Ehrlich-Ziehl - Neelsen (EZN) Mikobakterileri boyama yöntemi

1. Preparat hazırlanır, kurutulur ve tespit edilir

2. Lam üzerine ve bütün lâmı kaplayacak tarzda karbol füchsin

solusyonu konur

3. Preparat alttan 4-5 dakika ve aralıklı olarak hafifçe ısıtılır. Preparatın

yanmamasına ve kabarcıkların çıkmamasına dikkat edilir (preparat

üzerinden hafif buharlar çıkabilir)

4. Boya dökülür, preparat asit-alkolde (alkol + HCI asit) dekolore edilir

(1 dk)

5. Su ile yıkanır

6. Preparat üzerine metilen mavisi solusyonu konur ve 10-15 saniye

boyanır

7. Boya dökülür ve su ile yıkanır

8. Kurutulur ve immersiyonla muayene edilir


*Mikobakteriler (veya asidorezistens mikroorganizmalar) pembe kırmızı renkte, diğer mikroorganizmalar ise mavi renkte görülürler


SPOR BOYASI

1- Alevde tesbit edilmiş preparat 5 dk karbolfuksin ile hafifçe ısıtılarak boyanır.

2- Su ile yıkanır.3- %0,5 Sülfirikasit ile renk giderilir.4- Su ile yıkanır.5- Zıt boya olarak % 1 lik metilen mavisi ile 3 dk

boyanır.6- Su ile yıkanır. • Sporlar (varsa) KIRMIZI olarak görülür.


Kapsül Boyama

• Çok temiz ve yağsız bir lam üzerine

bir öze dolusu nigrosin veya çin

mürekkebi konur

• Katı kültür besiyerinden alınan koloni

ile suspansiyon yapılır veya sıvı

kültürden bir öze dolusu konarak

boya solusyonu ile karıştırılır

• Üzerine lamel kapatılır.

• Karanlık alan mikroskobunda

mikroplar ve etrafındaki kapsül açık

renkte görülür.


Laktofenol pamuk mavisi ile boyama:

a) Lam üzerine bir damla alkol konur.b) Üzerine iğne ile alınmış mantar elementi konur ve yayılır.c) Alkolün uçması beklenir.d) Bir damla boya solusyonu (laktofenol pamuk mavisi) konur ve öze ile hafifçe yayılır.e) Üzerine lamel kapatılır ve hafifçe bastırılır ve yayılma sağlanır.f) Boyanın etkilemesi için 10 dakika beklenir ve mikroskop altında muayene edilir.


http://images.google.com.tr/imgres?imgurl=http://www.apsnet.org/education/IllustratedGlossary/PhotosI-M/macroconidium.jpg&imgrefurl=http://www.apsnet.org/education/IllustratedGlossary/PhotosI-M/macroconidium.htm&h=306&w=350&sz=32&hl=tr&start=1&tbnid=iMnZIRP4RhUHBM:&tbnh=105&tbnw=120&prev=/images%3Fq%3Dmicroconidium,%2Bmacroconidium%26svnum%3D10%26hl%3Dtr%26lr%3D

BESİYERLERİ


• Canlı üretme ortamları– Döletli yumurta– Doku kültürleri– Deney hayvanları

• Cansız ortamlar– Bakterilerin büyük bir çoğunluğu ve mantarlar

cansız ortamlarda üretilebilmektedirler...


Besiyeri nedir?• Mikroorganizmaların

– Gelişmeleri ve üremeleri için gerekli besin maddelerini içeren,

– Koloni ve biyokimyasal özelliklerinin incelenmesi ve biyolojik ürünlerinin elde edilmesi için

– Onları, organizmanın dışında üretmek amacı ile kullanılan cansız ortamlara ‘besiyeri’ denir.


• Kimyasal yapıları bilinen sentetik besiyerleri• Genel üretim besiyerleri

– Temel besiyerleri (basit besiyerleri)– Zenginleştirilmiş besiyerleri

• Özel besiyerleri– Özgül besiyerleri– Seçici (seçerek üretici) besiyerleri– Ayırtıcı besiyerleri– Ayıraçlı besiyerleri


KULLANIM AMAÇLARINA VE İÇERİKLERİNE

GÖRE BESİYERLERİ:

1.SENTETİK BESİYERLERİ:

Belli miktarlarda saf kimyasal maddeler kullanılarak hazırlanan, yapısı ve içeriği tam olarak bilinen besiyerlerine sentetik besiyerleri denir


