i
UJI HEPATOPROTEKTIF EKSTRAK ETANOL HERBA SELEDRI
TERHADAP AKTIVITAS SERUM ALT PADA TIKUS BETINA GALUR
WISTAR TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Maria Arielisa
NIM : 158114106
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2019
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
Karya ini kupersembahkan kepada:
Tuhan Yesus Kristus dan Bunda Maria
Orang tuaku,
Bapak Jonandar dan Ibu Noorlaila
Saudaraku,
Mas Oscar dan Mas Paska
dan Almamaterku,
Universitas Sanata Dharma
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
v
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vii
PRAKATA
Puji syukur penulis haturkan ke hadirat Tuhan Yang Maha Kuasa atas
karunia dan bimbingan-Nya dalam penyelesaian skripsi yang berjudul “Uji
Hepatoprotektif Ekstrak Etanol Herba Seledri terhadap Aktivitas Serum ALT pada
Tikus Betina Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida” dengan lancar dan
sesuai waktu yang telah ditetapkan. Skripsi ini disusun untuk salah satu syarat
dalam memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) pada Program Studi Farmasi
Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.
Penyelesaian skripsi ini tidak lepas dari dukungan dan bantuan dari berbagai
pihak. Oleh karena itu, penulis mengucapkan terimakasih kepada:
1. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma
2. Ibu Dr. Christine Patramurti, Apt. selaku Kepala Program Studi Farmasi
Universitas Sanata Dharma
3. Ibu drh. Sitarina Widyarini, M.P., Ph.D. selaku dosen pembimbing skripsi
yang telah memberi bimbingan, saran, perhatian, motivasi, waktu, dan
dukungan dalam mendampingi penulis selama proses penelitian hingga
penyusunan skripsi.
4. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, Apt. selaku dosen penguji yang telah
memberikan saran dan kritik demi perbaikan dan kemajuan skripsi ini.
5. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt. selaku dosen penguji yang telah
memberikan saran dan kritik demi perbaikan dan kemajuan skripsi ini.
6. Ibu Damiana Sapta Candrasari, S.Si., M.Sc., selaku Kepala Laboratorium
Fakultas Farmasi atas perijinan dalam penggunaan fasilitas laboratorium
dalam proses penelitian ini.
7. Bapak Heru Purwanto, Bapak Kayat, Bapak Suparjiman, Bapak Musrifi,
dan Bapak Wagiran selaku laboran laboratorium Fakultas Farmasi yang
telah membantu penulis dalam proses pelaksanaan penelitian di
laboratorium.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
viii
8. Lembaga-lembaga di Universitas Gadjah Mada yang telah membantu dalam
penerbitan dokumen dan proses penelitian ini.
9. Keluarga tercinta, Bapak Jonandar, Ibu Noorlaila, Mas Oscar, Mas Paska,
Mbak Emilia, Mbak Jeni, Felis, Kasih, Alm. Tante Ning, Alm. Eyang Kung
Ngadimin, dan Eyang Uti Karsiti atas dukungan, doa, motivasi, dan kasih
sayang selama ini.
10. Teman satu kelompok “Skripsi Hepatoprotektif Herba Seledri” Bretha Celia
Saragih, Paulina Dewi Rosari, dan E.Inge Cindy Luisa, atas bantuan dan
kerjasama selama proses penelitian hingga penyusunan naskah skripsi.
11. Teman-teman seperjuangan dan sahabat-sahabat atas dukungan, motivasi,
dan semangat yang telah diberikan.
12. Seluruh pihak yang telah membantu dan mendukung penulis dalam
penyelesaian penyusunan naskah ini.
Penulis menyadari bahwa naskah penelitian ini masih banyak kekurangan.
Oleh karena itu, penulis memohon maaf dan mengharapkan kritik serta saran yang
membangun agar skripsi ini menjadi lebih baik dan bermanfaat bagi perkembangan
ilmu pengetahuan dalam bidang farmasi.
