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Digoxin

IMMULITE® 2000 Digoxin

2 IMMULITE 2000 Digoxin (PIL2KDI-9, 2005-04-05)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic usewith the IMMULITE 2000 Analyzer — forthe quantitative measurement of digoxin inserum or heparinized plasma, as an aid inmonitoring the therapeutic administrationof this cardioglycoside, while avoidingtoxicity.Catalog Number: L2KDI2 (200 tests),L2KDI6 (600 tests)Test Code: DGX Color: Light Green

Summary and ExplanationImmunoassay has proved particularlyuseful in determining drug overdoses inpatients treated with cardiac glycosides.The technique is also useful (a) inclarifying situations where a patient'ssymptoms might be due either to intrinsicheart disease or to digitalis intoxication;(b) where there is doubt concerning thetype of digitalis preparation the patient istaking — in this case, a digitoxinimmunoassay is also necessary; (c) formeasuring the digoxin ingestion ofpatients with an inadequate history ofprevious dosage; (d) in documentingcases of underdigitalization as well asdigitalis (digoxin) excess; (e) in monitoringthe toxic response in patients withmyocardial disease associated withhypokalemia, hypomagnesemia,hypercalcemia, hypoxia and alkalosis,which are particularly sensitive to digitalis;and (f) in preventing overdigitalization,particularly in patients whose renalfunction is deteriorating or for whom anincreased digoxin dosage iscontemplated.

The high sensitivity of digoxinimmunoassay is especially necessary inview of the small differences andoccasional overlap that exist betweentherapeutic and toxic levels of circulatingdigoxin.13 (Intoxication is defined in termsof arrhythmias and disturbances of cardiacconduction due to the drug's presence.)Smith et al reported serum digoxinconcentrations of 0.8–2.4 ng/mL (1.0–3.1 nmol/L) in nontoxic patients, and 2.1–

8.7 ng/mL (2.7–11.1 nmol/L) in toxicpatients, based on data taken six hourspost-dose in patients with normal renalfunction.8 More recent clinicalinvestigations have confirmed theassociation of toxicity with serum levelsabove 2 ng/mL.

Principle of the ProcedureIMMULITE 2000 Digoxin is a solid-phase,enzyme-labeled, competitivechemiluminescent immunoassay.Incubation Cycles: 1 × 30 minutes.

Specimen CollectionCollect blood in plain tubes without gelbarriers, noting the time of collection, justbefore the next dose — or, in any case, noless than six hours after the administrationof this cardioglycoside, to avoidmisleadingly high digoxin results.The use of an ultracentrifuge isrecommended to clear lipemic samples.

Hemolyzed samples may indicatemistreatment of a specimen before receiptby the laboratory; hence the results shouldbe interpreted with caution.

Centrifuging serum samples before acomplete clot forms may result in thepresence of fibrin. To prevent erroneousresults due to the presence of fibrin,ensure that complete clot formation hastaken place prior to centrifugation ofsamples. Some samples, particularlythose from patients receivinganticoagulant therapy, may requireincreased clotting time.Blood collection tubes from differentmanufacturers may yield differing values,depending on materials and additives,including gel or physical barriers, clotactivators and/or anticoagulants.IMMULITE 2000 Digoxin has not beentested with all possible variations of tubetypes. Consult the section on AlternateSample Types for details on tubes thathave been tested.Volume Required: 50 µL serum orplasma.

Storage: 7 days at 2–8°C, or2 months at –20°C.

IMMULITE 2000 Digoxin (PIL2KDI-9, 2005-04-05) 3

Warnings and PrecautionsFor in vitro diagnostic use.Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of inaccordance with applicable laws.

Follow universal precautions, and handle allcomponents as if capable of transmittinginfectious agents. Source materials derivedfrom human blood were tested and foundnonreactive for syphilis; for antibodies toHIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen;and for antibodies to hepatitis C.

Chemiluminescent Substrate: Avoidcontamination and exposure to directsunlight. (See insert.)Water: Use distilled or deionized water.

Materials SuppliedComponents are a matched set. Labels onthe inside box are needed for the assay.

Digoxin Bead Pack (L2DI12)With barcode. 200 beads, coated withmonoclonal murine anti-digoxin. Stable at2–8°C until expiration date.L2KDI2: 1 pack. L2KDI6: 3 packs.

Digoxin Reagent Wedge (L2DIA2)With barcode. Two reagents: 5.5 mL ofalkaline phosphatase (bovine calfintestine) conjugated to digoxin, in buffer,and 11.5 mL of buffer. Stable at 2–8°Cuntil expiration date.L2KDI2: 1 wedge. L2KDI6: 3 wedges.

Before use, tear off the top of the label atthe perforations, without damaging thebarcode. Remove the foil seal from the topof wedge; snap the sliding cover down intothe ramps on the reagent lid.

Digoxin Adjustors (L2DIJ3, L2DIJ4)Two vials (Low and High), 2 mL each, ofdigoxin in human serum matrix. Stable at2–8°C for 30 days after opening, or for6 months (aliquotted) at –20°C.L2KDI2: 1 set. L2KDI6: 2 sets.Before making an adjustment, place theappropriate Aliquot Labels (supplied withthe kit) on test tubes so that the barcodescan be read by the on-board reader.

Kit Components SuppliedSeparatelyL2SUBM: Chemiluminescent SubstrateL2PWSM: Probe Wash

L2KPM: Probe Cleaning KitLRXT: Reaction Tubes (disposable)SDCM: Bi-level, multi-constituent control

Also RequiredDistilled or deionized water; test tubes;controls.

Assay ProcedureNote that for optimal performance, it isimportant to perform all routinemaintenance procedures as defined in theIMMULITE 2000 Operator's Manual.See the IMMULITE 2000 Operator'sManual for: preparation, setup, dilutions,adjustment, assay and quality controlprocedures.Recommended Adjustment Interval:2 weeks.Quality Control Samples: Use controlsor serum pools with at least two levels(low and high) of digoxin.

Therapeutic RangeThe following results are reported in theliterature, based on data taken six hourspost-dose in patients with normal renalfunction.8

GroupDigoxin,ng/mL

Digoxin,nmol/L

Nontoxic patients 0.8 – 2.4 1.0 – 3.1

Toxic patients 2.1 – 8.7 2.7 – 11.1

Consider these limits as guidelines only.

LimitationsSole reliance on digoxin concentrations fordetermining digitalis toxicity is notwarranted, and must be supplementedwith additional clinical andelectrocardiographic information.Many physiological, pharmocological,pathological and genetic factors mayaffect the interpretation of results (seeSummary and Explanation of the Testsection).The presence of endogenous digoxin-likeimmunoreactive factors (DLIF) has beenreported in the serum of patients withrenal and hepatic failure, and in newbornsand women in the third trimester ofpregnancy.14 These factors can result infalsely elevated digoxin results in a


number of commercially availableimmunoassays.

In cases of overdosage, specimens shouldbe obtained before administering digoxinimmune Fab antidote preparations (e.g.Digibind®) since these can be expected tointerfere with any digoxin immunoassayprocedure. Once such a preparation hasbeen administered, accuratedeterminations of digoxin can be madeonly by specialized techniques (notroutinely available in most clinical settings)until the Fab fragments have beeneliminated from the body: this takesseveral days for patients with intact renalfunction, and a week or longer for patientswith renal impairment. In addition to invitro effects, these preparations,administered intravenously, cause a rapidrise in pharmacologically inactive, Fab-bound, total circulating digoxin that maybe detected immunologically.15

Heterophilic antibodies in human serumcan react with the immunoglobulinsincluded in the assay components causinginterference with in vitro immunoassays.[See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinelyexposed to animals or animal serumproducts can demonstrate this type ofinterference potentially causing ananomalous result. These reagents havebeen formulated to minimize the risk ofinterference; however, potentialinteractions between rare sera and testcomponents can occur. For diagnosticpurposes, the results obtained from thisassay should always be used incombination with the clinical examination,patient medical history, and other findings.

Performance DataSee Tables and Graphs for datarepresentative of the assay's performance.Results are expressed in ng/mL. (Unlessotherwise noted, all were generated onserum samples collected in tubes withoutgel barriers or clot-promoting additives.)Conversion Factor:ng/mL × 1.281 → nmol/LCalibration Range: 0.5 to 8 ng/mL(0.6 to 10 nmol/L).

Analytical Sensitivity: 0.2 ng/mL(0.3 nmol/L).

Precision: Samples were assayed induplicate over the course of 20 days, tworuns per day, for a total of 40 runs and 80replicates. (See “Precision” table.)

Linearity: Samples were assayed undervarious dilutions. (See "Linearity" table forrepresentative data.)Recovery: Samples spiked 1 to 19 withthree digoxin solutions (15, 30 and60 ng/mL) were assayed. (See "Recovery"table for representative data.)Specificity: The antibody is highly specificfor digoxin, though Lanatoside C andMethyldigoxin do exhibit significantcrossreactivity. (See "Specificity" table.)Bilirubin: Presence of conjugated andunconjugated bilirubin in concentrationsup to 200 mg/L has no effect on results,within the precision of the assay.Hemoglobin: Presence of hemoglobin inconcentrations up to 512 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.Lipemia: Presence of triglycerides inconcentrations up to 3,000 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.Alternate Sample Type: Matched serumand heparinized samples were collectedfrom 28 volunteers. Varying amounts ofdigoxin were added to the matchedsamples, which were analyzed by theIMMULITE 2000 Digoxin procedure. Bylinear regression:(Na Heparin) = 0.96 (Serum) – 0.03 ng/mLr = 0.988

Means:2.75 ng/mL (Serum)2.61 ng/mL (Na Heparin)

The results show that heparinized plasmayields essentially equivalent results toserum.Method Comparison 1: The assay wascompared to IMMULITE Digoxin on 97samples. (Concentration range:approximately 0.5 to 6.1 ng/mL.See graph 1.) By linear regression:(IML 2000) = 0.94 (IML) + 0.097 ng/mLr = 0.977


Means:1.4 ng/mL (IMMULITE 2000)1.4 ng/mL (IMMULITE)

Method Comparison 2: The assay wascompared to DPC's Coat-A-Count (RIA)Digoxin on 168 samples. (Concentrationrange: approximately 0.5 to 6.0 ng/mL.See graph 2.) By linear regression:(IML 2000) = 0.99 (CAC) + 0.004 ng/mLr = 0.975

Means:1.3 ng/mL (IMMULITE 2000)1.3 ng/mL (Coat-A-Count)

Method Comparison 3: The assay wascompared to another automatedimmunoassay (Kit A) on 169 samples.(Concentration range: approximately 0.5to 6.2 ng/mL. See graph 3.) By linearregression:(IML 2000) = 0.96 (Kit A) – 0.09 ng/mLr = 0.971

Means:1.3 ng/mL (IMMULITE 2000)1.5 ng/mL (Kit A)

References1) Butler VP, Jr., Lindenbaum J. Serum digitalismeasurements in the assessment of digitalisresistance and sensitivity. Am J Med1975;58:460-9. 2) Doherty JE. How and when touse the digitalis serum levels. J Am Med Assoc1978;239:2594-6. 3) Gault MH, et al. Studies ofdigoxin dosage, kinetics and serumconcentrations in renal failure and review of theliterature. Nephron 1976;17:161-87. 4) HuffmanDH, et al, Association between clinical cardiacstatus, laboratory parameters, and digoxinusage. Am Heart J 1976;91:28-34. 5) RietbrockN, Alken RG. The therapy of heart failure withdigitalis. Deutsche Med Wochenschr1980;105:1622-8. 6) Shapiro B, et al. Pitfalls inthe application of digoxin determinations. SemNucl Med 1975;5:205-20. 7) Shapiro W. Currentconsiderations in digoxin usage. CRC Crit RevClin Lab Sci 1978;9:321-46. 8) Smith TW, et al.Determination of therapeutic and toxic serumdigoxin concentrations by radioimmunoassay. NEngl J Med 1969;281:1212-16. 9) Smith TW.Medical intelligence. N Engl J Med1973;288:719-22 and 942-6. 10) Smith TW.Digitalis toxicity: epidemiology and clinical use ofserum concentration measurements. Am J Med1975;58:470-6. 11) Weintraub M. Interpretationof the serum digoxin concentration. ClinPharmacokinetics 1977;2:205-19. 12) WettrellG. Digoxin therapy in infants. Acta PaediatrScand 1976; Suppl 257:7-28. 13) Hallworth MJ.Practical therapeutic drug monitoring: digoxin.Lab Medica 1991 Mar/Apr;19-22. 14) Valdes RJr. Endogenous digoxin-like immunoreactivefactors: impact on digoxin measurements and

potential physiological implications. Clin Chem1985;9:1525-32. 15) Digoxin immune Fab. In:McEvoy GK, editor. AHFS Drug Information 92.American Society of Hospital Pharmacists,1992: 1977-81.

