UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS MICROBIOLOGA FARMACUTICA

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADORFACULTAD DE CIENCIAS QUMICASMICROBIOLOGA FARMACUTICAACTIVIDAD ANTIBACTERIAL DE NANOPARTCULAS DE PLATA: SENSIBILIDAD DE DIFERENTES SEROTIPOS DE Salmonella. 03/02/2015JESSICA MORA1ObjetivoProbar la efectividad antimicrobiana de nanopartculas de plata contra Salmonella Enteritidis, Hadar y Seftenberg e investigar las causas de sus diferentes habilidades de sobrevivir desde un punto de vista molecular.03/02/2015JESSICA MORA203/02/2015JESSICA MORA3IntroduccinSalmonella spp. es una de las principales causas de enfermedades transmitidas en los alimentos en todo el mundo.CADENA ALIMENTARIALa cadena alimentara es el conjunto de "eslabones" por los cuales pasa el ALIMENTO.

DISMINUCIN DE LA PREVALENCIADISMINUCIN EN EL IMPACTO DE LA SALUD CADENA ALIMENTARIA: Estos incluyen desde la produccin primaria de un alimento hasta que el consumidor lo pone en la mesa de su hogar. Todas las etapas son importantes y en cada una de ellas se deben hacer las cosas bien.Cualquier serotipo es considerado capaz de causar enfermedades gastrointestinales de diversa gravedad en humanos303/02/2015JESSICA MORA4Diferentes caractersticas en trminos de resistencia, infectividad, morbilidad y mortalidadUn serotipo es un tipo de microorganismo infeccioso clasificado segn los antgenos que presentan en su superficie celular.

CUALQUIER SEROTIPO ES CAPAZ DE CAUSAR ENFERMEDADES GASTROINTESTINALES DE DIVERSA GRAVEDAD EN HUMANOSIntroduccin (continuacin)03/02/2015JESSICA MORA5Los biocidas pueden ser sustancias qumicas sintticas o de origen natural o microorganismos que estn destinados a destruir, contrarrestar, neutralizar, impedir la accin o ejercer un control de otro tipo sobre cualquier organismo considerado nocivo para el hombre.5Introduccin (continuacin)03/02/2015JESSICA MORA6Nitrato de plata era bastante usado en la farmacopea romana.

6ImportanciaA pesar de que la efectividad de las nanopartculas de plata han sido probadas contra el gnero Salmonella, no estn disponibles hasta la fecha datos concernientes de diferentes serotipos de Salmonella incluyendo los que son de gran inters para humanos.La presencia de genes resistentes a la plata en aislados de Salmonella necesitan ser establecidos y la resistencia a las nanopartculas de plata de bacterias resistentes a la plata deben ser confirmados.Bacterias resistentes a la plata en la cadena alimentaria podra ser un potencial problema de salud pblica ya que la plata es la clave en la composicin de varios productos, especficamente dedicados a los materiales en contacto con alimentos.Datos de origen de estudios cientficos sobre la actividad biolgica de nanopartculas son difciles de interpretar debido a las peculiares caractersticas qumicas y fsicas de estas partculas, por eso es fundamental proporcionar caracterizacin detallada de cualquier prueba en nanopartculas. Este estudio resulta importante para la seguridad alimentaria, ya que los compuestos de plata son usados para desinfectar las plantas de produccin de comida con el fin de eliminar patgenos que son considerados de relevancia en salud pblica.03/02/2015JESSICA MORA703/02/2015JESSICA MORA8Materiales y Mtodos

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ICP MS: deteccin para la mayora de los elementos detectando unas pocas ppb ppt lo que la hace ideal para el anlisis de elementos traza.TEM: es un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto,1003/02/2015JESSICA MORA11

El nitrato de plata fue usado para investigar los efectos de iones de plataBasado columna-Spin cido nucleico de purificacin es una extraccin en fase slida mtodo para purificar rpidamente los cidos nucleicos . Este mtodo se basa en el hecho de que el cido nucleico se unen a la fase slida de slice bajo ciertas condiciones.11Resultados03/02/2015JESSICA MORA12

NANOPARTICULAS DE PLATA DISPERSADAS EN AGUA03/02/2015JESSICA MORA13Ensayo de susceptibilidad con nanopartculas de plata

Salmonella SenftenbergNPAgAgNO3Se prob en un cultivo lquido con igual cantidad de cada microorganismo por separado, se incub con nanopartculas de plata a diferentes tiempos1303/02/2015JESSICA MORA14

Salmonella Hadar Salmonella EnteritidisNPAgAgNO303/02/2015JESSICA MORA15Cepas de Salmonella resistentes a NPAgLa perdida selectiva de efectividad antimicrobiana, dependiendo del serotipo de Salmonella, de acuerdo a la hiptesis de la presencia de un mecanismo especficos de resistencia

Identificar si las 3 bacterias presentan el gen SilBVerificar el origen plasmidicoMicrografa en un gel de agarosaMW: peso molecularBp: segmento del genoma bacterianoLa cepa de Klebsiella pneumoniae, clon ST258 usado como control (+) fue anteriormente descrito que puede llevar el plasmido pKPN IT altamente relacionado con el plasmido pKPN3 que confiere resistencia al arsenico, cobre y plata 1503/02/2015JESSICA MORA16Probar la expresin del gen SilB resistente en la cepa S. Seftenberg,En presencia o ausencia de nanopartculas de plata y nitrato de plata

DiscusionesExiste evidencia circunstancial que estas partculas tienen buena actividad antimicrobiana; sin embargo, el mecanismo exacto por el que estas partculas ejercen esta actividad es todava especulativo. Las nanopartculas tienen una amplio espectro de accin contra una gama de microbios probablemente debido a que tienen multiples mecanismos de accin.Se demostr que las NPAg es un efectivo antimicrobiano incluso en el caso de Salmonella, pero esto es fuertemente dependiente de la cepa.Se observ en los serotipos investigados diferencias en trminos de dosis efectiva y tiempo de accin, debido probablemente a factores relacionados con caractersticas genticas de cada cepa (genes de resistencia).Los mecanismos de resistencia incluyen alteracin de membranas celulares y disminucin de la entrada de Ag por bombas de eflujo.Los genes de resistencia a la plata se asume que pueden ser expresados en respuesta a una exposicin a largo plazo con plata. 03/02/2015JESSICA MORA17ConclusionesLos ensayos de susceptibilidad de NPAg demostraron que estas son efectivas como antimicrobianos contra cepas de Salmonella solamente durante un corto periodo de tiempo. Esto sugiere que la habilidad de los patgenos de sobrevivir en la presencia de NPAg puede ser un reto para la aplicacin propuesta.La mayor actividad del nitrato de plata comparada con las NPAg, sugiere que los iones son los elementos mas efectivos ejerciendo actividad antibacteriana. Sin embargo, se necesita mas evidencia para apoyar esta hiptesis.Es importante destacar que solo se tomo en cuanta un solo tipo de nanopartcula, por lo que los resultados no se pueden generalizar debido a la amplia variabilidad de actividad biolgica de NP que depende no solamente de su forma qumica sino tambin de su forma especfica y de su rango dimensional.El tamao mas pequeo de NPAg (