sİtomegalovİrus (cmv )1 hafta sonra 130. günde viral klirens sağlandı cd4 hücre sayısı 260 x...
Post on 13-Nov-2020
4 Views
Preview:
TRANSCRIPT
SİTOMEGALOVİRUSSİTOMEGALOVİRUS(CMV)(CMV)
Prof. Dr.Prof. Dr. SeyyâlSeyyâl ROTAROTAGazi Ü.Tıp FakültesiGazi Ü.Tıp Fakültesi
LOWLOW SYSTEMICSYSTEMIC GANCICLOVIRGANCICLOVIREXPOSUREEXPOSURE ANDAND PREEMPTIVEPREEMPTIVETREATMENTTREATMENT FAILUREFAILURE OFOFCYTOMEGALOVIRUSCYTOMEGALOVIRUS REACTIVATIONREACTIVATIONININ AA TRANSPLANTEDTRANSPLANTED CHICHILDLD
J Popul Ther Clin Pharmacol 8:e257-e260;2011
LOWLOW SYSTEMICSYSTEMIC GANCICLOVIRGANCICLOVIREXPOSUREEXPOSURE ANDAND PREEMPTIVEPREEMPTIVETREATMENTTREATMENT FAILUREFAILURE OFOFCYTOMEGALOVIRUSCYTOMEGALOVIRUS REACTIVATIONREACTIVATIONININ AA TRANSPLANTEDTRANSPLANTED CHICHILDLD
Kök hücre transplant alıcılarında önemlibir morbidite ve mortalite faktörü
Kan alıcılarının %23’ünde en önemli riskfaktörleri;
-Alıcının CMV-seropozitif olması,-İmmünsupresyon altında olması-Graft-versus-host hastalığı
Kök hücre transplant alıcılarında önemlibir morbidite ve mortalite faktörü
Kan alıcılarının %23’ünde en önemli riskfaktörleri;
-Alıcının CMV-seropozitif olması,-İmmünsupresyon altında olması-Graft-versus-host hastalığı
Gansiklovir nükleozid analoğu; in-vitroherpeslere karşı aktiviteye sahip vehematopoietic stem cell transplant(HSCT) alıcılarında tercih edilen ilaç.
Viral mutantlar tedavi başarısınıengellerler
Gansiklovir nükleozid analoğu; in-vitroherpeslere karşı aktiviteye sahip vehematopoietic stem cell transplant(HSCT) alıcılarında tercih edilen ilaç.
Viral mutantlar tedavi başarısınıengellerler
OLGUOLGU4 yaşında, erkek çocukWiskott-Aldrich hastalığı; ciddi ekzema ve
trombositopeniİki kere umblikal kord kanı
transplantasyonu (UKKT) 1. graft rejeksiyon2. UKKT 2 yıl sonraBusulfan, siklofosfamidanti-timosit globulin, metilprednizon ve
siklosporin GVHD önlemek için
4 yaşında, erkek çocukWiskott-Aldrich hastalığı; ciddi ekzema ve
trombositopeniİki kere umblikal kord kanı
transplantasyonu (UKKT) 1. graft rejeksiyon2. UKKT 2 yıl sonraBusulfan, siklofosfamidanti-timosit globulin, metilprednizon ve
siklosporin GVHD önlemek için
CMV seropozitif haftalık CMV realtime kantitatif PCR (RT-PCR) ile takipSaptama limiti: 300 kopya/ml.2. UKKT’dan 18 gün sonra hasta
asemptomatik ancak viral yük 1025kopya/ml.Preemptif tedavi olarak (IV) GCV 5mg/kg
1 x 230 gün sonra CMV saptanamayan
düzeylere inmiş
CMV seropozitif haftalık CMV realtime kantitatif PCR (RT-PCR) ile takipSaptama limiti: 300 kopya/ml.2. UKKT’dan 18 gün sonra hasta
asemptomatik ancak viral yük 1025kopya/ml.Preemptif tedavi olarak (IV) GCV 5mg/kg
1 x 230 gün sonra CMV saptanamayan
düzeylere inmiş
CMV 2 hafta ara ile 2 defasaptanamayınca 83. günde tedavikesilmiş
97. gün hasta asemptomatik ikenreaktivasyon (viral yük: 1166 kopya/ml.)