2. GENEL ÜRETİM BESİYERLERİ:Rutin laboratuar çalışmalarında

mikroorganizmaları üretmek için, doğal ürünlerden yararlanılarak hazırlanan ‘genel üretim besiyerleri (amprik besiyerleri)’ kullanılır

Besiyerlerine ilave edilen doğal ürünler: Et suyu Et ekstratı Pepton Maya esktratı Kan Serum Süt


Temel besiyerleri:a. Su+pepton +tuz= peptonlu sub. Et suyu +pepton +tuz= buyyonc. Buyyon +agar= adi agar (jeloz)

Zenginleştirilmiş besiyerleri:Temel besiyerlerine kan, haben sıvısı, yumurta gibi besleyici maddeler ilave edilerek hazırlanırlar


3. ÖZEL AMAÇLI BESİYERLERİ:a) Özgül besiyerleri: yalnız bir çeşit ya da sınırlı

sayıda mo üretilmesi için hazırlanırlar. Mycobacterium tuberculosis için kullanılan besiyeri gibi

b) Selektif (seçerek üretici) besiyerleri: Bu tür besiyerleri özellikle birden fazla mikrorganizma içeren dışkı, mide biopsi materyali, balgam, abse eksudası gibi klinik materyallerden materyalde az sayıda olan patojenin izolasyonunda yararlıdır. Bazen besiyerlerine antibiyotikler ilave edilerek, besiyeri o antibiyotiğe dirençli bakteriler için selektif hale getirilebilir.


c) Ayırt edici besiyerleri: İçlerindeki ayıraçlar aracılığıyla benzer mikroorganizmaların farklı görünümde koloniler oluşturmalarını sağlayarak ayırt etmeye yarayan besiyerleridir. Örneğin;--Bakterinin hemolitik olup olmadığını ayırt eden “kanlı agar”--Laktoza etki eden barsak bakterileri etmeyenlerden ayıran EMB agar


d) Ayıraçlı besiyerleri: Mikroorganizmaların metabolizmalarına bağlı biyokimyasal özelliklerini incelemek amacıyla besiyerlerine çeşitli maddeler ve onları parçaladıklarını gösteren ayıraçlar eklenerek hazırlanan besiyerleridir.

Örnek: Şekerli (TSI agar), brom timol mavili (Citrat agar) ya da fenol kırmızılı (Üre agar) besiyerleri


Besiyerlerinin hazırlanmasında kullanılan temel maddeler

• Su: damıtık su kullanılmalıdır• Et ve et yerine kullanılan maddeler: Et suyu

(sığır ve at etinden elde edilir), et özütü, et ekstratı kullanılabilir

• Peptonlar: proteinlerin pepsin, tripsin, papain gibi enzimlerle hidrolize edilmeleri sonucunda, suda kolayca eriyen ve ısıtıldığında koagüle olmayan; polipeptid, dipeptid, aminoasit gibi maddelerin karışımını içeren maddelerdir. Bakteriler azot kaynağı olarak kullanır.


• Kimyasal maddeler ve Tuzlar:• Zenginleştirici maddeler

– Kan– Serum– Haben sıvısı– Safra– Maya özütü


-Besiyerinin hazırlanması sırasındaki aşamalar nelerdir?

*Tartım ve eritme *pH ayarlama *Katkıların ilavesi *Otoklav, benmari vb. *Petri, şişe vb.’ye döküm *Kurutma *Depolama *Besiyeri kalite kontrolleri


Eosin Metilen Blue Agar

İçerik• Jelatin pankreatik pepton 5 g/l, • pepton 5 g/l, • laktoz 5 g/l, • sükroz 5 g/l, • dipotasyum hidrojen fosfat 2 g/l, • eozin Y 0,4 g/l, • metilen mavisi 65 mg/l, • agar agar 13,5 g/l


X ve V FAKTÖRÜ

MANNİTOL SALT AGAR


Löwenstein Jensen besiyeri


Figures ‘A’ and ‘B’ show typical Beta-hemolysis. In ‘A’, the zone of hemolysis lies near bacterial growth whereas in ‘B’, hemolysis extends significantly further into the medium. ‘C’ shows the typical greenish-brown

coloration of alpha-hemolysis.


BESİYERLERİNİN YAPIMI

• Besiyerleri katı, yarı katı, sıvı olabilir. Besiyerini katılaştırmak için deniz yosunundan elde edilen bir polisakkarit olan agar kullanılır.

