cromatografia en placas

5/18/2018 cromatografia en placas

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CTEDRA:

ANALISIS DE ALIMENTOS

CATEDRTICO:

ING. JOSE LUIS

INTEGRANTE:CRISTOBAL ORE BEATRIZ

SEMESTRE:

VI

CROMATOGRAFIA EN PLACA FINA

HUANCAYO PER


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I.- INTRODUCCIN

En esta prctica se pretenden identificar los componentes de una disolucin. Esta puede estar

formada por compuesto desconocidas para nosotros siendo la mezcla completamente aleatoria. Para ello el

mtodo a utilizar ser la cromatografa.

Con este mtodo experimental podremos separar los componentes de una disolucin desconocida para

luego compararlos con diferentes disoluciones patrn. La tcnica a utilizar no se corresponde de manera

especfica con su nombre, puesto que no apreciaremos ninguna diferencia de color entre los diferentes

componentes. El nombre de la tcnica deria de los primeros ensa!os en los que se separaron pigmentos de

plantas como la clorofila, los cuales tienen colores definidos. Estos primeros pasos los dio el botnico ruso de

origen italiano "i#ail $s%ett cuando separo diersos pigmentos de las plantas.

La tcnica se basa en la elocidad de desplazamiento diferencial de los solutos al ser arrastrados por unafase mil sobre una estacionaria que puede ser slida o liquida. Esta diferencia ser la que nos permita tanto

identificar cuantos componentes tiene una disolucin como separarlos.

Objetivo !e "# $%&'ti'#.

&prendiza#e de la tcnica de cromatografa en capa fina

Conocimiento de conceptos cromatogrficos' polaridad, fase mil, fase estacionaria, factor de

retencin, etc.

(eterminacin de los componentes orgnicos presentes en una muestra usando sustancias patrn.


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II.- (UNDAMENTO TERICO

La cromatografa es la tcnica que separa una mezcla de solutos basada en la elocidad de

desplazamiento diferencial de los mismos que se establece al ser arrastrados por una fase mil )liquida o

gaseosa* a tras de un lec+o cromatogrfico que contiene la fase estacionaria, la cual puede ser slida o lquida.

Las tcnicas cromatogrficas se emplean para separar los componentes indiiduales de una mezcla !, en

ciertos casos, para identificar un compuesto comparando su comportamiento cromatogrfico con el de sustancias

conocidas empleadas como patrn.

La base de la tcnica es que cuando un determinado soluto interacta con dos fases, una de ellas,

+abitualmente slida, llamada fase estacionaria, experimenta una serie de procesos )adsorcin en fase slida,

solubilizacin en cada fase, arrastre por la fase mil, etc.* que, en ltimo extremo, llean a que el soluto se

reparta entre ambas fases. En el equilibrio, la relacin entre las concentraciones del soluto entre ambas fases es

constante, ! se denomina coeficiente de reparto. -i en una mezcla, cada componente tiene un coeficiente de

reparto diferente del de los otros, la separacin ser buena. aturalmente, dic+o coeficiente depende de la

naturaleza de las fases, as como de las condiciones de la cromatografa.

/na de las tcnicas cromatogrficas ms sencillas es la que se realiza en capa fina, llamada as porque la

fase estacionaria es una capa fina de un material poroso )gel de slice, almina, etc.* extendida para su mane#o

mecnico sobre un soporte inerte. La fase mil es una mezcla de disolentes en diferentes proporciones, que

emigra por la fase estacionaria debido, sobre todo, a la capilaridad. En su moimiento, arrastra ms o menos a

los componentes de una mezcla en funcin de sus ma!ores o menores coeficientes de reparto.


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El coeficiente de reparto es poco empleado en la prctica. En su lugar, ! relacionado con l, se emplea el

denominado 0f, caracterstico de cada sustancia, definido como la relacin entre la distancia que recorre dic+a

sustancia ! la que recorre la fase mil. Las ms insolubles tendrn, en el disolente empleado, un 0f prximo a

cero, mientras las ms solubles se acercarn a uno.

La cromatografa es una tcnica de anlisis qumico utilizada para separar sustancias puras de mezclas

comple#as. Esta tcnica depende del principio de adsorcin selectia )no confundir con absorcin*. La

cromatografa fue descubierta por el botnico ruso, de origen italiano, "i1+ail $s%ett en 2345, pero su uso no se

generaliz +asta la dcada de 2364. $s%ett separ los pigmentos de las plantas )clorofila* ertiendo extracto de

+o#as erdes en ter de petrleo sobre una columna de carbonato de calcio en polo en el interior de una probeta.& medida que la solucin a filtrndose por la columna, cada componente de la mezcla precipita a diferente

elocidad, quedando la columna marcada por bandas +orizontales de colores, denominadas cromatogramas.