Yogyakarta, 30 Januari 2019
Penulis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ix
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ................................................................................................ i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ..................................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................ iii
HALAMAN PERSEMBAHAN…………………………… ................................ iv
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .................................................................. v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH
UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS .............................................................. vi
PRAKATA ............................................................................................................ vii
DAFTAR ISI ......................................................................................................... ix
DAFTAR TABEL .................................................................................................. xi
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ xii
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xiii
ABSTRAK ........................................................................................................... xiv
ABSTRACT ............................................................................................................. xv
PENDAHULUAN ................................................................................................... 1
METODE PENELITIAN ......................................................................................... 3
Alat ...................................................................................................................... 3
Bahan .................................................................................................................. 4
Tatacara Penelitian .............................................................................................. 4
Persetujuan Ethical Clearance dan Pemeliharaan Hewan Uji................... 4
Pengumpulan dan Pembuatan Serbuk Herba Seledri ................................ 4
Determinasi Tanaman ................................................................................ 5
Penetapan Kadar Air Serbuk Herba Seledri .............................................. 5
Pembuatan EEHS ....................................................................................... 5
Uji Kromatografi Lapis Tipis .................................................................... 6
Preparasi Suspensi EEHS untuk Uji Hepatoprotektif ............................... 6
Pembuatan Larutan Karbon Tetraklorida Konsentrasi 50% ...................... 6
Uji Pendahuluan dan Penetapan Dosis EEHS ........................................... 6
Pengelompokan dan Perlakuan Hewan Uji ............................................... 7
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
Pengukuran Aktivitas Serum ALT ............................................................ 8
Analisis Data .............................................................................................. 8
Penetapan Persen Efek Hepatoprotektif EEHS pada Aktivitas Serum
ALT ............................................................................................................ 9
HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................................ 9
Pengumpulan dan Determinasi Tanaman ........................................................... 9
Pembuatan Serbuk Kering Herba Seledri ........................................................... 9
Penetapan Kadar Air Herba Seledri .................................................................. 10
Ekstraksi Etanol Herba Seledri ......................................................................... 10
Hasil Uji Kromatografi Lapis Tipis .................................................................. 11
Uji Pendahuluan ................................................................................................ 13
Efek Hepatoprotektif EEHS terhadap Aktivitas Serum ALT pada Tikus Betina
Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida .................................................. 15
Kontrol CMC Na 1% .............................................................................. 17
Kontrol Karbon Tetraklorida ................................................................... 18
Kontrol EEHS .......................................................................................... 18
Kelompok Perlakuan EEHS .................................................................... 18
KESIMPULAN ...................................................................................................... 21
SARAN .................................................................................................................. 21
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................ 22
LAMPIRAN ........................................................................................................... 26
BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................... 49
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
DAFTAR TABEL
Tabel I. Rf hasil uji kromatografi lapis tipis EEHS ........................................... 12
Tabel II. Rerata kadar serum ALT pada jam 0, 24, dan 48 setelah induksi
karbon tetraklorida ................................................................................ 14
Tabel III. Uji paired T test serum ALT pada jam ke 0, 24, dan 48 setelah
induksi karbon tetraklorida ................................................................... 14
Tabel IV. Rerata kadar serum ALT dan efek hepatoprotektif pemberian EEHS. 16
Tabel V. Uji Pos Hoc pengaruh pemberian EEHS terhadap aktivitas serum
