meios de cultura e técnicas de semeio- microbiologia

Meios de cultura

Quanto ao estado físico os meios podem ser:

SÓLIDO – Ágar-ágar (1.5%).

Utilizado isolamento de colônias bacterianas (plaqueamento);

SEMI-SÓLIDO – Ágar-ágar (0.5/0.7%)

Utilizado para observação de motilidade;

LÍQUIDO – Caldo.

Utilizado para enriquecimento bacteriano;

A consistência dos meios é dada pela concentração de “AGAR-AGAR” constituído de polissacarídeo

complexo (gelose)

ÁGAR SANGUE: Crescimento das bactérias piogênicas e observação dos três tipos de hemólise: alfa, beta e gama.

AGAR CHOCOLATE: Observa-se hemólise alfa e crescimento de Streptococcus e Haemophylus

ÁGAR CHOCOLATE THAYER MARTIN: Crescimento de Neisserias

ÁGAR CHOCOLATE TELURITO DE POTASSIO: Crescimento de Corynebacterium;

MEIOS SÓLIDOS

MEIOS SÓLIDOS:

ÀGAR TEAGUE, McCONKEY, HECTOEN

ENTERIC e SS: São seletivos (crescem

Gram negativas) e indicadores (separam as

bactérias em LACTOSE POSITIVA E

LACTOSE NEGATIVA)

ÁGAR TCBS: Crescimento de Vibrio

ÁGAR DNAse: Classificação dos

Staphylococcus

Teague

McConkey

DNAse

MEIOS SÓLIDOS cont.

Ágar-sangue

Ágar-chocolate

Ágar-Chocolate Thayer Martin

BHI (Brain Heart Infusion): Enriquecimento de cultura de bactérias piogênicas em secreções ou em frascos para hemocultura

TIOGLICOLATO: Crescimento de bactérias anaeróbias

TETRATIONATO: Crescimento de bactérias do trato fecal (enriquecimento das bactérias lactose negativas)

ÁGUA PEPTONADA ALCALINA: Crescimento do bacilo da cólera

MEIOS LÍQUIDOS

CALDO DE TIOGLICOLATO

MEIOS SEMI-SÓLIDOS

FLETCHER: utilizado em hemoculturas e

conservação de Leptospiras

URÉIA: Produção de urease

MEIOS ENRIQUECIDOS

São acrescentadas substâncias para aumentar o poder nutritivo do meio

Exemplos:

BHI Ágar-sangue (sólido): 5 a 10% de sangue desfibrinado de ovelha, coelho ou humano.

Fletcher (semi-sólido): soro de coelho, hemoglobina.

Ágar-chocolate (sólido): sangue de ovelha aquecido: fastidiosos

Ágar Müller-Hinton: Infusão animal, casaminoácidos e amido: crescimento de

muitos organismos.

Ágar Thayer-Martin Fatores de crescimento:hemoglobina, vitaminas,

difosfopiridina e glutamina

MEIO SÓLIDO ENRIQUECIDO

ÁGAR-SANGUE

ÁGAR-CHOCOLATE

HEMÓLISE: • ALFA (PARCIAL) • BETA (TOTAL) • GAMA (AUSÊNCIA)

Padrões de hemólise

Hemólise beta Hemólise alfa

Hemólise gama

MEIOS SELETIVOS

Têm o objetivo de favorecer ou selecionar um tipo bacteriano

Manitol Ágar sal: Tem 7.5% de NaCl (favorece o S. aureus);

MacConkey: Contém sais biliares e cristal de violeta 1% (inibe os Gram positivos)

Teague, EMB: Contém eosina 2% e azul de metileno 0,5% (Inibe os Gram positivos, selecionando os Gram negativos)

HE: sais de bile (inibição de Gram positivos e retardamento do crescimento de Gram negativos da microbiota normal)

MEIOS INDICADORES

Indicam características bioquímicas/fisiológicas dos microrganismos

Ex.: se o microrganismo fermenta a lactose ou não – coloração das colônias

Teague: : modificação na cor e precipitação dos corantes como resultado da queda do pH.

MacConkey: Produção de ácido pelos fermentadores de lactose: mudança do corante neutro

absorvido pelas colônias para vermelho e precipitação de sais de bile.

Não fermentadores de lactose: colônias sem coloração ou transparentes

HE: Sais de ferro (tiosulfato de sódio e citrato de amônio férrico): detecção da

produção de gas sulfídrico (H2S): precipitado negro nas colônias.

MEIOS DE CULTURAS SÓLIDOS

TEAGUE TEAGUE COM CRESCIMENTO

MEIO SELETIVO E INDICADOR

MEIOS DE CULTURAS SÓLIDOS

McConkey

MEIO SELETIVO E INDICADOR

MEIOS DE CULTURAS SÓLIDOS

HECTOEN ENTERIC - HE HE -COM CRESCIMENTO

MEIO SELETIVO E INDICADOR E H2S

Composição de meios de cultura comumente

utilizados

Agar citrato de Simmons

Diferenciação de bacilos

entéricos Gram negativos.

