des de biologie médicale enseignement d’immunologie
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1DESCLI2009, Phnom Penh
ET01 & ET02Introduction aux techniques
immunologiques (Immunochimie)
Adrien Six ([email protected]) Phnom PenhUniversité Pierre et Marie Curie septembre 2009
DES de Biologie MédicaleEnseignement d’Immunologie
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2DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
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3DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
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4DESCLI2009, Phnom Penh
Réaction antigène/anticorps
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5DESCLI2009, Phnom Penh
Réaction antigène/anticorps
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6DESCLI2009, Phnom Penh
Production d’anticorps
monoclonaux
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7DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
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8DESCLI2009, Phnom Penh
Précipitation en milieu liquide
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9DESCLI2009, Phnom Penh
Précipitation interfaciale
Techniquedu “ring test”(test qualitatif)
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10DESCLI2009, Phnom Penh
Diffusion unidimensionnelle
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11DESCLI2009, Phnom Penh
Diffusion simple bidimensionnelle
Technique de Mancini
Immunodiffusion radiale
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Précipitation en milieu solideTechnique d’Ouchterlony
Immunodiffusiondouble
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13DESCLI2009, Phnom Penh
Immunoélectrophorèse (Grabar/Williams)Combine électrophorèse et immunodiffusion double:1. Séparation électrophorétique
d’une source d’antigènes selon leur charge
2. Immunodiffusion radiale des antigènes séparés
3. Immunodiffusion d’une source d’anticorps déposée dans une gouttière sur l’un ou l’autre des côtés des antigènes séparés
4. Formation éventuelle d’arcs de précipitation
Analyse qualitative
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14DESCLI2009, Phnom Penh
Immunoélectrophorèse en fusée
- Analyse quantitative- Nécessité que l’Ag soit chargé négativement
Technique de Laurell:
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15DESCLI2009, Phnom Penh
Immunoélectrophorèse bidimensionnelle
Analyse qualitative & quantitative
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16DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
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17DESCLI2009, Phnom Penh
Réaction d’agglutination
Qualitatif: très sensible; Quantitatif: peu précis
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18DESCLI2009, Phnom Penh
Test de Coombs directRecherche d’anticorps anti-Rhésus chez le nouveau-né
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19DESCLI2009, Phnom Penh
Test de Coombs indirectRecherche d’anticorps anti-Rhésus chez la mère
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20DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
![Page 21: DES de Biologie Médicale Enseignement d’Immunologie](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022012711/61aa8d469a0ab20efc5c653c/html5/thumbnails/21.jpg)
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RIA/ELISA
RadioImmunoAssay/Enzyme-linked ImmunoSorbentAssay
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22DESCLI2009, Phnom Penh
ELISA indirect
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23DESCLI2009, Phnom Penh
ELISA sandwich
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ELISA compétitif
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25DESCLI2009, Phnom Penh
ELISpot
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26DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
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27DESCLI2009, Phnom Penh
Immunoprécipitation
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Western blot1
2
3
4
5
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29DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
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Immunofluorescence - principe
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31DESCLI2009, Phnom Penh
Immunofluorescence - exemple
Coupe de pancréas:Anticorps « vert » dirigé contre GAD (glutamic acid decarboxylase) marque les cellules β des îlots de LangerhansAnticorps « orange » dirigé contre l’hormone glucagon marque les cellules α
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Cytométrie de flux (1)
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Cytométrie de flux (2)
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Cytométrie de flux (3)
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35DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
![Page 36: DES de Biologie Médicale Enseignement d’Immunologie](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022012711/61aa8d469a0ab20efc5c653c/html5/thumbnails/36.jpg)
36DESCLI2009, Phnom Penh
Tri cellulaire par « panning »
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37DESCLI2009, Phnom Penh
Tri cellulaire par cytométrie
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38DESCLI2009, Phnom Penh
Tri cellulaire magnétique
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39DESCLI2009, Phnom Penh
Introduction aux techniques immunologiques (Immunochimie)
1. Principe de la réaction Ag-Ac - Rappel2. Réactions de précipitation3. Réactions d’agglutination4. RIA; ELISA5. Immunoprécipitation; Western blot6. Immunofluorescence7. Techniques de tri cellulaire8. Conclusion
![Page 40: DES de Biologie Médicale Enseignement d’Immunologie](https://reader030.vdocuments.net/reader030/viewer/2022012711/61aa8d469a0ab20efc5c653c/html5/thumbnails/40.jpg)
40DESCLI2009, Phnom Penh
Sensibilité des techniques de détection
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41DESCLI2009, Phnom Penh
PCR-ELISA
A. VanderBorght et al. (1999) J.Immunol.Methods 223:47.
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42DESCLI2009, Phnom Penh
Immuno-PCR
M. C. Case et al. (1999) J.Immunol.Methods 223:93.
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43DESCLI2009, Phnom Penh
Panama-blot
D. Stahl et al. (2000) J.Immunol.Methods 240:1.
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44DESCLI2009, Phnom Penh
Immunoproteomics
Francisco J. Quintana, Peter H. Hagedorn, Gad Elizur, Yifat Merbl, Eytan
Domany, and Irun R. Cohen. Functional immunomics: Microarray
analysis of IgG autoantibody repertoirespredicts the future response of mice to
induced diabetes.PNAS 101:14615-14621, 2004.