8.1 8.1 酶可以按催化的反应类型分类酶可以按催化的反应类型分类8.2 8.2 比活是酶纯化程度的指标比活是酶纯化程度的指标8.3 8.3 酶降低反应的活化能，但不会改变反应平衡酶降低反应的活化能，但不会改变反应平衡8.4 8.4 酶催化作用发生在活性部位 酶催化作用发生在活性部位 8.5 8.5 存在着几种解释酶催化作用的机制存在着几种解释酶催化作用的机制8.6 8.6 米氏方程是表示酶促反应的速度方程米氏方程是表示酶促反应的速度方程8.7 8.7 可逆抑制剂通过非共价键与酶结合可逆抑制剂通过非共价键与酶结合8.8 8.8 不可逆抑制剂共价修饰酶不可逆抑制剂共价修饰酶8.9 8.9 酶促反应的速度受酶促反应的速度受 pHpH 的影响的影响8.10 8.10 丝氨酸蛋白酶可以说明酶活性的许多特征丝氨酸蛋白酶可以说明酶活性的许多特征8.11 8.11 调节酶一般都是寡聚体调节酶一般都是寡聚体8.12 8.12 某些酶具有组织或器官特异性某些酶具有组织或器官特异性

第第 88 章 酶学章 酶学

酶是非常有效的和特异性高的生物催化剂。酶催化反应条件酶是非常有效的和特异性高的生物催化剂。酶催化反应条件温和、常温、常压。酶催化的反应比相应的没有催化剂的反应温和、常温、常压。酶催化的反应比相应的没有催化剂的反应快快 101033 ～～ 10101717 倍。例如在倍。例如在 0℃0℃ 时，时， 1mol1mol 过氧化氢酶过氧化氢酶能使能使 5×105×1066

mol Hmol H22OO22 分解为分解为 HH22OO 和和 OO22 ；而在同样条件下，每克；而在同样条件下，每克离子铁离子铁只只

能使能使 6×106×10 －－ 44mol Hmol H22OO22 分解，酶比铁离子快了分解，酶比铁离子快了 10101010 倍。倍。

酶作用的特异性分为绝对特异性、相对特异性和立体异构酶作用的特异性分为绝对特异性、相对特异性和立体异构特异性。特异性。 绝对特异性是指酶只能催化一种或两种结构极相似的化合绝对特异性是指酶只能催化一种或两种结构极相似的化合物的反应，如脲酶只水解尿素。而相对特异性是指酶可作用于物的反应，如脲酶只水解尿素。而相对特异性是指酶可作用于一类化合物或一种化学键，如脂肪酶或酯酶催化酯键水解，对一类化合物或一种化学键，如脂肪酶或酯酶催化酯键水解，对酯键两侧的基团要求不严格，对很多有机酸和醇（或酚）形成酯键两侧的基团要求不严格，对很多有机酸和醇（或酚）形成的酯键都能水解。的酯键都能水解。

立体异构特异性是指酶作用的底物应具有特定的立体结立体异构特异性是指酶作用的底物应具有特定的立体结构才能被催化。这种异构性包括光学异构性和几何异构性。构才能被催化。这种异构性包括光学异构性和几何异构性。

光学异构性是指一种酶只能催化一对镜像异构体中的一光学异构性是指一种酶只能催化一对镜像异构体中的一种，而对另一种不起作用。例如精氨酸酶只水解种，而对另一种不起作用。例如精氨酸酶只水解 L-L- 精氨酸精氨酸生成生成 L-L- 鸟氨酸和尿素，而对鸟氨酸和尿素，而对 D-D- 精氨酸没有作用。精氨酸没有作用。

几何异构性是指立体异构中的顺式和反式，几何异构性是指立体异构中的顺式和反式， -- 、、 -- 构构型。有的酶具有这种立体异构的专一性，如延胡索酸酶只能型。有的酶具有这种立体异构的专一性，如延胡索酸酶只能催化延胡索酸（反丁烯二酸）加水生成苹果酸，对顺丁烯二催化延胡索酸（反丁烯二酸）加水生成苹果酸，对顺丁烯二酸不起作用。酸不起作用。

8.1 8.1 酶的命名和分类是根据酶催化的反应酶的命名和分类是根据酶催化的反应

将酶按照酶催化的有机化学反应类型分为六大类型：将酶按照酶催化的有机化学反应类型分为六大类型：

1. 1. 氧化还原酶氧化还原酶：催化氧化－还原反应。其中的大多数酶称之脱：催化氧化－还原反应。其中的大多数酶称之脱氢酶，但有些也称之氧化酶、过氧化酶、加氧酶或还原酶。 氢酶，但有些也称之氧化酶、过氧化酶、加氧酶或还原酶。

2. 2. 转移酶转移酶：催化基团转移反应。其中许多转移酶需要辅酶。通：催化基团转移反应。其中许多转移酶需要辅酶。通常底物分子的一部分与酶或辅酶共价结合，这类酶包括激酶。常底物分子的一部分与酶或辅酶共价结合，这类酶包括激酶。

3. 3. 水解酶水解酶：催化水解反应。这是特殊的一类转移酶，水作为转：催化水解反应。这是特殊的一类转移酶，水作为转移的基团的受体。移的基团的受体。

4. 4. 裂合酶裂合酶：催化非水解和非氧化的底物的消除反应，或裂：催化非水解和非氧化的底物的消除反应，或裂解，生成一个双键。在裂解酶催化的可逆反应中，裂解酶催解，生成一个双键。在裂解酶催化的可逆反应中，裂解酶催化一个底物加到第二个底物的一个双键处。催化细胞内的加化一个底物加到第二个底物的一个双键处。催化细胞内的加成反应的裂解酶常命名为合成酶。成反应的裂解酶常命名为合成酶。

5. 5. 异构酶异构酶：催化异构化反应。这类反应是最简单的酶促反：催化异构化反应。这类反应是最简单的酶促反应，因为这些反应只有一个底物或一个产物。 应，因为这些反应只有一个底物或一个产物。

6. 6. 连接酶连接酶：催化两个底物的连接反应或称之交联反应。这：催化两个底物的连接反应或称之交联反应。这类反应通常需要输入能量，例如腺苷三磷酸类反应通常需要输入能量，例如腺苷三磷酸 ATPATP 。连接酶。连接酶也常称之合成酶。也常称之合成酶。

8.2 8.2 比活是酶纯化程度的指标比活是酶纯化程度的指标 酶活性也称为酶活力酶活性也称为酶活力，是指酶催化指定化学反应的能力。是指酶催化指定化学反应的能力。 酶活力的大小用酶活性单位的多少来表示。酶活力的大小用酶活性单位的多少来表示。 比活是指每毫克蛋白含有的酶单位数。比活是指每毫克蛋白含有的酶单位数。

纯化步骤 级分体积 （ ml ）

总蛋白 （ mg ）

活力 （ U ）

比活（ U/mg ）

粗提取液 1860 6720 13440 2

丙酮分级 80 960 9600 15

凝胶层析 80 300 8700 29

离子交换 22 90 4230 47

猪肾氨基酰化酶各个步骤纯化数据

8.3 8.3 酶降低反应的活化能，但不会改变反应平衡酶降低反应的活化能，但不会改变反应平衡一个简单的单底物的酶促反应可用下式表示。一个简单的单底物的酶促反应可用下式表示。EE＋＋ SS＝＝ ESES＝＝ EE＋＋ P P 可以用相应反应历程图表示。可以用相应反应历程图表示。

a.a.无酶催化的反应无酶催化的反应 b.b. 酶催化的反应酶催化的反应

无催化

催化

反应剂

产物

自

由

能

活化能

过渡态

自由能变化

自

由

能

纵坐标表示自由能（纵坐标表示自由能（ GG ），横坐标为反应过程。从图中），横坐标为反应过程。从图中可以看到，可以看到， SS 和和 PP 都含有一定的自由能，即处于称为基态的都含有一定的自由能，即处于称为基态的一种稳定的状态。一种稳定的状态。 SS 和和 PP 之间的平衡反映了它们的基态自由之间的平衡反映了它们的基态自由能的差别，它们之间存在着象座“ 山 ” 的能障，反应的底能的差别，它们之间存在着象座“ 山 ” 的能障，反应的底物必须提高能量水平才能跨越能障。物必须提高能量水平才能跨越能障。

