저 시-비 리-동 조건 경허락 2.0 한민
는 아래 조건 르는 경 에 한하여 게
l 저 물 복제, 포, 전송, 전시, 공연 송할 수 습니다.
l 차적 저 물 성할 수 습니다.
다 과 같 조건 라야 합니다:
l 하는, 저 물 나 포 경 , 저 물에 적 허락조건 확하게 나타내어야 합니다.
l 저 터 허가를 러한 조건들 적 지 않습니다.
저 에 른 리는 내 에 하여 향 지 않습니다.
것 허락규약(Legal Code) 해하 쉽게 약한 것 니다.
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저 시. 하는 원저 를 시하여야 합니다.
비 리. 하는 저 물 리 적 할 수 없습니다.
동 조건 경허락. 하가 저 물 개 , 형 또는 가공했 경에는, 저 물과 동 한 허락조건하에서만 포할 수 습니다.
학 사 학 논
암 포주에 시스플라틴 내
지 자 분
Gene expressions as resistant markers
to cisplatin in bladder cancer cell lines
2013 2 월
울 학 학원
학과 사과
이 우
A thesis of the Master’s degree
Gene expressions as resistant
markers to cisplatin in bladder
cancer cell lines
암 포주에 시스플라틴
내 지 자 분
February 2013
The Department of Urology,
Seoul National University
College of Medicine
Jeong Woo Lee
암 포주에 시스플라틴
내 지 자 분
지도 이 식
이 논 학 사 학 논 출함
2012 10 월
울 학 학원
학과 뇨 과학 공
이 우
이 우 학 사 학 논 인 함
2012 12 월
원 장 재 원 (인)
부 원장 이 식 (인)
원 변 (인)
학 논 원 공 스에 한 동
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공하는 것에 동 합니다.
1. 동 사항
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복 할 경우 작 내용 변경하지 않는 범 내에 복 를
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논 목 : 암 포주에 시스플라틴 내 인자 자
변 분
학 구분: 사 ■ · 사 □
학 과: 학과
학 번: 2007-23318
연 락 처:
작 자: 이 우 (인)
출 일: 2012 10 월 25 일
울 학 장 귀하
i
: Cisplatin 진행 암 료에 있어 가장 효과 인
항암 학요법 이나, 다양한 자 또는 억 를 통해 약
내 이 생한다. 라 cisplatin에 한 약 내 극복
료 향상 해 매우 요하다. 본 연구에 는 암
포주 cisplatin 내 암 포주 자
분 하여 cisplatin 내 에 여하는 자를 인하고 약 내
규명하는데 공하고자 하 다.
법: 미국 ATCC에 도입한 인체 암 포주 (T24)
cisplatin 농도 2.0 μg/ml에 내 보이는 포주 (T24R2)를
이용하여 mRNA expression analysis (cDNA microarray)를 통해
T24 T24R2 자 차이를 구하 다. 이
자 (fold change ≥2, p-value <0.05)를 실시간 합효소
연쇄 통해 인하 다.
ii
결과: cDNA microarray 분 결과 과 자
3가지 암 경 ( 포고사, p53 신 경 , 포주 )
PRKAR2A, PRKAR2B, CYCS, Bcl-2, BIRC3, DFFB, CASP6,
CDK6, CCNE1, STEAP3, MCM7, ORC2, ORC5, ANAPC1,
ANAPC7, CDC7, CDC27, SKP1 등 18개 자가 실시간
합효소 연쇄 에 2 이상 차이를 보 다. 특히,
MCM7, Bcl-2, CYCS, PRKAR2B는 cDNA microarray 또는
실시간 합효소 연쇄 에 4 이상 (fold change ≥4) 이
증가 었다.
결 : T24 포주 하여 T24R2 포주에 과
18개 자는 암 cisplatin에 한 내 생과
이 있 것 생각한다.
