cual ves mejor? - uab barcelona · 2 micrococcus luteus mkta 9341, excelente, colonias rojas en 48...

Recuento total en alimentos (FIL,IDF,AOAC,APHA,ICMSF), diferenciando las colonias (incluso las más diminutas)

de las partículas y del medio

Con este novedoso medio de MICROKIT, distinguirá a simple vista las colonias, rojas, de las partículas de muestra y del medio, agilizando los recuentos sin desgastar su vista.

El color de las colonias de aerobios es rojo, independientemente de las especies.

Otros medios de recuento total con cromógeno rojo termoestable: PCA-MILK (ISO4833) cromogénico para recuento en productos lácteos. Yeast Extract Agar (Agar Nutritivo ISO 6222) cromogénico para recuento en aguas.

Mas sensible que el PCA clásico y demás medios de recuento, ya que el color permite vermuy bien las colonias, incluso las más diminutas y distinguirlas de burbujas y de partículas.

El color no afecta a ninguna prueba de identificación posterior que quisiera realizar.

El cromógeno no interfiere en el crecimiento de ninguna cepa, si bien algunas levaduras ylactobacilos crecerán sin viraje a rojo.

Como en el PCA clásico, sólo se necesitan disolver 19 g de medio en 1 litro de agua destiladay autoclavar. ¡Y a un precio prácticamente idéntico! el color final del medio es blanco-crema.

Cual ves mejor?

PLATE COUNT AGAR (PCA)CROMOGÉNICO

Todos ellos también disponibles en medios preparados para fundir.

: (+34) 91 897 46 16 - Fax: (+ 34) 91 897 46 41 Apartado 44 - 28210 Madrid - España

www.microkit.es E mail: [email protected] http://www.laboratoriosmicrokit.blogspot.com

En el pca cromogénico las colonias crecen rojas, resaltando tan evidentes que ya se puede hacer un recuento estimado en las primeras 18h!!!

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PLATE COUNT AGAR (PCA) CROMOGÉNICO Recuento total en alimentos (FIL,IDF,AOAC,APHA,ICMSF), diferenciando las colonias, incluso las más diminutas, de las partículas y del medio

COMPOSICIÓN Triptona 5,0 g Extracto de Levadura 2,5 g Glucosa 1,0 g Agar-agar 10,5 g Cromógeno termoestable c.s. (Fórmula por litro) pH final: 7,0 ± 0,2

PREPARACIÓN Disolver 19 g de medio en 1 litro de agua destilada. Calentar hasta ebullición, agitando para su completa disolución. Repartir en tubos o frascos. Autoclavar a 121 ºC durante 15 min o preferiblemente a 116°C durante 15 minutos. No sobrecalentar ni mantener fundido mucho tiempo. Refundir sólo una vez. El color final del medio es blanco-crema. A veces, por sobrecalentamiento, adquiere un tono rosado que retorna al crema cuando se vuelve a enfríar el medio y no afecta los resultados. PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. DESHIDRATADO CODIGO: BCD510

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,...). DESHIDRATADO: Polvo grueso, Crema PREPARADO: Estéril, Crema EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2 24-48 h a 37 ºC o mejor 72 h a 30 ºC, aplicando el método ISO 4833, ISO 2293, o el indicado en el Manual MICROKIT: E. coli MKTA 25922, Excelente, colonias rojas, PR >70% en concreto 76-163 % * de colonias respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en TSA. Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Excelente, colonias rojas, PR >70% en concreto 81-145 % * de colonias respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en TSA. Bacillus subtilis MKTA 6633, Excelente, colonias rojas, PR >70% en concreto 93-107 % * de colonias respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en TSA.

Con este novedoso medio de MICROKIT,

distinguirá a simple vista las colonias, rojas,

de las partículas de muestra y del

medio, agilizando los recuentos sin desgastar su

vista.

Apartado de Correos / P.O. Box 44 28210-Valdemorillo (Madrid, Spain)

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Empresa Certificada bajo Norma ISO 9001 desde 1997

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Micrococcus luteus MKTA 9341, Excelente, Colonias rojas en 48 h, crecen mucho más rápido y mejor que en TSA, y mejor a temperatura ambiente. Enterococcus faecalis MKTA 29212, Excelente, colonias rojas, PR >70% en concreto 171 % *de colonias respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en TSA. Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Excelente, colonias rojas. * Esta variabilidad de la productividad depende de la composición y carga de la flora acompañante inoculada. Las colecciones TIPO prohiben el uso de su referencia por lo que indicamos la nuestra, directamente trazable a la colección TIPO. Dos años de participación en ensayos intercomparativos de alimentos, con 10 matrices alimentarias diferentes, demuestran que no existen diferencias en los recuentos en contra del PCA cromogénico de MICROKIT respecto a los PCA standard, sino al revés; ejemplo: en hamburguesas, recuento medio en PCA clásico 9,0 x 104, en PCA cromogénico 2,6 x 105 (ya que el color permite ver muy bien las colonias diminutas), otros medios (Nutrient Agar, R2, LPT Agar, YEA... no indicados para matrices alimentarias) 8,5 x 103. Comparando la recuperación de diferentes microorganismos en PCA cromogénico, fabricado con diferentes agares, observamos que el Agar Europeo MICROKIT es el que mejores resultados obtiene, con diferencias significativas de 1 log (36-39 veces más colonias), respecto a los demás agares y respecto a TSA, y por ello es el que empleamos, para máximas recuperación y exactitud: Cepa con concentración certificada

en TSA PCA cromogénico

fabricado a partir de PCA de otra marca de reconocido prestigio

PCA cromogénico fabricado con agar

americano MICROKIT

PCA cromogénico fabricado con agar

Europeo MICROKIT

E. coli 1.79 x 103 6x103 (335 %) 1x104 (559 %) 1.8x104 (1000 %) Klebsiella oxytoca 7.10 x 103 6x103 (84,51 %) 1x103 (14 %) 1.7x104 (239 %) Shigella sonnei 1.37 x 103 7x103 (511 %) 7x103 (511 %) 1.6x104 (11.678 %) Enterococcus faecalis 2.46 x 103 1x104 (406 %) 6x103 (244 %) 1.5x104 (6.098 %) Candida albicans 3.19 x 103 5x103 (157 %) 8x103 (251 %) 1.8x104 (564 %) TOTAL RECUENTO 1,59 x 104 298 % respecto a TSA 316 % respecto a TSA

106 % respecto al anterior

3.916 % respecto a TSA3.694 % respecto a los

anteriores

PRESENTACIÓN: TUBOS 20 ml, FRASCOS 100 ml, MEDIO DESHIDRATADO. Recuento total standard de bacterias aerobias en alimentos, productos farmacéuticos, cosméticos y otros productos. Las colonias crecen en distintos tonos del rojo: rosa, naranja, purpura.... sobre el tono crema del medio (excepto ciertos acidolácticos y ciertas levaduras, que crecen con colonias blancas, sin viraje, por lo que este medio los distingue de los aerobios). El color no afecta a las pruebas de identificación posteriores que quisiera realizar.

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS Inocular 1 ml de muestra y su serie de diluciones decimales, en masa. Incubar a 30 ºC aproximadamente durante 48 horas. Con flora psicotrofa, incubar a 6 ºC aproximadamente durante 10 días y con flora termófila, incubar a 55 ºC aproximadamente durante 48 horas. Contar todas las colonias. Esta fórmula, con menos agar, aumenta la sensibilidad del medio frente a los aerobios más lábiles, al permitir una mejor oxigenación del fondo. Este medio está diseñado para siembra en masa. Si desea sembrar en superficie, añada 3-5 g/l de Agar-Agar (BCB006), o utilice 25-27 g/l de este mismo medio. Para minimizar la desecación en muestreos de aire y superficies, o para siembra en Spiral, añadir 2 gotas de antiburbujas (SBL001) por cada litro de agua, antes de añadir el medio y antes de autoclavar. Para contar por separado las bacterias, de las levaduras y mohos, añadir a un duplicado, enfriado a 45°C, 0,05-0,5 g/l de Cicloheximida (SKM200): En la placa con CEX sólo crecerán las bacterias y en la placa sin CEX , la suma de bacterias + levaduras y mohos. El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura. Diseñado en Enero 2007, revisado en Nov, 2014

Salmonella

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Salmonella

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CHE-Gal es metabolizado por la -galactosidasa, produciendo colonias negras en presencia de hierro, como ocurre en la mayoría de Enterobacterias. es hidrolizado por produciendo colonias verde-azuladas. El medio está basado en la fórmula DCA (Desoxicolato Citrato Agar).

X -gal Salmonella

La mayoría de medios para aislamiento de Salmonella son poco selectivos y/o diferenciales, provocando un inmenso gasto en confirmaciones de colonias sospechosas que luego resultan ser negativas. Con una asombrosa especificidad, M C O I C R M A M reduce drásticamente la necesidad de confirmar falsos positivos, ahorrando trabajo y grandes costes en medios adicionales, galerías bioquímicas y pruebas inmunológicas.

I R K T®H O OS L

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Los resultados son excepcionalmente mejores en Chromosalm que en cualquier otro medio clásico y moderno, incluidos otros medios cromogénicos con sustratos que colorean las presuntas Salmonella de rojo, pero que muestran demasiados falsos positivos, sobre todo con Proteus y Citrobacter.

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Disolver 36'5 gramos de medio M C O I C R M A M en 1 litro de agua bidestilada, calentar hasta ebullición. Esterilizar manteniendo la ebullición durante 1 minuto.

I R K T® H O OS L

MODO DE EMPLEO

PRESENTACIÓN:

* Envases de 100 g. Ref: .* Frascos preparados de 100 ml, para elaborar 5-6 placas. Ref: . * Tubos preparados, para elaborar 1 placa. Ref: .

DMT500RPL012

TPL402

Medio cromogénico para aislar colonias de de forma diferencial y específica.

EXCLUSIVO de MICROKIT Salmonella

M C O I C R M A M A AI R K T® H O OS L G R

AHORRE TIEMPO Y CONFIRMACIONES....¡NO DEJE QUE SU DINERO

SE ESCAPE!

Validado con 250 muestras naturales de todo tipo de aguas y alimentos, resultando la mayor sensibilidad (del 89,47%), especificidad (del 98,45 %) y eficiencia (del 96,40 %) de todos los medios de aislamientos selectivo de Salmonella.

SENSIBILIDAD DE AGARES DE AISLAMIENTO SELECTIVO

DE SALMONELLA

ESPECIFICIDAD DE AGARES DE AISLAMIENTO SELECTIVO

DE SALMONELLA

0.00%

50.00%

90.00%

SENSIBILIDAD FALSOS NEGATIVOS

89.47%

62.96%

47.22%

10.53%

37.04%

52.78%

0.00%

50.00%

90.00%

ESPECIFIDAD

FALSOS POSITIVOS

60.84%65.38%

73.91%

42.55%

73.47%

98.45%

39.16% 34.62%

26.09%

1.55%

57.45%

26.53%

¡No es necesario autoclavar ni añadir suplementos!

CHROMOSALMXLDBGA

BGA

CHROMOSALM

XLD

SS Agar

Hektoen

Magenta-Gal


www.microkit.es E mail: [email protected] http://www.laboratoriosmicrokit.blogspot.com

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MICROKIT® CHROMOSALM AGAR Agar cromogénico para Salmonella (Investigación de la Beta-Galactosidasa )

(UNE 34-554:1983, UNE 34-818:1985, EN-12824:1997, UNE-EN ISO 6579:2003) INTRODUCCIÓN Presentamos el esperado medio cromogénico de MICROKIT para aislar colonias del género Salmonella de forma diferencial y específica. Totalmente diferente a los medios cromogénicos de Salmonella de otras marcas, que tienen cromógenos color rojizo mucho menos específicos. Salmonella puede diferenciarse de otras Enterobacterias gracias a su mecanismo para producir alfa-galactosidasa en ausencia de beta-galactosidasa. MICROKIT® CHROMOSALM incorpora dos sustratos cromogénicos, CHE-Gal y X-alfa-gal, que permiten visualizar esta actividad en la misma placa. Efectivamente, CHE-Gal es metabolizado por la beta-galactosidasa, produciendo colonias negras en presencia de hierro, como ocurre en la mayoría de Enterobacterias. X-alfa-gal es hidrolizado por Salmonella produciendo colonias verde-azuladas, claramente distinguibles de las de otras Enterobacterias, negras y de las de otros microorganismos, incoloras. Las reacciones cromogénicas están muy concentradas en las colonias, dejando al medio de su color natural, crema. El resto del medio está basado en la fórmula DCA de Hynes, utilizando desoxicolato sódico y citrato sódico como inhibidores de la flora acompañante. Gracias a todo ello, MICROKIT® CHROMOSALM detecta las cepas enterotoxigénicas de Salmonella (S.enteritidis, S.typhimurium, S.paratyphi...) y también detecta S.typhi, en todo tipo de muestras alimentarias, clínicas, agua...

Muchos medios para aislamiento de Salmonella (incluidos muchos otros modernos medios cromogénicos con Magenta-Gal) son poco selectivos y/o diferenciales, provocando un inmenso gasto en confirmaciones de colonias sospechosas que resultan ser negativas (Proteus, Citrobacter...). Con una asombrosa especificidad (99,7%), MICROKIT® CHROMOSALM reduce drásticamente la necesidad de confirmar falsos positivos, ahorrando trabajo y grandes costes en medios adicionales, galerías

Colonias verdes: Salmonella. Colonias negras: otras Enterobacterias, incluida

Citrobacter. Colonias incoloras: Proteus







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bioquímicas y pruebas inmunológicas: ¡Requiere un 95% menos confirmaciones de colonias que los medios tradicionales!. De este modo, su aparente elevado coste de “medio cromogénico” es sólo un espejismo.

Pero además, con frecuencia, en los medios habituales para Salmonella, los crecimientos abundantes de flora acompañante enmascaran a Salmonella cuando está presente en bajas proporciones. La incidencia de falsos negativos en MICROKIT® CHROMOSALM es también ínfima, ya que la sensibilidad es del 90,5%, obteniéndose un 14% más positivos reales que en los demás medios.

