HELENA, minha querida esposa,

cujo apoio e incentivo so, para mim, fundamentais

"We must assure the bioavailability of our drug products to the best of our ability."

G. LEVY

AGRADECIMENTOS

Muitas so as pessoas a quem devo agradecer, pois de uma maneira ou de outrasempre colaboraram comigo. Porm, gostaria de fazer meno especial quelas que maisdiretamente auxiliaram na realizao deste trabalho:

Profa. Dra. Slvia Storpirtis, pela orientao e incentivo.

Profa. Dra. Vladi o. Consiglieri, pelo apoio e diviso das tarefas na parte experimental.

EMS Indstria Farmacutica Ltda. pelo auxlio financeiro concedido, sem o qual teriasido impossvel a execuo deste.

s estagirias que prestaram grande auxlio: Andria, Cristiane, Letcia e Clarislene.

Ao amigo Jos de Jesus pelo apoio, incentivo e grande amizade sempre demonstrados.

Aos funcionrios Sr. Jamil e Dna. Regina pelo apoio prestado quando da realizao do. . .

ensaio In VIVO.

Profa. Dra. Maria Valria Robles Velasco-de-Paola, pelo auxlio na parte experimental.

Aos voluntrios que participaram do ensaio in vivo cuja colaborao foi decisiva para osucesso deste.

s bibliotecrias Moema, pela reviso das referncias bibliogrficas e Maria Luiza pelaelaborao da ficha catalogrfica.

estatstica Ting pelo inestimvel apoio no tratamento dos dados.

s secretrias Bete, Ben e Elaine, pela ateno e incentivo sempre demonstrados.

todos,

agradeo sinceramente.

3.5.3. Critrios para aceitao da bioequivalncia entre duas

formulaes 29

3.6. Mtodo espectrofotomtrico para anlise quantitativa da ampicilina

em lquidos biolgicos 32

3.7. Biodisponibilidade e bioequivalncia de formas farmacuticas

slidas de ampicilina 34

4. MATERIAL E MTODOS 39

4.1. Amostras 39

4.2. Anlises fsicas e fsico-qumicas .40

4.2.1. Aspecto 40

4.2.2. Variao de peso dos comprimidos 41

4.2.3. Dimetro, espessura e dureza 41

4.2.4. Friabilidade 42

4.2.5. Tempo de desagregao 42

4.2.6. Perfil de dissoluo 42

4.2.7. Teste de dissoluo segundo a USP XXIII ed .47

4.2.8. Teor de ampicilina .47

4.3. Avaliao biofarmacutica in vivo 49

4.3.1. Seleo dos voluntrios 50

4.3.1.1. Critrios de incluso 50

4.3.1.2. Critrios de excluso 51

4.3.2. Protocolo do ensaio 51

4.3.3. Coleta das amostras 53

2

Assim, a Farmacotcnica, que sempre se ocupou com a elaborao

de sistemas que veiculassem de modo eficiente um dado princpio ativo,

comeou a atentar para esse fato, sobretudo, a partir dos trabalhos de

WAGNER (1961) e LEVY (1961). As propriedades fsico-qumicas do

frmaco, as caractersticas da forma farmacutica e fatores fisiolgicos

devem ser considerados quando da formulao e da produo de agentes

teraputicos efetivos e seguros. Estas consideraes constituem,

exatamente, o objetivo da Biofarmacotcnica.

Portanto, no mais possvel a concepo de uma nova formulao

de um comprimido, por exemplo, sem que se verifique se o princpio ativo

veiculado pelo sistema ser adequadamente absorvido. Deste modo,

atualmente, observa-se grande preocupao com os parmetros

relacionados biodisponibilidade e bioequivalncia de medicamentos

comercializados como similares. De fato, a "Food and Drug Administration"

(FDA-USA) foi responsvel pelo estabelecimento de critrios, de modo

que, na ltima reviso da "United States Pharmacopeia" (USP XXIII, 1995),

encontra-se captulo especial dedicado ao tema.

No Brasil, essa questo crtica tendo em vista o grande nmero de

especialidades farmacuticas contendo o mesmo princpio ativo,

fabricadas por laboratrios farmacuticos diferentes, de origem nacional e

transnacional (DEF, 1997). Sabe-se que poucos grupos de pesquisadores

brasileiros dedicam seus trabalhos ao assunto (MUSCAR & DE

NUCCI,1991; MENDES eta/., 1994) e que o ensaio de bioequivalncia no

real:zado quando do lanamento de um similef no mercado. A este fato,

juntam-se dois outros:

3

a) a tentativa de se implantar no pas uma poltica de medicamentos

genricos com o Decreto 793/93 (BRASIL, 1993);

b) o no reconhecimento, at pouco tempo, de patentes na rea

. farmacutica.

No primeiro caso, embora extremamente desejvel, qualquer poltica

de medicamentos genricos necessita, para obter xito, considerar que os

produtos cujos princpios ativos sejam idnticos, comercializados como

similares, sejam, quando requerido, bioequivalentes. Caso contrrio, tem-

se o risco de, ao escolher-se uma especialidade de menor custo, no se

obter tratamento eficiente, uma vez que esta pode no propiciar a mesma

eficcia clnica (HORVITZ, 1975; STORPIRTIS & CONSIGLlERI, 1995).

o no reconhecimento de patentes farmacuticas, fato queaparentemente representa vantagem ao pas, possibilita a cpia de

determinado produto, cuja patente ainda esteja vigorando, por empresas

nacionais. Como conseqncia, surge, rapidamente, grande nmero de

especialidades farmacuticas, mesmo para produtos de lanamento

recente no mercado.

Completam esse quadro, um sistema de Vigilncia Sanitria falho e

sem recursos materiais adequados, alm de uma legislao ultrapassada

e, conseqentemente, ineficiente. Assim, problemas de formulao

incorreta e/ou a utilizao de processos impropnos de manufatura,

totalmente em desacordo com as Boas Normas de Fabricao e Controle

(SINDUSFARM, 1995), tomam o mercado farmacutico brasileiro

4

vulnervel ao abastecimento com produtos de qualidade inferior e que,

portanto, apresentam risco potencial para quem os utiliza (VERNENGO,

1993).

A ampicilina, antibitico derivado da penicilina e largamente

comercializado no Brasil, um exemplo tpico para ilustrar tais fatos.

Embora seja um frmaco cuja patente j se encontra expirada, o nmero

de especialidades farmacuticas contendo ampicilina bastante

exagerado: 12 sob a forma de comprimidos, 33 de cpsulas, 29 de

suspenso oral e 17 sob a forma injetvel, oriundos de 45 laboratrios

distintos (KOROLKOVAS, 1996). Neste sentido, um estudo em que se

verifique a qualidade biofarmacutica de uma amostragem destes produtos

toma-se bastante interessante e, sobretudo, til para que se possa avaliar

a situao atual.

5

2- OBJETIVOS

o presente trabalho teve como escopo central a avaliao daqualidade biofarmacutica, tanto in vitro como in vivo, de especialidades

farmacuticas, sob a forma de comprimidos contendo ampicilina, na

dosagem de 500 mg, comercializados no mercado farmacutico brasileiro.

Deste modo, os objetivos foram:

CD Verificar a conformidade das especialidades farmacuticas estudadas

em relao s especificaes contidas em compndios oficiais;

a> Comparar o perfil de dissoluo (in vitro) dos produtos, bem como

parmetros relativos cintica de dissoluo, de modo a caracterizar mais

adequadamente a liberao do frmaco a partir de cada um destes;

Q) Avaliar a bioequivalncia entre duas destas especialidades

Iv farmacuticas.

6

3- REVISO BIBLIOGRFICA

3.1) GENERALIDADES

A ampicilina um antibitico semi-sinttico, derivado da penicilina,

que exibe largo espectro de ao. Quimicamente denominada cido 6-

[(aminotenilacetil)amino]-3,3-dimetil-7-oxo-4-tia-1-azabiciclo[3.2.0] heptano

-2-carboxlico, D(-)-u-aminobenzilpenicilina ou cido 6-[D(-)-u-

aminotenilacetamido] penicilnico (Figura 1).

Exerce sua ao antibacteriana por interferncia na sntese da

parede celular, inibindo a enzima transpeptidase, o que resulta em uma

fragilidade da mesma e sua conseqente ruptura (DOLERY, 1991; DRUG

EVALUATIONS, 1991).

Pode ser administrada por via oral, ao contrrio de outros derivados

da penicilina,. uma vez que sua estabilidade em meio cido adequada

(MUTSCHLER & DERENDORF, 1995). solvel em solues diludas de

cidos e hidrxidos alcalinos, fracamente solvel em gua e praticamente

insolvel em lcool, acetona, clorofrmio e ter, podendo apresentar-se

sob a forma anidra, triidratada ou sdica (AUSTIN et ai., 1965;

MARTINDALE, 1996; MERCK INDEX, 1996).

7

( N CH, 3,COOH

Figura 1 : Estrutura qumica da ampicilina

Seu espectro de ao abrange, alm dos microorganismos sensveis

penicilina, vrias outras bactrias Gram-negativas, tais como E. col e P.

mirabilis. Porm, microorganismos produtores de penicilinase so

resistentes ampicilina (MUTSCHLER & DERENDORF, 1995;

MARTINDALE, 1996).

Tendo sido introduzida na teraputica em 1962, na antiga Alemanha

Ocidental, sob a denominao comercial de Binotal (SITTING, 1988), a

ampicilina difundiu-se rapidamente, sendo possvel encontr-Ia, com

grande variedade de marcas comerciais, em diversos pases

(MARTINDALE,1996). No Brasil, como citado anteriormente, tambm

grande o nmero de especialidades farmacuticas que contm esse

princpio ativo. Sob a forma farmacutica comprimidos contendo 500 mg

so citadas 12 especialidades farmacuticas (DEF, 1997; KOROLKOVAS,

1996).

8

3.2) ASPECTOS FARMACOLGICOS DA AMPICILlNA

Quando administrada por via oral, a ampicilina estvel no pH cido

do estmago, porm, somente cerca de 35 a 50 % da dose so absorvidos

pelo trato gastrintestinal. Sua absoro prejudicada pela presena de

alimentos (KOROLKOVAS, 1995), interao estabelecida por WELLlNG et

ai. (1977), que observaram reduo significativa em indivduos que

receberam alimentao antes da ingesto do frmaco por via oral. Esta

observao era vlida, tambm, para a amoxicilina, porm, a interao

ampicilina-alimentos era clinicamente mais significativa, tendo em vista sua

absoro mais baixa, que resulta em nveis plasmticos ainda mais

reduzidos.

Apesar de pouco absorvido, esse frmaco extensamente

excretado, em sua forma inalterada, pela urina (cerca de 90% da

quantidade absorvida). Este fato foi atestado por vrios autores (JUSKO &

LEWIS, 1973; LOO et ai., 1974; JONES, 1977; EHRNEBO, 1979).

A baixa absoro da ampicilina, aps administrao oral, pode ser

atribuda ao seu carter anfotrico e sua limitada solubilidade em gua

(LOO et ai., 1974). Tentativas foram feitas para melhorar sua absoro

com a introduo de steres que so hidrolisados no trato gastrintestinal,

liberando a ampicilina bem prximo aos locais de absoro,

incrementando-se, desse modo, seus nveis sangneos e urinrios. Assim,

os citados autores constataram que a pivampicilina administrada oralmente

-produzia nveis sricos bem mais elevados do que o frmaco original,

equiparando-se ampicilina sdica, administrada por via intramusculc3r. A

bacampicilina, segundo ROZENCWEIG (1976), cinco vezes mais

9

rapidamente absorvida e produz nveis sricos e urinrios at 30% mais

elevados. Para a talampicilina possvel obter-se uma quantidade

excretada na urina acima de 90%, enquanto que, para a ampicilina esta

situa-se na faixa de 40-60% da dose administrada (JONES, 1977).

