Revue Frangaise de Transfusion et Immuno-h6matologie Tome XXVII -- N ° 3 - - 1984 309

Diagnostic immunologique des infections cytom6galovirus

Application aux centres de transfusion sanguine

par M. A y m a r d *, J .C. T a r d y ** et R. Giber t **

* Laboratoire de Virologie-S6rologie C.H.U. Lyon, Universit6 Claude Bernard Lyon-I

** Ddpartement d'Etudes des Maladies Virales, Laboratoire National de la Sant6, LYON.

L Es Centres de Transfusion Sanguine sont directement concern6s par les infections h CMV :

1 ° Pour d6tecter les traces s6rologiques d 'une infection h CMV chez les donneurs de sang, de cellules et d 'organes, la pr6sence d 'ant icorps prouvant que ces donneurs sont potentiel lement dange- reux pour les receveurs s6r0n6gatifs et devraient 6tre exclus;

2 ° Pour ddterminer si les receveurs sont des sujets h haut risque d' infection parce que ne poss6dant pas d 'ant icorps et d ' immuni t6 anti-CMV ;

3 ° Pour s61ectionner des sujets h haut t i tre d 'ant icorps anti-CMV dont les plasmas permet t ra ient de produire des pr6parat ions d ' Im- munoglobulines h haut titre sp6cifique anti-CMV.

Seules les m6thodes s6rologiques sont bien adapt6es /i la d6tection d 'une infection virale m6me ancienne : elles doivent doser les Immuno-

310 AYMARD M. et coll.

globulines sp6cifiques totales des s6rums et des p r6para t ions d ' Im- munoglobul ines ou les IgG. Mais elles peuven t explorer des ant ieorps ~t fonct ion biologique diff6rente (neut ra l i sants donc p ro tec t eu r s cont re l ' infect ion de la cellule, ou f ixant le compl6ment ) et des an t icorps dirig6s vis-h-vis d 'ant ighnes diff6rents selon la qualit6 des antig6nes utilis6s, la pr6senta t ion de ces antig6nes aux ant icorps et Ia m6thode d 'explorat ion. La sensibilit6 des tests s6rologiques est va r i ab l e ; leur r6p6tabili t6 et reproduct ib i l i t6 sont aussi var iables . La qualit4 des antig6nes ainsi que la facilit6 avec laquelle on peu t les produire , sont deux fac teurs impor t an t s de cet te variabili t6. La sp6ci- ficit6 de ces tests varie. Enf in les consid6rat ions de cofit, de facilit6 et de d61ai d 'ex4cution, et d ' adap ta t ion aux tes ts de rout ine de grande s6rie in terviennent dans l '6valuat ion g6n4rale des m6thodes et de leur choix.

VALEUR ET LIMITE D E S PRINCIPALES METHODES

Le tableau I tente de r6 sumer la valeur de ces diff6rents para- m6t res tels que nous avons pu la d6 te rminer dans no t re p r o p r e exp& rience : celle-ci ne c o m p o r t e pas l 'usage de la r6act ion d 'agg lu t ina t ion pas s i ve [2 ] ; d 'apr6s STEVENS [8], les r4act ions d 'agglut inat ion pas- sive sont sensibles, faciles de r6al isat ion et de l ec tu re ; mais les inconv6nients t iennent ~ la qualit6 de l 'antig6ne, de son a t t a chemen t sur le suppor t , de la dur6e de vie du s uppo r t et de la qualit6 des ant icorps d6tect6s. En outre, cet te r6act ion est pa r t i cn l ib rement sensible ~t toutes causes de modi f ica t ion de la stabil i t6 de la suspen- sion de par t icules sensibilis6es c'est-h-dire pH, force ionique, concen- t ra t ion prot6ique, forces de centr i fugat ion, qualit6 du mat4r ie l darts lequel se f a r le test. Enfin, routes les r6actions d 'agglut inat ion sont sensibles au ph6nom6ne de zone.