En Enero de 2003, publicación en XIX Congreso SEM Santiago, hemos

validado este medio en un estudio intercolaborativo para 250 muestras naturales de todo tipo de alimentos, aguas y manipuladores, con 6 laboratorios participantes, resultando la mayor sensibilidad (del 89,47%), especificidad (del 98,45 %) y eficiencia (del 96,40 %) de todos los medios de aislamiento selectivo de Salmonella, con gran diferencia respecto a todos ellos. COMPOSICIÓN (BASE Desoxicolato Citrato Agar) Extracto de buey 5,00 g/l Peptonas 5,00 g/l Citrato Sódico 8,50 g/l Desoxicolato Sódico 5,00 g/l Citrato Férrico Amónico0,50 g/l IPTG 0,03 g/l Mezcla Cromogénica 0,38 g/l Agar-agar 12,00 g/l pH final 7'2 ± 0'2

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MODO DE EMPLEO Disolver 36'5 gramos de medio MICROKIT® CHROMOSALM en 1 litro de agua bidestilada a temperatura ambiente (ideal 21-25 ºC). Dejar embeber 10 minutos, calentar hasta ebullición, agitando hasta la total homogeneización. Esterilizar manteniendo la ebullición durante 1 minuto. No autoclavar. No sobrecalentar. Los frascos sólo se pueden refundir una vez. Enfriar rápidamente a 47 ºC y dispensar en placas Petri. Una vez preparadas, las placas pueden mantenerse una semana a 2-8 ºC, en la oscuridad, precintadas para evitar su desecación. Sembrar las muestras clínicas procedentes de caldo Selenito, y las muestras alimentarias procedentes de los medios de pre-enriquecimiento más enriquecimiento habituales (ver ISO 6579 de Salmonella). Incubar 18-24 horas a 37 ºC aproximadamente. LECTURA DE RESULTADOS 24–48 h a aprox. 37°C S. typhimurium MKTN 12190 Colonias verde-azuladas. Recuperación 96,3-200% con respecto a TSA estandarizado (El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas internacionales, trazables a la cepa tipo). Salmonella abony MKTN 6016 Colonias verde-azuladas (alguna cepa, si es beta-galactosidasa positiva, puede crecer con colonias negras o incoloras *). Tamaño 1-2 mm.

Salmonella abony

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E.coli MKTA 25922: Colonias negras (o no crece) Shigella flexneri MKTA 12022: Colonias incoloras (alguna cepa, si es beta-galactosidasa positiva, puede crecer con colonias negras). Tamaño 1-2 mm. Citrobacter freundii MKTA 8090: Colonias negras. Proteus mirabilis MKTA 14153: Colonias incoloras o verde claro con olor a pescado. Tamaño 0,5-2 mm. Klebsiella oxytoca MKTA 13182: Colonias negras, mucosas. Tamaño 1-2,5 mm. Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027: Colonias incoloras o verdes fosforescentes. Tamaño 0,5-1 mm. BIBLIOGRAFÍA Perry, J.D., Ford, M., Taylor, J., Jones, A., Freeman, R., Gould F.K. 1999. A New Chromogenic Agar for selective Isolation of Salmonella spp. J.Clin.Micro. 37: 766-768. *Salmonella are normally alpha-galactosidase positive (green colonies) but beta-galactosidase negative (not black colonies). In the original publication they tested 556 strains of S.enteriditis and all growth green, that is alpha gal positive. Out of the 1022 Salmonella tested after, only 2 were reported colourless: a Braenderup and a Saintpaul. So, it is possible to get an exception but they are very rare. Sanchis, J. y otros 11 autores, 1/2003, XIX Congreso SEM Santiago.: Validación del medio CHROMOSALM mediante un estudio intercolaborativo en los más diversos tipos de matrices. Sanchis, J. 09-2014: XIX Congreso Nacional de Microbiología de los Alimentos. Doble enriquecimiento simultáneo para detección de Salmonella. J. Sanchís. MICROKIT.

PRESENTACIÓN MICROKIT® CHROMOSALM se comercializa en: * Envases 100 g ( para unos 3 litros de medio final), ref: DMT500-. 500 g ref: DMT500 * Frascos hidratados y estériles, para fundir, de 100 ml, ref: RPL012. * Tubos preparados 15 ml para elaborar una placa, ref: TPL402. * Placas preparadas 25 ml (3 meses de caducidad), ref: PPLM55 ATENCIÓN, MÉTODO RÁPIDO PARA SALMONELLA: Uniendo este avance a un enriquecimiento mixto acelerado (mezclando los medios del preenriquecimiento revitalizador y neutralizante: 225 ml Buffered Peptone Neutralizing Water de MICROKIT DMT011+ enriquecimiento selectivo 18 ml SS Broth concentrado [x5] de MICROKIT DMT067) e incubándolos juntos en las 18 h previas; permite la detección fiable de Salmonella en sólo 36 h desde la muestra inicial. Por todo ello, este método acortado es la herramienta que estaban esperando todas las fábricas de productos alimenticios para poder liberar lotes gracias a la detección precoz de este patógeno, que les retrasaba hasta ahora el resultado global del laboratorio microbiológico a 3-5 días. El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura. Documento creado el 9 de Marzo de 2001, actualizado el 30 de Octubre de 2014

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SALMOQUICK Detección rápida y fiable de

INTRODUCCIÓN Salmonella spp. en alimentos

El método ISO 6579 tiene como desventajas la lentitud de obtención de resultados y la no neutralización de los conservantes de la muestra, que conlleva a resultados falsamente negativos. En dicha Norma se realiza un pre-enriquecimiento revitalizador de 25 g de la muestra, 18-24 h a 35-37ºC en 225 ml de Agua de Peptona Tamponada (BPW). Al día siguiente se toma una alícuota y se incuba por duplicado en un post-enriquecimiento selectivo en 10 ml de Rappaport VS Broth y en 10 ml de MK Tetrationato Broth otras 18-24 h. Y de ahí se estría por duplicado, en XLD y en otro medio de elección por el laboratorio, incubando otras 18-24 h. De modo que todas las muestras (incluso las negativas) llevan un mínimo de 3 días (72 h) de demora en la obtención de los resultados presuntivos. Se emplean en total 5 medios, de los cuales uno (Rappaport) es tan selectivo que inhibe muchas cepas de Salmonella, por lo que se ha de usar otro en paralelo (MK Tetrationato). Otro, el BPW, no inactiva los conservantes, ni los metabolitos creados por la flora acompañante, permitiendo la aparición a menudo de resultados falsamente negativos.

SALMOQUICK ha sido diseñado por Laboratorios MICROKIT, basándose en la Norma ISO 6579 pero optimizándola; el método varía, ahorrando un medio y acortando el tiempo de obtención de resultados a la mitad: sólo 36 horas! En este caso se realiza el pre-enriquecimiento revitalizador (e inactivador de conservantes y de metabolitos generados por el resto de la flora acompañante, que podrían interferir en el crecimiento de Salmonella en un sinfín de matrices alimentarias) de 25 g de la muestra en 225 ml de Agua de Peptona Tamponada Neutralizante (BPNW), 2-20 minutos a temperatura ambiente. Se añaden al mismo 18 ml de SS Broth a [x5], se mezcla y se incuba el conjunto 18 h a 35-37ºC, constituyéndose así en un solo paso la revitalización de las Salmonella dañadas, la inactivación de los graves problemas que no contempla la ISO 6579 y el aumento de la selectividad para la multiplicación de las Salmonella presentes. En este medio mixto, las muestras con Salmonella ennegrecen el caldo, por lo que de entrada en las primeras 18h ya tenemos una alerta de posible presencia de Salmonella si el caldo está negro. Pero algunas otras enterobacterias también pueden ennegrecer, por lo que hay que continuar con el segundo paso: Al día siguiente se estría por duplicado, en XLD y en Cromosalm, incubando otras 18h. De modo que las muestras sin crecimientos típicos de Salmonella (colonias negras en XLD y colonias verdes en Cromosalm) son liberadas en sólo 36h.

La validación de SALMOQUICK ha sido realizada con los cuatro medios indicados, y de la marca Microkit. Cualquier variación sobre los medios o la marca invalida nuestra validación

SALMOQUICK es una herramienta simple, rápida y fiable, diseñada especialmente para simplificar y agilizar al máximo el control de alimentos con contaminación por Salmonella, que es uno de los puntos más críticos y que más retrasan la liberación del lote en la industria alimentaria.

SIMPLE: Ahorra un medio de cultivo de dudosa utilidad (Rappaport) y cambia dos medios mediocres (BPW y MK-T Broth) por los más modernos y eficientes (BPNW y SS Broth)

RÁPIDA: De la muestra a la liberación del lote en sólo 36 horas (frente a las 72 h habituales); además alerta de la posible presencia de Salmonella en las primeras 18 h (vira a negro)

FIABLE: Validado en base a la Norma UNE-EN-ISO 16140 por el método de pares frente a la Norma ISO 6579, con inóculos muy bajos de distintas cepas de Salmonella, variada flora interferente, matrices inhibitorias y 100% de eficiencia (ver publicación en bibliografía).

Se presenta de dos formas: como kit preparado y listo para usar y como un conjunto de los 4 medios de cultivo deshidratados necesarios para que el mismo laboratorio se lo pueda preparar.







DESINFECTEST®

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a) SALMOQUICK-Estéril, kit listo para emplear: los 3 medios necesarios para detección rápida de Salmonella (en sólo 36h), en presentación estéril y lista para su uso. 3x20 Tubotes prepesados y estériles BPNW para añadir a 225 ml de agua estéril (Ref: KBB002), 3x20 tubos SS Broth 18 ml [x5], 60 DryPlates-SAL preparadas con Agar Cromosalm. No se incluyen las placas XLD, para no acortar su año de caducidad. No necesita nevera. Conservar en lugar fresco y seco, con una temperatura de entre 5ºC y 25ºC, eso sí, al abrigo de la luz. No congelar. Kit de 60 test, ref: KMT037

b) SALMOQUICK-Iniciación, conjunto de los 4 medios deshidratados necesarios para detección rápida de Salmonella (en sólo 36 h), para que cada laboratorio se lo prepare: 1x 500g BPNW (para hacerse 62 frascos o bolsas Stomacher con 225 ml), 1x500g SS Broth (para hacerse 111 tubos de 18 ml a [x5], 1x500g XLD Agar (para hacerse 522 placas) y 1x100 g Cromosalm (para hacerse 156 placas). En conjunto es mucho más económico (entre 2 y 3 €) que la adquisición de cada uno de los 4 medios por separado, para que el laboratorio se inicie en este método y pueda pedir después por separado los medios conforme vaya necesitando cada uno. Ref: KMT038

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS 1.- Tomar 25 g del alimento en una bolsa Stomacher o en un frasco 2.- Añadir 225 ml de Agua Peptonada Tamponada Neutralizante (Microkit DMT011) 3.- Homogeneizar durante 2 minutos y dejar reposar hasta un máximo de 20 minutos 4.- Añadir 18 ml de SS Broth (Microkit DMT067) a concentración [x5] 5.- Homogeneizar e incubar 18 h a 35-37ºC 6.- Pueden leerse los resultados presuntivos desde las primeras 18 horas: el viraje del caldo a negro es presuntivo de presencia de Salmonella; pero debe confirmarse con el siguiente paso: 7.- Estriar sobre placas de XLD Agar (Microkit DMT142) y de Cromosalm Agar (Microkit DMT500) 8.- Incubar ambas placas 18 h a 35-37ºC 9.- La aparición de colonias negras, rojas o incoloras en XLD, o bien de colonias verdes en Cromosalm, es altamente presuntiva de presencia de Salmonella. Las colonias sospechosas deben confirmarse en laboratorio mediante los kits bioquímicos e inmunológicos habituales (Referencias a elegir: Enterotubos 49578619, Antisueros ZC01, ZC02, PL6100, Látex KMB501, Látex que serogrupa KWD096…). Muchas colonias presuntivas de la mayoría de medios de aislamiento de Salmonella (incluidos la mayoría de medios cromogénicos) acaban siendo confirmadas como Proteus o Citrobacter; esto no sucede en Cromosalm, donde Salmonella crece con colonias verdes, Proteus con colonias incoloras y Citrobacter con colonias negras.

BIBLIOGRAFÍA: Norma ISO 6579: Microbiología de los alimentos para consumo humano y alimentación animal. Método horizontal

para la detección de Salmonella.

Sanchis, J. Doble enriquecimiento simultáneo para detección rápida de Salmonella. XIX Congreso SEM de Microbiología de los alimentos. Zaragoza, X-2014.

El usuario es el único responsable de la destrucción de los microorganismos generados en el interior del kit durante su uso, de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Sumerja en lejía o alcohol, o mejor autoclávelos, antes de desecharlos a la basura. Mantener fuera del alcance de los niños. No ingerir.

Diseñado y fabricado por MICROKIT desde el 27 de Octubre de 2014.

Bolsas Stomacher con 25 g de alimento, 225 ml de BPNW y 18

ml SS Broth [x5] (ver tubo arriba) antes de incubar

1

MICROKIT® MUG PLUS CROMOGENIC AGAR CCA (ISO 9308-1:2014) AGAR CROMOGÉNICO COLIFORMES Y E.COLI S/BOE 31-MARZO-2009 Agar selectivo para la detección simultánea confirmativa de coliformes totales/fecales y E.coli en aguas y alimentos. Medio diseñado por MICROKIT desde 1995, oficial por B.O.E. desde 2009 y por ISO desde 2014. INTRODUCCION Los substratos cromógenicos desarrollados desde los años 90 por los laboratorios BIOSYNTH AG, en concreto Salmon-Gal, X-Glucurónido e IPTG, permiten la detección simultánea de coliformes (colonias rojas) y E.coli (colonias azules) en el mismo medio de cultivo. La acción simultánea de las peptonas seleccionadas en el medio, del piruvato y de los tampones fosfato, garantiza un rápido crecimiento colonial, incluso para los coliformes en estado subletal. El crecimiento de la flora acompañante Gram positiva, queda inhibido gracias al tergitol y a la mezcla de antibióticos Cefsulodina + Vancomicina.

El enzima Beta-D-galactosidasa, característica de los coliformes, actúa sobre el Salmon-GAL provocando la pigmentación roja o rosada en las colonias de coliformes.