Technical AssistanceIn the United States, contact DPC'sTechnical Services department.Tel: 800.372.1782 or 973.927.2828Fax: 973.927.4101. Outside the UnitedStates, contact your National Distributor.Manufactured by EURO/DPC Ltd. under aQuality System registered to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Precision (ng/mL)

Within-Run1 Total2

Mean3 SD4 CV5 SD CV

1 0.6 0.05 8.3% 0.05 8.3%

2 1.2 0.06 5.0% 0.07 5.8%

3 2.7 0.12 4.4% 0.15 5.6%

4 3.3 0.14 4.2% 0.14 4.2%

5 6.6 0.31 4.7% 0.35 5.3%

Linearity (ng/mL)

Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 4 in 45 2.1 — —

2 in 4 1.1 1.1 100%

1 in 4 0.5 0.5 100%

2 8 in 8 4.2 — —

4 in 8 2.0 2.1 95%

2 in 8 1.0 1.1 91%

1 in 8 0.5 0.5 100%

3 8 in 8 4.2 — —

4 in 8 1.8 2.1 86%

2 in 8 0.9 1.1 82%

1 in 8 0.5 0.5 100%

4 8 in 8 6.4 — —

4 in 8 3.2 3.2 100%

2 in 8 1.5 1.6 94%

1 in 8 0.7 0.8 88%


5 8 in 8 7.3 — —

4 in 8 3.5 3.7 95%

2 in 8 1.7 1.8 94%

1 in 8 0.9 0.9 100%

Recovery (ng/mL)

Solution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 — ND — —

A 0.7 0.8 88%

B 1.5 1.5 100%

C 2.9 3.0 97%

2 — <0.5 — —

A 0.8 0.8 100%

B 1.5 1.5 100%

C 2.8 3.0 93%

3 — 1.0 — —

A 1.7 1.7 100%

B 2.4 2.5 96%

C 3.7 4.0 93%

4 — 2.0 — —

A 2.8 2.7 104%

B 3.3 3.4 97%

C 4.7 4.9 96%

5 — 3.2 — —

A 3.3 3.8 87%

B 4.1 4.5 91%

C 5.6 6.0 93%

Specificity

Compound1ng/mLAdded2

ApparentConc.ng/mL3

%Cross-

reactivity4

Digitoxin 100 0.99 0.1%

Aldosterone 30 0.19 0.6%

Canrenoic Acid 100 <0.5 ND

5,000 <0.5 ND

50,000 <0.5 ND

Corticosterone 40,000 0.23 ND

Cortisone 100,000 0.23 ND

Cortisol 19,600 0.17 ND

11-Deoxy-corticosterone 20,000 0.17 ND

Dexamethasone 100,000 0.12 ND

Estradiol 50 0.20 0.4%

Estriol 10,600 0.24 ND

Lanatoside C 12.5 0.99 7.9%

Methotrexate 100,000 0.19 ND

Methyldigoxin 3.0 4.42 147%

Prednisolone 100,000 0.27 ND

Pregnanediol 100,000 0.22 ND

Pregnenolone 100,000 0.24 ND

Progesterone 10,500 0.24 ND

Spironolactone 100,000 0.24 ND

Testosterone 9,500 0.24 ND

Uzara 1,397 <0.5 ND

5,588 <0.5 ND

ND: not detectable5

Method Comparison 1:

0

1

2

3

4

5

6

7

0 1 2 3 4 5 6 7IMMULITE Digoxin, ng/mL

IMM

ULI

TE 2

000

Dig

oxin

(IML 2000) = 0.94 (IML) + 0.097 ng/mLr = 0.977



0

1

2

3

4

5

6

7

0 1 2 3 4 5 6 7

Coat-A-Count Digoxin, ng/mL

IMM

ULI

TE 2

000

Dig

oxin

(IML 2000) = 0.99 (CAC) + 0.004 ng/mLr = 0.975


0

1

2

3

4

5

6

7

0 1 2 3 4 5 6 7

Kit A, ng/mL

IMM

ULI

TE 2

000

Dig

oxin

(IML 2000) = 0.96 (Kit A) – 0.09 ng/mLr = 0.971

Deutsch. Precision: 1Intra-Assay, 2Gesamt,3Mittelwert, 4SD (Standardabweichung), 5CV(Variationskoeffizient). Linearity: 1Verdünnung,2Beobachten (B), 3Erwarten (E), 4% B/E, 54 in 4.Recovery: 1Lösung, 2Beobachten (B), 3Erwarten(E), 4% B/E. Specificity: 1Verbindung,2zugesetzte Menge, 3 AusgewieseneKonzentration, 4% Kreuzreaktivität, 5NN: Nichtnachweisbar. Method Comparison: Digoxin:Digoxin.

Español. Precision: 1Intraensayo, 2Total,3Media, 4DS, 5CV. Linearity: 1Dilución,2Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E, 54 en 4.Recovery: 1Solución, 2Observado (O),3Esperado (E), 4%O/E. Specificity:1Compuesto, 2Cantidad añadida, 3Concentraciónaparente, 4% Reacción cruzada, 5ND: nodetectable. Method Comparison: Digoxin:Digoxina.

Français. Precision: 1Intraessai, 2Total,3Moyenne, 4SD, 5CV. Linearity: 1Dilution,2Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 54 dans 4.Recovery: 1Solution, 2Observé (O), 3Attendu(A), 4%O/A. Specificity: 1Composé, 2ajouté, 3Concentration apparente, 4Réaction croisée %.5ND: non détectable. Method Comparison:Digoxin: Digoxine.

Italiano. Precision: 1Intra-serie, 2Totale, 3Media,4SD (Deviazione Standard), 5CV (Coefficiente diVariazione). Linearity: 1Diluizione, 2Osservato(O), 3Atteso (A), 4%O/A, 54 in 4. Recovery:1Soluzione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A.Specificity: 1Composto, 2quantità aggiunta, 3Concentrazione apparente, 4Percentuale diCrossreattività, 5ND: non determinabile. MethodComparison: Digoxin: Digossina.

Português. Precision: 1Entre-ensaios, 2Total,3Média, 4Desvio padrão, 5Coeficiente devariação. Linearity: 1Diluição, 2Observado (O),3Esperado (E), 4%O/E, 54 em 4. Recovery:1Solução, 2Observado (O), 3Esperado (E),4%O/E. Specificity: 1Composto, 2Quantidadeadicionada, 3Apparent Concentration,4Percentagem de reacção cruzada, 5ND: nãodetectável. Method Comparison: Digoxin:Digoxina.

Deutsch

Digoxin – IMMULITE 2000Anwendung: Zur in vitro-Diagnostik unterVerwendung des IMMULITE 2000Systems - zur quantitativen Bestimmungvon Digoxin in Serum oder heparinisiertemPlasma für die Überwachung einermedikamentösen Behandlung mitHerzglykosiden um Toxizität zuvermeiden.Artikelnummern:L2KDI2 (200 tests), L2KDI6 (600 tests)Testcode: DGX Farbe: hellgrün

Klinische RelevanzBei Patienten, die mit Herzglykosidentherapiert werden, haben sichImmunoassays in der Erkennung vonÜberdosierungen als hilfreich erwiesen.Eine Bestimmung des Digoxin im Serumist indiziert (a) bei der Abklärung vonRhythmusstörungen, da diese sowohlAusdruck einer nicht kompensiertenHerzinsuffizienz, als auch einer Digitalis-Intoxikation sein können; (b) wenn Zweifelbestehen hinsichtlich des Typs des


eingenommenen Digitalis Präparates. Insolchen Fällen ist die zusätzlicheBestimmung des Digitoxins erforderlich;(c) bei Verdacht auf unzuverlässigeEinnahme, „Non-Compliance“ desPatienten; (d) zur Erkennung von DigitalisUnter- und Überdosierungen; (e) zurKontrolle der toxischen Reaktion beiPatienten, deren Empfindlichkeitgegenüber Herzglykosiden erhöht ist:Myokardinsuffizienz in Kombination mitHypokaliämie, Hypomagnesämie,Hypercalcämie, Hypoxie und Alkalose; (f)zur Vermeidung von Überdosierungen beisolchen Patienten, deren Nierenfunktion,und damit die Digoxin Ausscheidung,eingeschränkt ist.Die hohe Empfindlichkeit von Digoxin-Assays ist besonders wichtig im Hinblickauf den geringen Unterschied (und diegelegentliche Überlappung) vontherapeutischen und toxischen Digoxin-Blutspiegeln. Eine Intoxikation ist definiertals Arrhythmie oder Störungen derHerztätigkeit in Anwesenheit vonMedikamenten. Smith et al. berichtenSerum Digoxin Konzentrationen von 0,8–2,4 ng/ml (1,0–3,1 nmol/l) in nicht-toxischen Patienten und von 2,1–8,7ng/ml (2,7–11,1 nmol/l) in toxischenPatienten. Die Messungen wurden 6Stunden nach Digoxin Gabe bei Patientenmit normaler Nierenfunktion durchgeführt.Aufgrund verschiedener klinischerUntersuchungen kann generell gesagtwerden, dass bei Verwendung vonDigoxin und seinen Derivaten bei einerSerumkonzentration unter 2,0 ng/ml eineIntoxikation ungewöhnlich, oberhalb2,0 ng/ml dagegen zunehmendwahrscheinlich ist.

MethodikDer IMMULITE 2000 Digoxin Assay ist einkompetitiver Festphasen-Chemilumineszenz-Immunoassay.Inkubationszyklen: 1 × 30 minuten.

ProbengewinnungDie Blutentnahme soll in Röhrchen ohneZusätze oder Trenngel erfolgen. Umirreführend hohe Digoxin Konzentrationenzu vermeiden, soll die Blutentnahme voroder mindestens 6 Stunden nach einerGabe von Herzglykosiden erfolgen.

Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zurKlärung von lipämischen Probenempfohlen.Bei hämolysierten Proben besteht dieMöglichkeit einer unsachgemäßenHandhabung vor Eintreffen im Labor,daher sind die Ergebnisse zurückhaltendzu interpretieren.Die Zentrifugation der Serumproben vordem völligen Abschluss der Gerinnungkann zu Fibringerinnseln führen. Umfehlerhaften Analysenergebnissen infolgevon Gerinnseln vorzubeugen, istsicherzustellen, dass die Gerinnung vorder Zentrifugation der Proben vollständigabgeschlossen ist. Insbesondere Probenvon Patienten unter Antikoagulantien-therapie können eine verlängerteGerinnungszeit aufweisen.Blutentnahmeröhrchen von verschiedenenHerstellern können differierende Werteverursachen. Dies hängt von denverwendeten Materialien und Additiven(Gel oder physische Trennbarrieren,Gerinnungsaktivatoren und /oderAntikoagulantien) ab. IMMULITE 2000Digoxin sind nicht mit allen möglichenRöhrchenvariationen ausgetestet worden.Details der getesteten Röhrchenarten sinddem Kapitel "Alternative Probenarten" zuentnehmen.Erforderliche Menge: 50 µl Serum oderPlasma.

Lagerung: 7 Tage bei 2–8°C, oder2 Monate bei –20°C.

Hinweise undVorsichtsmaßnahmenZur In-vitro-Diagnostik.Reagenzien: Bei 2–8°C lagern. UnterEinhaltung der geltenden gesetzlichenVorschriften entsorgen.Die generell geltendenVorsichtsmaßnahmen sind einzuhaltenund alle Komponenten als potenziellinfektiös zu behandeln. Alle ausmenschlichem Blut gewonnenenMaterialien wurden auf Syphilis,Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2,Hepatitis-B-Oberflächenantigen undHepatitis-C-Antikörper untersucht undnegativ befundet.

Chemilumineszenz-Substrat:Kontamination und direkte


Sonneneinstrahlung vermeiden. SiehePackungsbeilage.

Wasser: Destilliertes oder deionisiertesWasser verwenden.

Im Lieferumfang enthaltenDie Bestandteile sind aufeinanderabgestimmt. Die Aufkleber auf derInnenverpackung werden zurTestdurchführung gebraucht.

Digoxin Kugel-Container (L2DI12)Der barcodierte Kugel-Container enthält200 Kugeln, beschichtet mit Digoxin-Antikörpern (monoklonal, Maus). Bei2–8°C bis zum Ablaufdatum haltbar.L2KDI2: 1 Container. L2KDI6: 3 Container.

Digoxin- Reagenzbehälter (L2DIA2)Mit Barcode. 2 Reagenzien: 5,5 mlalkalische Phosphatase konjugiert mitDigoxin in Puffer und 11,5 ml Puffer. Bei2–8°C bis zum Ablaufdatum haltbar.L2KDI2: 1 Behälter. L2KDI6: 3 Behälter.

Vor Gebrauch den Aufkleber an derPerforation abreißen, ohne dabei dieBarcodierung zu beschädigen. Die Folievon der Oberseite des Containersentfernen. Den Schiebedeckel nach untenin die Führung des Reagenziendeckelseinrasten lassen.

Digoxin- Kalibratoren (L2DIJ3, L2DIJ4)Zwei Fläschchen (niedrig und hoch),jeweils mit 2 ml Digoxin in einer humanenSerum-Matrix. 30 Tage nach dem Öffnenbei 2–8°C haltbar oder 6 Monate bei–20°C (aliquotiert).L2KDI2: 1 Set.L2KDI6: 2 Sets.Vor der Kalibrierung die entsprechendenAufkleber (dem Kit beiliegend) aufGlasöhrchen kleben, so daß die Barcodesvom Barcodereader des Systems gelesenwerden können.

Separat erhältliche Testsystem-KomponentenL2SUBM: Chemilumineszenz-SubstratmodulL2PWSM: WaschmodulL2KPM: ReinigungsmodulLRXT: (Einmal-) Reaktionsgefäße

SDCM: Multikomponentenkontrolle in zweiKonzentrationen.

Ebenfalls benötigtTransferpipetten für die Proben;destilliertes bzw. deionisiertes Wasser;Kontrollen.

TestdurchführungFür eine optimale Funktion des Gerätes istunbedingt zu beachten, dass dieWartungen, wie im IMMULITE 2000-Handbuch beschrieben, regelmäßigdurchgeführt werden.Hinweise zur Vorbereitung, täglichenInbetriebnahme des Systems, derKalibrierung sowie Verfahren zur Test-und Qualitätskontrolle entnehmen Sie bittedem IMMULITE 2000-Handbuch.Empfohlenes Kalibrationsintervall:2 Wochen.Proben zur Qualitätskontrolle:Kontrollen oder Pool-Serum mit Digoxin inmindestens zwei Konzentrationen (niedrigund hoch) verwenden.

Therapeutischer BereichAls Richtwerte für Erwachsene werden inder Literatur folgende Werte genannt(Nierengesunde Patienten, 6 Stundennach Digoxingabe).8

BereichDigoxin,

ng/mlDigoxin,nmol/l

Nicht-toxischer Bereich 0,8 – 2,4 1,0 – 3,1

Toxischer Bereich 2,1 – 8,7 2,7 – 11,1

Diese Grenzwerte sind lediglich alsRichtlinien aufzufassen.

Grenzen der MethodeDie alleinige Bestimmung der DigoxinKonzentration ist nicht ausreichend, umeine Überdosierung zu diagnostizieren,und muss deshalb um zusätzlicheklinische und elektrokardiographischeBefunde ergänzt werden.

Die Interpretation der Ergebnisse kanndurch physiologische, pharmakologische,pathologische und genetische Faktorenbeeinflusst werden.

Das Auftreten von sog. Digoxin LikeImmunoreactive Factors (DLIF) im Serumvon Patienten mit Leber — oderNierenerkrankungen, sowie bei


Neugeborenen und Frauen im 3.Trimesterder Schwangerschaft sollte berücksichtigtwerden. Diese Faktoren können zu falscherhöhten Digoxin Resultaten in vielenkommerziell erhältlichen Immunoassaysführen.Im Falle einer Digitalis-Überdosierung desPatienten sollte die Probe vor der Gabevon Digitalis-Antitoxin wie Digitalis-Antidot-BM o. ä. erfolgen, da die hierinenthaltenen Fab-Antikörperfragmente inDigoxin-Immunoassays interferierenkönnen. Nach der Gabe eines solchenPräparates ist die Digoxin Bestimmung biszur Eliminierung der Fab-Fragmente ausdem Körper nur mit speziellen Methodenmöglich, die in Routinelabors meist nichtverfügbar sind. Bei Patienten mit intakterNierenfunktion kann dies mehrere Tage,bei Patienten mitNierenfunktionsstörungen eine Wocheund länger dauern. Zusätzlich zu den invitro Effekten führt die Gabe von Fab-Fragmenten zum schnellen Anstieg despharmakologisch inaktiven, Fab-gebundenen, zirkulierenden Gesamt-Digitoxin, welches evtl. vonImmunoassays detektiert werden kann.15

Heterophile Antikörper in Humanserenkönnen mit Immunglobulinen aus denAssaykomponenten reagieren undInterferenzerscheinungen innerhalb des invitro Immunoassays verursachen. (Clin.Chem. 1988:34:27-33) Proben vonPatienten, die häufig mit Tier- bzw.Tierserumprodukten zu tun haben, könnendie erwähnten Interferenzen verursachenund zu anomalen Resultaten führen. Dieverwendeten Reagenzien sind sokonzipiert, dass das Risiko einerInterferenz mit den zu messenden Probenminimiert ist. Dennoch können potentiellInteraktionen zwischen seltenen Serenund den Testkomponenten auftreten. Zudiagnostischen Zwecken sollten die mitdem Assay erhaltenen Ergebnisse immerin Kombination mit der klinischenUntersuchung, der Patientenanamneseund anderen Befunden gesehen werden.

LeistungsdatenSiehe Tabellen und Grafiken mitrepräsentativen Daten für den Assay. DieErgebnisse sind als ng/ml ausgedrückt.(Alle Daten wurden – sofern nicht andersangegeben – aus Serumproben in

Röhrchen ohne Gelbarrieren odergerinnungsfördernde Zusätze gewonnen.)

Umrechnungsfaktor:ng/ml × 1,281 → nmol/lMessbereich: 0,5 – 8 ng/ml(0,6 – 10 nmol/l).Analytische Sensitivität: 0,2 ng/ml(0,3 nmol/l).

Präzision: Proben wurden innerhalb von20 Tagen mit jeweils zwei Testansätzen inDoppelbestimmung gemessen (insgesamt40 Bestimmungen und 80Einzelmessungen; siehe Tabelle„Precision“).Linearität: Proben wurden inverschiedenen Verdünnungen getestet.(Repräsentative Daten entnehmen Siebitte der Tabelle „Linearity“.)Wiederfindung: Die getesteten Probenwaren mit drei Digoxin-Lösungen 1:19versetz (15, 30 und 60 ng/ml).(Repräsentative Daten entnehmen Siebitte der Tabelle „Recovery“.)Spezifität: Der Antikörper isthochspezifisch für Digoxin, wenngleich dieKreuzreaktivität zu Lanatosid C undMethyldigoxin signifikant ist (siehe Tabelle„Specificity“).

Bilirubin: Konjugiertes undunkonjugiertes Bilirubin hat inKonzentrationen bis zu 200 mg/l keinenEinfluss auf die Messung, der größer alsdie Impräzision des Assays selbst ist.Hämoglobin: Hämoglobin hat inKonzentrationen bis zu 512 mg/dl keinenEinfluss auf die Messung, der größer alsdie Impräzision des Assays selbst ist.Lipämie: Triglyceride haben inKonzentrationen bis zu 3 000 mg/dlkeinen Einfluss auf die Messung, dergrößer als die Impräzision des Assaysselbst ist.Alternative Probenarten: PassendeSeren und heparinisierte Proben wurdenvon 28 freiwilligen Probanden gesammelt.Verschiedene Mengen an Digoxin wurdenden Proben zugesetzt, welche dann mitIMMULITE 2000 Digoxin bestimmtwurden. Berechnung der linearenRegression:(Na Heparin) = 0,96 (Serum) – 0,03 ng/mlr = 0,988


Mittelwerte:2,75 ng/ml (Serum)2,61 ng/ml (Na Heparin)

Die Ergebnisse zeigen, dass inheparinisiertem Plasma und Serumvergleichbare Werte gemessen werden.Methodenvergleich 1: Der Assay wurdeunter Verwendung von 97Patientenproben mit dem IMMULITEDigoxin Assay der DPC verglichen.Konzentrationsbereich ca. 0,5–6,1 ng/ml.Siehe Grafik 1.) Berechnung der linearenRegression:(IML 2000) = 0,94 (IML) + 0,097 ng/mlr = 0,977

Mittelwerte:1.4 ng/ml (IMMULITE 2000)1.4 ng/ml (IMMULITE)

Methodenvergleich 2: Der Assay wurdeunter Verwendung von 168Patientenproben mit dem Coat-A-CountDigoxin Assay der DPC verglichen.(Konzentrationsbereich ca. 0,5–6 ng/ml.Siehe Grafik 2.) Berechnung der linearenRegression:(IML 2000) = 0,99 (CAC) + 0,004 ng/mlr = 0,975

Mittelwerte:1,3 ng/ml (IMMULITE 2000)1,3 ng/ml (Coat-A-Count)

Methodenvergleich 3: Der Assay wurdefür 169 Proben mit einem weiterenautomatisierten Immunoassay (Kit A)verglichen. (Konzentrationsbereich ca.0,5–6,2 ng/ml. Siehe Grafik 3.)Berechnung der linearen Regression:(IML 2000) = 0,96 (Kit A) – 0,09 ng/mlr = 0,971

Mittelwerte:1,3 ng/ml (IMMULITE 2000)1,5 ng/ml (Kit A)

AnwendungsberatungBei Rückfragen wenden Sie sich bitte anIhre DPC Niederlassung.Hergestellt von Euro/DPC Ltd. unter demQualitätssystem ISO 13485:2003.

