métodos diagnóstico prenatal genético

Métodos de

diagnóstico prenatal genético

Raluca Oancea – MIR 4º -Análisis Clínicos

Usos del diagnóstico prenatal:

Para que los padres tomen una decisión

Tratamiento clínicoTratamiento prenatalAtención del recién nacidoConsideraciones obstétricas

Introducción:

Cariotipo normal – 46XX (mujer)

Cariotipo normal – 46XY (hombre)

Locus genético Alelos

dominanterecesivocodominanteHomocigotoHeterocigoto

Gen (segmento de ADN que contienela información para sintetizar una cadena peptídica)

Genotipo (constitución genética de un individuo)Fenotipo (apariencia, física, bioquímica y fisiológica de un individuo,

que es resultado de la interacción del ambiente y del genotipo)

Conceptos fundamentales:

Enfermedades hereditarias Malformaciones congénitas

Mendeliana. Monogénica (AD,AR,LX)

Cromosómica (numéricas, estructurales)

Multifactorial (poligénica, predisposición)

Esporádica. Ambiental.

Desconocida

Frecuencias de las enfermedades genéticas

Monogénica Dominante 0.2 - 0.9 %Recesiva 0.2 – 0.3 %Ligada al x 0.05 – 0.3 %

Cromosómica 0.7 %Enfermedad común 0.7 -1 %Malformación congénita 2 – 2.5 %Total 4 – 5 %

Consulta Genética ↔ Consejo genético

Decisión por parte de la pareja / Consentimiento informado

SI

¿Pruebas diagnósticas?

FISH (21,13,18,X,Y)Estudio microscópico

Cultivo celularBandeo cromosómico Estudio microscópico

Cariotipo fetal

Edad de riesgo>35 años

Screening1ºTalto riesgo

Hallazgosecográficos

Antecedentes familiares y personales

APP Técnicas de reproducción asistida Otras

NO

y/o

Estudio molecular

Diagnóstico prenatal

Ultrasonidos

Muestra devellosidades coriónicas

Muestra de sangre materna

Amniocentesis

No invasivo

Muestra de sangre fetal

Fetoproteína alfa

Diagnóstico previo a la implantación

Invasivo

10-12 S

14-16 S

+18 S

3-4 D

Alt. cromosómicasEnf. monogénicas

Diagnóstico previo a la implantación

Muestra devellosidades coriónicas

AmniocentesisMuestra de sangre fetal

Más difícil de realizar

Sensibilización RhCultivo lento Se cuenta con poco tiempo para repetirse

MosaicismoPrecisión menor del estudio

Resultado ràpidoEstudio DNA

Medir AFPMás experiencia

Etapa más temprana

1-2%<0,5%<1%

CordocentesisAmniocentesisBiopsia corial

Técnicas invasivas para diagnóstico prenatal

Técnicas utilizadas Cultivo celular

Bandeo cromosómico Estudio microscópico

Cariotipo fetal

FISH (21,13,18,X,Y)Estudio microscópico

Estudio molecular directo e indirectoEnf. monogénicas

QF -PCR

Citogénetica convencional

Citogénetica molecular

Cultivo a 37ºC/subcultivo (añadir colchicina)Sacrificio del cultivo (choque osmótico; KCL)Fijación (Carnoy)Extensión y Tinción (Giemsa)EnvejecerBandeo

¿CÓMO OBTENEMOS UN CARIOTIPO?

Caso 1. Screening de 1º trimestre de alto riesgo para el Sdr. Down.

Caso 2. Hallazgos ecográficos

Caso 3. Edad de riego(37 años).

Técnicas utilizadas Cultivo celular

Bandeo cromosómico Estudio microscópico

Cariotipo fetal

FISH (21,13,18,X,Y)Estudio microscópico

Estudio molecular directo e indirectoEnf. monogénicas

QF -PCR

Citogénetica convencional

Citogénetica molecular

Painting/SKY

Cromosomas 13/21

QF - PCR

DIAGNOSTICO GENÉTICO PRENATAL ESTUDIO MOLECULAR

LÍQUIDO AMNÍOTICO (sem. 14-16)Biopsia corial (sem 12 -14)

EXTRACCIÓN DNA

STRSCOMPATIBILIDAD

MUESTRA - PACIENTE

DTEREMINACIÓN DEL SEXO FETAL

(PCR)

MUTACIÓN

Directo Indirecto

Secuenciación Real time quantitative PCR

Multiplex fluorescent analysis of STRs

Diagnóstico prenatal

Ultrasonidos

Muestra devellosidades coriónicas

Muestra de sangre materna

Amniocentesis

No invasivo

Muestra de sangre fetal

Fetoproteína alfa

Diagnóstico previo a la implantación

Invasivo

10-12 S

14-16 S

+18 S

3-4 D

Muestra de sangre materna

Ácidos nucleicos fetales

Células fetales

Células fetales en sangre materna :

¿Trofoblastos ? ¿Linfocitos fetales?¿Eritroblastos fetales?

┌┌●●

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FACS

MACS

ADN fetal (<0.5%)

ADN materno

Cariotipo masculino normal ,46 XY

Sexo fetal masculino

DETERMINACIÓN DEL SEXO FETAL (Gen SRY)EN EL PLASMA MATERNO

ENFERMEDADES LIGADAS AL X (HEMOFILIAS)

DETERMINACIÓN DEL SEXO FETAL EN EL PLASMA MATERNO(Sem. 10)

STOPBiopsia corial/Amniocentesispara el diagnóstico prenatal

SEXOMASCULINO

SEXO FEMENINO

DETERMINACIÓN DEL RH FETALEN EL PLASMA MATERNO

Gestante RH negativa, ¿Incompatibilidad RH?

DETERMINACIÓN DEL RH FETAL EN EL PLASMA MATERNO(a partir sem. 15)

¿Amniocentesis para la determinación del RH fetal?

RH positivo RH negativo

En caso de feto Rh negativo: se descarta EHRN, se evitan pruebas invasivas se evita administración de la gammaglobulina anti D

Marco legal, problemas éticosEl artículo 417 bis del Código Penal

«1. No será punible el aborto practicado por un médico, o bajo su dirección, en centro o establecimiento sanitario, público o privado, acreditado y con consentimiento expreso de la mujer embarazada, cuando concurra alguna de las circunstancias siguientes:

1.ª Que sea necesario para evitar un grave peligro para la vida o la salud física o psíquica de la embarazada y así conste en un dictamen emitido con anterioridad a la intervención por un médico de la especialidad correspondiente, distinto de aquél por quien o bajo cuya dirección se practique el aborto.En caso de urgencia por riesgo vital para la gestante, podrá prescindirse del dictamen y del consentimiento expreso.

2.ª Que el embarazo sea consecuencia de un hecho constitutivo de delito deviolación del artículo 429, siempre que el aborto se practique dentro de las doce primeras semanas de gestación y que el mencionado hecho hubiese sido denunciado.

3.ª Que se presuma que el feto habrá de nacer con graves taras físicas o psíquicas, siempre que el aborto se practique dentro de las veintidós primeras semanas de gestación y que el dictamen, expresado con anterioridad a la práctica del aborto, sea emitido por dos especialistas ser centro oestablecimiento sanitario, público o privado, acreditado al efecto, y distintos de aquél por quien o bajo cuya dirección se practique el aborto.

2. En los casos previstos en el número anterior, no será punible la conducta de la embarazada aún cuando la práctica del aborto no se realice en un centro o establecimiento público o privado acreditado o no se hayan emitido los dictámenes médicos exigidos.»

Gracias por su atención