contribuciÓn al estudio fitoquÍmico de partes aÉreas …
TRANSCRIPT
CONTRIBUCIÓN AL ESTUDIO FITOQUÍMICO DE PARTES AÉREAS DE LA
ESPECIE Momordica charantia Linn (CUCURBITACEAE) Y EVALUACIÓN
DE SU CAPACIDAD ANTIOXIDANTE
GUINNET PAOLA FUQUENE BUSTOS
UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS
FACULTAD DE CIENCIAS Y EDUCACIÓN
PROYECTO CURRICULAR: LICENCIATURA EN QUÍMICA
Bogotá. D.C
2018
CONTRIBUCIÓN AL ESTUDIO FITOQUÍMICO DE PARTES AÉREAS DE LA
ESPECIE Momordica charantia Linn (CUCURBITACEAE) Y EVALUACIÓN
DE SU CAPACIDAD ANTIOXIDANTE
GUINNET PAOLA FUQUENE BUSTOS
Proyecto de grado como requisito para optar al título de pregrado en
licenciatura en química.
DIRECTORES:
WILLIAM FERNANDO CASTRILLON CARDONA
Químico, Magíster en ciencias ambientales, Magíster investigación en
educación, Especialista en informática para la docencia, Docente Universidad
Distrital FJC
JAVIER ANDRES MATULEVICH PELAEZ
Licenciado en Química, Especialista en Análisis Químico Instrumental, Magister
en Ciencias Biológicas – Fitoquímica, Docente Universidad Distrital FJC
UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS
FACULTAD DE CIENCIAS Y EDUCACIÓN
PROYECTO CURRICULAR DE LICENCIATURA EN QUÍMICA
Bogotá. D.C
2018
AGRADECIMIENTOS
Agradezco a Dios en primer lugar por haberme acompañado y guiado a lo largo
de mi carrera, a mis padres Mauricio y Nidia por su apoyo, fortaleza y amor en
cada momento de mi vida, A mis abuelos Beatriz y Antonio, a mis tíos Pilar y
Gregori por darme la fuerza y confianza para cumplir mis metas y sueños, siendo
cada uno de ellos mi motor de vida.
Le agradezco a la universidad Distrital por la formación como profesional,
además agradezco al profesor William Castrillón por permitirme estar en el Grupo
de investigación de Productos Naturales Vegetales.
Le agradezco al profesor Javier Matulevich por él, apoyo, confianza y amistad
quien a través de su experiencia y ejemplo a seguir. ha sido parte importante de
mi aprendizaje en la carrera y formación en todo el trayecto de mi tesis.
Le agradezco a Carlos y a mis amigos por llenar mi vida de alegría y brindarme
su apoyo incondicional.
A Diego Silva y a todo el grupo de Investigación de productos Naturales por el
apoyo, la confianza y amistad formada.
A la Pontificia Universidad Javeriana le agradezco por el préstamo de
instalaciones y equipos empleados, al igual que al profesor Gonzalo Sequeda
por su colaboración en la determinación de la capacidad antioxidante.
TABLA DE CONTENIDO
1 RESUMEN ................................................................................................... 1
2 INTRODUCCIÓN ......................................................................................... 3
3 JUSTIFICACIÓN ......................................................................................... 4
4 OBJETIVOS ................................................................................................ 6
4.1 OBJETIVO GENERAL .......................................................................... 6
4.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS ................................................................. 6
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................. 7
4.3 FÓRMULACIÓN DEL PROBLEMA ...................................................... 7
5 ESTADO ACTUAL DEL TEMA ................................................................... 8
5.1 FAMILIA CUCURBITACEAE ............................................................... 8
Características generales de la familia Cucurbitaceae ................... 8
Características morfológicas de la familia Cucurbitaceae .............. 8
Distribución de la familia Cucurbitaceae ......................................... 9
Usos etnobotánicos de la familia Cucurbitaceae ............................ 9
Actividades biológicas evaluadas en especies de la Familia
Cucurbitaceae ............................................................................................ 10
Momordica grosvenori. .................................................................................. 11
Estudios Químicos de la familia Cucurbitaceae ............................ 12
5.2 Género Momordica ............................................................................ 15
Características morfológicas del género Momordica .................... 15
Distribución del género Momordica .............................................. 16
Usos etnobotánicos del género Momordica .................................. 17
Actividades biológicas en especies del género Momordica .......... 17
Estudios químicos del género Momordica .................................... 19
5.3 Especie Momordica Charantia L. ..................................................... 23
Características morfológicas de la especie Momordica charantia L.
…………………………………………………………………………..23
Distribución de la especie Momordica charantia L........................ 24
Usos etnobotánicos de la especie Momordica charantia L. .......... 26
Actividad biológica de la especie Momordica Charantia L. ........... 26
Estudio químico de la especie Momordica Charantia L. ............... 28
5.4 Capacidad antioxidante .................................................................... 30
Determinación de la capacidad antioxidante ................................ 31
Método de 1,1-difenil-2-pricrilhidrazil (DPPH) ............................... 31
Método del ácido 2,2'–azino–bis–[3–etillbenzotiazolin–6–sulfónico]
(ABTS•+) ..................................................................................................... 32
6 METODOLOGIA ........................................................................................ 34
6.1 GENERALIDADES ............................................................................. 34
Métodos de separación cromatográficos y elucidación estructural34
Espectroscopia de Resonancia Magnética Nuclear ...................... 35
6.2 Estudio fitoquímico de las partes aéreas de Momordica charantia
L ……………………………………………………………………………….35
Recolección e identificación del material vegetal.......................... 35
Marcha fitoquímica preliminar ....................................................... 36
Obtención del extracto etanólico de las partes aéreas Momordica
charantia (E. EtOH.Mc.PA) ........................................................................ 37
Evaluación de la Capacidad antioxidante por los métodos de DPPH
y ABTS… ................................................................................................... 41
7 RESULTADOS Y ANÁLISIS ..................................................................... 45
7.1 Marcha fitoquímica preliminar (MFP) .............................................. 45
7.2 Metabolitos secundarios aislados ................................................... 47
Composición de la mezcla McPA1 ............................................... 47
Composición de la mezcla McPA2 ............................................... 54
Composición de la mezcla McPA3 ............................................... 58
Composición de la mezcla McPA4 ............................................... 64
Elucidación estructural del compuesto McPA5 ............................. 68
Elucidación estructural del compuesto McPA6 ............................. 73
7.3 Evaluación de la capacidad antioxidante ........................................ 78
Curva de calibración para el ensayo DPPH .................................. 78
Cuantificación de la capacidad captadora de radicales libres por
DPPH …………………………………………………………………………..80
Estadística para el extracto, y las fracciones para determinar la
capacidad antioxidante .............................................................................. 81
Curva de calibración para el ensayo ABTS .................................. 83
Cuantificación de la capacidad captadora de radicales libres ABT
…………………………………………………………………………………….85
Estadística para el extracto, y las fracciones ................................ 86
Comparación entre el método de DPPH Y ABTS ......................... 88
8 CONCLUSIONES ...................................................................................... 92
9 RECOMENDACIONES .............................................................................. 94
10 BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................... 95
INDICE DE FIGURAS
Figura 5-1 Características morfológicas de la familia Cucurbitaceae . .............. 8
Figura 5-2 Distribución de la familia Cucurbitaceae .......................................... 9
Figura 5-3 Estructuras identificadas en mono y sesquiterpenoides comunes en
la familia Cucurbitaceae ................................................................................... 13
Figura 5-4 Ejemplos de triterpenoides de tipos oleanano y lupano comunes en
la familia Cucurbitaceae ................................................................................... 14
Figura 5-5 Ejemplos de cucurbitacinas, triterpenóides típicos de la familia
Cucurbitaceae .................................................................................................. 15
Figura 5-6 Morfología del género Momordica ................................................. 16
Figura 5-7 Distribución de especie Momordica . .............................................. 17
Figura 5-8 Ejemplos de fitoesteroles comunes encontrados en el género
Momordica........................................................................................................ 20
Figura 5-9 Ejemplos de triterpenóides encontrados en el género Momordica).
......................................................................................................................... 21
Figura 5-10 Triterpenóides tipo cucurbitanos encontrados en el género
Momordica........................................................................................................ 22
Figura 5-11 Características morfológicas de la especie Momordica charantia
A. Hojas, B. Flor, C. Frutos............................................................................... 24
Figura 5-12 Distribución de la especie Momordica charantia en el mundo
25
Figura 5-13 Distribución de la especie Momordica charantia en Colombia ..... 26
Figura 5-14 Compuestos químicos más representativos de la especie
Momordica charantia ........................................................................................ 30
Figura 5-15 Reacción química del DPPH antes y después de reaccionar con un
agente antioxidante. ......................................................................................... 32
Figura 5-16 Reacción química del ABTS antes y después de reaccionar con un
compuesto antirradical (AOH) ......................................................................... 33
Figura 6-1 Mapa de localización del área de recolección de la especie
Momordica charantia, Colombia (Tolima) municipio de honda. ........................ 36
Figura 6-2 Diagrama de la marcha Fitoquímica preliminar .............................. 37
Figura 6-3 Diagrama general del extracto y fracciones de partes aéreas de la
especie Momordica charantia........................................................................... 38
Figura 6-4 Aislamiento y purificación de las mezclas y compuestos. .............. 40
Figura 6-5 Protocolo utilizado para el control de Trolox en los métodos de
ABTS y DPPH .................................................................................................. 43
Figura 7-1 Corriente iónica total (TIC) de la mezcla McPA1 ............................ 48
Figura 7-2 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
8.30 minutos de la mezcla McPA1. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08 ................................................................................................. 49
Figura 7-3 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el Epoxylinalool . 50
Figura 7-4 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
11.738 minutos de la mezcla McPA1. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08 ................................................................................................. 51
Figura 7-5 Posibles rutas de fragmentación propuesta para la
Dihidroactinidiolida ........................................................................................... 51
Figura 7-6 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
16.056 minutos de la mezcla McPA1. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08 ................................................................................................. 52
Figura 7-7 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el Ácido palmítico
......................................................................................................................... 52
Figura 7-8 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
23.372 minutos de la mezcla McPA1. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08 ................................................................................................. 53
Figura 7-9 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el Escualeno ...... 54
Figura 7-10 Corriente iónica total (TIC) de la mezcla McPA2 .......................... 55
Figura 7-11 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
13.855 minutos de la mezcla McPA2. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08 ................................................................................................. 56
Figura 7-12 Posibles rutas de fragmentación propuesta para 3-Hidroxi-5,6-
epoxy-beta-ionona ............................................................................................ 56
Figura 7-13 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
14.014 minutos de la mezcla McPA2. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08 ................................................................................................. 57
Figura 7-14 Posibles rutas de fragmentación propuesta para 2-Ciclohexen-1-
ona-4-hidroxi-3,5,6-trimetil-4-(3-oxo-1-butenil) ................................................. 58
Figura 7-15 Corriente iónica total (TIC) de la mezcla McPA3 .......................... 59
Figura 7-16 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
8.415 minutos de la mezcla McPA3. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08 ................................................................................................. 60
Figura 7-17 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el Ácido benzoico
......................................................................................................................... 60
Figura 7-18 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
9.529 minutos de la mezcla McPA3. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08 ................................................................................................. 61
Figura 7-19 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el indol ............. 61
Figura 7-20 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
10.313 minutos de la mezcla McPA3. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08 ................................................................................................. 62
Figura 7-21 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el óxido de linalool
......................................................................................................................... 63
Figura 7-22 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
10.680 minutos de la mezcla McPA3. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08 ................................................................................................. 63
Figura 7-23 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el Ácido cinámico
......................................................................................................................... 64
Figura 7-24 Corriente iónica total (TIC) de la mezcla McPA4 .......................... 65
Figura 7-25 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
7.184 minutos de la mezcla McPA4. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08 ................................................................................................. 66
Figura 7-26 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el Eucaliptol ..... 66
Figura 7-27 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
8.415 minutos de la mezcla McPA4. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08 ................................................................................................. 67
Figura 7-28 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el Ácido
propanoico, 2-metil-, 1-(1,1-dimetiletil)-2-metil-1,3-propanediol ester .............. 68
Figura 7-29 Espectro de RMN 1H (300 MHz, Metanol-d4) del compuesto
McPA5 .............................................................................................................. 69
Figura 7-30 Espectro de RMN 13C J-MOD (75 MHz, Metanol-d4) del compuesto
McPA5. ............................................................................................................. 70
Figura 7-31 Ampliación de espectro COSY en RMN para el compuesto McPA5.
......................................................................................................................... 71
Figura 7-32 Asignación de los desplazamientos químicos para el compuesto
McPA5 .............................................................................................................. 71
Figura 7-33 Espectro de RMN 1H (300 MHz, Metanol-d4) del compuesto
McPA6 .............................................................................................................. 74
Figura 7-34 Espectro de RMN 13C J-MOD (75 MHz, Metanol-d4) del compuesto
McPA6 .............................................................................................................. 75
Figura 7-35 Ampliación de espectro COSY en RMN para el compuesto McPA6
......................................................................................................................... 76
Figura 7-36 Asignación de los desplazamientos químicos para el compuesto
McPA6 .............................................................................................................. 76
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 5-1 Actividades biológicas de algunas especies vegetales de la familia
Cucurbitaceae .................................................................................................. 10
Tabla 5-2 Actividades biológicas de algunas especies vegetales del género
Momordica........................................................................................................ 18
Tabla 5-3 Clasificación taxonómica de Momordica charantia L. ...................... 23
Tabla 5-4 Estudios de algunas actividades farmacológicas en la especie
Momordica charantia + ..................................................................................... 27
Tabla 7-1 Marcha fitoquímico preliminar del extracto etanólico de las partes
aéreas de la especie Momordica charantia. ..................................................... 45
Tabla 7-2 Tiempos de retención y resultados de la comparación con la librería
NIST 08 para la mezcla McPA1 ....................................................................... 48
Tabla 7-3 Tiempos de retención y resultados de la comparación con la librería
NIST 08 para la mezcla McPA2 ....................................................................... 55
Tabla 7-4 Tiempos de retención y resultados de la comparación con la librería
NIST 08 para la mezcla McPA3 ....................................................................... 59
Tabla 7-5 Tiempos de retención y resultados de la comparación con la librería
NIST08 para la mezcla McPA4 ........................................................................ 65
Tabla 7-6 Comparación de los desplazamientos químicos del compuesto
McPA5 con los de kaguasaponina D . .............................................................. 72
Tabla 7-7 Comparación de los desplazamientos químicos del compuesto
McPA5 con los de Momordicina ll .................................................................... 77
Tabla 7-8 Promedio de absorbancias (n=3), %inhibición, IC50 de trolox......... 78
Tabla 7-9 Datos estadísticos para la sustancia patrón Trolox.......................... 79
Tabla 7-10 Lectura del extracto y las fracciones, a los 60 min transcurridos. .. 80
Tabla 7-11 Porcentaje de inhibición, datos estadísticos para el extracto y las
fracciones por el método de DPPH .................................................................. 81
Tabla 7-12 Promedio de absorbancias (n=3), %inhibición, IC50 de trolox....... 84
Tabla 7-13 Datos estadísticos para la sustancia patrón Trolox........................ 85
Tabla 7-14 Lectura del extracto y las fracciones, a los 60 min transcurridos. .. 85
Tabla 7-15 % de inhibición por el método de ABTS para el extracto y las
fracciones ......................................................................................................... 86
Tabla 7-16 Comparación del método DPPH Y ABTS a partir del IC50 para el
extracto y fracciones ........................................................................................ 88
Índice de Gráficas
Gráfica 7-1 Curva de calibración para trolox .......................................................... 79
Gráfica 7-2 % de Inhibición para el control positivo, extracto y fracciones ....... 83
Gráfica 7-3 Curva de calibración para Trolox ......................................................... 84
Gráfica 7-4 % de Inhibición para el control positivo, extracto y fracciones ....... 88
LISTA DE ABREVIATURAS
ABTS
AcOEt
AFP
CC
CCD
CCDP
CF
CG-EM
Acido 2,2′-azino-bis-3-etilbenzotiazolin-6-
sulfonico
Acetato de etilo
Análisis fitoquímico preliminar
Cromatografía en Columna
Cromatografía Capa Delgada
Cromatografía en capa delgada preparativa
Cromatografía en columna flash
Cromatografía de gases acoplada a
espectrometría de masas
DCM
DDPH
EM
Diclorometano
1,1-difenil-2-pricril-hidrazilo
Espectrometría de masas
EtOH
E. EtOH.Mc.PA
Fx.AcOEt.Mc.PA
Fx.DCM.Mc.PA
Fx.HEP.Mc.PA
Fx.Hidroalc.Mc.PA
HEP
IC50
MeOH
MFP
m.s.n.m
m/z
TIC
Etanol
Extracto etanólico de las partes aéreas de
Momordica charantia
Fracción de acetato de etilo de las partes
aéreas de Momordica charantia
Fracción de diclorometano de las partes
aéreas de Momordica charantia
Fracción de heptano de las partes aéreas
de Momordica charantia
Fracción hidroalcohólica de las partes
aéreas de Momordica charantia
Heptano
Concentración inhibitoria del 50%
Metanol
Marcha Fitoquímica Preliminar
Metros sobre el nivel del mar
Relación masa carga
Corriente iónica total
1
1 RESUMEN
La especie Momordica charantia L. perteneciente al género Momordica de la
familia Cucurbitaceae conocida comúnmente como balsamina, bejuco de coje,
subicogen, pepinillo y pepino cimarrón es una planta enredadera con fruto
amargo; actualmente es utilizada como planta medicinal, reconocida por su
actividad hipoglicemiante nativa de la región tropical, teniendo en cuenta la
importancia de esta especie en la medicina tradicional ,este trabajo presenta la
contribución al estudio químico y biológico de las partes aéreas de la especie
Momordica charantia, haciendo una importante contribución a la familia
Cucurbitaceae y en especial al género Momordica, ya que presenta pocos
estudios en nuestro país.
A partir del material vegetal colectado en el municipio de Honda (Tolima) e
identificado en el herbario de la Universidad Nacional de Colombia bajo el
número de colección COL 596915 se realizó la extracción mediante la técnica de
maceración en frio con etanol al 96% obteniéndose 37.1 g (7.4 % p/p) de extracto
total (E.EtOH.Mc.PA), donde mediante el estudio fitoquímico preliminar se
determinó cualitativamente la presencia de diferentes metabolitos secundarios
como: terpenos, taninos, glucósidos cardiotónicos y probablemente alcaloides
siendo esto consecuente con estudios fitoquímicos realizados sobre diferentes
especies del mismo género como Momordica balsamina (Mussa, 2006) o
Momordica grosvenori (Takasaki et al., 2003).
Para la determinación y caracterización química de los metabolitos secundarios
de la especie vegetal Momordica charantia se realizó un fraccionamiento liquido-
liquido continuo al extracto E.EtOH.Mc.PA con solventes de polaridad creciente,
obteniendo las fracciones de heptano (Fx.Hept.Mc.PA 1.22%), diclorometano
(Fx.DCM.Mc.PA 8.51%), acetato de etilo (Fx.AcOEt.Mc.PA 1.02%) y un residuo
hidroalcohólico (Fx.Hidroalc.Mc.PA 89.25%); estas fracciones fueron sometidas
a separaciones sucesivas y purificación utilizando técnicas de cromatografía,
tales como cromatografía en capa delgada (CCD), cromatografía en capa
delgada preparativa (CCDP) y cromatografía en columna (CC), permitiendo
identificar dos compuestos denominados Kaguasaponina D y Momordicina ll ,
2
cuatro mezclas de compuestos, la primera conformado por: un terpeno
oxigenado Epoxylinalool, un norisoprenoides Dihidroactinidiolida, un ácido graso
saturado el Ácido palmítico y un triterpeno alifático identificado como Escualeno,
en la segunda mezcla se encontró: un terpenoide biciclico (3-Hidroxi-5,6-epoxy-
beta-ionona y un norisoprenoide 2-Ciclohexen-1-ona-4-hidroxi-3,5,6-trimetil-4-
(3-oxo-1-butenil), en la tercer mezcla se encontró: un terpeno oxigenado el Oxido
de linalool, dos compuestos fenólicos Ácido cinámico y Ácido benzoico, un
compuesto heterocíclico Indol y por ultimo para la cuarta mezcla se encontró un
terpeno oxigenado Eucaliptol y un ácido esterificado (ácido propanoico, 2-metil-,
1-(1,1-dimetiletil)-2-metil-1,3-propanediol ester.La identificación de las mezclas
obtenidas se realizó mediante la técnica de Cromatografía de gases acoplada a
espectrometría de masas, realizando la comparación de los datos con los
reportados en la librería NIST08.
La determinación de la capacidad antioxidante se realizó mediante dos métodos
por DPPH y ABTS, donde presento efecto inhibitorio al 50% en concentraciones
superiores a 1000 ppm, para el extracto total con un IC50 de 5734.1ppm, las
fracciones de acetato de etilo con un IC50 de 6178ppm y el residuo
hidroalcohólico con IC50 de 7251.8 ppm, por el método del radical DPPH. A
diferencia por el método desarrollado ABTS el extracto etanolico presento un
IC50 de 5513 ppm para las fracciones de heptano con un IC50 de 5578ppm ,
la fracción de acetato de etilo con un IC50 de 4282.9ppm y un residuo
hidroalcohólico con un IC50 de 4375.2ppm, tomando como referencia la
captación antioxidante del trolox como radical libre para ambos métodos,
permitiendo establecer así la baja capacidad antioxidante que poseen las partes
aéreas de la especie vegetal Momordica charantia debido a las altas
concentraciones en que inhibe el radical.
3
2 INTRODUCCIÓN
Colombia ocupa el 0,22 % de la superficie terrestre y alberga cerca del 10% de
la biodiversidad del planeta con aproximadamente 28.800 especies catalogado
a nivel mundial, como territorio megadiverso dentro del grupo de los 14 con
mayor índice de biodiversidad en la tierra (Andrade, 2011) utilizando estas
especies con fines medicinales y etnobotánicos. A esta alta diversidad biológica
subyacen factores, climáticos, ecológicos, geográficos y evolutivos, cuya
interacción resulta en un mosaico de ecosistemas, procesos y especies
(Ministerio de ambiente y desarrollo sostenible,2014).
Destacando la diversidad de especies presentes en el país algunos estudios han
servido como modelos para la preparación de sustancias bioactivas, siendo
materia prima para la síntesis de sustancias de interés farmacológico y/o interés
industrial, realizando acciones útiles para la salud en procesos patológicos
(Gutiérrez R. y Estévez B.,2009).
En la familia Cucurbitaceae se ha encontrado reportes acerca de la composición
química y estudios farmacológicos de varias especies como, por ejemplo,
especies del género Cucumis y Cucúrbita que presentan actividades biológicas
como antiinflamatoria, antimicrobiana anticancerígena y antioxidante (Pozner,
2010; Mussa, 2006). Actualmente Momordica charantia ha tenido diferentes
estudios preclínicos documentando los efectos antidiabéticos e hipoglucémicos
a través de diversos mecanismos postulados y por lo que ha sido de gran ayuda
en la medicina (Villareal et al., 2015).
De acuerdo con lo descrito anteriormente, el presente trabajo de investigación
realiza un aporte al conocimiento químico y biológico de la familia Cucurbitaceae
en Colombia, por medio del estudio químico de sus metabolitos fijos y la
evaluación de la capacidad antioxidante de sus extractos y fracciones obtenidos
de las partes aéreas de Momordica charantia L.
4
3 JUSTIFICACIÓN
En el planeta solo se ha estudiado una pequeña fracción de la flora en pro de la
salud humana y animal. Se calcula que un 80% del cuidado primario de la salud
en la población de los países en desarrollo depende de la medicina tradicional
basada en medicamentos provenientes de plantas y animales (Rodríguez, 2003).
Así mismo una sola planta puede presentar miles de metabolitos secundarios
diferentes que pueden ser de gran importancia para el desarrollo de productos
naturales que combatan diferentes enfermedades en el mundo (Hostettmann
Gupta, & Mutis de Serna, 2008).
Colombia al ocupar el segundo lugar con mayor biodiversidad, se constituye
como un gran potencial a estudiar, en especial por sus condiciones ambientales
en las diversas regiones, lo cual puede representar mayor variedad de
compuestos en cuanto a su composición química y actividad biológica
(Hostettmann Gupta, & Mutis de Serna, 2008). Por lo anterior, el efecto que han
tomado las plantas medicinales y los compuestos presentes en ellas en los
últimos años ha sido un nuevo auge para varias investigaciones y estudios que
se han expuesto con el fin de mantener viva la tradición herbolaria, encontrando
nuevos compuestos activos con diferentes propiedades que actúan contra
enfermedades, para el uso en la medicina moderna.
