coupling of solvent semimicroextraction with capillary electrophoresis using ethyl acetate as sample...

6
Coupling of solvent semimicroextraction with capillary electrophoresis using ethyl acetate as sample matrix This paper reports a strategy to couple liquid-liquid semimicroextraction (LLsME) with capillary electrophoresis (CE) based on a newly introduced on-column decomposable sample matrix, ethyl acetate (EA). LLsME was performed in volumetric flasks of 100 mL. Samples containing an aqueous phase were first saturated with EA. Then, an extra 500 mL of EA was added to extract the samples. Sample injection in CE could be made in hydrodynamic mode by dipping the injection end of the capillary into the organic (EA) phase in the volumetric flasks. As a demonstration, alkylphenones in water samples were extracted by LLsME into EA and subjected to separation by micel- lar electrokinetic chromatography (MEKC). Alkylphenones of C8±C12 with concentra- tions of about 10 ppb can be concentrated and detected after extraction; extraction effi- ciencies range from 72- to 334-fold. Linearity of extraction was determined and the effect on reproducibility by spiking an internal standard was studied. The method developed is time-saving and requires no further special experimental device other than a basic CE setup. Therefore, it would be readily acceptable for routine analysis, especially in analytical laboratories dealing with environmental samples. Keywords: Liquid-liquid semimicroextraction / Decomposable sample matrix EL 3703 Wei Zhan 1 Tianlin Wang 1 Sam F. Y. Li 1,2 1 Department of Chemistry, National University of Singapore, Republic of Singapore 2 Institute of Materials Research and Engineering, Singapore, Republic of Singapore 1 Introduction In recent years microextraction techniques have been gaining increasing popularity in analytical laboratories [1± 3]. Not only was the amount of hazardous solvents, to which operators are frequently exposed, notably decreased with these methods, but the automation of extraction procedures also became more manageable. Among these techniques, flow injection extraction [4, 5] (FIE), solid-phase extraction [6, 7] (SPE), solid-phase microextraction [9] (SPME) and liquid-phase microextrac- tion [10±12] (LPME) have been the most attractive and are thus already in wide use. Successful coupling of these techniques with chromatographic techniques such as GC and HPLC [13] have been demonstrated. A microextrac- tion followed by a separation process usually results in considerable enhancement of the detection sensitivity and reduction of interference from sample matrix in com- plicated samples. Capillary electrophoresis (CE) has developed into a new separation technique with even higher separation effi- ciency than GC and HPLC [14, 15]. Low concentration sensitivity in CE has been recognized as a disadvantage from its early developmental stage. Coupling of microex- traction with CE has the potential to fully utilize the advan- tages of both techniques and improve concentration sen- sitivity in CE effectively. However, this type of coupling is not easy to effect in CE. The reasons leading to this diffi- culty are mainly as follows. First, the tip size and volume of the column are too small; therefore, direct introduction of sample after reproducibly extracting into the CE capil- laries while simultaneously avoiding sample overloading would be difficult. Consequently, it is difficult to design a direct and practical interface between solvent extraction tools and CE. Considering a 50 cm long capillary with an inner diameter (ID) of 50 mm: its total inner volume is ~ 0.98 mL, which always means that any visible size of sample droplet will cause an overloading in the column. Second, commonly used water-insoluble solvents cannot conduct a sufficiently high current along the capillary due to their poor electrical conductivity. Our preliminary studies showed that ethyl acetate (EA) could be employed as a novel sample matrix in CE. EA can be quickly decomposed on-column under the cataly- sis of a strong base. The products of hydrolysis of EA, ethanol and acetic acid can dissolve in aqueous buffer for electrophoresis at any mixing proportion. Thus, introduc- ing samples with EA as sample matrix will not interrupt the current through the electrophoresis buffer for CE. Other advantages of using EA as sample matrix include its low toxicity and ready availability. As shown in our pre- vious results, a syringe turns out not to be ideal when Correspondence: Dr. Sam F. Y. Li, Department of Chemistry, National University of Singapore, Kent Ridge, Singapore, 119260, Republic of Singapore E-mail: [email protected] Fax: +65-7791691 Abbreviations: EA, ethyl acetate; LLsME, liquid semimicroex- traction Electrophoresis 2000, 21, 573±578 573 WILEY-VCH Verlag GmbH, 69451 Weinheim, 2000 0173-0835/00/0303-0573 $17.50+.50/0 CE and CEC