Cada banda corresponde a un pigmento diferente.

La cromatografa es probablemente la ms erstil de las tcnicas de separacin' es aplicable a cualquier mezcla

soluble o oltil. (e +ec+o las tcnicas de separacin suelen diidirse en dos grandes grupos' cromatogrficas !

no cromatogrficas. La eleccin de una tcnica cromatogrfica concreta depender de la naturaleza ! cantidad de

la muestra, del ob#etio de la separacin ! de las limitaciones del tiempo ! equipo asequible. Para explicar el

fenmeno cromatogr!co e" nece"ario e"ta#lecer $o" tipo" $e f%n$amento& %no remoto 'otro prximo

()*!#+e*to %e+oto' Este fundamento se encuentra en alguna o algunas propiedades fsicas o fsico

qumicas de los analtos' solubilidad, adsorcin )tendencia a ser retenidos en slidos finamente diididos*,

olatilidad, tama7o, carga, reactiidad qumica o bioqumica, etc. La mezcla de sustancias a separar se coloca en

una situacin experimental dinmica donde ex+iben dos de estas propiedades, o bien una de ellas pero por

duplicado tal como la solubilidad en dos lquidos diferentes como ocurre en cromatografa liquido 8 liquido.

(eben cumplirse las condiciones siguientes'

8 Los componentes de los sistemas empleados deben estar en intimo contacto entre si.

8 El equilibrio establecido entre esos componentes debe ser lo mas completo posible.


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()*!#+e*to $%,i+o' -e encuentra en el +ec+o de que es mu! improbable que dos especies presenten

cuantitatiamente el mismo par de propiedades fsicas o fsico 8 qumicas frente a un sistema cromatogrfico

dado. Por tanto, en estas diferencias, que pueden ser mu! peque7as, se basa la separacin cromatogrfica.

-i se transforma la idea del equilibrio esttico establecido entra las dos fases en un equilibrio dinmico,

se tiene la realidad del fenmeno cromatogrfico. Como se +a indicado anteriormente, una de las fases,

denominada fase mil, flu!e a tras de la otra, a la que se denomina fase estacionaria, que permanece inmil,

! que, al menos en una extensin esta en equilibrio con la fase mil.

Las propiedades de los componentes de una mezcla determinan so 9moilidad: entre si ! con respecto a

la fase mil. -e eligen las condiciones experimentales ! las fases cromatogrficas para que los componentes de

la mezcla se muean a distinta elocidad. La base de la separacin cromatogrfica ser, por tanto, la diferencia

en la elocidad de migracin de los mismos.

La cromatografa es probablemente la ms erstil de las tcnicas de separacin' es aplicable a cualquier

mezcla soluble o oltil. (e +ec+o las tcnicas de separacin suelen diidirse en dos grandes grupos'

cromatogrficas ! no cromatogrficas. La eleccin de una tcnica cromatogrfica concreta depender de la

naturaleza ! cantidad de la muestra, del ob#etio de la separacin ! de las limitaciones del tiempo ! equipo

asequible

Puede +acerse una primera distincin entra las tcnicas cromatogrficas atendiendo a la integracin

continua o no del sistema de deteccin. &s, la cromatografa no conllea a un sistema de deteccin, mientras

que cualquier cromatgrafo de lquidos o gases llea incorporado dic+o sistema siendo, por tanto, autnticos

instrumentos.

C"#ii'#'io*e:

Para clasificar globalmente los procesos cromatogrficos es necesario atender a dos criterios bsicos'

()*!#+e*to !e" $%o'eo '%o+#to/%&i'o, lo que conduce a los tipos de cromatografas

(o%+# !e %e#"i0#% e" $%o'eo '%o+#to/%&i'o , es decir, lo que constitu!e las distintas tcnicas

cromatogrficas


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Ti$o !e '%o+#to/%#1#:

-i es un slido, cabe distinguir entre'

C%o+#to/%#1# !e #!o%'i,*' El slido adsorbe al componente que inicialmente estaba en fase mil )liquida o

gaseosa* );uerzas de


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-i es un fluido supercrtico, )fluido calentado a una temperatura superior a la temperatura crtica, pero

simultneamente comprimido a una presin ma!or que su presin critica*, se trata de la cromatografa de fluidos

supercrticos )C;-*, que puede ser de particin o de adsorcin.