Español

IMMULITE 2000 DigoxinaUtilidad del análisis: Para el diagnósticoin vitro con el Analizador IMMULITE 2000— para la medida cuantitativa de digoxinaen suero o plasma heparinizado comoayuda en la monitorización de laadministración terapéutica decardioglucósidos, evitando su toxicidad.Referencia: L2KDI2 (200 tests),L2KDI6 (600 tests)

Código del Test: DGX Código de Color: Verde claro

Resumen y Explicacióndel TestEl inmunoensayo se ha mostradoespecialmente útil para determinar lasobredosis en pacientes tratados conglucósidos cardiácos. Esta técnicatambién es útil: (a) para clarificarsituaciones donde los síntomas de lospacientes pueden ser debidos tanto a unaenfermedad cardiaca intrínseca como auna intoxicación con digitálicos; (b)cuando se duda qué tipo de preparacióncon digitálicos está tomando el paciente –en este caso, tambien es necesario uninmunoensayo de digitoxina; (c) paracuantificar la ingestion de digoxina enpacientes con un protocolo de dosificaciónprevio inadecuado, (d) para documentarcasos de infradigitalización, asi como dedigitálicos (digoxina) en exceso; (e) paramonitorizar la respuesta tóxica enpacientes con enfermedades delmiocardio asociadas con hipocaliemia,hipomagnesemia, hipercalcemia, hipoxia yalcalosis, que son particularmentesensibles a los digitálicos; y (f) para laprevención de sobredigitalización,particularmente en pacientes cuya funciónrenal se encuentra deteriorada o enaquellos en los que se está considerandoun aumento de la dosis de digoxina.

La alta sensibilidad del inmunoensayo dedigoxina es especialmente necesariodebido a las pequeñas diferencias y a lasocasionales superposiciones que existenentre los niveles terapeúticos y tóxicos dedigoxina circulante.13 (La intoxicación sedefine en términos de arritmias y de


interrupciones de la conducción cardiacadebido a la presencia del fármaco). Smithet al han definido concentraciones dedigoxina en suero de 0,8–2,4 ng/ml(1,0–3,1 nmol/l) en pacientes nointoxicados, and 2,1–8,7 ng/ml (2,7–11,1 nmol/l) pacientes intoxicados,basándose en datos tomados 6 horasdespues de la administración delmedicamento en pacientes con unafunción renal normal.8 Investigacionesclínicas mas recientes han confirmado laasociación entre toxicidad y niveles ensuero por encima de los 2 ng/ml.

Principio del análisisIMMULITE 2000 es unenzimoinmunoanálisis competitivo porquimioluminiscencia en fase sólida.Ciclos de incubación: 1 × 30 minutos.

Recogida de la muestraRecoger la muestra en tubos vacios singel, tomando nota de la hora de colección,justo antes de la proxima dosis – o, en sudefecto no antes de seis horas despuésde la administración de estecardioglucósido para evitar resultadosengañosamente elevados.Se recomienda el uso de unaultracentrífuga para aclarar las muestraslipémicas.

Las muestras hemolizadas podrían indicaruna mala manipulación de la muestraantes de ser recibida por el laboratorio; eneste caso, los resultados debeninterpretarse con precaución.La centrifugacion de las muestras desuero antes de que se forme el coagulopuede ocasionar la presencia de fibrina.Para evitar resultados erroneos debidos ala presencia de fibrina, asegurarse que seha formado el coagulo completamenteantes de centrifugar las muestras.Algunas muestras, particularmenteaquellas de pacientes sometidos a terapiaanticoagulante, pueden requerir mayortiempo de coagulacion.Los tubos para recoger sangre dedistintos fabricantes pueden producirvalores diferentes, dependiendo delmaterial del tubo y de los aditivos,incluyendo barreras de gel o barrerasfísicas, activadores de la coagulación y/oanticoagulantes. El Digoxina IMMULITE

2000 no ha sido analizado con todos losdistintos tipos de tubos. Para obtenerdetalles sobre los tipos tubos que se hananalizado, consulte la sección de Tipos deMuestras Alternativos.

Volumen requerido: 50 µL suero oplasma.Conservación: 2–8°C durante 7 días, ohasta 2 meses a –20°C.

Advertencias y precaucionesPara uso diagnóstico in vitro.Reactivos: Mantener a 2–8°C. Desecharde acuerdo con las normas aplicables.Siga las precauciones universales ymanipule todos los componentes como sifueran capaces de transmitir agentesinfecciosos. Los materiales derivados desangre humana han sido analizados y sonnegativos para sífilis; para anticuerposfrente al HIV 1 y 2; para el antígeno desuperficie de hepatitis B y para losanticuerpos de hepatitis C.Sustrato quimioluminiscente: evite lacontaminación y exposición a la luzdirecta del sol. (Ver el prospecto.)Agua: Use agua destilada o desionizada.

Materiales suministradosLos componentes representan un juegocompleto. Las etiquetas incluidas en lacaja son necesarias para el ensayo.

Cartucho de bolas de Digoxina (L2DI12)Con códigos de barras. 200 bolas,recubiertas con anticuerpo monoclonal deratón anti-digoxina. Estable a 2–8°C hastala fecha de caducidad.L2KDI2: 1 cartucho. L2KDI6: 3 cartuchos.

Vial de reactivo de Digoxina (L2DIA2)Con código de barras. Dos reactivos:5,5 ml de fosfatasa alcalina (de intestinode ternera) conjugada con digoxina ensolución tampón, y 11,5 ml de solucióntampon. Estable a 2–8°C hasta la fechade caducidad.L2KDI2: 1 vial. L2KDI6: 3 viales.Antes de usar, cortar la parte superior dela etiqueta en la perforación, sin dañar elcódigo de barras. Quitar el precinto delorificio del vial; encajar la cubierta


deslizante en las rampas de la tapa delreactivo.

Ajustadores de Digoxina (L2DIJ3,L2DIJ4)Dos viales (bajo y alto) que contienen 2 mlcada uno de digoxina en una matriz desuero humano tratado. Estable a 2–8°Cdurante 30 días después de abrise ohasta 6 meses (alicuotados) a –20°C.L2KDI2: 1 juego. L2KDI6: 2 juegos.Antes de procesar adjustadores, colocarlas etiquetas a las alícuotas apropiadas(suministradas con el kit) sobre tubos deensayo, de forma tal que los códigos debarras puedan ser leídos por el lector.

Componentes del kit que sesuministran por separadoL2SUBM: Substrato quimioluminiscenteL2PWSM: Lavado de sondaL2KPM: Kit de limpieza de sondaLRXT: Tubos de reacción (desechables)

SDCM: control multiconstituyente de dosniveles.También necesariosPipetas de transferencia de muestras;agua destilada o desionizada; controles.

EnsayoAviso: para obtener el funcionamientoóptimo, es importante realizar todos losprocedimientos del mantenimiento generalsegún lo definido en el manual deloperador de IMMULITE 2000.Consulte el Manual del operador deIMMULITE 2000 para: la preparación,instalación, ajuste, ensayo yprocedimientos de control de calidad.Intervalo de ajuste recomendado:2 semanas.Muestras de Control de calidad: Usecontroles o pools de suero con dosniveles diferentes, como mínimo, dedigoxina (bajo y alto).

Rangos TerapeúticosLos siguientes resultados están descritosen la bibliografía, basados en los datostomados 6 horas después de la dosis enpacientes con función renal normal.8

GruposDigoxina,

ng/mlDigoxina,

nmol/l

Pacientes nointoxicados 0,8 – 2,4 1,0 – 3,1

Pacientes Intoxicados 2,1 – 8,7 2,7 – 11,1

Estos límites han de considerarse sólocomo una guía.

LimitacionesLas concentraciones de digoxina nodeben ser utilizadas por si solas paradeterminar toxicidad por digitálicos, sinoque estos datos deben sercomplementados con información clínicaadicional y electrocardiogramas.Muchos factores fisiológicos,farmacológicos, patológicos y genéticospueden afectar a la interpretación de losresultados (Ver el apartado de Resumen yExplicación del test).Ha sido descrita la presencia de factoresinmunoreactivos semejantes a digoxina(DLIF) endógenos en el suero depacientes con fallo renal y hepático, enrecien nacidos y en mujeres en el 3er

trimestre de embarazo.14 Estos factorespueden dar lugar a niveles falsamenteelvados de digoxina en variosinmunoensayos comercialmentedisponibles.En caso de sobredosis, las muestrasdeben obtenerse antes de administrar elpreparado de antídoto con anticuerposanti-digoxina (e.g. Digibind®), dado queéste último puede interferir con cualquierinmunoensayo de digoxina. Una vez queel preparado ha sido administrado, sólopueden obtenerse determinacionesprecisas de digoxina con técnicasespecializadas (no disponibles de manerarutinaria en la mayoria de los serviciosclínicos) hasta que los fragmentos Fabhayan sido eliminados del cuerpo: estolleva varios días a los pacientes con unafunción renal intacta, y una semana o mása los pacientes con daño renal. Ademásde los efectos in vitro, estos preparadosde antídoto al administrarse por víaintravenosa, causan una rápida elevaciónde la digoxina total circulante,farmacológicamente inactiva y unida a losfragmentos Fab, que puede ser detectadainmunológicamente.15


Los anticuerpos heterofílicos en el suerohumano pueden reaccionar con lasinmunoglobulinas de los componentes delensayo provocando interferencias con losinmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Las muestras de lospacientes que frecuentemente estánexpuestos a animales o a productosséricos animales pueden presentar estetipo de interferencia que potencialmenteocasione un resultado anómalo. Estosreactivos han sido formulados paraminimizar el riesgo de interferencia, noobstante, pueden darse interaccionesanómalas entre sueros conflictivos y loscomponentes del ensayo. Con fines dediagnóstico, los resultados obtenidos coneste ensayo siempre deben ser usados encombinación con el examen clínico, lahistoria médica del paciente y cualquierotro dato clínico relevante.

Características analíticasPara ver resultados representativos de lascualidades del ensayo, consulte las tablasy los gráficos. Los resultados se expresanen ng/ml. (A no ser que se indique locontrario, todos los resultados fuerongenerados en muestras de suerorecogidas en tubos sin geles oactivadores de la coagulación).