Upload: wei-zhan

Post on 06-Jun-2016

213 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

�������� � ����� ���������� ��� ��� �� ���������� ���� �������� ���� � ��� ��� � � ������ �� ������� ����� ����� � ������ ���� ������������� ������ ����� �� ������� ��� �������� ��� �������� ���� ����� � � ����� ����� �� �� ���� �� ������������� ������ ���� � ��� ���� ����� ��� ���!���� �� "������ !���#� !$%% �� &������ ������� �� ������ ����� ���� !��� ������� ��� �� ����� ������ '%% �� ! �� ��� ����� ���� �� ������� &����� ��(� �� �� �� ��� ������ �� ���������� ��� �� ������� �� ��(� �� ��� ! �� �������� �� ������� ���� ����� �� �� "������ !���#� �� � ���������� ��#��������� ������ ������� ���� ���� �� �� ����� �� �� ��� ���(� �� �������� �� �� ������ ��� �#���� ���������� ���)�� ��#��������� ! �*+�$, ��� � �������� ! ��� $% ��� �� �� � ������ ��� ��� �� �!�� ���� ��- ���� �� �!!�� ��� ��� ����� !�� .,� //0�!�� �������� ! ���� �� ��� ��������� ��� ���!!� � ������ ������ �� ���#��� �� ������� ������� ��� ������ ��� ������"����� �� ������"��� ��� �������� � !����� ��� ��� ����������� ��"� � ������ � ���� �� ���� �����!��� � ���� �� ������� � ������ !� ����� ������������� ����� �� ������ �� ��������� ������� ��� ��"�������� �������

�������� ������������� ������ ����� �� 1 2� ������� ������ ����� �� /.%/

��� �����

������� �����

��� �� � !��"#

$2������� ! ���������3����� 4��"����� !&�������� 5������ !&�������

,6����� ! ��������5����� � ��� ������������&�������� 5������ !&�������

� $� ����� ���

6� �� �� ����� �� ����� �� � ������� ��"� ����������� �� ������� �������� �� ������ �� ��������� 7$+/8 3 ��� ��� �� ���� ! ��9����� ��"���� ��� � ������ ��� !�������� ������� ������� ������ ��� ���� ������ �� �� ������ !���� �� �� ������ ��� �� ��� ��� ���������� ���� ���� � �������� !�� ��(� �� ���� �� 70� '8�:6��� ���������� ���� �� 7;� .8 �&<��� ������������ ����� �� 7=8 �&<��� ��� ������������ �� ����� ��� 7$%+$,8 ��<��� ��"� ���� �� �� ��� �"� ������ ��� ������� �� ���� ��� &� ���!�� ������ ! ����� ������� ��� ���������� � ������� �� � �� >���� ?<�� 7$/8 ��"� ���� ��������� � �� ����� ��� !����� �� � �������� �� ��� ������� ������ �� ���������� ����� ���� ! �� ��� �� ������"����� ���� �� ! ����!���� � !�� ������ ����� �� ����� ��� �������

��������� ��� �������� ���� ��� ��"����� �� � ����������� � ������ ��� �"�� ������ �������� �!!�� ��� � ��� >� ��� ?<�� 7$0� $'8 �� � ������

������"�� �� �� ��� ���� �� ���9�� �� � �����"�����!�� �� ����� ��"�������� ���� ������� ! �� ������ �� ��� �� ��� �� ������ !���� ����9� �� ��"������� ! �� � ������� ��� ����"� � ������ �������"�� �� �� �!!� �"��� ?��"��� ��� ��� ! ������ ��� ���� �!!� �� �� ��� ������ ������� ��� ��!!�� ��� ��� ������ �� !���� :���� �� �� ��9� ��� "����! �� ���� ��� �����- ����!��� ���� ����� ��! ������ �!�� ������ ���� ���� ��� �� �� �� ����������� ����� ������������ �"����� ������ "������������ �� ��!!� �� ����������� � �� ��!!� �� ������ ����� ��� ��� � �� ����!� � ������ ��"�� ���� ���� ��� �� ���������� � '% � ��� �������� ��� ������� ������� �62� ! '% ��@ �� �� ����� "���� ��A % =* ��� ��� � ������ ����� �� ��� "������ ��9� !������ ����� ���� ���� �� "�������� �� �� ���� &� ��� ����� ���� ������������� ��"��� ��� ��� � ��!!� ����� ���� ����� ���� �� �������� ��� ���� �� ��� �� �� ��� �"��

B�� ����������� ������ ����� �� ���� � ��� ���� ��� �� ������� �� � �"�� ������ ����� �� �� �� �� �� ��� #�� �� ����� �� ���� ����� �� �������� ! � ���� ���� ��� ���� � ! ��������� ! �������� ��� � �� � �� �� �����"� �� ������ ��!!�� !���� �������� � ��� ������ ������ ����� ����� ���� ������� ��� �� �� ������ ����� ���� � ��������� ����� ����� �� ��� �������� ��!!�� !� �� B��� ��"������ ! ����� �� �� ������ ����� �� ������ �� �� �� ��� ����� �"��������� �� ���� �� �� ����"��� ������� � ������� ���� � � �� ����� ����

�������������� 2� &�� : C ��� 2������� ! ���������3����� 4��"����� ! &�������� )�� 5����� &��������$$=,;%� 5������ ! &�������%&����� ����!��D��� ��� ������ E;'�..=$;=$

'((����� ���� %'� ���� � ���- !!)%� ������ ������ ������ ��

������������ ,%%%� � � './+'.* './

F G6��C�H�? H����� >��?� ;=0'$ G�������� ,%%% %$./�%*/'1%%1%/%/�%'./ I$. '%E '%1%

�%����%�

���� �� � �� ����� �� ��"� � ����� ��� ���� ���� ! �� ������� �� �"����� �� � ����� �� !��(� �� ��� ��� ������ "��������- ��� ��!!��� !���� ������� ������� �� ��� ���������� �����7$,� $;8 6������ ��"�� ���� �� ��� ���� ���!������ � "������ !���# ��� � ����� ����� ��� 7$.� $*8 ������ ��"�� ������� �� ������9�� ����� ���� ������� "������ !���#� !� ��"�� ���� �� �� �� "������ ������ �� ������ �� ���� ����� ���� ������������� ��� ��������� ����"� ������ ������ �������� �������� ���

���� ����� ����� �� � ������ ���� ������������������� ����� �� ������� ��� �� ����� � �� �� ���� �� ������� ������ ����� � �����������#��������� �� ����� ������� ���� ���� �� ������� �� �� ��� ���(� �� �������� �� �� �������� �#���� ���������� ���)�� ��� ����������� �� �� �� ����� �� ���� �� �!!� ��� ��� ! ��"����� ��� �������� ! ���� ��� �� ������ ��� ��������� ������ ����

# )� ����� ��� �� ���

#�� )� �����

��#���������� �� ������ � ������� ��*�� ����������� ��=�� ���������� ��$%�� "���������� ��$$����� ����������� ��$,� �� ���� �� $����������������� ���� ��� ����� !�� ����� � �������#��� G6� 4&�� ���� � ��� ! ?<�� ����� ��� ��� ����� !�� :�����& ����!� �:��� ����� 3J� 4&�� &���� ��� �� ���!���&2&�� ����� ��������� ������� �������� ��� �������� ������� �������� ��� ��� � ����� ��"� ==K����� ������ !�� :��#� ������ �L� ��� &��9������� 2����9�� ���� ���� ������ �� ���������� ����������� ��� � ������M ����� ���������� L��!��� ���4&�� �� ��!!�� ������ ! '% �� &2& ��� ,' ��

������� ��!!�� ��� ��� � �? ! . % & # ����� !��#��������� ��� ������ �� �������� �*+�$, �$' =%�$/ *.� $' 0$� $' '= ��� $, 00 ��� ����� �"����� ��� ��������"�� �� $ %%% �� ������M ���� ��� ������ �������� ���#�� "������ ��!�� ���

#�# '����� �

?< '*=% 66 ��� ���������� ��� � !���� ���9������ � �:62� ��� ���� ���� �� ���� �� �� ���� ��� ���� �������� &<L���$ !�� &���� �L�����!��� <�� 4&��� ��� /% � ��� ��� % ,' �� 62 ��� �������� ����� ! % ,' �� �� ������� �� ��� ����!���� ��� � ������������ �� ������ �������� ��� �&������� �N� $%%%5 ���� ������ ��� ���� ���������&�������� <����"���� 3C� 4&�� ��� �� ���� 4�H6&,%% ��� � !�� ������ 6�������� �5��� 3H� 4&��

��� ���������� ���� �� ���� ��� �� //=%� �������� !�� ?�����<� #��� ��"������ <�� 4&�� :��������� � ���������� ��� � '% �� 62 ��� /;% �� B2�<���� � �� �������� <������ �N� 4&�� ���� ���� ��� �� ����� ��� ��� '% � ��� �� �!!� �"� �������� 0% � B�� ���� ���� 4H ��� �� ��� ���� �� � ,$% �� ��� ��������� ��� ��������� �,' O $�

#�* %� ��� ��� ���������

� "������ !���# ! $%% �� ��� ���� ���!�� ������ �� � ������ ������ ���� ���� ��� �� ���� ��������� ��������� ��� �� ������ � ,'� � �� ������ ���� ! ���� � ��� ��� ����� �� �� ���������� �� ��!������ �� �������� �� ���� � ,'� 6�$%% �� ! ��� ���������� ������� �� ���� % ' �� !�� ��� ����� �� �!�� ��� �� ������� ���� ����� �� �� ���#��� �� !���# �� ��� ��� � � �� �����

#�+ ,� ��� )%�� ����� ��� ���������

��� >� �������� ��� ������ � � ����� �����"�� �� ! ,' �1� ��� ���� ��� �������� ���� �$%%�� ��� ��������� �� ����� $*%� � ;� ������ ��� !������ ���� � $*%� !� . ��� � ���� ��(� �� !$ �� ! ������ ��� ���� ��� � ���� ��� ! /%@$ �����)� ��� ������ � �� !��� ������� ���� ��(� ���$' � ! % $ � 3�B?� !����� �� $' � ! ������������"�� � ���� �� �� �� ��� �� ��(� �� ����� !$$ , � ��� ���� ��(� �� ��� ����� / 0 ��� ��� ��� ������� !� �� �� ���� ���� 3 ���� ���# ���������� ��� ����"�� � �� ����������� ������ ��"�������� � ����� �� ����� ����� . ' �� � % *K ! �� �� �������� "����� �� �� ��(� �� ���� �� ��� ��� ������� �� ����� ?��"��� �� � � ���"� ������ ������� �� ��� ������ �� ��� �������� �� ��� �� ������ ! ����� ������� ��� ������� ��� ������ �������� ��� �� ����!�� ������� !� ������� �������� ���� �������� �� ���� �� � ����� ����� ! ����� ��"�� �� ��� ���� ��� ����� ��� �� ��� �"�� ���� �� �� �� �� ������� �� 9�� ��� ���� ��� � ������� ! 3�B? ��(� �� ��� ����9�� �� ����������� �����������- ��� �� ��(� �� ��� � ���� � � ������� ���� ������� �� �� ����"��� ��� ��� ���� � ����� ����� ��� ���� ����!�� ����� �� �� ������� �������� &� � ���� ��� �������� ���� �� :�� $

* -��� ��� �������

*�� )������� ���������� %' � ������� ���

���� �������� ��"���� ���� � ��� �� �� �� ������� ��� ����- � ,'�� . .K �1� �� �����"� ������� ����� / /K ! ���� �� �����"� �� �� � �� ����

'.0 G N���� � G��� ��� & : C �� ������������ ,%%%� � � './+'.*

��������� 7,%8 ������ ��� ������ ��#�� �� �����!!� ��� �� ��"�� ���� �� ! ����� ������ ������9���� �� ���������� ����� � ��� ������ �� ����!!� �"� �� � ����� ��(� �� ���� �� �� �� �� �������� G��� � ������ 9�� ! �� ! � !�� �� �� ����� �� ��� ��������� � �� ������� ��!!� �� ������� ���� ������ ?��"��� ��������� ! �� ����9�� �� 3�B?� ������!� ��� 7,$8� ��� ���� !��- ���������� � ����� ����� �� �� ������ !� ��� �������� ��"���� �� ���� �!�� �������� ���� "���� ��� ����� ! ��)� ��� ��� �� ������9�� ���� ���������� �!�� ������������ "���� �� ��������� ��� �� ����� ��#��� ���������� 1��������� �������� ! &2& �� ���������� 7,,� ,/8� � �� ������ ! �� �� ������ ����� ����)� ��� ������ ���� :�� ,� � ����� ���� �!���������� ���� "���� !� �� ��������� �� ��!!���� ���� ���������� ��!!��� ��� �������� ��������� ������� �� �� ����� ����� ! &2& ��� �� ������ ��������� ��������� ����9�� �� 3�B? �"�������� ����� ����� �� ���� ������ ��� ���� ����� �� ��� ������ ��� �� �B:

<���������� ���������� ����� �� �� ���� �� ������� ��� ! �� �� ���� ��� ����� .K G���� ������� �������� "����� �� ���� !�� �� !�� ����� �� ������� ������ ���� ������ $����� � ������ �� ��!!���� ��� ������ ��� �����"���!�� ��� ��������� �� �� ��#��� �� ��������� �� �

������������ ,%%%� � � './+'.* ������� ! ��"�� ������ ����� �� ��� �� '.'

������ �� �!!� ! "����� � ������� ! 3�B?��(� �� ��!�� �� ������ � ��)� ! ��#��������� �� ������ ! ��#��������� �� �� �� '% ���- ��(� ���� ���� ���� ������� ���� � � ����� ��!!���� � !$$ * � !� ,' � L�!!�� �� $, ' �� ������� ��� ,' ��

&2&� �? . %- ��������� '% � 62� ��� � �� ����� !'% � ��!!� �"� ������ /' ��- ������� "����� $* #H &��� ���� ! 3�B? ��� ��(� �� �� ! �� �� �������� ! 3�B? �� ���� �L� ��� ��� ���� % $� % 0� ���% * �� ����� �"��� L��� �������� ��� ���# ������������ ����"�� ���� % $ � 3�B? ��� ����

������ #� ��� & ����� ��������� ! �� ������ ! ������ ��� �� �� �� �������� ����� �� �� ����������� �6� � ����� ���� ! % $ � 3�B? �,�� !������� ������ �� ���� ���� ! �� �$� ������� ��������� ��(� �� �� �� ����� ��� ���� "���� ����������- �66� �� �� ������ � ! 3�B?� ��� ��� �� ����! �� ���"��� ��������� ����� ��� �� �� ����"����� �� �� ����� �������� �0�- ��������������� ����� ! �� ��(� �� ���� �� �� ��� ��!!�� ���������"�� ��� ����� ��� �� ��!!�� ?���� � ��!!��������!� �� ! ��(� �� 9���� �� ����� �� ��� ��!!����-����������� 9�� 0� ������ ��� � �� � ����� ���� ������ �� � ��� ���� �� ������ �� ��!!���� ������������� ����� 9�� / ��� !���� �� ��!!���� ���"�������� �� �� ���� ��� �� �� !����� ��� 9�� ' �� ��!!���� ���� ��� ��� ������ !�� ��� ����"��� �� ��� !��� ����� ������ ������ ��� �� �������� ��� �����������- ����!��� �B: ����� � ��"� !���� �!!� �"��� �666� ������ ���"�� �� �� ��� �� �� !����� �� ������������!!�� ���� �� �� ���� ����� �� ����� ����� ��������� ��� � �� � �� !������� ��� �� �����"�� �� &2&��� ������� � ��� �B: ��� & ����� ������� ! ���� �� ����� ���� ! �B: ���#�� ��� ���� ������� ��� ���� ����� �� ��� ���� ���� �� �� &2&��� ��� ��� ���!��� �� �B: ��� ��� ����� �������� �B:

��� ?�������� ��� ����� � ��� �� ������� ���������� ����� ����� �� �������� � �� ����� ���� ! ���� ��������

*�# )������ ��� ���

�� ������� ��"�� �� ����� �������� ������ ����� ���� �� ���� �����"� ��� �������� ��"��� �����!��� ���� ���� ��� ������ ������� ��"� �� ������� ��� ��- ������� ���������� �� �������� ���� �� ��!!� �� :� ��� ������� ��� ��� ����� !�� ���� ����� �� �� ������ ������ � ����� ���������� � ,'� �!�� �� � #���� ! ������� ��� ������"�� �� � ���� ��"��� ���� � ���!�� ������ �����'%% �� ! �� ���� ����� �� �� $%% �� ! �� ����������� ������ ���!�� �� ���� �� :����� / ���� ������ �� ����������� ���� ��� �� ! ��#����������*+�$, ��� �� �� >� ����� �� �� ��"�� L� ������������ �� "������ !���# �� ��� ��� ��� � ����������� ! ;% ���� ��� ������ ��������� ! �� ��#���������� ������ �� � ������ ��� ��� ����������� �����0 ��� � ������ �� ���� ! �� !���# ��� �� ������

�� ��� ������ �� ������� ������� ������ ! ������� ��� ������ ������� ��� � !�� ������ �� ��� � ����� ����������� ��� 3� ��� �� ��� �� ������ �� ����� �������� ������� ���� ������������� �!�� ���� ��� �� � �� ��� � ������� ������� �� ���� ������ 7$*8 ��� ������ ����� ! �������� ����� ��� ��)� ��� ��������� !� ��#����������:�� 0� 6� � ����� ! $% ��� ���� �� ����� ' ������ ������� ! �� 4H ��� � �� ������ ������������� �� �� ����� �� �� ������� ������ � ������� &������ ! � ������ ������ ��� ' ��� ��"� ����� �� ����� �� ���� ���# "��������� ����� ��������� ! �� �������� �� #� ��� ���� �� ����� ,

*�* ������ �� ��� ���������� � !!)%

:����� ' ���� � ��� �� ��� ��������� ! ��#���������� �!�� ���� �� �� �� ���������� � ���������� ���� �� ��� ���� �!!� ��� � ��� �� ��� ��#���������� ��� ����� ��#�� ����� �� ���� � �� ������������ L� ������� ������9�� ���# ����� ������� ��� ������� ������ ! ��#��������� ���������� ����� � ������ !� �� ! ��#��������� ! �*+�$, ����� �� ����� �� ���� .,� $',� ,$/� /%,� ���//0� ����� �"��� ��� !!����� ���� �� ������ ��� ��������� ��� ���"��� ����� ! �� ���� � ������� ������� ����� � !���� �����!� ��� 7,08 3� � ���"�� ���� �!!� � ��� �� ���� �� �� !����� ���!� ��

'.; G N���� � G��� ��� & : C �� ������������ ,%%%� � � './+'.*

��(�� �� ������� �� ���# ����� ! ���� ��������� � ��� ��� �� ������� ! "���� ��� �����

H���� ������ ������� ��� ������ ������

�#H� ���� �����

$% $. ; %% $ /% � $%. , $; � $%.

$, ,$ 0 =, $ %= � $%. , ,; � $%.

$' ,* / .% * // � $%; , ,, � $%.

$* /= , *= ; 0% � $%; , ,, � $%.

,% 0' , 00 ; $% � $%; , ,. � $%.

