centro nacional de alimentaciÓn - eurolabeurolab.org.es/newsletter/junio2014/11.a.01.pdf ·...
TRANSCRIPT
-
CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN
Novedades en el cribado de residuos de antibióticos en alimentos
-
Centro
Nacional de
Alimentación
• Situación actual: • Europa – Encuesta 2014 LRUE
• España – Aplicación PNIR 2014
• Tendencias futuras
CRIBADO DE RESIDUOS DE ANTIBIÓTICOS EN ALIMENTOS
-
Centro
Nacional de
Alimentación
INTRODUCCIÓN
• DEFINICIÓN:
D 2002/657/UE: “métodos utilizados para detectar la presencia de una sustancia, o tipo de sustancias, al nivel de interés. Estos métodos permiten tratar un elevado número de muestras y se utilizan para cribar grandes cantidades de muestras en busca de posibles resultados no conformes”
• Elevado número de muestras • Variedad de matrices y especies • Unos 60 antibióticos en diferentes matrices
-
Centro
Nacional de
Alimentación
CLASIFICACIÓN
1. Métodos no específicos: microbiológicos • métodos de inhibición en placa: 4-5 placas, STAR (Screening Test of
Antibiotic Residues)
• métodos de inhibición en tubo: Premitest, Eclipse, Delvotest
2. Métodos semiespecíficos: inmunológicos • ELISA • Biosensor: Evidence Investigator (Randox)
1. Métodos específicos: químicos • HPLC • LC-MS/MS
-
Centro
Nacional de
Alimentación
EUROPA - UERL
El Laboratorio de Referencia de la Unión Europea para el control de residuos de sustancias antibacterianas es ANSES (French agency for food, environmental and occupational health safety) 2013 – Reunión de Laboratorios Nacionales de Referencia sobre residuos de antibióticos en alimentos
2014 – Questionnaire: Información detallada sobre los métodos microbiológicos de screening para la detección de residuos de antibióticos en carne en los LNR europeos
-
Centro
Nacional de
Alimentación
EUROPA - ENCUESTA 2014 ANSES
PAIS
CH
IPR
E
HO
LA
ND
A
IT
ALIA
NO
RU
EG
A
RE
IN
O U
NID
O
AU
ST
RIA
BU
LG
AR
IA
ES
LO
VA
QU
IA
ES
TO
NIA
FIN
LA
ND
IA
GR
EC
IA
MA
CE
DO
NIA
POLO
NIA
SE
RB
IA
ES
PAÑ
A
BÉ
LG
IC
A
ES
LO
VE
NIA
FR
AN
CIA
HU
NG
RÍA
IR
LA
ND
A
LIT
UA
NIA
POR
TU
GA
L
RE
P. CH
EC
A
ALE
MA
NIA
DIN
AM
AR
CA
LE
TO
NIA
MA
LT
A
RU
MA
NÍA
SU
EC
IA
TU
RQ
UÍA
MICRO X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X
INMUNO X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X
OTROS X X X X X X X X X X X X X X X X
LABORATO RIOS
17% (5) 30% (9) 3% 27% (8) 13% (4) 10% (3)
77% (23) 23% (7)
-
Centro
Nacional de
Alimentación
EUROPA - ENCUESTA 2014 ANSES
-
Centro
Nacional de
Alimentación
EUROPA - ENCUESTA 2014 ANSES
-
Centro
Nacional de
Alimentación
EUROPA – AGENDA 2014 ANSES
- Updated Survey on Microbiological Inhibitory
Methods and their Performance for Screening Antimicrobials in Foodstuffs
- Evaluation of new rapid biomethods and kits
for screening antimicrobials in food products
-
Centro
Nacional de
Alimentación
ESPAÑA – SITUACIÓN ACTUAL
APLICACIÓN INFORMÁTICA PNIR 2014 26 laboratorios aplican técnicas de cribado para residuos del grupo B1
•23 declaran únicamente métodos microbiológicos •2 declaran únicamente métodos químicos •1 (CNA) declara ambos tipos de métodos
-
Centro
Nacional de
Alimentación
ESPAÑA – TENDENCIAS FUTURAS
1. Métodos no específicos: microbiológicos • métodos de inhibición en placa: 4-5 placas, STAR (Screening Test of Antibiotic
Residues) • métodos de inhibición en tubo: Premitest, Eclipse, Delvotest
4 PLACAS + EXPLORER
2. Métodos semiespecíficos: inmunológicos • ELISA • Biosensor: Evidence Investigator (Randox)
3. Métodos específicos: químicos • HPLC • LC-MS/MS
-
Centro
Nacional de
Alimentación
ESPAÑA – TENDENCIAS FUTURAS
1. Métodos no específicos: microbiológicos • métodos de inhibición en placa: 4-5 placas, STAR (Screening Test of Antibiotic
Residues) • métodos de inhibición en tubo: Premitest, Eclipse, Delvotest
4 PLACAS + EXPLORER
2. Métodos semiespecíficos: inmunológicos • ELISA • Biosensor: Evidence Investigator (Randox)
3. Métodos específicos: químicos • HPLC • LC-MS/MS
-
Centro
Nacional de
Alimentación
ESPAÑA – TENDENCIAS FUTURAS
EXPLORER 2.0:
• Prueba cualitativa • Rápido y sencillo • Se basa en comprobar la inhibición del crecimiento microbiano provocada por la presencia de residuos de antibióticos y sulfamidas.