T3'*i'# '%o+#to/%&i'#:

-egn la forma de llear a cabo la separacin cromatogrfica, es decir, segn el dispositio utilizado

para conseguir entre la fase mil ! la estacionaria, cabe distinguir dos tipos de tcnicas cromatogrficas' en

columna ! plana.

C%o+#to/%#1# e* 'o")+*#' -e utiliza un tubo cilndrico, en cu!o interior se coloca la fase estacionaria! a su tras se +ace pasar la fase mil. El flu#o de la fase mil )liquido o gas* a tras de la estacionaria se

consigue' 2*por presin, >*por capilaridad, 6* por graedad.

Es de destacar que en la actualidad, aunque incorrectamente, el trmino de cromatografa en columna

suele aplicarse a la cromatografa liquida para distinguirla de la cromatografa plana !a que, obiamente la

cromatografa de gases solo puede realizarse en columna.

C%o+#to/%#1# $"#*#' La fase estacionaria esta colocada en una superficie plana que en realidad es

tridimensional, aunque una de sus dimensiones es mu! reducida, por lo que puede considerarse bidimensional.

-e diide en dos tipos generales'

Cromatografa en papel' en la que el papel acta como soporte de la fase estacionaria )cromatografa de

particin*.

Cromatografa en capa fina: en la que un slido acta como fase estacionaria )cromatografa de

particin*, se extiende en una capa delgada sobre una placa, generalmente de idrio.

El flu#o de la fase mil puede conseguirse de dos formas' 2* por capilaridad )cromatografa +orizontal !

ascendente* ! >* por capilaridad ! graedad )cromatografa descendente*. En la cromatografa plana queda

excluido el uso de un gas como fase mil, por lo que sta siempre es lquida.

CROMATOGRA(4A 5LANA'


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La cromatografa plana es un tipo de cromatografa liquida en la que la fase estacionaria esta extendida

sobre la superficie de un plano ! la fase mil flu!e a tras de ella. La fase mil siempre es un lquido,

mientras que la fase estacionaria puede ser un lquido soportado en un slido )cromatografa de particin* o un

slido solente )cromatografa de adsorcin, cambio inico o exclusin*. El flu#o de la fase mil se produce'

5o% '#$i"#%i!#! )cromatografa +orizontal ! ascendente*

5o% '#$i"#%i!#! 6 /%#ve!#! )cromatografa descendente*

Esta clase de cromatografa es considerada la ms simple de todas las tcnicas cromatogrficas. La

diferencia principal con la cromatografa en columna es de tipo tcnico, es decir, difieren en la forma de soportar

la fase estacionaria. En lo que se refiere al fenmeno en que se fundamenta la separacin, es el mismo para

ambas tcnicas. En la cromatografa plana, la disolucin de la muestra a separar se sita sobre el plano que

contiene la fase estacionaria en forma de manc+a, o a eces de banda, a corta distancia de uno de los extremos de

dic+o plano. /na ez seca la manc+a o banda, el extremo del plano prximo a la misma se pone en contacto con

la fase mil, manteniendo todo el sistema cromatogrfico en una cmara cerrada. La separacin se produce por

migracin diferencial de los componentes de la muestra en la direccin en que se muee la fase mil.

?eneralmente, a diferencia de la cromatografa en columna, en cromatografa plana el analito no

abandona el lec+o cromatogrfico, de forma que el proceso se detiene cuando la fase mil +a alcanzado una

determinada zona del plano.

Cabe distinguir dos tipos de cromatografa plana' En papel )CP* ! en capa fina )CC;*.

La cromatografa en papel tuo su mximo desarrollo en, os a7os cincuenta pero en la actualidad se

encuentra prcticamente eclipsada debido a la ma!or rapidez, eficacia ! ersatilidad de la cromatografa en capa

fina. &proximadamente solo el @A de las publicaciones sobre las distintas tcnicas cromatogrficas se dedican a


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la cromatografa en papel. En esta tcnica, la celulosa acta como soporte de la fase estacionaria que suele ser

agua )cromatografa de particin*. o obstante, tambin existen en el comercio papeles impregnados ).i. como

gel de slice o almina, con silicona para separaciones en fase inertida, con cambiadores ionicos* o tratadas

qumicamente ).i. grupos cambiadores incorporados al esqueleto polimrico de la celulosa*, que amplan la

aplicabilidad de esta tcnica.