5&2 � ' *

�� B������ ���� �� !�� �������� �������� ����� ������9�� �� ��"����� �� ���� �� �� �������

��� � 5����"� ������� ��"���� � $%%

������ *� ���� ���� ! ���� �� ����������� ! ��#���������� ��� �� �� >� &�� &� �� , 0 !� ������� ������

��(�� #� ������ ��������� ! ���# ����� ! ��#���������*+�$, �����9�� �� >�

��#�������� 5�������� ������ ��������� "����

� ������� ���P$%, $0�+*,0, ; % ==$.<��������� �P,;, *'�+$,..$ % ==/=L��������� �P;,$ /=�+,=$;= % ==*/H���������� �P;=, ;'�E.**. * % ==**?���������� �P'/% '*�E'.%/. % ==''

�� 6� �� ��������� �������� � ��� � �����!� ������ � ������ ��� ���# ����� ����� �"���

������ +� �������� !� ���� �� ��#��������� �*+$,�����9�� �� ��)� ��� ��� &� �� , 0 !� ������� ������

�� ! �� ���� �� ��"� � � �� ���� � �� ���� !�� ����

��� ���� ��� ����� ���� ��� ������ ����� ���� ���� �������� ! ������� ������� ���� ��� �������� � �� ������� ��� ���� �������� ������� �� �������!���� �����!� ��� � ������� ��� ����#��� �� ����� ���� ��� �� ����� <����� �� ��� 7,'8 ��������� �� ��� !������ ��!!�� ��� ���� ��� �"�� !� ������ �� #����� ��)�� ��� �!� ���� ����9��� �� ��������� ��"���������� ! �� ����� ������ ������� � �� ����!� � ������� ������ ��� ������� ��!!�� � ���� �������� ������!� ��� ������� ��� ��� ! �� ��� �"�� ! �������� 9�� �� �� ������

*�+ %�� � ���� �� �� ����� ������ �����������(��� �

� ����"� �� ������ ������ ! �� ���� ��� $����������������� ��� ����� �� �� �� ����� �� �������������� ���� ���� �� 2�� ����� �� ����� / ����� �� ������ ������ ��� �����!� ���� ����"�� ��� �������� ! �� ������� �������� ���� ����� !� ���� ��������� ������ �� � �� � ������� ��� �����������

+ ���������� �����.

&�"�� ������ ����� �� ����� ��� �� �� ������!� �� !��� ��� &� � � ������ ���� �!!� �"��������� �� ��"������ ! �� � �������� �� !� ����

��� ��������� ��� �� ��� !� �������� �� ������� ������"�� ! �� !� �������� ������ �� ������� �� �� � !� � ! ��"���� ��� �������� ! �������� �� ������ ! ������ "����� ��� � �� !���� ������ �� ��� � ������� 6� ������� ��� �������� ���� ������������� ���� ��� ��� � ������ �� ���!� �� �� ���������� ! ����� ��"�� ��� ����������� ���� �� ���� ��� ���� ������ ��� �� ��������� 6� ������� � �� ������� !� ���� �� ! "����� �����"����� ��"�������� �������� !� ��� � �� ������ ������� Q���������� �����Q �� � ���� !��� ��� !�������� ������ �� ������ ��� ��� ���������� �������� ������� ���� ��� ��� ����� �����!�� ��� ��� ��� � �� ���� ��� ��"�������� �� ������ �� ��"� �� �� �� ������ �"�������� ������������ ! ����� ��"�� ��� ������ � �������!!� � �� �� ���� �� �� �������� �� ������ ������������ ���� �������� �� ������� ������� ����"���������"� ������ �����!� ���� ��� ���� ��"�������� ���� ������ �� �� �������� ! ��"�������� ��������� ���� ����� ��� !��� �� ���� �������

�� ���� �� �������� �� �� �������� ��������� �� ��!�������

5� ��"�� J��� .� $===

/ -�������

7$8 &���������� ? � "������ #� $���� %�&� $=*=� ''(�0.'+0..