La r~act ion de n e u t r a l i s a t i o n appliqu6e au CMV pal' BENYESH- MELnlCK et PLUMMER en 1964 [5], exige des cul tures cellulaires de tr6s bonne qualit6 une suspens ion virale de t i t re infect ieux 61ev6 et s table et un d61ai de r6alisat ion et de lecture de plusieurs jours. Sa sensibilit6 n ' es t pas tr6s 61ev6e, elle est am41ior4e pa r l ' ad jonct ion de compl6ment . Lorsque les bonnes condit ions de la r6al isat ion de la r6act ion sont r6unies, elle est r eproduc t ib le et r6p6table. La sp6cificit4 et la p ro tec t ion des cellules cont re l ' infect ion h CMV pa r les an t icorps d6velopp6s contre les glycoprot6ines d 'enveloppe du CMV, font de la neut ra l i sa t ion le tes t de choix pou r d6 te rminer la va leur p ro tec t r i ce des pr6para t ions d ' tmmunoglobu l ines . Elle n ' e s t r6alisable que dans cer tains labora to i res sp6cialis6s et les r6actifs ne sont pas com- mercialis6s.

DIAGNOSTIC IMMUNOLOGIQUE DES INFECTIONS A CYTOMEGALOVIRUS 311

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3i2 AYMARD M. et coll.

La r~action de fixation du compldment est une technique tr~s utilis6e depuis son application au CMV par Rowe en 1956 [6]. On en conna i t bien la valeur. Elle est r6alisable en quelques heures, ne n6cessite pas d '6quipement sp6cial mais elle est adaptable ~t l 'auto- matisation. La r6p6tabilit6 et la reproductibil i t6 sont excellentes, quant ~ la sp6cificit6, elle est bonne darts la mesure o/i l 'on s 'assure que les s6rums ne cont iennent ni pouvoir anticompl4mentaire, ni anticorps anti-cellules. L' influence des facteurs rhumatoides, de l 'agr6gation des Immunoglobul ines et de la pr6sence de r6cepteurs Fc cellulaires sur la sensibilit6 et la sp6cificit6 du test n 'a jamais 6t6 ni recherch6e ni d6montrde.

Les r6actifs (antig~nes) de bonne qualit6 sont commercialis6s mais il est p rudent de r66valuer chaque nouveau lot en pr6sence de s6rums contenant des anticorps anti-CMV h des taux vari6s. M6me avec les meilleurs antigbnes, la sensibilitd de la FC est insuffisante pour le diagnostic d 'une infection pr imaire chez un sujet jeune ou adulte, immunod6pr im6 ou non et sur tout pour le d6pistage d 'une infection ancienne (au moins 10 % des cas).

Ce d6faut de sensibilit6 nous avait amends ~ met t re au point le test d ' IF indirecte puis le test ELISA plus sensibles [3, 9].

La rdaction d ' immunof luorescence indirecte d6crite par HANSHAW et al. en 1968 pour le CMV [4], n6cessite des cultures cellulaires de tr6s bonne qualit6 pour la pr6para t ion des antig~nes : c 'est la pro- duction r6guli~re d'antigbnes de qualit4 qui est le facteur le plus difficile h contr61er. Le d61ai de r6alisation est cour t mais la lecture au microscope ~ U.V. est laborieuse n6cessitant un technicien entrain& La sp6cificit6 de cette technique a 6t4 beaucoup discutde: si 1'on prend soin de ne consid6rer comme positives que les rdactions de f luorescence des inclusions intranuc16aires [3], ce test est sp6cifique. I1 est indispensable d ' in t roduire des contr61es : de la prdsence ou non d 'ant icorps anti-cellules dans les sdrums, de la quantitd et l 'activit6 des rdcepteurs Fc dans les cellules infectdes utilisdes comme anti- g6nes, des facteurs rhumatoides, de l '6tat agrdg6 ou non des Immuno- globulines et de la spdcificit6 et de l 'avidit6 des conjuguds.

Ce test sensible rend service pour le diagnostic des infections primaires mais il n 'est pas adapt6 aux grandes sdries et l 'antig6ne n 'est pas commercialis6.

La mdthode immunoenzymat ique : ELISA.

Cette technique a connu un essor consid6rable ces derni~res ann6es depuis la description de VOLLER et BIDWELL en 1976 [10]. Son principe est rapport6 dans la figure 1. Sa sensibilit6 est tr6s 41ev4e, d ' ap r~s

DIAGNOSTIC IMMUNOLOGIQUE DES INFECTIONS A CYTOMEGALOV1RUS 313

SAROV [ 7 ] , e11e e s t v o i s i n e d e c e l l e d e s d o s a g e s r a d i o i m m u n o l o g i q u e s .