3.3) AVALIAO "IN VITRO" E CARACTERIZAO FSICA E FSICO-

QUMICA DE FORMAS FARMACUTICAS SLIDAS

As formas farmacuticas slidas so elaboradas de modo a

possibilitar a administrao de frmacos por via oral, tendo em vista as

inmeras vantagens da mesma (BANKER & ANDERSON, 1986). Porm,

como mencionado anteriormente, a liberao do princpio ativo contido

nestas formas relativamente complexa. Da a fundamental importncia de

uma correta formulao, quando do desenvolvimento de uma preparao

desta natureza (BURLlNSON, 1971; DAVIS, 1972).

De fato, o preenchimento de requisitos mnimos, por parte da

formulao, indispensvel para que se possa deduzir acerca de sua

viabilidade como sistema que ir veicular um agente teraputico. Assim,

vrias farmacopias oficializam mtodos que so utilizados no somente

no controle de qualidade rotineiro, mas tambm no desenvolvimento de

formas farmacuticas slidas, fornecendo resultados valiosos para a

seleo de uma formulao vivel (FERRAZ, 1993; WHO, 1993).

Alm do exposto, necessrio lembrar a recomendao da "Food

and Drug Administration" (FDA - USA), expressa no "CODE of federal

regulations" (1992), captulo 21, parte 320, subparte 320.25 (i), que

preconiza a realizao de ensaios descritos em compndios oficiais

10

previamente execuo de estudos de biodisponibilidade e

bioequivalncia.

Os ensaios mais comuns em formas farmacuticas slidas, em

especial os comprimidos, so:

3.3.1) VARIAO DE PESO

A verificao da variao de peso das unidades de determinado lote

de um produto farmacutico um indicativo importante da homogeneidade

e, consequentemente, da variao do teor do princpio ativo contido no

mesmo. Esta considerao pode ser levada a cabo se o componente em

maior quantidade na formulao for exatamente o princpio ativo e quando

a distribuio deste pelo p ou granulado for suficientemente uniforme

(SAKR, 1972; GORDON et ai., 1990).

So vrios os problemas decorrentes do processo de produo de

comprimidos que podem conduzir a uma variao de peso inaceitvel.

Estes podem estar relacionados ao granulado (propriedades de fluxo,

tamanho e uniformidade, variao na densidade, etc.) e a problemas

mecnicos, que podem surgir durante a compresso (GORDON et ai.,

1990).

Na tabela 1, so apresentados os limites de variao permitidos na

FARMACOPIA BRASILEIRA 4a. edio (FB IV, 1988), sendo admitido

no mais que duas unidades em desacordo com o estabelecido, porm,

nenhuma poder estar acima ou abaixo do dobro das por~entagens

indicadas.

11

Tabela 1: Variao de peso de comprimidos segundo a FB IV (1988).

FORMA FARMACEUTICA PESO MEDIO OU VALOR LIMITES DE

NOMINAL DECLARADO (mg) VARIAO (%)

comprimidos, ncleos para drgeas, at 80,0 10,0

comprimidos efervescentes, entre 80,0 e 250,0 7,5

sublinguais, vaginais e pastilhas acima de 250,0 5,0

at 25,0 15,0

drgeas e comprimidos revestidos entre 25,0 e 150,0 10,0

entre 150,0 e 300,0 7,5

acima de 300,0 5,O

A Farmacopia britnica (BP, 1993) determina os mesmos

parmetros de variao de peso para comprimidos, porm no existe,

como na FB IV (1988), uma distino entre revestidos e no revestidos.

Porm, na Farmacopia americana 23a. edio (USP XXIII, 1995)

os critrios para clculo da variao de peso so baseados no teor do

frmaco em cada unidade (total de dez) e no desvio padro relativo (DPR).

Segundo este compndio, o contedo individual deve estar entre 85 e 115

% do valor rotulado e o DPR menor ou igual a 6 %. Se uma unidade estiver

fora desta faixa ou se o DPR for superior a 6 % ou se ambas as condies

existirem, necessrio testar mais 20 unidades. Neste caso, no mais que

uma, do total de 30, pode estar fora da faixa de 75 a 125 % e o DPR no

deve exceder 7,8 %.

13

meno a este teste. Segundo a FB IV (1988) um comprimido deve

apresentar dureza mnima de 30 N.

3.3.4) FRIABILlDADE

A friabilidade de um comprimido est relacionada com a resistncia

deste abraso, oriunda de processos de embalagem, do transporte e

manuseio do medicamento (BURLlNSON, 1971). Em geral, este parmetro

est associado dureza do comprimido. Obtendo-se uma dureza elevada,

a friabilidade ser reduzida e vice-versa (SAKR, 1972), embora esta,

relao nem sempre seja vlida, como demonstraram SEITZ &

FLESSLAND (1965).

A determinao da friabilidade descrita na FB IV (1988), estabelece

que a porcentagem de p perdido deve ser inferior 1,5 % do peso dos

comprimidos. Na USP XXIII (1995) o limite estabelecido de no mais

que 1,0 %.

3.3.5) DESAGREGAO

Este ensaio, correntemente denominado de desintegrao, est

oficializado em vrias farmacopias (USP XXIII, 1995; BP, 1993; FB IV,

1988). Sua importncia perdeu espao, na medida em que o ensaio de

dissoluo foi sendo adotado ao longo dos anos. De fato, nem sempre

possvel estabelecer uma correlao direta entre a desagregao e a

dissoluo do frmaco (BURLlNSON, 1971; ABDOU, 1995). LEVY, em

1961, fez esta observao ao comparar a absoro do cido acetilsaliclico

com a dissoluo e a desintegrao de comprimidos contendo o frmaco.

15

De fato, um frmaco somente pode ser absorvido quando se

encontra dissolvido nos lquidos do trato gastrintestinal. Ento, a extenso

da absoro depende da velocidade com que o processo de dissoluo

ocorre, estabelecendo-se, deste modo, uma relao direta entre a

dissoluo e a eficcia clnica do produto farmacutico, embora, somente

um estudo de correlao entre dados in vitro e in vivo (biodisponibilidade)

pode, com segurana, comprovar tal fato (DAVIS, 1972; CARSTENSEN,

1977; HANSON, 1991; ABDOU, 1995). CABANA (1976) cita que a causa

mais freqente dos casos de bioinequivalncia, registrados pela FDA,

deviam-se baixa dissoluo dos produtos.

COX et aI. (1979) referem-se ao teste de dissoluo como um ensaio

que, aplicado s formas farmacuticas slidas, capaz de avaliar a

quantidade dissolvida do frmaco, em um volume conhecido de meio, a um

tempo pr-determinado, utilizando-se um equipamento (aparato)

especfico, controlando-se, cuidadosamente, todos os parmetros

envolvidos.

o ensaio de dissoluo foi inicialmente introduzido na USP XVIII(1970), onde eram descritas as especificaes para apenas sete produtos,

todos sob a forma de comprimidos. Com a evoluo implementada ao

longo destes anos, o ensaio se difundiu bastante, chegando a 532

monografias na ltima edio da Farmacopia americana (USP XXIII,

1995). Em geral, nestas monografias se estabelece um mnimo aceitvel

para a quantidade de frmaco dissolvida aps certo intervalo de tempo, o

que toma esse ensaio uma ferramenta til na avaliao rotineira de formas

fannacuticas slidas. O "critrio de aceitao" preconizado pela referida

Farmacopia encontra-se descrito na tabela 2 .

16

Tabela 2: Critrio de aceitao para o teste de dissoluo, segundo

recomendaes da USP XXIII (1995).

ESTGIO N DE AMOSTRAS CRITERIO

81 6 Cada unidade: no menos que Q + 5%

O total de 12 unidades (81 + 82) igualouS2 6 maior que Q e nenhuma unidade menor que Q

-15%

O total de 24 unidades (81 + 82 + 83) igual83 12 ou maior que Q, no mais que 2 unidades so

menores que Q - 15% e nenhuma unidade menor que Q - 25%

Q= porcentagem de frmaco dissolvido indicada em cada monografia

Porm, um ensaio em que se determine apenas um ponto, ou seja,

um valor de porcentagem de frmaco dissolvido, embora til em termos de

avaliao quantitativa, pode no significar uma avaliao real do processo

de dissoluo. GORDON et aI. (1990), citam o exemplo da

hidroclorotiazida. Neste caso, a USP XXIII (1995), especifica que aps 30

minutos, 60% do frmaco devem dissolver-se. possvel, ento, ocorrer

que os 40% restantes sejam dissolvidos muito lentamente, o que

constituiria um risco para a biodisponibilidade do frmaco, como concluem

estes autores.

Outro aspecto importante a se considerar a possibilidade de

calcular-se, com a obteno do perfil de dissoluo do frmaco a partir da

forma farmacutica, parmetros relativos cintica do processo. O ensaio

de dissoluo pode, se dessa forma executado, auxiliar na identificao de

17

formulaes que apresentem risco potencial para a biodisponibilidade do

frmaco.(WHO, 1993; SHAH et aI., 1995), alm de servir como ferramenta

til no desenvolvimento de formulaes, na medida em que possvel

selecionar aquelas de melhor desempenho no que diz respeito liberao

do frmaco (TINGSTAD, 1978; ABDOU, 1995).

A determinao da quantidade de frmaco dissolvido em vrios

intervalos de tempo diferentes, possibilita a obteno de dados

importantes, tais como a velocidade de dissoluo, a quantidade mxima

dissolvida e pontos nos quais podem ocorrer mudanas significativas no

processo (COX et aI., 1979).

Assim, vrios autores tm empregado esse recurso para realizar

estudos mais detalhados sobre a dissoluo de frmacos. Em geral,

nesses trabalhos, so comparados vrios parmetros de cintica de

dissoluo, tais como eficincia de dissoluo (ED), meia-vida de

dissoluo (t50%), constante de velocidade de dissoluo (K), aps a

eleio do modelo cintico mais adequado.

o tabela 3 apresenta os vrios tipos de tratamentos cinticosaplicveis linearizao de curvas de dissoluo.

Tabela 3: Tratamentos cinticos aplicveis Iinearizao de curvas de dissoluo.

MECANISMO DE L1BERAAO DO REFERENCIA

MODELO CINTICO EQUAO FRMACO BIBLIOGRFICA

a velocidade do processo de dissoluo

zero ordem Q = Qo-Kot independente da quantidade de frmaco JALAL et ai. (1989)

presente na forma farmacutica

primeira ordem InQ = InQo-K1t por difuso atravs do ncleo JALAL et ai. (1989)

Higuchi Q=Kt por difuso atravs da matriz HIGUCHI (1963)

JALAL et ai. (1989)

a dissoluo processa-se

Hixson-Crowel Q = Qo-K2t independentemente do pH. do meio e da JALAL et aI. (1989)

metodologia empregada

Q = quantidade dissolvida; Qo = quantidade inicial do frmaco; Ko. K1 K e K2 = constantes de velocidade de

dissoluo; t = tempo

.......ex>

19

GAIZER et aI. (1987) estudaram a cintica de dissoluo de

comprimidos de aspartato de potssio em matrizes base de cloreto de

polivinila. Os autores aplicaram os modelos de zero ordem, primeira ordem

e Higuchi, sendo que, das trs formulaes testadas, duas seguiram o

modelo proposto por Higuchi e uma o modelo de zero ordem.