“ “ 山 ”顶处称为过渡态，因为具有过渡态能量的分子可山 ”顶处称为过渡态，因为具有过渡态能量的分子可以转化为 以转化为 S S 或 或 PP 。从反应物的基态到达过渡态所需要的能。从反应物的基态到达过渡态所需要的能量称为反应的活化能。量称为反应的活化能。 SS→P→P的活化能用的活化能用 ΔGΔG00 SS→→PP ，， P→SP→S的的

活化能用活化能用 ΔGΔG00 PP→→SS 表示。而表示。而 ΔGΔG00 代表由代表由 SS 到到 PP 的整个标准自的整个标准自

由能变化。一个底物要转化为产物必须克服活化能障，升高由能变化。一个底物要转化为产物必须克服活化能障，升高反应温度可以增加具有克服活化能障的底物分子数，但活化反应温度可以增加具有克服活化能障的底物分子数，但活化能并没有降低。能并没有降低。

酶分子一般都很大，但酶中真正起催化作用的部位只是酶酶分子一般都很大，但酶中真正起催化作用的部位只是酶分子中某一部位，该部位称为酶的活性部位，活性部位是酶结分子中某一部位，该部位称为酶的活性部位，活性部位是酶结合和催化底物的场所。合和催化底物的场所。 活性部位是一个三维空间结构；通常位于酶蛋白的两个结活性部位是一个三维空间结构；通常位于酶蛋白的两个结构域或亚基之间的裂隙，或位于蛋白质表面的凹槽。 构域或亚基之间的裂隙，或位于蛋白质表面的凹槽。 活性部位是多肽链折叠形成的一个特殊的空间结构，一些活性部位是多肽链折叠形成的一个特殊的空间结构，一些在氨基酸序列相距很远的氨基酸残基经折叠会靠近，有的就是在氨基酸序列相距很远的氨基酸残基经折叠会靠近，有的就是活性部位的组成成分，直接参与酶的催化作用。活性部位的组成成分，直接参与酶的催化作用。 对活性部位没有直接贡献的其它部位是形成和稳定酶天然对活性部位没有直接贡献的其它部位是形成和稳定酶天然结构所需要的。当然酶的其它功能还包括调节功能和指导酶正结构所需要的。当然酶的其它功能还包括调节功能和指导酶正确定向于细胞中的信号部分确定向于细胞中的信号部分。

8.4 8.4 酶催化作用发生在活性部位酶催化作用发生在活性部位

8.5 8.5 存在着几种解释酶催化作用的机制存在着几种解释酶催化作用的机制8.5.1 8.5.1 几乎所有酶的作用机制都包括酸碱催化机制几乎所有酶的作用机制都包括酸碱催化机制 在活性部位，离子化的氨基酸残基侧链参与两类化学催在活性部位，离子化的氨基酸残基侧链参与两类化学催化，即酸碱催化和共价催化，是两种主要的化学催化模式。化，即酸碱催化和共价催化，是两种主要的化学催化模式。 在酸碱催化中，一个反应的加速是通过催化一个质子转在酸碱催化中，一个反应的加速是通过催化一个质子转移完成的。酶利用在细胞接近中性移完成的。酶利用在细胞接近中性 pHpH 条件下可以给出或接条件下可以给出或接受质子的氨基酸侧链，酶的活性部位可以提供一个相当于强受质子的氨基酸侧链，酶的活性部位可以提供一个相当于强酸或强碱溶液的生物环境。酸或强碱溶液的生物环境。 由于在大多数蛋白质中，组氨酸侧链咪唑基解离的由于在大多数蛋白质中，组氨酸侧链咪唑基解离的 pKpK

值是值是 66 到到 77 ，所以它是一个在中性，所以它是一个在中性 pHpH 下用于质子转移的理下用于质子转移的理想的基团。天冬氨酸和谷氨酸的羧基在某些酶中也可以充当想的基团。天冬氨酸和谷氨酸的羧基在某些酶中也可以充当酸碱催化剂，因为这些羧基解离的酸碱催化剂，因为这些羧基解离的 pKpKαα 值近似为值近似为 44 。。

用用 BB ：表示一个碱，或一个质子受体，而用：表示一个碱，或一个质子受体，而用 BHBH ＋＋表示相表示相应的共轭酸，一个质子的供体。一个质子受体可以通过除去一应的共轭酸，一个质子的供体。一个质子受体可以通过除去一个质子切断个质子切断 C-HC-H 键形成一个负碳离子。键形成一个负碳离子。

也可参与涉及碳的其它键的断裂，例如一个也可参与涉及碳的其它键的断裂，例如一个 C-NC-N 键的键的断裂，通过断裂，通过 BB ：在中性溶液中除去水分子的一个质子后产：在中性溶液中除去水分子的一个质子后产生的一个等价的生的一个等价的 OHOH －－来完成。来完成。

8.5.2 8.5.2 许多酶催化的基团转移反应都是通过共价催化进许多酶催化的基团转移反应都是通过共价催化进行的行的

共价催化是第二种类型的化学催化模式，主要通过一个底共价催化是第二种类型的化学催化模式，主要通过一个底物或底物的一部分与催化剂形成共价键催化基团的转移反应。物或底物的一部分与催化剂形成共价键催化基团的转移反应。在酶作用下的共价催化中，一个底物的一部分首先转移到酶上，在酶作用下的共价催化中，一个底物的一部分首先转移到酶上，然后再转移到第二个底物上。例如基团然后再转移到第二个底物上。例如基团 XX 从分子从分子 A-XA-X 转移到分转移到分子子 BB上就是经共价上就是经共价 ESES复合物复合物 X-EX-E ，按如下两个步骤进行的。，按如下两个步骤进行的。

A-A-XX＋＋ E E ＝ ＝ AA＋＋ XX-E-E

XX-E-E＋＋ B B ＝ ＝ B-B-XX＋＋ EE

A-A-XX ＝ ＝ B-B-XX

8.5.3 8.5.3 底物与酶的结合在催化过程中起着重要的作用底物与酶的结合在催化过程中起着重要的作用

1. 1. 底物靠近和定向于酶的活性部位底物靠近和定向于酶的活性部位 显然活性部位处的底物浓度越高越有利于反应。底物显然活性部位处的底物浓度越高越有利于反应。底物（也包括辅助因子）的敏感键逐渐靠近活性部位的催化基团，（也包括辅助因子）的敏感键逐渐靠近活性部位的催化基团，为的是定向于催化基团以便容易形成过渡态。为的是定向于催化基团以便容易形成过渡态。

2. 2. 底物变形底物变形 许多活性部位开始与底物并不相适合，但为了结合底物酶许多活性部位开始与底物并不相适合，但为了结合底物酶的活性部位不得不变形（诱导契合）以适合底物。一旦与底的活性部位不得不变形（诱导契合）以适合底物。一旦与底物结合，酶可以使底物变形，使得敏感键易于断裂和促使新物结合，酶可以使底物变形，使得敏感键易于断裂和促使新键形成。键形成。