-
Centro
Nacional de
Alimentación
ESPAÑA – TENDENCIAS FUTURAS
EXPLORER 2.0: PROCEDIMIENTO
-
Centro
Nacional de
Alimentación
ESPAÑA – TENDENCIAS FUTURAS
EXPLORER 2.0: PROCEDIMIENTO
-
Centro
Nacional de
Alimentación
ESPAÑA – TENDENCIAS FUTURAS
1. Métodos no específicos: microbiológicos • métodos de inhibición en placa: 4-5 placas, STAR (Screening Test of Antibiotic
Residues) • métodos de inhibición en tubo: Premitest, Eclipse, Delvotest
4 PLACAS + EXPLORER
2. Métodos semiespecíficos: inmunológicos • ELISA • Biosensor: Evidence Investigator (Randox)
3. Métodos específicos: químicos • HPLC • LC-MS/MS
-
Centro
Nacional de
Alimentación
EVIDENCE INVESTIGATOR
•LRUE – miel y músculo (pescado) •ELISA múltiple
Cada biochip es una plataforma sólida (1 cm2) dividida en 25 regiones (5 x 5) en las cuales podemos inmovilizar anticuerpos, con lo cual conseguimos analizar a la vez, varios residuos a partir de una sola muestra
1 Kit (“matriz”)= 54 biochips (9 para curvas de calibrado y 45 para muestras)
-
Centro
Nacional de
Alimentación
EVIDENCE INVESTIGATOR: “matrices”
-
Centro
Nacional de
Alimentación
PREPARACIÓN MUESTRA
EVIDENCE INVESTIGATOR
-
Centro
Nacional de
Alimentación
EQUIPO LECTOR
EVIDENCE INVESTIGATOR
-
Centro
Nacional de
Alimentación
MIEL
EVIDENCE INVESTIGATOR
-
Centro
Nacional de
Alimentación
CONCLUSIONES EN MIEL: - Buenos LD para los 6 antibióticos estudiados - 6,7% falsos + en quinolonas = el fabricante debe mejorar este aspecto - Aplicabilidad: consideran que el método se puede aplicar sobre
diferentes tipos de miel
EVIDENCE INVESTIGATOR
-
Centro
Nacional de
Alimentación
MÚSCULO Y PRODUCTOS ACUICULTURA
EVIDENCE INVESTIGATOR
-
Centro
Nacional de
Alimentación
CONCLUSIONES EN MÚSCULO: - LD superiores a los anunciados por el fabricante, pero < LMR - No se obtuvieron falsos + después de analizar 30 muestras blanco - Validan el Microarray II para 6 familias (quinolonas, tetraciclinas, aminoglucósidos, macrólidos,
cefalosporinas y fenicoles)
EVIDENCE INVESTIGATOR
-
Centro
Nacional de
Alimentación
CONCLUSIONES EN PROD.ACUICULTURA: - Evalúan los LD obtenidos en músculo (+/-). - Únicamente determinan LD para 3 antibióticos (enrofloxacino, tilosina y OTC), el resto de
los evaluados tienen un LD > al obtenido en músculo pero parece ser < LMR (por determinar)
- No se obtuvieron falsos + después de analizar 20 blancos de diferentes especies
EVIDENCE INVESTIGATOR
-
Centro
Nacional de
Alimentación
EVIDENCE INVESTIGATOR
COSTE (MIEL)
ELISA/OTROS EVIDENCE INVESTIGATOR
5 PLACAS EXPLORER
2.0
EQUIPO 5000/6000 e 50000 e No especial Baño /
E-reader(1350 e)
KIT
Kit tilosina Microarray I
Kit STR/dihidroSTR Microarray II
Tetrasensor
(TIL,STR,TCs) (TIL,STR,TC,QUI,TIANF,CEFT, SULF,TMP)
TOTAL = 52 euros /muestra
TOTAL = 36 euros/muestra
Kit betalactámicos Microarray IV 50 test (175)
Kit quinolonas Betalactam array
TOTAL = 70 euros/muestra
TOTAL = 72 euros/muestra
TOTAL = 2 euros/muestra
TOTAL= 4 euros/muestra
TIEMPO DE
ANÁLISIS 7h 20 min
5 h 30 min
24 h 3 horas 10 h
Centro Nacional de Alimentación
-
Centro
Nacional de
Alimentación
Carretera de Pozuelo a Majadahonda, km 5,100 E-28.220 MAJADAHONDA (Madrid)
http://www.aecosan.msssi.es Telef. 91 338 05 84
Correo-E: [email protected]
MUCHAS GRACIAS