Avaliando produtos comerciais contendo teofilina sob a forma de

cpsulas ou comprimidos de ao prolongada, JALAL et aI. (1989)

compararam dados de cintica de dissoluo empregando, para

linearizao das curvas, os modelos de zero ordem, primeira ordem,

Higuchi e Hixson-Crowell. Os autores selecionaram os modelos cinticos

mais adequados mediante comparao dos respectivos valores de

coeficiente de correlao (r) e concluram que existiam diferenas

significativas na velocidade de dissoluo dos produtos testados.

BHANJA & PAL (1989) aplicaram os modelos de zero ordem,

primeira ordem e de Higuchi para avaliar a cintica de dissoluo de

microcpsulas de sulfato de salbutamol revestidas com Eudragit RS 100.

Atravs da comparao dos respectivos coeficientes de correlao obtidos

para cada modelo, concluram os autores que o modelo de Higuchi era o

mais adequado para todas as microcpsulas por eles elaboradas.

Comparando diferentes formulaes de cloridrato de papaverina

obtidas por "spray-dried" e utilizando ftalatos de celulose, SENJKOVIC et

aI. (1990) aplicaram o modelo de Higuchi para a linearizao das curvas

de dissoluo. Assim, foi possvel classificar as preparaes obtidas aps

o clculo dos parrnetros cinticos correspondentes e apontar as mais

adequadas para uma liberao controlada do frmaco.

20

LPEZ et ai. (1991a) avaliaram a cintica de dissoluo de

formulaes de ampicilina sob as formas de cpsulas e comprimidos,

calculando parmetros tais como a velocidade e a ordem do processo de

dissoluo. Os resultados por eles obtidos indicaram que os produtos

apresentaram processo de liberao do frmaco de primeira ordem e que,

estatisticamente, as velocidades de dissoluo dos mesmos mostraram

diferenas significativas. Alm disso, concluram que a ampicilina, sob a

forma de comprimidos, era liberada mais rapidamente se comparada

liberao a partir das cpsulas.

Comprimidos de aspirina, sob trs denominaes comerciais, foram

avaliados por NIKOLlC et ai. (1992) utilizando trs modelos cinticos

distintos (primeira ordem, Hixson-Crowell e modelo de Higuchi). Testando

os produtos sob vrias condies experimentais de pH, velocidade de

agitao, volume de meio e temperatura, os autores concluram que o pH e

a velocidade de agitao eram os fatores de maior influncia sobre a

dissoluo. O modelo cintico mais adequado para a maioria dos casos foi

o de Hixson-Crowell (modelo da raiz cbica).

GORACINOVA et ai. (1995) compararam a dissoluo de disperses

slidas (coprecipitados) de cloridrato de verapamil elaborados com

polmeros diferentes. Os autores empregaram trs tratamentos cinticos

distintos: modelo de Higuchi, modelo da raiz cbica e cintica de primeira

ordem, concluindo que o modelo proposto por Higuchi adequava-se melhor

para aquelas formulaes.

AMPERIADOU & GEORGARAKIS {1995), investigaram, dentre

outros itens, a liberao do sulfato de salbutamol a partir de microcpsulas

21

por eles obtidas utilizando condies de preparo diferentes. Os melhores

valores de coeficiente de correlao foram obtidos para o modelo de

primeira ordem e, em alguns casos para o modelo de Higuchi.

Mudanas nos perfis de dissoluo de comprimidos de teofilina

obtidos por compresso direta, aps armazenagem sob diferentes

condies de umidade, foram relatadas por AOEYEYE et aI. (1995). Logo

aps a produo e quando armazenados em valores de umidade relativa

iguais a 52 %, os comprimidos no se adequaram ao modelo de Higuchi.

Entretanto, armazenados em ambiente com umidade relativa maior que

52%, as formulaes passaram a liberar o frmaco de modo que os

coeficientes de correlao obtidos a partir da linearizao das curvas de

dissoluo pelo modelo de Higuchi apresentaram-se mais adequados.

GONZLEZ et al.(1995b) compararam a dissoluo de formulaes

de cloridrato de propanolol existentes na Argentina e por eles elaborados

utilizando vrios parmetros de cintica de dissoluo. A maioria dos

produtos farmacuticos testados seguiu um processo de primeira ordem,

com exceo de duas formulaes que apresentaram uma cintica de zero

ordem. Os autores compararam, ainda, o parmetro eficincia de

dissoluo pelo mtodo da mnima diferena significativa (MOS) e

concluram que vrios dos produtos apresentavam um perfil de dissoluo

com diferenas estatisticamente significantes. Os mesmos autores

(GONZLEZ et aI., 1995a) trabalharam de forma idntica com

formulaes de ampicilina. Neste caso, verificaram, tambm, diferenas

significativas nos vrios perfis de dissoluo obtidos e que, para os

comprimidos da, ampicilina por eles obtidos, os mais adequados eram

22

aqueles elaborados por via seca ou compresso direta, utilizando-se como

excipiente AVICEL~ e AEROSIL~.

Para avaliar microcpsulas de cefradina (sob a forma de

comprimidos e p que no sofreu processo de compresso), TUNCEL et

aI. (1996) aplicaram os modelos cinticos de zero e primeira ordem e o

modelo de Higuchi s respectivas curvas de dissoluo, concluindo que o

modelo de Higuchi era capaz de descrever mais adequadamente o

processo de liberao do frmaco em ambos os casos.

AMMAR & KHALlL (1996) realizaram um estudo a partir de trs

produtos contendo rifampicina, analisando-se a dissoluo de seis lotes

diferentes de cada. Empregando o parmetro eficincia de dissoluo

(ED), os autores utilizaram trs mtodos de dissoluo: mtodo da cesta

(USP), mtodo do bquer e de fluxo, avaliando qual deles era capaz de se

correlacionar melhor com os valores por eles obtidos in vivo. Os resultados

indicaram que o mtodo da cesta preconizado pela Farmacopia

americana era o que melhor descrevia as diferenas entre os produtos e,

tambm, o que melhor se correlacionava com parmetros obtidos in vivo.

Em outro trabalho, AMMAR et ai. (1997) tambm basearam-se na

ED, utilizando os mesmos mtodos de dissoluo para comparar diferentes

produtos comerciais contendo cido acetilsaliclico. Neste caso, os autores

analisaram trs lotes de cada fabricante com a finalidade de verificar qual

mtodo era capaz de melhor identificar as diferenas entre as formulaes

testadas e qual destes se correlacionava melhor com dados obtidos in vivo.

O mtodo da cesta, preconizado pela Farmacopia amerIcana, julgaram os

23

autores, era o que melhor diferenciava as formulaes, porm, a melhor

correlao foi obtida com o mtodo do bquer.

3.4) DISSOLUO DE FORMAS FARMACUTICAS SLIDAS:

SITUAO BRASILEIRA

No Brasil, diversos trabalhos tm apontado problemas em relao

dissoluo de formas farmacuticas slidas. Assim, SANTORO et ai.

(1991), avaliando comprimidos de hidroclorotiazida e de cloridrato de

propranolol distribudos pela Central de Medicamentos (CEME), concluram

que, destes, 29 e 50%, respectivamente, no obedeciam s especificaes

da Farmacopia americana.

Em estudo in vitro de 5 especialidades farmacuticas contendo 100

mg de aminofilina, STORPIRTIS et ai. (1995) verificaram que destes, um

no estava de acordo com o especificado pela Farmacopia americana

para o teste de dissoluo e que, em relao ao perfil de dissoluo, estes

medicamentos apresentavam-se bastante diferenciados.

Perfis de dissoluo distintos foram tambm obtidos por SERRA et

ai. (1995), ao avaliarem comprimidos de nimodipina comercializados no

Brasil. Neste caso, os autores encontraram dentre os produtos, um que

praticamente no liberou o frmaco nas condies empregadas.

Comparando duas marcas comerciais contendo teofilina para

liberao prolongada, VELASCO-DE-PAOLA et al.(1995) verificaram que o

prodJto por eles designado como B, lilJerava o frmaco mais Iapidamente,

comportamento este, inadequado, em se tratando de uma forma

24

farmacutica de lenta liberao. Resultados similares foram obtidos por

YUGUE et aI. (1996) ao compararem a dissoluo do diltiazem a partir de

formas farmacuticas de ao prolongada e por FERRAZ et aI. (1997)

comparando lotes diferentes de dois produtos contendo cloreto de

potssio. Especificamente para este frmaco, a liberao deve ser lenta,

uma vez que altas concentraes do mesmo, em nvel do estmago, pode

causar reaes indesejveis. Porm, para um dos produtos, valores

elevados de porcentagem de frmaco dissolvido foram relatados.

Estudando a dissoluo de produtos contendo piroxicam e o frmaco

complexado com p-ciclodextrina, DEL COMUNE et ai. (1996) verificaram

que destes, 78% foram reprovados no teste de dissoluo e que seus

perfis de dissoluo eram bastante distintos, com destaque para o produto

com o complexo, que apresentou os melhores resultados.

Para comprimidos de cimetidina, FERRAZ et ai. (1997) encontraram,

dentre oito marcas comerciais, uma na qual a dissoluo, segundo as

recomendaes da Farmacopia americana, foi praticamente nula.

Produtos com liberao deficiente do frmaco foram observados por

FERRAZ et ai. (1997) ao pesquisarem a dissoluo de especialidades

farmacuticas contendo diclofenaco sob a forma de sal potssico. Para o

diclofenaco sdico, que apresenta proteo mucosa do estmago, foi

relatado que dos trs produtos estudados, dois mostraram perfis de

dissoluo inadequados em meio entrico artificial (FERRAZ et ai., 1997 ).

25

Em todos esses casos, evidencia-se que problemas de formulao

e/ou tecnologia empregada no preparo de formas farmacuticas slidas de

liberao convencional ou controlada so relativamente comuns no pas.

3.5) BIODISPONIBILlDADE E BIOEQUIVALNCIA DE MEDICAMENTOS

3.5.1) DEFINiO DE TERMOS

Vrias publicaes tm apresentado a descrio de conceitos

fundamentais na rea de biodisponibilidade de medicamentos (WHO,

1993; CID, 1982; CODE of federal regulations, 1992; STORPIRTIS, 1994).

A seguir sero definidos os termos mais comumente utilizados:

BIOFARMCIA OU BIOFARMACOTCNICA

Estudo dos fatores fsicos e fsico-qumicos relativos ao frmaco, em

sua forma farmacutica, e sua relao com o efeito farmacolgico

desencadeado no organismo.

BIODISPONIBILlDADE

a velocidade e a extenso pelas quais um frmaco absorvido, a

partir da forma farmacutica que o veicula, sendo, em geral, determinadas

atravs de dados de concentrao no sangue ou excreo urinria.

BIOEQUIVALNCIA

A bioequivalncia entre duas especialidades farmacuticas obtida

pela comparao dos dados de biodisponibilidade. Administradas na

mesma dose molar, sob as mesmas condies experimentais, a diferena

entre os parmetros relativos absoro no deve ser significativa.

26

EQUIVALENTES FARMACUTICOS

So produtos farmacuticos que contm o mesmo frmaco, sob

idntica forma de sal ou ster e idntica forma farmacutica e dosagem.

Entretanto, os excipientes utilizados no so, necessariamente, os

mesmos. Ambos produtos devem satisfazer aos ensaios farmacopicos

indicados.