D e s r 6 a c t i f s e t d e s c o f f r e t s s o n t m a i n t e n a n t c o m m e r c i a l i s 6 s y c o m p r i s

u n c o f f r e t p e r m e t t a n t d e r 6 a l i s e r le t e s t e n m o i n s d ' u n e h e u r e . O n

p e u t u t i l i s e r d e s e x t r a i t s d e c e l l u l e s i n f e c t 6 e s , b e a u c o u p r n o i n s c o f i t e u x

q u e l e s a n t i g 6 n e s p u r i f i 6 s . L a l e c t u r e e n e s t f a i t e s o i t ~ l%eil n u ,

s o i t o b j e c t i v e m e n t e t a u t o m a t i q u e m e n t a u s p e c t r o p h o t o m 6 t r e . L ' a u t o -

m a t i s a t i o n p a r t i e l l e d e c e t t e m 6 t h o d e e x i s t e d6 j~ . M a i s l a m & h o d e

E L I S A a p p l i q u 6 e h l a d & e c t i o n o u a u t i t r a g e d e s a n t i c o r p s a n t i - C M V

e s t s u j e t t e ~t d e s c a u s e s d ' e r r e u r d 6 t a i l l 6 e s da r t s le t a b l e a u I I .

J. ADSORPTIO#

DE L'AG

LAVAGES

@A]A ; AC SPECIFIQUE

SE FIXE SUN L'AG

LAVAGE$ LAVAGES $ g / a F S ~ Om ~ F Q SUBSTRAT HYDROLYSE d ~ / A~I J[ |~ANTICORPS

ANTIGLOBULINE / ANTI G ~/ (ANTI T,N,G.A.) NYDROLYSE

SE FIXE SUR L'AC LE SUBSTRAT

FIG. 1. - - Ddtection + t i t rage des ant icorps. Principe de l 'El isa indirect (d 'apr6s VOLLER e t a [ . , 1976). AG : antigone - - AC : anticorps. - - anti-GE * : ant iglobul ine marqude pa r l 'Enzyme - - S : subst ra t . - - ant i -T: ant iglobulines totales - - M.G.A. : IgM, IgG, IgA.

TABLEAU II

Causes d'erreur dans le titrage des anticorps par le test ELISA indirect.

FAUX +

-- Sites l ibres pour f ixa t ion prot6 ines / plast ique.

- - A G cont ient composants

• Hdtdro-spdcifiques (d6 te rminants communs)

• Non sp6cifiques r6cepteurs pour FC AG d'h6te.

- - R 6 a c t i o n s pa r ant icorps hdtdrophi- liques.

- - Agrdgats d 'I .globulines

- - Facteurs rhumato ides

C o n t a m i n a t i o n s bact6ries.

- - C o n j u g u 6 s non sp6cifiques.

F A U X - -

- - Sensibilit6 antig6nes (d&erminants Mode prdpara t ion Conservation.

. Compdti t ion ent re classes I.globulines spdcifiques entre I .globulines spdcifiques et non

spdcifiques.

- - C o n s e r v a t i o n des s6rums h doser.

- - T i t r e et avidit6 du conjugu6.

314 AYMARD M. et coll.

P o u r 6vi ter les r6ac t ions f a u s s e l n e n t n6gat ives , la qua l i t6 de l ' an t i - g~ne est n a t u r e l l e m e n t p r 6 p o n d d r a n t e : en p a r t i c u l i e r la p r o p o r t i o n e n t r e les d 6 t e r m i n a n t s a n t i g 6 n i q u e s sp6ci f iques et les p ro t6 ines n o n sp6ci f iques est c r i t ique . Les causes d ' e r r e u r dues h d ' 6ven tue l s p h 6 n o m ~ n e s de c o m p 6 t i t i o n et h la qua l i t6 d u c o n j u g u 6 s o n t s u r t o u t i m p o r t a n t e s p o u r la d6 tec t ion et le t i t r age des c lasses d ' I m m u n o - g lobu l ines .