E.coli, coliforme Beta-D-glucuronidasa positivo, actúa sobre el Salmon-GAL y sobre el X-Glucurónido (5-bromo-4-chloro-3-indoxyl Beta-D-glucurónido) de modo que sus colonias crecen de color azul. COMPOSICION (g/l) Digerido Enzimático de Caseína ........ 1´0 Extracto de levadura ........................... 2,0 Cloruro Sódico .................................... 5´0 Dihidrógeno Fosfato Sódico.2H2O ..... 2´2 Hidrógeno Fosfato Disódico ............... 2´7 Piruvato Sódico ................................... 1´0 Sorbitol ............................................... 1´0 Triptófano ........................................... 1´0 Tergitol 7 .......................................... 0´15 Salmon-beta-D-Galactósido .............. 0,2 X-beta-G-Glucurónido CHX sal ........ 0´1 IPTG ................................................... 0,1 Agar-Agar E libre de inhibidores ..... 10´0 pH Final: 6´8 ± 0´2

MICROKIT® MUGPLUS: Agar cromogénico para E.

coli (colonias azules -olas-) y demás coliformes (colonias

rosas -surf-). Campylobacter y Shigella crecen con colonias verdes (hierba) y otros Gram negativos con colonias crema (Pseudomonas -montañas-).

Inconfundibles colonias añil, las más típicas de la mayoría de cepas de E.coli







DESINFECTEST®

MUGPLUS

NUTRILINIA

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PLAQUIS® M-IDENT®


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MODO DE EMPLEO Agitar el bote. Disolver 26,5 g en 1 litro de agua destilada, calentando hasta

ebullición. Mantener durante 1 minuto. Agitar hasta su completa disolución. Si se desea, por contar con flora acompañante abundante, añadir asépticamente, cuando el medio se haya enfriado a 55 ºC, 5 mg de Cefsulodina + 5 mg de Vancomicina (total 5 ml de solución estéril MICROKIT SMS400) para aumentar la selectividad del medio y eliminar la flora acompañante Gram positiva. No autoclavar. El medio final es blanquecino. No refundir más de una vez.

En alimentos, la siembra en profundidad elimina los Gram negativos no fermentadores, que en la técnica de Filtración de Membrana para análisis de aguas pueden dar lugar a falsos positivos y además reducir en un 50% la recuperación de los microorganismos diana; para evitarlo, se puede añadir sobre la membrana o sobre la muestra, una segunda capa de medio agarizado, previamente enfriado a 50 ºC. Esto no es tan necesario en aguas potables o poco contaminadas por flora acompañante. LECTURA DE RESULTADOS

E.coli crece en MugPlus Agar con colonias azul oscuro-añil (algunas cepas

azul claro-turquesa, foto abajo) y los demás coliformes con colonias rosa-

fucsia. No confundir E.coli con algunas cepas de Campylobacter, Salmonella o

Shigella, que pueden crecer con colonias esmeralda, aunque también son

indicadoras de problemas a menudo no detectados con otros medios.

3

Tras 18-24 horas de incubación a 35-37 ºC aproximadamente (ó 44,5 ºC

aproximadamente para C. fecales), los resultados son: E.coli: Colonias de azul oscuro a añil, a veces turquesa (Salmon-GAL y X-GLU positivo), que resultan indol positivas. Coliformes: Colonias rosas-rojas (Salmon-GAL positivo) + las azules (E.coli). Otras enterobacterias: Colonias incoloras, excepto cepas como las Salmonella o Shigella Beta-D glucuronidasa positivas, que aparecen de color azul claro a esmeralda. Muchas cepas de Shigella y de Campylobacter crecen con colonias verdes, pero también es del máximo interés que sean detectados, al ser microorganismos patógenos.

Unas pocas cepas de Enterococcus durans crecen con colonias rojas, pero diminutas, y además también indican contaminación fecal del agua. Ciertas cepas de Staphylococcus aureus y de Bacillus crecen con colonias naranjas, pero nunca rosas-rojas. Otras cepas crecen con colonias crema que tampoco se han de tener en cuenta. Las colonias con colores intermedios (violáceo-lila) proceden de ufc mixtas: diluir y repetir el análisis, o resembrar la colonia para aislar colonias puras, o mirar una placa sembrada con una dilución mayor.

Confirme E.coli cubriendo sus colonias con reactivo de Kovacs. Si éste vira de amarillo a rojo-cereza antes de 1 minuto, la reacción es, definitivamente, confirmativa. De forma más definitiva, repicar una colonia azul en Agua de Triptona con Triptófano (MICROKIT BCD129, tubos preparados TPL034), incubar a 44,5ºC durante 6-18h y añadir el reactivo de Kovacs, para confirmar como positivo en caso de viraje de la superficie del tubo a rojo. Color de la colonia Salmon-GAL X-Glucurónido Indol Rto. TSA estandarizado*

E.coli Azul oscuro-añil o turquesa + + + 58-125% ** Citrobacter freundii Rojo-rosa + - - 98-106% Klebsiella oxytoca Lila-Granate + - - >99% Enterobacter cloacae Rojo-rosa + - - 58-104% Salmonella enteritidis Incoloro - - - 29-202% Shigella flexneri Incoloro (azul en superficie) - - - Salmonella MUG+ Azul claro - + - E. coli O157 : H7 Rojo-rosa + - + 230% * El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a cepa tipo. Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al medio). ** En superficie, ya que en masa recupera el 200% más que en superficie Un estudio comparativo independiente (*) de validación cuantitativa entre este medio, otros cromogénicos, Endo y MFC demuestra que MUG PLUS® es el mejor medio de recuento de E. coli en aguas. La validación interna realizada por MICROKIT con centenares de muestras y la revalidación mensual entre Seilagua ®, Seilalimentos y Seilaparfum, lo confirman de rutina para agua y para todo tipo de matrices alimentarias y cosméticas, desde 1998.

PRESENTACION (PARA TODAS LAS NECESIDADES) * Botes de 100 g de medio de cultivo deshidratado en polvo agarizado. Referencia DMT400- * Suplemento voluntario en frasco de 100 ml, con 100 mg de solución estéril de Cefsulodina

+ Vancomicina, para 20 litros de medio (5 ml/l). Referencia SMS400. * Frascos de 100 ml de agar MUG PLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina. Referencia RPL444. * Frascos de 200 ml de agar MUG PLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina. Referencia RPL244. * Tubos de 20 ml de agar MUG PLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina. Referencia TPL400. * Viales 2 ml de caldo MUG PLUS® de MF con Cefsulodina+Vancomicina. Referencia FPL400.

4

* Viales pinchables de 100 ml de caldo MUG PLUS® de MF con Cefsulodina+Vancomicina. Ref. RPL400. * Plaquitas herméticas de Agar MUGLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina. Referencia PPL902 * Placas preparadas de Agar MUGLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina. Referencia PPLM40 * Placas Rodac Envirocount preparadas de Agar MUGLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina. Referencia PPL511 * Placas preparadas de medio deshidratado DryPlates-EC con Agar MUGLUS®. Referencia DPP006

BIBLIOGRAFIA Framptom, e.w., Restaino, l., and Blaszco, n. 1988. evaluation of the b glucoronidase

substrate 5 bromo 4 chloro 3 indolyl bd glucuronide (x-gluc) in 24 hour direct plating method for E.coli. j. food prot. 51: 402-404.

Kilian, m. and Bulow, p. 1976, rapid diagnosis of enterobacteriaceae. i. detection of bacterial glycosidases. acta pathot. microbiol. scand sect. b84: 245-251.

Le Minor, L., and Ben hamida, f. 1962. Avantages de la recherche de la b-galactosidase sur celle de la fermentation du lactose en milieu complexe dans le diagnostic bacteriologique des enterobacteriaceae. Ann. Inst. Pasteur (Paris) 102

Manafi, M. and Kneifel, W. 1989. A combined chromogenic/fluorogenic medium for the simultaneus detection of total coliforms and E.coli in water.zentralbl.hyg. 189: 225-224.

Santos, C.J., Araujo, M., Gómez, M.J. and Garrido, M.J. evaluación de medios de cultivo para la detección de Escherichia coli en aguas. Lab. microbiología, instituto de investigación y análisis alimentarios. Universidad de Santiago de Compostela. 9-1999. “Cuando se evaluaron los parámetros de especificidad, selectividad, eficacia relativa, precisión y exactitud del recuento, el Agar MugPlus resultó ser el más adecuado frente al Endo, m-FC, Colitag y Coli-ID”

Real decreto sobre aguas de consumo humano, addenda BOE 16 de 19/Enero/2011 y BOE 17 de 20/Nov/2011

Validación MICROKIT del Agar MUGPLUS en aguas mediante SEILAGUA, 31-Marzo-2009

Validación MICROKIT del Agar MUGPLUS en alimentos mediante SEILALIMENTOS, 16-07-2009

Validación MICROKIT del Agar MUGPLUS en cosméticos mediante SEILAPARFUM, 31-Marzo-2009

Validación MICROKIT del Agar MUGPLUS en placas deshidratadas (DryPlates-EC) en alimentos, aguas, cosméticos, superficies y aire, 6 de Noviembre de 2013

ISO 9308-1:2014 Calidad del agua. Detección y recuento de E. coli y de bacterias Coliformes.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Fabricado desde 1995, Revisado en Febrero, 2016

1

O/F GLUCOSE MEDIUM

Confirmación de Enterobacterias en base a su capacidad de

oxidación/fermentación de la glucosa, según ISO 21528-2:2017

COMPOSICIÓN

Peptona de caseina 2,00 g Cloruro sódico 5,00 g Fosfato dipotásico 0,30 g Azul de Bromotimol 0,08 g Glucosa (Dextrosa) 10,0 g Agar-Agar 3,50 g (Fórmula por litro) pH final: 6,8 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver (20,88) 21 g de medio en 1 litro de agua bidestilada y llevar a

ebullición. Repartir en tubos de fermentación. Autoclavar a 121 ºC durante 15

minutos.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

EXTREMADAMENTE HIGROSCÓPICO: MANTENGA EL BOTE BIEN

CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE

ANTES DE USAR. EN ZONAS DE ELEVADA HUMEDAD

AMBIENMTAL GUARDAR EL BOTE BIEN CERRADO EN UN TUPPER

HERMÉTICO CON SILICAGEL.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT095G

Izquierda: Metabolismo oxidativo. Derecha: Metabolismo Fermentativo.

(Sólo crece en el tubo sin tapón) (Crecimiento en ambos tubos)

Apartado de Correos / P.O. Box 44

28210-Valdemorillo (Madrid, Spain)

(34) 91 897 46 16 Fax: (34) 91 897 46 41

E-mail: [email protected]

Web: http://www.microkit.es

Blog: www.medioscultivo.com


MCC P/A COSMETIKIT®CRIOTECA® CHROMOSALM

DRY PLATES®

PLAQUIS® KITPRO-PLUSDESINFECTEST®

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SEILAGUA® ENVIROCOUNT

SALMOQUICK

MUGPLUS

CROMOKIT®AIRESANO

mailto:[email protected]

http://www.laboratoriosmicrokit.com/


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2

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio

siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar

laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque

no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,...)

DESHIDRATADO: Polvo crema

PREPARADO: Verdoso

CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a 37°C aproximadamente:

E. coli WDCM 000013, en tubo sin parafina, oxida a amarillo, en tubo con

parafina fermenta a amarillo.

Pseudomonas aeruginosa WDCM 00026, crece sólo en tubo sin parafina,

oxida a amarillo; en tubo con parafina no fermenta, medio verde.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Inocular 2 tubos en picadura. Uno de ellos debe cerrarse con parafina para

generar condiciones anaerobias que permitan la fermentación. Incubar 24-48 h

a 37°C aproximadamente. Los organismos fermentadores (como las

Enterobacterias) producen un viraje a amarillo por la producción de ácido, en

ambos tubos. Los oxidativos (colonias falsamente positivas de Enterobacterias

en medios como el VRBG) sólo producen esta reacción en el tubo sin parafina.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos

según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la

basura.

Fabricado por MICROKIT desde 9-2017

1

CROMOKIT VIBRIO AGAR Medio sólido para aislamiento y diferenciación cromogénica de las especies de Vibrio en alimentos marinos y en aguas. COMPOSICIÓN Digerido enzimático animal 10,0 g Cloruro Sódico 25,0 g Tiosulfato Sódico 5,0 g Citrato Sódico 6,0 g Colato Sódico 1,0 g Mezcla cromogénica 5,5 g Agar-agar 15,00 g (Fórmula por litro) pH final: ajustar a 8,5 ± 0,2 PREPARACIÓN Disolver 67,5 g del medio en 1 litro de agua destilada. Calentar agitando hasta ebullición para su disolución. NO Autoclavar. Enfriar rápidamente hasta 45ºC y mezclar bien antes de verter en placas Petri estériles. PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. CODIGO: DMT510 PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO (500 g y 100 g).