8.6 8.6 米氏方程是表示酶促反应的速度方程米氏方程是表示酶促反应的速度方程

酶促反应动力学简称之酶动力学，主要研究酶促反应的速酶促反应动力学简称之酶动力学，主要研究酶促反应的速度以及其它因素，例如抑制剂等对反应速度的影响。度以及其它因素，例如抑制剂等对反应速度的影响。 在酶促反应中，如果底物的量远远超过酶量，则反应速度在酶促反应中，如果底物的量远远超过酶量，则反应速度与酶浓度成正比与酶浓度成正比。。

酶浓度

反应速度

如果固定酶浓度，改变底物浓度，酶促反应的速度与底物如果固定酶浓度，改变底物浓度，酶促反应的速度与底物浓度有什么样关系呢？浓度有什么样关系呢？

在低浓度底物情况下，反应相对于底物是一级反应，反应在低浓度底物情况下，反应相对于底物是一级反应，反应速度与底物成直线关系。速度与底物成直线关系。

当底物浓度处于中间范围时，相对于底物的反应是混合级当底物浓度处于中间范围时，相对于底物的反应是混合级反应。当底物浓度增加时，反应由一级反应向零级反应过渡。反应。当底物浓度增加时，反应由一级反应向零级反应过渡。

在高浓度底物下，酶被底物饱和，反应相对于底物是零级在高浓度底物下，酶被底物饱和，反应相对于底物是零级反应。反应速度与底物浓度无关。酶被底物饱和时的速度称之反应。反应速度与底物浓度无关。酶被底物饱和时的速度称之最大反应速度最大反应速度 VVmaxmax ，，

当底物浓度当底物浓度 [S][S]逐渐增大时，速度逐渐增大时，速度相对于相对于 [S][S] 的曲线为一的曲线为一双曲线。双曲线。

酶浓度固定，反应速度与底物浓度之间的关系

底物浓度

零级反应

一级反应

双曲线方程可以写成双曲线方程可以写成：

Vmax[S] ＝—————— （ 4.2 ） Km＋ [S]

该方程称为该方程称为 Michaelis-MentenMichaelis-Menten 方程（米氏方程），其中 方程（米氏方程），其中 KKmm

值称之米氏常数，值称之米氏常数， VVmaxmax 是酶被底物饱和时的反应速度。是酶被底物饱和时的反应速度。

米氏常数米氏常数 KKmm 是酶促反应速度是酶促反应速度为最大酶促反应速度值一半为最大酶促反应速度值一半时的底物浓度。这可通过用时的底物浓度。这可通过用[S][S]取代米氏方程（取代米氏方程（ 4.24.2 ）中）中的的 KKmm 证明，通过计算可得证明，通过计算可得

＝＝ VVmaxmax /2 /2 。。

酶（酶（ EE ）催化底物（）催化底物（ SS ）在酶活性部位裂隙中先形成一）在酶活性部位裂隙中先形成一个酶个酶 -- 底物复合物（底物复合物（ ESES ），底物与酶短暂反应转化为一个产），底物与酶短暂反应转化为一个产物（物（ PP ）的双分子反应起始时的反应可以写作（把酶看作一）的双分子反应起始时的反应可以写作（把酶看作一个反应分子）：个反应分子）： kk1 1 kkccatat

EE＋＋ S → ES → ES → ES → E＋＋ P P （（ 4.14.1 ）） kk －－ 11

方程中的速度常数方程中的速度常数 kk11 为 为 S S 和 和 E E 的结合常数，的结合常数， kk －－ 11 是是

ESES 的解离常数。的解离常数。 kkccatat 为第二步反应的速度常数，也称为催化为第二步反应的速度常数，也称为催化常数（或转换数）。由常数（或转换数）。由 ESES 转换为游离的酶和产物的反应是转换为游离的酶和产物的反应是用单箭头表示的。这是因为在刚开始的时候，生成的产物非用单箭头表示的。这是因为在刚开始的时候，生成的产物非常少，所以可逆反应（常少，所以可逆反应（ ES → EES → E＋＋ SS ）可以忽略。）可以忽略。

当底物浓度非常大时，反应速度接近于一个恒定值。在曲线当底物浓度非常大时，反应速度接近于一个恒定值。在曲线的这个区域，酶几乎被底物饱和，反应相对于底物的这个区域，酶几乎被底物饱和，反应相对于底物 SS 是个零级反是个零级反应。就是说再增加底物对反应速度没有什么影响。应。就是说再增加底物对反应速度没有什么影响。

（饱和时）＝（饱和时）＝ VVmaxmax ＝＝ [E][S][E][S]00 ＝＝ [E][E]totaltotal ＝＝ catcat[ES] [ES] （（ 4.34.3 ））

速度常数速度常数等于催化常数等于催化常数 catcat 。饱和时，所有的。饱和时，所有的 EE 都是以都是以 EE

SS 存在。方程（存在。方程（ 4.34.3 ）中还有另一个简单的关系式：）中还有另一个简单的关系式：

VVmaxmax ＝＝ catcat [E] [E]totaltotal

从中得出：从中得出： catcat ＝＝ VVmaxmax / [E] / [E]totaltotal 。催化常数是。催化常数是 VVmaxmax 除以起始除以起始

的酶浓度的酶浓度 [E][E]totaltotal 或除以在饱和条件下每秒每摩尔酶催化下转化成或除以在饱和条件下每秒每摩尔酶催化下转化成产物的底物的摩尔数。产物的底物的摩尔数。 catcat 的单位是的单位是 ss －－ 11 。。 catcat 的倒数是完成一个催化过程所需要的倒数是完成一个催化过程所需要的时间，所以催化常数可以衡量一个酶促反应的快慢。的时间，所以催化常数可以衡量一个酶促反应的快慢。

8.6.18.6.1 米氏方程的推导米氏方程的推导 假定存在一个时间周期，在此期间 假定存在一个时间周期，在此期间 S S 结合 结合 EE 的速度与 的速度与 ES ES

解离的速度相同。此时解离的速度相同。此时 [ES][ES] 是个恒定值，因为 是个恒定值，因为 ES ES 解离为 解离为 EE

＋＋ S S 或 或 EE＋＋ P P 的速度等于由 的速度等于由 EE＋＋ S S 形成 形成 ES ES 的速度。由的速度。由 EE

＋＋ S S 形成 形成 ESES 的速度取决于游离酶的浓度，即等于的速度取决于游离酶的浓度，即等于 [E][E]totaltotal －－ [E[E

S]S] 。可写成：。可写成：

（（－－ 11 ＋＋ catcat ）） [ES][ES]＝＝ 11 （（ [E][E]totaltotal －－ [ES][ES] ）） [S] [S] （（ 4.44.4 ））

整理方程，将速度常数集中在一边，并定义为米氏常数整理方程，将速度常数集中在一边，并定义为米氏常数 KKmm 。。

（（－－ 11 ＋＋ catcat ） （） （ [E][E]totaltotal －－ [ES][ES] ）） [S][S]

—————— —————— ＝ ＝ KKm m ＝ ———————— （＝ ———————— （ 4.4.