Citrato=fonte de carbono

Crescimento = utilização sais de

amônio

Quebra dos sais de amônio:

alcalinização do meio = indicador

azul de bromotimol : de verde

para azul.

Composição de meios de cultura comumente

utilizados

TSI (Triple Sugar Iron)

Fermentadores e não-fermentadores de glicose, lactose e sacarose, produção de gás e de H2S

Fermentadores: acidificação = amarelo

Sais de ferro e tiosulfato: H2S + tiosulfato: sultato ferroso: precipitado negro.

TSI

Composição de meios de cultura

comumente utilizados

Agar Bile-Esculina Isolamento e identificação de

Streptococcus do grupo D, incluindo os Enterococcus.

Streptococcus do grupo D, incluindo Enterococcus: hidrólise da esculina.

Reação com o citrato férrico no meio para produzir sais de ferro insolúveis.

Deposição dos sais de ferro: enegrecimento do meio, indicando a hidrólise da esculina.

.

Composição de meios de cultura

comumente utilizados

Agar Mueller-Hinton meio transparente

susceptibilidade de organismos a antibióticos.

Amido no meio:proteção dos organismos contra substâncias tóxicas e fonte de energia.

Composição de meios de cultura

comumente utilizados

Agar Lisina Ferro

Três parâmetros: dascarboxilação da lisina, desaminação da lisina e produção de H2S.

Contém lisina (aminoácido), glicose (carboidrato), uma pequena quantidade de proteína, violeta de bromocresol (indicador de pH) e tiosulfato de sódio/ citrato de amônio férrico (fonte de enxofre e indicador de H2S).

Região inferior alcalina (violeta) e superior alcalina (violeta) indicam que o organismo descarboxila a lisina mas não pode desaminá-la.

Região inferior ácida (amarelo) e superior alcalina (violeta) indicam que o organismo fermentou a glicose mas não foi capaz de desaminar ou descarboxilar a lisina.

Região inferior ácida

(amarelo) e superior

vermelho-bordeaux

indicam que o

organismo desamina

a lisina mas não é

capaz de realizar a

descarboxilação.

enegrecimento na região inferior indica produção de H2S a partir do tiossulfato de sódio.

Composição de meios de cultura

comumente utilizados

Agar Manitol-Sal

Alta concentração de sal (7,5%):

Staphylococcus aureus é capaz de fermentar manitol, a única fonte de carbono no meio

baixa no pH: indicador vermelho de fenol para amarelo.

S. aureus: colônias amarelas, rodeadas por uma área amarelada.

Outras espécies de Staphylococcus e Micrococcus :colônias rodeadas por uma área avermelhada ou rosada

TÉCNICAS DE SEMEIO

Para o isolamento, cultivo como também a identificação, são

necessárias técnicas adequadas de inoculação em meio de

cultura, que permitam o crescimento rápido e sem contaminação

TECNICAS DE SEMEIO

Cuidados:

Técnicas assépticas;

Ambiente estéril – próximo à chama (bico de Bunsen);

Alças devem ser flambadas antes e depois do uso;

Tubos, quando abertos, devem ser flambados antes e

depois do uso.

SEMEIO EM MEIO SÓLIDO

POR ESGOTAMENTO

Técnica necessária para o

isolamento e obtenção de culturas puras;

Com a alça de platina fazer estrias na superfície do meio de cultura, até o esgotamento de todo material presente na alça

Alça de platina

SEMEIO POR ESGOTAMENTO

SEMEIO EM MEIO SÓLIDO COM

ALÇA DE DRIGALSKY

Quantificação

Semeio uniforme;

Uso de suspensão bacteriana;

Inóculo: 50-100ųl da suspensão;

Semeio cobrindo toda a superfície do meio

Semeio – Alça Drigalsky

SEMEIO EM MEIO SÓLIDO COM “SWAB”

Técnica de antibiograma;

Suspensão bacteriana padronizada: 0,5 na Escala de McFarland

Umedecimento do “swab” na suspensão;

Retirada do excesso

Semeio cobrindo toda a superfície do meio.

SEMEIO EM MEIO LÍQUIDO

Tocar com a alça de platina na amostra;

Inocular o meio líquido;

Incubar;

Observar a turvação do meio.

SEMEIO EM PICADA

Utilizado nas provas bioquímicas

(TSI, citrato, lisina);

Meios sólidos em tubos inclinados

ou “slants”

Semeio com a agulha de platina em

profundidade, e no caso do TSI na

superfície do meio

Semeio em picada

TSI