Arriba: V.cholerae, púrpura Abajo: V.parahaemolyticus, azul-verdoso







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2

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,...) DESHIDRATADO: Polvo amarillento PREPARADO: Estéril, Crema CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 18-24 h a 35-37ºC: Vibrio parahaemolyticus MKTA 17802, Excelente, Colonias verde-azuladas. Inoculando 100 ufc, crecen más de 50 colonias. Vibrio cholerae MKTA 15748, Excelente, Colonias púrpura. Inoculando 100 ufc, crecen más de 50 colonias. Escherichia coli MKTA 25922, Totalmente Inhibido. Enterococcus faecalis MKTA 29212, Totalmente Inhibido. SIEMBRA Sembrar en superficie en estría por agotamiento para aislar colonias tras el enriquecimiento en los medios Alkaline Enrichment Broth DMT151 (para V.cholerae) o bien Alkaline-Saline Enrichment Broth DMT159 o Vibrio Hipersaline Microkit Broth DMT137 (para V.parahaemolyticus). Incubar 18-24 h a 35-37ºC. INTERPRETACIÓN V.parahaemolyticus crece con colonias verde-azuladas, mientras V.cholerae lo hace con colonias púrpura. La flora acompañante crece con colonias de otros colores. La concentración de sal es la adecuada para que puedan crecer ambas especies de Vibrio, que quedan perfectamente diferenciadas por el color que desarrolla enzimáticamente la mezcla cromogénica en las mismas. De este modo queda eliminado el problema de falsos positivos del clásico TCBS Agar (causado por la flora acompañante que fermenta la sacarosa). El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Diseñado y fabricado por MICROKIT desde Octubre, 2012, revisado en Mayo de 2013

Vibrio cholerae MPT Broth Vibrio cholerae MPT AGAR

Medios diseñados por MICROKIT para revitalizar y aislar Vibrio cholerae

COMPOSICIÓN CALDO COMPOSICIÓN AGAR Triptona 17,0 g/L 17,0 g/L Peptona de soja 3,0 g/L 3,0 g/L Cloruro sódico 25,0 g/L 25,0 g/L Fosfato dipotásico 2,5 g/L 2,5 g/L Glucosa 2,5 g/L 2,5 g/L Agar-Agar MICROKIT-E 0,75 g/L 15 g/L Extracto de 50 g/L de nutrientes específicos MPT c.s. c.s.

pH final: 8,6 ± 0,2

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA LOS TUBOS BIEN CERRADOS EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

PRESENTACIÓN A causa de sus componentes revitalizadores, no existe versión deshidratada, sino tubos 10 mL de caldo (TPL507) para revitalizar extraordinariamente V.cholerae y tubos 18 mL de agar (TPL508) para fundir en una placa y aislar por estría colonias de V.cholerae procedentes del caldo.

NOTA Este microorganismo es uno de los más difíciles de mantener vivo. Por eso tras años de investigaciones, MICROKIT ha encontrado los nutrientes específicos que faltaban en los medios habituales y hemos denominado “nutrientes específicos MPT”, dejando su composición en secreto industrial para evitar malas copias. Cepas que llevaban “muertas” más de 1 año en placas completamente secas de TCBS, han sido perfectamente revitalizadas gracias a estos dos medios, y de ninguna manera han crecido con ninguno de los medios clásicos.

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO Y MODO DE INCUBACIÓN Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,...) DESHIDRATADO: No existe. PREPARADO: Estéril, Color paja/crema. EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2: 18-24 h a 28 ± 1 ºC, aplicando el indicado en el Manual MICROKIT actualizado:

Vibrio cholerae Eltor biovar. Serovar O:7 WDCM 00203: Crecimiento excelente tanto en caldo, como en

agar, en estría de una alícuota procedente del caldo.

Vibrio cholerae Eltor biovar. Serovar O:1 MKTC 652: Crecimiento excelente tanto en caldo, como en

agar, en estría de una alícuota procedente del caldo. El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Diseñado en Diciembre de 2017



Web: www.microkit.es http://www.laboratoriosmicrokit.blogspot.com/

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1

CETRIMIDE RAPID CROMOGENIC AGAR (BASE) BASADO EN PHARMACOPEA MEDIO N

Aislamiento selectivo para Pseudomonas aeruginosa en medicamentos (USP)

y cosméticos (ISO 22717) con detección más rápida

COMPOSICIÓN

Peptona pancreática de gelatina 20,0 g

Cetrimida 0,3 g

Cloruro magnésico 1,4 g

Sulfato Di-potásico 10,0 g

Mezcla cromogénica c.s.

Agar-agar 13,6 g

(Fórmula por litro)

pH final: 7,2 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 44,5 g de medio en 1 litro de agua destilada.

Añadir 10 ml de glicerol.

Calentar hasta ebullición, agitando para su disolución.

Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. No sobrecalentar.

El medio final es blanquecino, aunque puede adquirir tonalidades rosadas tras

autoclavarlo, que desaparecen tras oxigenarlo al plaquearlo.

Pseudomonas

aeruginosa, crece con colonias rojas

rodeadas de halo

amarillo fluorescente. En

18-24 h ya aparece

como colonias incipientes (puntos

rojos), sin

fluorescencia, por lo que este medio

sirve de alerta

precoz sin tener que esperar las 48-

120 h típicas del

Agar Cetrimida clásico.

Fluorescencia en 18h de P.aeruginosa (izda) y

no de B.cepacia (derecha) con luz UVA de

366 nm (linterna VMT050)



(34) 91 897 46 16 Fax: (34) 91 897 46 41






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P.aeruginosa, roja, crea un viraje

del medio a crema en sólo 18 h





2

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES

DE USAR. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO,

FRESCO Y OSCURO. DESHIDRATADO CODIGO: DMT550






DESHIDRATADO: Polvo grueso, Blanco PREPARADO: Estéril, Blanco,

rosado cuando caliente o antes de plaquearlo-oxigenarlo.

CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 24-48 h a 37°C

aproximadamente, o bien a temperatura ambiente (aprox.21-28°C):

Pseudomonas aeruginosa MKTA 27853, Bueno, Pigmenta, Colonias rojas en

24h, con fluorescencia verde-amarillenta a las 48 h. Con respecto a TSA

estandarizado*, recuento 92-99%, pero selectivo.

Burkholderia cepacia MKTA 25416, Correcto, colonias rojas sin

fluorescencia. Con respecto a TSA estandarizado*, recuento 72%, pero

selectivo.

Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido.

E.coli MKTA 25922, Inhibido.

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas

cuantitativas trazables a la cepa tipo.

NOTA: Medio selectivo para Pseudomonas (USP XXI). El cetil trimetil

amonio bromuro o cetrimida (base de amonio cuaternario) inhibe a la mayoría

de flora acompañante. El medio estimula la producción de fluoresceína y

piocianina. La adición de un cromógeno termoestabilizado facilita la detección

precoz en las primeras 24 h (si la cepa no está letárgica) por la aparición de

pequeñas colonias rojas, que a las 48 ya se evidencian de un buen tamaño y con

fluorescencia.

SIEMBRA E INTERPRETACION

Verter 20 ml en cada placa de Petri estéril. Dejar enfriar (el medio así

oxigenado, revierte del rosado a su color blanquecino). Sembrar en superficie.

En el caso de las placas de contacto, tocar la superficie un instante, sin mover o

introducirlas en un aparato para control del aire. Incubar a 37 ºC

aproximadamente, durante 18-48 horas.

Pseudomonas aeruginosa crece con colonias rojas rodeadas de fluorescencia

verde-amarillenta (sobre todo bajo luz de 366 nm, linterna MICROKIT), o bien

marrones. Confirmar con tiras de citocromo-oxidasa KOT050 (no usar asa de

nicrom, sino exclusivamente de Platino (VCS147)) y galerías de identificación

(MICROKIT 245000). El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente.

Autoclavar antes de desechar a la basura. Diseñado en medio deshidratado en Abril de 2014, revisado en Diciembre/2018

1

CROMOKIT BURKHOLDERIA AGAR Agar cromogénico para aislamiento selectivo y diferencial de Burkholderia cepacia en aguas, cosméticos y otras

muestras, con base BCPT Agar.

COMPOSICIÓN

Polipeptona bacteriológica 6.00 g

Piruvato sódico 6.00 g

Dihidrógeno fosfato potasio 4.35 g

Hidrógeno fosfato sodio 1.42 g

Sales biliares 1.50 g

Amonio sulfato 1.00 g

Magnesio sulfato 0.20 g

Sulfato férrico amónico 0.01 g

Rojo fenol 0.02 g

Cristal violeta 0,01 g

Agar-agar 12.0 g



pH final: ajustar a 6.2 ± 0.2

PREPARACIÓN

Disolver 32,5 g de medio en 1 litro de

agua bidestilada. Calentar hasta ebullición,

agitando hasta la total homogeneización. No

sobrecalentar. Autoclavar a 121 ºC durante 15

minutos. Si se desea hacer el medio más

selectivo para análisis en aguas, enfriar a 45-50

°C y añadir 14 ml de solución BCPT

Suplemento estéril selectivo (SMT301, que

contiene Polimixina B (150.000 UI/L) y

Ticarcilina (500,0 mg/L). Para máxima

selectividad y evitar falsos positivos de

Sphingomonas spp. y Moraxella spp., se puede añadir Gentamicina, aunque forman colonias diminutas y diferentes a

las típicas de Burkholderia cepacia. En cambio Ochrobactrum anthropi y Delftia acidovorans sólo resultan

distinguibles mediante identificación molecular, ya que las galerías comerciales dan, igual que este medio, falso

positivo de B.cepacia.

Los antibióticos polimixina y ticarcilina del suplemento SMT301 restringen la productividad de algunas cepas

de B.cepacia, por lo que no conviene usarlos para recuentos. Además todas las colonias crecidas en estos medios (base

BCPT) sin suplemento, que han sido enviadas a nuestro servicio de identificación molecular, han sido siempre de

patógenos emergentes como lo es Burkholderia. Para detección por estría tras enriquecimiento (para analizar muestras

cosméticas de escasa carga microbiana), si se deben usar con los antibióticos, porque no hay que contar colonias y así

se evitan muchos falsos positivos.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. MANTENGA EL BOTE

BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CÓDIGO: DMT555

Detección en las primeras 24 horas. Izda: Pseudomonas aeruginosa, colonias rojas grandes. Dcha: Burkholderia

cepacia, colonias rojas pequeñas. Medio salmón-crema.

Crecimiento a las 48 h: medio fucsia. Izda: Pseudomonas aeruginosa, colonias rojas grandes y con márgenes lobulados. Dcha: Burkholderia

cepacia, colonias rojas menores y con márgenes redondos.



(34) 91 897 46 16 Fax: (34) 91 897 46 41






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2

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. PARA USO EXCLUSIVO

EN LABORATORIO.

NOTA: Antes Pseudomonas cepacia, Burkholderia cepacia es una especie muy resistente que agrupa numerosas

cepas de bacilos Gram negativos, Oxidasa positivos (a menudo oxidasa-lentos), No Fermentadores de Glucosa,

Móviles. Algunas cepas pueden crecer en Agar Cetrimida sin fluorescencia y en Agar CN. Muchas cepas no crecen a

más de 35°C. En TSA algunas cepas crecen con colonias regulares, redondeadas, blanquecinas, crema o amarillas.

Deben identificarse molecularmente (MICROKIT SFI004), ya que las galerías bioquímicas no son nada fiables en este

tándem de cepas denominado B.cepacia. Debe el nombre genérico a su descubridor y el específico, a haber sido

descubierta infectando cebollas (Allium cepa), aunque se encuentra también en aguas y biofilms. Es una de las

bacterias más versátiles que se conocen, capaz de usar más de 200 compuestos como nutrientes, entre los cuales se

encuentran antibióticos, desinfectantes, pesticidas, hidrocarburos aromáticos policíclicos (HPA), tricloroetileno,

policlorobifenilos, ftalatos... además de producir sus propios antibióticos para suprimir el crecimiento de otros

competidores, así como matrices especiales para generar biofilms, lo que la hace extremadamente difícil de erradicar.

Es frecuente como saprófito en aguas, ambientes húmedos y suelos. Se emplea en biorremediación de

contaminaciones y en control de plagas fúngicas agrícolas, pero tambien algunas cepas son serios patógenos

oportunistas en infecciones nosocomiales. Parece que junto a otros Pseudomonadinos esta bacteria fué, desde el

Arcaico, corresponsable del paso de la vida a Tierra, al sintetizar ciertas macromoléculas que actúan como inductores

de la lluvia.


Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3

meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya

llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,...). DESHIDRATADO:Polvo, rosado

PREPARADO: Estéril, crema-anaranjado a menudo con precipitados negros del hierro

CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a 35°C aproximadamente:

Burkholderia cepacia MKTA 25416, Crece con colonias rojas, pequeñas (<2 mm en 24 h), algunas cepas viran el

medio bajo las colonias a rosa-fucsia, sobre todo a las 48h. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 75-294 %.

Burkholderia cepacia MKTN 10743, Crece con colonias rojas, vira el medio de debajo de las colonias a rosa-fucsia,

desde las primeras 24h. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento medio 75-294 %.

Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Crece con colonias rojas, pero son muy grandes (>5 mm a no ser que haya

tantas que compitan por el sustrato) e irregulares, además son fluorescentes bajo luz UVA de 366 nm.

Pseudomonas fluorescens MKTA 13525, Inhibido o lento y sin viraje, fluorescentes bajo 366 nm.

Staphylococcus aureus MKTA 6538, Inhibido

Escherichia coli MKTA 25922, Inhibido

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a cepa tipo.

Polimorfismo de 3 cepas TIPO de Burkholderia cepacia en BCPT cromogénico: en 24 h una de ellas es más salmón que roja.

3

MODO DE EMPLEO Y LECTURA DE RESULTADOS Sembrar en estría sobre la placa preparada una alícuota del cosmético (previamente diluido y enriquecido en LPT

Neutralizing Broth u otro caldo similar que sea neutralizante de todos los conservantes empleados actualmente y a la

vez enriquecedor). En agua, sembrar una membrana por la que se hayan filtrado 100 ml). Incubar a 30-35°C durante

24-72 horas, ideal 48 h. Verificar el crecimiento de una estría roja intensa o de colonias rojas de 1,5-2 mm de

diámetro, con o sin halo fucsia en el medio. Identificar por ID molecular (MICROKIT SFI004). El recuento/ml será la

suma de los recuentos de las tres placas (por filtración, el recuento será el número de colonias/los 100 ml filtrados). De

todas formas, no debe aparecer ni una sola colonia confirmativa en 1 g de cosmético enriquecido ni en 100 ml de agua

farmacéutica o cosmética.

El recuento a 24h y a 48 h es similar, solo unas pocas colonias más a las 48h (11% en la cepa de NCTC, 7% en la cepa

de DSMZ) y significativo: 70% en la cepa de ATCC.

Polimorfismo de 3 cepas TIPO de Burkholderia cepacia en BCPT cromogénico: en 48 h todas son fucsia-rojas, pero de

diferentes tonalidades. Y el viraje del medio salmón a fucsia es muy diferente de unas a otras cepas tipo.