• Sıvı besiyerlerine eklenen %1.5-2.0 oranındaki agarla katı besiyerleri elde edilir.

• Agar, 100°C’de şeffaf bir eriyik halindeyken 40-42°C’de katılaşır. (Kanlı agar, EMB agar, vb.)


• Sıvı besiyerlerine %0.3- 0.5 oranında agar ilave edilerek yarı-katı besiyerleri hazırlanabilir

• (Craigie besiyeri, bakterilerin hareket muayenesi için kullanılan yarı-katı besiyeri).


• Besiyerlerinin pH’ı sterilizasyondan önce ayarlanmalı, sonra kontrol edilmelidir. Gerekirse NaOH ve HCl ile ayarlanmalıdır.


BAZI BESİYERLERİNİN YAPIMLARI-

KULLANILDIĞI YERLER

BUYYON

Etsuyu + %1 oranında pepton + %0.5 oranında NaCl otoklavlanır.

Besiyerinde çökmüş olabilecek fosfatları gidermek için filtre kâğıdından süzülüp uygun kaplara dağıtıldıktan sonra tekrar otoklavlanır.

Çoğaltım besiyeri olarak kullanılır.


ADİ AGAR

Buyyon içine %1.5-2 oranında agar ilave edilerek hazırlanır.

Besiyeri önce 100 °C civarındaki su banyosunda bekletilerek agarın erimesi beklenir, sonra otoklavda steril edilir.

Steril tüp veya petrilere dağıtılarak dondurulur.


KANLI AGARAdi agar sterilize olduktan sonra 45-50°C’ye kadar

soğutularak içine %5-7 oranında defibrine steril kan konulur.

Steril petrilere dağıtılıp dondurulur. Genel kullanım besiyeri olarak ve daha çok hemoliz ayrımında kullanılır.

Konulan kanın at, insan, koyun vb. değişmesiyle gözlemlenecek özellikler değişir. Örneğin;koyun kanı konulan agarda hemolizleri daha iyi görülebilir.


ÇİKOLATAMSI AGAR

Zengin, Hemofilus’lar dahil birçok bakterinin üretilmesinde kullanılır.

Kanlı agar hazırlanırken agar 70°C’deyken içine %5-7 kan konulursa kanın içindeki eritrositleri parçalanarak kahve rengi hal alır, x ve v faktörleri açığa çıkar.


EMB (Eozin ve Metilen Blue)İçinde eozin ve metilen mavisi boyaları ile gram

olumlu bakterilerin üremesini inhibe eder. Özellikle Enterobacteriacae ve benzer bakterilerin ayırımında kullanılan ayırt edici besiyeridir.

Laktoz ve sükroz üzerine etki eden bakteriler asit oluştururlar. Sonuç olarak Escherichia coli gibi laktozu fermante eden bakteriler madeni parlaklık veren yeşil-siyah renkli koloniler yaparlar.

Salmonella, Shigella ve Proteus gibi bu şekerleri fermante etmeyenler saydam renksiz koloniler oluştururlar.


MUELLER HİNTON BESİYERİ

Bu besiyeri genel kullanım için olup hazırlanan plaklara antibiyogram duyarlılıklarına bakılacak bakterilerin ekimleri yapılır.

http://images.google.com.tr/imgres?imgurl=http://www.troybio.com/images/Product_Images_BBL/MUELLERHINT-PAERU.gif&imgrefurl=http://www.troybio.com/images/Product_Images_BBL/BBL.htm&h=1501&w=1577&sz=541&hl=tr&start=2&tbnid=LZqbVnl0kpVeLM:&tbnh=143&tbnw=150&prev=/images%3Fq%3Dmuller%2Bhinton%26svnum%3D10%26hl%3Dtr%26lr%3D%26sa%3DG

http://images.google.com.tr/imgres?imgurl=http://www.geniebio.ac-aix-marseille.fr/zimages/IMG/vignettes/Antibiogramme_Boite-s.jpg&imgrefurl=http://www.geniebio.ac-aix-marseille.fr/zimages/article.php3%3Fid_article%3D147&h=148&w=150&sz=5&hl=tr&start=4&tbnid=tcb8_Ib5aW2lrM:&tbnh=95&tbnw=96&prev=/images%3Fq%3Dmuller%2Bhinton%26svnum%3D10%26hl%3Dtr%26lr%3D%26sa%3DG


SS (SALMANELLA-SHİGELLA) AGAR

Salmonella ve shigellaların üremesine olanak verdiği halde koliformların çoğu ve diğer birçok bakterilerin üzerindeki inhibitör etkisi ile yüksek derecede “seçici besiyeri”dir.