Lo r sque n o u s avons dvalud le tes t E L I S A [9] p a r r a p p o r t ~ I ' IF i nd i r ec t e p o u r le d6pis tage des su je t s s6ron6gat i f s et s6ropos i t i f s n o n s avons t rouv6 u n e c o n c o r d a n c e de prbs de 100 %. Mais il n ' ex i s te q u ' u n e co r r6 l a t i on pa r t i e l l e e n t r e I F i n d i r e c t e et ELI S A p o u r

ELISA

DILUTIONS

2 5 6 0 0

6400

1600

400

100

0

3 1B

4 8 10

6 "2

4 3

17

0 8 16

20

4

11 6 4

8 2 1

3 4 1

32 64 128 256 512 1024 2048

FC ~ILUTIONS

FIG. 2. - - Corrdlation entre FC et Elisa pour le titrage des IgG anti-CMV (Etude sur 145 sdrums de transplantds rdnaux). - -31 sdrums FC = 0 = 14 ELISA + - - t i t r e s moyens en FC (16,32) = ELISA: 1600-6400 - - forts titres en ELISA (~ 25600) observds h partir de FC = 64 - - coefficient de corrdlation (log dilutions ELISA / log dilutions FC)

r = 0,82.

la d d t e r m i n a t i o n du t i t r e en a n t i c o r p s an t i -CMV: ceci t i e n t aux d i f fdrences dans la p r 6 p a r a t i o n des an t ig6nes , la qua l i t6 (avidi t6, c lasse , spdcificit6) des a n t i c o r p s mi s en 6v idence et les p h d n o m 6 n e s de c o m p 6 t i t i o n d i f fd ren t s dans ces deux t echn iques . Alors que, & p a r t sa sens ib i l i t6 n o t a b l e m e n t p lus 61evde (100 & 400 lois) les t i t r es d ' an t i -

corps ELISA son t en b o n n e corr61at ion ( r = 0,82) avec les t i t r es FC (Figure 2), ce t te b o n n e corr61at ion a d ' a i l l eu r s 4t6 s ignal6e p a r SAROV et al. [7].

DIAGNOSTIC IMMUNOLOG1QUE DES INFECTIONS A CYTOMEGALOVIRUS 315

Nous avons utilis6 la m d t h o d e E L I S A dans d i ver ses ind ica t ions :

1 ° Pour le d6pistage des s u j e t s rdcep t i f s : on doit pouvoir t rancher entre absence et pr6sence d 'anticorps. Se posent deux ques t ions :

1. Quelle dilution initiale utiliser ?

2. Quelle est la valeur seuil ?

De nombreux essais ant6rieurs avaient montr6 que pour avoir le brui t de fond min imum et parce que nos antig~nes sont trbs sensi- bles, la dilution de 1/100 du s6rum 6tait satisfaisante.

Dans une enqu6te prospective sur l ' incidence des infections h CMV chez la femme enceinte, nous avons recherch6 la distr ibution des anticorps IgG en notant la DO du s6rum. On volt clairement que les deux populat ions de sujets n6gatifs (139 s6rums) et positifs (223 s6rums) sont tr~s diff6rentes. I1 existe une frange de 7 personnes (1,9 % du total des sujets) dont la DO s6rique est comprise entre 0,20 et 0,30 ( f igures 3 et 3 his). Le brui t de fond 6valu6 soit par la DO des s6rums en pr6sence d'antig~ne cellulaire normal, soit par la DO des s6rums en pr6sence d'antig~ne CMV mais d 'un conjugu6 anti-IgM, est dans 92 % des cas inf6rieur ~t 0,10, et la DO moyenne 6valu6e sur les s6rums I g G + ou I g G - - , est de 0,04.

Nous avons donc consid6r6 que lorsqu 'un s6rum a une DO com- prise entre 0,2 et 0,3, il dolt 6tre consid6r6 comme douteux et que si la DO de ce sdrum est > 0,3 en pr6sence de l 'antigbne CMV, il est positif.

Des observations identiques ont dr6 faites lors du titrage des anti- corps chez des sujets suspects d ' infecti0n ~t CMV avec une diffdrence qui por te sur la fr6quence des cas ,, douteux ,~ (12 %).

2 ° La d d t e r m i n a t i o n exac te d 'un t i t re est utile lorsqu 'on veut 6valuer une variat ion significative du taux des anticorps dans le diagnostic des rdinfections ou pour le dosage d ' Immunoglobul ines .

Le proc6d6 classique consiste h effectuer des dilutions successives de la pr6parat ion et de d6terminer la dilution qui donne une r6action positive. Malheureusement, il existe une incert i tude sur la valeur seuil (DO, 0,2 h 0,3), la courbe 4 mont re qu'il n 'y a relation lindaire entre le taux d 'ant icorps et la DO que dans une gamme 6troite de DO comprise entre 0,5 et 1,30 et d 'un individu h l 'autre et d 'un antigone

l 'autre, la pente de la droite peut varier.