4

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO 500g (DMT555) y suplemento opcional en frasco pinchable estéril

100 ml (SMT301) c.s.p.7 litros de medio final. DryPlates-BCPT (DPP015), que en realidad son el origen de este

medio cromogénico que ahora también ofrecemos deshidratado. Placas preparadas 90 mm con (PPLM56, mejor para

detección por estría tras enriquecimiento) o sin (PPLM56NS, mejor para recuentos en aguas) suplemento de

antibióticos. Plaquis herméticas 55 mm con (PPL942, mejor para detección por estría tras enriquecimiento) o sin

(PPL942NS, mejor para recuentos en aguas) suplemento de Abb.

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan desarrollado, según la

legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar en la basura.

Diseñado y fabricado en deshidratado por MICROKIT, desde Noviembre de 2016, en DPP desde Diciembre de 2013. Texto revisado: 13 de Junio de 2018

1

LISTERIQUICK Detección rápida y fiable de

Listeria monocytogenes en alimentos

INTRODUCCIÓN: El método ISO 11290 tiene como desventajas la lentitud de obtención de resultados y

la no neutralización de los conservantes de la muestra, que conlleva a resultados falsamente negativos. En dicha Norma

se realiza un pre-enriquecimiento revitalizador de 25 g de la muestra, 18-24 h a 30-35ºC en 225 ml de Caldo

Semifraser. Al día siguiente se toma una alícuota (0,1 ó 1 mL) y se incuba en un post-enriquecimiento selectivo en 10

ml de Fraser Broth otras 18-24 h. Y de ahí se estría en placas de medio cromogénico Ottaviani & Agosti (que destronó

al Oxford y al Palcam, que daban excesivos falsos positivos), incubando otras 18-24 h. De modo que todas las muestras

(incluso las negativas) llevan un mínimo de 3 días (72 h) de demora en la obtención de los resultados presuntivos. Se

emplean en total 3 medios y 4 suplementos de los cuales dos (Semifraser y Fraser) viran presuntivamente a negro con

una proporción impresionante de falsos positivos y de falsos negativos, por lo que hay que seguir hasta el final. Otro

que se emplea en otros protocolos, el BPW, no inactiva los conservantes, ni los metabolitos creados por la flora

acompañante, permitiendo la aparición demasiado a menudo de resultados falsamente negativos.

LISTERIQUICK ha sido diseñado por Laboratorios MICROKIT, en 4 años de estudios tras el diseño de su

homólogo Salmoquick, basándose en la Norma ISO 11290 pero optimizándola; el método varía, ahorrando 2

suplementos y acortando el tiempo de obtención de resultados a menos de dos días, sólo 36 horas! En este caso se

realiza el pre-enriquecimiento revitalizador (e inactivador de conservantes y de metabolitos generados por el resto de la

flora acompañante, que podrían interferir en el crecimiento de Listeria en un sinfín de matrices alimentarias) de 25 g de

la muestra en 225 ml de Agua de Peptona Tamponada Neutralizante (BPNW), 20-30 minutos a temperatura ambiente.

Se añaden al mismo 18 ml de LEB Broth a [x5] (una optimización del Fraser), se mezcla y se incuba el conjunto 18 h a

30-35ºC, constituyéndose así en un solo paso la revitalización de las Listeria dañadas, la inactivación de los graves

problemas que no contempla la ISO 11290 y el aumento de la selectividad para la multiplicación de las Listeria

presentes. En este medio mixto, las muestras con Listeria enturbian el caldo, por lo que de entrada en las primeras 18h

ya tenemos una alerta de posible presencia de Listeria si el caldo está turbio. Pero otras bacterias también pueden crecer,

por lo que hay que continuar con el segundo paso: Al día siguiente se estría en placas de Cromocytogenes (Ottaviani &

Agosti) Agar, incubando otras 18h. De modo que las muestras sin crecimientos típicos de Listeria monocytogenes

(colonias verdes con halo) son liberadas en sólo 36h.

PRECAUCIÓN: La validación de LISTERIQUICK ha sido realizada con los medios indicados, y de la marca

MICROKIT. Cualquier variación sobre los medios o la marca invalida nuestra validación, de hecho este protocolo se ha

probado y ¡NO FUNCIONA con BPW, ni con Fraser, ni con LEB de otras marcas, ni con Ottaviani & Agosti Agar +

suplementos de otras marcas! Verificar si todo funciona bien en muestras de pollo, ya que en la validación retrasaban 18

h los resultados (también en el método ISO).

LISTERIQUICK es una herramienta simple, rápida y fiable, diseñada especialmente para simplificar y

agilizar al máximo el control de alimentos con contaminación por Listeria, que es uno de los puntos más críticos y que

más retrasan la liberación del lote en la industria alimentaria.

SIMPLE: Ahorra un medio de cultivo de dudosa utilidad (Semi-Fraser) y los dos suplementos del Fraser por

los más modernos y eficientes medios que no necesitan suplemento alguno (BPNW y LEB Broth).

RÁPIDA: De la muestra a la liberación del lote en sólo 36 horas (frente a las 72 h habituales).

FIABLE: Validado en base a la Norma UNE-EN-ISO 16140 por el método de pares frente a la Norma ISO

11290, con inóculos muy bajos de distintas cepas de Listeria, variada flora interferente, matrices de todo tipo y 100% de

eficiencia (ver publicación en bibliografía). Cuidado con las muestras de pollo.



(34) 91 897 46 16 Fax: (34) 91 897 46 41






DRY PLATES®


M-IDENT® NEOGRAM

CCCNTMBS


SALMOQUICK

MUGPLUS

CROMOKIT®AIRESANO





2

Se presenta de dos formas: como kit preparado y listo para usar y como un conjunto de los 3 medios de cultivo

deshidratados y suplementos necesarios para que el mismo laboratorio se lo pueda preparar.

a) LISTERIQUICK-Estéril, Ref: KMT040: kit listo para emplear, incluye los 3 medios necesarios

para detección rápida de Listeria (en sólo 36h), en presentación estéril y lista para su uso. 4x20

Tubotes prepesados y estériles BPNW (Ref: KBB002, con Cad: 2 años desde fabricación) para añadir

a 225 ml de agua estéril, 4x20 tubos LEB Broth 18 ml [x5] (Ref: TPL0335, con Cad: 1 año desde

fabricación) para añadir 25 minutos después al anterior, 2x45 Plaquis herméticas Cromocytogenes

suplementadas (Ref: PPL970, con 6 meses de caducidad el día de su envío, para analizar al menos 14

muestras/mes). Ninguno de los componentes necesita nevera. Conservar en lugar fresco y seco, con

una temperatura de entre 5ºC y 25ºC, eso sí, al abrigo de la luz. No congelar. Kit de 80 test (Emplee

las 10 plaquis que le sobran para duplicados, verificaciones… no se le han cobrado)

b) LISTERIQUICK-Iniciación, Ref: KMT041: conjunto de los 3 medios

deshidratados y doble suplemento del agar, necesarios para detección rápida

de Listeria (en sólo 36 h), para que cada laboratorio se lo prepare: 1x 500g

BPNW (Ref: DMT011, para hacerse 62 frascos o bolsas Stomacher con 225

ml), 1x500g LEB Broth (Ref: DMT070, para hacerse 154 tubos de 18 ml a

[x5], 1x500g Cromocytogenes Agar Ref: DMT700 Ref: SMT700+ (para

hacerse 355 placas de 20 mL ó 473 placas de 15 mL) y su doble suplemento

SMT700+ (para hacerse 250 placas de 20 mL ó 33 placas de 15 mL). En

conjunto es más económico (2,31 €/test) que la adquisición de cada uno de

los 3 medios por separado (3,13 €/test), para que el laboratorio se inicie en

este método y pueda pedir después por separado los medios conforme vaya

necesitando cada uno (Para alcanzar el mínimo precio de 2,31 €/test, pida

10 botes de cada uno de los 3 medios y 10 suplementos).

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

1.- Tomar 25 g del alimento en una bolsa Stomacher o en un frasco estéril

2.- Añadir 225 ml de Agua Peptonada Tamponada Neutralizante (Microkit DMT011)

3.- Homogeneizar durante 2 minutos y dejar actuar 20-30 minutos

4.- Añadir 18 ml de LEB Broth (Microkit DMT070) a concentración [x5]

5.- Homogeneizar e incubar 18 h a 30-35ºC

6.- Pueden leerse los resultados presuntivos desde las primeras 18 horas: la turbidez

del caldo es tan presuntiva de presencia de Listeria como el ennegrecimiento del

caldo ISO 11290; debe confirmarse con el siguiente paso:

7.- Estriar sobre placas de Cromocytogenes Agar (Microkit DMT700 + Suplemento

SMT700+).

8.- Incubar las placas 18 h a 30-37ºC

9.- La aparición de colonias verdes, es altamente presuntiva de presencia de

Listeria. Si están rodeadas de un halo opaco, son altamente presuntivas de

L.monocytogenes (sólo algunas cepas de L.ivanovii producen también halo). Las

colonias verdes (con o sin halo, igual que debería hacerse en el método ISO) deben

confirmarse en laboratorio mediante los kits bioquímicos e inmunológicos

habituales, a elegir (X/R Broth DMT167 y sus dos suplementos DMT169 y

DMT171, lo mismo en kit preparado KMT012, galerías CRYSTAL G+ 245140…). Muchas colonias

presuntivas de la mayoría de medios de aislamiento de Listeria (Oxford, Palcam, McBride…) acaban siendo

confirmadas como Micrococcus, Enterococcus o Staphylococcus ambientales; esto no sucede en

Cromocytogenes, donde Listeria spp. crece con colonias verdes, L.monocytogenes con colonias verdes con

halo y los demás no suelen crecer.

BIBLIOGRAFÍA:

Norma ISO 11290: Microbiología de los alimentos para consumo humano y alimentación animal. Método horizontal para la

detección y recuento de Listeria monocytogenes.

Sanchis, J. Doble enriquecimiento simultáneo para detección rápida de Listeria monocytogenes en matrices alimentarias. XXI

Congreso SEM de Microbiología de los alimentos. Tarragona, IX-2018.

El usuario es el único responsable de la destrucción de los microorganismos generados en el interior del kit durante su uso, de acuerdo con la

legislación medioambiental vigente. Sumerja en lejía o alcohol, o mejor autoclávelos, antes de desecharlos a la basura. Mantener fuera del alcance de

los niños. No ingerir. Diseñado y fabricado por MICROKIT desde el 26 de Marzo de 2018, texto revisado el 4 de Abril de 2018.

Bolsas Stomacher con 25 g de

alimento, 225 ml de BPNW y

18 ml LEB Broth [x5] antes de incubar

1

CROMOKIT BACILLUS CEREUS AGAR Medio cromogénico para recuento diferencial de B.cereus y otras especies relacionadas de Bacillus en alimentos (Con base de Agar Mossel CENAN, ICMSF, ISO 7932:2004, ISO 21871:2006). COMPOSICIÓN Peptona péptica de carne 10,0 g Extracto de carne 1,0 g D-Mannitol 10,0 g Cloruro sódico 10,0 g Rojo Fenol 0,025 g Mezcla cromogénica 3,2 g Agar-agar 15,00 g (Fórmula por litro) pH final: ajustar a 7,1 ± 0,2 PREPARACIÓN Disolver 49,2 g del medio en 1 litro de agua destilada. Calentar agitando hasta ebullición para su disolución. NO Autoclavar. El color final del medio es salmón, transparente. Para conseguir selectividad, enfriar a 50 ºC y añadir asépticamente 10 ml de Polimixina B 106UI (Ref: SMS009, reconstituidas en 100 ml de agua estéril, o bien 50 ml de yema con polimixina Ref: SAJ001 para retener más tiempo el color del posible halo, al volverse el medio más opaco). Mezclar y repartir en placas, sin recalentar. Si se desea detectar especies como B.coagulans, B.pumilus, B.subtilis (colonias verdes o verde-amarillentas), B.megaterium (colonias amarillas y mucosas)... no añadir la polimixina, Pero entonces crecerán otros Gram positivos, a menudo con colonias azules, como los enterococos. PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. CODIGO: DMT505

B.cereus, arriba sin yema, medio virado a crema, abajo con yema y sin viraje del medio.







DESINFECTEST®

MUGPLUS

NUTRILINIA

CROMOKIT®


PLAQUIS® M-IDENT®






2

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO (500 g y 100 g); PLACAS PREPARADAS con 3 meses de caducidad a su recepción por el laboratorio.

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,...) DESHIDRATADO: Polvo grueso, asalmonado PREPARADO: Estéril, salmón CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 24-48 horas a 30 ºC aproximadamente: Bacillus cereus MKTA 10876, Excelente, Colonias grandes, céreas, aplanadas, con centro azul claro. Algunas colonias muestran halo crema en el medio salmón. Inoculando 100 ufc de este microorganismo en este medio, crecen al menos 50 colonias típicas. Bacillus thuringiensis MKTA 10792, Excelente, crece con colonias similares a las de B.cereus y a menudo halo crema en el medio salmón, pero los bordes de las colonias son irregulares. Staphylococcus aureus MKTA 25923, Excelente, Colonias amarillas. Enterococcus faecalis MKTA 29212, Inhibido completamente.