ALTERNATIVAS FARMACUTICAS

So produtos farmacuticos que contm o mesmo frmaco, mas no

necessariamente o mesmo sal ou ster, a mesma quantidade e idntica

forma farmacutica e dosagem. Porm, devem satisfazer os ensaios

farmacopicos indicados.

PRODUTOS FARMACUTICOS INTERCAMBIVEIS

So produtos farmacuticos para os quais a substituio entre si

vivel, tendo como base a comprovao de sua bioequivalncia.

3.5.2) EXCREO URINRIA COMO PARMETRO PARA

DETERMINAO DA BIODISPONIBILlDADE E BIOEQUIVALNCIA DE

MEDICAMENTOS

Nos casos em que a via de eliminao principal do frmaco no

organismo a via renal, na forma inalterada (no metabolizada),

possvel avaliar sua biodisponibilidade, ou ainda comparar a

bioequivalncia entre duas formulaes que o contm, utilizando-se dados

de excreo urinria (SMITH & YAKATAN, 1979; CID, 1982).

27

Considerando-se, ento, que praticamente todo o frmaco absorvido

pelo organismo ser recuperado na urina e que a velocidade pela qual este

surgir como inalterado proporcional sua quantidade no organismo,

obtm-se dois parmetros importantes: a quantidade total de frmaco

excretado e a velocidade do processo.

CID (1982) cita trs requisitos necessrios para que se utilize dados

de excreo urinria em estudos farmacocinticos:

./ o frmaco deve ser excretado pelos rins, pelo menos ao redor de

10%, sob forma no metabolizada;

./ a urina deve ser coletada durante todo o tempo de durao do

experimento, sem a perda de nenhuma frao;

./ a coleta da urina deve realizar-se at que se elimine

completamente o frmaco no metabolizado ( pelo menos 7 meias-vidas

do frmaco, tempo em que 99,2% da dose administrada tenha sido

eliminada).

Alm destes, RITSCHEL (1992) enumera, tambm, alguns outros

itens que devem ser obedecidos para tornar vlido um estudo

farmacocintico, com base em dados de excreo urinria, aps

administrao de dose nica do frmaco:

./ a ingesto de gua durante o ensaio deve ser adequada para

po~sibilitar uma diurese constante e, assim, tornar possvel a obteno de

amostras de urina em quantidade suficiente para determinao do frmaco;

28

./ imediatamente antes da administrao do medicamento em

estudo, deve-se coletar urina a fim de garantir completo esvaziamento da

bexiga do voluntrio participante do ensaio;

./ a cada tomada de amostra, nos tempos preestabelecidos, deve-se

garantir o completo esvaziamento da bexiga. Deste modo, impede-se que

uma certa quantidade do frmaco presente naquele instante seja

considerado como parte de outro perodo de tempo;

./ para cada amostra de urina coletada deve-se anotar o volume

exato obtido;

././ caso a amostra de urina no fr imediatamente analisada, uma

alquota deve ser retirada, estabilizada com tolueno e imediatamente

congelada para posterior anlise;

Alguns aspectos da utilizao de dados de excreo urinria em

estudos de bioequivalncia so bastante interessantes, como por exemplo

a concentrao do frmaco que se atinge na urina, consideravelmente

maior do que a obtida no sangue, fato que facilita sua quantificao. Outra

vantagem o fato de que, no sendo necessria a mltipla retirada de

sangue do voluntrio, o ensaio toma-se menos traumtico para o grupo de

pessoas que dele participam. Por outro lado, existe uma maior dificuldade

em estabelecer diferenas com relao velocidade de absoro em um

estudo de bioequivalncia, em funo da impossibilidade de se obter um

muior nmero de amostras de urina durante 1 fase de absoro do frmaco

(SMITH & YAKATAN, 1979).

29

Em estudos de excreo urinria para a determinao da

biodisponibilidade e bioequivalncia de medicamentos, os seguintes

parmetros farmacocinticos podem ser avaliados (RITCHEL, 1992;

RUBlO, 1993; SHARGEL & YU, 1993; FAGIOLlNO, 1994):

A quantidade total de frmaco excretado na urina (Duo'');

A velocidade de excreo de frmaco na urina (dDu/dt).

No caso especfico da ampicilina, tem-se uma recuperao na urina

de aproximadamente 90% da dose absorvida, o que permite, ento, a

utilizao do parmetro quantidade total de frmaco excretado como

indicativo da absoro do mesmo e seu conseqente emprego na

avaliao da biodisponibilidade (JUSKO et aI., 1975).

Dados de excreo urinria foram recentemente utilizados por

VERGIN et aI. (1995) para avaliao da bioequivalncia de diferentes

formulaes de aciclovir.

3.5.3) CRITRIOS PARA ACEITAO DA BIOEQUIVALNCIA ENTRE

DUAS FORMULAES

As questes que envolvem a bioequivalncia entre formulaes tm

despertado maior ateno desde a dcada passada, porm, as

recomendaes acerca do tema, por parte de diversos rgos (FDA,

"Nordic Council of Med'icines', entre- outros), esto longe de serem

30

consensuais (PABST & JAEGER, 1990; STEINIJANS et ai., 1992; BLUME

& MIDHA, 1995).

Um passo importante nesta questo foi dado por WESTLAKE

(1972), que recomendou a introduo do intervalo de confiana (IC) como

mtodo estatstico para avaliao da bioequivalncia. A partir de ento,

muito se discutiu sobre este assunto e a proposta do autor foi destacando-

se, at que HAUCK & ANDERSON (1984) consideraram o teste de

hipteses insuficiente para uma indicao mais segura acerca da

bioequivalncia entre duas formulaes.

Durante as discusses por ocasio da "Bio Intemational'S9"

(McGILVERAY et aI., 1990), o IC foi recomendado como critrio de

aceitao e a FDA passou, ento, a adot-lo oficialmente para deciso

acerca da bioequivalncia, em conjunto com o clculo do nvel estatstico

de significncia (IN VIVO... , 1993).

Segundo a agncia norte-americana, a faixa de aceitao situa-se

entre SO a 120%, para um IC de 90%, calculado com base na razo dos

valores obtidos para determinado parmetro farmacocintico de cada

voluntrio do estudo.

Outro ponto que at pouco tempo ainda gerava dvidas

(McGILVERAY, 1990) a transformao logartmica dos valores para

posterior tratamento estatstico. A FDA recomenda esta transformao e,

neste caso, a faixa de aceitao desloca-se para SO a 125%, isto porque,

como resultadc seria obtida uma probabilidade mxima de concluso da

bioequivalncia de aproximadamente 0,9S. Com o deslocamento esse

31

valor ajusta-se a 1,0, no caso de produtos exatamente iguais (IN VIVO... ,

1993).

Nos ltimos anos, outras questes tm preocupado os especialistas

em bioequivalncia, sobretudo em relao aos frmacos com alta

variabilidade individual nos parmetros da absoro. A "Bio

Intemational'89" j havia identificado casos em que ocorria variabilidade

intra-individual maior que 30%, avaliada a partir do coeficiente de variao

residual (McGILVERAY et aI., 1990). Na reunio seguinte, a "Bio

Intemational'92", o assunto voltou pauta e discutiu-se, entre outras

questes, a possibilidade de alterar o IC nesses casos ou expandi-lo,

baseando-se em consideraes farmacodinmicas inerentes cada

frmaco (BLUME & MIOHA, 1993). Durante as discusses da edio de

1994 do evento, McGILVERAY, exemplificou a influncia da variabilidade

dos resultados na deciso sobre a bioequivalncia. Segundo o mesmo, a

probabilidade de existir a bioequivalncia entre duas formulaes de

100%, quando o coeficiente de variao da anlise de varincia (CVANOVA)

de 15%. Se o CVANOVA for maior ou igual 30 % essa probabilidade reduz-

se para 45% ou menos.

MIDHA et aI. (1995) comprovaram a necessidade de mudana nos

critrios de aceitao para frmacos com CVANOVA > 30 %, ao avaliarem a

bioequivalncia entre duas formulaes de nortriptilina. Trabalhando com

o frmaco e alguns de seus metablitos, foi verificado que nos casos em

que se obteve um CVANOVA > 30 % (o que ocorreu com um dos

metablitos, em dois dos trs parmetros farmacocinticos estudados), o

IC apresentou-se fora da faixa de a~itao em um dos "lados", Porm,

32

em todas as outras situaes obtiveram-se valores que mostraram,

nitidamente, que as formulaes testadas eram bioequivalentes.

3.6) MTODO ESPECTROfOTOMTRICO PARA ANLISE

QUANTITATIVA DA AMPICILlNA EM LQUIDOS BIOLGICOS

Para a execuo de um ensaio de bioequivalncia necessrio

dispor de mtodo de anlise adequado, considerando-se o material

biolgico utilizado no ensaio (sangue, plasma, urina, etc) e a sua

viabilidade, dado o grande nmero de amostras a serem quantificadas

(LESLlE, 1994; SMITH & YAKATAN, 1979). Assim, possvel encontrar

na literatura vrios mtodos utilizados para anlise de ampicilina em

lquidos biolgicos, tais como cromatografia lquida - HPLC - (HAGINAKA

& WAKAI, 1985; HAGINAKA & WAKAI, 1987), fluorimetria (PLAVSIC et

ai., 1989) e microbiolgico (DUGAL et ai., 1974; HILL et ai., 1974;

WHYATT et ai., 1976).

Dentre esses mtodos, o emprego da espectrofotometria no

ultravioleta (UV), proposto inicialmente por SMITH et ai. (1967) e adaptado

anlise de lquidos biolgicos por ANGELUCCI e BALDIERI (1971),

merece destaque.

A possibilidade de analisar espectrofotometricamente os derivados

semi-sintticos da penicilina teve incio com HERRIOTT (1946), que

props um mtodo que permitia, aps reao qumica em pH 4,6,

transformar a penicilina em um composto cuja absoro no UV (322 nm)

era adequada. STOCK (1954), verificou que o composto fomlado a partir

da reao era o cido penicilnico e que resultados mais reprodutveis

33

eram obtidos com a presena de sais de cobre em soluo tampo de pH

4,6. HOLBROOK (1958), aplicou o mtodo para determinar sais de

penicilina em formas farmacuticas (pomadas, injetveis e suspenses

orais). WEAVER & RESCHKE (1963) aplicaram o mesmo anlise da

meticilina, um derivado semi-sinttico da penicilina e j apontavam as

vantagens do mtodo: simplicidade, rapidez, sensibilidade e aplicabilidade

anlise de grande nmero de amostras.

Ento, SMITH et aI. (1967), adaptaram esse mtodo para analisar

ampicilina, realizando estudo bastante aprofundado em relao s

variveis que podem comprometer os resultados (tabela 4).

Tabela 4: Condies ideais para anlise espectrofotomtrica da ampicilina

segundo SMITH et aI. (1967).

VARIVEL

tempo de aquecimento

pH

concentrao de ons cobre

temperatura

CONDiO IDEAL

30 minutos

5,2

15 ~g/mL

Com base no trabalho de SMITH et aI. (1967), ANGELUCCI &

BALDIERI (1971) realizaram a determinao de ampicilina em lquidos

biolgicos (plasma, bile e urina). VILA JATO et aI. (1973) empregaram o

mtodo para quantificar a ampicilina em um estudo para obteno de

dados de excreo urinria do frmaco. A anlise espectrofotomtrica foi,

ento, utilizada por vrios autores em trabalhos que envolviam a

34

biodisponibilidade e bioequivalncia de formulaes contendo ampicilina

(ALI, 1981; ALI et aI., 1981; KHALlL et aI., 1984; OGUNBONA & AKANNI,

1985; LPEZ et aI., 1991).

o mtodo foi, ainda, correlacionado com o ensaio microbiolgico emum estudo de bioequivalncia entre duas formulaes de ampicilina (ALI et

aI., 1981).