E* '%o+#to/%#1# e* '#$# i*#, un slido, sorbente o soporte de la fase estacionaria, se extiende en forma de

capa sobre el plano de una superficie rgida, normalmente una capa de idrio o polietileno, de forma que la fase

mil flu!e a tras del mismo. (ependiendo de las caractersticas del slido utilizado, la cromatografa ser departicin, adsorcin, cambio inico o exclusin.

Basta +ace relatiamente poco tiempo, la )CC;* era considerada una tcnica cualitatia simple ! rpida,

para separar mezclas no demasiado comple#as, pero su aplicabilidad cuantitatia resultaba una pobre alternatia

frente a otras tcnicas cromatogrficas como la CL&0. -in embargo, actualmente, debido a los cambios

introducidos en esta tcnica, en lo que se refiere a la calidad de los solentes, equipos para aplicar ! la muestra !

sistemas de deteccin, el inters por la CC; +a uelto a renacer, siendo considerada una tcnica til para separar

! determinar cualitatia ! cuantitatiamente mezclas comple#as a niel de trazas. Estos cambios +an lleado a

modificar el nombre de la tcnica, denominada cromatografa en capa fina de alta resolucin )CC;&0 o BP$LC

en la bibliografa inglesa*, al igual que ocurri cuando se me#oro la capacidad de resolucin de la cromatografa

liquida en columna, pasando a denominarla cromatografa liquida de alta resolucin )CL&0 o BPLC*

La cromatografa en capa fina de adsorbentes se +a me#orado )-ta+l ! altenbac+D 2352* usandosustancias pulerizadas que se ad+ieren al idrio. Esto +a permitido usar otros soportes con diferentes

propiedades, por e#emplo slice ! 1ieselgu+r. -e dispone de aparatos para recubrir placas de idrio para la CC;,

pero a+ora se estn usando ampliamente placas de idrio pre recubiertas, pelculas plsticas rgidas ! +o#as

delgadas de aluminio, existentes en el comercio. La CC; es mas sensible, adaptable ! rpida que la

cromatografa en papel ! las separaciones cromatogrficas son ms eficientes ! pueden ser semicuantitatias.


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-e pueden preparar o adquirir en el comercio placas que no contengan materia orgnica ! produciendo la

isualizacin de las manc+as por carbonizacin con acido sulfrico. Puede ser mu! efectia la isualizacin ba#o

luz /< despus de +aber rociado la placa con un reactio fluorescente, cuando los compuestos que se +an

separado destru!en o modifican la fluorescencia. La CC; es el mtodo mas barato ! a menudo el me#or para

aislar e identificar componentes menores de los alimentos. El componente separado puede ser raspado de la

placa, extrado del material de sta ! despus sometido a anlisis por espectrometra o por cromatografa gas F

liquido. La CC; puede ser totalmente cuantitatia, como en la determinacin de acido erucico. -e cuenta con

una reisin reciente de la cromatografa en capa fina.

"s recientemente se +a aplicado la tecnologa usada en la preparacin del empaque con microparticulaspara columna en la cromatografa liquida a alta presin a la CC; introduciendo la llamada Cromatografa en

Capa ;ina &lta Presin )BP$LC* )CC;&P* . -e cuenta con placas pre recubiertas para CC;&P que presentan

resolucin ! sensibilidad ms eleadas que las placas normales. Estas placas requieren cargas menores de la

muestra ! se pueden realizar ms pruebas por placa con menores corridas de desarrollo )64 a 54 mm* ! los

anlisis son mas rpidos. La alta resolucin de los geles de slice con microparticulas que se usan, posibilitan la

CC; cuantitatia directa. Ba aparecido una reisin

El uso de la cromatografa en capa fina o de la electroforesis son adecuados para aeriguar el nmero !la cantidad relatia de los diferentes aminocidos presentes en una muestra )anlisis cualitatio*, aunque para los

anlisis cuantitatios es necesaria la cromatografa de gases o un analizador de aminocidos.

/na importante aplicacin de la cromatografa en capa fina es la de serir como gua para el desarrollo

de las condiciones ptimas para realizar separaciones por cromatografa de lquidos en columna. Proporciona

una idea rpida de los aminocidos ma!oritarios existentes en la muestra. Las enta#as de este procedimiento son

la rapidez ! el ba#o coste de los ensa!os experimentales. (e +ec+o, algunos cromatografistas son de la opinin

de que los ensa!os en capa fina deberan preceder siempre al uso de la columna.