SIEMBRA Las placas no deben estar recién hechas, ya que en este medio hay que dejarlas enfriar más de una hora para que la superficie quede bien dura. Sembrar en superficie 0,1 ml de muestra y su serie de diluciones decimales, extendiendo con un asa de Digralsky (VCL155, VRR154). Esta siembra es ideal para máximo recuento de microorganismos muy aerófilos como B.cereus. Incubar 24-48 horas a 30 ºC aproximadamente. INTERPRETACIÓN Contar como B.cereus todas las colonias planas, céreas, con centro azul y bordes regulares, con o sin viraje crema alrededor, ya que la mezcla cromogénica es específica para este subgrupo. Dado que B.cereus y B.thuringiensis son cepas bioquímicamente idénticas, el aspecto de sus colonias en este medio también lo es, aunque B.cereus crece con márgenes lisos, regulares, mientras B.thuringiensis lo hace con márgenes irregulares, con pequeños lóbulos. Tambien B.anthracis, algunas de cuyas cepas son el agente del letal ántrax, se considera actualmente por Bergey de este mismo grupo B.cereus. El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Diseñado y fabricado por MICROKIT desde Octubre, 2012. Revisado el 8-Febrero-2013

1

HRS RAPID CROMOGENIC AGAR

La presencia de esporas altamente resistentes al calor de Bacillus sporothermodurans en leche pasterizada por el método Ultra Hight Temperature (UHT) se ha convertido en un problema importante en la industria láctea. Su presencia se considera indeseable, ya que obstaculizan los requisitos de esterilidad comercial. En un estudio (APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, Mar. 2005, p. 1480–1494), se han evaluado, mediante el uso de un selectivo tratamiento térmico de 30 minutos a 100°C, la presencia, fuentes, y naturaleza de las esporas potencialmente muy resistentes al calor en la leche cruda. Se detectaron altos números de estas esporas en la tela del filtro del equipo de ordeño y en muestras de cultivos y forrajes verdes. Se aislaron aproximadamente 700 cepas después del calentamiento selectivo. La colección de cepas mostró una notable diversidad, con representantes de siete géneros que forman esporas aerobias. Las más frecuentes esporas aisladas de leche UHT han sido Bacillus sporothermodurans (aerobio facultativamente anaerobio), Brevibacillus borstelensis, Paenibacillus lactis, Bacillus sphaericus, Bacillus licheniformis, y Brevibacillus brevis. El 23% de las 603 cepas formadoras de esporas pertenecen a 18 nuevas especies. La reducción de esta carga de esporas por buenas medidas higiénicas durante el ordeño probablemente podría reducir aún más el nivel de contaminación de la leche cruda, y de esta manera reducir al mínimo el recuento aeróbico de formadores de esporas de bacterias que podrían conducir al deterioro de la leche y los productos lácteos.

Las HRS (Heat Resistant Spores) o más coloquialmente “termorresistentes”,

aparecen en muestras de leche UHT, sobre todo si el método de tratamiento térmico es “indirecto” (intercambiador de calor). Los métodos “directos” con inyección de vapor sobrecalentado son más eficaces, pero estas esporas también aparecen de vez en cuando. No son un problema para la salud (son microorganismos de riesgo biológico 1: sin riesgo para la salud) y aparentemente no alteran la leche, de modo que nos hemos acostumbrado a beber leche contaminada por estos microorganismos. El problema no es para el consumidor sino para la imagen de la industria.

MICROKIT ha desarrollado un nuevo medio de cultivo cromogénico, HRS

Cromogenic RAPID Agar derivado del HRS Cromogenic Agar, con un nuevo factor “doping” adicional, que permite, de forma muy rápida (en sólo 36h en vez de las 72 h propias del Agar HRS), la visión de estas esporas germinadas, en forma de colonias, que suelen ser grandes, con forma de volcán y rojas, gracias a un cromógeno termoestable. Este medio no es selectivo para B. sporothermodurans, de modo que también crecen en el mismo Bacillus licheniformis, Bacillus sphaericus (otras esporas termorresistentes o HRS) y los demás esporulados, así como otros alterativos de la


(34) 91 897 46 16 Fax: (34) 91 897 46 41 E-mail: [email protected] Web: http://www.microkit.es




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2

leche UHT: Por eso debe emplearse en leche UHT o en leche cruda o pasteurizada a la que sometamos previamente a un calentamiento UHT o similar que elimine los acompañantes no esporulados.

COMPOSICIÓN Triptona 5,0 g Extracto de Levadura 2,5 g Glucosa 1,0 g Factores doping MICROKIT 35,5 g Agar-agar 12,0 g Cromógeno termoestable c.s. (Fórmula por litro) pH final: 6,8 ± 0,2

PREPARACIÓN Disolver 56 g de medio en 1 litro de agua destilada. Calentar hasta ebullición, agitando para su completa disolución. Repartir en tubos o frascos. Autoclavar a 121 ºC durante 15 min o preferiblemente a 116°C durante 15 minutos. No sobrecalentar ni mantener fundido mucho tiempo. Refundir sólo una vez. El color final del medio es blanco-crema. A veces, por sobrecalentamiento, adquiere un tono rosado que retorna al crema cuando se vuelve a enfriar el medio, lo cual no afecta los resultados. Si lo desea, puede añadir trazas de vitamina B12 cuando el medio se está enfriando a 47-50ºC, aunque ya están incorporadas en el medio deshidratado, dentro del extracto de levadura. Si desea una cierta selectividad en leche cruda, añada a 1 L de medio, cuando se está enfriando a 47-50ºC, 10 ml de un frasco pinchable de polimixina B (MICROKIT SMS009), para eliminar la mayor parte de la flora acompañante Gram negativa. O mejor aún, someta a la leche cruda a un calentamiento (ej: UHT), para eliminar toda la flora acompañante no esporulada y que crezcan solo las esporas termoresistentes (HRS). PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. DESHIDRATADO CODIGO: DMT534

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,...). DESHIDRATADO: Polvo grueso, Crema PREPARADO: Estéril, Crema EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2, 36-48 h a 37-55 ºC o bien a 35-37ºC, aplicando el método ISO 4833, ISO 2293, o el indicado en el Manual MICROKIT: Bacillus sporothermodurans MKTD 10599, Excelente, colonias rojas o fucsia, redondas, con forma de volcán (boina), PR >90% de colonias respecto al TSA. Bacillus subtilis WDCM 00003, Excelente, colonias grandes, rojas o rosas, lobuladas, PR >90% de colonias respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en TSA. Bacillus cereus WDCM 00001, Excelente, colonias céreas, fucsia, enormes, lobuladas, PR >90% de colonias respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en TSA.

Obsérvese la forma

de volcán de las

colonias, rojas, de Bacillus

sporother-modurans

Obsérvese el aspecto vulcaniforme de B.sporothermodurans en este medio rápido y cromogénico, en sólo 36-48 h a 35-37ºC

3

Enterococcus faecalis WDCM 00009, Excelente, colonias pequeñas, rojas, redondas, con márgenes incoloros, PR >90% de colonias respecto al TSA. Staphylococcus aureus WDCM 00032, Excelente, colonias rojo burdeos, grandes, redondas, mucosas, PR >90% de colonias respecto al TSA. Las colecciones TIPO prohíben el uso de su referencia, por lo que indicamos la Universal WDCM según ISO 11133-2:2014 y la Colección de Cepas Nativas Tropicales. PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO (100 g, 500 g, 5 Kg). Recuento total de bacterias esporuladas en leche UHT y otros alimentos UHT (lácteos, gelatina, forraje…). Las colonias crecen en distintos tonos del rojo: rosa, naranja, púrpura, burdeos.... sobre el tono crema del medio (excepto ciertos acidolácticos y ciertas levaduras, que crecen con colonias blancas, sin viraje, por lo que este medio los distingue de los aerobios). El color de las colonias no afecta a las pruebas de identificación posteriores que desee realizar.

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS Inocular 1 ml de muestra de leche UHT y su serie de diluciones decimales, en

masa, para detectar precozmente la posible contaminación del lote por esporas de este microorganismo (o bien estriar en superficie muestras ya alteradas).

Si se desea analizar la leche antes de la UHT, añada a cada L de medio 10 ml de Polimixina B (frascos pinchables MICROKIT SMS009), cuando está enfriándose a 47-50ºC, para eliminar buena parte de la flora acompañante. La polimixina es un antibiótico polipeptídico producido por una cepa de Bacillus polymyxa, activo frente a la mayoría de Gram negativos, ya que rompe violentamente su membrana plasmática. Atención: los iones Ca++ inhiben su acción. Pero el mejor agente selectivo es el calor UHT, y de este modo buscar con este medio (sin suplementos de antibióticos), sólo los supervivientes al calentamiento de la muestra. De modo que para analizar leche cruda, es mejor someterla a un calentamiento similar a UHT antes de sembrarla en el medio de cultivo, a fin de eliminar la flora acompañante no esporulada (tanto G- como G+).

Incubar una placa a 30 ºC aproximadamente durante 36-48 horas, e incubar otra placa a 37 y/o 55 ºC aproximadamente, durante 36-48 horas. Buscar las colonias rojas y vulcaniformes de B.sporothermodurans, aunque cualquier otro tipo de colonia que aparezca, también demuestra una UHT deficiente. La recuperación supera un 528% en el rango bajo de recuento en placa, un 145% en el rango medio y un 116% en el rango alto, aquella conseguida por el HRS Agar (DMT532), gracias a un tercer factor doping descubierto y agregado por MICROKIT. Esta fórmula, con menos agar, aumenta la sensibilidad del medio frente a los aerobios más lábiles, al permitir una mejor oxigenación del fondo de la placa. Este medio está diseñado para siembra en masa de productos que han sufrido esterilización UHT, de modo que los resultados no son concluyentes en productos no-UHT, con numerosos falsos positivos (sobre todo si no se añade polimixina B). Si desea sembrar en superficie, utilice 70 g/l de este mismo medio, en lugar de 56 g/l. Para minimizar la desecación en muestreos de aire y superficies, o para siembra en Spiral, añadir 2 gotas de antiburbujas (MICROKIT SBL001) por cada litro de agua, antes de añadir el medio y antes de autoclavar. El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Diseñado en Diciembre de 2018

4

ANEXO FOTOGRÁFICO

B.sporothermodurans en HRS cromogénico (MICROKIT DMT532). Obsérvese el mayor tamaño de las colonias en 3 días a 35ºC, que con lupa ya muestran su forma de volcán

B.sporothermodurans en Maxim Agar Cromogénico (MICROKIT BCD515) en 3 días a 35ºC

B.sporothermodurans en HRS cromogénico rápido (MICROKIT DMT534). Obsérvese el espectacular tamaño de las colonias en sólo 36 (izda) y 72h (dcha) a 35ºC, que muestran a simple vista su forma de volcán

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Bacillus cereus en Rapid crom Agar con polimixina (MICROKIT DMT534+SMS009): Colonias céreas, enormes, fucsia, lobuladas

Bacillus subtilis en HRS Rapid crom Agar con polimixina (MICROKIT DMT534+SMS009): Colonias grandes, rojo burdeos, lobuladas

Bacillus subtilis en HRS Rapid crom Agar con polimixina (MICROKIT DMT534+SMS009) al que hemos añadido 37 g/L de BHI Broth

(MICROKIT DMT022): Colonias enormes, fucsia, lobuladas

Enterococcus faecalis en HRS Rapid crom Agar con polimixina (MICROKIT DMT534+SMS009): Colonias pequeñas, redondas, con

centro rojo y borde incoloro, aspecto similar a Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes en HRS Rapid crom Agar con polimixina (MICROKIT DMT534+SMS009): Colonias pequeñas, redondas, con

centro rojo y borde incoloro, aspecto similar a Enterococcus faecalis

Pseudomonas aeruginosa en HRS Rapid crom Agar con polimixina (MICROKIT DMT534+SMS009): Colonias rojas con reborde rosado

Staphylococcus aureus en HRS Rapid crom Agar con polimixina (MICROKIT DMT534+SMS009): Colonias grandes, rojo burdeos,

mucosas, redondas

Shigella flexneri en HRS Rapid crom Agar con polimixina (MICROKIT DMT534+SMS009): única Enterobacteria testada que crece, con

colonias enormes, fucsia, lobuladas

6

Izda: HRS Rapid cromogenic Agar DMT534. Dcha: el mismo inóculo en el clásico B.sporothermodurans HRS Cromogenic Agar DMT532. Se observan colonias más

grandes y numerosas en el nuevo medio RAPID.

HRS Rapid cromogenic Agar DMT534. Colonias típicas de B.sporothermodurans en forma de volcán rojo.


www.microkit.es E mail: [email protected] www.medioscultivo.com

Vea el tutorial en: https://www.youtube.com/watch?v=A8WifR8mZ1k

Ref: QPA-CP (caja 20 ó 200 test)

También disponible para Clostridium sulfito-reductores con SPS (Ref: QPA-CSR) y para enterococos con BEA (Ref: QPA-ETC)

Empresa certificada ISO 9001

desde 1997

COSMETIKIT® CHROMOSALM KITPRO-5S SEILAGUA®

DRY-PLATES® DESINFECTEST®

CROMOKIT®MUGPLUS

COLICULT-MCC CRIOTECA® PLAQUIS® M-IDENT®

Controle eficazmente el único indicador de Enterovirus y Protozoos (Cryptosposidium, Giardia, Entamoeba...) que exige la UE en aguas de consumo humano, aguas de bebida envasada y aguas de baño

Evita la bajada de 1-2 log típica de la Filtración de Membrana en m-CP y en TSC (aumenta tremendamente la exactitud)

No existe método alternativo por NMP

Quanti-P/A ClostricultQuanti-P/A ClostricultQuanti-P/A ClostricultNuevo método patentado para recuento de Clostridium perfringens y sus esporas en 50-100 mL de agua con medio TSC Agar (ISO 14189 de aguas, ISO 13401 de alimentos)

No necesita jarras ni kits de anaerobiosis, lo cual disminuye su coste

Ahorra el estrés oxigenante de la Filtración de Membrana y sus consecuentes 49% de falsos negativos (aumenta drásticamente la sensibilidad).

Modo de empleo:Modo de empleo:Modo de empleo:

Amase con las manos la muestra de agua con el medio en polvo; cuando adquiera destreza, le bastarán 10 segundos.

En una superficie horizontal, dé unos golpecitos a la bolsa con el medio inoculado (para eliminar grumos) y plánchela (para homogeneizar el grosor) .

4.

Extraiga el aire residual que quede en la bolsa, cierre el tapón con fuerza.

1.

2.

3.

Si busca esporas, precaliente el agua 15 minutos a 70-80 ºC y déjela enfriar un poco para no quemarse. Si su muestra es de 50 mL (aguas envasadas), añádale otros 50 mL de agua estéril. Añada la muestra de 100 mL de agua por el tapón.

Incube las bolsas apiladas, en posición horizontal, 18-24h a 44ºC5.

Enumere las colonias negras; si no aparece ninguna, indique “0 ufc/100 mL”6.

Tambien lo puede utilizar para sembrar en masa muestras de 1 g de alimentos y cosméticos (diluidos en 100 ml de agua estéril), ahorrando asi la fusión/enfriamiento de agares.