3.7) BIODISPONIBILIDADE E BIOEQUIVALNCIA DE fORMAS

fARMACUTICAS SLIDAS DE AMPICILlNA

Em 1973, um Comit designado pela "Academy of General Practice

of Pharmacy" e pela "Academy of Pharmaceutical Sciences" dos EUA

publicou uma lista de frmacos classificados como de alto risco, moderado

ou baixo risco em relao problemas de biodisponibilidade, na qual a

ampicilina figurava como frmaco de risco moderado (REPORT ... , 1973).

Tal concluso parece ter sido originada aps a publicao, por McLEOO et

aI. (1972), de trabalho demonstrando que algumas especialidades

farmacuticas contendo ampicilina comercializadas no Canad eram

bioinequivalentes. Neste trabalho, os pesquisadores estudaram trs lotes

de cpsulas de ampicilina triidratada (250 mg), de um mesmo fabricante,

alm de duas outras especialidades farmacuticas. Concluram que no

havia diferena significativa quando eram comparados os trs lotes do

mesmo fabricante. Porm, diferenas significativas foram registradas

quando os dois outros produtos eram comparados a um desses lotes. A

partir de ento, vrias pesquisas foram publicadas sobre o assunto e as

concluses fvram as mais variJdas.

35

Algumas dessas publicaes, no obstante, foram bastante crticas

com relao ao trabalho de McLEOD e seus colaboradores. RITSCHEL

(1972) questionou, sob o ponto de vista da farmacocintica, alguns dos

aspectos da pesquisa. BARR et aI. (1972) discutiram, entre outros pontos,

o fato de que aquele estudo havia sido executado em parte e financiado

por uma indstria farmacutica, interessada nos resultados e que, em

editorial no mesmo peridico, os autores desaconselhavam a substituio

de medicamentos em funo dos resultados por eles obtidos. De forma

veemente, KLASS (1972) tambm questionou a ligao entre os autores do

trabalho e a indstria farmacutica.

J no ano seguinte era publicado novo trabalho sobre a

bioequivalncia de formulaes contendo ampicilina, tambm sob a forma

de cpsulas. MAYERSOHN et aI. (1973), na verdade, refizeram o estudo

anterior testando dois dos produtos que foram considerados

inequivalentes, alm de um terceiro. Baseando-se na rea sob a curva da

concentrao plasmtica do frmaco, concluram que no existiam

diferenas significativas entre as amostras, considerando-os, portanto,

bioequivalentes. Entretanto, os autores revelaram que um dos produtos

que apresentou melhora considervel em seu desempenho havia recebido

modificaes em sua formulao original, com a adio de um

desagregante e discutiram, a partir destes resultados, a importncia da

formulao na eficcia da forma farmacutica. Os pesquisadores

verificaram, ainda, a grande variabilidade intra-individual da ampicilina

quando ministraram para os mesmos voluntrios, o mesmo produto, do

mesmo lote, em ocasies diferentes e constataram grande desigualdade

entre os resultados.

37

o restante apenas distribuidores dos produtos elaborados pelos mesmos

que recebiam denominaes comerciais distintas. Destes produtos, apenas

um apresentava ampicilina sob a forma anidra e os demais sob a forma

triidratada.

No Chile, ANDRADE et ai. (1978), tambm no encontraram

diferenas significativas entre trs marcas comerciais de cpsulas de

ampicilina, sendo que destes dois estavam sob a forma de ampicilina

triidratada e um sob a forma anidra.

Outrossim, ALI (1981) estudou a bioequivalncia entre oito diferentes

marcas comerciais de ampicilina (cpsulas - 500 mg) existentes no Sudo

e concluiu que estas formulaes, em sua maioria, no eram

bioequivalentes. interessante notar que estes produtos originaram-se de

oito pases diferentes (importados) e que todos, exceto um, apresentavam

a ampicilina sob a forma triidratada.

Entretanto, ALI & FAROUK (1981) investigaram a biodisponibilidade

da ampicilina sob as formas anidra e triidratada, a partir de cpsulas

contendo 250 mg do frmaco, sendo duas preparaes comerciais do

Sudo (uma sob forma anidra e outra triidratada) e duas outras obtidas de

enchimento de cpsulas sem excipiente, uma de cada forma de ampicilina.

A concluso a que chegaram aumentou a dvida em relao

biodisponibilidade das duas formas: a ampicilina anidra revelou ser melhor

absorvida que a forma triidratada, e que a formulao exerceu, como

esperado, marcante influncia.

38

Produtos bioinequivalentes foram tambm encontrados por

OGUNBONA & AKANNI (1985) na Nigria, ao compararem a

biodisponibilidade de trs marcas comerciais de cpsulas contendo 250

mg de ampicilina.

PLAVSIC et ai. (1989) ao investigarem a bioequivalncia entre

formas farmacuticas contendo ampicilina (500 mg), oriundas de dois

fabricantes distintos, concluram que no havia diferena significativa entre

as mesmas formas farmacuticas de cada laboratrio.

Estudando quatro diferentes formas farmacuticas slidas contendo

ampicilina, LPEZ et ai. (1991) encontraram diferenas na

biodisponibilidade, verificando que cpsulas de gelatina mole

apresentavam melhor absoro em relao aos demais produtos.

ATAY et ai. (1991) avaliaram trs formulaes de cpsulas contendo

ampicilina (uma sob a forma anidra e duas sob a forma triidratada) e

concluram que, embora houvesse grande variabilidade entre os

voluntrios, os produtos poderiam ser considerados bioequivalentes.

39

4- MATERIAL E MTODOS

4.1) AMOSTRAS

Foram estudadas 4 (quatro) especialidades farmacuticas, sob a

forma de comprimidos, contendo 500 mg de ampicilina, sendo que, para

um dos laboratrios, foram testados 2 (dois) lotes diferentes, totalizando 5

(cinco) amostras distintas. Estas correspondiam s amostras comerciais de

seus respectivos laboratrios fabricantes, colocados venda no comrcio

varejista farmacutico. A tabela 5 descreve com detalhes o material

pesquisado.

Tabela 5: Designao adotada, nmero de lote e forma cristalina contida

nas especialidades farmacuticas estudadas, sob a forma de comprimidos

contendo 500 mg de ampicilina.

DESIGNAO NUMERO DO fORMA CRISTALINA DE

ADOTADA LOTE AMPICILINA

A1 052.93 triidratada

A2 165994A triidratada

B 025116C triidratada

C 6665 anidra

D 10219 anidra

40

4.2) ANLISES FSICAS E FSICO-QuMICAS (ANLISE

BIOFARMACUTICA IN VITRO)

Para a caracterizao fsica e fsico-qumica das formulaes de

ampicilina 500 mg, sob a forma de comprimidos, foram realizados os

seguintes ensaios:

./ aspecto;

./ variao de peso dos comprimidos;

./ dimetro, espessura e dureza;

./ friabilidade;

./ tempo de desagregao;

./ perfil de dissoluo;

./ teste de dissoluo, segundo a USP XXIII ed.;

./ teor de ampicilina.

4.2.1) ASPECTO

Os comprimidos, de cada fabricante, foram examinados quanto s

suas caracterstica3 externas tais como cor, formato, integridade, presena

ou ausncia de revestimento, gravaes, entre outros.

41

Para a realizao desse ensaio no foi empregado qualquer

instrumento, sendo os comprimidos apenas observados a olho nu,

anotando-se suas caractersticas. Foram tomados, aleatoriamente, 10

comprimidos.

4.2.2) VARIAO DE PESO DOS COMPRIMIDOS

Foram pesados 20 comprimidos de cada fabricante em balana

analtica METTLER H15, anotando-se os valores individuais. A mdia foi

calculada, bem como o coeficiente de variao e o desvio-padro. O teste

de variao do contedo, preconizado pela USP XXIII (1995) tambm foi

aplicado, considerando-se o peso individual de 10 comprimido e o teor de

ampicilina encontrado para cada especialidade farmacutica testada. O

desvio padro relativo (DPR) foi calculado, de acordo com a citada

Farmacopia.

4.2.3) DIMETRO, ESPESSURA E DUREZA

Para este ensaio, utilizou-se equipamento PHARMATEST modelo

PTB 311. Este equipamento fornece, automaticamente, as dimenses do

comprimido (dimetro e espessura) e a resistncia do mesmo ruptura

(dureza). Foram realizadas 10 determinaes para cada especialidade

farmacutica, calculando-se a mdia, o desvio-padro e o coeficiente de

variao correspondentes.

42

4.2.4) FRIABILlDADE

o ensaio de friabilidade dos comprimidos foi executado emfriabilmetro tipo ROCHE, marca TICA. Para pesagem dos comprimidos

utilizou-se balana analtica METTLER H15. Foram tomados 10

comprimidos.

4.2.5) TEMPO DE DESAGREGAO

Neste ensaio (tambm denominado tempo de desintegrao), em

que foi utilizado o equipamento descrito na FB IV (1988), USP XXIII (1995)

e BP (1993), da marca TICA, verificou-se o tempo necessrio para a

desagregao do comprimido, sem que houvesse presena de resduos

entre a tela do aparelho e os discos. Foram tomados, individualmente, 5

(cinco) comprimidos e anotados os tempos de desagregao.

4.2.6) PERFIL DE DISSOLUO

o perfil de dissoluo das diferentes especialidades farmacuticasaqui testadas foi traado a partir da quantificao da ampicilina nas cubas

de dissoluo, em intervalos de tempo preestabelecidos. O equipamento

utilizado (HANSON RESEARCH CORP., modelo 72 RL) obedece a todas

as especificaes descritas na FB IV (1988), USP XXIII (1995) e BP

(1993). As condies utilizadas encontram-se descritas na tabela 6.

43

Tabela 6: Condies utilizadas para determinao do perfil de dissoluo

das especialidades farmacuticas.

Sistema de agitao mtodo 1 (cesto)

Velocidade 100 rpm

Meio de dissoluo gua desgaseificada

Volume de meio 900mL

Alquota retirada 10mL

Deteco (mtodo) Espectrofotometria UV (320 nm)

Tempo (amostragem) 1,5, 10,20,30 e 45 minutos

Para essa anlise foram utilizados 3 (trs) comprimidos de cada

laboratrio. O procedimento adotado foi o seguinte: decorridos 1, 5, 10, 20,

30 e 45 minutos aps o incio do ensaio, foram retiradas alquotas de 10

mL do meio de dissoluo, fazendo-se, em seguida, a reposio deste com

gua desgaseificada mesma temperatura.

A alquota retirada era, aps filtrao em papel de filtro quantitativo

faixa azul (FRAMEX), diluda convenientemente com soluo de sulfato

de cobre tamponado. Desta diluio, tomou-se uma poro de 10 mL, em

tubo de ensaio que, aps tampado, foi levado banho-maria regulado 75

cC, por um perodo de 30 minutos. Decorrido esse tempo, a amostra foi

retirada do aquecimento e colocada em banho de gelo at que atingisse a

temperatura ambiente, para efetuar-se a leitura da absorvncia em

espectrofotmetro INCIBRS MF 200, 320 nm.

44

Para o clculo da concentrao de ampicilina nas amostras, utilizou-

se padro de ampicilina anidra, de potncia igual a 993,71 ~g/mg,

gentilmente cedido pela EMS Indstria Farmacutica Ltda. Quando da

leitura espectrofotomtrica das amostras, uma soluo padro de

ampicilina anidra, de concentrao aproximada de 20 j..lg/mL foi tratada de

maneira similar, efetuando-se em seguida, a leitura de sua absorvncia.