En la cromatografa de papel se pueden aplicar grandes olmenes de muestra, lo que permite la elucin

posterior de un aminocido en particular para su posterior purificacin ! anlisis, factor que tiene gran

importancia en la identificacin de un constitu!ente desconocido de la muestra.


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&ntes de la realizar la cromatografa, es necesario eliminar las sustancias que interfieren, tales como

protenas, carbo+idratos ! sales, lo que puede +acerse con una resina de intercambio inico. Los aminocidos

retenidos pueden eluirse a continuacin a7adiendo a la columna un peque7o olumen de amoniaco ! laando

despus con agua destilada. La separacin de los aminocidos se basa en que stos se reparten de modo

diferencial entre la fase mil ! la fase estacionaria.

?eneralmente se realizan por el procedimiento ascendente' introduciendo el borde inferior de la placa

cromatogrfica en el elu!ente que ser succionado por accin de las fuerzas capilares del recubrimiento de la

superficie del la placa.

La identificacin de un aminocido se realiza comparando los alores de 0f )factor de retraso' cociente

entre la distancia recorrida por el compuesto desde el origen ! la distancia recorrida por el solente desde el

origen*, con otros tomados como referencia, debindose utilizar al menos tres sistemas de disolentes distintos

para establecer su identidad con un cierto grado de seguridad.

La naturaleza de los aminocidos es un factor importante a la +ora de elegir un disolente, !a que los

diferentes solentes pueden permitir una me#or resolucin de los componentes cidos, bsicos o neutros. En

general, aumentando la proporcin de agua en el disolente se incrementan todos los alores de 0f e

introduciendo peque7as cantidades de amoniaco aumentan los alores del factor de retraso de los aminocidos

bsicos. &lgunos disolentes contienen compuestos nocios, por e#emplo el fenol, lo que restringe su uso

rutinario.

La composicin qumica del disolente puede tambin limitar el rango de reactios de localizacin que

pueden aplicarse satisfactoriamente. Por e#emplo, el cido sulfanlico no puede utilizarse con disolentes

fenlicos.

El poder de resolucin de la cromatografa de capa fina puede aumentarse empleando tcnicas

bidimensionales, o sea, utilizando dos disolentes distintos. -e aplica una cantidad de muestra ma!or que la

utilizada generalmente para la separacin cromatogrfica de una dimensin )aproximadamente el triple* en una

esquina del papel o placa ! se +ace correr en una dimensin. Entonces el cromatogramas se seca completamente


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al aire, se gira un ngulo de 34G ! se desarrolla con el segundo solente. $ras un nueo secado, se sumerge en el

reactio de localizacin elegido. En la cromatografa de dos dimensiones, la composicin de los dos disolentes

es la que determina el orden en que debe utilizarse.

Las separaciones bidimensionales permiten la resolucin de un gran nmero de aminocidos presentes

en una muestra, !a que los que tienen una moilidad similar en la primera dimensin se separan en la segunda.

Esto es mu! til en la deteccin de los componentes que estn en mu! ba#a concentracin ! pueden quedar

enmascarados por otros compuestos que tengan una concentracin alta cuando se utiliza la cromatografa en una

dimensin.

A$"i'#'i,* !e "# +)et%#

Los productos a examinar se disolern, cuando sea posible, en un disolente orgnico que tenga un

punto de ebullicin lo suficientemente ba#o para que se eapore despus de la aplicacin, lo ms comn es usar

acetona. ;recuentemente se emplean disoluciones al 2A, de manera que al aplicar > Hl resulta en la carga >4 Hg

de producto slido. "uc+os reactios de reelado llegan a detectar 4.2 Hg de materialD por esto con esta carga

puede llegarse a obserar un IA de impurezas.

Existen una gran ariedad de micropipetas ! micro#eringuillas para realizar el proceso de siembra de la

muestra a analizar. $ambin pueden usarse tubos capilares. El proceso de siembra se realiza tocando con la punta

del capilar )micropipeta, etc* sobre la placa preparada. (e#ando una distancia al borde inferior de un centmetro

aproximadamente. El punto de aplicacin de la muestra se denomina toque.

/na ez colocado el toque se de#a secar para eaporar el disolente, de forma que en la placa solo

quedar la muestra a analizar.

E"e''i,* !e" e")6e*te

La eleccin del elu!ente depende del componente que se a a separar ! del material en que la separacin

se llea a cabo. /n mtodo que se emplea para la seleccin del elu!ente es una cromatografa en capa fina con

distintos disolentes ! unas muestras patrn.