En a t tendant que des donn6es math6mat iques plus 61abor6es permet ten t des calculs pr6cis, on peut 6valuer actuellement raison- nablement un titre en se rdf6rant ~t un s tandard bien calibr6, introduit

316 A Y M A R D M. et coll.

nb de sujets 30

20.

10.

rl R 0;00 OjOI 0=02 0~03 0~04 0,05 0,06 Oj07 0,06 0,09 0,10 0,11 0,12 0,13 0,14 0,15 0,]6 0~17 0,18

FIr. 3 EX 3 bis . - - D i s t r i b u t i o n de la DO d a n s les s 6 r u m s de f e m m e s ence in t e s ( enqu~ t e s y s t 6 m a t i q u e prospect ive)_ Tes t E l i s a i n d i r e c t :

- - P o u r 139 f e m m e s ence in tes sdrondgat fves : c h a q u e b a r r e r e p r 6 s e n t e le N de s u j e t s d o n t le s 6 r u m di lu6 1/100 ava i t u n e DO de 0,00 - 0 ,01- 0,02 j u s q u ' 5 0,20.

- - P o u r 223 f e m m e s ence in te s sdropos i t i ves : c h a q u e b a r r e r e p r 6 s e n t e le N de s u j e t s d o n t le s 6 r u m di lu6 1/100 ava i t u n e DO compi- ise e n t r e 0,20-0,30 - 0,31-0,40 j u s q u ' a 2,00.

nb de sujets

40.

30.

20.

10.

nHnnn I

m

~ r'-I P-I Oj30 0,40 0,50 0=60 0,70 0360 Oj90 1,00 1,10 1±20 1,30 1,40 1,50 1,50 1,70 1,80 1j90 2jO0

D O

DIAGNOSTIC IMMUNOLOG1QUE DES INFECTIONS A CYTOMEGALOVIRUS 317

comme cont rb le darts chaque plaque, en des places diff6rentes, sous au moins 3 d i lu t ions et en t e s t an t au moins 2 d i lu t ions des pr6para- t ions h examine r calcu16es pour que l eur DO soi t compr i se en t re 0,5 et 1,3.

3 ° Pour le ddpistage des donneurs de sang ayant un haut titre d'anticorps, nous avons d6termin6 le t i t re des an t i corps p a r la m6thode des d i lu t ions chez 352 femmes enceintes po r t euses d ' infec t ion latente, et 6tabl i la d i s t r i bu t ion de ces t i t res . Plus de 60 % ont des an t icorps >~ 6400 et moins de 10 % ont un t i t re d ' an t i co rps >/ 25 600. Chez les immunoddpr im6s ( t r ansp lan t6s rdnaux) infect6s, les t i t res d 'ant i - corps sont dans la ma jo r i t 6 des cas > 25 600 (la r6act ion de FC est p resque tou jou r s > t~ 64).

Dans nos condi t ions techniques , on peu t donc faire un d6pis tage des s6rums h hau t t i t r e d ' an t i corps , soi t p a r la f ixat ion du compl6ment h la d i lu t ion 1/64, soit p a r I 'ELISA h la d i lu t ion 1/25 000 (ddlai d ' i ncuba t ion AG-AC 2 heures , puis conjugu6 30 minutes) , soit p a r un ELISA en t emps cour t en u t i l i san t des concen t ra t ions plus 61ev6es de s6rum.

4 ° Le titrage des prdparations d'Immunoglobulines p a r la m6thode ELISA prdsen te les m~mes diff icult6s que le t i t rage des s6rums en ra i son de 1'absence de l in6ari t6 en t re la quant i t6 d ' an t i co rps et la DO aux for tes concen t ra t ions et aux for tes d i lu t ions des Immunoglo- bul ines .

Dans les essais pr61iminaires r appor t6s dans le tableau III, on a compar6 I 'ELISA, I ' IF ind i rec te et la neu t ra l i sa t ion . La r6act ion de

TABLEAU I I I

Titres compards des immunoglobulines vis-&-vis du CMV dosdes par ELISA. IF et neutralisation.

ORIfiINE NOMBRE ELISA IF NEUTRALI- SATION DE LOTS X ET X ET X ET

- - IM polyvalente p lasma . . . . . . . .

- - IV Polyvalente p lacenta . . . . . .