H2S yapan Salmonella’ların kolonileri

ortalarında siyah benekli renksiz koloniler oluştururlar. Shigellaların bazısı inhibe olabilir, kolonileri renksizdir.


• Salmonella türü bakterilerin SS agardaki görüntüsü

http://images.google.com.tr/imgres?imgurl=http://www.offthearkexoticpets.com/Quickstart/ImageLib/Salmonella_on_SS_agar.jpg&imgrefurl=http://www.offthearkexoticpets.com/answers.html&h=801&w=897&sz=76&hl=tr&start=2&tbnid=ewKajA2P3o0xjM:&tbnh=130&tbnw=146&prev=/images%3Fq%3Dss%2Bagar%26svnum%3D10%26hl%3Dtr%26lr%3D

http://images.google.com.tr/imgres?imgurl=http://service.merck.de/microbiology/tedisdata/prods/4981-1_07667_0500-1.jpg&imgrefurl=http://service.merck.de/microbiology/tedisdata/prods/4981-1_07667_0500.html&h=199&w=300&sz=17&hl=tr&start=1&tbnid=MgiFepGObVZIqM:&tbnh=77&tbnw=116&prev=/images%3Fq%3Dss%2Bagar%26svnum%3D10%26hl%3Dtr%26lr%3D


MANNİTOLLU TUZLU (CHAPMAN)AGAR

Karışık bakteri florası içeren materyalden stafilokokların soyutlanması için kullanılan ayırtıcı ve seçici bir besiyeridir.

İçerisindeki mannitolü fermante eden S.aureus, fenol kırmızısını sarıya çevirir.

http://images.google.com.tr/imgres?imgurl=http://www.cat.cc.md.us/courses/bio141/labmanua/lab15/images/msase.JPG&imgrefurl=http://www.cat.cc.md.us/courses/bio141/labmanua/lab15/msase.html&h=300&w=309&sz=26&hl=tr&start=3&tbnid=luiuAqBQ7K53FM:&tbnh=114&tbnw=117&prev=/images%3Fq%3DMANN%25C4%25B0TOL%2Bagar%26svnum%3D10%26hl%3Dtr%26lr%3D%26sa%3DG

http://images.google.com.tr/imgres?imgurl=http://www.troybio.com/images/Product_Images_BBL/MANNITOLSA-STAPHA.gif&imgrefurl=http://www.troybio.com/images/Product_Images_BBL/BBL.htm&h=1606&w=1603&sz=703&hl=tr&start=5&tbnid=-orXSsDIkv989M:&tbnh=150&tbnw=150&prev=/images%3Fq%3DMANN%25C4%25B0TOL%2Bagar%26svnum%3D10%26hl%3Dtr%26lr%3D%26sa%3DG


CAMPYLOBACTER KANLI AGAR(CAMPY-BAP)

Başta Campylobacter jejuni olmak üzere bu genus içindeki bakterilerin dışkıdan soyutlanmasında kullanılan besiyeridir.

http://images.google.com.tr/imgres?imgurl=http://www.microedservices.com/ASCatViewer/ProdImgs/campylobacter-AS-2111036022006.jpg&imgrefurl=http://www.microedservices.com/ASCatViewer/userview/%3FsCmd%3Ddisp_detail%26id%3D5014&h=966&w=969&sz=89&hl=tr&start=1&tbnid=dJwXolHz7uXeKM:&tbnh=148&tbnw=148&prev=/images%3Fq%3Dcampylobacter%2Bagar%26svnum%3D10%26hl%3Dtr%26lr%3D%26sa%3DG

http://images.google.com.tr/imgres?imgurl=http://medinfo.ufl.edu/year2/mmid/bms5300/images/d7153.jpg&imgrefurl=http://medinfo.ufl.edu/year2/mmid/bms5300/bugs/campjeju.html&h=300&w=400&sz=25&hl=tr&start=5&tbnid=53y1U4lSwggadM:&tbnh=93&tbnw=124&prev=/images%3Fq%3Dcampylobacter%2Bagar%26svnum%3D10%26hl%3Dtr%26lr%3D%26sa%3DG


SABOURAUD- DEXTROSE AGARMantarların klinik örneklerden üretilmesinde

kullanılan genel bir besiyeridir. Besiyeri içerisine eklecek Cycloheximide ile

kontaminant mantarların, Chloramphenicol ile de bakterilerin izolasyonunu sağlayarak seçici hale gelir.