----------------------------------------------------------------------------------------------
주요어: 암, cisplatin, 약 내 , cDNA microarray, 실시간
합효소 연쇄
학 번: 2007 – 23318
iii
목 차
.............................................................................. i
목차............................................................................ iii
그림 목 .......................................................... iv
.............................................................................1
실험재료 법 .........................................................3
결과.............................................................................9
고찰...........................................................................20
참고 헌 ....................................................................28
( ) ...............................................................39
iv
그림 목
1 List of primers. .................................................11
그림 1 Up-regulated genes related to apoptosis.
(A) 7 significant up-regulated genes with symbol,
name, function, and fold change between T24 and
T24R2. (B) Gene expression analysis by
quantitative real-time PCR. ......................................13
그림 2 Up-regulated genes related to p53
signaling pathway. (A) 4 significant up-regulated
genes with symbol, name, function, and fold change
between T24 and T24R2. (B) Gene expression
analysis by quantitative real-time PCR. ...................15
그림 3 Up-regulated genes related to cell cycle.
v
(A) 10 significant up-regulated genes with symbol,
name, function, and fold change between T24 and
T24R2. (B) Gene expression analysis by
quantitative real-time PCR. ......................................16
1
암 계 체 암 남 에 생 도가 5 ,
여 에 7 에 이르고, 미국과 럽 경우 매 50,000-
70,000여명에 생한다 (1-3). 암 진단시 30%가
침 이며, 장 에 국한 침 암 경우 근
출 이 료 이나, 이 20-50%는 원격 이
진행하거나 5-15%에 국소 재 한다 (4). 이 경우 cisplatin
본 한 MVAC (methotrexate, vinblastine, adriamycin,
cisplatin), 또는 GC (gemcitabine, cisplatin) 병합요법이
항암 학요법 이용 나, 약 30%에 에 실 하고,
부분 1 내에 cisplatin에 한 내 에 재 한다 (5-6).
그러나 1차 항암 학요법에 실 하거나 재 할 경우 재 립
효과 인 2차 항암 학요법 가 없는 실 이다. 라
cisplatin에 한 암 내 극복하는 것 진행 암
료 향상 해 매우 요하다.
근 항암 학요법 에 한 암 내 생에 특
자들 역할이 지면 여러 종 암 료 략에
분자생 학 연구들이 주목 고 있다. 암 경우도
cisplatin에 한 내 생 히 는 여러 연구들이
진행 어 포 내 cisplatin 축 감소시키는 약 달 변
(changes in drug transport), 손상 DNA 회복 (DNA repair)
또는 DNA 손상 항 (DNA damage tolerance mechanism)
변 , 포고사 경 변 (changes in the apoptotic cell death)
2
등 여러가지 가 들 시하고 있 나, 아직 실히 립 어 실
임상에 용 고 있는 것 없는 실 이다 (7-17).
cDNA microarray는 자 칩 이용해 개에 만개
자 동시에 분 할 있는 특징 에 여러 암
연구에 많이 이용 고 있다. 특히 항암 학요법 작용 내
생에 있어 자 연구에 히 이용 고 있다. 암
포에 cisplatin 작용 특 한 능 DNA 므
cisplatin 내 암 포에 자 분 연구는 그 내
뿐만 아니라 cisplatin 내 암에 한 새 운 료
개 에도 도움이 것이다 (18-19).
본 연구에 는 mRNA expression analysis (cDNA
microarray)를 이용하여 T24 암 포주 cisplatin 내
암 포주 (T24R2) 자 분 하고, 실시간
합효소 연쇄 통해 cisplatin 내 암 포주 독특한
자 특징 알아냄 써, 암에 cisplatin 내
자들 알아보고자 하 다.
3
실험 재료 법
1. 암 포주 양 (cell lines and culture)
암 포주는 미국 ATCC (American Type Culture
Collection, Rockville, MD)에 도입한 인체 암 포주 T24를
사용하 다. Cisplatin 내 포주는 T24 포주를 cisplatin 0.5
μg/ml부 2 μg/ml 지 단계 노출 후 양하면 포 생존
인한 후 립한 T24R2를 실험에 사용하 다 (20-22).