En las últimas décadas se ha generado gran interés en los antioxidantes
naturales presentes en las plantas ya que el estrés oxidativo (un desequilibrio
entre las sustancias oxidantes y prooxidantes) ha implicado grandes afecciones
en la salud. Científicamente se ha demostrado que el daño oxidativo ocasionado
por los radicales libres está relacionado con un amplio número de enfermedades
y desordenes que incluye: fallo cardíaco, daños celébrales, cataratas,
inflamaciones, entre otros (Youngson, 2005). Al contar con un recurso tan amplio
como la biodiversidad en nuestro país, se ha permitido realizar el estudio
fitoquímico de diferentes especies vegetales. Una de las familias vegetales que
se encuentra ampliamente distribuida es la familia Cucurbitaceae, constituye una
fuente importante de especies como Cucurbita mostacho, Sechium edule que
según estudios reportados en la literatura posee un elevado potencial
5
antioxidante y otras especies como Cucumis anguria y Melothria guadalu
presentan actividad antiinflamoria y antimicrobiana (Carlos, 2014) a esta familia
también pertenece la especie vegetal Momordica charantia conocida
comúnmente en las regiones tropicales de Colombia como ¨balsamina¨ se han
reportado en los frutos y semillas efectos como febrífugo, dolencias hepáticas,
cálculos renales, afecciones de piel, ulceras, quemaduras por contenido de
carotenos, además se usa contra el raquitismo y la xeroftalmia (Arango,2006),
de acuerdo con estudios realizados puede ser atribuida la capacidad
antioxidante a compuestos fenólicos considerados marcadores
quimiotaxonómicos de esta familia (Fonnegra & Jiménez, 2007). En la especie
Momordica charantia no se tiene antecedentes científicos nacionales que
comprueben su propiedad antioxidante y su composición; por esta razón se hace
meritorio realizar este estudio contribuyendo de manera importante al
conocimiento químico y biológico de esta especie.
6
4 OBJETIVOS
4.1 OBJETIVO GENERAL
Contribuir al estudio químico de las partes aéreas de Momordica charantia L.
(Cucurbitaceae) y evaluar su capacidad antioxidante.
4.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Obtener extractos y fracciones de distintas polaridades provenientes de la
especie Momordica charantia L.
Aislar, purificar y elucidar la estructura química de los metabolitos
secundarios mayoritarios presentes en los extractos o fracciones de las
partes aéreas de Momordica charantia L.
Evaluar la capacidad antioxidante de los extractos y fracciones obtenidos
de las partes aéreas de la especie Momordica charantia L.
7
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
En la actualidad el uso de plantas para tratar ciertas enfermedades es bastante
reconocida debido a los metabolitos secundarios que posee, por lo que han sido
estudiados para aplicarlos en la industria farmacológica en beneficio de la
población mundial (Aldana, 2010). Teniendo en cuenta la diversidad vegetal de
Colombia es importante hacer el reconocimiento de algunas especies como lo
son de la familia Cucurbitaceae que su estudio ha sido basado en la
alimentación balanceada del ser humano y aunque otras de las especies de esta
familia hacen parte del estudio en la medicina hace falta contribuir en el
conocimiento de plantas como Momordica charantia que se ha utilizado como
hipoglicemiante y que tiene cantidades de beneficios pero no se han hecho
estudios recientes , es por esto que se hace necesario realizar estudios sobre
capacidad antioxidante además de la extracción y purificación de metabolitos
que pueden llegar a ser importantes para futuras investigaciones en la
evaluación de otras actividades biológicas.
4.3 FÓRMULACIÓN DEL PROBLEMA
¿Cuál es la composición química de las partes aéreas de Momordica charantia
L. y presentan sus extractos y fracciones capacidad antioxidante?
8
5 ESTADO ACTUAL DEL TEMA
5.1 FAMILIA CUCURBITACEAE
Características generales de la familia Cucurbitaceae
La familia Cucurbitaceae se encuentra constituida por 118 géneros y 845
especies distribuidas en el trópico con algunas especies semidesérticas
(Stevens, 2009). Esta familia se divide en dos subfamilias: Zanonioideae y
Cucurbitoideae generalmente son plantas herbáceas y trepadoras que crecen
rápidamente, un gran número de especies en esta familia son utilizadas en la
alimentación balanceada del ser humano y animal (Deyo & Malley, 2008).
Características morfológicas de la familia Cucurbitaceae
Son plantas típicamente trepadoras (zarcillos) con gruesos rizomas tuberosos,
leñosas en la base, sus hojas palmeado-lobuladas, sin estípulas con nectarios
extraflorales. Las flores usualmente son unisexuales y regulares monoicas o
dioicas, epíginas. Las semillas se pueden encontrar grandes, aplanadas, sin
endosperma, cotiledones muy desarrollados y con reservas oleaginosas. El fruto
es alargado y rugoso, la mayoría de miembros tienen como característica en su
estructura haces vasculares bicolaterales. (Trease & Evans, 2002; Facena, s.f).
En la Figura 5-1 se observan algunas características morfológicas descritas
anteriormente.
Figura 5-1 Características morfológicas de la familia Cucurbitaceae (Castroviejo
et.al, 2005).
9
Distribución de la familia Cucurbitaceae
La familia Cucurbitaceae constituye una variedad de géneros y especies
anteriormente mencionado presentándose en distintas zonas continentales. Las
plantas se encuentran distribuidas en regiones tropicales y subtropicales de
ambos hemisferios, en todo el mundo (Bolaños, 1998). Se desarrollan entre los
50-1500 m.s.n.m, ocupando áreas de bosques siempre verdes, caducifolios,
márgenes de ríos, matorrales, sabanas, alrededor de asentamientos humanos y
áreas de cultivo (Facena, s.f). Las especies de la familia Cucurbitaceae se
encuentran principalmente en, África, sur de Asia, norte de Australia, y en el
centro y sur de América como se puede observar en el mapa de la Figura 5-2.
Las Cucurbitáceas en los antecedentes botánicos favorecen el origen sur y
centro americano y en los países que más han sido cultivados son (México,
Colombia y Guatemala) debido a su gran importancia en la alimentación. En
Colombia la distribución de esta familia se centra en las zonas de Sierra nevada,
Santa Marta, Costa Atlántica, Antioquia y algunas zonas de la cordillera de los
andes (Patiño, 2002).
Figura 5-2 Distribución de la familia Cucurbitaceae (tropicos.org, s.f).
*Las zonas de color amarillo corresponden a la distribución de la familia Cucurbitaceae
Usos etnobotánicos de la familia Cucurbitaceae
10
Diversas especies de la familia Cucurbitaceae son empleadas con fines curativos
tradicionales Cayaponia racemosa, Citrullus lanatus, Cucumis sativus, Cucurbita
moschata, Gurania spinulosa, Luffa cylindrica, L. sepium, Momordica
charantia y Rytidostylis carthagenensis, por sus potenciales propiedades
antiálgicas, antiflatulentas, antiinflamatorias, catárticas, febrífugas, otálgicas y
vermífugas (Delascio & López, 2007). Como plantas alimenticias o comestibles,
bajo la forma de frutas frescas, cocidas, ensaladas, jugos, dulces, arilos y
semillas son consumidas Citrullus lanatus, Cucumis anguria, C. melo, Cucurbita
sativus, Cucurbita moschata, Cucurbita pepo y Momordica charantia. Incluye
además especies con valor alimenticio potencial que a partir de los años 60 se
ha esforzado para producir variedades comerciales de las Cucurbitáceas con
tolerancia y resistencia a las virosis más comunes y destructivas, ensayando con
métodos tradicionales para el mejoramiento genético (Bolaños, 1998).
Actividades biológicas evaluadas en especies de la Familia
Cucurbitaceae
Los estudios realizados sobre actividades biológicas en especies de la familia
Cucurbitaceae son amplios debido a su distribución geográfica. Dentro de las
diversas actividades biológicas evaluadas a extractos y compuestos aislados de
especies pertenecientes a esta familia se encuentran reportes de actividad
antiinflamatoria, antioxidante, antimicrobiana, antidiabética, y antiandrogénica
(Pozner, 2010; Mussa, 2006). En la Tabla 5-1, se ilustran algunos estudios
biológicos realizados en especies de la familia Cucurbitaceae.
Tabla 5-1 Actividades biológicas de algunas especies vegetales de la familia
Cucurbitaceae
Especie
Órgano de
la planta o
extracto
evaluado
Actividad/caracterización
biológica
Referencia
11
Cucurbita
pepo L
Semillas Actividad Antiandrogénica Bellma A et
al., 2006
Cucurbita
mostacho
Extractos
vegetales
Actividad Antioxidante Gutiérrez et
al., 2007
Cucumis
anguria
Fruta Actividad Antimicrobiana Kumar &
kamaraj.,
2011
Melothria
guadalu
Tallos y fruta Actividad Antiinflamatoria Mohamed,
Polo &
Martinez, s. f
Sechium
edule
Hojas y
semillas
Actividad Antioxidante Ordoñez,
Gómez &
Vattuone,
2006
Ecballium
elaterium
Extractos
vegetales
Actividad
inmunomoduladora
Attard,
Brincat, &
Cuschieri,
2005
Cucúrbita aff
máxima
Semillas Actividad Vermífuga Avila &
Vásquez,
2011
Lagenaria
siceraria
Fruta Caracterización
Germoplasma
Yetisir, Sakar,
& Serçe, 2008
Momordica
grosvenori.
Fruta Actividad Anti carcinogénica Takasaki et
al., 2003
12
Momordica
charantia l
Semillas y
frutos
Actividad Anti-diabética Raman &
Lau,1996
Estudios Químicos de la familia Cucurbitaceae
De los estudios fitoquímicos realizados sobre las especies de la familia
Cucurbitaceae en general se han reportado triterpenoides tetracíclicos
oxigenados denominados cucurbitacinas, con efecto purgante y sabor amargo,
autores como Takabayashi et al., 1994, reportan en la familia Cucurbitaceae que
algunas especies al estar infestadas por arácnidos, elevando los niveles de β-
ocimeno de monoterpenos 4,8-dimetil-1,3E,7-nonatrieno a 25 y 54%,
respectivamente, de los compuestos volátiles totales en libertad. Mientras el β-
ocimeno (6) es particularmente un monoterpeno típico en la familia
Cucurbitaceae, el monoterpeno 4,8-dimetil-1,3E,7-nonatrieno (2) y el
sesquiterpeno 4,8,12-trimetil-1,3E,7E,11-tridecatetraeno (3) es común en
muchas especies de diversas familias (Loughrin JH et. al,1994). En esta familia
se han identificado los siguientes compuestos químicos: α-pineno (1), β-
felandreno (5), (-)-mentol (4) ,1,8-cineol (7), piperitona (8), citronelal (9) ,neral
(z-citral) (10), geranial (E-citral) (11), acetato de geranilo (12).
13
Figura 5-3 Estructuras identificadas en mono y sesquiterpenoides comunes en
la familia Cucurbitaceae (Mussa, 2006).
Los compuestos de lupeol (17) y β-amirina (13) cuyos esqueletos de tipo Lupano
y oleanano respectivamente se observan en la Figura 5-4, siendo otros alcoholes
triterpenoides muy comunes en el reino vegetal. El lupeol actúa a través de un
mecanismo diferente en acción de la aspirina y por lo tanto no inhibe la actividad
de la ciclooxigenasa y la prostaglandina (Kweifio-Okai et.al ,1955). La actividad
citotóxica de triterpenoides pentacíclicos también ha sido demostrada por el
ácido Ursólico (16) y el ácido Oleanólico (15). Otros triterpenoides comunes en
la familia Cucurbitaceae son: α-amirina (14), Betulinol (18), ácido betulinico (19),
y acido 3-acetilbetunilico (20).
OH
O
O
H
O
H
H
O
O
O
(1) (2) (3)
(4) (6)(5) (8)(7)
(12)(11)(10)(9)
14
Figura 5-4 Ejemplos de triterpenoides de tipos oleanano y lupano comunes en
la familia Cucurbitaceae (Gershenson & Croteau ,1991; Faldt, 2000).
Las cucurbitacinas son derivados bioactivos de triterpenoides tetracíclicos se
producen principalmente en la familia Cucurbitaceae (Halaweish, Tallamy &
Santana,1999) son conocidos por ser extremadamente amargos, por su alta
toxicidad a la mayoría de los organismos (incluyendo seres humanos) y
participan directa o indirectamente en los procedimientos de defensa contra las
plantas (Miró,1995). Existen una variedad de cucurbitacinas que difieren en
cuanto a la aparición de ciertos tipos de ligandos y la presencia de dobles
enlaces en ciertas posiciones encontrando los siguientes: cucurbitacina D ó
2β,16α,20β,25-tetra-hidroxicucurbita-5,23-dien-3,11,22-triona (21) ,
cucurbitacina B ó 2β,16α,20β-trihidroxi-25-acetocucurbita-5,23-dien-3,11,22-
triona (22), di-hidrocucurbitacina C ó 3β,16α,19,20β-tetra-hidroxi-25-
acetocucurbita-5-en-11,22-diona (23) y di-hidrocucurbitacina Q1 ó 3β,3α,20β-
tetra-hidroxi-25-acetocucurbita-5-en-11,22-diona (24) (Afifi et.al ,1999).
OH
R1
R3
R2
R1
R2
(13) R1=CH3;R2=H;R3=CH3 β-amirina
(14) R1=CH3;R2= CH3;R3=H α-amirina(15) R1=CO2H; R2=H;R3=CH3 Ac.
Oleanólico(16) R1= CO2H; R2= CH3;R3=H Ac.
Ursólico
(17) R1=OH; R2=CH3 Lupeol
(18) R1=OH; R2= CH2O H Betulinol(19) R1=OH; R2=CO2H Ac. Betulínico
(20) R1= OAc; R2= CO2H Ac. 3-acetilbetulínico
15
Figura 5-5 Ejemplos de cucurbitacinas, triterpenóides típicos de la familia
Cucurbitaceae (Mussa, 2006).
5.2 Género Momordica
Características morfológicas del género Momordica
El género Momordica posee alrededor de 59 especies, en ambientes cálidos y
en áreas húmedas. Este género cubre una amplia variedad de plantas silvestres
de gran importancia por su funcionalidad en ecosistemas y aplicaciones
terapéuticas de igual manera, incluye a la mayoría de vegetales de la familia
Cucurbitaceae que se utilizan como alimento (Assubaie & Garawany, 2004).
Las semillas de este género son planas, gruesas sobre la superficie, contiene
márgenes afiladas y gruesas en los lados, ampliamente rectangulares, sin
distinción entre los extremos con micropilares, esculpidos. Los frutos son
pequeños, distantemente blandos, sin protuberancias o crestas, aunque las
especies monóicas anuales (M. balsamina y M. charantia) comparten más
características morfológicas a diferencia de otras especies. Una característica
especifica es el sujetador de la flor macho se encuentra en la base cerca del eje
o por debajo del centro del tallo de la flor en M. charantia. Mientras que en M.
balsamina se sitúa en el medio superior o hacia la punta del pedúnculo. Los
filamentos de anteras se fusionan para dar una apariencia globosa como lo es la
OHOH
O
OH
RO
O
(21) R=OH
(22) R=OAc
(23)R1=H;R2=OH
(24)R1=OH;R2=H
OAc
O
OH
OH
OH
R2
O
R1
16
especie M. charantia, mientras que en la otra especie se divide en lóbulos
(Bharathi & Jhon, 2013). En la figura 5-6 se presenta la morfología del género
Momordica.
Figura 5-6 Morfología del género Momordica (Poisoner’s, 2018).
Distribución del género Momordica
Las especies del género Momordica se distribuyen en su mayoría en África
tropical, Sudáfrica, Asia, India y algunas en sur América. Principalmente como
vegetal están en Gabón, Sudán, y Malawi otras zonas principales donde se
encuentran son en Ghana, Kenia, Uganda y Tanzania. La mayoría de los cultivos
utilizados en África oriental son importados de países asiáticos. En la actualidad,
los criadores de este género se están concentrando en los híbridos y las ventajas
de obtener un mayor potencial de rendimiento teniendo una mejor resistencia a
una proporción alta de plagas, enfermedades y al grado de amargura (Grubben
& Denton, 2004), la distribución del género Momordica se observa en la Figura
5-7.
raíz cónica
y ramificada
tallo robusto ores nacen
arracimadas
en as a i as
de os ta os
Hojas
palmadas y
lobuladas
Frutos son
bayas lisas y
globulares
17
Figura 5-7 Distribución de especie Momordica (tropicos.org, s.f).
*Las zonas de color amarillo corresponden a la distribución del género Momordica
Usos etnobotánicos del género Momordica
Las especies del género Momordica se han utilizado como un purgante drástico
incluso hasta tóxico, pero en algunas zonas de distintos continentes los frutos
son tradicionalmente comestibles. Las hojas de algunas especies en este género
se recogen de la naturaleza y se comen después de hervir por lo general en
tiempos de escasez. Las plantas son pastoreadas por el ganado en Sudán, y las
hojas se usan como forraje (Kenia, Tanzania). Según la literatura botánica, en la
medicina se usa popularmente contra problemas de la piel y parásitos externos,
como sarnas y granos también para expulsar parásitos estomacales e
intestinales (Grubben & Denton, 2004).
Actividades biológicas en especies del género Momordica
En cuanto a los estudios de la actividad biológica en el género Momordica la
literatura reporta principalmente actividades como Antihiperglucemica y
Antidiabética como es el caso de la especie Momordica cymbalaria (Rao,
Kesavulu & Apparao, 2001). Se reporta en otras especies estudios como
Hipoglicemiante, Antioxidante, Anticancerígena y Antiinflamatoria (Maulide,
2012). En la Tabla 5-2, se observa algunos estudios biológicos realizados en
especies del género Momordica.
18
Tabla 5-2 Actividades biológicas de algunas especies vegetales del género Momordica
Especie
Órgano de
la planta o
extracto
evaluado
Actividad/caracterización
biológica
Referencia
Momordica
balsamina
Semillas Actividad Antiinflamatoria
Actividad Antiemética
Actividad Antioxidante
Actividad Antimicrobiana
Propiedades anti-VIH
Maulide,2012
Mussa,2006
Bot et
al.,2006
Momordica
cymbalaria
Extractos
vegetales
Actividad antiovulatoria
Actividad aantidiabética
Actividad hipolipidemica
Actividad
antihiperglucémica
Rao,
Kesavulu &
Apparao,
2001
Momordica
grosvenori
Extractos
vegetales
Actividad anticarcinogénica
Actividad antinflamatoria
Takasaki
et.al 2003
Di, Huang y
Ho, 2011
Momordica
cochinchinen
sis
Fruta y
Semillas
Semillas
Actividad Antioxidante
Actividad
inmunomoduladora
Actividad antinflamatoria
Kubola &
Siriamornpu ,
2011
Tsoi, NG &
Fong, 2006
Jung et.al
2013
19
Momordica
foetida
Extracto
acuoso de
la planta
Actividad Antipalúdica Waako et
al.,2005
Momordica
charantia l
Semillas y
frutos
Actividad Antidiabética Raman &
Lau, 1996
Estudios químicos del género Momordica
Se ha realizado algunos estudios preliminares fitoquímicos, sobre algunas
especies de Momordica con el fin de caracterizar algunos metabolitos
secundarios determinando su potencial biológico. En el que se atribuye la
composición en flavonoides y taninos para propiedades antioxidantes
antiinflamatorias antialérgicas y anticancerígenas. Por su contenido en
triterpenos, como la momordicina propiedades antioxidantes, antiinflamatorias y
vasodilatadoras se encuentra el B-sitoesterol (30), estigmastanol (33) y
campesterol (32). Los esteroides también hacen parte de este género el cual se
le comprenden una estructura similar a la de triterpenoides, que consta de un
sistema de anillo tetracíclico típico (Halaweish, Tallamy & Santana,1999). Los
fitoesteroles al tener de 27 a 32 átomos de carbono tienen un grupo hidroxilo en
la posición C-3, dos grupos metilos en las posiciones C-10 y C-13 y una cadena
lateral de alquilo en la posición C-17 (Novotný, Vachalkova, & Biggs,
2001).También pueden producirse en forma de ésteres y ácidos grasos, por
ejemplo, el linoleato de β-sitosterilo (36), E β-sitosterol es el fitosterol más
abundante en las plantas como se ilustra en la Figura 5-8. Mientras que a los
alcaloides y resinas se les atribuyen propiedades antimicrobianas
antiinflamatorias, antisépticas y antiinfecciosas. Los glucósidos juegan un papel
importante en el tratamiento de la insuficiencia cardíaca, (Mussa, 2006; Thakur
et al., 2009). Encontrando así los siguientes compuestos: Colestano (25),
ergostano (26), estigmastano (27), colesterol (28), campesterol (29),
Momordeno ó 3β-hidroxi-estigmasta-5,14-dien-16-ona (31), Espinasterol ó
Estigmasta-7,22-dien-3β-ol (34), Estigmasterol (35).
20
Figura 5-8 Ejemplos de fitoesteroles comunes encontrados en el género
Momordica (Mussa, 2006).
R
(25) R=H colestano
(26) R=Me ergostano(27) R=Et estigmastano
(28) R=H colesterol
(29) R=Me campesterol(30) R=Et sitosterol
R
OH
OH
O
R
OH(32)R=Me
campesterol(33)R=Et sitostanol o estigmastanol
(31)
OHOH
O(CH2)7
O
(CH2)4CH3
(34) (35)
(36)
21
Sin especificar las cantidades y composiciones, algunos estudios publicados
muestran que diferentes partes del género Momordica contienen una resina,
algunas saponinas y ciertos alcaloides, además de metabolitos tipo triterpenoide
como la momordicina en mayor cantidad, el momordol un alcohol triterpenoide
monocíclico, y un grupo de triterpenóides tipo pentacíclicos, que comprende
momordicina, momordicinina y momordicilina (Figura 5-9) en algunas especies
del género Momordica (Begum et.al 1997; Mussa, 2006). Por su amplia variedad
se deduce que la diversidad estructural de triterpenoides está relacionada con
funciones fisiológicas en lo que estos compuestos son sintetizados por especies,
encontramos algunas como : Momordicina ó 13-hidroxi-28-metoxi-urs-11-en-3-
ona (37), Momordicilina ó 24-(1´-hidroxi-1´-metil-2-penteniloxil)- ursan -3-ona
(38) , Momordicina ó 13β,28-epoxi-urs-11-en-3-ona (39) y Momordol ó 1-hidroxi-
1,2-dimetil-2-(8´,10´-dihidroxi-4´7´-dimetil-11´-hidroximetil-trideca)-3etilciclohex-
5-en-4-ona (40) .
Figura 5-9 Ejemplos de triterpenóides encontrados en el género Momordica
(Mussa, 2006).
OH
COCH3
O
O
O
O C
OH
CH
O
CH CH2 CH3
O
OH
OH OH
CH2OH
(37)
(39)
(38)
(40)
22
Los cucurbitanos constituyen un grupo de triterpenoides tetracíclicos típico de
las especies en la familia Cucurbitaceae, especialmente actúan en la actividad
biológica antitumoral (Akihisa, Yasukawa, & Tokuda, 2003). En general, el
cucurbitano tipo triterpenoide tiene un esqueleto compuesto de un núcleo
tetracíclico similar al de esteroides (1,2-ciclopentano-perhidrofenantreno,
designados gonano o esterano) y sustituido por dos grupos metilos en el C-4 de
posición de otros grupos metilos en las posiciones C-9, C-13 y C-14 cadena
lateral alquilo en C-17 como se observa en la Figura 5-10. A continuación las
estructuras de los siguientes compuestos químicos encontrados en el género
Momordica: 3β,7β,23α-trihidroxicucurbita-5,24-dien-19-al (41), 3β,7β,25-
trihidroxicucurbita-5,23-dien-19-al (42), 3β,7β –trihidroxi-25-metoxicucurbita-
5,23-dien-19-al (43) , 3β-hidroxi-7β,25-dimetoxicucurbita-5,23-dien-19-al (44)
,3β-dihidroxi-7β-metoxicucurbita-5,23,25-trien-19-al (45) (Miró ,1995).
Figura 5-10 Triterpenóides tipo cucurbitanos encontrados en el género
Momordica (Mussa, 2006).
CHO
HH
OH
OH
OH
CHO
HH
OHOR1
OR2
CHO
HH
OHOMe
(42)R1=H ; R2=H(43)R1=H ; R2=Me(44)R1=Me ;
R2=Me
(45)
(41)
23
5.3 Especie Momordica Charantia L.
Características morfológicas de la especie Momordica charantia L.
La especie Momordica charantia L. es una planta tipo enredadera, herbácea
anual, es conocida como karela en India, melón amargo (por el sabor amargo de
todas sus partes) o Cundeamor en sur América. En Colombia se reconoce por
sus nombres comunes balsamina, bejuco de coje, subicogen, pepinillo, pepino
cimarrón (Vademecum Colombiano de Plantas Medicinales, 2008) y en el Valle
del Cauca, como comidita de culebra. En la tabla 5-3 se presenta la descripción
taxonómica de la especie Momordica charantia tomado de (http://www.cabi.org,
2016).