QPA-CP sin acabar de amasar, con grumos de TSC

QPA-CP Recuento de colonias y Linealidad

QPA-CP incubación de bolsas apiladas

1

Quanti-P/A Clostricult Recuento de Clostridium perfringens y/o de Clostridios sulfito-reductores

en 1 g, 50 ml, 100 ml ó 250 ml de muestra

Quanti-P/A-Clostricult-TSC para detección y recuento fiables de Clostridium perfringens en 100 ml de muestra de aguas potables o en 1 gramo/ml de muestra de alimentos. Ref: QPA-CP (caja 20 u) Quanti-P/A-Clostricult-SPS para detección y recuento fiables de Clostridium sulfito-reductores en 1 gramo/ml de muestra de alimentos/cosméticos o en 50 ml de muestra de aguas envasadas. Ref: QPA-CSR (caja 40 u)

Clostridium perfringens es un anaerobio estricto que por el método destructivo de filtración de membrana, aunque sea el método oficial, ve reducida su concentración a niveles inaceptables (baja al 10% e incluso al 1% respecto al valor inóculo, cuando debería recuperarse al menos un 50-95 % del valor inóculo) y además es incapaz de ofrecer una sensibilidad adecuada (el 49% de las aguas con este microorganismo, casi la mitad, dan falso negativo con dicho sistema, cuando deberían dar como máximo un 5% de falsos negativos; y no sólo con el medio de la Directiva 2003 de aguas de consumo, el Agar m-CP, también con el medio de la Nueva Directiva 2015 de aguas de consumo, el Agar TSC).

Por otra parte el sistema DryPlates para recuento de microorganismos, por inclusión en masa de 1 ml de muestra, sin necesidad de calentar/enfriar agares, no puede emplearse en anaerobios estrictos, porque la fina capa de medio los oxigena demasiado. Desde la invención de las DryPlates en 2014, MICROKIT ha estado intentando encontrar el método idóneo para hacer recuentos de Clostridium perfringens y de Clostridium sulfito-Reductores en 1 ml de muestra de alimento o cosmético, en 50 ml de aguas envasadas y en 100 ml de aguas de consumo humano. Y tras 3 años, en Junio de 2017 por fin lo ha conseguido! Damos la bienvenida al futuro a los pioneros, con criterio propio, que no se dejan cegar por la ortodoxia normativa! Sin duda pasarán años hasta que este nuevo método sea el oficial, pero de ninguna manera eso significa que no deba emplearlo desde ya y adelantarse al futuro normativo, que siempre es tan lento. La fiabilidad de resultados es lo más importante. Y actualmente, esta fiabilidad está gravemente comprometida en los recuentos de anaerobios.

Empleando el mismo hidragar de las DryPlates diseñado y patentado por MICROKIT, mezclado con el medio de cultivo TSC (QPA-CP para Clostridium perfringens) o SPS (QPA-CSR para Clostridios sulfito-reductores) en bolsas transparentes, rígidas y herméticas, con tapón a rosca, se consigue una recuperación muy cercana al 100% del valor inóculo y una sensibilidad también muy cercana al 100% de las muestras realmente positivas. Hemos bautizado este nuevo método patentado por MICROKIT con el nombre Quanti P/A, porque utilizamos los mismos caldos P/A que diseñamos hace décadas, pero con el hidragar de las DryPlates para poder hacer recuentos.

Se añaden como ventajas a la fiabilidad mediante estos excelentes resultados, la comodidad del método (ahorro de filtraciones de membrana, que además son destructivas para las células subletales; siembra en masa sin necesidad de calentar y enfriar agares) y su extraordinaria caducidad (3 años desde fabricación). Además, se ahorra el empleo de jarras y de costosas atmósferas de anaerobiosis, ya que se incuba hermético en ausencia de aire (semivacío).

El Agar TSC es el medio Normativo para análisis de Clostridium perfringens, tanto en muestras de alimentos (ISO 13401), como de aguas de consumo humano (ISO 14189).

El Agar SPS es el medio Normativo (AOAC) para análisis de Clostridium sulfito-Reductores, tanto en muestras de alimentos, como de aguas envasadas.

¡Enhorabuena por utilizar el mejor método para recuento de anaerobios en aguas (o en alimentos y cosméticos) sin necesidad de calentar/enfriar agares, sin oxigenar por filtración y sin necesidad de atmósferas de anaerobiosis, sustituto del Siglo XXI de los medios deshidratados, de los medios preparados hidratados en tubo, frasco o botella y del método destructivo de Filtración de Membrana!



(34) 91 897 46 16 Fax: (34) 91 897 46 41






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8 ufc Quanti-P/A-CP incubando sólo 18h pero sin haber

extraido previamente el aire

148 ufc Quanti-P/A-CSR

incubando en exceso (48 h):colonias ya englobándose

unas a otras. Su aspecto no es

el más ortodoxo, pero lo importante es que es el

método que mejores

resultados obtiene en

recuento de anaerobios.





2

MODO DE EMPLEO (ver tutorial en https://www.youtube.com/watch?v=A8WifR8mZ1k ):

1) para detección y recuento de Clostridium perfringens y sus esporas en 100 ml de muestra de aguas de consumo humano: 1. Tome un Quanti-P/A-CP, dele la vuelta para que el medio salga del fondo, doble el fondo de la bolsa para que no vuelva a depositarse allí,

ponga la bolsa vertical con el fondo doblado, abra el tapón y añada por el orificio, con pulso para evitar derrames, 100 ml de la muestra de agua (tratada con Na TioSulfato si es clorada). Si lo que busca son esporas, caliente el agua de muestra a 75 ºC antes de añadirla a kit. Lo ideal es analizar una muestra de 100 ml a temperatura ambiente para formas vegetativas y un duplicado de 100 ml de la misma muestra a 75ºC para esporas. Los eventuales artefactos negros de Citrato Fe-Amónico no afectan los resultados: son de contorno irregular y no crecen al incubarse, a diferencia de las colonias. Apriete para que el agua llegue casi al borde del tapón y quede muy poco aire.

2. Cierre con fuerza el tapón. Amase el conjunto con las dos manos unas 30 veces (o bien con stomacher-masticator) para mezclar el medio con los 100 ml de muestra de agua. Si queda polvo o algún grumo de más de 1 cm, pellízquelo hasta que se disuelva o parta. No se preocupe por los pequeños grumos que queden, desaparecerán durante la incubación. Cuanto mejor amase mejores resultados obtendrá, al separar mejor las ufcs. Aplane la bolsa contra la poyata y extienda el medio hidratado con la muestra en toda la superficie interna de la bolsa para que la capa de medio sea lo más homogénea y fina posible, y así luego pueda contar mejor las colonias al trasluz.

3. Deposite la bolsa horizontal en la estufa de cultivos, verificando que el tapón sigue herméticamente cerrado. Puede apilar numerosas bolsas, alternando su posición (tapones al N en una capa, al S en otra, al E en otra, al W en otra…)

4. Incube 18-48 horas a 35-45ºC (dada la selectividad del medio TSC, se puede incubar a 35ºC aprox, aunque los protocolos oficiales digan que es mejor a 45ºC aprox). Si se prolonga la incubación, las colonias se agrandan, se solapan y en caso extremo todo el medio ennegrece, impidiendo así el recuento que, por este motivo, debe hacerse entre 18 y 48 h desde iniciada la incubación. Si a las 18-24 h no hay crecimientos, espere a leer a las 48h. Durante la incubación, en caso positivo extremo, la bolsa se podría hinchar del gas generado.

5. Extraiga la bolsa y cuente al trasluz todas las colonias o burbujas negras, que serán el número de ufc de Clostridium perfringens en 100 ml de muestra de agua. Cuente primero por una cara y repita el recuento por la otra, ya que el medio es traslúcido: Sume los recuentos de ambas caras evitando contar dos veces la misma colonia. En este sistema se cuentan perfectamente entre 0 y 200 colonias. Puede confirmar las colonias con el kit KMT008 (ISO 6461 y FDA) pinchando a través de la bolsa.

2) para detección y recuento de Clostridium perfringens y sus esporas en 1 g ó ml de muestra de alimentos o cosméticos (u otras matrices): Siga exactamente los mismos pasos descritos en el apartado anterior, con las siguientes salvedades:

1. Mezcle su ml ó gramo de muestra con 100 ml de medio estéril FTM (puede emplear agua peptonada tamponada, Ringer, Solución marina al 0,9 %, agua…, aunque FTM es lo ideal para conseguir los más óptimos resultados en anaerobios).

2. Cuente todas las colonias o burbujas negras, que serán el número de ufc de Clostridium perfringens en 1 ml ó gramo de muestra de alimento, cosmético o la matriz que sea (aumenta x10 el límite inferior). En este sistema se cuentan perfectamente entre 1 y 100 colonias.

3) para detección y recuento de Clostridium sulfito-reductores en 50-100 ml de muestra de aguas envasadas: Siga exactamente los mismos pasos descritos en el apartado 1), con las siguientes salvedades:

1. En este caso use la bolsa Quanti-P/A-CSR. 2. Añada 100 ml del agua de muestra (o 50 ml de su agua de muestra más 50 ml de agua estéril) y amase sobre la pila para prevenir posibles

derrames. Siga los demás pasos indicados en el apartado 1) 3. Incube 18-48 horas a 35ºC aprox. Si a las 18-24h no hay crecimientos, espere a leer a las 48h. 4. Cuente todas las colonias o burbujas negras, que serán el número de ufc de Clostridium sulfito-reductores en 50-100 ml de agua

envasada. En este sistema se cuentan perfectamente entre 1 y 100 colonias.

4) para detección y recuento de Clostridium sulfito-reductores en 1 g ó ml de muestra de alimentos o cosméticos (u otras matrices): Siga exactamente los mismos pasos descritos en los apartados 1) y 3), con las siguientes salvedades:

1. Mezcle su ml o gramo de muestra con 100 ml de medio estéril FTM (puede emplear agua peptonada tamponada, Ringer, Solución marina al 0,9 %, agua,…, aunque FTM es la mejor opción en anaerobios). Aumenta x10 el límite inferior de cuantificación, al emplear directamente 1 g de alimento diluido en 100 ml de caldo: leerá ufc/g, no las hasta ahora habituales ufc/0,1 g.

CONSERVACIÓN Y PRECAUCIONES DE USO Almacenar a temperatura ambiente (ideal 15-25ºC) ¡no en nevera!, ya que en ésta la humedad es más fácil que prehidrate y estropee los medios. Es imprescindible almacenar en lugar muy seco y oscuro, ya que la humedad y la luz dañan irreversiblemente los medios de cultivo deshidratados. Si trabaja en zonas de alta humedad atmosférica, almacene las Quanti-P/A, bien cerradas en su bolsa, dentro de una caja hermética “tupper” con sacos antihumedad (ej: VRB747).

VER FOTOGRAFIAS EXPLICATIVAS EN FOLLETO ANEXO

Con este sistema, con la destreza que da la experiencia, un analista puede controlar (de la muestra a la estufa incubadora) hasta 50 muestras por hora. Tambien en este mismo método, el Quanti-P/A-Enterocult (QPA-ETC) para recuento de Enterococos fecales (colonias pardas-negras) en 100-250 ml de muestra de agua, conseguido mezclando nuestro clásico P/A Enterocult con Hidragar en este tipo de envase. Para cuantificar Coliformes-E.coli y Pseudomonas aeruginosa emplee nuestros caldos P/A (MCC Colicult y Pseudocult, respectivamente) en las cubetas NMP. Esto ahorrará los elevados porcentajes de falsos negativos que también implica el método de filtración de membrana en estos tres parámetros (21% en E.coli-Coliformes, 6% en Enterococos fecales y 33% en P.aeruginosa).

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Validado en base a la Norma UNE-EN-ISO 16140. Exactitud del 87,5 % al 100 % de ufcs, en función de lo correctos que sean el amasado- extensión de la muestra al mezclarla con el medio. Exclusividad: 100%. Límite inferior de cuantificación: 1-5 ufc/100 ml. Diseñado, Patentado y Fabricado desde Junio de 2017 por Laboratorios MICROKIT, S.L. Texto elaborado el 7/6/2017, actualizado el 19/2/2018.

https://www.youtube.com/watch?v=A8WifR8mZ1k

1

Quanti-P/A Clostricult (QPA-CP y QPA-CSR)

Vea también el video del modo de empleo: https://www.youtube.com/watch?v=A8WifR8mZ1k



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1-Dispensar la muestra dentro de la bolsa, por el tapón 2-Aspecto de la muestra sin mezclar aún con el medio

3-Mezcla suficiente tras amasar 30 segundos, a pesar del aspecto heterogéneo, que desaparecerá al incubar

4-Sacando el aire de la bolsa para ahorrarnos el coste de la atmósfera de anaerobiosis

5-Tras la incubación, Recuentos bajos, medios e incontables (macrocolonia negra por confluencia de muchas colonias)

https://www.youtube.com/watch?v=A8WifR8mZ1k





2

Quanti-P/A CSR incubado 18h: Colonias negras,

redondas y puntiformes.

El mismo, incubado 48h: Colonias negras,

redondeadas, grandes y con gas en su centro. Esto las

distingue de posibles artefactos del citrato férrico, ya

que éstos son pequeños, de contorno irregular y no

crecen. Espectacular recuperación (22 colonias, cuando

en SPS clásico incubado en jarra de anaerobiosis, sólo

se detectan 8 –valor inóculo-)

Abajo: 3 fases de la disolución de un artefacto negro,

después convertido, mediante amasado con pellizcos, en una

nube azul oscuro, y luego bien disuelto, sin residuos.

3

Arriba: Necesidad de contar por ambas caras (cara 1: 15 colonias, cara 2: 32 colonias). La destreza en su uso permite

distinguir con el tiempo las colonias que solo se ven por una cara, de las que se ven por ambas, permitiendo así un recuento

más exacto. Abajo, Izda: En muestras de alimentos, se puede incluir 1 g del alimento completo y analizarlo junto con los 99-

100 ml del diluyente, no es necesario emplear bolsas Stomacher con filtro. Las partículas del alimento (en la foto, salmón) se

distinguen perfectamente de las 4 colonias negras. Abajo, Dcha: Colocación durante su incubación.