포주는 10mM HEPES-buffer (Gibco Laboratories, Grand
Island, NY), 100 units/ml penicilline과 100 μg/ml
streptomycin (penicillin-streptomycin solution, Gibco
Laboratories, Grand Island, NY), 56oC에 30분간 등 시킨
10% fetal bovine serum (Gibco Laboratories, Grand Island,
NY) 첨가한 RPMI 1640 양액 (Gibco Laboratories, Grand
Island, NY) 사용하여 37oC 5% CO2-95% air 항 항습 에
양하 고, 단 포 부착하게 하여 장시 다.
2. RNA 추출과 cDNA 합 (RNA extraction and
4
cDNA synthesis)
체 RNA는 T24 T24R2 포주 부 mirVanaTM microRNA
isolation kit (Ambion)를 이용하여 조사 사용 법에 라
추출하 다. RIN9 이상 농도 도 A260/A280에
1.8~2.1 범 에 있는 RNAs는 cDNA 합 해 사용하 다.
cDNA 증폭 이 틴 지 amplified RNA (aRNA)를
해 는 GeneChip® IVP Express kit (Affymetrix)를 이용하 다.
이 틴 지 aRNA 생 한 Affymetrix GeneChip®
kit 사용 차는 조사 사용 법에 라 in vitro transcription,
hybridization과 워싱 스캐닝하여 행하 다.
3. 자 프 일 한 microarray 분
(Microarray analysis for gene expression profiles)
지 aRNA는 효소, 염, unincorporated 뉴클 타이드
거를 해 하 며, 약 15μg aRNA는 5x Array
Fragmentation Buffer를 이용하여 94oC에 35분 동안
학 단편 하 다. 지 단편 aRNA는 45oC에
16시간동안 GeneChip® kit에 합 (hybridize)하 다. 합
probe array는 Fluidics Station 450 (Affymetrix)를 이용하여
5
염색과 척 행하 다. 염색 GeneChip probe array는
GeneChip® Scanner 3000+ 7G (Affymetrix) 를 이용하여
570 nm에 하 다.
4. Microarray 데이 규 분 (Microarray
data normalization and analysis)
CEL 일 데이 분 해 GenPlexTM 소프트웨어 버 3.0
(ISTECH Inc., Goyang, Korea) 사용하 다. MAS5 알고리즘
자 요약과 54,120 probe 트를 포함한 MicroDBTM
Data Mining Tool 소프트웨어 (Affymetrix, Santa Clara, CA)에
해 분 GeneChip® Human Genome HG-U133 Plus 2.0
array 데이 신 계산 (signaling calculation) 해
사용하 다. U133 plus 2.0 chip 38,573개 자 클러스 를
나타내는 54,120 probe 트를 포함한 특징 가지고 있다. 시료
자 Affymetrix사 를 통해 분 하 다.
T24 T24R2 포주 사이 자 평균차, 변 (fold
change)는 Data Mining Tool 소프트웨어 (Affymetrix, Santa
Clara, CA)를 이용하여 인하 다. 자 clustering 분
GENECLUSTER 1.0 (MIT, Cambridge, MA)를 이용하여
6
행하 다. 변 보이는 자들 Onto-Express를
이용하여 그들 생 학 능에 고 분 하 다. 또한
자 데이 를 나타내 해 GenMAPP 소프트웨어를
사용하 다 (http://www.genmapp.org). 쉽게 분 지 않
자들 능 clustering 분 에 하 다.
5. RNA 추출과 자 에 한 실시간 합효소
연쇄 분 (RNA extraction and real time-PCR
analysis of gene expression)
Cisplatin 내 인간 암 포주 (T24R2)를 하여 RNeasy
Mini kit (Qiagen)를 이용하여 체 RNA를 분리하 다. cDNA는
oligo(dT) 프라이 Omniscript reverse transcriptase enzyme
(Qiagen)를 이용하여 조사 사용 법에 라 생산하 다. cDNA
microarray 부 얻 자들과 GAPDH mRNA real time-
PCR ABI 7500 detection system (Applied Biosystems)과
SYBR Green I (Roche) 이용하여 행하 다. 시 체
(primer)는 PCR 생산 이 200bp 미만이 도 계하 다.