Tabla 5-3 Clasificación taxonómica de Momordica charantia L.
Reino Vegetal
División Magnoliofita
Clase Dicotiledónea
Orden Violales
Familia Cucurbitaceae
Genero Momordica
Especie Momordica Charantia
Linn
24
Esta especie se caracteriza por ser bastante ramificada con tallo provisto de
zarcillos. Las hojas son lobadas (cinco a siete lóbulos de 3-6 cm ovado-
oblongos), alternas, membranosas, lisas y aterciopeladas por debajo de la
nerviación (Lima, 2008). Las flores son amarillas, axilares, solitarias,
pedunculadas y unisexuales; tiene corola de cinco pétalos acompañadas de una
gran bráctea. Su fruto es cilíndrico- alargado de aproximadamente 2-3 cm el cual
es verde cuando está creciendo y al madurar adquiere una coloración naranja.
En la Figura 5-11 Se ilustra un ejemplo de las características morfológicas de la
especie Momordica charantia L.
Figura 5-11 Características morfológicas de la especie Momordica charantia A.
Hojas, B. Flor, C. Frutos (www.shutterstock.com,s.f).
Distribución de la especie Momordica charantia L.
La especie Momordica charantia es originaria de China, India, Filipinas y
Vietnam. Es un importante mercado de hortalizas en Asia meridional y oriental,
y las poblaciones silvestres y cultivadas se puede encontrar en países como la
India, Sri Lanka, Tailandia y Malasia, el sur de China y África tropical (Grubben,
& Denton, 2004). Se cree que M. charantia se introdujo en América del oeste de
África con el tráfico de esclavos. Momordica charantia se registró por primera
vez en Puerto Rico en 1885 en el Herbario Nacional de los Estados Unidos
(Grubben & Denton, 2004). Esta planta Ha sido usada tradicionalmente como
planta medicinal en países como Brasil, Colombia, Haití, Nicaragua, México,
Panamá, Perú, Ghana, India, China, Malasia, Nueva Zelanda y Cuba.
A B C
Cinco a siete lóbulos oblongos
lobado-palmadas
Membranosas lisas y aterciopeladas
amarillas, con corola de cinco pétalos y una
gran bráctea
Fruto ovoide, color amarillo
Semillas elípticas, planas, color rojizo
superficie cubierta por verrugas o tubérculos
25
Figura 5-12 Distribución de la especie Momordica charantia en el
mundo (http://www.cabi.org/,2016).
*Los puntos negros corresponden a la distribución de la especie Momordica charantia en el mundo
En Colombia crece en los departamentos de Tolima, Magdalena, Antioquia,
Bolívar, Santander, Valle del Cauca, entre otros como se puede observar en la
Figura 5-13. En zonas de altitud entre 340 y 1000 m.s.n.m, se han registrado
ejemplares en el Herbario Nacional Colombiano.
26
Figura 5-13 Distribución de la especie Momordica charantia en Colombia
(http://www.gifex.com,s.f).
*Los puntos morados corresponden a la distribución de la especie Momordica charantia en Colombia
Usos etnobotánicos de la especie Momordica charantia L.
Esta especie vegetal posee una larga tradición como planta antidiabética hasta
el punto en que su extracto ha sido llamado "insulina vegeta ”. Recientemente,
una proteína aislada de las semillas de Momordica, ha demostrado propiedades
interesantes como antivírico y antineoplásico. En la medicina folklórica se
atribuyen a esta planta multitud de aplicaciones: las hojas secas o la raíz
pulverizada sirven para preparar una decocción que alivia las molestias de las
hemorroides (aprendeenlinea.udea.edu.co, 2008). El jugo de los frutos se utiliza
en la disentería y colitis crónica, mientras que la decocción de las semillas se
emplea para las infecciones uretrales. También se dice que las semillas son
vermífugas. Sin embargo, científicamente solo ha sido demostrados los efectos
hipoglucémicos y antivíricos (Arango,2006)
En algunos libros de plantas medicinales en Colombia se nombra esta especie
como uso de emenagogo, febrífugo, dolencias hepáticas; también usado en
emplastos y cataplasmas contra las hemorroides, afecciones cutáneas, prurito,
aftas, afecciones de la piel y quemadura, antimicótico, antimicrobiano. en asma,
bronquitis, estreñimiento, fiebre, resfrió, tos, cefalea, hipertensión cálculos
renales, desordenes menstruales, afecciones de piel, ulceras, quemaduras
(Arango,2006).
Actividad biológica de la especie Momordica Charantia L.
A nivel de estudios de actividad biológica se ha demostrado que el extracto de la
especie Momordica charantia presenta por electroforesis unas propiedades
químicas similares a las de la insulina en algunos animales (Day et al.,1990).
Otros hallazgos señalan que puede reducir la gluconeogénesis hepática,
aumentar la síntesis hepática de glucógeno y aumentar la oxidación periférica de
la glucosa en los eritrocitos y adipocitos, efectos todos ellos que contribuyen a
27
reducir los niveles de glucosa en sangre ( Basch, Gabardi & Ulbricht, 2003).
Aunque esta especie presenta diferentes estudios a nivel internacional, como se
describe en la Tabla 5-4 enfocados a la evaluación de diferentes actividades
como: la antiinflamatoria, hipoglicemiante, antioxidante a nivel nacional los
estudios de esta especie únicamente han sido orientados al establecimiento de
parámetros de calidad y rango de variación en el material vegetal (Carlos, 2014).
Tabla 5-4 Estudios de algunas actividades farmacológicas en la especie
Momordica charantia (Carlos, 2014).
Partes de la
planta
Actividad
Farmacológica
Tipo de
estudio
Referencia
Todas las
partes (fruto,
semillas, hojas)
Actividad
hipoglicemiante
In vivo Ali et al., 1993 Bailey,
Turner & Leatherdale,
1985
Çakici et al., 1994
Jayasooriya et al., 2000
Shibib, Khan &
Rahman,1993
Sarkar, Pranava &
Marita,1996
Suspensión de
la pulpa del
fruto
Actividad
hipoglicemiante
In vivo Ahmad et al.,1999
Extracto de
hojas en agua,
metanol y
etanol)
Actividad
Antibacterial
Ensayo de
laboratorio
Omoregbe, Ikuebe &
Ihimire,1996
Ogata et al.,1991.
28
Extracto de la
planta entera
Actividad
Antimicrobiana
Ensayo de
laboratorio
Yesilada, Gürbüz &
Shibata,1999
Extracto crudo y
fracciones
purificadas
Actividad
Anticancerígena
In vivo
In vitro
Battelli et al.,1996
Ganguly, De &
Das,2000
Licastro et al., 1980
Ng et al., 1994
Sun et al., 2001
Extracto de la
planta entera
Actividad
Antiparasitaria
ensayo de
laboratorio
Khan & Omoloso,1998
Extractos de
frutos en agua,
etanol, metanol
cloroformo y
hexano
Actividad
Hipoglicemiante
In vitro Yadav et al., 2010
Estudio químico de la especie Momordica Charantia L.
La especie Momordica charantia L. cuenta con algunos estudios fitoquímicos
reportando en general compuestos fenólicos (ácidos fenólicos), glicósidos
triterpenicos, saponinas, glicósidos esteroidales adicionalmente se reportó la
presencia de momordicosidos, momordicinas (i, ii y iii) y proteínas (Raman & lau,
1996). En partes de la planta más específicamente en raíces se han aislado
algunos compuestos triterpenicos (Chen et al., 2008). En los frutos se han
identificado triterpenos, alcaloides, fenoles, taninos, saponinas, además de
terpenoides cucurbitanos, siendo coherentes con los reportes en la familia y
genero dichos anteriormente (Yadav et al., 2010). Se encuentra los siguientes
compuestos: Taiwacina A (46), Momordicosido K (47), Momordicosido L (48),
Momordicina (49), Charantina (51), Kuguaglicosido G (54), Charantal (52),
Charantin (50), Kuguacina A (53).
29
OH
CHOH
OH
OH
OH
O
H
Glu
H
H
OH O
O OH
(50)(51)
(52)
OGlu
H
H
H
(53)
O
O
H
O
O OO
OH
OH
OH
OH
OH OH
OH
OH
O
H
O OH
OH
OH OH
CH3
CH3
O CH3
OH
O
H
OO
OH
OH
OH
OH
(46) (47)
(48) (49)
OH
O
H
OH
OH
H
OO
30
Figura 5-14 Compuestos químicos más representativos de la especie
Momordica charantia (Lin, Yang & Lin C., 2011; Liu et al., 2010; Li et al., 2007;
keller et al., 2011; Yuan, Gu & Tang, 2008; Chen et al., 2008).
5.4 Capacidad antioxidante
Los Antioxidantes son compuestos que pueden inhibir o retardar la oxidación de
otras moléculas inhibiendo la iniciación y/o propagación de las reacciones en
cadena de los radicales libres (Orjuela ,2015). La suplementación con
antioxidantes está fundamentada en estudios epidemiológicos y clínicos que
demuestran la estrecha relación entre factores como: dieta, estilo de vida,
exposición a radiación, metales, pesticidas, tóxicos, y algunos medicamentos;
con la aparición y desarrollo de enfermedades como cáncer, diabetes,
aterosclerosis, desórdenes neurodegenerativos y envejecimiento. Todas estas
condiciones patológicas están asociadas a un estado conocido como “estrés
o idativo”, es decir, un aumento en as especies o idantes (principa mente
Especies Reactivas del Oxígeno–EROs) y/o una disminución en los mecanismos
de detoxificación de ellas. (Londoño, 2012).
Se encuentran dos categorías en los antioxidantes que son: sintéticos y
naturales. En general los antioxidantes sintéticos son compuestos de estructuras
fenólicas con varios grados de sustitución alquílica, mientras que los
antioxidantes naturales pueden ser: compuestos fenólicos (tocoferoles,
flavonoides y ácidos fenólicos), compuestos nitrogenados (alcaloides, derivados
OH
H
H
O-Glu
O Glu
(54)
31
de la clorofila, aminoácidos y aminas) o carotenoides, así como el ácido
ascórbico. Los antioxidantes sintéticos como el BHA y BHT (Butil – hidroxianisol
y Butil - hidroxitolueno) han sido utilizados como antioxidantes desde principios
del siglo pasado. Sin embargo, se han impuesto medidas de precaución y se ha
restringido su uso debido a su carcinogenicidad (Londoño, 2012). Debido a esto,
el interés por los antioxidantes naturales se ha incrementado considerablemente
ya que la capacidad de actuar como antioxidante se ha demostrado en especial
con los flavonoides, muestra un amplio rango de efectos biológicos incluyendo
funciones antibacteriales, antivirales, antiinflamatorias, antialergénicas,
antitrombóticas y vasodilatadores. Una terapia antioxidante provee una
alternativa barata para el tratamiento de enfermedades relacionadas con el
estrés oxidativo ya que se ha demostrado el efecto antioxidante de productos
naturales provenientes de las plantas (Orjuela, 2015).
Determinación de la capacidad antioxidante
La manera más efectiva de evitar el daño producido por los radicales libres es
su destrucción o estabilización por parte de antioxidantes, para medir esta
capacidad existen diversos métodos entre ellos el ensayo de DPPH* y ABTS+•,
el cual determinó la capacidad antioxidante de las fracciones y extractos donde
se encuentran los respectivos metabolitos secundarios en las partes aéreas de
la especie Momordica charantia basadas en:
Método de 1,1-difenil-2-pricrilhidrazil (DPPH)
El ensayo DPPH se basa en la estabilidad del radical 1,1-difenil-2-picrilhidrazil
(DPPH) la cual se atribuye a la deslocalización del electrón desapareado, esta
deslocalización también le otorga una coloración violeta caracterizada por una
banda de absorción, en solución etanólica, centrada alrededor de 517 nm de
forma que su concentración se puede determinar mediante métodos
espectrofotométricos. Cuando una disolución de DPPH entra en contacto con
una sustancia que puede donar un átomo de hidrógeno o con otra especie radical
(R.) se produce la forma reducida DPPH-H ó DPPH-R con la consecuente
pérdida del color y por lo tanto la pérdida de la absorbancia (Muñoz y Gutiérrez,
32
2009). En la Figura 5-15 se observa la reacción del DPPH con un agente
antioxidante.
Figura 5-15 Reacción química del DPPH antes y después de reaccionar con un
agente antioxidante (Muñoz y Gutiérrez, 2009).
Método del ácido 2,2'–azino–bis–[3–etillbenzotiazolin–6–sulfónico]
(ABTS•+)
El ensayo ABTS●+ es uno de los métodos espectrométricos que han sido
aplicados para medir la capacidad antioxidante total de soluciones o sustancias
puras y mezclas acuosas (Re et al., 1999). La generación del radical catión
ABTS●+, implica la producción directa del cromóforo ABTS●+ verde-azul a través
de la reducción del ABTS con persulfato de potasio (K2S2O8).
El catión radical resulta en tres máximos de absorción a las longitudes de onda
de 645 nm, 734 nm y 815 nm, considerándose mejor para ABTS●+, 734 nm como
la longitud de onda de máxima absorbancia. La adición de los antioxidantes al
radical pre-formado lo reduce a ABTS. De esta manera el grado de decoloración
del radical catión ABTS●+ influye de acuerdo a la concentración de antioxidante
como de la duración de la reacción sobre la inhibición de la absorción de catión
radical se tienen en cuenta al determinar la capacidad antioxidante (Del Rio,
2013). En la Figura 5-16 se observa la reacción del ABTS con un agente
antirradical.
N N
N+
O-
O
N+
O-
O
N+
O-
O
+A-H NH N
N+
O-
O
N+
O-
O
N+
O-
O+ A
.
33
Figura 5-16 Reacción química del ABTS antes y después de reaccionar con un
compuesto antirradical (AOH) (Oliveira et al., 2014).
2. Método del ácido 2,2'–azino–bis–[3–etillbenzotiazolin–6–sulfónico] (ABTS•+)
N
S
N
N
S
N
CH3
CH3
SO3HHO3S
K2S
2O
8
N+
S
N
N
S
N
CH3
CH3
SO3HHO3S
N+
S
N
N
S
N
CH3
CH3
SO3HHO3S
N+
S
N
N
S
N
CH3
CH3
HO3S
SO3H
+ AOH
+ AO.
N+
S
NH
N
S
N
CH3
CH3
HO3S
SO3H
+ AO.
34
6 METODOLOGIA
Este trabajo de investigación se caracterizó por abordar dos aspectos, uno
químico y otro biológico. El estudio químico se orientó en el aislamiento,
purificación y elucidación estructural de metabolitos fijos presentes en las partes
aéreas de la especie Momordica charantia y el estudio biológico se enfocó en
evaluar la capacidad antioxidante del extracto y fracciones obtenidas de esta
especie.
6.1 GENERALIDADES
Para el estudio fitoquímico de las partes aéreas de la especie Momordica
charantia se emplearon métodos cromatográficos, espectroscópicos y
espectrométricos convencionales utilizados en el aislamiento, purificación y
elucidación estructural de metabolitos secundarios.
Métodos de separación cromatográficos y elucidación estructural
Los extractos y fracciones obtenidos fueron sometidos a separaciones sucesivas
empleando para ello cromatografía en columna (CC) bajo gravedad,
cromatografía en capa delgada (CCD) y cromatografía en capa delgada
preparativa (CCDP); cada una de las sub-fracciones obtenidas se monitorearon
por cromatografía en capa delgada (CCD) utilizando cromatoplacas en sílica gel
60G F-254 Merck y para la CC se utilizó sílica gel 60 Merck (60- 200 Mesh).
El perfil cromatográfico de la CCD y la cantidad de fracción, permitió la selección
de las fracciones que se llevaron a purificación, donde el control de pureza se
realizó por CCD empleando como reveladores luz ultravioleta y vainillina en ácido
sulfúrico.
Para determinar las mezclas obtenidas en las diferentes fracciones se utilizó un
cromatógrafo con detector selectivo de masas SHIMADZU QP2010 plus, dotado
con sonda de inserción directa y analizador de masas cuadrupolar. Utilizando un
modo ionización electrónica (IE) a 70eV y una temperatura de la cámara de
ionización de 230°C, ubicado en el laboratorio de química de la Universidad
35
Distrital Francisco José de Caldas. La separación se realizó en una columna
capilar SHRXi-5MS de 30 metros de ongitud 0,25 mm 0,25 μm con una
inyección en modo Splitless, el gas de arrastre utilizado fue helio (grado 5.0) con
flujo constante de 1,2mL/min. La programación de la temperatura del horno fue:
de 50 °C (2 min) a 15°C/min hasta 200°C (2 min) a 10°C/min hasta 300°C (10min)
para un tiempo total de análisis de 34 minutos, la temperatura de la línea de
transferencia fue de 275°C y de la cámara de ionización de 230°C.
Espectroscopia de Resonancia Magnética Nuclear
Los compuestos obtenidos fueron analizados por RMN (1H, 13C, J-MOD)
tomados en un espectrómetro Bruker Avance del laboratorio de RMN de la
Pontificia Universidad Javeriana. Los análisis se realizaron a 75 MHz para 13C y
300 MHz para 1H, empleando como solvente deuterado Metanol-d4, con
tetrametilsilano (TMS) como referencia interna.
6.2 Estudio fitoquímico de las partes aéreas de Momordica charantia L
A continuación, se muestra la metodología que se empleó en la identificación de
la especie vegetal, la obtención de extractos y fracciones, el aislamiento y
purificación de los metabolitos secundarios fijos.
Recolección e identificación del material vegetal
La especie vegetal fue recolectada en el municipio de Honda - Tolima
(Coordenadas geográficas: 5°11′ 29′′ N, 74° 44′ 36′′ O) como se observa en la
Figura 6-1.
Se recolectaron 500 g de partes aéreas, las cuales se secaron a temperatura
ambiente y se redujeron de tamaño para su posterior extracción, una muestra
testigo fue enviada al Herbario Nacional de Colombia para su determinación
taxonómica la cual fue clasificada como Momordica charantia bajo el código COL
596915, identificada por el biólogo Carlos Alberto Parra.
36
Figura 6-1 Mapa de localización del área de recolección de la especie
Momordica charantia, Colombia (Tolima) municipio de honda.
*Departamento Tolima, Municipio Honda. Adaptado de http://www.honda-
tolima.gov.co/calendario/mapas_municipio.shtml?apc=bcxx-1-&x=1950707
Marcha fitoquímica preliminar
Para el estudio y caracterización de los metabolitos secundarios mayoritarios, se
preparó un extracto etanólico, por medio de maceración en frio con 50 ml de
etanol al 96%, empleando 10 g de partes aéreas secas de la especie vegetal
Momordica charantia. A partir de este extracto se procedió a realizar las
diferentes pruebas de identificación utilizando controles positivos para cada
grupo de metabolitos presentes en la especie vegetal. El análisis se realizó
basado en la guía de análisis fitoquímico preliminar (Sanabria, 1983) y en el
método de estudio de productos naturales (Lock de Ugaz, 1994), tal como se
muestra en la Figura 6-2.
37
Figura 6-2 Diagrama de la marcha Fitoquímica preliminar (Sanabria, 1983) y
(Lock de Ugaz, 1994).
Obtención del extracto etanólico de las partes aéreas Momordica
charantia (E. EtOH.Mc.PA)
La preparación del extracto se realizó con 500 g de material vegetal seco y
molido de partes aéreas de la especie Momordica charantia empleando 2400 mL
de EtOH al 96% a temperatura ambiente utilizando la técnica por maceración en
frio. El extracto etanólico obtenido se filtró y concentro a una presión reducida a
una temperatura de 40°C, posteriormente se floculó con H2O en relación 1:1 (E.
EtOH.Mc.PA:H2O) con el fin de eliminar interferencias e impurezas,
posteriormente se realizó el fraccionamiento liquido-liquido continuo. El
porcentaje de rendimiento neto que presento la extracción por maceración en frio
con EtOH fue del 7.4 % p/p.
38
6.2.3.1 Obtención de Fracciones (Fx) totales
El extracto etanólico (E. EtOH.Mc.PA) fue empleado para el fraccionamiento
liquido-liquido continuo, utilizando solventes de polaridad creciente; a partir de
esto fueron obtenidas las fracciones de heptano (Fx.Hept.Mc.PA 450mg
(1.22%)), diclorometano (Fx.DCM.Mc.PA 3152.2mg (8.51%)), acetato de etilo
(Fx.AcOEt.Mc.PA 377.9mg (1.02%)) y un residuo hidroalcohólico
(Fx.Hidroalc.Mc.PA (89.25%)). El proceso de fraccionamiento y los porcentajes
de rendimiento para cada fracción se observan en la Figura 6-3.
Figura 6-3 Diagrama general del extracto y fracciones de partes aéreas de la
especie Momordica charantia.
Fx.Hidroalcolica.Mc.PA
(1200 mg) 89.25%
500 g Material vegetal seco y Molido
de Partes aéreas de Momordica
charantia
Macerado en frio con EtOH
al 96%
Obtención E.EtOH.Mc.PA 7.4%
Floculación de E.EtOH.Mc.PA
sistema EtOH :H2O 1:1
Fx.Hep.Mc.PA
(450 mg) 1.22%
Fraccionamiento Liquido-
Liquido Continuo
Fx.DCM.Mc.PA
(2000 mg) 8.51%Fx.AcOEt.Mc.PA
(350 mg) 1.02%
39
6.2.3.2 Fracción heptano de las partes aéreas de Momordica charantia
(Fx.Hep.Mc.PA)
350 mg de Fx.Hep.Mc.PA fueron fraccionados por CC utilizando como fase móvil
Hexano: Acetona 7:3, obteniendo 40 fracciones de las cuales fueron reunidas en
5 subfracciones. En la subfracción 9 (Fx9.Hept Mc .PA) se obtuvieron 30.9 mg
de un sólido color amarillo denominado Mezcla McPA1, esta fracción fue
analizada por CG-EM.
6.2.3.3 Fracción diclorometano de partes aéreas Momordica charantia
(Fx.DCM.Mc.PA)
1000 mg de la fracción Fx.DCM.Mc.PA fue fraccionada por CC empleando como
fase móvil CHCl3: Acetona 7:3 obteniendo 90 fracciones las cuales después de
ser monitoreadas por CCD fueron reunidas en 22 fracciones. De la fracción 18
(Fx18.DCM Mc.PA) se obtuvo 156 mg de un sólido color amarillo-verdoso
denominado Mezcla McPA2. De la fracción 21 (Fx21.DCM Mc.PA) se obtuvo
100 mg de un sólido color amarillo denominado Mezcla McPA3 , por último, en
la fracción 30 (Fx30.DCM Mc.PA) se obtuvieron 100 mg de un sólido color
amarillo al cual se le realizo CCDP empleando como fase móvil CHCl3: Acetona
1:1 empleando como revelador vainillina en H2SO4 y Luz ultravioleta obteniendo
3 subfracciones, de las cuales solo la subfracción 2 (Fx30.2 DCM Mc.PA) fue
estudiada obteniendo 88.7mg de un sólido color blanco denominado Mezcla
McPA4 siendo analizadas las fracciones y subfracciones por CG-EM.
6.2.3.4 Fracción de Acetato de Etilo de partes aéreas Momordica charantia
(Fx.AcOEt.Mc.PA)
2,5 mg de la Fx.AcOEt.Mc.PA, fue fraccionada por el método de CC empleando
como fase móvil Acetonitrilo: Metanol 8:2, obteniendo 25 fracciones las cuales
después de ser monitoreadas por CCD utilizando cromatoplacas de aluminio en
sílica gel RP18 Merck fueron reunidas a 5 fracciones. De la fracción 1
(Fx1.AcOEt Mc.PA) se obtuvo 18.3 mg de un cristal amarillo denominado
Compuesto McPA5 el cual fue analizado por RMN.
40
6.2.3.5 Fracción Hidroalcohólica de partes aéreas Momordica charantia
(Fx.Hidroalc.Mc.PA)
1000 mg de la Fx.Hidroalc.Mc.PA fueron separados por el método CF utilizando
el equipo isoleraTM Biotage, ubicado en el laboratorio de química de la
Universidad Distrital Francisco José de Caldas. Empleando como fase móvil
Metanol: Agua 8:2 y un cartucho SNAP Ultra C18 60g. Se obtuvo 70 fracciones
las cuales fueron monitoreadas por CCD empleando cromatoplacas de aluminio
en sílica gel RP18 Merck utilizando como fase móvil Metanol: agua 9:1 reunidas
a 30 fracciones. De la fracción 6 (Fx6.Hidroalc Mc.PA) se obtuvo 38.5 mg de un
cristal amarillo con punto de fusión de 222°C denominado Compuesto McPA6
el cual fue analizado por RMN.
La metodología empleada para el aislamiento de las mezclas y compuestos
obtenidos de las fracciones de partes aéreas de Momordica charantia se ilustran
en la Figura 6-4.