CMV 2 hafta ara ile 2 defasaptanamayınca 83. günde tedavikesilmiş
97. gün hasta asemptomatik ikenreaktivasyon (viral yük: 1166 kopya/ml.)
Siklosporin (10 mg/kg/gün) tedavisinedevam
CD4: 60 x 106 cells/L
122. günde 109000 kopya/mL
Siklosporin (10 mg/kg/gün) tedavisinedevam
CD4: 60 x 106 cells/L
122. günde 109000 kopya/mL
NEDEN BÖYLE OLDU?????NEDEN BÖYLE OLDU?????NEDEN BÖYLE OLDU?????NEDEN BÖYLE OLDU?????
Dirençli suş ?Dirençli suş ?
GCV-dirençli CMV izolatları antiviralprofilaksi başladıktan sonra ortayaçıkabilir (Bilhassa KİT hastalarında)
GCV tedavisi altında iken viral yükünartması genelde direnç gelişimigöstergesi tedavi rejiminde değişiklik uygulanabilir
GCV-dirençli CMV izolatları antiviralprofilaksi başladıktan sonra ortayaçıkabilir (Bilhassa KİT hastalarında)
GCV tedavisi altında iken viral yükünartması genelde direnç gelişimigöstergesi tedavi rejiminde değişiklik uygulanabilir
Gansiklovir yerine i.v. foscarnet 60mg/kg 1 x 4
Siklosporin (5 mg/kg/gün)
Gansiklovir yerine i.v. foscarnet 60mg/kg 1 x 4
Siklosporin (5 mg/kg/gün)
1 hafta sonra 130. günde viral klirenssağlandı
CD4 hücre sayısı 260 x 106 hücre/L. yeyükseliyor
GCV direncini araştırma 119 ve 122.günlerde CMV PCR ve DNA sekansı(UL54 ve UL97 genleri)
1 hafta sonra 130. günde viral klirenssağlandı
CD4 hücre sayısı 260 x 106 hücre/L. yeyükseliyor
GCV direncini araştırma 119 ve 122.günlerde CMV PCR ve DNA sekansı(UL54 ve UL97 genleri)
Herhangi bir mutasyon bulunmadığındanGCV’e duyarlı olarak kabul ediliyor.Herhangi bir mutasyon bulunmadığından
GCV’e duyarlı olarak kabul ediliyor.
Tedavi neden başarısız?Tedavi neden başarısız?Tedavi neden başarısız?Tedavi neden başarısız?
Bilinmeyen mutasyonlar sonucu dirençgelişimi
Tedavi başarısızlığının bir diğer nedenitavsiye edilen dozlara rağmen ilaçdüzeylerinin tedavi edici düzeylerinaltında kalma olasılığı
İlaç dozunun kg değil vücut yüzeyinegöre hesaplanması
Bilinmeyen mutasyonlar sonucu dirençgelişimi
Tedavi başarısızlığının bir diğer nedenitavsiye edilen dozlara rağmen ilaçdüzeylerinin tedavi edici düzeylerinaltında kalma olasılığı
İlaç dozunun kg değil vücut yüzeyinegöre hesaplanması
HPLC ile GCV kan düzeyi araştırılıyor
Plazma düzeyi düşük
CMV MİKROBİYOLOJİKCMV MİKROBİYOLOJİKTANISITANISI
CMV MİKROBİYOLOJİKCMV MİKROBİYOLOJİKTANISITANISI
ÖrnekÖrnekİdrar
Tükrük
BAL
Kan
Biyopsi örnekleri v.b..
İdrar
Tükrük
BAL
Kan
Biyopsi örnekleri v.b..