Realizou-se, ainda, varredura no intervalo compreendido de 250 a

400 nm de uma amostra que sofreu a reao descrita e outra resultante

apenas da diluio do meio de dissoluo.

Os valores obtidos foram corrigidos, considerando-se as alquotas

retiradas (ARONSON, 1993) e expressos na forma de grficos da % de

frmaco dissolvido versus tempo.

Alm disso, foram aplicados trs modelos matemticos para

interpretao da cinticp de dissoluo, visando a determinao da ordem

do processo:

./ Cintica de zero ordem: foram traados, para cada produto,

grficos de tempo versus quantidade total menos quantidade de frmaco

dissolvido (T x Qinf - Qt);

./ Cintica de primeira ordem: foram traados, para cada

produto, grficos de tempo versus log neperiano da porcentagem de

frmaco no dissolvido (T x In %ND);

45

./ Modelo de Higuchi: foram traados, para cada produto,

grficos da raiz quadrada do tempo versus porcentagem de frmaco

dissolvido ("T x %0);

o modelo mais adequado para cada especialidade farmacutica foiselecionado aps a anlise de regresso, considerando-se os parmetros r

e F, das curvas de dissoluo, onde foram tomados apenas os pontos que

correspondiam fase ascendente das mesmas.

Foram tambm calculados os seguintes parmetros relativos

cintica de dissoluo:

./ Constante de velocidade de dissoluo (K): aps a seleo

do modelo mais adequado para cada especialidade farmacutica,

possvel obter-se o valor de K, uma vez que este corresponde inclinao

da reta;

./ Meia-vida de dissoluo (t5O%): este parmetro foi calculado

em seguida obteno dos valores de K correspondentes, empregando-se

as seguintes frmulas, de acordo com a cintica do processo de

dissoluo:

46

tso% = Qcx:>

2 x Ko (zero ordem)

em que: Qcx:> = quantidade total dissolvida

Ko = constante de velocidade de dissoluo de

zero ordem

tso% =0,693 (1 ordem)Kd

em que: Kd = constante de velocidade dedissoluo de primeira ordem

tso% =%O x './ tem que: %0 = porcentagem dissolvida (modelo de Higuchi)

t = tempo (minutos)

./ Eficincia de dissoluo (EO): a eficincia de dissoluo

(EO) foi calculada a partir das curvas de % frmaco dissolvido versus

tempo (perfil de dissoluo). Obtendo-se a rea sob a curva (ASC) e a

rea total do grfico (superfcie), a EO calculada pela razo entre estes

dois parmetros e expressa em porcentagem.

Os valores de EO obtidos foram submetidos, ainda, anlise de

varincia (ANOVA), a fim de se detectar a existncia de diferena

significativa entre os mesmos. Em seguida, efetuou-se uma comparao

destes mesmos valores, por intermdio dos testes de Tukey e da mnima

diferena significativa - MOS (SOLTON, 1990).

47

4.2.7) TESTE DE DISSOLUO SEGUNDO A USP XXIII ed.

Alm do perfil de dissoluo, executou-se tambm o teste de

dissoluo especificado para comprimidos de ampicilina da USP XXIII ed.

(1995). Neste caso, a amostragem deu-se aps 45 minutos de ensaio,

sendo as demais condies, idnticas quelas descritas no item anterior,

inclusive para a quantificao do frmaco dissolvido.

4.2.8) TEOR DE AMPICILlNA

A quantidade de frmaco presente em cada especialidade

farmacutica testada foi avaliada pelo mtodo iodomtrico (USP XXIII,

1995), procedendo-se da seguinte maneira: foram triturados, com auxlio

de gral de porcelana e pistilo, e pesados 10 comprimidos. Do p resultante

tomou-se quantidade equivalente cerca de 62,5 mg de ampicilina e diJuiu-

se para 50 mL com gua, agitando-se at completa dissoluo. Foram

tomadas duas alquotas de 2 mL desta soluo, transferindo-as para dois

erlenmeyers com tampa, identificados como AB e AE. O padro foi

preparado pesando-se analiticamente 62,5 mg de padro de ampicilina (o

mesmo utilizado no ensaio de dissoluo) e diluindo-se com gua para 50

mL. Foram tomadas duas alquotas de 2 mL desta soluo transferindo-as

para dois erlenmeyer com tampa, identificados como PB e PE.

Foram, ento, adicionados ao erlenmeyer contendo a amostra e ao

outro, contendo o padro, 2,0 mL de NaOH 1N . Aps agitao, estes

foram mantidos em repouso por 15 mino Em seguida, juntaram-se 2 mL de

Hei 1,2 N a agitou-se novamente. Foram, ento, acrescentados 10 mL de

iodo 0,01 N , tampando-se os frascos e deixando-os em repouso, ao abrigo

48

da luz, por 15 mino O excesso de iodo foi titulado com tiossulfato de sdio

0,01 N. Prximo ao ponto de viragem, adicionou-se uma gota de amido e

continuou-se a titulao at o desaparecimento da cor azul.

Para a prova em branco procedeu-se como descrito para o ensaio,

porm, sem a adio da soluo de NaOH 1N, utilizando-se apenas 2,0

mL de Hei 1,2 N .

A quantidade, em mg, de ampicilina anidra presente na amostra, foi

calculada pela seguinte frmula:

c= VAB -VAE x mPXP xdi/AXPMVPB - VPE di/P mA

em que:

VAS = volume gasto de soluo de tiossulfato de sdio 0,01 N (SV) naprova em branco da amostra (AS)

VAE =volume gasto de soluo de tiossulfato de sdio 0,01 N (SV) nodoseamento da amostra (AE)

VPS = volume gasto de soluo de tiossulfato de sdio 0,01 N (SV) naprova em branco do padro (AS)

VPE =volume gasto de soluo de tiossulfato de sdio 0,01 N (SV) nodoseamento do padro (PE)

mP =massa de padro de ampicilinaP =potncia do padro de ampicilinadil P =diluio (volume final) da soluo do padrodil A =diluio (volume final) da soluo obtida da amostraPM =peso mdio dos comprimidosmA =massa da amostra utilizada no ensaio

49

A tabela 7 apresenta resumo dos ensaios executados, nmero de

comprimidos testados e a(s) respectiva(s) referncia(s) bibliogrfica(s).

Tabela 7: Ensaios fsicos e fsico-qumicos executados para a avaliao

das especialidades farmacuticas, nmero de comprimidos testados e

referncias bibliogrficas

ENSAIOS N DE REFERENCIAS

COMPRIMIDOS BIBLIOGRFICAS

Aspecto 10 ----

Variao de peso 20 USP XXIII (1995); FB IV (1988)

Dimetro, 10 FB IV (1988)*

espessura e dureza

Friabi Iidade 10 USP XXIII (1995); FB IV (1988)

Tempo de USPXXIII(1995); FB IV (1988);

desagregao 5 BP (1993)

Perfil de dissoluo 3 USP XXIII (1995)

Teor de ampicilina 10' USP XXIII (1995)

* Apenas para dureza

4.3) AVALIAO BIOFARMACUTICA "IN VIVO" (BIOEQUIVALNCIA)

Para o ensaio de bioequivalncia foram utilizadas duas

especialidades farmacuticas sob a forma de comprimidos, contendo 500

mg de ampicilina: A2 (considerado o produto-teste) e B (produto de

referncia).

50

4.3.1) SELEO DOS VOLUNTRIOS

Os voluntrios que participaram do presente estudo foram

selecionados entre a equipe de "internos" da Clnica Mdica do HU/USP e

do Corpo de E;nfermagem do Hospital. Os candidatos foram examinados

pela Diviso de Clnica Mdica, obedecendo-se os seguintes critrios:

4.3.1.1) CRITRIOS DE INCLUSO

Apresentar bom estado de sade, idade entre 18 e 35 anos e peso dentro

do ideal 10%;

No apresentar patologias cardacas, renais, gastrintestinais, hepticas,

pulmonares, neurolgicas, psiquitricas, hematolgicas ou metablicas;

No apresentar antecedentes de hipersensibilidade a medicamentos;

No ingerir medicamentos uma semana antes do estudo ou durante sua

realizao;

No ingerir bebidas alcolicas 48 horas antes do ensaio e durante sua

realizao;

No fumar e no ingerir caf, ch ou outras bebidas xnticas durante o

ensaio;

A participao de voluntrios do sexo feminino deve estar condicionada

a que no estejam em estado de gravidez ou em perodo de

amamentao;

Estar disponvel para participar de todas as fases do estudo.

51

4.3.1.2) CRITRIOS DE EXCLUSO

Ter participado de outro estudo como voluntrio nos ltimos trs meses;

Fumar 20 ou mais cigarros por dia;

Antecedentes de abuso de lcool ou drogas;

Consumo regular de lcool (dois copos de cerveja ou quatro clices de

vinho por dia).

Alm disso, os voluntrios devem apresentar valores normais para

os seguintes exames laboratoriais a que foram submetidos:

Hematolgico;

Urina tipo I;

Dosagens bioqumicas: aspartato transaminase, alamina transaminase,

fosfatase alcalina, uria e creatinina.

4.3.2) PROTOCOLO DO ENSAIO

Participaram do ensaio de bioequivalncia das formulaes 16

voluntrios sadios (tabela 8), sendo 7 indivduos do sexo masculino e 9 do

sexo feminino, cujas idades variaram de 21 a 26 anos (mdia de 23 anos)

e peso entre 48 e 10S kg (mdia de 68,2 kg).

Aprovado, previamente, pela Comisso de tica do HUIUSP. Processo CEP 001/ 94 .

52

o ensaio foi executado segundo estudo cruzado aleatrio (BOLTON,1990; DEL PINO, 1993) que possibilitou a administrao das 2

fonnulaes (A2 e B) a todos os voluntrios, como mostra a tabela 8. Os

produtos foram administrados em duas fases distintas: 1 e 2, havendo

entre estas um perodo de "wash-out" de dois dias (48 horas).

Tabela 8: Planejamento estatstico utilizado no estudo para a

administrao dos produtos A2 e B e dados de idade e sexo dos

voluntrios.

VOLUNTARIO N FASE 1* FASE 2* IDADE SEXO

1 A B 21 M

2 A B 24 F

3 B A 23 F

4 B A 23 M

5 B A 23 M

6 B A 23 F

7 A B 22 M

8 A B 23 M

9 A B 24 M

10 A B 23 F

11 B A 22 F

12 B A 25 M

13 A B 23 F

14 B A 22 F

15 B A 26 F

16 A B 23 F

* Fases do ensaio

53

Os voluntrios receberam, quando da administrao do

medicamento, 200 mL de gua. Aps cada coleta de urina, nova ingesto

de gua ou suco de laranja foi efetuada, o que garantiu a diurese.

Decorridas 4 horas do ensaio, os voluntrios receberam refeio

padronizada (almoo) e aps 8:30 h foi servido lanche, tambm

padronizado, a todos os participantes do ensaio. Esta ligeira refeio foi

constituda de sanduche de po com verduras e queijo ou presunto,

refrigerante no cafeinado e um doce.

4.3.3) COLETA DAS AMOSTRAS

As amostras de urina dos voluntrios foram coletadas nos seguintes

intervalos de tempo, aps a administrao do produto: O, 1, 2, 4, 6, 8, 10 e

12 horas.