Figura 6-4 Aislamiento y purificación de las mezclas y compuestos.
Fx.Hep.Mc.PA
350 mg
40 fracciones
CC Hex:Acetona 7: 3
CCD DCM : Acetona 6:4
5 subfracciones
(30.9 mg)
Sólido Amarillo
Mezcla McPA1
CG-EM
Fx.5.Hep.Mc.PA
F.DCM.Mc.PA1000 mg
CC CHCl3:Acetona 7:3
90 fracciones
CCD CHCl3 : Acetona7:3
Fx10.DCM Mc.PA (156mg)
Sólido Amarillo
Mezcla McPA2
Fx18.DCM Mc.PA (100mg)Sólido Amarillo
Mezcla McPA3
Fx 21.DCM Mc.PA (200mg)Sólido Amarillo
Fx s 21. 2.DCM Mc.PA (88,5mg)Sólido Blanco
Mezcla McPA4
CG-EM
2 subfracciones
22 subfracciones
CCDP CHCl3:Acetona 1:1
F.AcOEt.Mc.PA250 mg
CC Acetonitrilo: Metanol8:2
25 fracciones
5 subfracciones
Fx1.AcOEt.Mc.PA
(38.3 mg)Cristales Amarillos
Compuesto McPA5
RMN
CCD Acetonitrilo: Metanol 6:4
Fx.Hidroalc.Mc.PA1000 mg
70 fracciones
CFMetanol:Agua8:2
CCD Metanol:Agua9:1
30 subfracciones
(50.2 mg)Cristales AmarillosCompuesto McPA6
RMN
Fx6.Hidroalc.Mc.PA
41
Evaluación de la Capacidad antioxidante por los métodos de DPPH y
ABTS
6.2.4.1 Preparación de la solución de DPPH
Para el ensayo se preparó la solución del radical libre 1,1-difenil-2-picril-hidrazilo
disolviendo 10mg de (DPPH•) en 10ml de metanol grado analítico. La solución
fue protegida totalmente de la luz para evitar su degradación.
6.2.4.2 Cuantificación de la capacidad antioxidante en DPPH
Se evaluó de forma cuantitativa la capacidad que tienen los diferentes extractos
y compuestos antioxidantes para neutralizar un radical libre, para este estudio
se empleó el compuesto DPPH el cual se caracteriza por ser un radical estable
gracias a la deslocalización de su electrón libre y su color violeta oscuro que
posee una banda de absorción a 520nm, permitiendo determinar las
concentraciones optimas de inhibición mediante métodos espectrofotométricos.
Cuando una solución de DPPH se mezcla con una solución donadora de
protones como un antioxidante, el radical se reduce perdiendo la intensidad de
color y su absorbancia (Jara, 2013).
Se realizaron lecturas del ensayo para la capacidad antioxidante por triplicado
utilizando placas excavadas con un tota de 96 pozos de 300 μL c/u. Se
prepararon concentraciones stock para cada una de las fracciones a 10000 ppm,
para cada ensayo se realizaron diluciones en serie de 9000, 6000, 3000, 1000,
500 y 100 ppm a 25 μL de cada uno se agregó 275 μL de solución DPPH y se
leyó su absorbancia a 520 nm, en un equipo FLUOstar OPTIMA BMG LABTECH
ubicado en el laboratorio de química de la Pontificia Universidad Javeriana, Las
absorbancias se registraron teniendo en cuenta intervalos de tres minutos ente
0 y 60 min respectivamente. Se utilizó un control de trolox en solución
metanólica, siguiendo el protocolo descrito en la Figura 6-5, el porcentaje de
inhibición del radical DPPH, se calculó utilizando la ecuación 1:
% de inhibición del DPPH=(𝐴𝐵−𝐴𝐴)
𝐴𝐵∗ 100
Ecuación 1. Cálculo % de inhibición DPPH
42
Donde:
AB corresponde a la absorbancia del blanco
AA corresponde a absorbancia del antioxidante
6.2.4.3 Preparación de la solución de ABTS
El radical catiónico ABTS●+ se produjo mediante la reacción entre ABTS 20 mg
en agua desionizada y persulfato de potasio 2.4mg, almacenado en la oscuridad
a temperatura ambiente durante 16h debido a la alta sensibilidad a la luz.
6.2.4.4 Cuantificación de la capacidad antioxidante en ABTS
El ensayo ABTS●+ se basa en la transferencia de electrones; por lo cual los
diferentes compuestos antioxidantes presentes en los extractos, donan uno o
dos electrones para reducir el radical catión generando una medida precisa de
la capacidad antioxidante total en el punto final de reacción (Wootton-Beard et
al., 2011). Este catión radical ABTS azul posee una banda de absorción en
734nm volviéndose una solución incolora en presencia de antioxidantes,
permitiendo así determinar las concentraciones óptimas de inhibición mediante
métodos espectrofotométricos.
Se realizaron lecturas del ensayo para la capacidad antioxidante por triplicado
uti izando p acas e cavadas con un tota de 96 pozos de 300 μL c/u. Se
prepararon concentraciones stock para cada una de las fracciones a 10000 ppm,
para cada ensayo se realizaron diluciones de 9000 6000, 3000, 1000, 500, 100
ppm, continuando con el mismo protocolo empleado en la medición por DPPH.
El porcentaje de inhibición del radical ABTS, se calculó a partir de la ecuación 2:
% de inhibición del ABTS=(𝐴𝐵−𝐴𝐴)
𝐴𝐵∗ 100
Ecuación 2. Cálculo % de inhibición ABTS
Donde:
43
AB corresponde a la absorbancia del blanco
AA corresponde a absorbancia del antioxidante
En la figura 6-5 se describe el procedimiento empleado para la evaluación de la
capacidad antioxidante por los métodos de DPPH y ABTS.
Figura 6-5 Protocolo utilizado para el control de Trolox en los métodos de ABTS
y DPPH
6.2.4.5 Análisis estadístico para los métodos de DPPH Y ABTS
El análisis estadístico para la cuantificación de la capacidad antioxidante (%
inhibición y IC50), se realizó para el extracto etanólico y las fracciones de las
partes aéreas de Momordica charantia, de acuerdo a los reportes establecidos
A partir de un stock de 200
ppm de Trolox
A partir de un stock de 200
ppm de Trolox
Método DPPH Método ABTS
En solución
metanólica
Di uciones a 20, 60 y
100 ppm
Se preparo Se preparo
Diluciones a 60, 75 y
125 ppm
se agregó 275 μL de
so ución DPPH y 25 μL de
cada dilución
Se eyó a absorbancia en
un equipo L Ostar
OP M BM L B ECH
ubicado en e aboratorio de
química de a Pontificia
niversidad averiana
se agregó 275 μL de
so ución B S y 25 μL de
cada dilución
a 520nm a 734nm
Tres minutos entre 0 y 60 min Dos minutos entre 0 y 60 min
En intervalos de En intervalos de
gua
desionizada
44
por triplicado (n=3), donde se estableció coeficientes de correlación y análisis de
varianza, para cada ensayo utilizando el programa de statgraphics centurion XVI.
45
7 RESULTADOS Y ANÁLISIS
A continuación, se presenta los resultados obtenidos del trabajo de investigación
denominado “CONTRIBUCIÓN AL ESTUDIO FITOQUÍMICO DE PARTES
AÉREAS DE LA ESPECIE VEGETAL Momordica charantia Linn
(CUCURBITACEAE) Y EVALUACIÓN DE SU CAPACIDAD ANTIOXIDANTE”
de acuerdo al estudio químico y biológico realizado.
7.1 Marcha fitoquímica preliminar (MFP)
La MFP se desarrolló teniendo en cuenta patrones de comparación de diferentes
tipos de metabolitos secundarios para este estudio; Los resultados fueron
realizados a partir del extracto etanólico (E.EtOH.Mc.PA) y se encuentran
consignados en la Tabla 7-1.
Tabla 7-1 Marcha fitoquímico preliminar del extracto etanólico de las partes
aéreas de la especie Momordica charantia.
Grupo de
Metabolitos Prueba Química Patrón de comparación Resultado
Flavonoides
Shinoda
Catequina
-
Rosenheim -
Leucoantocianidinas -
Quinonas
Borntrager-Krauss
Plumbagina
-
Comportamiento H+ -
Comportamiento OH- -
Rodamina -
Taninos
Gelatina-Sal
Ácido Gálico
+
FeCl3 +
Acetato de Plomo +
Cumarinas Hidroxamato férrico
7-Hidroxicumarina -
Erlich -
Alcaloides Drangerdorf
Cinconina -
Mayer -
46
Valser +
Wagner +
Schleiber +
Saponinas Formación de espuma
Diosgenina +
Rosenthaler +
Terpenos Liebermann-Buchard Colesterol +
Carotenoides Ácido sulfúrico 98% Ex. Calendula oficinalis +
Glucósidos
cardiotónicos
Baljet
Ex. Digitales purpurea
+
Tollens +
Antrona +
Molish +
*(-) resultado negativo, (+) resultado positivo.
Los resultados de la MFP de la Tabla 7-1, indica que la especie vegetal
Momordica charantia, a través de pruebas cualitativas contiene diferentes
metabolitos secundarios como: terpenos, taninos, glucósidos cardiotónicos,
carotenoides y probablemente alcaloides debido a que solo tres pruebas dieron
resultado positivo, por el contrario no presenta quinonas, flavonoides y
cumarinas, siendo esto consecuente con estudios fitoquímicos realizados en
diferentes especies del mismo género como Momordica balsamina
(Mussa,2006) o Momordica grosvenori (Takasaki, et al; 2003). A pesar de que
en nuestro país solo se encuentran algunos estudios de cuatro especies de la
familia Cucurbitaceae que son Luffa cylindrica, Citrullus lanatus, Cucurbita
máxima y Momordica charantia, en estudios internacionales únicamente en las
especies Cucurbita máxima ,Citrullus lanatus y Momordica charantia se han
caracterizado y reportado flavonoides, polifenoles, carotenoides, saponinas,
proteínas y triterpenos, en frutos y semillas (Rajasree et al.,2016) siendo
metabolitos importantes como agentes activos que poseen actividad
farmacológica.
Aunque la especie Momordica charantia es la única del género Momordica
presente en Colombia , se han realizado pocos estudios entre ellos un estudio
acerca del tamizaje fitoquímico preliminar de hojas y semillas en la costa atlántica
47
ya que es una especie promisoria por su uso en la medicina tradicional
estableciendo así metabolitos como: alcaloides glucósidos cardiotónicos y
triterpenos (Beltrán, Díaz & Gómez, 2013) a nivel internacional se determinó
principalmente en los frutos los siguiente compuestos: Taninos, glicósidos
triterpenicos , glicósidos esteroidales y alcaloides (Rajasree et al., 2016)
permitiendo determinar y corroborar a partir de MFP que la especie conserva
una composición química similar en las diferentes regiones de Colombia .
7.2 Metabolitos secundarios aislados
La separación y purificación de las fracciones de heptano, diclorometano,
acetato de etilo e hidroalcohólica, obtenidas a partir del extracto etanólico total
de las parte aéreas de la especie Momordica charantia permitió la identificación
de cuatro mezclas y dos compuestos la primer mezcla conformada por: un
terpeno oxigenado Epoxylinalool, un norisoprenoide, Dihidroactinidiolida, un
ácido graso saturado y un triterpeno alifático (Ácido palmítico y Escualeno)
denominada Mezcla McPA1, en la mezcla designada como Mezcla McPA2 se
encontró: un terpenoide biciclico (3-Hidroxi-5,6-epoxy-beta-ionona y un
norisoprenoide 2-Ciclohexen-1-ona-4-hidroxi-3,5,6-trimetil-4-(3-oxo-1-butenil),
en la Mezcla McPA3 se encontró: un terpeno oxigenado Oxido de linalool, dos
compuestos fenólicos Ácido cinámico y Ácido benzoico, un compuesto
heterocíclico Indol, por ultimo para la Mezcla McPA4 se encontró un terpeno
oxigenado Eucaliptol y un ácido esterificado (ácido propanoico, 2-metil-, 1-(1,1-
dimetiletil)-2-metil-1,3-propanediol ester siendo las mezclas analizadas por CG-
EM, los compuestos aislados e identificados como saponinas denominado el
compuesto McPA5 como Kaguasaponina D y el compuesto McPA6 como
Momordicina ll , analizados por RMN (1H, 13C, J-MOD).
Composición de la mezcla McPA1
La mezcla McPA1 (44.4 mg) se obtuvo como un sólido amarillo a partir de la
fracción de heptano, el cual presentó manchas de color azul-violeta en CCD al
ser revelado con Vainillina /H2SO4. La corriente iónica total (TIC) del análisis por
CG-EM arrojo cuatro señales significativas de alta intensidad. La comparación
48
de los espectros de masas de las respectivas señales con los de la librería
NIST08 fueron identificados como: Epoxylinalool, Dihidroactinidiolida, Ácido
palmítico y escualeno. Para determinar la posible composición de la mezcla se
compararon los espectros obtenidos con los de la librería NIST08, la TIC y los
tiempos de retención de los compuestos obtenidos que se encuentran
consignados en la Figura 7-1 y la Tabla 7-2 respectivamente.
Figura 7-1 Corriente iónica total (TIC) de la mezcla McPA1
Tabla 7-2 Tiempos de retención y resultados de la comparación con la librería
NIST 08 para la mezcla McPA1
tR (min) % Área %Coincidencia* Asignación
posible
8.3000 1.08 92 Epoxylinalool
11.738 7.10 92 Dihidroactinidiolida
16.056 42.81 92 Ácido palmítico
23.372 1.25 96 Escualeno
*Comparado con la librería NIST 08
O
CH3CH3
OH
CH3
CH2
O
O
CH3CH3
CH3
OH
O
CH3CH3
49
En la figura 7-2 A se observa el espectro de masas para el compuesto con Tr
8.3000 minutos obtenido en la mezcla McPA1 y en la figura 7-2 B el espectro
reportado por la librería NIST 08 como Epoxylinalool con la fórmula molecular
C10H18O2 y un % de coincidencia del 92%.
Figura 7-2 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
8.30 minutos de la mezcla McPA1. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08
Según la Figura 7-2 el compuesto Epoxylinalool no presenta ion molecular (M+)
m/z a 170 por inestabilidad de la molécula, presentando una señal de baja
intensidad en m/z 155 por pérdida de un radical alquílico (CH3). A partir de la
señal de baja intensidad m/z 137 se fragmenta generando las señales de m/z 94
y m/z 43. Posteriormente el pico base m/z 68 corresponde a la pérdida de un
radical acetileno C2H2 (M-26) en la señal m/z 94. En la Figura 7-3 se describen
las posibles rutas de fragmentación propuestas para el compuesto identificado
como epoxylinalool.
A
B
50
Figura 7-3 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el Epoxylinalool
El Epoxylinalool ha sido reportado en la familia Caricaceae (Winterhalter,
Katzenberger & Schreier,1986) particularmente en la especie vegetal Carica
papaya que posee ciertas características en el aroma debido a varios
compuestos volátiles entre los más destacados son derivados del linalool, la
especie ha demostrado importantes actividades biológicas en distintos órganos
de la planta como lo son: antihelmíntica, antibacteriana, vermífuga y
antidisintérica (Torres et.al,2005). En la familia Cucurbitaceae se reporta en las
flores de la especie Luffa acutangula y en los frutos de la especie Momordica
charantia (Fernando y Grün, 2001) siendo el primer reporte en partes aéreas y
consecuente con el reporte en los frutos.
En la figura 7-4 A se observa el espectro de masas para el compuesto con Tr
11.738 minutos obtenido en la mezcla McPA1 y en la figura 7-4 B el espectro
reportado por la librería NIST 08 como Dihidroactinidiolida con la fórmula
molecular C11H16NO2 y un % de coincidencia del 92%.
O
CH3CH3
OH
CH3
CH2
m/z 170
C+
O
CH3OH
CH3
CH2
m/z 155
-CH3 C
+O
CH3
CH3
CH2
-C2H
2
m/z 137
++
-H2O
m/z 68m/z 43
.+ C+
CH3
CH2
H
O
CH3
m/z 94
+ CH2
+CH3
CH2
A
51
Figura 7-4 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
11.738 minutos de la mezcla McPA1. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08
En la Figura 7-4 se observa el ion molecular (M+) m/z 180 el cual genera la señal
en m/z 137 a partir de una ruptura en el ciclohexano, formando el radical isopropil
correspondiente a la señal de mediana intensidad m/z 43. Él espectro A y B
muestran una señal intensa en m/z 111 correspondiente al pico base el cual se
fragmenta a partir del ion molecular, generado por un reordenamiento tipo
Mclafferty, en la Figura 7-5 se describen las posibles rutas de fragmentación para
el compuesto.
Figura 7-5 Posibles rutas de fragmentación propuesta para la
Dihidroactinidiolida
La Dihidroactinidiolida ha sido reportado en la familia Zygophyllaceae (Dastagir,
Hussain & Rehman, 2014) particularmente en la especie vegetal Tribulus
terrestris demostrando importantes actividades biológicas como la antioxidante,
antibacterial, antiinflamatoria y analgésica (Borran et al., 2017). En la familia
Euphorbiaceae (Dastagir, Hussain & Rehman 2014) especialmente en la especie
Ricinus communis la cual se ha reportado una actividad antioxidante promisoria,
además de actividades citotóxicas y mutagénicas leves (Abbas et.al, 2018)
siendo el primer reporte en el género Momordica.
En la figura 7-6 A se observa el espectro de masas para el compuesto con Tr
16.056 minutos obtenido en la mezcla McPA1 y en la figura 7-6 B el espectro
B
O
O
CH3CH3
O
O
H+ CH3
CCH3
H+
m/z 180m/z 137 m/z 43
C
CH3 O
O
m/z 111
-C5H
9
.+
52
reportado por la librería NIST 08 como Ácido palmítico con la fórmula molecular
C16H32O2 y un % de coincidencia del 92%.
Figura 7-6 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
16.056 minutos de la mezcla McPA1. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08
En la Figura 7-6 se presenta el ion molecular (M+) a m/z 256, para el compuesto
Ácido palmítico, el cual presenta una señal de mediana intensidad en m/z 213
que se produce por perdida de un propilo C3H7 (M-43), la señal de m/z 73 de alta
intensidad se da por la ruptura de cadena lateral C13H27 en esta ruptura se toma
como referencia el compuesto base; se presentan una señal m/z 43
características de la perdida de metilo de una cadena carbonada, una señal en
m/z 60 que es el pico base y es una fragmentación de tipo McLafferty. De
acuerdo con la literatura (Walker ,2017) las posibles fragmentaciones propuestas
para el ácido palmítico se presentan en la Figura 7-7.
Figura 7-7 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el Ácido palmítico
A
B
CH3
OH
O
m/z 256
CH2
+
OH
O
-C3H
7
CH2
+
OH
O
m/z 213
m/z 43m/z 73
m/z 60
CH2
OH
OH
-C14
H28
-C13
H27
CH2
+CH3
+
+
-C13
H25
O2
53
El ácido palmítico ha sido ampliamente reportado en la familia Asteraceae en
particular la especie Carthamus tinctorius (Kang, Chang & Park,1990)
demostrando un alto potencial antioxidante al igual que la especie Myrciaria
cauliflora de la familia Myrtaceae (Neuza,2011). En la familia Cucurbitaceae se
encuentra en las especies Cucurbita moschata, Cucumeropsis mannii, Cucurbita
pepo (Fokou et al., 2009) además en los frutos de Momordica cochinchinensis
(Ishida et al.,2004) y flores de Momordica charantia (Sarkar, N., & Barik,2015)
siendo consecuente con el reporte en partes aéreas.
En la figura 7-2 A se observa el espectro de masas para el compuesto con Tr
23.372 minutos obtenido en la mezcla McPA1 y en la figura 7-2 B el espectro
reportado por la librería NIST 08 como Escualeno con la fórmula molecular
C30H50 y un % de coincidencia del 96%.
Figura 7-8 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
23.372 minutos de la mezcla McPA1. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08
En la Figura 7-8 no se presenta el ion molecular (M+) a m/z 410 el cual por
fragmentación alfa de una cadena C15H27 (M-207) genera la señal en m/z 203,
siendo esta señal participe de dos fragmentaciones la primera en m/z 69 con
pérdida de una cadena lateral C10H14 (M-68) estableciendo esta señal como pico
base tanto en el espectro A como B, la segunda fragmentación en m/z 81 se
genera por perdida de la cadena lateral C9H14 siendo esta señal de mediana
intensidad. Finalmente, a partir de la señal m/z 81 por perdida del radical propino
A
B
54
(M-40) se origina m/z 41, en la Figura 7-9 se describen las posibles rutas de
fragmentación para el compuesto escualeno.
Figura 7-9 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el Escualeno
El escualeno es una molécula que tiene la capacidad de suministrar oxígeno a
las células, además de generar capacidad antioxidante (principalmente en la
parte interna de la membrana celular) protegiendo a las células de los radicales
libres (Warleta et al.,2007). Este compuesto ha sido reportado en especies como
Calea ternifolia de la familia Asteraceae y Cocos nucifera L. de la familia
Arecaceae (López, 2016). En la familia Cucurbitaceae se reporta en las especies
Cucurbita máxima y cucurbita moschata estableciendo su posible uso como
hipocolesterolémicos en humanos (Martínez, Valdivié & Estarrón, 2011). Es
reportado por primera vez en la especie Momordica charantia.
Composición de la mezcla McPA2
La mezcla McPA2 (156 mg) se obtuvo como un sólido amarillo, a partir de la
fracción de diclorometano, el cual presentó manchas de color azul-violeta en
CCD al ser revelado con Vainillina /H2SO4. La corriente iónica total (TIC) del
análisis por CG-EM arrojo cuatro señales significativas de alta intensidad. La
comparación de los espectros de masas de las respectivas señales con los de la
librería NIST08, fueron identificados como: 3-Hidroxi-5,6-epoxy-beta-ionona y 2-
CH3CH3
m/z 410
CH3CH2
m/z 203
-C15
H27
-C9H
14
-C3H
4CH2 CH+
m/z 81
CH2 CH2
+
m/z 41
CH3CH2
+
m/z 69
-C10
H14
55
Ciclohexen-1-ona-4-hidroxi-3,5,6-trimetil-4-(3-oxo-1-butenil). Para determinar la
posible composición de la mezcla se compararon los espectros obtenidos con
los de la librería NIST 08, la TIC y los tiempos de retención de los compuestos
obtenidos que se encuentran consignados en la Figura 7-10 y la Tabla 7-3
respectivamente.
Tabla 7-3 Tiempos de retención y resultados de la comparación con la librería
NIST 08 para la mezcla McPA2
*Comparado con la librería NIST 08
En la figura 7-11 A se observa el espectro de masas para el compuesto con Tr
13.855 minutos obtenido en la mezcla McPA2 y en la figura 7-11 B el espectro
reportado por la librería NIST 08 como 3-Hidroxi-5,6-epoxy-beta-ionona con la
fórmula molecular C13H20O3 y un % de coincidencia del 90%.
tR (min) % Área %Coincidencia* Asignación posible
13.855 49.99 90 3-Hidroxi-5,6-epoxy-beta-
ionona
14.014 10.28 94 2-Ciclohexen-1-ona-4-
hidroxi-3,5,6-trimetil-4-(3-
oxo-1-butenil)
O
OH
CH3CH3
CH3
CH3O
CH3
CH3CH3
O
OH
OCH3
Figura 7-10 Corriente iónica total (TIC) de la mezcla McPA2
56
Figura 7-11 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
13.855 minutos de la mezcla McPA2. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08
En la Figura 7-12B se presenta el ion molecular (M+) m/z a 224, a diferencia del
espectro B que no presenta el ion molecular por inestabilidad del compuesto, el
cual por fragmentación alfa de una cadena C5H9O2 (M-207) genera la señal en
m/z 123, estableciendo esta señal como pico base tanto en el espectro A como
B, posteriormente a partir de la anterior ruptura por perdida de la cadena lateral
C6H8 (M-80) se origina la señal a m/z 43, en la Figura 7-12 se describen las
posibles rutas de fragmentación para el compuesto 3-Hidroxi-5,6-epoxy-beta-
ionona.
Figura 7-12 Posibles rutas de fragmentación propuesta para 3-Hidroxi-5,6-
epoxy-beta-ionona
El compuesto 3-Hidroxi-5,6-epoxy-beta-ionona se ha reportado en el aceite
esencial de diferentes especies vegetales como: Vallisneria spiralis de la familia
Hydrocharitaceae (Xian et al., 2006), Prunus pérsica de la familia Rosaceae
A
B
O
OH
CH3CH3
CH3
CH3O
m/z 224
CH3CH3
CH3
CH3O
CH3O
++
+
.