55 ）） 1 1 [ES][ES]

从方程（从方程（ 4.54.5 ）：）： KKmm[ES][ES]＝（＝（ [E][E]totaltotal －－ [ES][ES] ）） [S][S]

[ES][ES] （（ KKmm ＋＋ [S][S] ）＝）＝ [E][E]totaltotal[S][S]

[E][E]totaltotal[S][S]

[ES][ES] ＝ ———— （＝ ———— （ 4.64.6 ）） KKmm ＋＋ [S][S]

由于酶促反应速度取决于由于酶促反应速度取决于 ESES 转换为转换为 EE＋＋ PP 的速度。的速度。

＝＝ catcat[ES] [ES] （（ 4.74.7 ））

将方程（将方程（ 4.64.6 ）代入（）代入（ 4.74.7 ），），

catcat [E] [E]totaltotal[S][S]

＝ —————— （＝ —————— （ 4.84.8 ）） KKmm ＋＋ [S][S]

因为因为 catcat [E] [E]totaltotal ＝＝ VVmaxmax ，代入方程（，代入方程（ 4.84.8 ），就得到了米氏方程。），就得到了米氏方程。

VVmaxmax[S][S] ＝—————— （＝—————— （ 4.94.9 ）） KKmm ＋＋ [S][S]

（（－－ 11 ＋＋ catcat ）） —————— —————— ＝ ＝ KKmm

11

如果如果 catcat 比比 11 或或－－ 11 小得多，小得多， catcat 可以忽略，可以忽略， KKmm 就变成了就变成了 － － 11 / /

11 ，这是 ，这是 ES ES 解离为解离为 EE＋＋ SS 的平衡常数。的平衡常数。

同样同样 MichaelisMichaelis 和和 MentenMenten 假定假定 ESES 与与 EE ＋＋ SS 处于快速的平衡中， 处于快速的平衡中，

KKmm 就是 就是 ES ES 的解离常数。因此 的解离常数。因此 KKmm 是 是 E E 对 对 S S 的亲和力的量度。如果 的亲和力的量度。如果

KKmm 的值越小，表明 的值越小，表明 E E 与 与 S S 结合的越紧密。结合的越紧密。

如果一个酶可作用几个底物，例如己糖激酶对葡萄糖的如果一个酶可作用几个底物，例如己糖激酶对葡萄糖的 KKmm 值为值为 1.1.

5×105×10 －－ 44 ；对果糖的；对果糖的 KKmm 值为值为 1.5×101.5×10 －－ 3 3 ，显然酶对葡萄糖的亲和性，显然酶对葡萄糖的亲和性

更高，葡萄糖就称之为己糖激酶的天然底物。更高，葡萄糖就称之为己糖激酶的天然底物。

8.6.2 K8.6.2 Km m 和 和 VVmaxmax 可以用双倒数作图法确定可以用双倒数作图法确定

在计算机广泛应用之前，通常都是利用米氏方程的转换形在计算机广泛应用之前，通常都是利用米氏方程的转换形式求出式求出 KKmm 和和 VVmaxmax 值。常用的米氏方程转换形式是值。常用的米氏方程转换形式是 LineweaveLineweave

r-Burkr-Burk 方程，也称为双倒数方程。方程，也称为双倒数方程。

1 K1 Kmm 1 1 1 1 —— —— ＝＝———— · · ———— ＋ ＋ ———— VVmaxmax [S] V [S] Vmaxmax

将将 1/ 1/ 对对 1/[S]1/[S] 作图，可以获得一条直线。从直线与作图，可以获得一条直线。从直线与 xx轴轴的截距可以得到 的截距可以得到 1/K1/Km m 的绝对值；而 的绝对值；而 1/V1/Vmax max 是直线与是直线与 yy轴的截轴的截

距。虽然由双倒数作图得到的 距。虽然由双倒数作图得到的 KKm m 和 和 VVmax max 值的精确性要比计值的精确性要比计算机计算给出的值差，但双倒数作图直观、容易理解，为酶抑算机计算给出的值差，但双倒数作图直观、容易理解，为酶抑制研究提供了易于识别的图形。制研究提供了易于识别的图形。

8.7.1 8.7.1 竞争性抑制剂只与游离的酶结合竞争性抑制剂只与游离的酶结合

8.7 8.7 可逆抑制剂通过非共价键与酶结合可逆抑制剂通过非共价键与酶结合

竞争性抑制剂一与酶结合就阻止了底物与酶的结合，所以说底物、抑制剂与酶的结合是竞争性的。

只要底物浓度浓度足够大，酶仍然可以被底物饱和，就象没有抑制剂存在时一样，即最大反应速度应当是不变的。

因此在有竞争性抑制剂存在下， VVmaxmax 不变，但 KKm m

增加。

吲哚是胰凝乳蛋白酶的竞争性，这是由于酶作用的底物 Trp 的侧链中含有吲哚基。

8.7.2 8.7.2 反竞争性抑制剂只与反竞争性抑制剂只与 ESES 结合结合反竞争性抑制剂只与反竞争性抑制剂只与 ESES 结合，而不与游离酶结合。结合，而不与游离酶结合。

在反竞争性抑制作用中，在反竞争性抑制作用中， VVmaxmax 减小（减小（ 1/V1/Vmaxmax 增大），增大）， KKmm 减小减小

（即（即 1/K1/Kmm 的绝对值增大）。的绝对值增大）。

8.7.3 8.7.3 非竞争性抑制剂与非竞争性抑制剂与 ESES 和和 EE 都结合都结合非竞争性抑制剂与底物结合部位不同，所以他既可与非竞争性抑制剂与底物结合部位不同，所以他既可与 EE 结合，结合，也可与也可与 ESES 结合，生成的结合，生成的 EIEI 和和 ESIESI 都是失活形式的复合物。都是失活形式的复合物。

在非竞争性抑制作用中， 在非竞争性抑制作用中， KKmm 不变， 不变， VVmaxmax 变变小小。。

8.7.4 8.7.4 可逆的酶抑制剂常用于酶学研究和临床可逆的酶抑制剂常用于酶学研究和临床

临床上通过改变酶活性可以提供非常有效的治疗手段。临床上通过改变酶活性可以提供非常有效的治疗手段。在癌症和微生物或病毒感染中，药物治疗的目的是在不伤害在癌症和微生物或病毒感染中，药物治疗的目的是在不伤害宿主细胞的条件下防止受侵害细胞或病毒的繁殖。例如通过宿主细胞的条件下防止受侵害细胞或病毒的繁殖。例如通过抑制病毒抑制病毒 DNADNA 合成所需要的酶就可使病毒感染减轻。合成所需要的酶就可使病毒感染减轻。

核苷核苷 33ˊ-ˊ-叠氮叠氮 -2-2ˊ,ˊ,33ˊ-ˊ-脱氧胸腺嘧啶（脱氧胸腺嘧啶（ AZT,AZT, ）是第一）是第一个用于治疗获得性免疫缺陷综合症（个用于治疗获得性免疫缺陷综合症（ AIDSAIDS ）的药物，它通）的药物，它通过代谢可转换为相应的过代谢可转换为相应的 AZT 5AZT 5ˊ́-- 三磷酸，该三磷酸化合物抑三磷酸，该三磷酸化合物抑制催化由病毒制催化由病毒 RNARNA模板合成模板合成 DNADNA 的逆转录酶。的逆转录酶。

氨甲蝶呤和三甲氧苄二氨嘧啶都是二氢叶酸还原酶的氨甲蝶呤和三甲氧苄二氨嘧啶都是二氢叶酸还原酶的竞争性抑制剂，该酶是胸腺嘧啶单磷酸（竞争性抑制剂，该酶是胸腺嘧啶单磷酸（ TMPTMP ）合成所必）合成所必需的酶。需的酶。

氨甲蝶呤可以抑制脊椎动物二氢叶酸还原酶和被用于氨甲蝶呤可以抑制脊椎动物二氢叶酸还原酶和被用于选择性杀伤快速分裂的细胞，是最成功的癌症化疗制剂之选择性杀伤快速分裂的细胞，是最成功的癌症化疗制剂之一。一。