Aps cada coleta, verificaram-se o volume e o pH da urina de cada

voluntrio, retirando-se, ento, alquota, de aproximadamente 20 mL para

anlise.

4.3.4) ANLISE DA AMPICILlNA

As amostras de urina foram analisadas, em duplicata, no mesmo dia

das coletas. Utilizou-se, para a quantificao da ampicilina, o mtodo

espectrofotomtrico inicialmente descrito por SMITH et aI. (1967). O

procedimento adotado foi o seguinte:

54

Tomar 2 mL da urina e diluir para 100 mL com soluo de sulfato de

cobre tamponado. Transferir 10 mL desta soluo para um tubo de ensaio,

fechar e levar um banho-maria regulado 75 oCo Aps 30 minutos,

remover o tubo do banho e resfriar com auxlio de banho de gelo.

Determinar a leitura em 320 nm, utilizando como branco uma amostra que

no sofreu aquecimento.

4.3.5) CONSTRUO DA RETA DE CALlBRAO

A partir de solues de ampicilina padro (potncia =993,71 pg/mg)em tampo fosfato (pH 5,2) cujas concentraes variaram de 2,0 25,0

pg/mL, foi construda reta de calibrao, 320 nm, aps reao descrita no

item anterior.

4.3.6) PARMETROS FARMACOCINTICOS

Para avaliao da biodisponibilidade das formulaes, adotou-se

como parmetro fundamental a quantidade de ampicilina excretada na

urina (Dual). Foram ento, traadas curvas de quantidade de ampicilina

excretada (acumulada) versus tempo. Calculou-se tambm a velocidade

mxima de excreo urinria da ampicilina - (dDu/dt)mx - construindo-se a

curva de velocidade de excreo do frmaco (dDu/dt) versus intervalo

mdio de tempo (tm).

55

4.3.7) ANLISE ESTATSTICA

Para avaliao da existncia ou no do efeito de grupo, ou seja, se a

ordem de administrao dos produtos A2 e S interferia nos resultados

obtidos, aplicou-se o teste t pareado. Neste, investigado se a mdia das

diferenas observadas entre A2 e S, para um mesmo voluntrio, igual a

zero. Para tanto, so formados dois grupos:

I - grupo de voluntrios que inicialmente tomaram o produto A2 (fase I) e

posteriormente S (fase 11)

II - grupo de voluntrios que inicialmente tomaram o produto S (fase I) e

posteriormente A (fase 11).

A constatao da existncia ou no de diferena significativa entre

os produtos A e S para os valores mdios de Duoo e (dDu/dt)mx foi

realizado aplicando-se os seguintes testes:

./ teste t (paramtrico)

./ teste de Mann-Whitney (no-paramtrico)

Calculou-se, tambm, para Duoo e (dDu/dt)mx o intervalo de confiana

(valores logaritmados), obtido por intermdio da seguinte frmula (DEL

PINO, 1993):

56

IC =t. si . ~2n

Em que:

t =valor tabelado do teste t de Student para n-2 e 90 %si =resduo da ANOVA

Aps execuo da ANOVA com a estimativa da variao ocorrida

para cada voluntrio, obteve-se o coeficiente de variao da ANOVA

(CVANOVA) para Ou'" e (dDu/dt)mx , por intermdio da seguinte frmula

(BLAND, 1995):

CVANOVA =~QMRX

Em que:

QMR = quadrado mdio relativo (obtido a partir da tabela da

ANOVA)

X =valor mdio do parmetro farmacocintico correspondente

57

5- RESULTADOS

5.1) ANLISES FSICAS E FSICO-QuMICAS

5.1.1) ASPECTO

o resultado do exame visual dos comprimidos estudados encontra-se descrito na tabela 9.

Tabela 9: Descrio do aspecto dos comprimidos de ampicilina 500 mg

utilizados no estudo.

FABRICANTE

A1

A2

B

C

D

DESCRIAO

comprimidos de aspecto uniforme, ntegros,

retangulares, cor cinza, sem gravaes,

revestidos

comprimidos de aspecto uniforme, ntegros,

retangulares, cor branca, sem gravaes e

sem revestimento

comprimidos de aspecto uniforme, ntegros,

retangulares, cor branca, sem gravaes e

sem revestimento

comprimidos de aspecto uniforme, ntegros,

arredondados, cor alaranjada, sem gravaes

e sem revestimento

comprimidos de aspecto uniforme, ntegros,

arredondados, cor branca, sem gravaes e

sem revestimento

60

Tabela 11: Resultados da avaliao do contedo individual do frmaco,

de acordo com a USP XXIII (1995), para os produtos A1, A2, S, C e D,

calculado a partir do teor dos comprimidos e do peso individual de 10

unidades; os valores esto expressos em porcentagem.

A1 A2 B C D

1 84,80 106,70 108,70 103,05 92,55

2 83,80 103,23 106,55 105,22 93,78

3 83,35 102,62 107,07 104,12 91,74

4 84,55 103,16 107,75 103,89 96,28

5 82,78 101,43 107,34 104,73 95,78

6 83,85 103,16 106,90 105,63 92,49

7 83,69 103,42 107,08 104,01 99,77

8 83,77 101,97 106,71 101,03 98,79

9 84,54 104,12 107,98 103,70 95,49

10 84,40 105,09 106,85 105,22 88,56

MDIA 83,95 103,49 107,29 104,06 94,52

DP 0,62 1,52 0,67 1,33 3,38

DPR 0,74 1,47 0,62 1,28 3,57

DP =desvio padroDPR =desvio padro relativo

5.1.3) DIMETRO, ESPESSURA E DUREZA

Na tabela 12 encontram-se os valores obtidos para as medidas dos

comprimidos, bem como sua dureza. So expressos, tambm, a mdia e o

desvio-padro correspondentes.

62

Tabela 13: Friabilidade, teor de ampicilina e tempo de desagregao

(cinco valores expressos como mdia desvio-padro) das

especial idades farmacuticas.

PRODUTO FRIABILlDADE TEOR DE AMPICILlNA TEMPO DE DESAGREGAAO

(%) (% DO VR) (MINUTOS)

A1 - 83,7 32,15 1,68

A2 0,0 103,1 5,40 1,36

B 0,21 107,2 1,36 O,16

C 0,15 104,1 23,33 4,45

O 0,22 93,6 9,31 2,85

VR =Valor rotulado de ampicilina

Na figura 2 so comparados os valores de dureza e tempo de

desagregao obtidos para as especialidades farmacuticas estudadas.

Na figura 3 so apresentados os espectros de absoro no

ultravioleta de uma nica amostra contendo ampicilina, proveniente do

ensaio de dissoluo, em que se efetuou leitura da absorvncia de

solues com e sem a reao qumica com sal de cobre de acordo com o

procedimento descrito por SMITH et aI. (1967).

70

Tabela 21: Anlise de varincia dos valores de eficincia de dissoluo

(EO) para as especialidades farmacuticas estudadas.

FONTE DE GRAUS DE SOMADOS QUADRADOS FO

VARIAO LIBERDADE QUADRADOS MDIOS OBSERVADO

entre 4 17094,785 4273,6963 249,62

tratamentos

dentro dos 10 171,316 17,1316

tratamentos

total 14 17266,102 significativo

Tabela 22: Comparao dos valores de eficincia de dissoluo (EO) para

cada especialidade farmacutica estudada, empregando-se o teste de

Tukeye o mtodo da MOS.

GRUPOS HOMOGENEOS

PRODUTOS TUKEY MOS

A1 - -A2 8 B

8 A2 A2

C - -

D - -

Nas figuras 5, 6 e 7 so mostrados os pontos utilizados, para cada

especialidade farmacutica, nos clculos relativos cintica de dissoluo

para os modelos de zero ordem, primeira ordem e Higuchi.

I

75

Tabela 23: Porcentagens de ampicilina dissolvida obtidas para os produtos

A1, A2, B, C e D no teste de dissoluo segundo a USP XXIII.

CUBAS A1 A2 B C D

1 26,46 104,19 96,66 27,54 88,83

2 10,80 98,91 99,90 45,36 92,07

3 17,55 100,52 85,59 57,24 85,86

4 25,92 104,94 90,99 73,17 92,61

5 16,20 98,46 91,26 47,79 90,72

6 19,44 103,65 91,80 45,63 97,20

MDP 19,405,48 101,782,59 92,704,54 49,4513,77 91,223,49

CV(%) 28,25 2,54 4,90 27,85 3,82

RESULTADO REPROVADO APROVADO APROVADO REPROVADO APROVADO

M = mdia; DP = desvio-padro; CV = coeficiente de variao

5.2) AVALIAO BIOFARMACUTICA IN VIVO

5.2.1) RETA DE CALlBRAO

Os valores obtidos para a anlise de regresso linear relativa reta

de calibrao construda a partir da leitura espectrofotomtrica de vrias

solues contendo padro de ampicilina encontram-se descritos na tabela

24.

76

Tabela 24. Resultado da anlise estatstica dos dados obtidos a partir da

construo da reta de calibrao para ampicilina em tampo fosfato pH

5,2.

PARAMETRO

coeficiente angular (b)

. intercepto (a)

coeficiente de correlao (r)

equao da reta

Erro padro da estimativa relativo (SER)

5.2.2. PARMETROS FARMACOCINTICOS

RESULTADO OBTIDO

0,0391

- 0,07264

0,9999

y =-0,07264 + 0,0391 x0,483

Na tabela 25, so apresentados os valores de Duco e respectivas

mdias para cada um dos voluntrios, para o produto A2 e para o produto

B..

Na figura 9 so apresentadas as curvas mdias da excreo urinria

acumulada da ampicilina para os produtos A2 e B.

Nas figuras 1e 11 possvel visualizar os valores individuais dequantidade do frmaco excretado na urina em funo do tempo, para A2 e

B, respectivamente.

77

Tabela 25: Quantidade de ampicilina (mg) excretada na urina (DuCXl ) de

cada voluntrio para os produtos A2 e B.

VOLUNTARIO A2 B

1 193,27 255,27

2 337,09 410,06

3 298,63 191,40

4 294,12 219,53

5 370,10 368,84

6 383,80 373,61

7 204,74 284,63

8 265,36 299,17

9 239,62 257,68

10 200,78 235,31

11 273,53 279,60

12 246,29 230,97

13 301,66 309,60

14 308,60 178,78

15 193,91 202,31

16 210,89 191,66

M DP 270,15 61,7 268,03 70,07

CV(%) 22,84 26,14

% RECUPERADA* 54,03 53,61

M =mdia; DP =desvio-padro; CV =coeficiente de variao* corresponde porcentagem total de ampicilina obtida na urina, tomando-

se como base a dose administrada (500 mg).

ao

Nas tabelas 26 e 27 so apresentados os valores mximos de

velocidade de excreo urinria da ampicilina - (dDu/dt)max _e intervalo de

tempo mdio (tm)max correspondente para os produtos A2 e S,

respectivamente.

As curvas mdias de velocidade de excreo urinria do frmaco

para A2 e S encontram-se na figura 12.

81

Tabela 26: Velocidade mxima de excreo urinria de ampicilina -

(dDuldt)max. intervalo de tempo mdio (tm)max correspondente e respectivas

mdias, para o produto A2.

