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Construção de Biblioteca Gênica
1-Vetor de Clonagem Plasmidial
2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
3-Biblioteca de cDNA
4-Cromossomo Artificial Bacteriano
Edmar Vaz de Andrade
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1-Vetor de Clonagem Plasmidial
Componentes básicos de vetor plasmidial de clonagem5 – 10 kb
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2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
Ciclo Lítico de um Bacteriófago
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2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
Formação de placas de lise em cultura
de bactérias
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2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
Genoma do bacteriófago λ
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1 – Remoção de genes não essenciais
2 – Inserção de sítios de restrição específicos
3 – Introdução de um DNA de preenchimento
4 – Substituição do DNA de preenchimento por um gene de interesse (fragmentos: 10 - 25 kb)
2-Vetor de Clonagem Derivado do bacteriófago λ
DNA de preenchimento
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3-Biblioteca de cDNA
Síntese do cDNA
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3-Biblioteca de cDNA
Adição de uma extremidade em Gn
Hibridização com iniciador Cn
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3-Biblioteca de cDNA
Síntese do cDNA fita dupla e Metilação
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3-Biblioteca de cDNA
Adição de Adaptadores com Sítio de Restrição
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3-Biblioteca de cDNA
Digestão com Enzima de Restrição
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3-Biblioteca de cDNA
Clonagem dos Fragmentos Digeridos no Vetor λ
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3-Biblioteca de cDNA
Infecção de Bactérias com o Vetor λ Recombinante
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4-Cromossomo Artificial Bacteriano
Genes par derivado do plasmído F. Facilita a distribuição do plasmídio para células filhas
Construção de bibliotecas genômicas com insertos de até
300.000 pb
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Quando não mencionado, as figuras apresentadas foram retiradas, com ou sem modificações, das seguintes referências:
1. LODISH, H; DARNELL, J. E. e BALTIMORE, D. 2005. “Biologia Celular e Molecular”, 5ª edição. Artmed Editora SA. Porto Alegre-Brasil. (www.whfreeman.com/lodish)
2. LEHNINGER, A. L. NELSON, D. L e COX, M. M. 2000. “Principles of Biochemistry”. 3ª Edition, Worth Publitions.