Mikrobiyolojik tanıMikrobiyolojik tanı
Moleküler olmayan yöntemleroKültüroHistopatolojik incelemeo pp65 antijenemioSeroloji
Moleküler yöntemlero PCRoHibridizasyonoDNA dizi analizi
Moleküler olmayan yöntemleroKültüroHistopatolojik incelemeo pp65 antijenemioSeroloji
Moleküler yöntemlero PCRoHibridizasyonoDNA dizi analizi
KültürKültür
Zaman alıcı
Hızlı kültür metodları
Zaman alıcı
Hızlı kültür metodları
Hızlı kültürHızlı kültür
Shell vial
DEAFF
2-4 günde sonuç
Shell vial
DEAFF
2-4 günde sonuç
HistopatolojikHistopatolojik incelemeinceleme
Biyopsi örnekleri inklüzyon cisimcikleri(Baykuş gözü)
Duyarlılık düşük
Biyopsi örnekleri inklüzyon cisimcikleri(Baykuş gözü)
Duyarlılık düşük
pp65pp65 AntijenemiAntijenemi testitesti
Lökosit izolasyonu
Lam üzerine tespit
Erken CMV Ag ne karşıAb (floresinleişaretlenmiş) ile boyanır
Sonuç birkaç saatte
Lökosit izolasyonu
Lam üzerine tespit
Erken CMV Ag ne karşıAb (floresinleişaretlenmiş) ile boyanır
Sonuç birkaç saatte
SerolojiSeroloji
Moleküler YöntemlerMoleküler Yöntemler
HibridizasyonPCRKalitatifKantitatif
DNA dizi analizi
HibridizasyonPCRKalitatifKantitatif
DNA dizi analizi
PCRPCR
• Kalitatif• Kantitatifa) Miktar tayinib) Klinik takipc) Antiviral tedaviye yanıtd) Mutasyon tayinie) Hepsi
• Kalitatif• Kantitatifa) Miktar tayinib) Klinik takipc) Antiviral tedaviye yanıtd) Mutasyon tayinie) Hepsi
RTRT--PCR ??PCR ??
Kantitatif CMV-PCR viral yük saptama veCMV hastalığının gelişmesinde prediktifve primer diagnostik test
500 kopyanın üstünde devamlı artıştransplant hastalarında CMV hastalığınıgösterir
European Society for Organ Transplantation (2009)
Kantitatif CMV-PCR viral yük saptama veCMV hastalığının gelişmesinde prediktifve primer diagnostik test
500 kopyanın üstünde devamlı artıştransplant hastalarında CMV hastalığınıgösterir
RTRT--PCRPCRa) PCR daha duyarlı, pp65 daha spesifik.
b) İkisi bir arada kullanılarak tedaviyönlendirilmesi
c) PCR daha avantajlı
d) pp65 daha üstün
a) PCR daha duyarlı, pp65 daha spesifik.
b) İkisi bir arada kullanılarak tedaviyönlendirilmesi
c) PCR daha avantajlı
d) pp65 daha üstün
Genomik polimorfizmden dolayıkorunmuş gen bölgelerinin çoğaltılmasısonucu pp65’den hassas
Genomik polimorfizmden dolayıkorunmuş gen bölgelerinin çoğaltılmasısonucu pp65’den hassas
DİKKAT !!!DİKKAT !!!
Çoğaltılan gen bölgelerinin farklılığı
Yöntem içi farklılıklar
Kalibrasyon standartları
Duyarlılık farklılıkları
Çoğaltılan gen bölgelerinin farklılığı
Yöntem içi farklılıklar
Kalibrasyon standartları
Duyarlılık farklılıkları
Tercih: Ticari kitHasta takibinde aynı şartların sağlanması
STANDARDİZASYON
Bağımsız uluslararası kalite kontrol
Tercih: Ticari kitHasta takibinde aynı şartların sağlanması
STANDARDİZASYON
Bağımsız uluslararası kalite kontrol
DNA Dizi AnaliziDNA Dizi Analizi((SekanslamaSekanslama))
Sanger
Yeni nesil sekanslama (Pyrosequencing)
Sanger
Yeni nesil sekanslama (Pyrosequencing)
PyrosequencingPyrosequencing
Real Time, sekans tabanlı teknolojidir
Separasyon, jel, label ya da probgerektirmez
Real Time, sekans tabanlı teknolojidir
Separasyon, jel, label ya da probgerektirmez
Aynı anda 24 örneğin analizi…10-15 dk.
PyrosequencingPyrosequencing
TEŞEKKÜRLERTEŞEKKÜRLER
top related