PCR 처 95oC에 10분 동안 변 과 거 다 , 다시
95oC에 10 , 복원냉각 도 (annealing temperature)에
7
10 , 그리고 72oC에 10 동안 extention하여 40회
사이클 행하 다. 실시간 합효소 연쇄 에 한 특이
시 체 probe는 1에 나타낸 것 사용하 다.
Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)
beta-actin normalization 한 reference 자
사용하 며 mRNA threshold cycle 법
이용하여 량 하 다. Fold change는 comparative CT (2-
ΔΔCT) 법에 해 계산하 다. 모든 어도 2회 이상
행하 다.
6. 통계처리
데이 는 편차 평균값 나타내었다. 실시간 합효소
연쇄 에 해 얻어진 two variables numerical values 사이
계는 Mann-Whitney U test를 이용하여 분 하 다. Three
variables 사이 계는 Bonferroni adjusted Mann-Whitney U
test를 이용하여 분 하 다. Expert statview® 분 소프트웨어
(Version 4; SAS Institute Inc., CARY, NC, USA)는 경우 모
사용하 다. 차이가 있게 자들 fold change (cutoff
=2.0) Welch’s t-test (p-value ≤0.05)를
8
분 하 다. 모든 실험 3회 행하 다.
9
결 과
mRNA expression analysis (cDNA microarray)를 이용하여
Welch’s test 결과 (p-value ≤0.05) fold change
(cutoff=2.0) 법 동시에 용하여 T24 포주 T24R2 포주
간 차이가 나는 448개 자들 별하 다.
별 자들 Self-organizing map analysis (SOM)
군집 분 법 이용하여 조사하 고, 그 에 라
자들 군집 하 다 (23). 또한 Onto-Express software를
이용하여 포고사 (apoptosis), p53 신 경 (signaling
pathway), 포주 (cell cycle) 등 생 학 능에 라 군집
하 다 (그림 1, 2, and 3).
cDNA microarray 데이 를 자 신 값 규
(scaling normalization), 복 실험 재 인 (correlation
scatter plot, correlation matrix plot) 등 데이 처리 후
T24 포주 T24R2 포주에 차이가 나는 1,163개
자 (up-regulated genes), 905개 GO (gene ontology)
10
보, 327개 pathway 보를 인하 다. 그 Welch’s T-
test 결과 p-value ≤0.05인 432개 GO 보 (294 biological
process, 67 cellular component, 71 molecular function)
72개 pathway 보를 인하 다. GSEA (Gene Set
Enrichment Analysis) 법 이용하여 자들이 일
보이는 curated gene sets를 별하 다 (p-value <0.05).
실 분 에 는 GSEA 페이지
(http://www.broadinstitute.org/gsea/)에 속하여 분
행하 며, Kolmogorov-Smirnov statistic 이용하여 자
일 스트하여, 57개 후보 gene sets
추출하 다.
T24 포주 T24R2 포주 간 양상 차이를 regression
normalization 후 n-fold method statistical p-value
용하 , T24R2에 2 이상 많이 자는
448개 다. 이 가지 주요 암 경 (cancer-related
pathways) 하여 포고사는 7개, p53 신 경 4개,
포주 10개, 18개 자를 별하 다 (그림 1A, 2A,
11
and 3A).
cDNA microarray에 차이를 보인 18개 자
2개 housekeeping genes (GAPDH, beta-actin)를 이용하여
실시간 합효소 연쇄 분 하 다. 18개 자에 한
실시간 합효소 연쇄 결과는 cDNA microarray 결과
하게 부합하 다 (그림 1B, 2B, and 3B). 가지 분 법
간에 에 있어 fold change가 하게 일 하지는 않았지만,
자 사한 변 가 실시간 합효소 연쇄 에
찰 었다. 즉, 암 포주 cisplatin에 한 내 생
프 스에 과 18개 자가 연 이 있 뒷 침한다.