Factor de Conversión:ng/ml × 1,281 → nmol/lIntervalo de calibración: 0,5 – 8 ng/ml(0,6 – 10 nmol/l).Analytical Sensitivity: 0,2 ng/ml(0,3 nmol/l).

Precisión: Las muestras fueronprocesadas por duplicado durante 20 días,en dos tandas de trabajo por día, para untotal de 40 tandas y 80 replicados. (Véasela tabla " Precision ").

Linealidad: las muestras fueronanalizadas con varias diluciones. (Véasela tabla " Linearity " para resultadosrepresentativos).

Recuperación: Se han analizado lasmuestras cargadas 1 a 19 con tressoluciones de digoxina 15, 30 y 60 ng/ml).(Ver la tabla " Recovery " para resultadosrepresentativos).Especificidad: El anticuerpo es altamenteespecífico para la digoxina, aunque el

Lanatósido C y Metildigoxina muestranuna reactividad cruzada significativa(Véase la tabla " Specificity ").Bilirrubina: La presencia de bilirrubibaconjugada y no conjugada enconcentraciones de hasta 200 mg/l notiene ningun efecto en el procedimiento,dentro de la precisión del ensayo.Hemoglobina: La presencia dehemoglobina en concentraciones de hasta512 mg/dl no tiene ningun efecto en elprocedimiento, dentro de la precisión delensayo.Lipemia: La presencia de triacilglicéridosen concentraciones de hasta 3 000 mg/dlno tiene ningun efecto en elprocedimiento, dentro de la precisión delensayo.

Tipo alternativo de muestra: Muestrasiguales de suero y plasma heparinizadofueron recogidas de 28 voluntarios.Distintas cantidades de digoxina fueronañadidas a las muestras, que fueronanalizadas por el procedimientoIMMULITE 2000 Digoxina. Por regresiónlineal:(Heparina Na) = 0,96 (Suero) – 0,03 ng/mlr = 0,988

Medias:2,75 ng/ml (Suero)2,61 ng/ml (Heparina Na)

Los resultados muestran que el plasmaheparinizado esencialmente produceresultados equivalentes al suero.Comparación de métodos 1: El ensayose ha comparado con el ensayoIMMULITE Digoxina de DPC en 97muestras de pacientes. (Intervalo deconcentración: aproximadamente 0,5 a6,1 ng/ml. Véase el gráfico 1). Porregresión lineal:(IML 2000) = 0,94 (IML) + 0,097 ng/mlr = 0,977

Medias:1,4 ng/ml (IMMULITE 2000)1,4 ng/ml (IMMULITE)

Comparación de métodos 2: El ensayose ha comparado con el ensayo Coat-A-Count (RIA) Digoxina de DPC en 168muestras de pacientes. (Intervalo deconcentración: aproximadamente 0,5 a6,0 ng/ml. Véase el gráfico 2). Porregresión lineal:


(IML 2000) = 0,99 (CAC) + 0,004 ng/mlr = 0,975

Medias:1,3 ng/mL (IMMULITE 2000)1,3 ng/mL (Coat-A-Count)

Comparación de métodos 3: El ensayofue comparado con otro inmunoensayoautomatizado (Kit A) en 169 muestras.(Rango de concentraciones: 0,5 a6,2 ng/ml. Véase el gráfico 3). Porregresión lineal:(IML 2000) = 0,96 (Kit A) – 0,09 ng/mlr = 0,971

Medias:1,3 ng/ml (IMMULITE 2000)1,5 ng/ml (Kit A)

Asistencia técnicaPóngase en contacto con el distribuidornacional.Fabricado por EURO/DPC Ltd. bajo un Sistemade Calidad acorde con la ISO 13485:2003.

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IMMULITE 2000 DigoxineDomaine d'utilisation : dosage quantitatifde la digoxine dans le sérum ou le plasmahépariné. Ce test est réservé à un usagediagnostique in vitro avec l'analyseurIMMULITE 2000 et constitue une aide ausuivi de l'administration thérapeutique dece glycoside cardiaque pour en éviter latoxicité.

Référence catalogue : L2KDI2 (200 tests),L2KDI6 (600 tests)

Code produit : DGXCode couleur : vert clair

IntroductionLes tests immunologiques ont prouvéqu'ils étaient particulièrement utiles pourdéterminer les surdosages chez lespatients traités par les glycosidescardiaques. Ce dosage est aussiimportant (a) pour clarifier les situations oùles symptômes des patients peuvent êtredus à une maladie cardiaque intrinsèqueou à une intoxication digitalique; (b) s'il y aun doute concernant la préparationdigitalique prise par le patient - dans cecas un test pour le dosage de la digitoxine

est aussi nécessaire; (c) pour adapter letraitement chez un patient qui présentaitantérieurement un sous-dosage; (d) pourdocumenter des cas de sur ou de sousdigitalisation; (e) pour suivre la réponse autraitement des patients ayant une maladiemyocardique associée à unehypokaliémie, hypomagnésémie,hypercalcémie, hypoxie, alcalose qui sontparticulièrement sensibles à la digitaline;et (f) pour prévenir le surdosage endigitaline, particulièrement chez les sujetsqui ont une fonction rénale altérée ouchez ceux à qui on augmente la posologiede Digoxine.

Une grande sensibilité des testsimmunologiques de Digoxine est vraimentnécessaire en raison d'une superpositionpossible des zones thérapeutique ettoxique de la digoxinémie.13 (Uneintoxication est définie par une arythmie etdes perturbations de la conductioncardiaque dues aux médicaments). Smithet Coll en 1969, ont déterminé lesconcentrations sériques de Digoxinecorrespondant à la zone thérapeutique 0,8à 2,4 ng/ml (1 à 3,1 nmol/l) et à la zonetoxique 2,1 à 8,7 ng/ml (2,7 à 11,1 nmol/l)en se basant sur les données obtenues 6heures après la dernière prise, chez dessujets ayant une fonction rénalenormale. 8 Des études cliniques plusrécentes ont confirmé qu'une toxicitépouvait survenir pour des taux sériquesau-dessus de 2 ng/ml.

Principe du testLe test IMMULITE 2000 Digoxine est unimmunodosage par compétition en phasesolide, en chimiluminescence avecamplification enzymatique.Cycles d'incubation : 1 × 30 minutes.

Recueil des échantillonsPrélever sur tubes ordinaires sans gel, ennotant l'heure du prélèvement, juste avantla prise du médicament ou en tout cas aumoins 6 heures après la dernièreadministration pour éviter des résultatstrompeusement élevés en digoxine.Il est recommandé de clarifier leséchantillons hyperlipémiques parultracentrifugation.Des échantillons hémolysés peuvent êtrerévélateurs d'une préparation inadéquate


du prélèvement avant son envoi aulaboratoire ; il faudra donc interpréter lesrésultats avec prudence.La centrifugation des échantillonssériques avant la formation complète ducaillot peut entraîner la présence defibrine. Pour éviter les résultats erronésdûs à la présence de fibrine, s'assurer dela formation complète du caillot avant decentrifuger les échantillons. Certainséchantillons, en particulier ceux provenantde patients sous anti-coagulants, peuventnécessiter un temps plus long pour laformation du caillot.Des tubes pour prélèvements sanguinsprovenant de fabricants différents peuventdonner des résultats différents, selon lesmatériaux et additifs utilisés, y comprisgels ou barrières physiques, activateursde la coagulation et/ou anticoagulants. Lecoffret Digoxine IMMULITE 2000 n'a pasété testé sur tous les types de tubespossibles. Veuillez consulter le chapitreintitulé Autres Types d'Échantillons pourplus de renseignements sur les tubes quiont été évalués.

Volume nécessaire : 50 µl de sérum oude plasmaConservation : Stable à +2°/ +8°Cpendant 7 jours, ou 2 mois à –20°C.

Précautions d'emploiRéservé à un usage diagnostique in vitro.Réactifs : conserver les réactifs à +2°/+8°C. Eliminer les déchets conformémentà la réglementation en vigueur.Respecter les précautions d'emploi etmanipuler tous les composants du coffretcomme des produits potentiellementinfectieux. Les réactifs dérivés de produitshumains et utilisés dans ce coffret ont subiun test sérologique pour la Syphilis et destests de dépistage pour les anticorps anti-VIH1 et 2, anti-VHC et pour l'antigène desurface de l'hépatite B, qui se sont tousavérés négatifs.

Substrat chimiluminescent : éviter lescontaminations et l'exposition directe à lalumière solaire (voir la fiche technique).Eau : utiliser uniquement de l'eau distilléeou désionisée.

Matériel fourniLes composants de la trousse ne peuventêtre utilisés que conjointement. Lesétiquettes à l'intérieur du coffret sontnécessaires au dosage.

Cartouche de billes Digoxine (L2DI12)Avec code-barres. 200 billes revêtues d'unanticorps monoclonal murin anti-digoxine.Stable à +2°/ +8°C jusqu'à la date depéremption.L2KDI2: 1 cartouche. L2KDI6: 3 cartouches.

Cartouche à réactif Digoxine (L2DIA2)Avec code-barre. Deux réactifs: 5,5 ml dephosphatase alcaline (intestins de veaux)liée à de la digoxine,dans un tampon, et11,5 ml de tampon. Stable à +2°/ +8°Cjusqu'à la date de péremption.L2KDI2: 1 cartouche. L2KDI6: 3 cartouches.Avant l'emploi, retirer la partie supérieurede l'étiquette au niveau des perforationsen ayant soin de ne pas endommager lecode-barres. Retirer le film protecteursitué sur la partie supérieure de lacartouche-réactif ; insérer le couverclecoulissant entre les glissières sur ledessus de la cartouche-réactif.

Ajusteurs Digoxine (L2DIJ3, L2DIJ4)2 flacons d'ajusteurs («bas» et «haut»), de2 ml chacun, de digoxine dans unematrice de sérum humain. Stable à+2°C/+8°C pendant 30 jours aprèsouverture ou 6 mois (aliquoté) à –20 °C.L2KDI2: 1 jeu. L2KDI6: 2 jeux.

Avant d'effectuer une calibration, placerles étiquettes correspondant à l'aliquot(fournies avec le coffret) sur des tubes enverre de sorte que les code-barres soientlisibles par le lecteur.

Composants du coffret fournisséparémentL2SUBM : Substrat chimiluminescentL2PWSM : Solution de lavageL2KPM : Coffret de décontamination del'aiguille de prélèvementLRXT : Godets réactionnels (jetables)

SDCM: contrôle multiparamétrique à deuxniveaux de concentration.


Egalement requisPipettes de transfert d'échantillon ; eaudistillée ou désionisée ; Contrôles.

Protocole de dosageSe reporter au manuel d'utilisation del'IMMULITE 2000 pour : la préparation, ledémarrage du système, les ajustements,le dosage et les procédures de contrôlede qualité.Noter que pour des performancesoptimales, il est important de réalisertoutes les procédures de maintenance deroutine selon les instructions du Manueld'Utilisation IMMULITE 2000.Intervalle d'ajustement recommandé :2 semaines.

Echantillons pour le contrôle dequalité : utiliser des Contrôle ou des poolsde sérums avec au moins deux niveauxde concentration (faible ou élevé) deDigoxine.

