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BIOTECNOLOGÍA APLICADA AL DESARROLLO DE NUEVAS VARIEDADES
Laboratorio de BiotecnologíaINIA Salto GrandeINIA Las BrujasLEDP Facultad de Agronomía
1. Manipulación de la ploidía para obtención de mandarinas sin semilla
2. Marcadores moleculares para caracterización de variedades y portainjertos
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1. Obtención de triploides por rescate de embriones
2. Obtención de parentales tetraploidesa. Espontáneos (duplicación somática)b. Fusión de protoplastos (hibridación somática)
MANIPULACIÓN DE LA PLOIDÍA PARA LA OBTENCIÓN DE MANDARINAS SIN SEMILLA
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1. Obtención de triploides por rescate de embriones
Recolección y desinfección de semillas vanas
Siembra del embrión en medio de cultivo (MS + Giberelina + Adenina)
Desarrollo de plantas citometría de flujo: selección de individuos tripliodes
Sobreinjerto
Posibles embriones triploides
embrión
A. Bertalmío
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Triploides obtenidos por rescate de embriones (INIA-LB e INIA-SG)
Variedad N° triploides
Marisol 25
Clemenules 9
Tomatera 1
Clemenpons 6
Ellendale 3
Daisy 6
A30 1
B25 6
Carte Noir X Sunburst 1
Ana Claudia X Limón Fino 1
Proceso muy complejo:
personal calificado insume muchas horas
Poco eficiente: menor a 10%
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Escarificado químico de semillas para facilitar proceso de rescate de embriones
Semillas vanas sin escarificar luego de 30 días en cultivo
Semillas vanas escarificadas luego
de 30 días en cultivo
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2. Obtención de parentales tetraploides
Objetivo: realizar cruzamientos de tetraploides con diploides Diploide (2n=2X) Tetraploide (2n=4X)
gametos
n 2n
Fecundación
Triploide (3X)
2 vías de obtención:
• Espontáneos
• Fusión de protoplastos
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Tetraploides espontáneos: duplicación somática
Selección de parentales(con semilla poliembriónica)
Siembra de semillas Análisis por Citometría de Flujo
Selección de tetraploides para cruzamientos
Variedad Plantines 4xB49 8B475 4B47 4B30 6F3P9 1F12P3 1A218 3A201 5A30 1M9 2
Variedad Plantines 4xMurcott 10Afourer 4Montenegrina 5Fremont 10Carvalais 7Page 3Satsuma 4
Total: 78 tetraploides espontáneos
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Fusión de protoplastos: hibridación somática
• Permite la combinación de variedades que no se pueden cruzar por métodos convencionales
• Genera diversidad genética1) Obtención de protoplastos
callohoja
0) Obtención de callos embriogénicos
Callos embriogénicos
Genotipos de hoja (híbridos nacionales)
M9 M19
Murcott F3P8, F2P3, F6P8, F4P8
Afourer A218
A30 B30
Page
Valencia
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Fusión de protoplastos: hibridación somática
1) Obtención de protoplastos
2) Fusión de protoplastos
3) Regeneración de plantas
0) Obtención de callos embriogénicos
Murcott X F6P8
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¿es realmente tetraploide?
¿proviene de la fusión de 2 células de variedades
diferentes o de la misma variedad?
Caracterización con Marcadores MolecularesDesarrollo de la herramienta
Aplicaciones alternativas