Principales elu!entes en orden creciente de polaridad'


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Eter de petrleo. Eter dietlico. Ciclo+exano. &cetato de etilo. $etracloruro de carbono. Piridina. Jenceno.

Etanol. Cloroformo. "etanol. (iclorometano. &gua. Kcido actico.

compuestos cancergenos.

En la eleccin del elu!ente influ!en arios factores'

Precio. Pureza. o utilizar mezclas de elu!entes )reproducibilidad*. o utilizar compuestos mu! oltiles. Eitar

que contengan trazas de metales )catalizadores*. La eleccin del elu!ente se realiza de forma emprica. Ba! que

estudiar la polaridad del componente ! probar con elu!entes cada ez menos polares.

a* $oque de la muestra sin aplicar ningn elu!ente.

b* &plicando un elu!ente poco polar.

c* &plicando un elu!ente ms polar.

&l aplicar en primer lugar elu!ente poco polares, podemos seguir utilizando la misma placa para aplicar otros

elu!ente ms polares, +asta dar con el ms apropiado.

tra tcnica para realizar la eleccin del elu!ente consiste en sembrar arias muestras distanciadas

suficientemente, ! aplicar con un tubo capilar distintos elu!ente sobre el centro de cada muestra. Esto permitedesarrollar cada elu!ente radialmente por capilaridad, de forma que se aprecie el elu!ente con el cual la

separacin se realiza de una manera ms eficaz. la cromatografa

De#%%o""o !e "# '%o+#to/%#1#

El desarrollo de los cromatogramas en capa fina se realiza normalmente por el mtodo ascendente, esto es, al

permitir que un elu!ente ascienda por una placa casi en ertical, por la accin de la capilaridad. La cromatografa

se realiza en una cubeta. Para conseguir la mxima saturacin posible de la atmsfera de la cmara, las paredes

se impregnan del elu!ente.?eneralmente el elu!ente se introduce en la cmara una +ora antes del desarrollo, para permitir la

saturacin de la atmsfera. El tiempo de desarrollo, por lo general, no llega a los 64 minutos. El tiempo de una

cromatografa cualitatia suele ser de un par de minutos, mientras que el tiempo de una cromatografa

preparatia puede llegar a un par de +oras.


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Las placas pueden desarrollarse durante un tiempo prefi#ado, o +asta que se alcance una lnea dibu#ada a

una distancia fi#a desde el origen. Esto se +ace para estandarizar los alores de 0;. ;recuentemente esta distancia

es de 24 cm.D parece ser la ms coneniente para medir alores de 0;. (espus del desarrollo, las placas pueden

secarse rpidamente con una corriente de aire caliente.

La me#or posicin de desarrollo para un componente es el punto medio entre el origen ! el frente del

elu!ente, !a que permite separar las impurezas que se desplazan con ma!or ! menor elocidad. El frente del

elu!ente nunca debe llegar a tocar el borde de la placa.

Lo'#"i0#'i,* !e )t#*'i#

-i los compuestos separados no son coloreados es necesario reelar la posicin de dic+os compuestos, para elloexisten dos tipos de mtodos'

M3to!o 7)1+i'oConsisten en realizar una reaccin qumica entre un reactio reelador ! los componentes

separados, para ello se puleriza la placa con los reactios reeladores.

?eneralmente se utiliza como reactio reelador !odo, el cual forma comple#os coloreados con los componentes

orgnicos )con tonos amarillo8marrn*, pero las manc+as desaparecen con el tiempo con lo que es coneniente

se7alar las manc+as aparecidas.

tro reactio reelador bastante utilizado es el cido sulfrico, que reacciona con los componentes

orgnicos produciendo manc+as negras.

$ambin es utilizado el permanganato potsico, que de#a unas manc+as de color amarillo. El tama7o de las

manc+as no est relacionado con la cantidad de componente separado.

&dems de estos reeladores generales, existen otros especficos'

>,@ 8 dinitrofenil+idracina )para alde+idos ! cetonas*.


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&lgunos compuestos poseen cierta fluorescencia )aunque no es normal* con lo que pueden ser detectados

directamente en una lmpara de ultraioleta.