Zone thérapeutiqueLes résultats suivants ont été rapportésdans la littérature, basés sur desprélèvements faits 6 heures après la prisethérapeutique, chez des patients ayantune fonction rénale normale.8

GroupeDigoxine

ng/mlDigoxine

nmol/l

Zone thérapeutique 0,8 – 2,4 1,0 – 3,1

Zone toxique 2,1 – 8,7 2,7 – 11,1

Utiliser ces valeurs à titre indicatifuniquement.

LimitesLe seul dosage de digoxinémie ne permetpas d'affirmer la toxicité digitalique, il fautaussi prendre en compte les signescliniques et l'électrocardiogramme.De nombreux facteurs physiologiques,pharmacologiques, pathologiques etgénétiques peuvent affecter l'interprétationdes résultats (voir le chapitre Introduction).L'existence dans le sérum de facteursendogènes ayant une immunoréactivitédigoxine-like (DLIF) a été rapportée chezles patients ayant une insuffisance rénaleet hépatique, les nouveau-nés et lesfemmes enceintes au 3ème trimestre de lagrossesse. 14 Ces facteurs peuvent donner

des résultats de Digoxine faussementélevés avec nombre de tests disponiblesdans le commerce.En cas de surdosage, les échantillonsdoivent être prélevés avantl'administration de l'antidote composé deFab anti-Digoxine (par ex Digibind ) carcelle-ci peut interférer avec tous les testsimmunologiques de dosage de laDigoxine. Dès que ce traitement a étéadministré, des dosages précis deDigoxine ne peuvent être réalisés que pardes techniques spécialisées (qui ne sontpas disponibles en routine dans la plupartdes centres) jusqu'à l'élimination desfragments Fab par l'organisme ce quiprend plusieurs jours chez les patients quiont une fonction rénale intacte et unesemaine ou plus en cas de fonction rénalealtérée. En plus de leurs effets in vitro, cespréparations, administrées en intraveineux, provoquent une augmentationrapide de Digoxine totale circulantepharmacologiquement inactive car liée auFab mais détectée immunologiquement.15

Les anticorps hétérophiles du sérumhumain peuvent réagir avec lesimmunoglobulines faisant partie descomposants du coffret et interférer avecles immunodosages in vitro. [Voir BoscatoLM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Les échantillonsprovenant de patients fréquemmentexposés aux animaux ou aux produitssériques d'origine animale peuventprésenter ce type d'interférence pouvantpotentiellement donner un résultatanormal. Ces réactifs ont été mis au pointafin de minimiser le risque d'interférence,cependant des interactions potentiellesentre des sérums rares et les composantsdu test peuvent se produire. Dans un butdiagnostique, les résultats obtenus avecce dosage doivent toujours être utilisés enassociation avec un examen clinique,l'histoire médicale du patient et d'autresrésultats.

Performances du testConsulter les tableaux et graphiques pourobtenir les données représentatives desperformances de ce test. Les résultatssont donnés en ng/ml. (En l'absenced'indication contraire, tous les résultats ontété obtenus sur des échantillons sériques


recueillis en tubes, sans gel ni activateurde la coagulation).

Facteur de conversion :ng/ml × 1,281 → nmol/lIntervalle de linéarité : 0,5 – 8 ng/ml(0,6 – 10 nmol/l).Sensibilité analytique : 0,2 ng/ml(0,3 nmol/L).

Précision : les échantillons sont dosés enduplicata sur une période qui s'étend sur20 jours, avec deux séries par jours, soit40 séries et 80 replicata au total. (Voir letableau « Precision ».)Test de dilution : des échantillons ont étédosés à différentes concentrations. (Voirle tableau « Linearity » pour des donnéesreprésentatives.)

Test de récupération : des échantillonsdosés ont été chargés dans uneproportion de 1 à 19 avec trois solutionsdigoxine (15, 30 et 60 ng/ml). (Voir letableau « Recovery » pour des donnéesreprésentatives.)Spécificité : L'anticorps est hautementspécifique de la Digoxine, cependant leLanatoside C et la Méthyldigoxineprésente une réaction croisée significative.(Voir le tableau « Specificity ».)

Bilirubine : La présence de bilirubine,conjuguée ou non, n'a aucun effet sur ledosage ni sur sa précision si laconcentration ne dépasse pas 200 mg/l.

Heéoglobine: La présence d'hémoglobinene présente aucun effet sur les résultats nisur la précision du dosage si laconcentration ne dépasse pas 512 mg/dl.

Lipémie : La présence de triglycéridesjusqu'à une concentration de 3 000 mg/dln'interfère ni sur la précision du dosage, nisur les résultats.Utilisation de différents typesd'échantillons : Différents échantillons desérum et de plasma hépariné ont étéprélevés sur 28 volontaires. Des quantitésvariables de Digoxine ont été ajoutés àces échantillons qui ont été dosé avec letest IMMULITE 2000 Digoxine. Parrégression linéaire :(Na Héparine) = 0,96 (Sérum) – 0,03 ng/mlr = 0,988

Moyennes:2,75 ng/ml (Sérum)2,61 ng/ml (Na Héparine)

Les résultats démontrent que le plasmahépariné conduit à des résultatséquivalents à ceux du sérum.Comparaison de méthodes 1 : le test aété comparé au test IMMULITE Digoxinede DPC sur 97 échantillons (intervalle deconcentrations : 0,5 à 6,1 ng/ml environ.Voir graphique 1). Par régression linéaire :(IML 2000) = 0,94 (IML) + 0,097 ng/mlr = 0,977

Moyennes:1,4 ng/ml (IMMULITE 2000)1,4 ng/ml (IMMULITE)

Comparaison de méthodes 2 : le test aété comparé au test Coat-A-CountDigoxine de DPC sur 168 échantillons(intervalle de concentrations : 0,5 à6,0 ng/ml environ. Voir graphique 2). Parrégression linéaire :(IML 2000) = 0,99 (CAC) + 0,004 ng/mlr = 0,975

Moyennes:1,3 ng/ml (IMMULITE 2000)1,3 ng/ml (Coat-A-Count)

Comparaison de méthodes 3 : le test aété comparé à un autre immunodosageautomatisé (Kit A) sur 169 échantillons(intervalle de concentrations : 0,5 à6,2 ng/ml environ. Voir graphique 3). Parrégression linéaire :(IML 2000) = 0,96 (Kit A) – 0,09 ng/mlr = 0,971

Moyennes:1,3 ng/ml (IMMULITE 2000)1,5 ng/ml (Kit A)

Assistance techniqueContacter votre distributeur national. EnFrance distribué par DPC France 90 bdNational 92257 La Garenne-Colombes.Fabriqué par EURO/DPC Ltd. dans le cadre d'unSystème Qualité enregistré sousISO 13485:2003.

Italiano

IMMULITE 2000 DigossinaUso: Per prove diagnostiche in vitro conl'analizzatore IMMULITE 2000 — per lamisurazione quantitativa della Digossinanel siero o nel plasma eparinizzato, qualeausilio nel monitoraggio della


somministrazione terapeutica di questocardioglicoside, evitando la tossicità.

Codice: L2KDI2 (200 test),L2KDI6 (600 test)Codice del Test: DGXColore: Verde Chiaro

Riassunto e Spiegazione delTestIl dosaggio è particolarmente utile nelladeterminazione di sovradosaggi di farmaciin pazienti trattati con glucosidi cardiaci.La tecnica è utile anche (a) per chiariresituazioni in cui i sintomi del pazientepossono essere dovuti ad una patologiacardiaca intrinseca o ad intossicazione dadigitalis; (b) dove rimane il dubbio circa iltipo di preparato di digitalis somministratoal paziente – è necessario anche undosaggio della digitossina; (c) permisurare l'ingestione di digossina inpazienti con dosaggi precedentiinsufficienti; (d) per documentare casi disottodigitalizzazione e di eccesso didigitalis (digossina); (e) per monitorare larisposta tossica in pazienti con malattiecardiache associate ad ipocalemia,ipomagnesemia, ipercalcemia, ipossia ealcalosi, che sono particolarmentesensibili alla digitalis; e (f) per evitare lasovradigitalizzazione, soprattutto inpazienti la cui funzione renale si stiadeteriorando o per cui si contempli unaumento nella dose di digossina.

L'elevata sensibilità del dosaggio delladigossina è particolarmente necessaria acausa delle poche differenze e dellapossibile sovrapposizione che esiste tralivelli terapeutici e tossici della digossinacircolante.13 (L'intossicazione si definiscein termini di aritmie e disturbi dellaconduzione cardiaca dovuti alla presenzadel farmaco). Smith et al hanno registratoconcentrazioni di digossina nel siero da0,8 a 2,4 ng/mL (1,0–3,1 nmol/L) inpazienti non tossici, e 2,1–8,7 ng/mL (2,7–11,1 nmol/L) in pazienti tossici, in base aidati raccolti sei ore dopo lasomministrazione della dose in pazienticon funzioni renali normali.8 Studi clinicipiù recenti hanno confermatol'associazione della tossicità con livellisierici superiori a 2 ng/mL.

Principio del procedimentoIl dosaggio IMMULITE 2000 Digossina èun dosaggio competitivo in fase solida edin chemiluminescenza.Cicli d'incubazione: 1 × 30 minuti.

Raccolta dei campioniPrelevare il sangue in provette semplicisenza barriere di gel, annotando l'ora delprelievo, poco prima della dosesuccessiva – o, in ogni caso, non meno disei ore dopo la somministrazione diquesto cardioglicoside, per evitare risultatidi digossina erroneamente elevati.

Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifugaper schiarire i campioni lipemici.I campioni emolizzati posson indicare iltrattamento non idoneo del campioneprima dell'arrivo al laboratorio; per questomotivo, i risultati devono essereinterpretati con prudenza.La centrifugazione dei campioni di sieroprima che la coagulazione sia completapuò produrre fibrina. Per evitare risultatierrati dovuti alla presenza di fibrina,assicurarsi che il processo dicoagulazione sia completo prima dicentrifugare i campioni. Alcuni campioni,in modo particolare quelli di pazientisottoposti a terapia con anticoagulanti,possono richiedere tempi di coagulazionepiù lunghi.

Provette per il prelievo di sangue diproduttori diversi possono dare valoridifferenti, a seconda dei materiali e degliadditivi usati, incluso gel o barriere fisiche,attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.L'IMMULITE 2000 Digossina non é statoverificato con tutte le possibili variazioni ditipi di provette. Consultare la sezioneriguardante Campioni Alternativi perdettagli sulle provette testate.Volume richiesto: 50 µL di siero oplasma

Conservazione: 7 giorni 2–8°C o 2 mesia –20°C.

Avvertenze e PrecauzioniAd uso diagnostico in vitro.Reagenti: Conservare a 2–8°C. Scartarein conformità alle leggi applicabili.Seguire le precauzioni generali emanipolare tutti i componenti come se


fossero potenzialmente infetti. I materialiderivati dal sangue umano sono statitestati con esito negativo per la Sifilide, glianticorpi Anti-HIV 1 e 2, l'Antigene diSuperficie dell'Epatite B e gli AnticorpiAnti-Epatite C.Substrato chemiluminescente: Evitarela contaminazione e l'esposizione alla lucesolare diretta. (Vedi metodica.)

Acqua: Utilizzare acqua distillata odeionizzata.

