Nama: Moch Heldi PrastyoNim/off: 110332421008/GTugas BioteknologiDNA Rancangan :ATG|CGA TCC CTG TAC TGG GAC CGC ATC ACC TACACG TCA AGC AGG GTT GTA ATT CGT AGC ACC ACTTGC CAG CTG GGT ACT GAT TCC ACT ACG ATT|TGAJenis enzim retriksi yang ada dalam vector PUC-19 yang digunakan yaitu XbaI dengan sisi pemotongan T|CTAGAPRIMER 5 CTA TCT AGA ATG CGA TCC CTG TAC 33 GAT AGA TCT TAC GCT AGG GAC ATG 5REVERSE PRIMER5 TCC ACT ACG ATT TGA 3 3 AGG TGA TGC TAA ACT 55 CTA TCTAGA TCA ATT CGT AGT GGA 3SISI PEMOTONGAN XbaI5 TCTAGA AGATCTCATATAN :PADA UJUNG PRIMER SEBAIKNYA DIISI ASAM NUKLEAT G-C AGAR KUAT IKATANNYA

Teknik PCR1. Denaturasi: pemanasan rancangan DNA pada suhu 94-950C. 2. Annealing: penempelan rancangan primer pada DNA yang telah dirancang, dengan memanaskan pada 600C.3. Extention: bertujuan untuk memanjangkan primer dengan menggunakan DNA Polimerase. Di panaskan pada suhu 700CSehingga dihasilkan DNA gen target dengan adapter, TCT AGA ATG GEN rancangan..TGA TCT AGADiperoleh:5 TCT AGA ATG CGA TCC CTG TAC TGG GAC CGC ATC ACC TAC ACG TCA AGC AGG GTT GTA ATT CGT AGC ACC ACT TGC CAG CTG GGT ACT GAT TCC ACT ACG ATT TGA TCT AGA 3Cara selanjutnya memotong vector dan gen hasil PCR dengan enzim XbaI sehingga diperoleh DNA target yang komplemen terhadap vector. Kemudian gen target dicampur dengan vector hasil pemotongan dengan enzim DNA ligase, sehingga didapatkan DNA rekombinasi. Setelah itu dilakukan transformasi DNA rekombinan kedalam sel bakteri, dengan metode heat shock. Cara ini dilakukan dengan mencampurkan DNA rekombinan dan sel bakteri disertai pemanasan pada suhu 420C selama 9 detik.Hasil transformasi diidentifikasi dengan metode seleksi putih biru dan ketahanannya terhadap media yang mengandung amplicilin.A. Uji ketahanan hasil transformasi terhadap media yang mengandung amplicilin.Hasil transformasi diinokulasikan ke dalam media yang mengandung amplicilin. Jika DNA hasil rekombinasi telah berhasil masuk pada sel bakteri maka sel tersebut dapat hidup dalam media itu. Hal ini disebabkan oleh vector PUC19 memiliki marker yang mengandung amplicilin resistant sehingga dapat tahan dalam media yang mengandung amplicilin.B. Seleksi Putih Biru. Pada vector PUC19 terdapat bagian lacZ yang bagiannya telah dipotong oleh XbaI. Apabila tidak terdapat DNA hasil rekombinasi pada bagian yang telah dipotong tersebut, maka enzim -galaktosidase akan menjadi aktif. Hal ini dapat menyebabkan adanya produk yang berwarna biru hasil degradasi X-gal. Sedangkan jika DNA hasil rekombinan telah masuk ke dalam bagian yang telah dipotong, maka dapat menyebabkan enzim -galaktosidase tidak aktif sehingga tidak dapat mendegradasi X-gal menjadi produk berwarna biru. Hal ini diindikasikan dengan warna larutan yang berwarna putih.