cDNA microarray 실시간 합효소 연쇄 결과, T24
포주 T24R2 포주에 3가지 암 경 하여
PRKAR2A, PRKAR2B, CYCS, Bcl-2, BIRC3, DFFB, CASP6,
CDK6, CCNE1, STEAP3, MCM7, ORC2, ORC5, ANAPC1,
ANAPC7, CDC7, CDC27, SKP1 등 18개 자
찰 었고, 이 MCM7, Bcl-2, CYCS, PRKAR2B는 cDNA
microarray 또는 실시간 합효소 연쇄 에 4 이상 (fold
change ≥4) 이 증가 어 cisplatin에 한 내 생과 이
12
있 것 생각 다 (그림 1, 2, and 3).
13
14
1. List of primers.
15
(A)
(B)
그림 1. Up-regulated genes related to apoptosis. (A) 7
significant up-regulated genes with symbol, name, function, and
fold change between T24 and T24R2. (B) Gene expression
16
analysis by quantitative real-time PCR.
17
(A)
(B)
그림 2. Up-regulated genes related to p53 signaling pathway.
(A) 4 significant up-regulated genes with symbol, name,
function, and fold change between T24 and T24R2. (B) Gene
expression analysis by quantitative real-time PCR.
* denotes up-regulated gene overlapped with other cancer-related pathways
18
(A)
(B)
19
그림 3. Up-regulated genes related to cell cycle. (A) 10
significant up-regulated genes with symbol, name, function, and
fold change between T24 and T24R2. (B) Gene expression
analysis by quantitative real-time PCR.
* denotes up-regulated gene overlapped with other cancer-related pathways
20
고 찰
재 진행 암에 있어 cisplatin 본 한 병합요법이
항암 학요법 이용 다. 그러나 이에 한 에
실 하거나 재 할 경우 효과 인 항암 학요법 가 없는 실 이다.
근 5-fluorouracil, docetaxel, ifosfamide, paclitaxel,
vinblastine 등 이용하여 단독 또는 병합요법 여러
임상시험들이 진행 었 나, 생존 증가를 보여주지 못했고, 후
또한 실망스럽다 (24-28). 라 cisplatin에 한 내
극복하고 새 운 약 를 개 하는 것 암 료 향상
해 매우 시 하다.
동시에 많 자들 분 할 있는 특징 에
cDNA microarray는 암 연구에 많이 이용 고 있다. 근
뇨 계 암에 도 다양한 항암 학요법 cDNA microarray를
이용한 자 에 한 연구들이 보고 고 있다 (29-32).
재 cisplatin 본 한 여러가지 병합요법 이 또는 국소
재 암 뿐만 아니라 여러 다른 암 료에 이
21
용 고 있다. 많 연구들이 cisplatin에 한 내 생 과 새
운 료 개 해 분자생 학 연구 법 (molecular
biology) 통한 자 연구들 시도해 나, 진행
암에 cisplatin에 한 내 생과 자 (gene
expression profile)과 그 (mechanism)에 해 는 거 알
진 것이 없는 실 이다 (33-36).
본 연구에 는 암 포주 (T24) cisplatin 내 암
포주 (T24R2)에 자 분 하 해 이미 알 진
22,245개 자를 포함하는 high-throughput microarray를 이
용하여, cisplatin에 한 포분자학 (cellular and
molecular responses)이 다양한 조 경 (regulatory pathways)
를 통해 이루어진다는 자 연구 (genome-wide analysis)
를 하고자 하 다. 암 포에 cisplatin에 한 신
달 (signal transduction), 포분 (cell proliferation), 포주
조 (cell cycle control), 사 번역 조 (transcriptional and
translational regulation), 단 질 분해 (protein degradation),
포고사 (apoptosis), 종양 억 (tumor suppression) 뿐만 아니라
22
포 사 (cellular metabolism)에 특 한 능 가지고 있
는 자들 (induction) 억 (inhibition) 다.