.-C
5H
9O
2
m/z 123
m/z 43
-C6H
8
57
(Aubert et al., 2003) y la especie Rumex hastatus con promisoria actividad
antioxidante (Ahmad et al., 2016) de la familia Polygonaceae. En la especie
Momordica charantia es reportado por primera vez.
En la figura 7-13 A se observa el espectro de masas para el compuesto con Tr
14.014 minutos obtenido en la mezcla McPA2 y en la figura 7-13 B el espectro
reportado por la librería NIST 08 como 2-Ciclohexen-1-ona-4-hidroxi-3,5,6-
trimetil-4-(3-oxo-1-butenil) con la fórmula molecular C13H18O3 y un % de
coincidencia del 94%.
Figura 7-13 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
14.014 minutos de la mezcla McPA2. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08
En la Figura 7-13 tanto en el espectro A como B no presenta ion molecular debido
a la inestabilidad de la molécula , por lo que se genera la señal en m/z 124 por
perdida del radical C5H6O2, estableciendo esta señal como pico base tanto en el
espectro A como B, posteriormente se presenta una señal de mediana intensidad
indicativa del radical propilo m/z a 43, en la Figura 7-14 se describen las posibles
fragmentaciones para el compuesto 2-Ciclohexen-1-ona-4-hidroxi-3,5,6-trimetil-
4-(3-oxo-1-butenil).
A
B
58
Figura 7-14 Posibles rutas de fragmentación propuesta para 2-Ciclohexen-1-
ona-4-hidroxi-3,5,6-trimetil-4-(3-oxo-1-butenil)
El compuesto 2-Ciclohexen-1-ona-4-hidroxi-3,5,6-trimetil-4-(3-oxo-1-butenil). ha
sido reportado en diferentes especies como Sphaeranthus indicus de la familia
Asteraceae (Rao & Vijaya, 2018), Beloperone plumbaginifolia (Rajasekaran,
Archana & Raviprasadh,2012) de la familia Acanthaceae con promisoria
actividad antiinflamatoria y también la especie Gymnotheca involucrata de la
familia Saururaceae (Yang et al., 2010), En la especie vegetal Momordica
charantia es reportada por primera vez.
Composición de la mezcla McPA3
La mezcla McPA3 (100 mg) se obtuvo como un sólido amarillo-verdoso, a partir
de la fracción de diclorometano, el cual presentó manchas de color azul-violeta
en CCD al ser revelado con Vainillina /H2SO4. La corriente iónica total (TIC) del
análisis por CG-EM arrojo cuatro señales significativas de alta intensidad. La
comparación de los espectros de masas de las respectivas señales con los de la
librería NIST08, fueron identificados como: Ácido benzoico, Indol, oxido de
linaool, Ácido y cinámico. Para determinar la posible composición de la mezcla
se compararon los espectros obtenidos con los de la librería NIST 08, la TIC y
los tiempos de retención de los compuestos obtenidos que se encuentran
consignados en la Figura 7-15 y la Tabla 7-4 respectivamente.
CH3
CH3CH3
O
OH
OCH3
-C5H
6O
2
m/z 222
CH3
CH3CH3
O
m/z 124
CH3O
+.
m/z 43
-C11
H15
O2
+.+
59
Figura 7-15 Corriente iónica total (TIC) de la mezcla McPA3
Tabla 7-4 Tiempos de retención y resultados de la comparación con la librería
NIST 08 para la mezcla McPA3
tR (min) % Área %Coincidencia* Asignación
posible
8.415 24.16 95 Ácido benzoico
9.529 1.83 96 Indol
10.313 2.30 92 Oxido de linalool
10.680 1.71 94 Ácido cinámico
*Comparado con la librería NIST 08
En la figura 7-16 A se observa el espectro de masas para el compuesto con Tr
8.415 minutos obtenido en la mezcla McPA3 y en la figura 7-16 B el espectro
reportado por la librería NIST 08 como 3-Hidroxi-5,6-epoxy-beta-ionona con la
fórmula molecular C7H6O2. y un % de coincidencia del 95%.
OOH
NH O
CH3
CH2
OH
CH3 CH3
OOH
60
Figura 7-16 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
8.415 minutos de la mezcla McPA3. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08
En la Figura 7-16 se presenta el ion molecular (M+) m/z 122, el cual por perdida
del hidroxilo (M-17) genera la señal en m/z 105 de alta intensidad establecida
como en pico base tanto en el espectro A como B, la ruptura del carbonilo (M-
28) genera la señal de mediana intensidad en m/z 77. Finalmente, a partir de la
anterior señal por perdida del radical acetileno C2H2 (M-26) se origina la señal
en m/z 51 de acuerdo con la literatura (Galen & Feiters, 2016) en la Figura 7-17
se describen las posibles rutas de fragmentación para el compuesto Ácido
benzoico.
Figura 7-17 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el Ácido benzoico
El ácido benzoico ha sido reportado ampliamente en la familia Orchidaceae en
la especie Encyclia longifolia (Bhattacharya et al.,2006) y en particular en
especies del género Phalaenopsis (Minh et al., 2016) reportando actividades
farmacológicas como: antirreumáticos, antiinflamatorios, antivirales,
anticancerígenos, neutroprotectores, anticancerígenos, antimicrobianos,
antibacterianos y antioxidantes (Minh et al., 2016).En la especie Momordica
A
B
OOH
m/z 122
C
O
m/z 105
C
m/z 77 m/z 51
-OH -CO -C2H
2
+ +
++
61
charantia este compuesto se ha reportado en corea en órganos como frutos
(Chae, Lee & Park, 2014) flores ,tallos y hojas (Cuong et al. 2018) corroborando
así con el estudio de este trabajo en Colombia.
En la figura 7-18 A se observa el espectro de masas para el compuesto con Tr
9.529 minutos obtenido en la mezcla McPA3 y en la figura 7-18 B el espectro
reportado por la librería NIST 08 como indol con la fórmula molecular C8H7N y un
% de coincidencia del 96%.
Figura 7-18 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
9.529 minutos de la mezcla McPA3. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08
En la Figura 7-18 presenta el ion molecular (M+) m/z 117 para el compuesto Indol,
el cual por reordenamiento tipo Mclafferty genera la señal en m/z 90 establecida
como el pico base tanto en el espectro A como B. De acuerdo con la literatura
(Powers, 1968) en la Figura 7-19 se describen la posible ruta de fragmentación
para el compuesto Indol.
Figura 7-19 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el indol
El Indol ha sido ampliamente reportado en la familia Araceae en particular
especies como Alocasia indica (Lim,2015) y Sauromatum guttatum (Chen y
A
B
NH
-CH2N
m/z 117 m/z 90
++
62
Meeuse ,1971) especies estudiadas que poseen alta actividad fitotóxica e
insecticida (Khan et al., 2007).En la familia Cucurbitaceae se encuentra en las
especies Cucurbita máxima, Cucurbita pepo (Andersen y Metcalf, 1987) luffa
acutangula y en las flores de Momordica charantia (Fernando y Grün, 2001)
siendo consecuente con el reporte en partes aéreas.
En la figura 7-20 A se observa el espectro de masas para el compuesto con Tr
10.313 minutos obtenido en la mezcla McPA3 y en la figura 7-20 B el espectro
reportado por la librería NIST 08 como oxido de linalool con la fórmula molecular
C10H18O2 y un % de coincidencia del 92%.
Figura 7-20 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
10.313 minutos de la mezcla McPA3. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08
En la Figura 7-20 el compuesto óxido de linalool , no presenta ion molecular (M+)
m/z a 170, por inestabilidad del compuesto, a partir de la fragmentación entre el
carbono 2 del furano y el radical etilo 1-hidroxi-1-metil genera una señal de baja
intensidad en m/z 111 y una señal de alta intensidad m/z 59 siendo el pico base
tanto en el espectro A como B, posteriormente la señal m/z 43 se originan por la
pérdida de oxigeno (M-16) de la señal m/z 59 .En la Figura 7-21 se describen las
posibles rutas de fragmentación para el compuesto oxido de linalool.
A
B
63
Figura 7-21 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el óxido de linalool
El óxido de linalool ha sido ampliamente reportado en la familia Magnolaceae en
particular especies como Magnolia bark (Sha et al.,2004 )y Michelia champaca
(Kaiser,1991) demostrando potencial en actividades antioxidantes, analgésicas
y citotóxicas (Hossain et al.,2009).En la familia Fabaceae se encuentra en la
especie Albizia julibrissin (Zhang & Setzer,2013) presentando actividades
antipiréticas, analgésicas, estrogénicas y antiinflamatorias (Farag et al., 2013)
No se encuentran reportes para la familia Cucurbitaceae y para el género
Momordica. Es reportada por primera vez para la especie Momordica charantia.
En la figura 7-22 A se observa el espectro de masas para el compuesto con Tr
10.680 minutos obtenido en la mezcla McPA3 y en la figura 7-22 B el espectro
reportado por la librería NIST 08 como oxido de linalool con la fórmula molecular
C9H8O2. y un % de coincidencia del 94%.
Figura 7-22 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
10.680 minutos de la mezcla McPA3. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08
O
CH3
CH2
OH
CH3 CH3
OCH
CH3
CH2
+
CH3
C
CH3
OH
m/z 170 m/z 111 m/z 59
CH3
CH
CH3
m/z 43
-O.
+ +
+
+
A
B
64
En la Figura 7-22 presenta el ion molecular (M+) m/z 148 para el compuesto
Ácido cinámico, presentando el pico base en m/z 147 tanto en el espectro A
como B, a partir del ion molecular por fragmentación del radical hidroxilo (M-17)
genera la señal en m/z 131 y este a su vez por la fragmentación del carbonil
origina la señal m/z 103. Posteriormente una fragmentación de acetileno (M-26)
genera señales em m/z 77 y m/ z 51 en la Figura 7-23 se describen las posibles
rutas de fragmentación para el compuesto Ácido cinámico.
Figura 7-23 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el Ácido cinámico
El ácido cinámico ha sido ampliamente reportado en la familia Fabaceae en
particular las especies Myroxylon toluiferum y Myroxylon balsamum
demostrando un alto potencial como antiséptico en ambas especies (Sartoriet
al., 2015), otra especie reportada ha sido Schisandra chinensis (Sladkovský y
Opletal, 2011) caracterizada por una óptima actividad Antioxidante y antibacterial
(Chen et al., 2011). En la familia Cucurbitaceae se ha reportado en la especie
Cucumis sativus (Ye et al., 2004) además en las flores de la especie Momordica
charantia (Cuong et al., 2018) siendo consecuente con el reporte en partes
aéreas.
Composición de la mezcla McPA4
La mezcla McPA4 (88.7 mg) se obtuvo como un sólido blanco, a partir de la
fracción de diclorometano al realizar una CCDP a la fracción 30, la cual presentó
manchas de color violeta en CCD al ser revelado con Vainillina /H2SO4. La
corriente iónica total (TIC) del análisis por CG-EM arrojo dos señales
significativas de alta intensidad. La comparación de los espectros de masas de
las respectivas señales con los de la librería NIST08, arrojo resultados de dos
OOH O
CH
m/z 148 m/z 131 m/z 103
-OH -CO
+ + +
-C2H
2
m/z 77
+
m/z 51
+
-C2H
2
65
compuestos identificados como: Eucaliptol y Ácido propanoico, 2-metil-, 1-(1,1-
dimetiletil)-2-metil-1,3-propanediol ester. Para determinar la posible composición
de la mezcla se compararon los espectros obtenidos con los de la librería NIST
08, la TIC y los tiempos de retención de los compuestos obtenidos que se
encuentran consignados en la Figura 7-24 y la Tabla 7-5 respectivamente.
Figura 7-24 Corriente iónica total (TIC) de la mezcla McPA4
Tabla 7-5 Tiempos de retención y resultados de la comparación con la librería
NIST08 para la mezcla McPA4
En la figura 7-25 A se observa el espectro de masas para el compuesto con Tr
7.184 minutos obtenido en la mezcla McPA4 y en la figura 7-25 B el espectro
tR (min) % Área %Coincidencia* Asignación posible
7.184 2.81 95 Eucaliptol
8.415 25.76 92 Ácido propanoico, 2-metil-
, 1-(1,1-dimetiletil)-2-metil-
1,3-propanediol ester
O
CH3CH3
CH3
CH3
O
CH3
O
CH3 CH3
OO
CH3CH3
CH3
CH3
66
reportado por la librería NIST08 como eucaliptol con la fórmula molecular
C10H18O y un % de coincidencia del 95%.
Figura 7-25 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
7.184 minutos de la mezcla McPA4. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08
En la Figura 7-25 presenta el ion molecular (M+) m/z 154 para el compuesto
Eucaliptol, presentando una pérdida de radical alquílico CH3, para la señal de m/z
139, por reordenamiento del ion molecular y posterior ruptura forma los iones
C8H15 en m/z 111, C7H12 en m/z 96 y C2H3O para la señal de m/z 43 establecido
como el pico base tanto en el espectro A como B. En la Figura 7-26 se describen
las posibles rutas de fragmentación para el compuesto Eucaliptol (Stashenko et
al.,2007).
Figura 7-26 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el Eucaliptol
A
B
O
CH3CH3
CH3
O
CH3
CH3
CH3 CH3
CH3
CH+
CH3CH3
m/z 154
m/z 139m/z 111
m/z 96m/z 81
m/z 43
+
+
+++
67
El Eucaliptol ha sido ampliamente reportado en la familia Lamiaceae
particularmente en las especies del género Ocimum, siendo utilizado en la
medicina tradicional por sus propiedades antisépticas, particularmente de las
vías respiratorias (Beltrán et al., 2010). Otra especie reportada ha sido
Myrcianthes rophaloides de la familia Myrtaceae demostrando un alto potencial
en la (actividad antimicrobiana Maldonado, 2006). Siendo reportado por primera
vez para la especie Momordica charantia.
En la figura 7-27A se observa el espectro de masas para el compuesto con Tr
8.415 minutos obtenido en la mezcla McPA4 y en la figura 7-27 B el espectro
reportado por la librería NIST08 como Ácido propanoico, 2-metil-, 1-(1,1-
dimetiletil)-2-metil-1,3-propanediol ester con la fórmula molecular C16H30O4 y un
% de coincidencia del 95%.
Figura 7-27 (A) Espectro de masas para el compuesto con tiempo de retención
8.415 minutos de la mezcla McPA4. (B) Espectro de masas reportado de la
librería NIST08
En la Figura 7-27 no presenta el ion molecular (M+) m/z 286 por inestabilidad del
compuesto , presentando el pico base para el espectro A y B en la señal m/z 71
por perdida de la cadena lateral C12H23O3 , a partir del ion molecular se presenta
la señal de m/z 43 generando el ion propilo en la Figura 7-28 se describen las
posibles rutas de fragmentación para el compuesto Ácido propanoico, 2-metil-,
1-(1,1-dimetiletil)-2-metil-1,3-propanediol ester.
A
B
68
Figura 7-28 Posibles rutas de fragmentación propuesta para el Ácido
propanoico, 2-metil-, 1-(1,1-dimetiletil)-2-metil-1,3-propanediol ester
El Ácido propanoico, 2-metil-, 1-(1,1-dimetiletil)-2-metil-1,3-propanediol ester se
ha reportado en diferentes especies vegetales como Mandragora autumnalis de
la familia Solanáceae (Hanuš, Dembitsky & Moussaief, 2006) presentando
promisoria actividad antimicrobiana y antioxidante en las raíces (Jodallah, 2013).
También se encuentra en la especie Glossostemon briguieri de la familia
Malvaceae con pontencial antimicrobiano y antifúngico (Darweesh &
Ahmed,2016) y la especie Cyclopia subternata de la familia Fabaceae (Roux et
al.,2012). Siendo reportado por primera vez para la especie Momordica
charantia.
Elucidación estructural del compuesto McPA5
El compuesto McPA5 (50.2 mg) se obtuvo como un cristal amarillo soluble en
metanol, el cual presento un punto de fusión de 234 °C. El compuesto fue aislado
a partir de la fracción de Acetato de etilo y analizado por 1H, 13C J-MOD y COSY
permitió identificar el compuesto 25-etoxi-7b-hidroxicucurbita-5,23(E)-dien-19-al
3-O-b-dalopiranosido también conocido como kaguasaponina D con m/z 685 y
formula molecular C38H62O9.
El Espectro de RMN 1H para el compuesto McPA5 , tomado a 300MHz en
Metanol-d4, se puede observar en la Figura 7-29 siete singletes en δH 0.89 , 0.93,
1.30, 1.32, 1.10, 1.47, 0.83 ppm correspondiente a grupos metilos , dos protones
CH3
O
CH3
O
CH3 CH3
OO
CH3CH3
CH3
CH3
O
CH3CH3
CH+
CH3CH3
-C12
H23
O3
+
-C13
H23
Om/z 286
m/z 43
m/z 71
+
69
de oximetina a δH 3.71 ppm (br, s) y 4.05 ppm (d, J=4.6 Hz), y dos protones
olefínicos δH 6.14 ppm (d, J = 7.8 Hz), y 6.06 ppm (d, J = 4.4 Hz).
El singlete en δH 9.89 ppm indica la presencia de un protón carboxaldehido. La
presencia de un etil se presenta en las señales de δH 3.53 y 1.19 ppm, por otra
parte las señales del glucosido presentan un doblete para el protón anomérico
en δH 5.28 , un doble doblete a δH 4.40 (dd, J = 9.1, 5.2Hz ) y δH 4.61 (dd, J =
9.1, 1.9 Hz), y multipletes en δH 4.56 , 3.95 , 4.03 y 4.27 ppm (Zhang et al.,
2014).
Figura 7-29 Espectro de RMN 1H (300 MHz, Metanol-d4) del compuesto McPA5
En el espectro de 13C, J-MOD para el compuesto McPA5, tomado a 75MHz en
Metanol-d4, se puede observar en la Figura 7-30, diversas señales las cuales
son atribuidas a 38 carbonos compuestas por: ocho metilos (δC 13.96, 19.47,
24.63, 26.09, 28.65,26.42, 17.81 , 17.28) , ocho metilenos (δC 20.81, 29.42, 21.90,
45.35, 34.22, 28.83 ,40.88, 61.32), un metileno oxigenado (δC , 62.9), cuatro
metinos (δC 49.40, 36.14, 50.54, 32.35), cuatro olefínicos (δC 145.98, 122.67,
124.42, 139.51), seis metinos oxigenados (δC 86.9, 65.49, 76.46, 75.48, 70.29,
70
79.35), cuatro carbonos cuaternarios (δC 39.65, 49.28, 27.17, 49.28), junto con
un carbonilo aldehído particular en la región campo bajo (δC 208.65) y un carbono
anomérico (δC 102.30) (Zhang et al., 2014).
Figura 7-30 Espectro de RMN 13C J-MOD (75 MHz, Metanol-d4) del compuesto
McPA5.
La correlación a tres enlaces entre hidrógenos se estableció mediante el análisis
del espectro COSY (Figura 7.31) en este espectro se muestran correlaciones
como la de los protones en δH 4.05 ppm (s, 1H) y 6.14 ppm (s, 1H) corroborando
la presencia de una olefina en el posición 6 , al igual que la correlación entre el
protón δH 5.61 y 6.06 ppm en la posición 24 y 25; el protón δH 3.53 y 1.19 ppm
indica la presencia de un etil, la correlación entre δH 5.28 y 4.56 ppm indican los
desp azamientos químicos de os carbonos 1’ y 2’ de glucosido.
71
Figura 7-31 Ampliación de espectro COSY en RMN para el compuesto McPA5.
Luego del análisis de los espectros en RMN y la comparación con otros autores
se asignaron los desplazamientos químicos para cada uno de los carbonos e
hidrógenos de la molécula (Figura 7-32) la cual se identificó como
kaguasaponina D.
Figura 7-32 Asignación de los desplazamientos químicos para el compuesto McPA5
(1.58,2.55)
(4.05,6.14)
(3.51,1.21)
(5.28,4.56)
(5.60,2.19)
(5.60,6.06)
72
En la Tabla 7-6 se resumen los desplazamientos químicos obtenidos para el
compuesto McPA5 y los descritos para la kaguasaponina D, según Zhang et al.,
2014. Tomados con diferente solvente y a diferente frecuencia 1H (400 MHz,
piridina-d5) y 13C (100 MHz, piridina-d5).
Tabla 7-6 Comparación de los desplazamientos químicos del compuesto McPA5
con los de kaguasaponina D (Zhang et al., 2014).
Posición
McPA5* Kaguasaponina D**
RMN 1H RMN 13C RMN 1H RMN
13C
1 1.73;1.96 20.81 1.57;1.93 22.4
2 1.90 ;2.44 29.42 1.92; 2.46 28.6
3 3.71 (br,s) 86.22 3.66 (br,s) 86.9
4 - 39.65 - 41.9
5 - 145.98 - 145.5
6 6.14 (d,J = 7.7 Hz) 122.67 6.20 (d,J = 7.8 Hz) 123.5
7 4.05 (d, J=4.3 Hz) 65.49 4.31 (d, J=4.6 Hz) 65.5
8 2.39 49.62 2.33 50.7
9 - 49.28 - 50.4
10 1.53 36.20 1.48 36.8
11 2.55 ;1.91 21.90 2.56;2.65 22.6
12 1.58 27.17 1.52 29.3
13 - 45.35 - 45.6
14 - 49.28 - 48.2
15 1.35 34.22 1.35 34.8
16 1.27;1.90 28.83 1.20;1.90 27.6
17 1.48 50.54 1.48 50.0
18 0.89 13.96 0.85 14.9
19 9.89 208.65 10.57 207.8
20 1.52 32.35 1.49 36.2
21 0.93 19.47 0.94 18.9
22 2.17 40.88 1.83;2.18 39.6
23 5.61 124.42 5.59 127.7
24 6.06 (d,J = 4.5 Hz) 139.51 5.55 (d,J = 4.4 Hz) 138.2
73
25 - 75.64 - 74.6
26 1.30 (s,3H) 24.63 1.32 27.1
27 1.32 (s,3H) 26.09 1.32 26.5
28 1.10 (s,3H) 28.65 1.09 27.8
29 1.41 (s,3H) 26.42 1.56 25.8
30 0.83 (s,3H) 17.81 0.80 18.1
31 3.53 61.32 3.39 57.7
32 1.19 (s,3H) 17.28 1.17 16.4
1’ 5.28 101.6 5.30 104.7
2’ 4.56 74.9 4.64 73.4
3’ 3.95 78.7 3.83 72.1
4’ 4.03 71.8 4.15 69
5’ 4.27 78.8 4.43 75.5
6’ 4.40;4.61 62.9 4.34;4.48 62.9 * Datos obtenidos a 300 MHz para RMN 1H y 75 MHz en RMN 13C (Solvente: Metanol-d4) ** Datos obtenidos a 400 MHz para RMN 1H y 100 MHz en RMN 13C (Solvente: piridina-d5) (Zhang et al.,2014)
La Kaguasaponina D es una saponina común en la familia Cucurbitaceae,
encontrado en Frutos de la especie Momordica charantia y Momordica
balsamina (Zhang et al.,2014) y (Mussa, 2006).
.
Elucidación estructural del compuesto McPA6
El compuesto McPA6 (18.3 mg) se obtuvo como un cristal de color amarillo,
insoluble en heptano, poco soluble en diclorometano y soluble en metanol, el
cual presento un punto de fusión de 222°C.El compuesto fue aislado a partir de
la fracción hidroalcoholica y analizado por 1H, 13C, J-MOD y COSY permitió
identificar el compuesto 23-O-ß-d-glucopiranosil-3,7-dihidroxycucurbita-5,24-
dien-19-al, también conocido como Momordicina ll con m/z 657 y formula
molecular C36H58O9.
El Espectro de RMN 1H para el compuesto McPA6 , tomado a 300MHz en
Metanol-d4, se puede observa en la Figura 7-33 siete singletes en δH 0.83 , 1.19,
1.72, 1.74, 0.94, 1.41, 1.18 ppm correspondiente a grupos metilos , tres protones
de oximetina a δH 3.71 (br, s) , 4.05 (d, J=4.6 Hz) y 4.60 ppm (d, J=7.8 Hz), y
dos protones olefínicos δH 5.93 ppm (d, J = 7.8 Hz), y 5.28 ppm (d, J = 4.4 Hz).
74
El singlete en δH 9.90 ppm indica la presencia de un protón carboxaldehido. Por
otra parte las señales del glucosido presentan un doblete para el protón
anomérico en δH 4.94 ppm, un doble doblete a δH 4.37 (dd, J = 9.1, 5.2Hz ) y δH
4.40 ppm (dd, J = 9.1, 1.9 Hz), y multipletes en δH 4.02 , 4.25 , 4.27 y 3.88 ppm
(Mekuria et al., 2006).