Materiali fornitiI componenti costituiscono un unico set.Le etichette all'interno della confezionesono necessarie per eseguire i dosaggi.

Contenitore di Sferette Digossina(L2DI12)Con codice a barre. 200 biglie coattatecon un anticorpo monoclonale murino anti-Digossina. Stabile a 2–8°C fino alla datadi scadenza.L2KDI2: 1 confezione. L2KDI6: 3 confezioni.

Porta Reagente Digossina (L2DIA2)Con codice a barre. Due reagenti: 5,5 mLdi fosfatasi alcalina (intestino di vitello)coniugato con Digossina, in un tampone,e 11,5 mL di tampone. Stabile a 2–8°Cfino alla data di scadenza.L2KDI2: 1 Porta Reagente. L2KDI6: 3 Porta Reagenti.Prima dell'utilizzo rimuovere la partesuperiore dell'etichetta lungo laperforazione senza danneggiare il codicea barre. Togliere il foglio protettivo dallaparte superiore del flacone. Far scattarenella corretta posizione il coperchioscorrevole lungo le guide del coperchiodel reagente.

Calibratori Digossina (L2DIJ3, L2DIJ4)Due flaconi (Basso ed Alto), 2 mLciascuno di Digossina in una matrice disiero umano. Stabile a 2–8°C per 30 giornidopo l'apertura o a –20°C per 6 mesi(aliquotato).L2KDI2: 1 set. L2KDI6: 2 set.Prima di ricalibrare collocare le etichettegiuste sulle provette delle aliquote (fornitecol kit) cosicché i codici a barre possanoessere registrati dal lettore.

Componenti del kit fornitiseparatamenteL2SUBM: Substrato ChemiluminescenteL2PWSM: Tampone di Lavaggio dell'AgoL2KPM: Kit di Pulizia dell'AgoLRXT: Tubi di Reazione (monouso)SDCM: Controllo multi-costituito a duelivelliMateriali richiestiPipette per il trasferimento dei campioni;acqua distillata o deionizzata; controlli.

Procedura del DosaggioAttenzione: per prestazioni ottimali, èimportante effettuare le procedure dimanutenzione di routine cosiccomedefinito nel Manuale dell'OperatoreIMMULITE 2000.Vedi il Manuale dell'Operatore IMMULITE2000 per: preparazione, messa a punto,calibrazione, dosaggio e procedure dicontrollo di qualità.Intervallo di Calibrazione Consigliato:2 settimane.Campioni per il Controllo di Qualità:Utilizzare controlli o campioni di siero conalmento due livelli (Basso ed Alto) diDigossina.

Range TerapeuticoI seguenti risultati sono riportati inletteratura, in base ai dati raccolti sei oredopo la somministrazione della dose inpazienti con funzionalità renale normale.8

GruppoDigossina,

ng/mLDigossina,

nmol/L

Pazienti non tossici 0,8 – 2,4 1,0 – 3,1

Pazienti tossici 2,1 – 8,7 2,7 – 11,1

Considerare questi limiti soltanto comelinee guida.

LimitiNon è consigliabile basarsi solamentesulle concentrazioni di Digossina perdeterminare la tossicità della digitalis;devono essere fornite altre informazionicliniche ed elettrocardiografiche.Molti fattori fisiologici, farmacologici,patologici e genetici possono influenzarel'interpretazione dei risultati (vedi la


sezione Riassunto e Spiegazione delDosaggio).

E' stata documentata la presenza di fattoriendogeni immunoreattivi digossina simili(DLIF) nel siero di pazienti coninsufficienza renale ed epatica, ed inneonati e donne nel terzo trimestre digravidanza. 14 Questi fattori possonodeterminare risultati di Digossinafalsamente elevati in un dato numero didosaggi immunologici disponibili incommercio.In casi di sovradosaggio, i campionidevono essere ottenuti prima disomministrare l'antidoto immuno Fab delladigossina (p.e. Digibind®) poichè èprobabile che questi interferiscano con ildosaggio della Digossina. Doposomministrazione del preparato èpossibile eseguire determinazioni accuratedella digossina soltanto mediante tecnichespecializzate (non comunementedisponibili in molti centri clinici) finchè iframmenti Fab siano stati eliminati dalcorpo; questo processo richiede alcunigiorni in presenza di una funzionalitàrenale integra, ed una settimana o più perpazienti con insufficienza renale. Oltre aglieffetti in vitro, queste preparazioni,somministrate per via endovenosa,causano un aumento rapido nellaDigossina circolante farmacologicamenteinattiva Fab legata che può essereindividuata immunologicamente.15

Gli anticorpi eterofili presenti nel sieroumano possono reagire con leimmunoglobuline presenti nellecomponenti del dosaggio provocandoun'interferenza con i dosaggi in vitro. [VediBoscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Campioni di pazienti routinariamenteesposti agli animali o a prodotti derivati dasiero di animali possono presentarequesto tipo di interferenza causapotenziale di risultati anomali. Questireagenti sono stati formulati perminimizzare il rischio di interferenze,tuttavia, possono verificarsi interazionipotenziali tra sieri rari e componenti deltest. A scopo diagnostico, i risultati ottenuticon questo dosaggio devono sempreessere utilizzati unitamente all'esameclinico, all'anamnesi del paziente e adaltre indagini di laboratorio.

Prestazioni del DosaggioVedi tavole e grafici per datirappresentativi. I risultati sono indicatiin ng/mL. (Laddove non diversamentespecificato, tutti i dati sono stati generatisu campioni di siero raccolti in provettesenza gel separatore o additivi chefavoriscano la formazione di coaguli.)Fattore di Conversione:ng/mL × 1,281 → nmol/LGamma di calibrazione: 0,5 – 8 ng/mL(da 0,6 a 10 nmol/L).Sensibilità Analitica: 0,2 ng/mL(0,3 nmol/L).Precisione: I campioni sono stati elaboratiin doppio nel corso di 20 giorni, due seduteal giorno, per un totale di 40 sedute ed 80replicati. (Vedi la tabella “Precision”)Linearità: I campioni sono stati dosati avarie diluizioni (Vedi la tabella “Linearityper dati rappresentativi).

Recupero: Sono stati dosati campioni1:19 cui sono state aggiunte tre soluzioni(15, 30 e 60 ng/mL) di Digossina (Vedi latabella “Recovery” per datirappresentativi).Specificità: L'anticorpo è altamentespecifico per la digossina, sebbene ilLanatoside C e la Metildigossinapresentino una crossreattività significativa.(Vedi la tabella "Specificity".)Bilirubina: La presenza di bilirubinaconiugata e non coniugata inconcentrazioni fino a 200 mg/L non haeffetto sulla procedura entro il range diprecisione del dosaggio.

Emoglobina: La presenza di emoglobinain concentrazioni fino a 512 mg/dL non hanessun effetto entro il range di precisionedel dosaggio.Lipemia: La presenza di trigliceridi inconcentrazioni fino a 3 000 mg/dL non hanessun effetto sulla procedura entro ilrange di precisione del dosaggio.Tipo di Campione Alternativo: Sonostate aggiunte quantità variabili diDigossina a campioni misti di sieroprovenienti da 28 volontari ed analizzaticon il dosaggio IMMULITE 2000Digossina. Mediante regressione lineare:(Eparina sodica) = 0,96 (Siero) – 0,03 ng/mLr = 0,988


Valore medio:2,75 ng/mL (Siero)2,61 ng/mL (Eparina sodica)

I risultati mostrano che i campioni diplasma eparinizzato produconoessenzialmente risultati equivalenti alsiero.Paragone dei metodi 1: La prova è stataparagonata al Dosaggio IMMULITEDigossina della DPC in 97 campioni.(Gamma di concentrazione: da 0,5 a6,1 ng/mL circa. Vedere la grafica 1.)Mediante regressione lineare:(IML 2000) = 0,94 (IML) + 0,097 ng/mLr = 0,977

Valore medio:1,4 ng/mL (IMMULITE 2000)1,4 ng/mL (IMMULITE)

Paragone dei metodi 2: La prova è stataparagonata al dosaggio Coat-A-CountDigossina della DPC in 168 campioni.(Gamma di concentrazione: da 0,5 a6 ng/mL circa. Vedere la grafica 2.)Mediante regressione lineare:(IML 2000) = 0,99 (CAC) + 0,004 ng/mLr = 0,975

Valore medio:1,3 ng/mL (IMMULITE 2000)1,3 ng/mL (Coat-A-Count)

Paragone dei metodi 3: La prova è stataparagonata al un altro immunodosaggioautomatizzato (Kit A) in 169 campioni.(Gamma di concentrazione: da 0,5 a6,2 ng/mL circa. Vedere la grafica 3.)Mediante regressione lineare:(IML 2000) = 0,96 (Kit A) – 0,09 ng/mLr = 0,971

Valore medio:1,3 ng/mL (IMMULITE 2000)1,5 ng/mL (Kit A)

Assistenza tecnicaContattare il distributore nazionale.Prodotto dalla EURO/DPC Ltd. nell'ambito di unSistema di Qualità Certificato ISO 13485:2003.

Português

IMMULITE 2000 DigoxinaUtilização: Para uso in vitro com oAnalisador IMMULITE 2000 — para odoseamento quantitativo da digoxina no

soro e plasma heparinizado, como auxíliona monitorização da administraçãoterapêutica deste cardioglicosido, demodo a evitar zonas de toxicidade.Números de catálogo: L2KDI2 (200testes), L2KDI6 (600 testes)Código do teste: DGX Cor: Verde claro

Sumário e explicação do testeOs imunoensaios têm-se demonstradoparticularmente úteis na determinação deoverdose de drogas em doentes tratadoscom cardioglicosidos. Esta técnicatambém é útil para: (a) esclarecersituações onde os sintomas do doentepossam ser causados tanto por doençacardíaca intrínseca ou intoxicação digital;(b) quando existirem dúvidasrelativamente ao tipo de preparaçãodigital que o doente está a tomar (oimunoensaio de digitoxina torna-senecessário também nesse caso) ; (c) paramedir a ingestão de digoxina em doentescom uma história inadequada dedosagens anteriores; (d) nadocumentação de casos de carênciaassim como de excesso de digitais(digoxina); (e) na monitorização daresposta tóxica em doentes com doençasdo miocárdio associadas comhipocalcémia, hipomagnesémia,hipercalcémia, hipoxia e alcalose, que sãoparticularmente sensíveis a digitais; e (f)na prevenção de excesso de digitais,particularmente em doentes cuja funçãorenal está em deterioração ou para quemuma dosagem superior de digoxina está aindicada.

A alta sensibilidade do imunoensaio dedigoxina é especialmente necessária deacordo com as pequenas diferenças esobreposição ocasional que existem entreníveis terapêuticos e tóxicos de digoxinacirculante.13 (A Intoxicação é definida emtermos de arritmias e distúrbios decondução cardíaca devido à presença dadroga.) Smith et al relataramconcentrações de digoxina em soro de0,8–2,4 ng/mL (1,0–3,1 nmol/L) emdoentes não tóxicos, e 2,1–8,7 ng/mL(2,7–11,1 mol/L) em doentes tóxicos,baseados em dados colhidos 6 horasapós administração da dose em doentescom função renal normal.8 Investigaçõesclínicas mais recentes confirmaram a


relação de toxicidade com níveis de sorosuperiores a 2 ng/mL.