- - IM polyvalente p lacenta . . . . . .

9

5

5

2 6 7 0 - 1 4622 I 113 l 79 1550 105 * 100 65 * 51

600 , . t 918 7 0 . . t 110 1 5 0 9 i 391 . 42 300** 173

950,,11043867 1 0 0 , . I 12088 620" '1 512752

X : t i t re m o y e n / m g de protdine. ET : 6cart type 6valu6 sur * 18 essais

• * 10 essais.

318 AYMARD M. et coll.

FC n'est pas utilis6e car les Immunoglobul ines sont le plus souvent anticompldmentaires.

Les titres obtenus par la mdthode ELISA sont les plus 61evds dans les Immunoglobul ines p]asmatiques IM, alors qu 'en IF indirecte les prdparat ions d ' Immunoglobul ines plasmatiques IM et placentaires IM ont des titres non significativement diffdrents. La neutral isat ion a donnd des rdsultats tr6s diff6rents puisque les Immunoglobul ines plasmatiques IM ont le t i tre le plus bas. Les pr6parat ions d ' Immuno- globulines placentaires pour adminis t ra t ion IV ont les titres les plus bas en ELISA et en IF (N.B. : tous ces titres ont 6t6 calculds par mg de protdine).

DO

1,8

1,5

1,3.

I

0,8

0 ~ 5

0,3

0~2

\ \

"\ % '. 4- \ t-

' , *',% \ 4".t"

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . _-,.~ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .~- . . . . SEUIL DE POSITIVITE

OILUTIONS

160 460 16'00 64'00 25600 102'400

FIG. 4. - - Courbe de titrage de 3 s6rums par le test Elisa indirect. . . . . titre FC du s6rum : 16

titre FC du s6rum: 64 xxxxxxxx titre FC du s6rum: 512

D I S C U S S I O N E T C O N C L U S I O N S

- - L a prevent ion du risque d'infection EL CMV du n o u v e a u - n 6 p r 6 m a t u r 6 s o u m i s h t r a n s f u s i o n d e s a n g f r a i s ( m o i n s de 48 h e u r e s d e c o n s e r v a t i o n ) o u de p u r 6 e l e u c o c y t a i r e e s t u n o b j e c t i f ~t a t t e i n d r e

DIAGNOSTIC IMMUNOLOGIQUE DES INFECTIONS A CYTOMEGALOVIRUS 319

de toute urgence. D a n s la populat ion fran~aise, l e taux de sujets n 'ayant pas pr6sent6 d ' infection ~ CMV (s6ron6gatif) est d 'environ 40 %.

Dans la s61ection de donneurs de sang s6ron6gatifs, ii convient d'6tre s6v6re et tous ceux qui ont une r6action douteuse ~ la dilution initiale devraient, pour plus de s6curit6, 6tre consid6r6s comme posi- tifs, c'est-h-dire por teurs d 'une infection latente donc potentiel lement contaminants . Dans l '6valuation de la r6ceptivit6 des sujets, .on ignore la signification protectr ice de titres faibles tel 100" : pour plus de s6curit6, il conviendrait de consid6rer les sujets ayant des anticorps d6tectables seulement 5 la dilution 1/100 comme entibrement r6ceptifs.

Le ra isonnement est identique lorsqu'il s 'agit d'6valuer le risque d ' infection d 'un receveur de greffe d 'organe ou de tissus.

- - La sdlect ion de p lasmas ou de donneurs ~ haut t i tre est certaine- merit tr6s facile en utilisant des r6actifs ou des coffrets commercialis6s de FC ou d'ELISA. I1 est certain qu 'nne m6thode rapide et 6cono- mique est la plus souhaitable sur tout si elle peut 6tre au moins part iel lement automatis6e en part iculier pour sa lecture.

Les donneurs /t haut titre ne repr6sentent probablement qu'envi- ton 5 ~ 6 % de l 'ensemble de la populat ion adulte non immuno- d6primde : les greff6s soumis h u n t ra i tement immunosuppresseur ont des anticorps ELISA h titre tr~s 61evg mais l 'on peut se demander quelle est la valeur protectr ice de ces anticorps.

FORGHANI et SCnMIDT [1] ont montr6 que tous les sujets ayant des anticorps neutralisants avaient des anticorps d6tectables par les autres m6thodes mais qu'il existe une mauvaise corr61ation entre la neutral isat ion et leur ELISA utilisant un substrat fluorog6nique.