三甲氧苄二氨嘧啶是原核生物二氢叶酸还原酶的一个三甲氧苄二氨嘧啶是原核生物二氢叶酸还原酶的一个有潜力的选择性抑制剂，但对人的还原酶的抑制很弱，所有潜力的选择性抑制剂，但对人的还原酶的抑制很弱，所以常被用于某些细菌感染和疟疾的治疗。以常被用于某些细菌感染和疟疾的治疗。

另外，磺胺药是以对氨基苯磺酰胺为主要成分的消炎药（杀菌药），它的结构非常类似于细菌生长繁殖所需要的叶酸中对氨基苯甲酸，叶酸在二氢叶酸合成酶的催化下生成二氢叶酸，所以磺胺药与叶酸竞争结合二氢叶酸合成酶，因此磺胺药是细菌二氢叶酸合成酶的竞争性抑制剂。

人由于可以直接从食物中获得叶酸，所以基本上不受磺胺药。但细菌不能利用外源的叶酸。

磺胺药中的主要成分

叶 酸

8.8 8.8 不可逆抑制剂共价修饰酶不可逆抑制剂共价修饰酶

不可逆抑制抑制剂与酶分子形成一个稳定的共价键。有不可逆抑制抑制剂与酶分子形成一个稳定的共价键。有机磷化合物、有机汞、有机砷化合物、氰化物等都是酶的不机磷化合物、有机汞、有机砷化合物、氰化物等都是酶的不可逆抑制剂。有机磷化合物可以使以可反应的丝氨酸为活性可逆抑制剂。有机磷化合物可以使以可反应的丝氨酸为活性部位残基的水解酶失活。部位残基的水解酶失活。 神经毒气二异丙基氟磷酸（神经毒气二异丙基氟磷酸（ DFPDFP ）是有机磷化合物中的）是有机磷化合物中的一员。一员。 DFPDFP 与酶活性部位的丝氨酸残基反应生成二异丙基磷与酶活性部位的丝氨酸残基反应生成二异丙基磷酰丝氨酸。神经毒气对神经极端有毒，生物学上的作用抑制酰丝氨酸。神经毒气对神经极端有毒，生物学上的作用抑制乙酰胆碱酯酶，使乙酰胆碱不能分解为乙酸和胆碱，乙酰胆乙酰胆碱酯酶，使乙酰胆碱不能分解为乙酸和胆碱，乙酰胆碱的堆积引起一系列神经中毒症状，所以也称为神经毒剂。碱的堆积引起一系列神经中毒症状，所以也称为神经毒剂。

二异丙基氟磷酸二异丙基氟磷酸（（ DFPDFP ）与酶活性部）与酶活性部位的丝氨酸残基反应位的丝氨酸残基反应生成二异丙基磷酰丝生成二异丙基磷酰丝氨酸。两者之间形成氨酸。两者之间形成的是共价健。的是共价健。

低浓度的吡啶醛肟低浓度的吡啶醛肟甲碘化物（甲碘化物（ PAMPAM ）可以）可以作为解毒药取代磷酸和作为解毒药取代磷酸和重新激活取代的酶。重新激活取代的酶。

因为带正电荷的甲因为带正电荷的甲基吡啶基团可以与乙酰基吡啶基团可以与乙酰胆碱酯酶的阴离子部位胆碱酯酶的阴离子部位结合，取代靠近有机酯结合，取代靠近有机酯的磷原子的亲核氧，使的磷原子的亲核氧，使酶恢复活性。酶恢复活性。

8.9 8.9 酶促反应的速度受酶促反应的速度受 pHpH 的影响的影响

反应的起始速度对反应的起始速度对 pHpH 作图，大多数情况下可得到一个钟形曲线，例如作图，大多数情况下可得到一个钟形曲线，例如葡萄糖葡萄糖 -6--6- 磷酸酶。有的酶温度曲线不是钟形，例如胃蛋白酶是个偏向酸性磷酸酶。有的酶温度曲线不是钟形，例如胃蛋白酶是个偏向酸性区的半钟形曲线。从曲线可以看出，在某一区的半钟形曲线。从曲线可以看出，在某一 pHpH 下，反应速度可达到最大，下，反应速度可达到最大，这一这一 pHpH 称为酶的最适称为酶的最适 pHpH 。。

葡萄糖葡萄糖 -6--6- 磷酸酶磷酸酶 胃蛋白酶

钟形曲线 半钟形曲线半钟形曲线

丝氨酸蛋白酶家族活性部位中都含有丝氨酸残基，包括丝氨酸蛋白酶家族活性部位中都含有丝氨酸残基，包括凝血因子和胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶等消化酶。凝血因子和胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶等消化酶。

细胞合成的是蛋白酶的非活性前体－酶原，必须经过共细胞合成的是蛋白酶的非活性前体－酶原，必须经过共价修饰才能具有活性。价修饰才能具有活性。

肠胰蛋白酶原、胰凝乳蛋白酶原、弹性蛋白酶原和羧肽肠胰蛋白酶原、胰凝乳蛋白酶原、弹性蛋白酶原和羧肽酶原在合适的生理条件下，于细胞外通过有选择地水解一个酶原在合适的生理条件下，于细胞外通过有选择地水解一个或几个肽键后被激活。或几个肽键后被激活。

8.10 8.10 丝氨酸蛋白酶可以说明酶活性的许多特征丝氨酸蛋白酶可以说明酶活性的许多特征

4.10.1 4.10.1 胰凝乳蛋白酶原胰凝乳蛋白酶原是胰凝乳蛋白酶的非活性前是胰凝乳蛋白酶的非活性前体体

胰凝乳蛋白酶原的激活首先是在胰蛋白酶的催化下，胰凝乳蛋白酶原的激活首先是在胰蛋白酶的催化下， ArAr

g-15g-15 和和 Ile-16Ile-16 之间的肽键被切断，生成一个具有很高活性的，之间的肽键被切断，生成一个具有很高活性的，但相当不稳定的称为但相当不稳定的称为 --胰凝乳蛋白酶。胰凝乳蛋白酶。

--胰凝乳蛋白酶的氨基酸残基第胰凝乳蛋白酶的氨基酸残基第 1313 和和 1414 、、 146146 和和 147147 以以及及 148148 和和 149149 之间的肽键易于被活性的胰凝乳蛋白酶切割，称之间的肽键易于被活性的胰凝乳蛋白酶切割，称为自动激活作用，切下了为自动激活作用，切下了 Ser-14Ser-14 －－ Arg-15Arg-15 和和 Thr-147Thr-147 －－ Asn-Asn-

148148 两个二肽，最后生成了最稳定形式的酶，即两个二肽，最后生成了最稳定形式的酶，即 --胰凝乳蛋胰凝乳蛋白酶，或简称为胰凝乳蛋白酶。白酶，或简称为胰凝乳蛋白酶。

胰凝乳蛋白酶是含有胰凝乳蛋白酶是含有 241241 个氨基酸残基的由个氨基酸残基的由 33 条链组成的条链组成的蛋白酶。胰凝乳蛋白酶的三级结构是通过连接残基蛋白酶。胰凝乳蛋白酶的三级结构是通过连接残基 11 和和 122122 、、4242 和和 5858 、、 136136 和和 201201 、、 168168 和和 182182 以及以及 191191 和和 220220 的的 55 个二个二硫键稳定的。硫键稳定的。