이는 cisplatin에 한 내 생이 특 자들에 해 획득
조 고, 진행 암 재 또는 이 연 어 있 보여
다. 암에 cisplatin에 한 내 생 여러 가지 들
과 며, 이는 cisplatin이 암에 DNA를 하고
있다는 에 고 있다. 첫째, cisplatin 동 산
입 (influx mechanism of passive diffusion)과 하여 내
포 (resistant cells)들 축 (accumulation) 감소시킨다.
째 , cisplatin에 한 내 내 포 내 glutathione과 하
여 cisplatin 포내 포착 (intracellular tapping) 증가에 인
하여 생한다. 째, 손상 DNA 회복 (repair) 또는 DNA 손상
항 (tolerance)이 증가하고, 마지막 cisplatin 내 포
는 항 사 질 (antimetabolite)에 한 차 항 (cross-
resistance)과 당과 아미노산 감소 같 복합 다면
(complex pleiotropic phenotype) 나타낸다 (18-
19). 다른 입증 는 DNA topoisomerase I 증가
23
(37), thioredoxin 증가 (38), 포고사 감소 Bcl-2,
Bcl-XL, Bax family 단 변 (39-40), cisplatin에 한
Bcl-XL sensitized cells down-regulation (41) 등 이다.
본 연구에 는 생 학 프 스 능 (biological process
function) 하여 자들 분 하 고, 그 이미 잘
알 진 포고사, p53 신 경 , 포주 등 3가지 주요 암
경 를 택하 다. 포고사 경 는 내인 (mitochondrial)과
외인 (cytoplasmic) 경 를 가지며 (42-43), 이들
포고사에 종 구조 조 질들 (final regulatory structural
molecules) 분리하는 하나 caspase 공통 경
(caspase-related common pathway) 병합한다 (44). 포주
경 는 cisplatin 주요 작용 이 DNA이 에 택하 다.
p53 신 경 는 포주 지 (cell cycle arrest), DNA 회복
(DNA repair), 포사 (cell death) 에 사인자
(transcription factor) 요한 역할 하며, p53 능 상실
(loss of p53) 포고사 억 , 포주 조 자
불안 야 한다 (45).
24
T24 포주 하여 T24R2 포주에 택 3가지 경
18개 자가 과 하 고, 특히, MCM7, Bcl-2,
CYCS, PRKAR2B는 fold change 4.0 이상 과 하 다. 이는
암 포에 cisplatin에 한 내 생과 이 있 것
추 다.
cDNA microarray 결과 포고사 경 7개 자
(PRKAR2A, PRKAR2B, CYCS, Bcl-2, BIRC3, DFFB, CASP6)가
fold change 2.0 이상이었다. DFFB는 액 신경계암
(hematologic or neurologic cancer) 등 다른 종 암 포고
사 과 에 caspase-3에 한 질 (substrate) 역할 하고
DNA fragmentation 진 (trigger)한다 (46-47). PRKAR2A
PRKAR2B는 엔도솜 (endosome) 부 골지체 (Golgi
apparatus), 나아가 소포체 (endoplasmic reticulum) 단 질
송 (protein transport) 조 하는 cAMP-dependent,
regulatory, type II alpha protein kinase이다. BIRC3, DFFB,
CASP6 자는 포고사 마지막 조 과 (regulatory
process)에 caspase에 해 조 는 것 알 있다. Bcl-
25
2 CYCS는 많 암에 포고사 한 이 있는 것
잘 알 있고 (42, 48), 특히 Bcl-2 자는 포고사 억 를
조 하고, 항암 학요법이나 사 료에 내 생시 과 는
것 알 있다 (49-50).
p53 신 경 자는 CYCS, CDK6, CCNE1,
STEAP3 다. CDK6는 특히 포 증식 (cell proliferation)과
포주 진행 (cell cycle progression)에 요한 역할 담당하
는 D-type cyclins cyclin-dependent kinase 하나이
다 (51-52). CCNE1 또한 암과 어 있는 것 잘
알 있다 (53). Metalloreductase인 STEAP3는 특히 DNA
ATP 합 (DNA and ATP synthesis)에 포 생존과 번식
(cellular proliferation and survival) 지를 한 철분 커
니즘 (iron-related mechanism) 핵심 인 역할 하며, 철분 부
족 상태 (hypoferric condition)에 철 장 (iron storage)과
른 종양 증식 지한다 (54).