Co*t#*te R 8 R

La constante 0; )0atio of ;ront* es simplemente una manera de expresar la posicin de un compuesto sobre una

placa como una fraccin decimal, mide la retencin de un componente. -e define como' 0;M (istancia de la

muestra desde el origenN(istancia del elu!ente desde el origen

La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de la manc+a, los clculos

se simplifican si el denominador es 24. Para que los 0; sean reproducibles deben ser fi#adas una serie decondiciones )Espesor de la placa, fase mil, fase estacionaria, cantidad de muestra*. El mximo alor de 0; que

se puede alcanzar es de 2, lo ideal es un 0; entre 4.II ! 4.O.

Para aeriguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la misma placa ! se desarrolla con

arios elu!ente. /na ez desarrollados se calculan los 0; ! si son distintos, puede deducirse con toda seguridad

que no se trataba del mismo compuesto. Por el contrario si los 0; son iguales los compuestos pueden ser iguales

o no serlo.

-i se sospec+a que dos compuestos son mu! parecidos se elu!en sobre la misma placa con el mismo elu!ente u

otros de menor polaridad, +asta apreciar una separacin mnima. En este caso no se pueden usar reeladores

qumicos, !a que alteraran los compuestos, sino indicador ultraioleta.

$ambin se puede operar de la manera siguiente' -e selecciona un compuesto )*, que tenga una

posicin de desarrollo conenienteD todos los dems compuestos sobre la placa se relacionan con ste. (e esta

manera se tiene el , 0 , !a que' 0xM (istancia recorrida por el compuesto de referencia)*N(istancia recorrida

por el elu!ente.

5%o'eo !e A!o%'i,*

La muestra aplicada en la capa es adsorbida en la superficie del material por la accin de fuerzas

electrostticas )fuerzas de


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capa es expuesta a un flu#o por accin capilar, se inicia una competencia de enlaces entre los sitios actios del

adsorbente ! la sustancia con el solente.

A!o%be*te

Los adsorbentes ms utilizados en la Cromatografa de Capa ;ina son'

-ilica gel )se utiliza en el Q4A de las separaciones*

Rxido de &luminio &lmina )cida, neutra bsica*

$ierra -ilcea ieselgu+r

Celulosa )atia o micro8cristalina*

Poliamidas

Estos adsorbentes deber tener las siguientes caractersticas'

$ama7o de Partcula

o Volumen de Poro

o Dimetro de Poro

o rea Superficial

Bomogeneidad

Pureza

5%e$#%#'i,* !e "# 5"#'# C%o+#to/%&i'#

-e usan como soporte del adsorbente lminas de'


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ormal

(oble Compartimiento -nd%ic+

Borizontal


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'luorescencia con (uenchin*(

III.- MATERIALES 8 M9TODOS

"ateriales'

@ placas de cromatografa

> asos de precipitado de 244ml

> Placa Petri

2 probeta de 24 ml


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Para la realizacin de los capilares, se tomar una arilla de idrio de unos 2I cm

aproximadamente, esta ser calentada en un mec+ero Junsen +asta q se reblandezca la seccin que estamos

calentando. Llegado a este punto, apartamos la arilla de la llama ! rpidamente estiramos axialmente.

Re#"i0#'i,* !e "# '%o+#to/%#1# e* '#$# i*#:

En este apartado se realizaran @ placas de cromatografa @VI x I cm, las cuales solo se podrn

coger por los bordes ! nunca tocar la parte de celulosa )la blanca*, porque ello acarreara errores en la medicin.

/na ez obtenidas las placas, marcamos a lpiz una lnea a 2 cm de la base. -obre esa lnea

marcamos O puntos, donde se depositaran con los capilares peque7as cantidades de las muestras.

En los asos de precipitado, que actan como tanque de elucin, se pondrn las disoluciones.

/tilizaremos @ disoluciones de acetato de etilo )&e* ! +exano )Bex*, cu!as composiciones sern del >4, @4, 54 !

Q4 A de &eNBex. -olamente utilizaremos I ml de cada disolucin, la cual no debe sobrepasar la lnea dibu#ada a

lpiz.

;inalmente se reelarn las placas usando dos agentes reeladores'

Reelador fsico, usaremos una lmpara de ra!os /


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IV.- RESULTADOS

Para el clculo del factor de retencin, 0f, se usar la siguiente expresin'

0f M distancia recorrida por el compuestoD distancia recorrida por el disolente

-e tomar como distancia del compuesto la distancia comprendida entre la lnea trazada donde se +a

depositado el compuesto ! el centro de la manc+a.