胰凝乳蛋白酶原的激活过程胰凝乳蛋白酶原的激活过程

胰蛋白酶胰蛋白酶

胰凝乳蛋白酶胰凝乳蛋白酶

-- 胰凝乳 胰凝乳 蛋白酶蛋白酶

胰凝乳胰凝乳蛋白酶蛋白酶

8.10.2 8.10.2 凝血涉及酶原激活的级联反应凝血涉及酶原激活的级联反应

凝血涉及十多种蛋白，其中某些蛋白质是以非活性的丝氨凝血涉及十多种蛋白，其中某些蛋白质是以非活性的丝氨酸蛋白酶原形式在血液中循环。当血管损伤时，凝血酶原通过酸蛋白酶原形式在血液中循环。当血管损伤时，凝血酶原通过级联反应的方式被快速地激活。每一个丝氨酸蛋白酶对它的底级联反应的方式被快速地激活。每一个丝氨酸蛋白酶对它的底物都具有很高的特异性，催化一个或几个肽键的水解。物都具有很高的特异性，催化一个或几个肽键的水解。

酶原的依次激活最终导致凝血酶的生成，凝血酶催化可溶酶原的依次激活最终导致凝血酶的生成，凝血酶催化可溶性的循环中的血纤维蛋白原转化为不溶的血纤维。性的循环中的血纤维蛋白原转化为不溶的血纤维。

凝血蛋白数字的大小大致表示出发现的先后次序，脚标凝血蛋白数字的大小大致表示出发现的先后次序，脚标 aa

特指有活性的因子。凝血酶和因子特指有活性的因子。凝血酶和因子 VIIVIIaa 、、 IXIXaa 、、 XXaa 、、 XIXIaa 和和

XIIXIIaa 是与其它丝氨酸蛋白酶，例如胰蛋白酶同源的丝氨酸蛋白是与其它丝氨酸蛋白酶，例如胰蛋白酶同源的丝氨酸蛋白

酶。酶。

凝血酶原和因子凝血酶原和因子 VIIVII 、、 XIXI 和和 XX 都含有钙结合部位，都含有钙结合部位， CC

aa2+2+ 是将这些凝血因子定位于血小板膜表面所必需的。是将这些凝血因子定位于血小板膜表面所必需的。

组织因子和因子组织因子和因子 VVaa 以及 以及 VIIIVIIIaa 是促进特殊蛋白酶活性的非是促进特殊蛋白酶活性的非酶辅助因子蛋白质。酶辅助因子蛋白质。

血友病是一种遗传病，常见的血友病血友病是一种遗传病，常见的血友病 AA 是缺少因子是缺少因子 VIVI

IIII 的血液遗传病，而不常见的血友病的血液遗传病，而不常见的血友病 BB 是由于缺少因子是由于缺少因子 XIXI

造成的。编码这两种因子的基因都位于造成的。编码这两种因子的基因都位于 XX染色体上，所以染色体上，所以血友病是与血友病是与 XX染色体相关的疾病。染色体相关的疾病。

患有血友病患有血友病 AA 的病人现在可以通过注射因子的病人现在可以通过注射因子 VIIIVIII治疗，治疗，因子因子 VIIIVIII 是通过编码该蛋白的基因的克隆和表达制备的是通过编码该蛋白的基因的克隆和表达制备的。

内在途径外在途径

血管损伤

组织因子

交联的血纤维蛋白

8.10.3 X-8.10.3 X- 射线晶体图分析揭示了丝氨酸蛋白酶底物结射线晶体图分析揭示了丝氨酸蛋白酶底物结合特异性合特异性

胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶结构上的微小差别胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶结构上的微小差别反映出它们底物的特异性。胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶之间结构反映出它们底物的特异性。胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶之间结构上的主要区别是胰凝乳蛋白酶的疏水性口袋的底部是一个不带上的主要区别是胰凝乳蛋白酶的疏水性口袋的底部是一个不带电荷的氨基酸残基（图电荷的氨基酸残基（图 aa ），而胰蛋白酶是一个带电荷的天冬），而胰蛋白酶是一个带电荷的天冬氨酸残基（图氨酸残基（图 bb ），这个带负电荷的残基是造成胰蛋白酶底物），这个带负电荷的残基是造成胰蛋白酶底物特异性的原因，在特异性的原因，在 ESES 复合物中，它与底物的带正电荷的复合物中，它与底物的带正电荷的 ArgArg

和和 LysLys残基的侧链形成离子对。残基的侧链形成离子对。 弹性蛋白酶在三级结构上类似于胰凝乳蛋白酶，但弹性蛋弹性蛋白酶在三级结构上类似于胰凝乳蛋白酶，但弹性蛋白酶的结合口袋要浅得多。胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶结合部位白酶的结合口袋要浅得多。胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶结合部位的入口处有两个甘氨酸残基，而在弹性蛋白酶的入口处是比甘的入口处有两个甘氨酸残基，而在弹性蛋白酶的入口处是比甘氨酸大得多的缬氨酸和苏氨酸残基（图氨酸大得多的缬氨酸和苏氨酸残基（图 cc ）。）。

胰凝乳蛋白酶的疏水性口袋的底部是一个不带电荷的胰凝乳蛋白酶的疏水性口袋的底部是一个不带电荷的氨基酸残基氨基酸残基

底物“口袋”中有一个带电荷的天冬氨酸残底物“口袋”中有一个带电荷的天冬氨酸残基基

酶结合底物的口袋中含有缬氨酸和苏氨酸残基，酶结合底物的口袋中含有缬氨酸和苏氨酸残基，限制大的底物进入限制大的底物进入

8.11 8.11 调节酶一般都是寡聚体调节酶一般都是寡聚体

上面是一个多酶催化途径，总的结果是由上面是一个多酶催化途径，总的结果是由 AA 生成生成 PP 。终产物。终产物是调节酶是调节酶 EE11 的一个别构抑制剂，的一个别构抑制剂， EE11 催化第一个关键的反应。催化第一个关键的反应。

这种类型的调节称为反馈抑制。一个调节酶有一个位于它的催化中心以外的第二个配体结合部位，这个部位称为调节部位。酶构象的变化是与一个别构激活剂或抑制剂和酶的调节部位的结合有关，这种构象的变化传递给酶的活性部位，活性部位形状的变化改变了酶的活性。

调节酶的一些共同特征：调节酶的一些共同特征：

11 、调节酶的活性对代谢的抑制剂和激活剂是很敏感的。调、调节酶的活性对代谢的抑制剂和激活剂是很敏感的。调节化合物是结合在与催化部位不同的另一个部位。这样的调节化合物是结合在与催化部位不同的另一个部位。这样的调节剂称为别构调节剂。节剂称为别构调节剂。

22 、典型的别构调节剂非共价地结合在它们调节的酶上。许、典型的别构调节剂非共价地结合在它们调节的酶上。许多调节剂改变了酶对底物的多调节剂改变了酶对底物的 KKmm 值，而有些调节剂是改变值，而有些调节剂是改变 VVmama

xx 。。

33 、一个调节酶在体外可以部分变性引起调节特性的全部或、一个调节酶在体外可以部分变性引起调节特性的全部或部分丧失，但酶的催化化学并未丧失，这一过程称为脱敏作部分丧失，但酶的催化化学并未丧失，这一过程称为脱敏作用，进一步证明了催化和调节事件发生在酶的不同部位。用，进一步证明了催化和调节事件发生在酶的不同部位。

44 、一个调节酶通常至少有一个底物，反应速度对该底物、一个调节酶通常至少有一个底物，反应速度对该底物浓度的曲线是浓度的曲线是 SS 型的，而不是双曲线型的。型的，而不是双曲线型的。

