animales transgénicos como herramientas
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Animales Transgénicos como herramientas de trabajo
Daniel Pérez-Witzke, M.Sc.
Laboratorio de Patología celular y molecular, Centro de Medicina Experimental, IVIC
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Mecanismos de recombinación en Mamíferos
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Técnicas para edición de genomas
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Clustered regularly interspaced short palindrome repeats (CRISPRs)
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Modelos de enfermedad
Animales Knockout
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Autoinmunidad TH2, Modelo
Lupus eritematoso sistémico
Kaveri y col. (2010). Basophils and Nephritis in Lupus. n engl j med 363;11
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Sistema Cre-LoxP
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Biología de la proteína HSP-70 en la fisiopatología de la hipertensión
arterial esencial
Daniel Perez-Witzke, MSc.
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Próximo paso: Noquear HPS-70
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Inhibición la expresión de los genes HSP70.1, HSP70.3
1. Sistema Cre-LoxP mediante cruces (knockout)
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Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes
[Rata Transgenica C]
Cre/Ksp-Cadherinpromotor renal
GFP (doble transgenico)[Rata transgenica A]
Células Renales5´ Ksp-
CadherinCre
Recombinasa
3´
3´ 5´
5´ LoxP
Promotor
LoxP
Exón 1HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
EnzimaCre
Transcripción/Traducción
Recombinación
5´LoxP
Exón 1 HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
Pro
mo
tor
LoxP
dsDNA
HSP70 -/-(knockout)
Ratas A-C homozigotos de la F3 (triple transgenico)
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Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes
[Rata Transgenica C]
Cre-mER(mutant Estrogen Receptor)
(doble transgenico)[Rata transgenica B]
Células Somáticas
5´mER Cre Recombinasa
3´
3´ 5´
5´ LoxP
Promotor
LoxP
Exón 1HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
EnzimaCre
Transcripción/Traducción
Recombinación
5´LoxP
Exón 1 HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
Pro
mo
tor
LoxP
dsDNA
HSP70 -/-(knockout)
Tamoxifeno
Ratas B-C homozigotos de la F3
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2. Sistema Cre-LoxP mediante infección con virus AAV-2-Cre
(knockout condicional)
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Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes
[Rata Transgenica C]
Células Renales
3´ Virus AAV-2 Cre Recombinasa 5´
5´ LoxP
Promotor
LoxP
Exón 1HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
EnzimaCre
Recombinación
5´LoxP
Exón 1 HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
Pro
mo
tor
LoxP
dsDNA
HSP70 -/-(knockout)
AAV-2/Cre
Transcripción 5´ Cre Recombinasa 3´
Traducción
Infección con virus con tropismo por células renales
ssDNA
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Sobreexpresión de los genesHSP70.1, HSP70.3
1. Sistema Cre-LoxP mediante cruces
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Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes
[Rata Transgenica C]
Células Renales
3´ Virus AAV-2 Cre Recombinasa 5´
5´ LoxP
PromotorWildtype
(Wt)
LoxP
Exón 1HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
EnzimaCre
RecombinaciónHomologa
AAV-2/Cre
Transcripción 5´ Cre Recombinasa 3´
Traducción
ssDNA
Pro
mo
tor β
A
LoxP
dsDNA
LoxP
5´ LoxP
Promotorβ-Actina
LoxP
Exón 1HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
PromotorβA
LoxP
dsD
NA
LoxP
Promotor Wt
LoxP
dsD
NA
LoxP
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Gracias