Principi LDg PGI: dlakenoktakoesluzokoeokauva

Cilj nastave:2. Principi LDg IGI: aglutinacija, precipitacija, ELISA, PCR, PH invazivna aspergiloza (IA) invazivna kandidijaza (IC) zigomikoze Pneumocystis pneumonija 3. Metode identifikacije gljiva Metode ispitivanja osetljivosti gljiva na AMDifuzijaDilucijaEtest

4. Epidemiologija GI Rizine grupe pacijenata Endemske GI (bifazne i subkutane mikoze) Mikoalergeni i mikoalergoze Mikotoksini i mikotoksikoze

Identifikacija i karakterizacija izolovanih gljiva vri se na osnovu:Makroskopskih kulturalnih karakteristikaMikroskopskih kulturelnih karakteristika (preparat sa SDA, HA, PDA, DTM, MSIA)Specifinosti rasta na diferencijalnim podlogama (GACA)Fiziolokih karakteristika (germinacija, produkcija ureaze, kapsule...)Biohemijske identifikacije (API, Candida Chrom Agar...)Odredjivanja antigenske gradje izolovanih gljiva (npr. LA)Odredjivanja DNK sekvenci karakteristinih za vrstu (npr. PCR)Odredjivanja faktora virulencije (detekcija enzima, mikotoksina...)Odredjivanja rezistencije na AM (rezistotipija)

Metode identifikacije gljiva:Na osnovu specifinosti rasta na diferencijalnim podlogama (GACA razlikovanje C. neoformans od Candida; kukuruzni agar hlamidospore formira samo C. albicans)Na osnovu fiziolokih karakteristika (germinacija karakterstika C. albicans; produkcija kapsule karakteristika C. neoformans) Na osnovu biohemijskih karakteristika (API sistemi za fermentaciju i asimilaciju; podloge sa hromogenim suptancama Chrom-agar)

Hrom agar IDENTIFIKACIJA kvasnica

C. tropicalisC. glabrata

C. kruseiC. albicans

Biohemijska karakterizacija IDENTIFIKACIJA kvasnica

Identifikacija i ispitivanje njihove osetljivosti Candida

Biohemijska serija ID32 (bioMerieux, Paris) UNI-YEAST-TEC PLATEBiohemijska identifikacija kvasnica

API ZYM - enzimska karakterizacija gljiva

C. parapsilosis C. dubliniensis

ANTIMIKOGRAM I ANTIMIKOTICI

Ozbiljan i esto lo kliniki tok i prognoza IGI, RVVK i sl.

Promenjen empirijski koncept leenja gljivinih infekcija zasnivan na pretpostavci da su gljive generalno osetljive na antimikotike (AM)

Toksinost i druga neeljena dejstva AM i ograniena primena

Vei izbor AM, posebno za parenteralnu primenuZbog ega antimikogram?Metode ANTIMIKOGRAMA:DifuzijaDilucijaEtestUPOTREBA AM: ProfilaksaEmpirujska thPre-emptive thSpecifina th

Georgopapadakou NH, Walsh T. Nature 1994; 264: 371Ciljne strukture gljiva i mehanizmi dejstva AM

Razvoj AM

Kombinovani metod (E test)48 hDifuzioni metod24-48 hDilucioni metod48 - 72 hAutomatski sistemi identifikacija i AM> 24 h Metode antimikograma

Disk difuzija, Etest i mikrodilucioni metod

100 lsuspenzijaAM (g/ml)BujonMFK = 0,5 g/mlMFKMIKMIK = 0,25 g/ml+24 h37C24 h37C0,030,060,1250,250,5MIK: najmanja koncentracija AM koja inhibira porast gljiva (bujon ostaje bistar)MFK: presejavanjem svih razblaenja koja inhibiraju porast gljiva Bujon dilucioni metod

24 h37CPlastina traka impregniranaAM u gradijentukoncentracije Zasniva se na principu difuzije AM kroz vrstu hranljivu podlogu (agar) prethodno zasejanu ispitivanom kulturom Opadajui gradijent koncentracije AM na traci E testaZona inhibicijeelipsaMIKKombinovani metod - E test

REZISTENCIJA GLJIVA NA AM Klinika rezistencija

Primarna (unutranja) prisutna i pre izlaganja tj. kontakta gljive sa AM (genetski predodredjena -spontatne mutacije)

Sekundarna (steena) - razvila se u toku/ posle primene terapije - rezultat genotipskih i fenotipskih promena indukovanih antimikotikomOtpornost na doze hemioterapeutika koje se postiu pri optimalnim/ maksimalno dozvoljenim terapijskim dozama (toksinost!)

REZISTENCIJA: odsustvo terapijskog efekta primenom odgovarajuih terapijskih doza AM Za sve izolate gljiva iz primarno sterilnih regija OBAVEZAN je antimikogram

MEHANIZMI REZISTENCIJE GLJIVA1. Prekomerna produkcija ciljnog enzima

2. Izmena ciljnog mesta

3. Efluksne pumpe

4. Spreen ulazak 5. Zaobilazni metaboliki putevi

6. Inhibicija enzima aktivatora leka

7. Degradacija leka EC enzimima

> 75% senzitivnost, 50%, < 5%; (O'Brien et al., ASH Edu 2003)NAJEE VRSTE GLJIVA I OSETLJIVOST NA AM

Vrste gljivaAmBFluconazolItrakonazolVorikonazolCaspofungin5-FCC. albicansC. parapsilosisC. tropicalisC. glabrataC. kruseiA. fumigatusA. flavusA. terreusZygomycetesFusarium spp.

0363738394041Temperature (C)TerapijaVerovatnoa IGI-7071421283542495663-140.1110Dani posle transplantacijeGranulocytes (log10x109/L)CTSavremena terapija i znaaj laboratorijske dijagnoze

**