7,8 �������� � � � ������ � & � ��@ G���!������ J 2 ��� ��%�&���� $������ J�� G���� R &��� 3�� C�#� 3C$==*� H� $0.� ����� $

7/8 ������ 5 � <�����9��� J � %���� ���� $���� %�&� $==.� �)�$%/+$/'

708 )���#� J � � ����� $���� %�&� $=*/� �� $*/+$*. 7'8 ���� ? � 2������� < ) � $���� %�&� $==;� *+� $*$.+$*,$ 7;8 ?����� J � L������ � � 5���� > � $���� %�&� $==*� ),�

;'%�+;';� 7.8 ���� N � 5�����(��� H � & � >������ 2 � � >���� � � �

&�������� 5 : � $���� %�&� $==/� *(� ,$+,;

������������ ,%%%� � � './+'.* ������� ! ��"�� ������ ����� �� ��� �� '..

������ /� ��� ��������� ! ��#��������� �*+�$,����# $+'� ���� �� �� �� ��� ������� � �������! �*+�$, ��� ..� ;.� .'� .; ��� ;% ��� ���1��� ����� ��"��� �� �� ��� '%% ��� $���������������� ����#;� ��� ���#�� �� �� �� ����� !������ ����� 3��� ���� �� ��� ����!���� � ����� �� ��"�� ����������

��(�� *� �������� ! �������"� ������ �� ��)� !��#��������� �*+�$, ���1���� ��������������

���#��������� �* �= �$% �$$ �$,

5&2 �K��� $* . $* 0 $= ' $; / * 05&2 �K��� $% % = , = 0 $% % * $

�� B������ ���� �� !�� ��������� ����� ��� ����� �� ���#��� $���������������� �� �����

��� ���������� ������� ���� ���� �� �� ���� � ���- �� ������� � ������� !�� �* �$, ���� ..� ;.� .'� .;� ���;% ���� ����� �"���- ��� &� �� , 0 !� ��� ������������ ������

7*8 <��� 2 G � <�����9��� J � $���� %�&� $==0� �+�,=*+/%'

7=8 N����� N � C���� � J � <�����9��� J � $���� %�&� $==0�**� *00�+*''�

7$%8 J����� � � � �������� : : � $���� %�&� $==;� *+�,,/;+,,0%

7$$8 J����� � � � �������� : : � $���� %�&� $==.� *-�,/'+,/=

7$,8 ?�� C � ���� ? ) � $���� %�&� $==.� *-� 0;/0+0;0%

7$/8 ��(��� 5 � � .%�/% $==;� 0� =/;+=0/

7$08 ��� & : C � %�������� ������������� 1������� ��� $������!����� %��&������ .���� H� ',� ����"���� �������� $==,� ����� $

7$'8 B��� 5 < � �������� J < � ��@ �������� J < ��� �� 2���!���� �� %�������� ������������� ,�� �� � �5� <�����L � 5��� :� $==.� ����� $

7$;8 ?���� � � B#�� ) � ��#������� 3 � $���� %�&� $=*=� * �.*0+.*.

7$.8 ������� 2 � J � 3� %��&������ $=.=� ))� $/'+$0%

7$*8 ������ J � � ��@ >��� � ��� �� 4����� 1������� �� /�%��&��������� /�� �� � G�����6���� ��� �� 3�� C�#$=='� �� .**+.=$

7$=8 L�� � � � L�������� ) � L������� 2 � >��!!���� B � <������ : �5���� ��� $==.� ' � $.$=+$.,.

7,%8 &������� 6 � � 2������� �� 6������ ������ 1���������?����� <����� 3�� C�# $==;� � ,,.

7,$8 6��� �� 3 & � 1����� 6������ %�&����� J�� G���� R&��� 3�� C�# $=*.� � 0;.

7,,8 ?���� 2 > � ������ > J � � ��@ �� ������5�������� � ? ��� �� $������ ���������!1����� %�&���� �� ���������$������ ��� �� 2�##��� 3�� C�# $=*$� ����� ,

7,/8 ������� & � B��#�� ) � 6 ��#���� ) � ��� ����� � � ���� � �$���� %�&� $=*0� (*� $$$+$$/

7,08 M������ J < � ������� & � ������ $==*� �+�� 0;'+0;*

7,'8 <������ J � ����� 3 J � �������� J < � $���� %�&� $===�) � $;.=+$;*.

'.* G N���� � G��� ��� & : C �� ������������ ,%%%� � � './+'.*