Bilirrubinas

Disciplina: Bioquímica

Curso: Análises Clínicas

3º. Módulo

Docente: Profa. Dra. Marilanda Ferreira Bellini

Bilirrubina

• É o principal produto do metabolismo do heme da hemoglobina.

Hemoglobina

Proteína Globular

Globina

Comparative Biochemistry and Physiology, 146 (2007) 22-52

GLOBINA 4 Cadeias

Polipeptídicas

2 tipo alfa

2 tipo beta

Hemoglobina

Proteína Globular

Globina

Grupo Heme

Comparative Biochemistry and Physiology, 146 (2007) 22-52

Hemoglobina

Proteína Globular

Globina

Grupo Heme

Função:

Comparative Biochemistry and Physiology, 146 (2007) 22-52

Função: •Oxigenação dos tecidos •Capacidade antioxidante ao sangue

GLOBINA 4 Cadeias

Polipeptídicas

2 tipo alfa

2 tipo beta

Bilirrubina

• É o principal produto do metabolismo do heme da hemoglobina.

• 20% � precursores dos eritrócitos destruídos na medula óssea na medula óssea

– eritropoiese não-efetiva,

– outras proteínas heme como a mioglobina, os citocromos e a peroxidase.

Síntese da Bilirrubina1) Eritrócitos são eliminados no baço quando

ficam velhos ou danificados. A hemoglobina liberta, que é decomposta em grupo heme e em globinas (transformadas em aminoácidos)Pela ação da Heme oxigenase o grupo Heme forma a Biliverdina.

Síntese da Bilirrubina2) Posteriormente, devido a ação da Biliverdina

redutase, a biliverdina é transformada em bilirrubina não conjugada nas células retículo-endotelial do baço. Esta bilirrubina não conjugada não é solúvel em água. Em seguida, é ligado à albumina e enviado para o fígado.

Síntese da Bilirrubina3) O complexo bilirrubina-albumina é

metabolizado nos hepatócitos.

Síntese da Bilirrubina4) Nos Hepatócitos, ela é conjugada com ácido

glicurônico pela enzima glucuroniltransferase, tornando-o solúvel em água. Muito do que vai para a bile e, portanto, fora para o intestino delgado.

Síntese da Bilirrubina5) A bilirrubina conjugada que permanece no

intestino grosso e é metabolizada pelas bactérias colônicas de urobilinogênio.Urobilinogênio é reabsorvido (circulação entero-hepática) e excretada na urina, juntamente com uma forma oxidada, urobilina; Quando presente nas fezes, essas apresentam coloração marrom. essas apresentam coloração marrom.

Síntese da Bilirrubina1) Eritrócitos são eliminados no baço

quando ficam velhos ou danificados. A hemoglobina liberta, que é decomposta em grupo heme e em globinas (transformadas em aminoácidos)Pela ação da Heme oxigenase o grupo Heme forma a Biliverdina.

4) Nos Hepatócitos, ela é conjugada com ácido glicurônico pela enzima glucuroniltransferase, tornando-o solúvel em água. Muito do que vai para a bile e, portanto, fora para o intestino delgado.

5) A bilirrubina conjugada que permanece

2 ) Posteriormente, devido a ação da Biliverdina redutase, a biliverdina é transformada em bilirrubina não conjugada nas células retículo-endotelial do baço. Esta bilirrubina não conjugada não é solúvel em água. Em seguida, é ligado à albumina e enviado para o fígado.

3) O complexo bilirrubina-albumina é metabolizado nos hepatócitos.

5) A bilirrubina conjugada que permanece no intestino grosso e é metabolizada pelas bactérias colônicas de urobilinogênio.Urobilinogênio é reabsorvido (circulação entero-hepática) e excretada na urina, juntamente com uma forma oxidada, urobilina; Quando presente nas fezes, essas apresentam coloração marrom.

Bilirrubina

Não-Conjugada , Indireta

• Produzida no baço;

• Apolar , ou seja, insolúvel em água;

Conjugada, Direta

• Produzida por reação enzimática da bilirrubina não-conjugada;

• Molécula polar+apolar;• Transportada para o fígado

via corrente circulatória;

• Ligada de maneira firme, mas reversível, à albumina.

• Molécula polar+apolar;

• Solúvel em água;

• Eliminada na urina.

Hiperbilirrubinemia

• Icterícia

– é a pigmentação amarela de pele, esclerótica e membranas mucosas.

– Bilirrubina plasmática > 3,0 mg/dL– Bilirrubina plasmática > 3,0 mg/dL

– Sinal � patologias hepáticas e biliares.

Hiperbilirrubinemia

Predominantemente não-conjugada (indireta)

• Pré –hepática;

• Excesso de bilirrubina não-conjugada no sangue circulante;

Predominantemente conjugada (direta)

• Comprometimento na captação, no armazenamento ou na excreção da bilirrubina.circulante;

• Não é excretada na urina;

• Atravessa a barreira hematoencefálica.

excreção da bilirrubina.

• Tanto a bilirrubina conjugada como a não-conjugada são retidas;

• Variadas concentrações no soro.

Detecção de bilirrubina

• Paciente:

– Jejum (8h)

• Amostra:

– Soro (mantido no escuro)– Soro (mantido no escuro)

• Realização Teste:

– Até 3h após coleta da amostra.

Detecção de bilirrubina

• Métodos:

• 1883-Erlich

– reação com o ácido sulfanílico diazotado, em amostras de urina.amostras de urina.

• Van den Bergh e Snapper

– presença de bilirrubina no soro sangüíneo pelo emprego do diazo -reagente de Erlich e álcool como acelerador.

Detecção de bilirrubina

• Métodos:

– Fundamentação teórica dos métodos:

fração que produz cor com a reação de Van denBergh em solução aquosa é bilirrubina direta Bergh em solução aquosa é bilirrubina direta

(polar+ apolar), enquanto a fração que desenvolve cor com o álcool é bilirrubina indireta (apolar).

Detecção de bilirrubina

• Métodos:

• Malloy e Evelyn:

– Propuseram o uso de metanol a 50% para evitar a precipitação das proteínas.precipitação das proteínas.

• 1938 -Jendrassik e Grof:

– uso de cafeína-benzoato-acetato para acelerar a reação azo-acoplada. Na maioria

Detecção de bilirrubina

• Métodos:

• Espectrofotometria direta:– Diluição da amostra em uma solução tampão.– Método não apresenta uma padronização adequada.

• Enzimático:– Enzima bilirrubina oxidase ;– Oxidação da bilirrubina � à biliverdina (incolor). – A reação é monitorada pela redução da absorvância;– Vantagem: elevada especificidade da enzima pela bilirrubina.

• Cromatografia líquida de alta performance (HPLC). – Quantifica as várias frações da bilirrubina. – Usado somente em laboratórios de pesquisa.

Urobilinogênio:

Urina e Fezes

Bilirrubina Conjugada

Bilirrubina Livre

Bilirrubina Livre+

Bactérias

Urobilinogênio

Urobilinogênio:

Urina e Fezes

• ↑urobilinogênio na urina e nas fezes � ↑ formação e excreção da bilirrubina

• ↓ urobilinogênio na urina e nas fezes � doenças hepáticas, obstruções intrahepáticas ou extrahepáticas.

• Valores de referência para o urobilinogênio urinário são de 0 -4 mg/dia.

– Valores diminuídos são impossíveis de serem detectados.

– O exame visual da amostra fecal com urobilinogênioreduzido revela cor cinza ou argila.

Referência

• Valter T. Motta, “Bioquímica Clínica: Princípios e Interpretações”, Capítulo 14 – Sistema Hepatobiliar.