cultivo in vitro de crisantemo

8/6/2019 Cultivo in Vitro de Crisantemo

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Se agita y se enrraza a 990 ml. Con la ayuda de una tira del test de Ph se ajusta elmismo a 5.5 (Se regula el ph con HCL diluido con agua destilada). Se adiciona el gel,se tapa y se lleva a ebullicin.

Foto 2. der) inmersion de la tira de test de pH. Izq) verificacion del pH.

Cuando ha hervido, se retira del fuego y y se deja reposar unos 15 minutos. Despusse dispensan 20 ml. en frascos con capacidad de 100 ml. Se tapa la boca del frascocon redondeles de papel aluminio.Foto 3. Proceso de dispensamiento del medio de cultivo en frascos.


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2.MANEJO DEL MATERIAL VEGETAL2.1. RECOLECCIN Y DESINFECCIN

Se seleccionan las camas donde se recolectaran los esquejes; estas camas debentener plantas sanas.Foto 5. Plantas madres de crisantemo.

En horas de la maana se cortan esquejes de 15 cm., los que son transportados allaboratorio en un recipiente con una franela encima.

En el laboratorio se los coloca bajo el chorro de agua para evitar el estrs delesqueje. Con la ayuda de una tijera, se cortan las hojas, dejando el esqueje sin hojas,pero con parte de la nervadura que envuelve a la yemaFoto 6. Der) Recepcion de los esquejes de crisantemo en el laboratorio. Cent)Esquejede crisantemo. Izq) Corte de las hojas.


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Con la ayuda de un cedazo, se dejan los esquejes sin hojas a chorro continuo porespacio de 5 minutos.

Se cortan los esquejes muy grandes y se introducen en un recipiente con aguadestilada para enjuagarlos.Foto 7. Esquejes de crisantemos listos paar empezar la desinfeccion.


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Se vuelve a colocar agua destilada hasta el nivel que cubra a los esquejes y seagregan 0.2 ml. de phyton. Los dejamos reposar 5 min y luego los lavamos con aguadestilada.

Se prepara una solucin de 20% hipoclorito de sodio y 80% agua destilada, y sevierte en el recipiente con los esquejes y se tapa la boca del recipiente con una

redondla de aluminio. Se dejan los esquejes en esta solucin por 20 minutos y se loslleva a la cabina de flujo laminar.Foto 8. Esquejes de crisantemo inmersos en una solucion de agua con phyton.


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2.2. SIEMBRA INICIAL

Se preparan y esterilizan previamente las cosa que se utilizaran en la cmara de flujolaminar (papel, algodn, bistur, agua destilada, medios de cultivo).

Se retira la tapa de la cabina de flujo laminar y se enciende la misma. Se limpian losfrascos con medio de cultivo para ingresarlos a la cabina (la limpieza es con alcohol

antisptico y algodn esterilizado.Foto 9. Der) material esterilizado previamente. Izq) atomizacion de alcohol en lamesa de trabajo.

Se limpia la mesa de trabajo de la cabina con alcohol antisptico y algodn estril. Seatomiza alcohol sobre el frasco con los esquejes en cloro, los frascos con cistena y

recipientes vacos, para luego secarlos con algodn esterilizado. Se enciende elmechero de alcohol.Se flamea el soporte de los instrumentos (tapa de caja petri), el bistur y la pinza,para luego atomizar alcohol industrial sobre parte de la mesa y flamearla tambin.Foto 10. der, cent, izq) Flameacion de las pinzas, caja petri y mesa de trabajorespectivamente.


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Transcurrido el tiempo de los esquejes en cloro, se ciernen los mismos y con aguadestilada esterilizada se procede a lavarlos varias veces, para retirar todo rastro decloro. Se vuelven a sumergir los esquejes en agua destilada y se colocan tres gotasde cloruro de mercurio, se agita fuertemente y se escurre el agua, se lava variasveces con agua destilada esterilizada y se escurre.Foto 11. der y Cent) lavado de los esquejas en la cabina de flujo laminar. Izq.)adicion del cloruro de mercurio.


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Se limpia la mesa de trabajo con un algodn esterilizado y alcohol industrial. Seextiende un papel esterilizado en la mesa de trabajo y se colocan sobre este losexplantes.Foto 12. Manejo de los esquejes antes del corte a explante.

Con la ayuda de una pinza, se sujeta el esqueje para que con un bistur se puedarealizar el corte del mismo.Foto 13. Der) esqueje antes del corte. izq) Corte del explante. abaj) explante oinoculo


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Una vez cortados, con la ayuda de una pinza se colocan los explantes en los frascoscon agua con cistena, hasta que se termine de preparar todos los explantes.

Se retira el papel usado y se limpia la mesa con alcohol y algodn esterilizado, antesde extender otro papel limpio.foto 14. Der) Explantes antes de la inmersion en cisteina. izq) Limpieza de la mesa detrabajo. abaj) Explantes inmersos en cisteina.


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Cuando al fin se ha terminado de realizar todos los cortes, se acercan los frascos conmedio de cultivo. Se extiende un papel esterilizado y con ayuda de una pinza sesacan los explantes inmersos en cistena para colocarlos sobre el papel. Se abre

suavemente la tapa del frasco con medio esterilizado. Se flamea la pinza y se dejaenfriar un poco.

Foto 15. Proceso de siembra de los explantes.


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Con la pinza se coge el explante y se lo deposita en el medio, este no debe quedartotalmente sumergido en el medio. Se tapa nuevamente el frasco y se ajusta hastaterminar de sembrar todos.Foto 16. arrib) siembra de explante. der e izq) Explante sembrado de forma adecuaday acostado respectivamente.


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Cuando se termina de sembrar todos los explantes, se retiran de la cabina de flujolaminar y se apaga la misma, luego se envuelve en plstico strech film cada uno delos frascos. Paar finalizar se llevan los frascos a un area esteril y sin luz por 8 dias,despues de esto se retiran los contaminados y se lleva el resto a estanterias contubos de luz fluorescente.Foto 17. Sellado de los frascos sembrados.


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Publicado por Especialista de Laboratorio en 14:33

Etiquetas: crisantemo, fase de iniciacion, In vitro, siembra

3 comentarios:

Annimo dijo...

hola como estas amigo, la verdad esta interesante el cultivo de crisantemo, seria bueno en video claro

si se puede, gracias, por todo soy de la ciudad de Moquegua... si lo tuvieras en video, a mi correo,

[email protected]

6 de noviembre de 2009 10:04

Especialista de Laboratorio dijo...

no amigo la verdad es dificil tomar un video dentro de la camara de flujo, incluso las fotos son

dificiles por q el trabajo q ahi se realiza es muy rapido, si te interesa te podria ayudar con lasformulaciones en las distintas etapas, para esta tecnica en especial. gracias por tu comentario

11 de noviembre de 2009 18:51

Annimo dijo...

hola mi nombre es ana y me parece un tema muy interezante ya q estoy realizando mi tesis enmetodos de desinfeccion del bambu para la propagacion invitro del bambu,pero el detalle es que

tengo mucha contaminacion, ya use lejia y antibioticos como amoxicilina y fingicidas para clacontaminacion por hongos y batecrias pero no tengo resultados positivos hasta el momento que tipo

de desinfectantes me recomiendas para evitar la contaminacion me serviria mucho tu respuesta micorreo es [email protected]. gracias.

8 de agosto de 2010 21:48

cultivo in vitro de crisantemo

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