55 、绝大多数调节酶都具有四级结构。调节酶中的每一条、绝大多数调节酶都具有四级结构。调节酶中的每一条多肽链可以是相同的，也可以是不同的。具有相同亚基的多肽链可以是相同的，也可以是不同的。具有相同亚基的调节酶的每一条多肽链上既含有催化部位，又含有调节部调节酶的每一条多肽链上既含有催化部位，又含有调节部位，所以这样的寡聚体是一个简单的对称的复合体，通常位，所以这样的寡聚体是一个简单的对称的复合体，通常是二聚体或四聚体。是二聚体或四聚体。

66 、别构酶因为具有协同效应，所以不符合米氏方程。、别构酶因为具有协同效应，所以不符合米氏方程。

加入激活剂可以使加入激活剂可以使 SS 型曲线向双曲线漂移，可以明显地降低型曲线向双曲线漂移，可以明显地降低 KKmm 值，并值，并提高酶的活性。如果加入抑制剂，可以明显地提高提高酶的活性。如果加入抑制剂，可以明显地提高 KKmm 值，并使酶的活性降值，并使酶的活性降低低。

8.11.1 8.11.1 有两种模型可以描述别构调节作用有两种模型可以描述别构调节作用 说明配体与寡聚蛋白结合协同性的齐变和序变两个模型已经获得了人说明配体与寡聚蛋白结合协同性的齐变和序变两个模型已经获得了人们的普遍认可。齐变模型也称为对称驱动模型或们的普遍认可。齐变模型也称为对称驱动模型或 KNFKNF 模型。序变模型也模型。序变模型也称为称为 MWCMWC 模型或配体诱导模型。模型或配体诱导模型。 齐变模型可用来解释相同配体（例如底物）的协同结合。该模型假设齐变模型可用来解释相同配体（例如底物）的协同结合。该模型假设每个亚基对每个配体只有一个结合部位，每个亚基的构象受到其它亚基的每个亚基对每个配体只有一个结合部位，每个亚基的构象受到其它亚基的限制，当蛋白质改变构象时，它仍维持它的分子对称性（图限制，当蛋白质改变构象时，它仍维持它的分子对称性（图 aa ）。因此存）。因此存在着两种构象的平衡，一种是对底物具有高亲和性的在着两种构象的平衡，一种是对底物具有高亲和性的 RR 构象，另一种是低构象，另一种是低亲和性的亲和性的 TT 构象。构象。 序变模型是近年来更为普遍运用的模型。其主要是依据这样一种设想，序变模型是近年来更为普遍运用的模型。其主要是依据这样一种设想，即一个配体可以诱导它要结合的亚基的三级结构的变化。这个亚基即一个配体可以诱导它要结合的亚基的三级结构的变化。这个亚基 -- 配体配体复合体又能够改变相邻亚基的构象。这一模型特别强调对于配体只有一种复合体又能够改变相邻亚基的构象。这一模型特别强调对于配体只有一种形状是亲和力最高的，但与齐变模型不同的是在具有部分饱和的一个寡聚形状是亲和力最高的，但与齐变模型不同的是在具有部分饱和的一个寡聚分子中允许存在着高亲和力和低亲和力的亚基（图分子中允许存在着高亲和力和低亲和力的亚基（图 bb ）。）。

序序变变模模型型

齐变模型

8.11.2 8.11.2 天冬氨酸转氨甲酰酶是第一个分析得比较透彻天冬氨酸转氨甲酰酶是第一个分析得比较透彻的别构酶的别构酶 在在 E.coliE.coli 中中 ATCaseATCase 催化嘧啶核苷酸生物合成的第一个关键的反应是催化嘧啶核苷酸生物合成的第一个关键的反应是由氨甲酰磷酸和天冬氨酸生成氨甲酰天冬氨酸。由氨甲酰磷酸和天冬氨酸生成氨甲酰天冬氨酸。 ATCaseATCase 的一个最有效的的一个最有效的抑制剂是代谢途径的终产物胞嘧啶三磷酸（抑制剂是代谢途径的终产物胞嘧啶三磷酸（ CTPCTP ），他们还发现），他们还发现 ATPATP 是是酶的激活剂。酶的激活剂。 ATPATP 是嘌呤核苷酸合成途径的终产物。是嘌呤核苷酸合成途径的终产物。 ATPATP 对对 ATCaseATCase 的激活作用可的激活作用可能是增强嘧啶核苷酸的生成以便使核酸合成所需要的两种类型的核苷酸的能是增强嘧啶核苷酸的生成以便使核酸合成所需要的两种类型的核苷酸的供应达到平衡。供应达到平衡。 CTPCTP 和和 ATPATP 都影响底物天冬氨酸的结合。都影响底物天冬氨酸的结合。 ATCaseATCase 催化催化反应中，速度对天冬氨酸浓度作图得到的是反应中，速度对天冬氨酸浓度作图得到的是 SS 型曲线。型曲线。 CTPCTP 使酶对天冬氨使酶对天冬氨酸的酸的 KKmm 值明显增大，但并没有改变值明显增大，但并没有改变 VVmaxmax ，所以，所以 CTPCTP 是一个竞争性抑制剂，是一个竞争性抑制剂，

它结合在活性部位以外的部位。它结合在活性部位以外的部位。 CTPCTP 使得原来的使得原来的 SS 曲线更为明显，表明天曲线更为明显，表明天冬氨酸结合冬氨酸结合 ATCaseATCase 的过程中具有更大的协同性。的过程中具有更大的协同性。 ATPATP 的存在使得的存在使得 SS 型曲型曲线向双曲线漂移，降低了底物对酶结合的协同性。线向双曲线漂移，降低了底物对酶结合的协同性。

8.11.3 8.11.3 某些调节酶受磷酸化作用调控某些调节酶受磷酸化作用调控 对于某些酶可以通过共价修饰来调控，磷酸化作用是最常见的共价修对于某些酶可以通过共价修饰来调控，磷酸化作用是最常见的共价修饰调节类型。最常见的共价修饰是酶的一个特定的丝氨酸残基的磷酸化。饰调节类型。最常见的共价修饰是酶的一个特定的丝氨酸残基的磷酸化。一个典型的哺乳动物细胞中大约一个典型的哺乳动物细胞中大约 1/31/3 的蛋白质都可能含有共价结合的磷酸。的蛋白质都可能含有共价结合的磷酸。蛋白激酶催化蛋白激酶催化 ATPATP 末端的磷酸基团转移到酶的特定的丝氨酸残基上。酶的末端的磷酸基团转移到酶的特定的丝氨酸残基上。酶的磷酸丝氨酸经蛋白磷酸化酶水解释放出磷酸基团后，又还原为脱磷酸的状磷酸丝氨酸经蛋白磷酸化酶水解释放出磷酸基团后，又还原为脱磷酸的状态。催化途径中的酶通常是受磷酸化作用激活，通过脱磷酸化作用而失活，态。催化途径中的酶通常是受磷酸化作用激活，通过脱磷酸化作用而失活，合成代谢途径中的大多数酶经磷酸化作用失活，脱磷酸化作用使其恢复活合成代谢途径中的大多数酶经磷酸化作用失活，脱磷酸化作用使其恢复活性。性。 丙酮酸脱氢酶催化葡萄糖降解中的一步关键反应，丙酮酸脱羧生成乙丙酮酸脱氢酶催化葡萄糖降解中的一步关键反应，丙酮酸脱羧生成乙酰辅酶酰辅酶 AA 和二氧化碳。这个反应将酵解途径与柠檬酸循环联系起来。丙酮和二氧化碳。这个反应将酵解途径与柠檬酸循环联系起来。丙酮酸脱氢酶的磷酸化使脱氢酶失活。磷酸化的丙酮酸脱氢酶可以通过酶中磷酸脱氢酶的磷酸化使脱氢酶失活。磷酸化的丙酮酸脱氢酶可以通过酶中磷酸丝氨酸残基水解而恢复活性，反应是由丙酮酸脱氢酶磷酸化酶催化的，酸丝氨酸残基水解而恢复活性，反应是由丙酮酸脱氢酶磷酸化酶催化的，该磷酸酶受该磷酸酶受 CaCa2+2+ 激活。激活。