Figura 7-33 Espectro de RMN 1H (300 MHz, Metanol-d4) del compuesto McPA6
En el espectro de 13C, J-MOD para el compuesto McPA6, tomado a 75MHz en
Metanol-d4, se puede observar en la Figura 7-34, diversas señales las cuales
son atribuidas a 36 carbonos compuestas por: siete metilos (δC 14.8, 18.30,
16.95, 26.37, 24.62, 27.17, 17.36 ) , siete metilenos (δC 21.89, 28.85, 20.77,
28.43, 34.24, 27.17, 42.89), un metileno oxigenado (δC 61.37), cuatro metinos (δC
39.65, 36., 50.67, 32.21), dos metinos olefínicos (δC 122.44, 127.22), siete
metinos oxigenados (δC 75.24, 65.41, 74.07, 75.69, 76.40, 70.18, 77.02), cuatro
carbonos cuaternarios (δC 40.87, 47.33, 45.32, 46.73), dos carbonos olefínicos
(δC 145.95, 132.27), junto con un carbonilo aldehído particular en la región campo
bajo (δC 208.91) y un carbono anomérico (δC 102.15) (Mekuria et al., 2006).
75
Figura 7-34 Espectro de RMN 13C J-MOD (75 MHz, Metanol-d4) del compuesto McPA6
La correlación a tres enlaces entre hidrógenos se estableció mediante el análisis
del espectro COSY (Figura 7.35) en este espectro se muestran correlaciones
como la de los protones en δH 4.02 ppm (s, 1H) y 5.93ppm (s, 1H) corroborando
la presencia de una olefina en el posición 6 , al igual que la correlación entre el
protón a δH 4.60 y 5.28 ppm en la posición 24 y 25 ; el protón δH 1.43 ppm del
ciclopentil con el protón δH 2.41 en la posición 20 y el protón δH 2.60ppm con
el protón δH 1.50 ppm indicando la unión entre los ciclos A y B indicativo de la
base estructural del ciclopentilperhidrofenantreno.
76
Figura 7-35 Ampliación de espectro COSY en RMN para el compuesto McPA6
Luego del análisis de los espectros en RMN y la comparación con otros autores
se asignaron los desplazamientos químicos para cada uno de los carbonos e
hidrógenos de la molécula (Figura 7-36) la cual se identificó como Momordicina
ll.
Figura 7-36 Asignación de los desplazamientos químicos para el compuesto McPA6
(4.02,5.93)
(1.74,5.28)
(1.43,2.41)
(4.60,5.28)
(2.60,1.50)
(4.60,181)
77
En la Tabla 7-7 se resumen los desplazamientos químicos obtenidos para el
compuesto McPA5 y los descritos para la Momordicina ll, según Mekuria et al.,
2006. Tomados con diferente solvente y a diferente frecuencia 1H (400 MHz,
piridina-d5) y 13C (100 MHz, piridina-d5).
Tabla 7-7 Comparación de los desplazamientos químicos del compuesto McPA5
con los de Momordicina ll (Mekuria et al., 2006).
Posición
McPA6 Momordicina ll
RMN 1H RMN 13C RMN 1H RMN 13C
1 1.27; 1.50 21.89 1.18 ;1.57 21.74
2 1.95 ;2.18 28.85 1.94;2.02 29.88
3 3.90 (br s) 75.24 3.80 (br s) 75.61
4 - 40.87 - 41.72
5 - 145.95 - 145.69
6 5.93(d, J = 7.6
Hz) 122.49
6.27 (d, J = 7.8 Hz)
124.27
7 4.02 (d, J=7.5
Hz) 65.41
4.02 (d, J=7.8 Hz)
65.70
8 2.36 49.40 2.58 50.57
9 - 47.33 - 50.64
10 2.60 36.14 2.71 36.83
11 1.89 20.77 1.93 22.68
12 1.35 28.43 1.50 29.60
13 - 45.32 - 45.89
14 - 47.33 - 48.26
15 1.55 34.24 1.50 34.92
16 1.33;1.72 27.17 1.29;1.87 27.81
17 1.43 50.67 1.53 51.24
18 0.83 14.8 0.86 14.93
19 9.90 208.91 10.73 207.50
20 2.41 32.21 2.06 32.66
21 1.19 18.30 1.10 19.41
22 1.81;2.38 42.89 1.96;2.71 43.75
23 4.60 74.07 4.94 75.29
24 5.28 (d, J = 4.3
Hz) 127.22
5.61 (d, J = 4.4 Hz)
129.11
25 - 132.27 - 132.23
26 1.72 (s,3H) 16.95 1.69 18.25
27 1.74 (s,3H) 26.37 1.75 26.21
78
28 0.94 (s,3H) 24.62 0.88 25.82
29 1.47 (s,3H) 27.17 1.47 27.31
30 1.18 (s,3H) 17.36 1.16 18.21
1’ 4.94 102.15 4.99 104.16
2’ 4.02 75.69 4.01 75.66
3’ 4.25 76.40 4.21 78.90
4’ 4.27 70.18 4.22 71.81
5’ 3.88 77.02 3.82 78.25
6’ 4.37;4.40 61.37 4.34;4.46 61.37 * Datos obtenidos a 300 MHz para RMN 1H y 75 MHz en RMN 13C (Solvente: Metanol-d4) ** Datos obtenidos a 400 MHz para RMN 1H y 100 MHz en RMN 13C (Solvente: piridina-d5) (Mekuria et al.,2006)
La Momordicina ll es una saponina común en la familia Cucurbitaceae,
encontrado en Hojas de la especie Momordica charantia y Frutos de Momordica
balsamina (Mekuria et al.,2014) y (Mussa , 2006)
7.3 Evaluación de la capacidad antioxidante
La capacidad antioxidante se determinó mediante el método de DPPH y ABTS
al extracto etanólico (E. EtOH.Mc.PA), y a las fracciones de heptano
(Fx.Hept.Mc.PA), diclorometano (Fx.DCM.Mc.PA), acetato de etilo
(Fx.AcOEt.Mc.PA) e hidroalcohólica (F. Hidroalcoholica.Mc.PA) a una longitud
de onda de 520 nm y 740 nm respectivamente.
Curva de calibración para el ensayo DPPH
A partir de un Stock de 200 ppm de Trolox (sustancia análoga hidrosoluble de la
vitamina E) se realizaron tres (3) diluciones a 20, 60 y 100 ppm. Se midieron las
absorbancias de cada una de estas diluciones a 520 nm, los promedios de las
absorbancias obtenidas se presentan en la Tabla 7-8, así como su % de
inhibición calculado con la ecuación 1 y su IC50.
Tabla 7-8. Promedio de absorbancias (n=3), %inhibición, IC50 de trolox
Pozos Promedio de
Absorbancias
% Inhibición IC50
79
20ppm 0.666 ± 0.001 32.6
47.5 60ppm 0.386 ± 0.0005 63.1
100ppm 0.151 ± 0.001 88.8
Los valores obtenidos en el ensayo de DPPH se interpretaron con valores
estadísticos, correspondiente al control positivo en cada ensayo así mismo se
determinó, el tiempo en que el patrón inhibió cerca del 50% del radical, que para
Trolox fue a los 15 minutos con un coeficiente de correlación de 0,997655. Como
se observa en la gráfica 7-1 la curva de calibración para Trolox, establecen que
la función matemática entre las variables del porcentaje de inhibición y
concentración (ppm) indica una buena relación lineal, en el grado de asociación
entre las dos variables cuantitativas, generando una relación directamente
proporcional. Los valores estadísticos se resumen en la tabla 7-9.
Ecuación Lineal: Y = a + b*x
% inhibición = (19,4) + (0,7019) *(concentración)
Gráfica 7-1 Curva de calibración para trolox
Tabla 7-9 Datos estadísticos para la sustancia patrón Trolox
R² = 0,9976
0,0
10,0
20,0
30,0
40,0
50,0
60,0
70,0
80,0
90,0
100,0
0 20 40 60 80 100 120
%in
hib
ició
n
concentración(ppm)
80
TROLOX en el método de DPPH
Coeficiente de correlación Análisis de varianza
Pendiente
0.7019
Media
47.5
Intercepto
19.4
DesvStd
0.1
Coef. R2
0.9976
CV %
0.24
Coef.R2 (Coeficiente de relación); Desv Std (Desviación estándar); CV (Coeficiente
de variación.
De acuerdo al análisis estadístico realizado, el coeficiente de varianza se
comporta de manera homogénea debido a que solo se presenta un 0.2% entre
la desviación estándar (47.5 ± 0.1) y la media del IC50, indicando una relación
significativa entre cada una de las variables. Los valores estadísticos indican que
el modelo es adecuado para la interpolación de los valores obtenidos para el
extracto y las fracciones.
Cuantificación de la capacidad captadora de radicales libres por
DPPH
Los porcentajes de inhibición (%I) y la IC50 se evaluaron midiendo las
absorbancias del minuto 0 al minuto 60 en ciclos de tres minutos, donde se
determinó el punto de partida y equilibrio en el momento en que las absorbancias
se hacen constantes en las muestras de estudio. En la tabla 7-10 se observa los
promedios de las absorbancias del extracto y las cuatro fracciones evaluadas.
Tabla 7-10 Lectura del extracto y las fracciones, a los 60 min transcurridos.
Promedio de Absorbancias
Pozos 100 ppm
500 ppm
1000 ppm
3000 ppm
6000 ppm
9000 Ppm
E. EtOH.Mc.PA 0.887
± 0.02
0.908
± 0.05
0.787
± 0.01
0.650
± 0.04
0.404
± 0.01
0.318
± 0.10
81
Fx.Hept.Mc.PA 0.836
± 0.001
8.858
± 0.06
0.946
± 0.1
0.762
± 0.07
0.555
± 0.03
0.795
± 0.2
Fx.DCM.Mc.PA 0.831
± 0.06
0.858
± 0.10
0.971
± 0.03
0.845
± 0.10
0.808
± 0.05
0.735
± 0.04
Fx.AcOEt.Mc.PA 0.813
± 0.01
0.792
± 0.04
0.948
± 0.1
0.638
± 0.04
0.446
± 0.05
0.380
± 0.07
Fx.Hidroalc.Mc.PA 0.832
± 0.001
0.962
± 0.3
0.944
± 0.01
0.778
± 0.02
0.624
± 0.1
0.402
± 0.03
Estadística para el extracto, y las fracciones para determinar la
capacidad antioxidante
La determinación de la capacidad antioxidante del extracto y las fracciones se
consideró como activo y valido, aquellos que presentaron un porcentaje de
inhibición en un rango del 40%-58%, valor utilizado como referencia de acuerdo
al equivalente a la mitad de la actividad presentada por Trolox como patrón
control, dichos porcentajes corresponden al IC50, que se calculó teniendo en
cuenta los valores estadísticos de la pendiente, la intersección con el eje y el
coeficiente R2 , estableciéndose una relación lineal positiva entre la inhibición al
50% y la concentración. De acuerdo a las 5 muestras analizadas por el método
DPPH, solo el extracto etanolico y las fracciones de acetato de etilo e
hidroalcohólica, inhiben mayor al 40% en concentraciones superiores a
1000ppm, en la Tabla 7-9 y la gráfica 7-2 se ilustran los resultados obtenidos
para el método de DPPH.
Tabla 7-11 Porcentaje de inhibición, datos estadísticos para el extracto y las
fracciones por el método de DPPH
82
Extracto/
Fracción
*T
I
E
M
P
O
%INHIBICION
DPPH
Coef.R2
IC50 (ppm)
CV
%
3000
ppm
6000
ppm
9000
ppm
E.
EtOH.Mc.
PA
12 30.7 55.9 70.5 0.976 5734.1 ± 82.7 1.4
Fx.
AcOEt.Mc
.PA
30 33.8 56.1 60 0.934 6178 ± 759.8 12
Fx.Hidroa
lc.Mc.PA
57 26.4 35.5 67.1 0.908 7251.8±187.1 2.6
*Tiempo especificado en minutos; Coef.R2 (Coeficiente de relación); CV (Coeficiente de varianza)
Según los resultados en la Tabla 7-9 el porcentaje de inhibición al 50% para el
extracto y las fracciones establece una relación de la capacidad antioxidante en
concentraciones superiores a los 1000ppm ,por lo que transcurrido a los 12
minutos para extracto etanólico con un coeficiente de relación de 0.976 y un
coeficiente de variación del 1.4% entre la media y la desviación estándar
(5734.1 ± 82.7) , para la fracción de acetato de etilo fue transcurrido a los 30
minutos con un coeficiente de relación de 0,934 mostrando un coeficiente de
variación del 12% entre la media y la desviación estándar (6178 ± 759.8) y para
la fracción hidroalcohólica transcurrido 57 minutos con un coeficiente de relación
0.908 se muestra un coeficiente de variación del 2.6% entre la media y la
desviación estándar (7251.8 ± 187.1), estableciendo así valores muy altos en
comparación con el patrón trolox.
De acuerdo a los resultados en la Gráfica 7-2, el extracto (E. EtOH.Mc.PA) y las
fracciones (Fx.AcOEt.Mc.PA; Fx.Hidroalc.Mc.PA) presentaron un % de inhibición
superior al 40%. A medida que la concentración disminuye por cada ensayo el
% de inhibición se comporta de la misma manera; las concentraciones que
superaron el 40% de inhibición se encuentran en el rango de (6000 a 9000 ppm)
por lo que comparado con el patrón Trolox y la especie vegetal Rosmarinus
officinalis L. que según estudios (Mahmoud, Al-Shihry, & Son, 2005 y Wang et
al.,2008) ha sido aceptada como una de las especies con mayor actividad
83
antioxidante presente en sus hojas , no se ajusta a una buena capacidad
antioxidante ya que se busca a bajas concentraciones inhibir el radical, por lo
tanto las partes aéreas de la especie vegetal Momordica charantia no presenta
promisoria capacidad antioxidante tanto en el extracto como en todas las
fracciones evaluadas por el método de DPPH.
Gráfica 7-2 % de Inhibición para el control positivo, extracto y fracciones
Curva de calibración para el ensayo ABTS
A partir de un Stock de 200 ppm de Trolox al igual que en el ensayo de DPPH,
se realizaron tres (3) diluciones a 60,75 y 125 ppm previamente seleccionadas
en comparación de métodos espectrofotométricos y se midieron las
absorbancias a 740 nm, los promedios de las absorbancias obtenidas se
presentan en la Tabla 7-12, así como su % de inhibición calculado con la
ecuación 2 y su IC50.
0,0
10,0
20,0
30,0
40,0
50,0
60,0
70,0
80,0
90,0
100,0
Tro
lox 2
0 p
pm
Tro
lox 6
0 p
pm
Tro
lox 1
00ppm
E. E
tOH
.Mc.P
A 1
00
ppm
E. E
tOH
.Mc.P
A 5
00ppm
E. E
tOH
.Mc.P
A 1
000ppm
E. E
tOH
.Mc.P
A 3
000ppm
E. E
tOH
.Mc.P
A 6
000 p
pm
E. E
tOH
.Mc.P
A 9
000ppm
Fx.H
ept.
Mc.P
A 1
00ppm
Fx.H
ep
t.M
c.P
A 5
00
ppm
Fx.H
ept.
Mc.P
A 1
000 p
pm
Fx.H
ept.
Mc.P
A 3
000 p
pm
Fx.H
ept.
Mc.P
A 6
000 p
pm
Fx.H
ept.
Mc.P
A 9
000 p
pm
Fx.D
CM
.Mc.P
A 1
00
pp
m
Fx.D
CM
.Mc.P
A 5
00 p
pm
Fx.D
CM
.Mc.P
A 1000ppm
Fx.D
CM
.Mc.P
A 3
000 p
pm
Fx.D
CM
.Mc.P
A 6
000 p
pm
Fx.D
CM
.Mc.P
A 9
000 p
pm
Fx. A
cO
Et.M
c.P
A 1
00ppm
Fx. A
cO
Et.M
c.P
A 5
00ppm
Fx. A
cO
Et.M
c.P
A 1
000ppm
Fx. A
cO
Et.M
c.P
A 3
000ppm
Fx. A
cO
Et.M
c.P
A 6
000ppm
Fx. A
cO
Et.M
c.P
A 9
000ppm
Fx.H
idro
alc
.Mc.P
A 1
00ppm
Fx.H
idro
alc
.Mc.P
A 5
00 p
pm
Fx.H
idro
alc
.Mc.P
A 1
000 p
pm
Fx.H
idro
alc
.Mc.P
A 3
00
0p
pm
Fx.H
idro
alc
.Mc.P
A 6
00
0p
pm
Fx.H
idro
alc
.Mc.P
A 9
00
0p
pm
% I
nh
ibic
ión
84
Tabla 7-12 Promedio de absorbancias (n=3), %inhibición, IC50 de trolox
Pozos Promedio de
Absorbancias
% Inhibición IC50
60ppm 0.774 ± 0.0007 27.8
128.5 75ppm 0.635 ± 0.011 42.9
125ppm 0.307 ± 0.004 55.7
Los valores obtenidos en el ensayo de ABTS se interpretaron con valores
estadísticos, correspondiente al control positivo en cada ensayo así mismo se
determinó, el tiempo en que el patrón inhibió cerca del 50% del radical, que para
Trolox fue a los 8 minutos con un coeficiente de correlación de 0,983496. Como
se observa en la gráfica 7-3 la curva de calibración para Trolox, establecen que
la función matemática entre las variables del porcentaje de inhibición y
concentración (ppm) indica una buena relación lineal, en el grado de asociación
entre las dos variables cuantitativas, generando una relación directamente
proporcional. Los valores estadísticos se resumen en la tabla 7-13.
Ecuación Lineal: Y = a + b*x
% inhibición = (14,19) + (0,0047) *(concentración)
Gráfica 7-3 Curva de calibración para Trolox
R² = 0,9977
0,0
10,0
20,0
30,0
40,0
50,0
60,0
0 2000 4000 6000 8000 10000
%in
hibi
ción
concentración(ppm)
85
Tabla 7-13 Datos estadísticos para la sustancia patrón Trolox.
TROLOX en el método de ABTS
Coeficiente de correlación Análisis de varianza
Pendiente
0.425
Media
128.5
Intercepto
7.878
DesvStd
4.94
Coef. R2
0.998
CV %
3.85
Coef.R2 (Coeficiente de relación); Desv Std (Desviación estándar); CV (Coeficiente
de variación.
Los resultados expuestos en la tabla 7-12 sobre los datos estadísticos indican
un coeficiente de varianza del 4.94% siendo homogéneo entre la desviación
estándar 4.94 y la media del IC50, indicando una relación significativa entre cada
una de las variables. Los valores estadísticos indican que el modelo es adecuado
para la interpolación de los valores obtenidos para el extracto y las fracciones.
Cuantificación de la capacidad captadora de radicales libres ABTS
Para el método de ABTS los porcentajes de inhibición (%I) y el IC50 se evaluaron
midiendo las absorbancias del minuto 0 al minuto 60 en ciclos de dos minutos,
donde se determinó el punto de partida y equilibrio en el momento en que las
absorbancias se hacen constantes en las muestras de estudio. En la tabla 7-14
se observa los promedios de las absorbancias del extracto y las cuatro fracciones
evaluadas.
Tabla 7-14 Lectura del extracto y las fracciones, a los 60 min transcurridos.
Promedio de Absorbancias
Pozos 100 ppm
500 ppm
1000 ppm
3000 ppm
6000 Ppm
9000 Ppm
E.EtOH.Mc .PA 0.801
± 0.911
± 0.869
± 0.544
± 0.536
± 0.459
±
86
0.1 0.02 0.04 0.2 0.03 0.1
Fx.Hept.Mc.PA 0.836
± 0.03
0.969
± 0.004
0.946
± 0.05
0.757
± 0.02
0.65
± 0.04
0.518
± 0.07
Fx.DCM.Mc.PA 0.824
± 0.03
0.877
± 0.2
0.923
± 0.1
0.49
± 0.03
0.452
± 0.4
0.472
± 0.02
Fx.AcOEt.Mc.PA 0.816
± 0.01
0.832
± 0.03
0.912
± 0.001
0.435
± 0.2
0.298
± 0.04
0.0949
± 0.03
Fx.Hidroalc.Mc.PA 0.812
± 0.05
0.922
± 0.1
0.903
± 0.07
0.545
± 0.1
0.339
± 0.03
0.147
± 0.2
Estadística para el extracto, y las fracciones
La determinación de la capacidad antioxidante del extracto y las fracciones se
consideró como activo y valido, aquellos que presentaron un porcentaje de
inhibición mayor al 40% valor utilizado como referencia de acuerdo al equivalente
a la mitad de la actividad presentada por Trolox como patrón control, dichos
porcentajes corresponden al IC50, estableciéndose una relación lineal positiva
entre la inhibición al 50% y la concentración. De acuerdo a las 5 muestras
analizadas por el método ABTS, presentaron inhibición mayor al 40% el extracto
etanólico y las fracciones de Heptano, acetato de etilo e hidroalcohólica en
concentraciones superiores a 1000 ppm . en la Tabla 7-15 y la gráfica 7-4 se
ilustran los resultados obtenidos para el método de ABTS.
Tabla 7-15 % de inhibición por el método de ABTS para el extracto y las
fracciones
Extracto/
Fracción
*T
I
E
M
P
O
%INHIBICION
DPPH
Coef.R2
IC50 (ppm)
CV%
3000
ppm
6000
ppm
9000
ppm
E.
EtOH.Mc.PA
34 47.6 51.2 52.2
0.993
5513 ±287.96
5.2
87
Fx.
Hept. Mc. PA
48 45,08 50,44 57,02
0.997
5578 ± 332.9
6.0
Fx.
AcOEt.Mc.PA
12 43,3 57,4 84,4 0.986
4282.9±266.7
6.2
Fx.
Hidroalc.Mc.
PA
10 46,1 56,7 84,01 0.955 4375.2±369.3 9.1
*Tiempo especificado en minutos; Coef.R2 (Coeficiente de relación); CV (Coeficiente de varianza)
Según los resultados en la Tabla 7-15 el porcentaje de inhibición al 50% para el
extracto y las fracciones es transcurrido a los 34 minutos para el extracto
etanolico con un coeficiente de relación de 0.938 indicando una buena relación
lineal entre las dos variables cuantitativas, además en los datos estadísticos se
muestra un coeficiente de variación del 5.2% entre la media y la desviación
estándar (5513 ± 287.96) , para la fracción de heptano fue transcurrido 48
minutos con un coeficiente de relación 0,997 mostrando un coeficiente de
variación del 6% entre la media y la desviación estándar (5578± 332.9) para la
fracción de acetato de etilo fue transcurrido a los 12 minutos con un coeficiente
de relación de 0,986 mostrando un coeficiente de variación del 6.2% entre la
media y la desviación estándar (4282.9± 266.07) y para la fracción
hidroalcohólica transcurrido 10 minutos con un coeficiente de relación 0.955 se
muestra un coeficiente de variación del 9.1% entre la media y la desviación
estándar (4375.2 ± 369.3) siendo el de mayor dispersión en el coeficiente de
variación , logrando resaltar la fracción de acetato de etilo con menor IC50, sin
embargo las concentraciones son superiores a 1000ppm , al igual que por el
método de DPPH.
De acuerdo a los resultados en la Gráfica 7-4, el extracto (E. EtOH.Mc.PA), y las
fracciones (Fx.Hept.Mc.PA, Fx.AcOEt.Mc.PA, Fx.Hidroalc.Mc.PA). A medida que
la concentración disminuía por cada ensayo el % de inhibición disminuía; las
concentraciones que superaron el 40% de inhibición comparado con el patrón no
presentan capacidad antioxidante promisoria ya que a concentraciones de
3000,6000 y 9000ppm la especie vegetal es diez veces mayor en concentración
88
que la muestra patrón por lo que se busca que a bajas concentraciones los
antioxidantes inhiban el 50% del radical y como se mencionó anteriormente la
especie Rosmarinus officinalis posee mayor capacidad antioxidante comparada
entre otras especies, por lo que inhibe a una concentración de 110 μg / m
(Mahmoud, Al-Shihry, & Son, 2005 y Wang et al.,2008).
Gráfica 7-4 % de Inhibición para el control positivo, extracto y fracciones
Comparación entre el método de DPPH Y ABTS
En la tabla 7-16 se presenta el IC50 por el método de DPPH Y ABTS para el
extracto y fracciones de la especie Momordica charantia.
Tabla 7-16 Comparación del método DPPH Y ABTS a partir del IC50 para el
extracto y fracciones
0,0
10,0
20,0
30,0
40,0
50,0
60,0
70,0
80,0
90,0
100,0
Tro
lox 6
0 p
pm
Tro
lox 7
5 p
pm
Tro
lox 1
25 p
pm
E. E
tOH
.Mc.
PA
100
pp
m
E. E
tOH
.Mc.
PA
500
pp
m
E. E
tOH
.Mc.
PA
100
0p
pm
E. E
tOH
.Mc.
PA
300
0p
pm
E. E
tOH
.Mc.
PA
600
0 p
pm
E. E
tOH
.Mc.