ALT ...................................................................................................... 17
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Uji kromatografi lapis tipis EEHS pada UV366 setelah
diuapkan amoniak ............................................................................. 12
Gambar 2. Rerata kadar serum ALT pada jam ke 0, 24, dan 48 setelah induksi
karbon tetraklorida ............................................................................. 14
Gambar 3. Rerata kadar serum ALT kelompok kontrol dan kelompok
perlakuan EEHS ................................................................................. 16
Gambar 4. Hasil Kadar Air Replikasi 1 ............................................................... 29
Gambar 5. Hasil Kadar Air Replikasi 2 ............................................................... 29
Gambar 6. Hasil Kadar Air Replikasi 3 ............................................................... 29
Gambar 7. Herba Seledri Segar ............................................................................ 30
Gambar 8. Serbuk Kering Herba Seledri ............................................................. 30
Gambar 9. Proses Maserasi .................................................................................. 30
Gambar 10. Filtrat Ekstrak Etanol Herba Seledri ................................................. 30
Gambar 11. Penguapan Pelarut ............................................................................. 30
Gambar 12. Penimbangan Bobot Tetap ................................................................ 30
Gambar 13. Sebelum di elusi deteksi UV366 ......................................................... 32
Gambar 14. Sebelum di elusi secara visible .......................................................... 32
Gambar 15. Sebelum diuapkan deteksi UV366 ...................................................... 32
Gambar 16. Sesudah diuapkan deteksi UV366 ....................................................... 32
Gambar 17. Setelah diuapkan deteksi UV254 ........................................................ 33
Gambar 18. Setelah diuapkan secara visible ......................................................... 33
Gambar 19. Pembuatan Larutan CMC Na ............................................................ 34
Gambar 20. Penimbangan Ekstrak Kental Herba Seledri ..................................... 34
Gambar 21. Pembuatan Larutan Ekstrak Etanol Herba Seledri ............................ 34
Gambar 22. Larutan Ekstrak Etanol Herba Seledri ............................................... 34
Gambar 23. Perlakuan Hewan Uji ........................................................................ 34
Gambar 24. Perlakuan Injeksi Karbon Tetraklorida ............................................. 34
Gambar 25. Pengambilan Darah ........................................................................... 34
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Ethical Clearance ................................................................ 26
Lampiran 2. Surat Keterangan Pengambilan Herba Seledri CV. Merapi Farma
Herbal ............................................................................................ 27
Lampiran 3. Surat Keterangan Determinasi Herba Seledri ................................ 28
Lampiran 4. Penetapan Kadar Air Serbuk Kering Herba Seledri ...................... 29
Lampiran 5. Tahap Pembuatan Ekstraksi .......................................................... 30
Lampiran 6. Perhitungan Rendemen Ekstrak Etanol Herba Seledri (EEHS) .... 31
Lampiran 7. Hasil Uji Kromatografi Lapis Tipis ............................................... 32
Lampiran 8. Tahap Perlakuan Hewan Uji .......................................................... 34
Lampiran 9. Surat Keterangan CE&BU untuk Penggunaan Program IBM
SPSS Statictics 22 .......................................................................... 35
Lampiran 10. Analisis Statistik Serum ALT pada Uji Pendahuluan ................... 36
Lampiran 11. Analisis Statistik Serum ALT pada Kelompok Perlakuan EEHS
dan Kelompok Kontrol .................................................................. 40
Lampiran 12. Penetapan Peringkat Dosis ............................................................ 46
Lampiran 13. Efek Hepatoprotektif EEHS terhadap Serum ALT ....................... 47
Lampiran 14. Perhitungan Konversi Dosis Manusia ........................................... 48
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek hepatoprotektif dan dosis
efektif pemberian ekstrak etanol herba seledri (EEHS) terhadap aktivitas serum
alanin aminotransferase (ALT) pada tikus betina galur Wistar terinduksi karbon
tetraklorida. Jenis penelitian merupakan eksperimental murni dengan rancangan
acak pola searah. Sejumlah 30 ekor tikus betina galur Wistar dibagi secara acak
dalam 6 kelompok (@ 5 ekor). Kelompok I diberi larutan karbon tetraklorida 50%
2 ml/kgBB (intraperitonial). Kelompok II diberi CMC Na 1% 20 mL/kgBB
(peroral) selama 6 hari. Kelompok III diberi EEHS 600 mg/kgBB (peroral) selama
6 hari. Kelompok IV, V, dan VI diberi EEHS 150, 300 dan 600 mg/kgBB (peroral)
selama 6 hari kemudian di induksi karbon tetraklodrida 2,0 mL/kgBB pada hari
ketujuh (intraperitonial). Darah diambil melalui sinus orbitalis dan diukur aktivitas
serum ALT. Pengambilan darah pada kelompok I pada hari kedua; kelompok II dan
III pada hari ketujuh; kelompok IV, V, VI pada hari kedelapan. Penelitian ini
dilakukan uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT) pada EEHS yang bertujuan untuk
identifikasi adanya senyawa flavonoid, dimana flavonoid merupakan salah satu
senyawa yang berperan sebagai antioksidan. Sistem KLT menggunakan fase gerak
kloroform : metanol : air (70:30:6.5 v/v) dengan fase diam silica gel GF254 dengan
deteksi UV366 dan uap amoniak.