Princípio do ProcedimentoO kit de IMMULITE 2000 Digoxina é umimunoensaio enzimático de fase sólida,competitivo por quimioluminescência.Ciclos de incubação: 1 × 30 minutos.

ColheitaRecolha o sangue em tubos simples sembarreiras de gel, anotando a hora decolheita, imediatamente antes da próximadose — ou nunca menos de seis horasapós a administração destecardioglicosido, para evitar falsosresultados altos de digoxina.Recomenda-se o uso de uma ultracentrífuga para clarear amostraslipémicas.

Amostras hemolisadas podem indicartratamento incorrecto de uma amostraantes do envio para o laboratório; portantoos resultados devem ser interpretadoscom cuidado.A centrifugação de amostras de soroantes da formação completa do coágulopode resultar na presença de fibrina. Paraprevenir resultados errados devido àpresença de fibrina, certifique-se que aformação do coágulo foi completa antesda centrifugação das amostras. Algumasamostras, em especial as de doentes querecebem terapia anticoagulante podemrequerer um maior tempo de formação docoágulo.Os tubos para colheita sanguínea dediferentes fabricantes, podem originardiferentes valores, dependendo dosmateriais e aditivos, incluíndo gel oubarreiras fisicas, activadores do coáguloe/ou anti coagulantes. IMMULITE 2000Digoxina não foram ainda testados comtodas as possiveis variações originadaspelos tipos de tubos. Consultar a secçãoTipos de Amostras Alternativas para obterdetalhes sobre os tubos que foramtestados.

Volume de Amostra: 50 µL de soro ouplasma.Estabilidade: 7 dias a 2–8°C, ou 2 mesesa –20°C.

PrecauçõesPara uso de diagnóstico in vitro.Reagentes: Manter a 2–8 °C. Elimine deacordo com as leis aplicáveis.

Manipule com as devidas precauçõestodos os materiais capazes de transmitirdoenças infecciosas. As matérias primas,obtidas de soro humano, foram testadas,revelando resultados negativos para asífilis, para os anticorpos do vírus daimunodeficiência humana (HIV) 1 e 2;para o antigénio de superfície da hepatiteB (HBsAg) e para os anticorpos do vírusda hepatite C.Substrato quimioluminescente: Evitecontaminação e exposição à luz directa(ver bula do substrato).Água: Use água destilada oudesionizada.

Materiais FornecidosOs componentes formam um conjunto unoe indivisível. Os códigos de barras nointerior das caixas são necessários para oensaio.

Embalagem de pérolas de Digoxina(L2DI12)Com código de barras. Contém 200pérolas revestidas com anticorpomonoclonal de rato anti-digoxina. Estávelaté a data de validade a 2–8°C.L2KDI2: 1 embalagem. L2KDI6: 3 embalagens.

Embalagem de Reagente de Digoxina(L2DIA2)Com código de barras. Dois reagentes:5,5 ml de fosfatase alcalina (de intestinobovino) conjugada com digoxina,tamponizada, e 11,5 ml de tampão.Estável até à data de validade a 2–8°C.L2KDI2: 1 embalagem. L2KDI6: 3 embalagens.Antes de utilizar, retire a etiqueta deprotecção da tampa deslizante; levante atampa,remova o remanescente daetiqueta com o cuidado de não danificar ocódigo de barras. Remova o selo dealumínio do topo da embalagem, encaixea tampa deslizante nas ranhuras everifique se a tampa desliza.


Ajustes de Digoxina (L2DIJ3, L2DIJ4)Dois frascos (nível alto e baixo), 2 mlcada, de digoxina numa matriz de sorohumano. Estável, após a abertura,durante 30 dias a 2–8°C, ou por 6 meses(aliquotado) a –20°C.L2KDI2: 1 conjunto. L2KDI6: 2 conjuntos.

Antes de realizar qualquer ajuste, coloqueas etiquetas de alíquota apropriadas(fornecidas com o "kit") em tubos deamostra de forma que os códigos debarras possam ser lidos pelo dispositivode leitura do aparelho.

Componentes do kit fornecidosseparadamenteL2SUBM: Substrato quimioluminescenteL2PWSM: Solução de lavagemL2KPM: Kit de limpeza do pipetadorLRXT: Tubos de reacção (descartáveis)

SDCM: Controlo multiparamétrico de doisníveis.Também necessário :Pipetas de transferência de amostra; águadestilada ou desionizada; controlos.

Procedimento de doseamentoTêr em atenção que para obter umdesempenho óptimo, é importanteefectuar todos os procedimentos demanutenção de rotina conforme definidono Manual de Operador doIMMULITE 2000.Consulte o Manual do Operador deIMMULITE 2000 para para instruçõessobre preparação, ajuste, doseamento eprocedimentos de controlo de qualidade.Intervalo entre ajustes aconselhável:2 semanas.Amostras de controlo de qualidade:Utilize controlos ou "pools" com, pelomenos, dois níveis (alto e baixo) dedigoxina.

Faixa terapêuticaOs seguintes resultados encontram-sedescritos na literatura, baseados emdados obtidos seis horas após aadministração de doses em doentes comfunção renal normal.8

GrupoDigoxina,

ng/mLDigoxina,

nmol/L

Doentes não tóxicos 0,8 – 2,4 1,0 – 3,1

Doentes tóxicos 2,1 – 8,7 2,7 – 11,1

Considere estes limites apenas comodirectrizes.

LimitaçõesNão é aconselhável confiar unicamentenas concentrações de digoxina para adeterminação de toxicidade por digitais, eeste método deve ser complementado porinformação electrocardiográfica e clínicaadicional.

Vários factores fisiológicos,farmacológicos, patológicos e genéticospodem afectar a interpretação dosresultados (veja Sumário e Explicação nasecção de Teste).A presença de factores imunoreactivosendógenos similares à digoxina (DLIF)tem sido relatada no soro de doentes cominsuficiência renal e hepática, em recém-nascidos e mulheres no terceiro trimestrede gestação.14 Estes factores podem darorigem a resultados falsamente elevadosde Digoxina em vários ensaios comerciais.Em casos de dosagem excessiva, asamostras devem ser obtidos antes daadministração de preparações de antídotoimunológico Fab de digoxina (porexemplo, Digibind®) já que se espera queestes interfiram com qualquerprocedimento de imunoensaio dedigoxina. Assim que tal preparação foradministrada, apenas se poderão realizardeterminações exactas de digoxinaatravés de técnicas especializadas (quenão estão habitualmente disponíveis namaioria das clínicas) até os fragmentos deFab serem eliminados do corpo: esteprocesso demora vários dias para doentescom a função renal intacta, e uma semanaou mais para doentes com deterioraçãorenal. Além dos efeitos in vitro, estaspreparações, administradasintravenosamente, causam uma elevaçãorápida na digoxina total, ligada a Fab,farmacologicamente inactiva, que podeser detectada imunológicamente.15

Os anticorpos heterófilicos no sorohumano podem reagir com asimunoglobulinas presentes no ensaio,causando interferência com os


imunoensaios in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Amostras de doentesexpostas em rotina a produtos ou sorosde animais podem demonstrar este tipode interferência, potencial causador deresultados anómalos. Estes reagentesforam formulados para minimizar o riscode interferência, contudo podem ocorrerpotenciais interacções entre soros (raros)e componentes do teste. Para fins dediagnóstico, os resultados obtidos nesteensaio devem ser sempre analisados emcombinação com o exame clínico, históriade medicação do doente e outrosachados que possam correlacionar.

Características do EnsaioConsulte Tabelas e Gráficos para dadosrepresentativos do desempenho dodoseamento. Os resultados sãoapresentados em ng/mL. (Salvo referênciaem contrário, todos os dados provêm deamostras de soro colhidas em tubos semanticoagulantes, barreiras de gel ouaditivos promotores da coagulação.)

Factor de conversão:ng/mL × 1,281 → nmol/LCalibração: 0,5 – 8 ng/mL(0,6 to 10 nmol/L).Sensibilidade Analítica: 0,2 ng/mL(0,3 nmol/L).

Precisão: Amostras foram processadasem duplicado num período de 20 dias, doisensaios por dia, perfazendo um total de 40ensaios e 80 réplicas. (Consulte a tabela“Precision”.)Linearidade: As amostras foramdoseadas sob várias diluições. (Consultea tabela " Linearity " para dadosrepresentativos.)

Recuperação: Às amostras foramadicionadas na relação de 1 para 19 trêssoluções digoxina (15, 30 e 60 ng/mL) dedigoxina antes do doseamento. (Vertabela de " Recovery " para dadosrepresentativos.)Especificidade: O anticorpo é altamenteespecífico para a Digoxina, embora oLanatosido C e a Metildigoxina exibamreacção cruzada significativa. (Ver tabelade " Specificity ".)

Bilirrubina: A presença de bilirubinaconjugada e não conjugada emconcentrações até 200 mg/L não temefeito no procedimento dentro da precisãodo ensaio.

Hemólise: A presença de hemoglobinaem concentrações até 512 mg/dL não temefeito nos resultados, dentro da precisãodo ensaio.

Lipémia: A presença de triglicéridos emconcentrações até 3 000 mg/dL não temefeito nos resultados, dentro da precisãodo ensaio.Tipo de amostras alternativas: Foramcolhidas amostras de 28 voluntários(soros e plasmas heparinizados):Adicionou-se digoxina ás amostras edoseou-se com o método de IMMULITE2000 Digoxina. Regressão linear:(Na Heparin) = 0,96 (Soro) – 0,03 ng/mLr = 0,988

Médias:2,75 ng/mL (Soro)2,61 ng/mL (Na Heparin)

Os resultados mostram valoresequivalentes entre o soro e plasmaheparinizados.Comparação de Métodos 1: Odoseamento foi comparado ao Kit deDigoxina IMMULITE da DPC em 97amostras de doentes. (Zona de trabalho:aproximadamente 0,5 a 6,1 ng/mL.Consulte o gráfico 1.) Regressão linear:(IML 2000) = 0,94 (IML) + 0,097 ng/mLr = 0,977

Médias:1,4 ng/mL (IMMULITE 2000)1,4 ng/mL (IMMULITE)

Comparação de Métodos 2: Odoseamento foi comparado ao Kit deDigoxina Coat-A-Count da DPC em 168amostras de doentes. (Zona de trabalho:aproximadamente 0,5 a 6,0 ng/mL.Consulte o gráfico 2.) Regressão linear:(IML 2000) = 0,99 (CAC) + 0,004 ng/mLr = 0,975

Médias:1,3 ng/mL (IMMULITE 2000)1,3 ng/mL (Coat-A-Count)

Comparação de Métodos 3: Odoseamento foi comparado a outroimunoensaio automatizado (Kit A) em 169amostras de doentes. (Zona de trabalho:


aproximadamente 0,5 a 6,2 ng/mL.Consulte o gráfico 3.) Regressão linear:(IML 2000) = 0,96 (Kit A) – 0,09 ng/mLr = 0,971

Médias:1,3 ng/mL (IMMULITE 2000)1,5 ng/mL (Kit A)

Assistência TécnicaPor favor contacte o seu DistribuidorNacional.Fabricado pela EURO/DPC Ltd. de acordo como Sistema de Qualidade registado segundo anorma ISO 13485:2003.

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