PA
900
0p
pm
Fx.H
ept.M
c.P
A 1
00
ppm
Fx.H
ept.M
c.P
A 5
00
ppm
Fx.H
ept.M
c.P
A 1
00
0pp
m
Fx. H
ep
t.M
c.P
A 3
000
pp
m
Fx. H
ep
t.M
c.P
A 6
000
ppm
Fx. H
ep
t.M
c.P
A 9
000
pp
m
Fx.D
CM
.Mc.
PA
100
ppm
Fx.D
CM
.Mc.
PA
500
ppm
Fx.D
CM
.Mc.
PA
1
00
0pp
m
Fx.D
CM
.Mc.
PA
300
0 p
pm
Fx.D
CM
.Mc.
PA
600
0 p
pm
Fx.D
CM
.Mc.
PA
900
0 p
pm
Fx. A
cO
Et.M
c.P
A 1
00
pp
m
Fx. A
cO
Et.M
c.P
A 5
00
pp
m
Fx. A
cO
Et.M
c.P
A 1
00
0p
pm
Fx. A
cO
Et.M
c.P
A 3
00
0p
pm
Fx. A
cO
Et.M
c.P
A 6
00
0p
pm
Fx. A
cO
Et.M
c.P
A 9
00
0p
pm
Fx.H
idro
alc
.Mc.P
A 1
00p
pm
Fx.H
idro
alc
.Mc.P
A 5
00 p
pm
Fx.H
idro
alc
.Mc.P
A 1
000
ppm
Fx.H
idro
alc
.Mc.P
A 3
000
pp
m
Fx.H
idro
alc
.Mc.P
A 6
000
pp
m
Fx.H
idro
alc
.Mc.P
A 9
000
pp
m
_%_I
nh
ibic
ión
89
Extracto/Fracción
Método DPPH Método ABTS
IC50
E. EtOH.Mc.PA
(5734.1± 82.7) (5513 ± 287.96)
Fx.Hept.Mc.PA >10000 (5578± 332.9)
Fx.DCM.Mc.PA >10000 >10000
Fx.AcOEt.Mc.PA (6178± 759.8) (4282.9± 266.07)
Fx.Hidroalc.Mc.PA (7251.8 ± 187.1) (4375.2 ± 369.3)
De acuerdo a los resultados sobre la capacidad antioxidante por el método DPPH
Y ABTS para el extracto y las diferentes fracciones, de la especie vegetal
Momordica charantia aunque se demostró inhibición mayor al 40% en el E.
EtOH.Mc.PA, Fx.AcOEt.Mc.PA y Fx.Hidroalc.Mc.PA teniendo en cuenta que
cada método tiene diferentes condiciones de reacción y solubilidad en ambos
métodos fue a concentraciones superiores de 1000 ppm por lo tanto las partes
aéreas de la especie vegetal no tienen un efecto de inhibición promisorio, por lo
que se debe tener en cuenta ciertas condiciones en la especie vegetal como el
tiempo de recolección , la temperatura, calidad del aire y el suelo para garantizar
la germinación y desarrollo total de la planta (Carlos, 2014).
Es importante inferir que de acuerdo a los resultados arrojados en ambos
métodos las diferencias se deben a varios factores, como la baja selectividad del
ABTS•+, ya que reacciona con cualquier compuesto aromático hidroxilado,
independientemente de su potencial antioxidante real (Roginsky & Lissi ,2005).
Por el contrario, si la capacidad antioxidante de los extractos se debe a la
presencia de ácidos fenólicos, flavonoides y otro tipo de polifenoles, como se
reporta en la literatura (Ahn et al.,2007) se debe a que el DPPH es más selectivo
que el ABTS•+ y, a diferencia de este último, no reacciona con los flavonoides
carentes de grupos hidroxilo en el anillo B, ni con ácidos aromáticos que
contengan un solo grupo hidroxilo (Roginsky & Lissi ,2005).
90
Según Chekroun et al., (2015) para la famila Cucurbitaceae se determino la
capacidad antioxidante al extracto butanolico de raices en la especie Bryonia
dioica mostrando una interesante actividad de eliminación de radicales libres con
C50 = 2.25 μg / ml, al igual que el extracto butanólico (IC50 = 61 μg / m ) y
acuoso ( C50 = 241,25 μg / m ) de os frutos en a especie Citrullus colocynthis.
Los autores Sulaiman, y Ooi, (2013) demostraron la actividad antioxidante de
diferentes especies como Luffa acutangula (28.04 ± 0.37 mg GAE / g de
extracto), Benincasa hispida (IC50 = 0.44 ± 0.03 mg / ml) y Sechium edule
demostró la mayor actividad de DPPH (951,73 ± 29,14 mM de extracto TE / g)
Se descubrió que la isoquercetina era el principal contribuyente a las actividades
de las diferentes especies vegetales.
Para el género Momordica la especie Momordica balsamina se determina en los
resultados obtenidos un bajo índice de IC50 por lo que se utiliza con otros fines
terapéuticos (Maulide,2012). En cuanto a la especie Momordica charantia los
autores Sulaiman, y Ooi (2013) demostraron las mayores actividades reductoras
y anti-α-glucosidasa mediante los extractos de metanol y acetato de etilo de
Momordica charantia (692,56 ± 43,38 mM / g, 66,64 ± 2,94%, respectivamente).
También autores como (Aljohi, Matou-Nasri & Ahmed, 2016) estudiaron las
actividades antioxidantes usando 0-15mg/ml de los extractos de pulpa de
Momordica charantia a un pH 7.4 e incubación a 37°C, para evaluar actividades
de barrido de radicales hidroxilos, DPPH, actividad quelante de metales y
potencia de reducción de los extractos. Se determinó los distintos extractos son
capaces de prevenir la formación en acumulación de productos finales de
glicación avanzada AGEs in vitro, por lo que no solo puede reducir la
hiperglucemia sino también proteger contra la acumulación de AGEs tisulares y
reducir el estrés oxidativo en pacientes con diabetes.
En la fracción de heptano no se encontró algún compuesto significativo
comparable para la capacidad antioxidante por lo que coincide con los resultados
en DPPH y ABTS , para la fracción de diclorometano al aislar el ácido cinámico
y ácido benzoico se puede determinar que Momordica charantia contiene
derivados de estos compuestos en baja proporción que a su vez pueden estar
presentes en los extractos de acetato de etilo e hidroalcohólico debido a la mayor
91
polaridad que presentan de acuerdo a los hidroxilos sustituidos en estos
compuestos, sin embargo los resultados obtenidos en cuanto a las
concentraciones de estas fracciones son iguales que para los de menor polaridad
que en este estudio es heptano.
92
8 CONCLUSIONES
Los resultados de la MFP de las partes aéreas de la especie vegetal Momordica
charantia, a través de pruebas cualitativas indica que contiene diferentes
metabolitos secundarios como: terpenos, taninos, glucósidos cardiotónicos,
carotenoides y probablemente alcaloides debido a que solo tres pruebas dieron
resultado positivo coincidiendo con especies del mismo género como Momordica
balsamina y Momordica grosvenori.
El trabajo fitoquímico desarrollado para las partes aéreas de la especie vegetal
Momordica charantia permitió el aislamiento e identificación de dos compuestos
denominados kaguasaponina D y momordicina ll y cuatro mezclas la primera
conformado por: un terpeno oxigenado Epoxylinalool, un norisoprenoides
Dihidroactinidiolida, un ácido graso saturado y un triterpeno alifático (Ácido
palmítico y Escualeno), en la segunda mezcla se encontró: un terpenoide
biciclico (3-Hidroxi-5,6-epoxy-beta-ionona y un norisoprenoide 2-Ciclohexen-1-
ona-4-hidroxi-3,5,6-trimetil-4-(3-oxo-1-butenil), en la tercer mezcla se encontró:
un terpeno oxigenado Oxido de linalool, dos compuestos fenólicos Ácido
cinámico y Ácido benzoico, un compuesto heterocíclico Indol y por ultimo para la
cuarta mezcla se encontró un terpeno oxigenado Eucaliptol y un ácido
esterificado (ácido propanoico, 2-metil-, 1-(1,1-dimetiletil)-2-metil-1,3-
propanediol ester aislados por primera vez para la especie en nuestro país.
La evaluación de la capacidad antioxidante de las partes aéreas de la especie
vegetal Momordica charantia mediante los métodos DPPH y ABTS permitió
establecer el efecto inhibitorio al 50% en concentraciones superiores a 1000
ppm, obteniendo como resultado para el extracto total un IC50 de 5734.1ppm,
para las fracciones de acetato de etilo un IC50 de 6178ppm y el residuo
hidroalcohólico con IC50 de 7251.8 ppm por el método del radical DPPH. A
diferencia del método por ABTS el extracto etanolico presento un IC50 de 5513
ppm, para las fracciones de heptano un IC50 de 5578ppm , la fracción de acetato
de etilo un IC50 de 4282.9ppm y un residuo hidroalcohólico con un IC50 de
4375.2ppm, tomando como referencia la captación antioxidante de trolox como
93
radical libre para ambos métodos, permitiendo establecer así la baja capacidad
antioxidante en las partes aéreas de Momordica charantia debido a las altas
concentraciones en que inhibe el radical.
El presente trabajo de investigación realiza un aporte al conocimiento químico y
biológico de la familia Cucurbitaceae en Colombia, por medio del estudio
fitoquímico de sus metabolitos fijos y la determinación de la capacidad
antioxidante de sus extractos y fracciones presentes en las partes aéreas de
Momordica charantia.
94
9 RECOMENDACIONES
Respecto a los avances del estudio que se realizó y de acuerdo a los resultados
obtenidos, para continuar con el estudio de la especie se recomienda:
Realizar el estudio de otras actividades biológicas en la especie, con el fin de
contribuir al conocimiento biológico en nuestro país.
Obtener los perfiles cromatográficos de la fracción del residuo hidroalcohólico de
las partes aéreas de Momordica charantia por HPLC acoplada a espectrometría
de masas, debido a que esta fracción presenta el mayor porcentaje de
rendimiento.
Continuar el estudio de la capacidad antioxidante con otros métodos como:
Poder de reducción antioxidante del hierro (FRAP), N,N- dimetil-p-fenilendiamina
(DMPD) , Capacidad de reducción antioxidante del cobre (CUPRAC) , Capacidad
de absorción del radical oxígeno (ORAC) ,Parámetro antioxidante de captura de
radicales (TRAP) entre otros , además de realizarlo a partir de la recolección en
otras partes de Colombia.
95
10 BIBLIOGRAFÍA
Abbas, M., Ali, A., Arshad, M., Atta, A., Mehmood, Z., Tahir, I. M., & Iqbal, M.
(2018). Mutagenicity, cytotoxic and antioxidant activities of Ricinus
communis different parts. Chemistry Central Journal, 12(1), 3.
Afifi, M. S., Ross, S. A., Elsohly, M. A., Naeem, Z. E., & & Halaweish, F. T. (1999).
Cucurbitacins of Cucumis prophetarum and Cucumis prophetarum.
Journal of chemical ecology, 25(4), 847-859.
Ahmad, N., Hassan, M. R., Halder, H., & Bennoor, K. S. (1999). Effect of
Momordica charantia (Karolla) extracts on fasting and postprandial serum
glucose levels in NIDDM patients. Bangladesh Medical Research Council
Bulletin, 25(1), 11-13.
Ahmad, S., Ullah, F., Sadiq, A., Ayaz, M., Imran, M., Ali, I., & ... Shah, M. R.
(2016). Chemical composition, antioxidant and anticholinesterase
potentials of essential oil of Rumex hastatus D. Don collected from the
North West of Pakistan. BMC complementary and alternative medicine,
16(1), 29.
Ahn, M. R., Kumazawa, S., Usui, Y., Nakamura, J., Matsuka, M., Zhu, F., &
Nakayama, T. (2007). Antioxidant activity and constituents of propolis
collected in various areas of China. Food Chemistry, 101(4), 1383-1392.
Akihisa, T., Yasukawa, W., & Tokuda, H. (2003). Studies in Natural Products
Chemistry.Bioactive Natural Products (Part J). Great Britain: Atta-ur-
Rahman: 28th.
Aldana, J. (2010). Evaluación de la actividad antimicrobiana de fracciones y
subfracciones obtenidas a partir de hojas de Elaeagia útiles sobre
Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus y Lactobacillus
acidophilus (Tesis de pregrado). Bogotá,Colombia: Pontificia unviersidad
javeriana.
Ali, L., Khan, A. K., Mamun, M. I., Mosihuzzaman, M., Nahar, N., Nur-e-Alam, M.,
& Rokeya, B. (1993). Ali, L., Khan, A. K. A., Mamun, M. I. R.,
96
Mosihuzzaman, M., Nahar, N., Nur-e-Alam, M., & Rokeya, B. (1993).
Studies on hypoglycemic effects of fruit pulp, seed, and whole plant of
Momordica charantia on normal and diabetic model rats. Planta medica,
59(05), 408-412.
Aljohi, A., Matou-Nasri, S., & Ahmed, N. (2016). Antiglycation and antioxidant
properties of Momordica charantia. PloS one, 11(8), e0159985.
Andersen, J., & Metcalf, R. (1987). Factors influencing distribution of Diabrotica
spp. in blossoms of cultivated Cucurbita spp. J. Chem. Ecol, 13:681-699.
Andrade, C. M. (2011). Estado del conocimiento de la biodiversidad en Colombia
y sus amenazas. Consideraciones para fortalecer la interacción ambiente-
política. Rev. Acad. Colomb. Cienc. , 35 (137): 491-507, ISNN 0370-3908.
Aprendeenlinea.udea.edu.co. (2008). Obtenido de Plantas medicinales.Banco
de objetos de Aprendizaje y de información:
http://aprendeenlinea.udea.edu.co/ova/?q=node/407&page=4 [Accessed
18 Mar. 2017].
Arango Mejia, M. (2006). Plantas medicinales. botánica de interés médico. 1st
ed. Manizales: Universidad de Caldas. 1st ed. Manizales: Universidad de
Caldas.pp 77-79.
Assubaie, N. F., & El-Garawany, M. M. (2004). Evaluation of some important
chemical constituents of Momordica charantia cultivated in Hofuf, Saudi
Arabia.Journal of Biological Sciences (Pakistan). Journal of Biological
Sciences (Pakistan).
Attard, E., Brincat, M., & Cuschieri, A. (2005). Immunomodulatory activity of
cucurbitacin E isolated from Ecballium elaterium. Institute of Agriculture,
University of Malta, Malta.
Aubert, C., Ambid, C., Baumes, R., & Günata, Z. (2003). Investigation of bound
aroma constituents of yellow-fleshed nectarines (Prunus persica L. Cv.
Springbright). Changes in bound aroma profile during maturation. Journal
of agricultural and food chemistry, 51(21), 6280-6286.
97
Avila, A., & Vásquez, A. (2011). Determinación del efecto vermífugo de semillas
tratadas de Cucúrbita Aff. Maxima. (Tesis de pregrado), universidad de
cuenca, cuenca, Ecuador.
Bailey, C. J., Turner, S. L., & Leatherdale, B. A. (1985). Cerasee, a traditional
treatment for diabetes. Studies in normal and streptozotocin diabetic mice.
Diabetes research (Edinburgh, Scotland), 2(2), 81-84.
Basch, E., Gabardi, S., & Ulbricht, C. (2003). Bitter melon (Momordica charantia):
a review of efficacy and safety. American Journal of Health-System
Pharmacy, 60(4), 356-359.
Battelli, M. G., Polito, L., Bolognesi, A., Lafleur, L., Fradet, Y., & Stirpe, F. (1996).
Toxicity of ribosome-inactivating proteins-containing immunotoxins to a
human bladder carcinoma cell line. International journal of cancer, 65(4),
485-490.
Begum, S., Ahmed, M., Siddiqui, B. S., Khan, A., Saify, Z. S., & Arif, M. (1997).
Triterpenes, a sterol and a monocyclic alcohol from Momordica charantia.
Phytochemistry, 44(7), 1313-1320.
Bellma Menéndez, A., Tillán Capó, J., Menéndez Castillo, R. A., López González,
O., Carrillo Domínguez, C., & González Sanabria, M. L. (2006). Evaluación
del extracto lipofílico de Cucurbita pepo L. sobre la hiperplasia prostática
inducida por andrógenos. Revista cubana de plantas medicinales, 11(2),0-
0.
Beltrán Cifuentes, M. C., Peláez Gutiérrez, E. C., Estrada Álvarez, J. M., Escobar
Ríos, J. A., Serna Ángel, L., & Ríos Morales, D. (2010). I study
farmacognosico for the care of the health from essential oils obtained by
distillation of steam dragging.
Beltrán Villanueva, C. E., Díaz Castillo, F., & Gómez Estrada, H. (2013). Tamizaje
fitoquímico preliminar de especies de plantas promisorias de la costa
atlántica colombiana. Cubana de Plantas Medicinales, 18(4), 619-631.
Bharathi, L., & John, K. (2013). Momordica genus in Asia—an overview. Springer,
New Delhi, 147.
98
Bhattacharyya, J., Nishonov, A. A., Felix, L. P., Pires, M. F., & Majetich, G. M.
(2006). Constituents of Encyclia longifolia Schltr.(Orchidaceae). Revista
Brasileira de Farmacognosia, 16(1), 22-23.
Bolaños, A. (1998). Introducción a la Olericultura. 1 edición Editorial universidad
estatal a distancia (EUNED), San josé costa rica.
Borran, M., Minaiyan, M., Zolfaghari, B., & Mahzouni, P. (2017). Protective effect
of Tribulus terrestris fruit extract on cerulein-induced acute pancreatitis in
mice. Avicenna journal of phytomedicine, 7(3), 250.
Bot, Y. S., Mgbojikwe, L. O., Nwosu, C., Abimiku, A., Dadik, J., & Damshak, D.
(2007). Screening of the fruit pulp extract of Momordica balsamina for anti
HIV property. African journal of Biotechnology, 6(1).
Cabi.org. (2016). Momordica charantia (bitter gourd). Obtenido de [image]
Available at: http://www.cabi.org/isc/datasheet/34678 [Accessed 9 Mar.
2017].
Çakici, Í., Hurmoǧlu, C., Tunçtan, B., Abacioǧlu, N., Kanzik, Í., & & Sener, B.
(1994). Hypoglycaemic effect of Momordica charantia extracts in
normoglycaemic or cyproheptadine-induced hyperglycaemic mice.
Journal of Ethnopharmacology, 44(2), 117-121.
Carlos, L. (2014). Contribución al establecimiento de parámetros de calidad y
rangos de variación para material vegetal de Momordica charantia L.
provenientes de individuos silvestres y de cultivo (Tesis de Maestría).
Universidad Nacional, Bogotá, Colombia.
Castroviejo, S., Aedo, C., Cirujano, S., LaÍnz, M., Montserrat, P., Morales, M., . .
. Soriano, C. (2005). Castroviejo, S., Aedo, C., Cirujano, S., LaÍnFlora
Ibérica Plantas vasculares de la Península Ibérica e Islas Baleares. 3rd
ed.Madrid:Jardin botánico CSIC. Obtenido de 3rd ed. [ebook] Madrid:
Real Jardin Botan.
Chae, S. C., Lee, J. H., & Park, S. U. (2014). Phenolic Compounds in Bitter
Melons Collected from Different Regions of Korea. Asian Journal of
Chemistry, 26(16), 5313.
99
Chekroun, E., Benariba, N., Adida, H., Bechiri, A., Azzi, R., & Djaziri, R. (2015).
Antioxidant activity and phytochemical screening of two Cucurbitaceae:
Citrullus colocynthis fruits and Bryonia dioica roots. Asian Pacific Journal
of Tropical Disease, 5(8), 632-637.
Chen, J., & Meeuse, B. J. (1971). Production of free indole by some aroids. Acta
botanica neerlandica, 20(6), 627-635.
Chen, J., Liu, W., Lu, L., Qiu, M., Zheng, Y., Yang, L., . . . Li, Z. (2009). Kuguacins
F–S, cucurbitane triterpenoids from Momordica charantia.
Phytochemistry, 70(1), pp.133-140.
Chen, J., Tian, R., Qiu, M., Lu, L., Zheng, Y., & & Zhang, Z. (2008).
Trinorcucurbitane and cucurbitane triterpenoids from the roots of
Momordica charantia. Phytochemistry, 69(4), 1043-1048.
Chen, X., Zhang, Y., Zu, Y., Fu, Y., & Wang, W. (2011). Composition and
biological activities of the essential oil from Schisandra chinensis obtained
by solvent-free microwave extraction. LWT-Food Science and
Technology, 44(10), 2047-2052.
Cuong, D. M., Kwon, S. J., Jeon, J., Park, Y. J., Park, J. S., & Park, S. U. (2018).
Identification and Characterization of Phenylpropanoid Biosynthetic
Genes and Their Accumulation in Bitter Melon (Momordica charantia).
Molecules. 23(2), 469.
Darweesh, K. F., & Ahmed, K. M. (2016). Anatomical and Phytochemical Study
of Glossostemon bruguieri (Desf.) Sterculiaceae in Kurdistan Region of
Iraq. Diyala journal for pure sciences, p.p 30-33.
Dastagir, G., Hussain, F., & Rehman, I. U. (2014). Essential oil composition of
some plants of family Zygophyllaceae and Euphorbiaceae. Pak. J. Bot,
46(6), 2043-2049.
Day, C., Cartwright, T., Provost, J., & Bailey, C. J. (1990). Hypoglycaemic effect
of Momordica charantia extracts. Planta Medica, 56(05), 426-429.
100
Del Rio, J. T. ( 2013). Determinación de la actividad antioxidante por DPPH y
ABTS de 30 plantas recolectadas en la ecoregión cafetera (Doctoral
dissertation, Universidad Tecnológica de Pereira. Facultad de
Tecnologías. Química Industrial).
Delascio-Chitty, F., & López, R. (2007). las cucurbitáceas del estado cojedes,
venezuela/Cucurbits of Cojedes State, Venezuela. Acta Botanica
Venezuelica, 19-41.
Deyo, A., & Malley, B. (2008). In College Seminar 235 Food for Thought: The
Science, Culture, & Politics of Food. In spring 2008.
Di, R., Huang, M. T., & Ho, C. T. (2001). Anti-inflammatory activities of
mogrosides from Momordica grosvenori in murine macrophages and a
murine ear edema model. Journal of Agricultural and Food Chemistry,
59(13), 7474-7481.
Facena, u. (n.d). EUDICOTILEDONEAS ESENCIALES-Clado Rosides-
Eurosides I-Cucurbitales: Cucurbitaceae. Obtenido de [online] Diversidad
Vegetal Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura (UNNE):
http://exa.unne.edu.ar/biologia/diversidadv/documentos/ANGIOSPERMA
S/Rosideas/Eurosides%20I/3Clado%20de%20los%20fijadores%20de%2
0Nitr%F3geno/1-Cucurbitales/2-Cucurbitaceae.pdf [Accessed 6 Feb.
2017].
Faldt, J. (2000). Volatile constituents in conifers and conifer-related wood-
decaying fungi. PhD dissertation, Royal Institute of
Technology,Stockholm, Sweden.
Farag, M., Gamal, A., Kalil, A., Al-Rehaily, A., El Mirghany, O., & El Tahir, K.
(2013). Evaluation of some biological activities of Albizia lebbeck flowers.
Pharmacology & Pharmacy, 4(06), 473.
Fernando, L. N., & Grün, I. U. (2001). Headspace–SPME analysis of volatiles of
the ridge gourd (Luffa acutangula) and bitter gourd (Momordica charantia)
flowers. Flavour and fragrance journal, 16(4), 289-293.
101
Fokou, E., Achu, M. B., Kansci, G., Ponka, R., Fotso, M., Tchiegang, C., &
Tchouanguep, F. M. (2009). Chemical properties of some Cucurbitaceae
oils from Cameroon.
Fonnegra Gomez, R., & Jimenez Ramirez, S. (2007). Plantas medicinales
aprobadas en Colombia. 1st ed. Medellin, Colombia: Editorial Universidad
de Antioquia.
Galen, P., & Feiters, M. C. (2016). Mass Spectrometry. En Instrumental Analysis
in (Bio)Molecular Chemistry (págs. 8-9). Radboud University, Nijmegen:
Institute for Molecules and Materials.
Ganguly, C., De, S., & Das, S. (2000). Prevention of carcinogen-induced mouse
skin papilloma by whole fruit aqueous extract of Momordica charantia.
European journal of cancer prevention, 9(4), 283-288.
Gershenzon, J., & Croteau, R. (1991). Terpenoids, in Herbivores, Their
Interactions with Secondary Plant Metabolites. 2nd edn., v 1,,(eds. G. A.
Rosenthal and M. R. Berenbaum), Acad, Press, San Diego, CA, 165-219.
Gifex. (n.d). Obtenido de [image] Availableat:http://www.mapa-
colombia.com/#country [Accessed 9 Mar.2017]
Grubben, G., & Denton, O. (2004). Plant resources of tropical africa 2 vegetables.