VOLUNTARIOS (tm)max (horas) (dDu/dt)max (mglh)

1 1,5 53,82

2 3,0 70,43

3 1,5 85,50

4 3,0 59,49

5 1,5 130,52

6 3,0 80,52

7 1,5 80,45

8 1,5 98,50

9 1,5 73,97

10 3,0 38,34

11 1,5 95,36

12 1,5 69,13

13 1,5 105,04

14 1,5 152,62

15 1,5 38,32

16 1,5 63,47

M 1,88 80,98

DP 0,65 29,72

CV 34,70 36,70

, . ..M = media; DP = desvio-padro; CV = coeficiente de vanao

82

Tabela 27: Velocidade mxima de excreo urinria de ampicilina

(dDuldt)max, intervalo de tempo mdio (tm)max correspondente e respectivas

mdias, para o produto B.

VOLUNTARIOS (tm)max (horas) (dOu/dt)max (mglh)

1 3,0 49,36

2 3,0 98,14

3 3,0 40,88 .

4 3,0 46,82

5 1,5 139,61

6 1,5 134,28_

7 1,5 84,10

8 3,0 71,29

9 1,5 70,36

10 3,0 52,77

11 1,5 92,78

12 1,5 63,11

13 3,0 58,07

14 1,5 56,43

15 1,5 59,08

16 1,5 58,05

M 2,16 73,44

OP 0,74 28,55

CV 34,5 38,9

M = mdia; DP = desvio-padro; CV = coeficiente de variao

84

5.2.3) ANLISE ESTATSTICA

Nas tabelas 28 e 29, so apresentados os resultados da anlise

estatstica paramtrica e no paramtrica dos dados obtidos para OuCXl e

para (dOu/dt)max relativos aos produtos A2 e B.

Na tabela 30 so apresentados a mdia dos valores logaritmados de

Ouoo e (dOu/dt)max, para os produtos A2 e B, os respectivos desvios

padro, o coeficiente de variao da ANOVA obtido para cada parmetro,

alm dos intervalos de confiana.

Tabela 28: Resultados da anlise estatstica (teste t), da diferena (O)

entre os valores de quantidade total de ampicilina excretada na urina

(OUoo ) e da velocidade mxima de excreo ((dOu/dt)max]obtidos para cada

voluntrio para os produtos A2 e B.

Dou""

D(dOuldt)maX

---

GRUPO

11

11

n

8

8

8

8

MDIA.... -- ~--.- _.-._- - _ ..-36,25

-40,49

5,23

9,81

DP

36,09

55,09

23,23

44,85

CV

1,00

1,36

4,44

4,57

P0,856

0,805

DP =desvio-padro; CV =coeficiente de variao.significativo para p ~ 0,05

85

Tabela 29: Resultados da anlise estatstica paramtrica (teste t) e no-

paramtrica (Mann-Whitney) aplicada aos parmetros Ou lXl (quantidade

total de ampicilina excretada na urina) e (dOu/dt)max (velocidade mxima

de excreo urinria) relativas aos produtos A2 e B.

PTESTE t MANN-WHITNEY

___________. - ..__ .~ .. _..._...._. ._.._. .__ ..__ . _. .0-._ .._.- ,__._

Ou'" 0,928 0,734

(dOu/dt)max 0,485 0,291---------

significativo para p ~ 0,05

Tabela 30: Valores da mdia, desvio-padro (OP), CVANOVA, t tabelado e

intervalos de confiana (90%) obtidos a partir dos valores logaritmados (In)

de Ou'" e (dOu/dt)max para os produtos A2 e B.

INTERVALO DE CONFIANA

PARMETRO PRODUTO MDIA DP CVANOVA (%)

(%) INFERIOR SUPERIOR

Duoo A2 5,621 0,352 15,12 92 116

B 5,582 0,236

(dDu/dt)max A2 4,327 0,382 31,42 91 132

8 4,232 0,359

86

6- DISCUSSO

No presente estudo foram avaliadas, do ponto de vista

biofarmacutico, 4 especialidades farmacuticas (A, B, C e O), sob a

forma de comprimidos, contendo 500 mg de ampicilina, disponveis no

mercado nacional, sendo que, para um dos fabricantes (A), foram

analisados 2 lotes diferentes (A1 e A2), totalizando 5 amostras distintas.

Foram realizados diversos ensaios fsico-qumicos com a finalidade de

detectar falhas que os produtos pudessem, ocasionalmente, apresentar,

de acordo com a determinao da FOA-USA (COOE of federal regulations,

1992), que preconiza a verificao prvia da conformidade dos produtos

em relao s especificaes, para a realizao de ensaios de

bioequivalncia. A avaliao biofarmacutica in vivo foi executada para

duas destas amostras: A2 e B, utilizando-se parmetros de excreo

urinria de 16 voluntrios sadios.

Anlises biofarmacuticas in vitro podem fornecer valiosas

informaes sob as caractersticas da forma farmacutica e assim,

mediante estudo da inter-relao das mesmas, auxiliar na compreenso

do comportamento dos produtos. Deste modo, possvel comparar

formulaes diferentes, quando do desenvolvimento, ou confrontar

distintas especialidades farmacuticas, apontando-se aquelas para as

quais especificaes de compndios oficiais no foram obedecidas, o que

pode indicar comprometimento de seu desempenho no organismo

(TINGSTAO, 1978; GONZLES et aI., 1995b).

Com relao observao do aspecto dos comprimidos estudados

(tabela 9), no foram denotadas caractersticas que estivessem em

87

desacordo com os padres estabelecidos para qualquer uma das

especialidades farmacuticas. Genericamente, apresentavam-se

uniformes e ntegros. exceo da especialidade farmacutica do

Laboratrio C, que se caracteriza pela presena de um corante alaranjado

em sua formulao e do lote A1 do Laboratrio A, que se apresentava

revestida, as demais apresentaram colorao branca e sem nenhum

revestimento, aparentemente. Alis, a ausncia de revestimento digna

de nota, uma vez que a deposio de pelculas de vernizes ou acar

pode trazer alteraes importantes no perfil de dissoluo, em geral,

retardando a velocidade de dissoluo do frmaco (McGINITY, 1989).

Este fato ajuda a explicar, em parte, o fraco desempenho do lote A1, em

relao dissoluo (figura 4).

Analisando-se os resultados de variao de peso dos comprimidos

(tabela 10) observa-se que os valores de desvio-padro e coeficiente de

variao foram relativamente baixos. Porm, considerando-se que a FB IV

(1988) preconiza, para comprimidos de peso superior 250 mg, uma

tolerncia de 5 % (tabela 1), o produto do Laboratrio D no atendeu

esta exigncia. Neste caso, o peso mnimo de cada comprimido deveria

ser de 0,6597 g e o mximo igual a 0,7291 g. Entretanto, os comprimidos

de nmero 10 e 18 estavam abaixo do valor mnimo e os de nmero 7 e 8

acima dos valores recomendados, o que totaliza quatro unidades em

desacordo com o especificado, sendo que so toleradas apenas no mais

que duas unidades fora destes valores. O mesmo produto foi o que

apresentou, dentre os estudados, o maior coeficiente de variao (3,1 %).

Pcrm, tomando-se como base os critrios recomendados pela USP .

XXIII (1995), todos os produtos encontram-se dentro do permitido (tabela

88

11), exceto A1 que, em funo do baixo teor do frmaco, apresentou,

conseqentemente, valores individuais fora da faixa de 85 a 115%. Ento,

quando se trata deste ensaio, possvel deduzir que os critrios adotados

pela BP 1993 e pela FB IV (1988) so mais rigorosos que aqueles

adotados pela USP XXIII (1995), uma vez que esta ltima no considera

como inadequada a variao registrada para o produto D. Ao contemplar

o teor de frmaco como critrio e no simplesmente a variao registrada

no peso das unidades possvel aceitar-se variaes maiores, porm,

desde que estas no impliquem em uma variao acentuada de teor do

frmaco.

Em relao ao dimetro e espessura dos comprimidos (tabela 12),

no foram registradas grandes variaes. Estes resultados, principalmente

para o dimetro, so esperados, uma vez que este condicionado pela

matriz da mquina de comprimir (FERRAZ, 1993). Entretanto, avaliando-

se os resultados de dureza dos comprimidos, observa-se considervel

diferena entre as cinco formulaes. Porm, este fato parece no ter

exercido influncia sobre a desagregao dos comprimidos, o que,

segundo alguns autores, poderia ocorrer (JACOB & PLEIN, 1968; SAKR,

1972; GORDON et ai., 1990). interessante observar o ocorrido com os

comprimidos dos Laboratrios B e C (figura 2): embora os valores de

dureza estivessem bastante prximos, o tempo de desagregao do

produto B foi muito inferior ao do produto C. Isto se deve, provavelmente,

s diferenas de formulao nas duas especialidades, notadamente em

relao aos desagregantes e aos umectantes utilizados, visto que estes

dois tipos de excipientes so os que esto mais diretamente relacionados

desagregao e dureza (FERRAZ, 1994; GORDON et ai., 1990).

89

Ainda para o peso mdio, dimetro, espessura e a dureza dos

comprimidos, os desvios-padro e os coeficientes de variao oriundos

destes parmetros revelam que o produto do Laboratrio O foi o que

apresentou maior oscilao de valores. Esta observao bastante

coerente, pois uma maior variao na espessura, por exemplo, indica uma

maior oscilao no peso mdio dos comprimidos. Isto ocorre porque, com

a matriz mais preenchida pelo granulado (durante o processo de

compresso) obtm-se um comprimido com peso mais elevado. Alm

disso, caso a presso aplicada seja constante, dar origem a um

comprimido de maior dureza (FERRAZ, 1993).

Os valores apresentados na tabela 13 indicam conformidade com

as especificaes da F8 IV (1988) para a friabilidade (mximo 1,5 %). O

lote A1 do laboratrio A no foi submetido ao ensaio, uma vez que

corresponde a um comprimido revestido. Para o lote A2 no foi registrado

desgaste nas unidades testadas, uma vez que as pesagens realizadas

antes e aps o teste no indicaram qualquer variao.

Em relao ao teor de ampicilina, de acordo com a USP XXIII

(1995), que permite uma oscilao de 90 a 120 % do valor rotulado do

frmaco, A1 apresentou-se com valor fora de especificao. O mtodo

utilizado para quantificao do frmaco (iodomtrico) bastante adequado

visto que capaz de determinar apenas a ampicilina no degradada, pois

a reao baseia-se na ruptura do anel ~-Iactmico por um lcali. O

resultado um derivado do cido penicilico que, ao contrrio da molcula

ntegra, consome iodo (KOROLKOVAS, 1984). Ao efetuar-se uma titulao

nas mesmas condies, pOl'm sem a adio de lcali, possvel

90

determinar por subtrao, a quantidade exata de ampicilina ntegra

presente na amostra.

Analisando-se os resultados de tempo de desagregao (tabela 13)

possvel observar grande oscilao entre as especialidades

farmacuticas (variao de 1,36 0,16 a 32,15 1,68). Para os

Laboratrios A1 e C, os tempos de desagregao foram relativamente

elevados (32,15 e 23,33 minutos, respectivamente) em se tratando de

formas farmacuticas de pronta liberao. Muito embora a desagregao

da forma farmacutica no esteja, necessariamente, relacionada de modo

direto biodisponibilidade do frmaco (LEVY, 1961), tal fato pode refletir-

se no aproveitamento do mesmo pelo organismo, uma vez que,

inevitavelmente, a absoro estar comprometida.

necessrio lembrar que o ensaio de desagregao aqui executado

foi conduzido de modo a possibilitar uma comparao entre as diferentes

especialidades farmacuticas. Enquanto a FB IV (1988) recomenda que

aps 30 minutos os comprimidos estejam desintegrados, foram aqui

registrados os tempos de desagregao de cada comprimido. Assim, foi

possvel obter a mdia e desvio-padro para cada produto e confrontar,

ento os resultados