- - Nous avons observ6 une discordance nette entre les deux tests p o u r le dosage in v i tro des I m m u n o g l o b u l i n e s . I1 serait hau tement souhaitable d'6valuer in vivo l 'efficacit6 prophylact ique des Immuno- globulines et d '6tablir une corr61ation avec leur titre obtenu 5 1'aide de diff6rentes techniques. L'6valuation devrait compor te r auss i la comparaison d ' Immunoglobul ines de pr6paration, d'origine plasma- tique ou placentaire et de voie d 'adminis t ra t ion diff6rentes.

- - M~me s'il n 'est pas encore possible de t i t ter les ant icorps en 6valuant ~ la fois leur pouvoir protecteur , leur sp6cificit6 et leur avidit6, il est tout h fair souhaitable de poursuivre le ddve loppemen t et la s tandard isa t ion d e m d t h o d e s plus rapides et moins cofiteuses. Ii est en outre urgent de pr6parer et calibrer un rdacti[ s tandard

* Test ELISA.

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uti l isable pa r t o u s l e s labora to i res qui leur p e r m e t t r a i t d '6 ta lonner leurs rdactifs in ternes dans leurs condit ions techniques et qui r endra i t enfin possible l ' in te rpr6 ta t ion des r6sul ta ts obtenus dans des labora- toires diff6rents.

SUMMARY

The Blood Transfusioxl Centers (B.T.C.) are main ly concerned wi th the select ion of CMV infect ion f ree b lood donors, the screening of the anti CMV ant ibody high t i t re p l a s m a donors and the evaluat ion of specific ant i CMV Im m unog l obu l i n p repara t ions .

Var ious serological me thods could be used bu t they are oi d i f ferent value depending the purposes of the B.T.C.

The neutra l iza t ion tes t (Nt), wi th the addi t ion of c o m p l e m e n t is specific and detects the pro tec t ing AB against the glycoproteins of the viral envelope.

The c o m p l e m e n t f ixat ion tes t (CF) using ext rac ts of CMV infected cells as ant igen largely varies in its sensi t ivi ty according to the quali ty of the antigen. In any case, the CF tes t is not sensit ive enough to detect a la tent CMV infect ion in a cer ta in percen tage of the non i m m u n o s u p p r e s s e d adults, bu t could be used for the selection of anti CMV ant ibody high t i t res carr iers .

Three sensit ive methods : pass ive haemagglut ina t ion , indirect immunof luo rescence and indirect ELISA tests, migh t be used for the detect ion of la tent CMV infections. They detect var ious AB against var ious in ternal and external componen t s of the CMV. They are submi t t ed to var ious sources of errors . The sensit ivi ty of the indirect IF test is main ly res t r ic ted by t h e quali ty of the ant igen p repara t ion , its specifici ty by the presence of anti cells ant ibodies in the sera, the Fc recep tors in the antigens and the specificity o f the con juga te s . The indirect ELISA w h i c h is submi t t ed to the ,same c a u s e s of e r rors is a highly sensit ive test, easy to pe r fo rm, reagents are available, and au toma t i c p rocessors have been developed. When c o m p a r e d wi th t h e previous techniques, the ELISA tes t is sui table for the screening of CMV free donors, when it is p e r f o r m e d wi th an highly sensit ive antigen. I t could be also used for the screening of high an t ibody t i t re carr iers: its corre la t ion wi th the CF tes t is quite good ( r = 0,82). When compara t ive ly appl ied to the t i t ra t ion of !mmunog lobu l in s p repara t ions , m a d e f r o m p lasmas or placentas , fo r e i ther IM or IV adminis t ra t ion , the Elisa tes t gives AB t i t r e s -d i f fe ren t f r o m those ob ta ined wi th Nt and indirect IF.

The cal ibrat ion of a s t anda rd I m m u n o g l o b u l i n reagent is u rgen t ly needed and double bl ind clinical assays of the pro tec t ive effect of

DIAGNOSTIC IMMUNOLOGIQUE DES INFECTIONS A CYTOMEGALOVIRUS 321

var ious p r e p a r a t i o n s of specif ic an t i CMV I m m u n o g l o b u l i n s have to

be p r o m p t l y des igned.

Pr M. AYUARO

Laboratoire de Virologie-S6rologie C.H.U. Lyon-I 8, avenue Rockefeller 69373 LYON Cedex 08.

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