2nd ed. [ebook] wageningen,netherlads: Prota foundation.
Gutiérrez Zavala, Á., Ledesma Rivero, L., García García, I., & Grajales
Castillejos, O. (2007). Capacidad antioxidante total en alimentos
convencionales y regionales de Chiapas, México. Revista Cubana de
Salud Pública, 33(1), pp.0-0.
Gutierrez-Ravelo, A., & Estévez-Braun, A. (2009). Relevancia de los productos
naturales en el descubrimiento de nuevos fármacos en el S. XXI. Revista
de la Real Academia de Ciencias Exactas, Fisicas y Naturales, 103 (2):
409-19.
Halaweish, F. T., Tallamy, D. W., & Santana, E. (1999). Cucurbitacins: A role in
cucumber beetle sterol nutrition? J. Chem. Ecol., 25:2373-2383.
102
Hanuš, L. O., Dembitsky, V. M., & Moussaieff, A. (2006). Comparative study of
volatile compounds in the fresh fruits of Mandragora autumnalis. Acta
Chromatographica, 17, 151-160.
Hossain, M. M., Jahangir, R., Hasan, S. R., Akter, R., Ahmed, T., Islam, M. I., &
Faruque, A. (2009). Antioxidant, analgesic and cytotoxic activity of
Michelia champaca Linn. Leaf. . Stamford Journal of Pharmaceutical
Sciences, 2(2), 1-7.
Hostettmann, K., Gupta, M., & Mutis de Serna, O. (2008). Manual de estrategias
para el aislamiento de productos naturales bioactivos. 1st ed. Bogota:
Programa Iberoamericano de Ciencias y Tecnología.
Ishida, B. K., Turner, C., Chapman, M. H., & McKeon, T. A. (2004). Fatty acid
and carotenoid composition of gac (Momordica cochinchinensis Spreng)
fruit. Journal of agricultural and food chemistry, 52(2), 274-279.
Jara Beltrán, Á. I. (2013). Ánalisis fitoquímico y determinación de la actividad
antioxidante del extracto etanólico de las hojas de la especie Piper
imperiale (Piperaceae) (Tesis de Pregrado). Universidad de Ciencias
Aplicadas y Ambientales U.D.C.A. Universidad de Ciencias Aplicadas y
Ambientales U.D.C.A.
Jayasooriya, A. P., Sakono, M., Yukizaki, C., Kawano, M., Yamamoto, K., &
Fukuda, N. (2000). Effects of Momordica charantia powder on serum
glucose levels and various lipid parameters in rats fed with cholesterol-
free and cholesterol-enriched diets. journal of ethnopharmacology,
72(1),331-336.
Jodallah, N. B. (2013). Antioxidant and antimicrobial activity of Mandragora
autumnalis Bertol extracts. Doctoral dissertation, p.p 22-34.
Jung, K., Chin, Y. W., Yoon, K. D., Chae, H. S., Kim, C. Y., Yoo, H., & Kim, J.
(2013). Anti-inflammatory properties of a triterpenoidal glycoside from
Momordica cochinchinensis in LPS-stimulated macrophages.
Immunopharmacology and immunotoxicology, 35(1).
103
Kaiser, R. (1991). New volatile constituents of the flower concrete of Michelia
champaca L. Journal of Essential Oil Research, 3(3), 129-146.
Kang, G. H., Chang, E. J., & Park, S. W. (1999). Antioxidative activity of phenolic
compounds in roasted safflower (Carthamus tinctorius L.) seeds.
Preventive Nutrition and Food Science, 4(4), 221-225.
Keller, A. C., Ma, J., Kavalier, A., He, K., Brillantes, A. M., & Kennelly, E. J. (2011).
Saponins from the traditional medicinal plant Momordica charantia
stimulate insulin secretion in vitro. Phytomedicine, 19(1), 32-37.
Khan, M. R., & Omoloso, A. D. (1998). Momordica charantia and Allium sativum;
Broad Spectrum Antibacterial Activity. Diario de las plantas medicinales.
Diario de las plantas medicinales, .29(3), 155-158.
Khan, T., Ahmad, M., Khan, R., Khan, H., & Choudhary, M. I. (2007). Phytotoxic
and insecticidal activities of medicinal plants of Pakistan: Studies on
Trichodesma indicum, Aconitum laeve and Sauromatum guitatum. Journal
of the Chemical Society of Pakistan, 29(3), 260-264.
Kubola, J., & Siriamornpun, S. (2011). Phytochemicals and antioxidant activity of
different fruit fractions (peel, pulp, aril and seed) of Thai gac (Momordica
cochinchinensis Spreng) . Food chemistry, 127(3), 1138-1145.
Kumar, S., & kamaraj, M. (2011). Antimicrobial activity of Cucumis anguria L. By
agar well diffusion method ,Tamil,nail, india, Botany research international.
jamal Mohamed college, department of research botany, 4(2), PP.41-42.
Kweifio-Okai, G., De Munk, F., Macrides, T. A., Smith, P., & Rumble, B. A. (1995).
Antiarthritic mechanisms of lupeol triterpenes. Drug Dev. Res, 36: 20–24.
doi:10.1002/ddr.430360104
Li, Q. Y., Liang, H., Chen, H. B., Wang, B., & Zhao, Y. Y. (2007). A new
cucurbitane triterpenoid from Momordica charantia. Chinese Chemical
Letters, 18(7), 843-845.
Licastro, F., Franceschi, C., Barbieri, L., & Stirpe, F. (1980). Toxicity of
Momordica charantia lectin and inhibitor for human normal and leukaemic
104
lymphocytes. Virchows Archiv B Cell Pathology Zell-pathologie, 33(1),
257-265.
Lim, T. (2015). Edible Medicinal and Non-Medicinal plants .Modified
stems,roots,bulbs (Vol. 9). New York, NY, USA: Springer.pp 433-435.
Lima, P. (2008). Avaliação da atividade de extratos de folhas de Momordica
charantia, Auxemma oncocalyx e Ziziphus joazeiro sobre bactérias e
larvas de Culex quinquefasciatus. Dissertação (Mestrado)-Universidade
Federal Rural do Sem.
Lin, K. W., Yang, S. C., & Lin, C. N. (2011). Antioxidant constituents from the
stems and fruits of Momordica charantia. Food chemistry, 127(2), 609-
614.
Liu, C. H., Yen, M. H., Tsang, S. F., Gan, K. H., Hsu, H. Y., & Lin, C. N. (2010).
Antioxidant triterpenoids from the stems of Momordica charantia. Food
chemistry, 118(3), 751-756.
Lock de Ugaz, O. (1994). Investigación fitoquímica, Métodos en el estudio de
productos naturales. (segunda ed.). Editorial de la Pontificia Universidad
Católica del Perú.
Londoño, J. (2012). Antioxidantes: importancia biológica y métodos para medir
su actividad. In Desarrollo y Transversalidad serie Lasallista Investigación
y Ciencia.Corporación Universitaria Lasallista.
López., J. (2016). Herbolaria apuntes. Unidad de aprendizaje. Universidad
Autónoma del Estado de México, pp 218-309.
Loughrin, J. H., Manukian, A. R., Heath, R. R., Turlings, T. C., & Tumlinson, J. H.
(1994). Diurnal cycle of emission of induced volatile terpenoids by
herbivore-injured cotton plant. Proceedings of the National Academy of
Sciences, 91(25), 11836-11840.
Mahmoud, A. A., Al-Shihry, S. S., & Son, B. W. (2005). Diterpenoid quinones
from Rosemary (Rosmarinus officinalis L.). Phytochemistry, 66(14), 1685-
1690.
105
Maldonado Rodríguez, M. E. (2006). Estudio químico y evaluación de la actividad
antimicrobiana del aceite esencial de Myrcianthes rophaloides Mc Vaugh.
(Master's thesis).
Martínez Aguilar, Y. M., Valdivié Navarro, M., & Estarrón Espinosa, M. (2011).
Fitoesteroles y escualeno como hipocolesterolémicos en cinco variedades
de semillas de Cucurbita maxima y Cucurbita moschata (calabaza).
Revista Cubana de Plantas Medicinales, 16(1), 72-81.
Maulide Cane, R. (2012). Obtención y caracterización de extractos de
Momordica balsamina L. Tesis de Maestría, Universidad Autónoma de
Madrid. Departamento de Química Física Aplicada.
Mekuria, D. B., Kashiwagi, T., Tebayashi, S. I., & Kim, C. S. (2006). Cucurbitane
glucosides from Momordica charantia leaves as oviposition deterrents to the
leafminer, Liriomyza trifolii. Zeitschrift für Naturforschung C, 61(1-2), 81-86.
Minh, T. N., Khang, D. T., Tuyen, P. T., Anh, L. H., Quan, N. V., Ha, P. T., & ...
Xuan, T. D. (2016). Phenolic compounds and antioxidant activity of
Phalaenopsis orchid hybrids. Antioxidants. 5(3), 31.
Ministerio de Ambiente y Desarrollo Sostenible, P. d. (2014). Quinto informe
nacional de biodiversidad de colombia.Ante el convenio de diversidad
biólogica. Bogotá, D.C, Colombia p.101.
Miró, M. (1995). Cucurbitacins and their pharmacological effects. Phytother.
Res., 9: 159–168. doi:10.1002/ptr.2650090302
Mohamed, A., Polo, E. M., & Martinez, A. (s.f). Análisis fitoquímico preliminar y
determinación de la actividad antiinflamatoria de Melothria guadalu. (Tesis
de pregrado), Universidad Nacional, Bogotá,Colombia.
Muñoz Juárez, M. A., & Gutiérrez, D. M. (2009). Determinación de actividad
antioxidante de diversas partes del árbol Nicotiana glauca. . Facultad
Química, Universidad Autónoma de Queretaro.
106
Mussa, E. (2006). Composição química de extractos da Momordica balsamina
cultivada em Moçambique. (Tesis de Maestría), Universidad de
Aveiro,Aveiro,Portugal.
Neuza., j. (2011). Actividad antioxidante y perfil de ácidos grasos de las semillas
de jabuticaba (Myrciaria cauliflora Berg) . Acta Biológica Colombiana,
16(2), 75-82.
Ng, T. B., Liu, W. K., Sze, S. F., & Yeung, H. W. (1994). Action of α-momorcharin,
a ribosome inactivating protein, on cultured tumor cell lines. General
Pharmacology: The Vascular System,, 25(1), 75-77.
Novotný, L., Vachalkova, A., & Biggs, D. (2011). Ursolic acid: an anti-tumorigenic
and chemopreventive activity. Minireview. Neoplasma, 48(4), 241-246.
Ogata, F., Miyata, T., Fujii, N., Yoshida, N., Noda, K., Makisumi, S., & Ito, A.
(1991). Purification and amino acid sequence of a bitter gourd inhibitor
against an acidic amino acid-specific endopeptidase of Streptomyces
griseus. Journal of Biological Chemistry, 266(25), 16715-16721.
Oliveira, S. D., Souza, G. A., Eckert, C. R., Silva, T. A., Sobral, E. S., Fávero, O.
A., & ... Baader, W. J. (2014). Evaluation of antiradical assays used in
determining the antioxidant capacity of pure compounds and plant
extracts. Química Nova. 37(3), 497-503.
Omoregbe, R. E., Ikuebe, O. M., & Ihimire, I. G. (1996). Antimicrobial activity of
some medicinal plants extracts on Escherichia coli, Salmonella paratyphi
and Shigella dysenteriae. African journal of medicine and medical
sciences, 25(4), 373-375.
Ordoñez, A., Gomez, J., & Vattuone, M. (2006). Antioxidant activities of Sechium
edule (Jacq.). Swartz extracts. Food Chemistry, 97(3), pp.452-458.
Orjuela Rodriguez, A. A. (2015). Determinación de actividad antioxidante de
extractos y fracciones de hojas de Chromolaena perglabra (BL Robinson)
RM King y H. Robinson . (Tesis de Pregrado), Universidad de Ciencias
Aplicadas y Ambientales U.D.C.A.
107
Osuna, L., Tapia, M., & Aguilar, A. (2005). Plantas medicinales de la medicina
tradicional mexicana para tratar afecciones gastrointestinales.Estudio
etnobotánico, fitoquímico y farmacológico. España: Publicacions i
Edicions de la universidad de barcelona.pp 50-51.
Patiño, V. (2002). Historia y dispersión de los frutales nativos del neotrópico.
Obtenido de 1st ed. [ebook] Cali: CIAT, pp.143-147.:
https://books.google.com.co/books?isbn=9586940373 [Accessed 4 Mar.
2017].
Powers, J. C. (1968). Mass spectrometry of simple indoles. The Journal of
Organic Chemistry, 33(5), 2044-2050.
Pozner, R. (2010). Flora del Valle de Lerma. 1st ed. Salta: Herbario MCNS, Fac.
de Ciencias Naturales, Univ. Nacional de Salta.
Rajasekaran, M., Archana, R., & Raviprasadh, R. (2012). GC/MS analysis and
identification of phytochemicals present in the leaves of Beloperone
plumbaginifolia (Jacq.) . Nees. Int J Bioeng Sci Technol, 3, 134-138.
Rajasree, R. S., Sibi, P. I., Francis, F., & William, H. (2016). Phytochemicals of
Cucurbitaceae family. A review. IJPPR, 8, 113-123.
Raman, A., & Lau, C. (1996). Anti-diabetic properties and phytochemistry of
Momordica charantia L.(Cucurbitaceae). Phytomedicine, 2(4), 349-362.
Rao, B. K., Kesavulu, M. M., & Apparao, C. (2001). Antihyperglycemic activity of
Momordica cymbalaria in alloxan diabetic rats. Journal of
Ethnopharmacology, 78(1), 67-71.
Rao, M. R., & Vijaya Lakshmi, N. (2018). Preliminary phytochemical and GC MS
analysis of different extracts of Sphaeranthus indicus leaves. Indo
American J of Pharmaceutical Sciences, 5(3), 1511-1520.
Re, R., Pellegrini, N., Proteggente, A., Pannala, A., Yang, M., & Rice-Evans, C.
(1999). Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation
decolorization assay. Free Radical Biology and Medicine;. 26: 1231–1237.
108
Rodríguez Becerra, M. (Noviembre de 2003). Los múltiples servicios de los
bosques y el desarrollo sostenible en Colombia. Conferencia Internacional
de Bosques, ACAD Conf. Bosques y Servicios llevada a cabo en Santa
Marta, Colombia.
Roginsky, V., & Lissi, E. (2005). Review of methods to determine chain-breaking
antioxidant activity in food. Food Chemistry, 92 (2): 235-254.
Roux, M. L., Cronje, J. C., Burger, B. V., & Joubert, E. (2012). Characterization
of volatiles and aroma-active compounds in honeybush (Cyclopia
subternata) by GC-MS and GC-O analysis. Journal of agricultural and food
chemistry, 60(10), 2657-2664.
Sanabria Galindo, A. (1983). Análisis fitoquímico preliminar: Metodología y su
aplicación en la evaluación de 40 plantas de la familia Compositae.
Sarkar, N., & Barik, A. (2015). Free fatty acids from Momordica charantia L. flower
surface waxes influencing attraction of Epilachna dodecastigma
(Wied.)(Coleoptera: Coccinellidae). International journal of pest
management, 61(1), 47-53.
Sarkar, S., Pranava, M., & Marita, A. R. (1996). Demonstration of the
hypoglycemic action of Momordica charantia in a validated animal model
of diabetes. Pharmacological Research, 33(1), 1-4.
Sartori, Â. L., Lewis, G. P., de Freitas Mansano, V., & Azevedo Tozzi, A. M.
(2015). A revision of the genus Myroxylon (Leguminosae: Papilionoideae).
. 70(4), 48.
Sha, Y. F., Huang, T. M., Shen, S., & Duan, G. L. (2004). Determination of volatile
compounds in Magnolia bark by microwave-assisted extraction coupled to
headspace solid-phase microextraction and gas chromatography-mass
spectrometry. Analytical sciences, 20(5), 857-859.
Shibib, B. A., Khan, L. A., & Rahman, R. (1993). Hypoglycaemic activity of
Coccinia indica and Momordica charantia in diabetic rats:. depression of
the hepatic gluconeogenic enzymes glucose-6-phosphatase and fructose-
109
1,6-bisphosphatase and elevation of both liver and red-cell shunt enzyme
glucose-6-phospahate deshydrogenase, págs. 292(1),267-270.
Shutterstock.com. (n.d). Momordica Charantia Imágenes sin cargo, y vectores
en stock | Shutterstock. Obtenido de
https://www.shutterstock.com/es/search/momordica+charantia [Accessed
9 Mar 2017].
Sladkovský, R., Solich, P., & Opletal, L. (2001). Simultaneous determination of
quercetin, kaempferol and (E)-cinnamic acid in vegetative organs of
Schisandra chinensis Baill. by HPLC. Journal of pharmaceutical and
biomedical analysis, 24(5-6), 1049-1054.
Stashenko, E. E., Martínez, J. R., Patiño, J. G., & Reyes, J. A. (2007).
Caracterización de los metabolitos secundarios de dos especies de
ocimum (fam. labiatae), en función del método de extracción. Scientia et
Technica, 1(33), 121-123.
Stevens, P. (2009). Angiosperm Phylogeny Website. Obtenido de Mobot.org:
http://www.mobot.org/MOBOT/research/APweb/ [Accessed 4 Feb. 2017].
Sulaiman, S. F., & Ooi, K. L. (2013). Antioxidant and α-glucosidase inhibitory
activities of cucurbit fruit vegetables and identification of active and major
constituents from phenolic-rich extracts of Lagenaria siceraria and
Sechium edule. Journal of agricultural and food chemistry, 61(42), 10080-
10090.
Sun, Y., Huang, P. L., Li, J. J., Huang, Y. Q., Zhang, L., Huang, P. L., & & Lee-
Huang, S. (2001). Anti-HIV agent MAP30 modulates the expression profile
of viral and cellular genes for proliferation and apoptosis in AIDS-related
lymphoma cells infected with Kaposi's sarcoma-associated virus.
Biochemical and biophysical research communications, 287(4), 983-994.
Takabayashi, J., & Dicke, M. (1996). Plant-carnivore mutualism through
herbivore-induced carnivore attractants. Trends Plant Sci , 1:109–113.
Takabayashi, J., Dicke, M., Takahashi, S., Posthumus, M., & Van Beek, T.
(1994). Leaf age affects composition of herbivore-induced synomones and
110
attraction of predatory mites. Journal of Chemical Ecology, 20(2), pp.373-
386.
Takasaki, M., Konoshima, T., Murata, Y., Sugiura, M., Nishino, H., Tokuda, H., .
. . Yamasaki, K. (2003). Anticarcinogenic activity of natural sweeteners,
cucurbitane glycosides, from Momordica grosvenori. Kyoto
Pharmaceutical University, Misasagi, Yamashina-ku, Kyoto, Japan.
Thakur, G. S., Bag, M., Sanodiya, B. S., Bhadauriya, P., Debnath, M., Prasad, G.
B., & Bisen, P. S. (2009). Momordica balsamina: a medicinal and
neutraceutical plant for health care management. Current pharmaceutical
biotechnology, 10(7), 667-682.
Trease, G., & Evans, W. (2002). Pharmacognosy. 15th ed. London: Bailliere
Tindall.
Tropicos.org, s. (s.f.). www.tropicos.org. Obtenido de Recuperado el 08 de
febrero de 2017: http://tropicos.org/Name/42000146?tab=maps.
Tsoi, A. Y., NG, T. B., & Fong, W. P. (2006). Immunomodulatory activity of a
chymotrypsin inhibitor from Momordica cochinchinensis seeds. Journal of
Peptide Science , 12(9), 605-611.
Ucihonda.com. (s.f). Obtenido de www.ucihonda.com:
http://ucihonda.com.co/index.php?page=./HTML/mapatolima&tituloenc=
Departamento%20del%20Tolima[Accessed el 15 de mar de 2017]
Vademecum. (2008). Vademecum Colombiano de Plantas Medicinales.
Obtenido de 1st ed. [ebook] Ministerio de la Protección Social.:
https://www.minsalud.gov.co/sites/rid/1/Vademecum%20Colombiano%2
0de%20Plantas%2Medicinales.PDF [Accessed 9 Feb. 2017].
Villareal, E. C., Lagunes, L. D., López, P. A., García, E., Palma, D. J., Ortiz, C.
F., & Oranday, M. A. (2015). Evaluación etnofarmacológica de plantas con
propiedades hipoglucémicas usadas en la medicina tradicional del sureste
de México. Boletín Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales
y Aromáticas, 14(2).
111
Waako, P. J., Gumede, B., Smith, P., & Folb, P. I. (2005). The in vitro and in vivo
antimalarial activity of Cardiospermum halicacabum L. and Momordica
foetida Schumch. Et Thonn. Journal of Ethnopharmacology, 99(1), 137-
143.
Walker, W. (2017). Lipidhome.co.uk. Obtenido de Mass Spectrometry of free
(unesterified) fatty acids and their trimethylsilyl (TMS) esters:
http://www.lipidhome.co.uk/ms/others/ffa-tms/index.htm
Wang, W., Wu, N., Zu, Y. G., & Fu, Y. J. (2008). Antioxidative activity of
Rosmarinus officinalis L. essential oil compared to its main components.
Food chemistry, 108(3), 1019-1022.
Warleta, F., Ruiz-Mora, J., Segura, M. C., Serrano, M. J., & Gaforio, J. J. (2007).
El Escualeno, componente minoritario del aceite de oliva, y su relación
con el cáncer. In I Congreso de la Cultura del Olivo. Instituto de Estudios
Giennenses, pp. 765-782.
Winterhalter, P., Katzenberger, D., & Schreier, P. (1986). 6, 7-Epoxy-linalool and
related oxygenated terpenoids from Carica papaya fruit. Phytochemistry.
25(6), 1347-1350.
Wootton-Beard, P., & Moran A, R. L. (2011). Stability of the total antioxidant
capacity and total polyphenol content of 23 commercially available
vegetable juices before and after in vitro digestion measured by FRAP,
DPPH, ABTS and Folin- Ciocalteu methods. Food Res Int, 44: 217-224.
Xian, Q., Chen, H., Liu, H., Zou, H., & Yin, D. (2006). Isolation and Identification
of Antialgal Compounds from the Leaves of Vallisneria spiralis L. by
Activity-Guided Fractionation . Environmental Science and Pollution
Research, 13(4), 233-237.
Yadav, M., Lavania, A., Tomar, R., Prasad, G. B., Jain, S., & Yadav, H. (2010).
Complementary and comparative study on hypoglycemic and
antihyperglycemic activity of various extracts of Eugenia jambolana seed,
Momordica charantia fruits, Gymnema sylvestre and Trigonella foenum
112
graecum seeds in rats. Applied biochemistry and biotechnology,
160(8),2388-2400.
Yang, Z. B., Mao, H. L., Kang, W. Y., Zou, H. T., Sun, C. B., & Guo, Z. Y. (2010).
Rapid Determination of Volatile Compounds in Gymnotheca involucrata
Pei. by MAE–HS-SPME Followed by GC–MS. Journal of the American Oil
Chemists' Society, 87(7), 737-745.
Ye, S. F., Yu, J. Q., Peng, Y. H., Zheng, J. H., & & Zou, L. Y. (2004). Incidence
of Fusarium wilt in Cucumis sativus L. is promoted by cinnamic acid, an
autotoxin in root exudates. Plant and Soil. 263(1), 143-150.
Yeşilada, E., Gürbüz, I., & Shibata, H. (1999). Screening of Turkish anti-
ulcerogenic folk remedies for anti-Helicobacter pylori activity. Journal of
Ethnopharmacology, 66(3), 289-293.
Yetisir, H., Sakar, M., & Serçe, S. (2008). Collection and morphological
characterization of Lagenaria siceraria germplasm from the Mediterranean
region of Turkey, Genetic Resources and Crop Evolution. 1257-1266.
Youngson, R. (2005). Antioxidantes y radicales libres. 1st ed. Madrid: Editorial
EDAF.
Yuan, X., Gu, X., & Tang, J. (2008). Purification and characterisation of a
hypoglycemic from Momordica charantia L. . Var abbreviata
ser.food.chemistry, 111(2), 415-420.
Zapata Bustos, R. (2009). Mecanismos Moleculares del efecto hipoglucemiante
de plantas usadas tradicionalmente como antidiabéticos.
Zhang, H., & Setzer, W. N. (2013). The floral essential oil composition of Albizia
julibrissin growing in Northern Alabama. American Journal of Essential
Oils and Natural Products, 1(2), 41-42.
Zhang, L. J., Liaw, C. C., Hsiao, P. C., Huang, H. C., Lin, M. J., Lin, Z. H., ... &
Kuo, Y. H. (2014). Cucurbitane-type glycosides from the fruits of Momordica
charantia and their hypoglycaemic and cytotoxic activities. Journal of Functional
Foods, 6, 564-574.
113