4

Linealidad en QPA-CP

Concentración baja Concentración muy baja Concentración media Concentración alta

Empresa certificada ISO 9001

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CROMOKIT X-STAPH AGAR

Medio cromogénico para detección y recuento diferenciales de Staphylococcus aureus, validado en muestras de alimentos, cosméticos, aguas, superficies y aires.

¿Sabía que de acuerdo con los servicios intercomparativos SEILA para alimentos, cosméticos y aguas, los medios más usad an un porcentaje aberrante de falsos resultados, con os para Staphylococcus aureus cresensibilidades y especificidades inferiores al 70%?

Por fin puede terminar con el grave problema generalizado de falsos positivos y falsos negativos propios del Baird Parker, del rpf y del Mannitol Salt Agar. Por eso MICROKIT ha diseñado un nuevo medio cromogénico, que fulmina este problema.

En la validación interna realizada en 80 muestras de flora mixta, la sensibilidad obtenida con CROMOKIT X-STAPH Agar ha sido del 100% (ningún falso -) y la especificidad también del 100% (ningún falso +). Límite de detección demostrado desde 4 ufc/inóculo (aunque en realidad será 1 ufc, pero la distribución contagiosa de los microorganismos impide normalmente demostrar valores inferiores a 6 ufc). En los servicios intercomparativos en que los laboratorios han participado con este medio, desde su diseño en Octubre de 2012, también demuestra esta excelencia de resultados sin falsos positivos ni falsos negativos propios de los demás medios. Esta validación intercomparativa ha sido auditada por terceros (TÜV Rheinland en nuestra certificación ISO 9001 y Prysma calidad en la auditoría de validación UNE-EN ISO 16140:2003/A1:2012), por lo que se debe considerar certificada.

Incubar a 35-37 ºC, durante 18-48 horas.

Para aislamientos tras enriquecimiento, recomendamos el caldo Mannitol (DMT165) mucho mejor que el clásico Giolitti-Cantoni.

Si lo que busca son estafilococos coagulasa positivos, realice un látex coagulasa (KWD094) a las colonias sospechosas (pequeñas, de colores azul índigo, azul turquesa o magenta).

Puede sembrar en masa (ideal), en superficie (reparto con asa Digralsky para recuentos o estría para aislamientos), o también torundas o membranas de filtración.

Termine de una vez con la incertidumbre de los análisis de estafilococos en muestras no clínicas, en productos donde se encuentran en estado letárgico o subletal, a causa de los tratamientos para erradicarlos (alimentos, cosméticos, aguas, superficies y aire).

Algunos Bacillus pueden crecer con colonias grandes, turquesa; si son habituales en sus muestras, añada polimixina B (SMS009) para que no crezcan.

S.aureus, colonias azul índigo o magenta (según cepa) S.epidermidis y otras especies: colonias azul turquesa


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1

CROMOKIT X-STAPH AGAR Mejorado Recuento diferencial de Staphylococcus aureus en muestras de alimentos, cosméticos y agua. Muy mejorado respecto a la anterior fórmula. COMPOSICIÓN Digerido enzimático de caseína 23,0 Extracto de levadura 15,0 Extracto de carne 10,0 Piruvato Sódico 4,0 Cloruro Sódico 40,0 Cloruro de Litio 5,0 Mezcla cromogénica 0,24 Agar-agar 12,5 (Fórmula en gramos/litro) pH final: ajustar a 7,2 ± 0,2 PREPARACIÓN Disolver 110 g del medio en 1 litro de agua destilada. Calentar agitando hasta ebullición para su disolución. NO Autoclavar. Enfriar rápidamente a 45ºC, mezclar bien. Si lo desea o la muestra es de matrices que se prevén con mucha flora acompañante, a fin de aumentar la selectividad, añada asépticamente al litro de medio enfriado a 45ºC, 100.000 UI de polimixina B (10 ml del frasco Ref. SMS009), mezclar bien. PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. CODIGO: DMT515 PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO (botes de 500 g y de 100 g), placas preparadas larga caducidad (25 ml y fabricadas bajo pedido para entregar siempre con 3 meses de vida útil), tubos preparados 18 ml para fundir y sembrar en placa en masa.



Web: www.microkit.es http://www.laboratoriosmicrokit.blogspot.com/

Blog: http://www. medioscultivo.com





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NUTRILINIA

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S.epidermidis, colonias azul turquesa

S.aureus, colonias azul oscuro o magenta (según cepa)

2

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,...) DESHIDRATADO: Polvo crema PREPARADO: Estéril, crema. CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 18-48 h a 35-37°C aprox: Staphylococcus aureus MKTA 25923, excelente, Colonias azul oscuro. Con respecto a TSA, recupera >50% normativo en un medio selectivo, en concreto un 66 %. Con respecto a B.Parker, recupera 63%, pero diferenciando claramente los falsos positivos de éste. Staphylococcus epidermidis MKTA 12228, Parcialmente inhibido. En caso contrario: colonias azul turquesa. Bacillus subtilis WDCM 00003, Crece con colonias crema o rosadas (sólo si el medio no tiene añadida polimixina). Bacillus cereus WDCM 00001, Completamente Inhibido incluso sin añadir polimixina. Bacillus thuringiensis MKTM-R002, Completamente Inhibido incluso sin añadir polimixina. Escherichia coli MKTA 25922, Completamente Inhibido. Enterococcus faecalis MKTA 29212, Completamente Inhibido.

SIEMBRA Sembrar en masa 1 ml de muestra y su serie de diluciones decimales, ya que esta siembra es ideal para máximo recuento de microorganismos fermentadores como S.aureus, sin el crecimiento típico de la siembra en superficie por parte de aerobios estrictos acompañantes, como S.epidermidis. Para recuento en muestras líquidas de gran volumen por filtración de membrana, sembrar sobre la placa la membrana de la muestra filtrada, evitando que se formen burbujas entre ambas. Para aislamiento desde enriquecimientos, estriar sobre la placa. Incubar a 35-37 ºC aproximadamente, durante 18-48 horas.

INTERPRETACIÓN Contar todas las colonias azul oscuro como S.aureus, ya que la mezcla cromogénica provoca esta coloración típica sólo en las colonias que crecen en este medio y son de este microorganismo. La composición del medio y el método de siembra lo hacen muy selectivo contra los típicos falsos positivos de otros medios como el Baird Parker, el RPF o el Mannitol Salt Agar. Su riqueza de ingredientes evita también los falsos negativos propios de dichos medios. Si lo que busca son S.aureus coagulasa positivos, confirme las colonias azul oscuro con latex M-Ident-Staph (Ref: KWD094), que a pesar de la composición salina del medio, funciona correctamente. En la validación interna realizada en 80 muestras de flora mixta, la sensibilidad obtenida ha sido del 100% (ningún falso -) y la especificidad también del 100% (ningún falso +). Límite de detección demostrado desde 4 ufc/inóculo (para inóculos menores, la incertidumbre y distribución de Poisson no aseguran su presencia). Respecto a anteriores lotes, desde Enero de 2014 este medio ha mejorado en cuanto a la naturaleza de sus cromógenos y de su agar-agar: ya no flocula y distingue perfectamente S.aureus (azul oscuro) de S.epidermidis (azul turquesa).

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Diseñado y fabricado por MICROKIT desde Octubre-2012, Modificado y revisado el 28 de Enero de 2014

1

SABOURAUD DEXTROSE CAF (CLORANFENICOL) AGAR

CROMOGÉNICO

Recuento selectivo de Levaduras y Mohos con mayor contraste de las colonias,

que de este modo se detectan antes de aparecer, más rápidamente por su

actividad metabólica anterior al crecimiento de sus células (verdes sobre medio

crema), en base a UNE 34 821:1986 e ISOS cosméticas: NF T75-611 (Poder

inhibitorio intrínseco), ISO 16212 (recuento de hongos), ISO 18416 (Candida

albicans).



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2

COMPOSICIÓN

Polipeptona micológica 10,00 g

Dextrosa 40,00 g

Cloranfenicol 0,50 g

Agar-agar 15,00 g



pH final: 5,6 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 65,5 g de medio en 1 litro de agua destilada. Calentar hasta ebullición,

agitando para su completa disolución. NO Autoclavar. Si se autoclava, hacerlo

a sólo 116ºC durante 1 minuto, o las colonias perderán mucho color.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y

OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT503






DESHIDRATADO: Polvo grueso, Crema PREPARADO: Estéril, Crema

CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 3-5 días a temperatura

ambiente (21-28°C aproximadamente): Aspergillus niger MKTA 16404, Correcto, Colonias verdes y esporuladas de negro en 5

días. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 73-475 %, pero de forma selectiva.

Saccharomyces cerevisiae MKTA 9763, Correcto, colonias verde-oscuras. Con respecto a

PCA estandarizado*, recuento 95-170 %, pero de forma selectiva.

Dos levaduras, Izda: Candida albicans Dcha: Saccharomyces cerevisiae

Irritante a causa

del cloranfenicol

3

Candida albicans MKTA 10231, Excelente, colonias verde-claro. Con respecto a PCA

estandarizado*, recuento medio 122-144 %, pero de forma selectiva.

Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido.

E.coli MKTA 25922, Inhibido.

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas

trazables a la cepa tipo. Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al

medio).

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO,

NOTA: Medio base (SDA Caf) de uso muy extendido para el aislamiento y

recuento de hongos (levaduras y mohos) en la industria alimentaria.

El cloranfenicol actúa como antibacteriano termoestable de amplio espectro, lo

que da al medio una excelente selectividad con respecto al Sabouraud Dextrose

Agar.

La mezcla cromogénica que hemos añadido al medio base, permite una visión

más rápida de las colonias incipientes de levaduras y mohos, al contrastar su

color verde sobre el medio crema. Si los colores que obtiene son más tenues

que los de las fotografías, es porque se ha sobrecalentado el medio, debe tener

más cuidado la próxima vez. Esto también le sirve de indicador de que ha

caramelizado los azúcares por sobrecalentamiento, lo cual en el medio base

sólo se aprecia por un color caramelo en vez de crema, y esto repercute

también en la fertilidad (% de recuperación de ufcs).

SIEMBRA

En placas se siembra en superficie, extendiendo con un asa de Digralsky. Se

puede sembrar en masa enfriando el medio a 45ºC, pero entonces los mohos y

algunas levaduras crecerán más lentamente por falta de oxígeno. El medio se

incuba a 20-25 ºC aproximadamente, durante 3-5 días.

INTERPRETACIÓN

Las levaduras aparecen como colonias verdes no filamentosas, a menudo

mucosas. Los mohos crecen con colonias filamentosas, verdes y de margen

difuso. Identificar al microscopio los mohos; para levaduras y mejores

identificaciones de mohos, enviar las placas de cultivos puros a nuestro

servicio de Identificación molecular.

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que

se hayan desarrollado, según la legislación medioambiental vigente.

Diseñado en Septiembre, 2017, texto revisado 28-02-2018

1

BIGGYPLUS MICROKIT CANDIDA - AGAR

Detección diferencial de Candida albicans.

COMPOSICIÓN

Extracto de levadura 0.5 g

Glicina 5.0 g

Glucosa 5.0 g

Sacarosa 15.0 g

Citrato-bismuto amoniacal 2.5 g

Sulfito sódico 1.5 g

Nitrato sódico 1.0 g

Cloruro potásico 0.25 g

Sulfato magnésico 0.25 g

Sulfato ferroso 0.005 g

Fosfato dipotásico 0.5 g

Agar-agar 15.0 g


pH final: 6,4 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 46,5 g de medio en 1 litro de agua

destilada. Calentar hasta ebullición, agitando

para su disolución. Mantener la ebullición durante un máximo de 2 minutos.

NO autoclavar ni sobrecalentar o el medio virará a gris.

Medio que, una vez preparado, gana calidad con el tiempo, mientras se

mantenga blanco (1-2 años).

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y

OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT239

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO

Candida albicans (colonias pardas que no

ennegrecen el medio)



(34) 91 897 46 16 Fax: (34) 91 897 46 41

E-mail: [email protected] Web: www.microkit.es

http://www.laboratoriosmicrokit.blogspot.com

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DESINFECTEST®

MUGPLUS

NUTRILINIA

CROMOKIT®


PLAQUIS® M-IDENT®






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no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,...).

DESHIDRATADO: Polvo fino, Beige PREPARADO: Estéril, Blanco.

CONTROL DE CRECIMIENTO 48-72 h a 37°C aproximadamente, o bien a

temperatura ambiente (aprox.21-28°C): Candida albicans MKTA 10231, Excelente, Colonia marrón sin difusión de

pigmento al medio. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 114-119%, pero de

forma selectiva.

Candida tropicalis MKTA 1005, Excelente, Colonia con difusión del color negro-

metálico al medio. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 115%, pero de

forma selectiva.

Escherichia coli MKTA 25922, Inhibido.

Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido. * El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas

trazables a la cepa tipo. Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al

medio).

SIEMBRA

Fundir frascos a 98 ºC para elaborar placas sin sobrecalentar. Sembrar en

superficie, exclusivamente con asa de Platino (VCS147). A pesar de ser una

levadura, si se siembra

en masa, se obtendrán

recuperaciones incluso

3 veces inferiores y

colonias más tardías y

diminutas.

Incubar durante 1-3

días a 35 ºC

aproximadamente.

INTERPRETACIÓN

Candida albicans forma colonias negras o pardo oscuras, sin brillo metálico ni

difusión de pigmentos al medio. C tropicalis: colonias pardo-oscuras con

centro negro, con reflejo metálico y con pigmento negro que difunde alrededor

de las colonias tras 72 horas. C. pseudotropicalis: colonias pardo-rojizas

oscuras, brillantes, sin difusión. C. krusei: colonias rugosas,

plateadas-pardo-negruzcas, con halo de difusión amarillo. C. parakrusei:

colonias rugosas, pardo-rojizas, con micelio amarillo alrededor. C.

stellatoidea: colonias pardo-oscuras con leve reborde micelial.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación

medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Diseñado en Junio, 2016

Izda: siembra en superficie.

Dcha: mismo inóculo por siembra en masa: menos colonias y mucho menos desarrolladas

cual ves mejor? - uab barcelona · 2 micrococcus luteus mkta 9341, excelente, colonias rojas en 48...

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