포주 경 어 과 자는 MCM7, ORC2,
ORC5, CDK6, CCNE1, ANAPC1, ANAPC7, CDC7, CDC27, SKP1
26
이었다. MCM7 포증식 (cell proliferation)에 요한 역할
하고 (55-56), ORC5는 많 암에 cell transcriptional
proliferation mechanism에 이 연 어 있다 (57). SKP1
SCF complexes 한 구 요소 단 분해 (degradation)를
(targeting)하는 ubiquitinating proteins과 하여 포 증
식 (cell proliferation) 포주 진행 (cell cycle progression)
조 에 여한다 (58-59). ANAPC1 ubiquitinating proteins
에 해 포주 (metaphase)에 후 (anaphase)
진행 (progression) 조 하는 anaphase-promoting complex
subunit이고, ANAPC7는 anaphase like ANAPC1 gene promoting
complex/cyclosome (APC/C) 구 요소 퀴틴
(ubiquitination) 포증식 (promoted cell
proliferation) 통해 많 포주 조 인자들 (cell cycle
regulators) (targeting)함 써 포주 진행 조 한
다 (60).
이 연구 외에 cisplatin에 한 내 생과 하여
포고사 내인 (intrinsic)과 외인 (extrinsic) 경 인
27
NFKB, ubiquitin/proteasome system, PI3K 같 경 들이 많
연구에 다 (44-45). 이 연구는 이러한 경 들과
자들 다루지는 않았지만, 나 지 64 biological
pathways 에 몇몇 이 존재할 있다고 생각한다.
Cisplatin 내 암에 이러한 자들 역할 립하
해 는 단 질 능 면과 본 연구에 는 포주에
국한하여 연구를 행하 지만 in vivo 연구 등 좀 심도있는
연구가 필요하다. 불어 내 생 과 연 인자들간
상 작용 내 한 추가 연구가 필요할 것 단한다.
결 T24 포주 하여 T24R2 포주에
포고사, p53 신 경 , 포주 등 3 가지 주요 암 경
(cancer-related pathways) 18개 자가
과 었다. 이 자들 암 cisplatin에
한 내 생과 이 있 것 생각한다.
28
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Abstract
Introduction: The resistance mechanism to the cisplatin during
treatment of bladder cancer is one of the most investigated
subjects in clinical fields. In order to understand the resistance
mechanism, bladder cancer cell lines were used in a
combination of cDNA microarray and real-time PCR profiling to
investigate the expression of possible genes related to cisplatin
resistance.
Methods: The human bladder cancer cell line (T24) and the
preformed bladder cancer resistant cell line at 2.0μg/ml of
cisplatin (T24R2) were used for the cDNA microarray analysis
to define the different expressions of significant genes resistant
to cisplatin. Those significant genes were confirmed by real-
time PCR in T24R2. A fold change ≥2.0 with p-value <0.05 of
statistics was considered significant.
Results: A total of 18 significantly up-regulated genes were
detected from three selected cancer-related pathways
(apoptosis, p53 signaling pathway, cell cycle) in both the cDNA
microarray and the real-time PCR with fold change ≥2.0. They
are PRKAR2A, PRKAR2B, CYCS, Bcl-2, BIRC3, DFFB, CASP6,
40
CDK6, CCNE1, STEAP3, MCM7, ORC2, ORC5, ANAPC1,
ANAPC7, CDC7, CDC27, and SKP1 genes. Especially, the fold
changes of MCM7, Bcl-2, CYCS, and PRKAR2B were greater
than 4.0, suggesting high correlation with cisplatin resistance.
Conclusions: The total 18 gene expression profiles might be
proposed to play one of the key roles and candidates in the
resistance mechanism to cisplatin for bladder cancer.
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Keywords: bladder cancer, cisplatin, drug resistance, cDNA
microarray, real time-PCR
Student number: 2007 – 23318