cromatografía de alta eficiencia
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8/18/2019 Cromatografía de Alta Eficiencia
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Cromatografía de alta eciencia
La cromatografía de gases d lata ecacia se encuadra dentro de la
cromatografía de elución. En esta un líquido circula en íntimo contacto
con un sólido u otro líquido inmiscible, al introducir una mezcla de
substancias en la corriente de fase móvil, cada analito avanzara a lolargo del sistema con una velocidad diferente que dependerá de su
anidad por cada una de las fases. Estos supone que después de
terminado el recorrido de la muestra por la columna, cada una de las
substancias introducidas en el sistema eluirá con un tiempo diferente, es
decir, estarán separadas.
• Clasicación
e puede clasicar de diferentes maneras, pero la más !abitual es la
realizada en base a la naturaleza de la fase estacionaria, "a que es estala que impone fundamentalmente el mecanismo de separación, de este
modo, se puede enumerar en cuatro tipos#
$. Cromatografía de adsorción %liquido&solido'( la fase estacionaria es
un adsorbente " la separación se basa en repetidas etapas de
adsorción&desorción.). Cromatografía de reparto*adsorción %fases ligadas químicamente'(
la separación en este caso, se basa en un reparto del soluto entre
la fase móvil " la fase estacionaria.
En estos dos primeros tipos se divide atendiendo a polaridad de lafase estacionaria#& Cromatografía de fase normal( la fase estacionaria presenta
activos de alta polaridad " las interacciones que se producen
con el soluto son especícas del grupo activo. La fase
estacionaria puede ser un sólido adsorbente, o bien, un soporte
al que se unen químicamente moléculas orgánicas que
presentan grupos funcionales de alta polaridad.& Cromatografía de fase reversa( la fase estacionaria tiene una
naturaleza apolar " las interacciones que se producen son
inespecícas.
+. Cromatografía de intercambio iónico( este tipo de cromatografía se
da cuando la fase estacionaria presenta en su supercie grupos
ionizados capaces de retener selectivamente a iones de signo
contrario que circulan en la fase móvil.
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4ipos de bombas
5ombas neumáticas( de desplazamiento directo " bombas
amplicadoras de aire.
5ombas de motor eléctrico( bombas de /eringa " bombas alternantes.
En la actualidad las bombas más utilizadas !abitualmente son las de
tipo alternante.
En una bomba alternante se distinguen tres partes
&el motor
& el mecanismo de transmisión.
& la cabeza de bomba.
istema de mezcla de fase móvil
6ezclado a alta presión( este sistema de mezclado utiliza una bomba
para cada uno de los disolventes qe se van a mezclar la salida de
cada bomba conectada a una cone-ión en 4 o a una pequea cámara
de mezcla. La denominación de mezcla en alta presión es debida a
que la mezcla se realiza una vez que los disolventes !an pasado la
bomba ", por lo tanto, !an adquirido la presión de traba/o.
El ma"or inconveniente de este sistema de mezcla, es el alto costo de
las bombas si se requieren mezclas con un porcenta/e inferior a un
78 de uno de los componentes. Como venta/as, se pueden sealar
una buena reproducibilidad de las mezclas, una rápida respuesta en
los cambios de concentración.
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6ezclado a ba/a presión
En este, el mezclado de los diferentes componentes se lleva a cabo
antes de que estos entre en la bomba. El mezclado de loscomponentes se realiza por medio de válvulas porcentuales
controladas por relés, que están calibradas para dar la mezcla
adecuada. El dispositivo de control simplemente abre cada válvula
durante un periodo de tiempo adecuado, que será función del
porcenta/e de cada componente que se precise en la mezcla.
La principal venta/a de este tipo de mezclado, es que el coste del
equipo se reduce considerablemente el mezclado en ba/a permite la
mezcla de dos o más componentes de la fase móvil con una buena
reproducibilidad. Como principal desventa/a se tiene la ba/areproducibilidad que se obtiene en mezclas donde uno de los
componentes se encuentra en una proporción del 78.
istema de in"ección
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9eriva# variación de la seal de base a lo largo del tiempo, que
origina una variación lenta " progresiva de la línea base.
ensibilidad
& :ue afectan a la ecacia de la separación
uL para evitar pérdidas de ecacia.
Constante de tiempo( esta constante del detector indica el
tiempo que necesita la electrónica del detector para asumir
seal instantánea originada por el soluto. Constantes de tiempo
elevadas, dan origen a que picos que salen rápidamente de la
columna se vean ensanc!ados " por lo tanto, dan origen a una
pérdida de la ecacia del sistema. 3ara análisis convencionales
son apropiadas constantes de tiempo inferiores a $?? ms.
Columna
Características
& 9iámetro interno( la elección del diámetro interno de la
columna se realiza en función de la cantidad de muestra a
separar, para la separación a escala analítica se suelen usar
columnas de diámetros de $ a @ mm, mientras que en los
traba/os a escala preparativa se superan los $?mm de diámetro
interno.& Longitud de la columna( a ma"or longitud de la columna, la
presión en cabeza se eleva considerablemente, por lo que !a"
que alcanzar un compromiso, a la !ora de seleccionar la
columna, entre ecacia " caída de presión.& Cone-iones( la cone-ión en este caso es realmente una unión
reductora de compresión radial, que permite una perfecta unión
del tubo de la columna con el capilar que la conecta a los
restantes dispositivos del cromatografo. Estas uniones no
deben presentar volumen muerto, deben permitir el paso de
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secciones anc!as de tubo a capilares, " deben ser fácilmente
montables " desmontables.3or otra parte, " como cierre del tubo que contiene el relleno se
colocan los llamados fritados, que son mallas con un tamao de
poro inferior al diámetro de la partícula de relleno de esta
forma, se de/a pasar al elu"ente evitando que el relleno sesalga de la columna.& ;elleno(
3eculiar( bolas de vidrio o polímero, no porosa " esférica con
diámetros de +? " ? um. ;ecubrimiento con una capa
delgada " porosa de distintos compuestos " recubrimiento
adicional de fase estacionaria " retenida por absorción.3artículas porosas( micro partículas porosas con diámetros
entre +" $? um, preparadas por aglomeración a partir de
partículas pequeas " recubrimiento con partículas
orgánicas unidas químicamente o físicamente.