SELENİT F BUYYONU

Karışık floralı dışkı gibi örneklerden Salmonella’ların çoğalmasını sağlayarak elde edilmelerini kolaylaştırır.

Enterokoklar ve dışkı florasının üremesini baskılar. Sıcak su banyosunda ısıtılarak eritilir.

Steril sıkı tıkaçlı tüplere en az 6 cm yükseklik olacak şekilde dağıtılır. Otoklavlanmaz.

Şüphelenilen dışkı 35°C’de 8-12 saat bekletilir ve ayırıcı besiyerine pasajlanır.


TSI- ÜÇ ŞEKERLİ DEMİRLİ AGAR

Gram negatif bakterilerin glikoz, laktoz ve sükroz üzerindeki etkilerini ve H2S oluşumlarını araştırıldığı besiyeridir.

Besiyerinde glikozun on katı kadar laktoz ve sükroz bulunmaktadır. Glikozu fermante eden bakteriler oluşturdukları asit ile fenol kırmızısı ayracını etkileyerek sarıya dönüştürür.

Fermantasyon sırasında gaz oluşturması besiyeri içinde gaz kabarcıklarının varlığı veya besiyerinin parçalanması ile anlaşılır.


TSI- ÜÇ ŞEKERLİ DEMİRLİ AGAR (devam)

Tiyosulfat’ın üzerine etki ederek H2S oluşturan bakteriler bu maddenin ferrik amonyum sulfat üzerine etkisi ile siyah renkli ferrosülfit yapar.

Besiyerinin dip kısmının siyahlaşması H2S oluştuğu anlamına gelir. Bazen bu siyahlık tüm besiyerini kaplar. Bu şekilde olduğunda sarı renk görülmese de Tiyosulfat üzerine etki ancak asit ortamda oluşabileceğinden glikozu da kullandığı anlamına gelir.


URE AGARBakterinin üreyi

hidrolize edip etmediğinin araştırılmasında kullanılır.

Üreyi kullanan bakteriler sarı renkli agarı kırmızı-pembeye dönüştürür.

http://images.google.com.tr/imgres?imgurl=http://science.nhmccd.edu/BioL/wellmeyer/media/urea.jpg&imgrefurl=http://science.nhmccd.edu/BioL/wellmeyer/media/media.htm&h=449&w=492&sz=38&hl=tr&start=5&tbnid=ygqb5Ws-0oPrUM:&tbnh=119&tbnw=130&prev=/images%3Fq%3Durea%2Bagar%26svnum%3D10%26hl%3Dtr%26lr%3D%26sa%3DG


SİTRAT AGAR (Simons)Sitratları tek karbon kaynağı

olarak kullanan bakterilerin incelenmesinde kullanılan besiyeri içindeki Bromtimol mavisi( yeşilimsi) 24-48 saatte 37°C’de Prusya mavisine dönüşür.

http://images.google.com.tr/imgres?imgurl=http://www.marietta.edu/~spilatrs/biol202/labresults/citrate.jpg&imgrefurl=http://www.marietta.edu/~spilatrs/biol202//labresults/citrate.html&h=2027&w=1078&sz=193&hl=tr&start=3&tbnid=B5WxDxapAwihOM:&tbnh=150&tbnw=80&prev=/images%3Fq%3DC%25C4%25B0TRATE%2Bagar%26svnum%3D10%26hl%3Dtr%26lr%3D%26sa%3DG


LÖWENSTEİN-JENSEN BESİYERİ

Mycobacterium’ların üretilmesinde en çok kullanılan yumurta, patates ve malaşit yeşili içeren zenginleştirici besiyeridir.


TAŞIMA BESİYERİAlınan sürüntü örneği taşıma besiyerleri içinde

laboratuvara gönderilmelidir. Böylelikle hem materyalin kuruması önlenmiş hem de mikroorganizmalar üretilmeden muhafaza edilir.

Rutin laboratuarlarda en sık kullanılan taşıma besiyerleri: -Stuart’s -Amies -Cary-Blair besiyerleridir.

Böylece örnek 24 saat kalabilir.

1 besİyerlerİ ve boyalar

Documents