无活性无活性 有活有活性性

磷酸化磷酸化

脱磷酸脱磷酸

8.12 8.12 某些酶具有组织或器官特异性某些酶具有组织或器官特异性

催化同一反应的来自同一个生物的不同蛋白质称为同功酶。同功酶具有催化同一反应的来自同一个生物的不同蛋白质称为同功酶。同功酶具有不同的不同的 KKmm 和和 VVmaxmax 值，可以通过电泳区分开。值，可以通过电泳区分开。

多亚基的同功酶中，亚基在结构上的类似使得它们可以组装成一个杂化多亚基的同功酶中，亚基在结构上的类似使得它们可以组装成一个杂化的寡聚体。例如乳酸脱氢酶（ 的寡聚体。例如乳酸脱氢酶（ LDHLDH ）是一个四聚体，从某些组织可分离到）是一个四聚体，从某些组织可分离到55 种种 LDHLDH 。这些同功酶是由两种类型的亚基组装成的，一种是在心肌中占。这些同功酶是由两种类型的亚基组装成的，一种是在心肌中占优势优势 HH 型亚基，另一种是在骨骼肌中占优势的型亚基，另一种是在骨骼肌中占优势的 MM 型亚基，型亚基， 55 种同功酶都是种同功酶都是由这两种亚基按不同比例组装成的四聚体，即由这两种亚基按不同比例组装成的四聚体，即 HH44 （心肌中）、（心肌中）、 HH33MM 、、 HH22

MM22 、、 HMHM33 和和 MM44 （骨骼肌中），它们都催化丙酮酸还原成乳酸或其逆反应。（骨骼肌中），它们都催化丙酮酸还原成乳酸或其逆反应。

各组织器官中各组织器官中 LDHLDH 同工酶的分布及含量不同，各有其特定的分布酶谱同工酶的分布及含量不同，各有其特定的分布酶谱。。 同功酶分布上的不同对生物体内反应的调节具有重要的意义。例如肌肉同功酶分布上的不同对生物体内反应的调节具有重要的意义。例如肌肉中富含中富含 LDHLDH55 ，它对丙酮酸的亲和力高，利于丙酮酸转化为乳酸；而心肌中，它对丙酮酸的亲和力高，利于丙酮酸转化为乳酸；而心肌中

富含富含 LDHLDH11 ，利于乳酸转化成丙酮酸，代谢上有其组织器官上的特异性。在，利于乳酸转化成丙酮酸，代谢上有其组织器官上的特异性。在

临床上可根据临床上可根据 LDHLDH 酶谱的变化诊断疾病。酶谱的变化诊断疾病。

要点归纳 1. 酶是生物催化剂。酶的显著特点是催化效率高，具有底物和反应的特异性，以及可调节性。除了某些 RNA之外，绝大部分酶是蛋白质，或是带有辅助因子的蛋白质。酶可以按照它们催化的反应类型分为六大类：脱氢酶、转移酶、水解酶、裂解酶、异构酶和合成酶。

2. 比活是每毫克酶蛋白所具有的酶活力单位数，比活测定是酶纯化的监测指标，对同一种酶来说，比活越高，酶的纯度越高。

3. 酶也和其他催化剂一样，可以通过降低反应的活化能来提高反应速度，使反应快速达到平衡点，但酶不能改变平衡点。

4. 酶活性部位是一个具有三维结构的疏水裂隙，除了含有疏水性氨基酸残基，还含有少量的极性氨基酸残基，极性氨基酸常常参与酶的催化反应。酶活性部位的可离子化和可反应的氨基酸残基形成酶的催化中心。

5. 酶催化的两个主要模式是酸碱催化和共价催化。在酸碱催化中，活性部位的弱酸给出质子，而碱接收质子，质子转移可以促进反应进行；在共价催化中，底物或底物中的质子与酶共价结合形成反应的中间产物。

6. 酶促反应速度的提高很大程度上依赖于底物与酶的结合。底物靠近和定向于酶的活性部位，使得活性部位的反应物浓度急剧增高，将大大加速酶促反应的速度。底物诱导酶结合，一旦酶结合底物后又使底物变形，当底物达到过渡态时，酶对底物的亲和力最大，使反应活化能降低，容易将底物转化为产物。

7. 酶动力学测定常常是测定反应的起始速度。酶促反应的第一步是形成非共价的酶 -底物复合物。酶促反应相对于酶浓度是一级反应，相对于底物浓度的变化表现出典型的双曲线特征。当酶被底物饱和时达到最大反应速度 Vmax 。米氏 (Michaelis-

Menten)方程描述了这样的动力学行为。

8. 米氏常数 Km等于最大反应速度一半时的底物浓度， Km是

酶的特征常数。通过双倒数作图法很容易获得 Km和 Vmax。酶

的催化常数（ kcat）或转换数等于每个酶分子（或是每个活性

部位）每秒钟转换底物（转换成产物）的最大分子数，在数值上 kcat 等于 Vmax除以总酶浓度。当 kcat 很小可以忽略时， Km

是酶对底物亲和力的量度： Km越小，表明酶对底物亲和力越

大。

9. 酶促反应速度受抑制剂的影响。酶抑制剂可分为可逆和不可逆抑制剂。可逆抑制剂与酶非共价结合，可逆抑制包括竞争性抑制（ Km增加，而 Vmax不变）、反竞争性抑制

（ Km和 Vmax都成比例地减少）、非竞争性抑制（ Vmax减少，

Km不变）；不可逆抑制剂与酶活性部位的功能基团共价结合。

利用不可逆抑制剂处理酶，有可能获得活性部位氨基酸残基的信息和解释酶催化的机制。

10. 酶促反应受 pH 和温度的影响，大多数酶都存在一个最适 pH 和最适温度，但最适 pH 和最适温度都不是酶的特征常数。在最适 pH 和最适温度下酶促反应具有最大反应速度，大多数酶的反应速度 -pH 以及反应速度 - 温度曲线是钟形曲线。

11. 许多蛋白酶都是以酶原形式合成的，在合适的条件下酶原通过有选择的蛋白水解被激活，这一过程称为酶原激活。血液凝固取决于酶原激活的级联反应和许多凝血因子。级联反应是一个信号放大的过程。

12. 某些酶是调节细胞内代谢速度的关键酶。在反馈抑制中，途径的终产物往往抑制该途径的第一个酶。一些称为别构酶的调节酶的活性受到特殊的调节剂调节，调节剂可逆地结合在别构酶的调节部位（常常是底物结合部位以外的部位）。调节剂可以是抑制剂或激活剂；调节剂也可以是底物本身或其他代谢物。

13. 别构酶一般都是寡聚酶。别构酶表现出的动力学曲线是 S形。别构调节剂通过控制 R（对底物亲和性高的构象）∶ T（对底物亲和性低的构象）的比例改变调节酶的 Km或 vmax值。其他调节酶的活性也可以通过共价修饰调节，常见的共价修饰是酶的磷酸化。磷酸化常发生在酶活性部位的丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基侧链上。

14. 某些器官或组织含有催化同一化学反应而化学组成不同的一组蛋白质，称之为同功酶。通过动力学或物理特性很容易将同功酶区别开。常见的乳酸同功酶有 5 种。