5"#'#

Site+# e")6e*te:>4A &eNBex

Dit#*'i# %e'o%%i!# $o% e" !io"ve*te:6I mm

5#t%

,*

Re'o%%i!o

;++ 2O 4.@QI -

i 0o#o

&cetoacetato

de etilo

6 > 4.4IO -

i O 4.OO2 -

i Tncoloro benzofenona

5"#'# =


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Site+# e")6e*te:@4A &eNBex

Dit#*'i# %e'o%%i!# $o% e" !io"ve*te:65 mm

5#t%

,*

Re'o%%i!o

;++< R

U

V Co"o% No+b%e

2 64 4.Q66

o &zul "entol

> >5 4.O>> -

i 0o#o

&cetoacetato

de etilo

6 3 4.>I4 -

i


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5"#'# ? Site+# e")6e*te:Q4A &eNBex

Dit#*'i# %e'o%%i!# $o% e" !io"ve*te:6O mm

5#t%

,*

Re'o%%i!o

;++< R

U

V Co"o% No+b%e

2 6@ 4.32Q

o &zul "entol

> 6> 4.Q5@

-i

0o#o

&cetoacetatode etilo

6 >Q 4.OI5 -

i 6 4.5>2 -

i &marillo ;loroglucina

I 6I 4.3@I -

i Tncoloro benzofenona

V.- DISCUSIONES En algunas placas no se e el mentol, esto es debido a que es posible q +a!an +abido otras reacciones las

cuales impiden poder alorarlas.

En el factor de retencin, las distancias +an sido medidas con una regla a simple ista, por lo que los

alores de polaridad no son exactos sino una simple aproximacin.


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VI.- CONCLUSIONES

La tcnica de cromatografa en capa fina )CC;* tiene numerosas enta#as, aparte de ser rpida, sencilla,

barata... tiene tambin la enta#a de utilizar poca cantidad de muestra.

Las muestras problemas P2 ! P> son mezclas de muestras patrn, siendo P2 una mezcla de floroglucina

! mentol, ! P> una mezcla de Pirogalol ! Jenzofenona. Esto lo +emos aeriguado gracias a las muestras

patrn, !a que al ser las muestras problema mezclas entre ellas, al meterlas en el tanque de elucin, el

disolente subir por la placa e ir separando la mezcla, de#ando aba#o el patrn ms polar. Luego,

gracias a los reeladores fsicos ! qumicos, se e que esta compuesta la mezcla problema.

& partir del factor de retencin sabremos que sustancia es ms polar, siendo el mas polar aquel que tenga

un 0f menor.

benzofenona W mentol W acetoacetato de etilo W pirogalol W floroglucina

@ 5o"#% - 5o"#%

VII.- BIBLIOGRA(IA +ttp'NN%%%.monografias.comNtraba#osONaminNamin.s+tml

+ttp'NN%%%.relaq.mxN0LSNtutorialesNcromatografiaN$+in.+tm

+ttp'NN+tml.rincondelago.comNcromatografiaX>.+tml
http://www.monografias.com/trabajos7/amin/amin.shtmlhttp://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/Thin.htmhttp://html.rincondelvago.com/cromatografia_2.htmlhttp://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/Thin.htmhttp://html.rincondelvago.com/cromatografia_2.htmlhttp://www.monografias.com/trabajos7/amin/amin.shtml


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+ttp'NN%%%.um.esNbbmbiN&!udas(ocentesNPracticasN"edicinaNPracticasLaboratori

oNPractica4I.+tm

VIII.- ANEOS

C#%#'te%1ti'# 6 be*ei'io
http://www.um.es/bbmbi/AyudasDocentes/Practicas/Medicina/PracticasLaboratorio/Practica05.htmhttp://www.um.es/bbmbi/AyudasDocentes/Practicas/Medicina/PracticasLaboratorio/Practica05.htmhttp://www.um.es/bbmbi/AyudasDocentes/Practicas/Medicina/PracticasLaboratorio/Practica05.htmhttp://www.um.es/bbmbi/AyudasDocentes/Practicas/Medicina/PracticasLaboratorio/Practica05.htm


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Y Estndares de calidad estrictos que garantizan un niel consistente de resolucin, precisin !

reproducibilidad

Y &pto para el proceso de arias muestras ! estndares simultneamente ba#o condiciones idnticas.

Y &mplio rango de qumica para responder a sus necesidades

Y Preparacin de muestra simplificada en placas desec+ables

Y Compatibilidad entre fase mil sin necesidad de detector

Y (isponible con o sin indicador fluorescente

cromatografia en placas

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