Hasil penelitian menunjukkan persen hepatoprotektif EEHS 150, 300, dan
600 mg/kgBB sebesar 80,79, 74,45, dan 82,20%. Tidak adanya hubungan
kekerabatan antar kelompok perlakuan dibuktikan adanya perbedaan tidak
bermakna antar dosis (p>0,05). Dosis 600 mg/kgBB merupakan dosis efektif
dengan persen hepatoprotektif paling besar. Hasil uji KLT menunjukkan bahwa
pada EEHS terdapat flavonoid ditunjukan adanya pendaran berwarna kuning pada
sinar UV366 setelah diuapkan amoniak. Penelitian ini menunjukkan bahwa herba
seledri memiliki potensi sebagai agen hepatoprotektor.
Kata kunci : ekstrak etanol herba seledri, karbon tetraklorida, kadar ALT.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xv
ABSTRACT
The purpose is to determine the hepatoprotective effect and effective dose
of ethanol extract of celery herb (EEHS) on alanine aminotransferase serum activity
in female Wistar rats induced by carbon tetrachloride. The study was a true
experimental with single factor completely randomized design. Thirty rats were
divided randomly in 6 groups (@ 5 rats). Group 1 was given 2 ml/kgBW of carbon
tetrachloride 50% intraperitoneally. Group II was given 20 ml/kgBW (orally, 6
days) of CMC Na 1%. Group III was given EEHS 600 mg/kgBW (orally, 6 days).
Group IV, V, and VI were given EEHS 150, 300, and 600 mg/kgBW (orally, 6 days,
and on the seventh day they were induced with 2 ml/kgBW carbon tetrachloride
intraperitoneally. Blood was taken through the sinus orbitalis and ALT serum was
measured. Group I on second day; Group II and III on seventh day; Group IV, V,
VI on eighth day. This research was done Thin Layer Chromatography (TLC) test
that aims to identify the presence of flavonoid compounds in EEHS. Flavonoid is
one of the compounds that act as antioxidants. TLC system used mobile phase a
mixture of chloroform : methanol : water (70:30:6,5 v/v) and the stationary phase
is silica gel GF254. The detection of flavonoid with UV366 and ammonia vapor.
The result showed that a percent of hepatoprotective EEHS 150, 300, and
600 mg/kgBW is 80.79, 74.45, dan 82.20%. The absence of kinship relations
between treatment groups proved that there no significant differences (p>0,05).
EEHS 600 mg/kgBW is the effective dose with the largest hepatoprotective percent.
The result of the TLC test show that in EEHS there are flavonoids indicated by
presence of yellow luminescence on UV366 rays after evaporation of ammonia. This
research shows that celery herbs have the potential as hepatoprotective agent.
Keywords: ethanol extract of celery herb, carbon tetrachloride, ALT levels.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
PENDAHULUAN
Hati merupakan salah satu organ vital dan terbesar yang memiliki bobot
antara 2% sampai 3% bobot rata-rata tubuh manusia dan terletak di atas kanan
kuadran dari rongga perut yang dilindungi oleh tulang rusuk (Misih and Bloomston,
2010). Hati memiliki tiga fungsi utama yaitu penyimpanan, metabolisme, dan
biosintesis (Hodgson and Levi, 2010). Selain itu, hati juga berfungsi dalam
detoksifikasi dan inaktivasi zat kimia menjadi zat yang tidak berbahaya bagi tubuh
(Elya et al., 2010).
Organ hati dapat mengalami gangguan fungsi dari ringan hingga berat
yang dapat dihubungkan dengan penyakit tertentu (Direktorat Bina Farmasi
Komunitas dan Klinik, 2007). Penyebab penyakit hati dapat diakibatkan oleh virus,
obat, efek dari zat-zat toksik, genetik, kanker, dan gangguan imunologis (Dey et al.,
2013). Salah satu kasus penyakit hati adalah Non-alcoholic fatty liver disease
(NAFLD) atau dapat disebut perlemakan hati non alkoholik. Penyakit NAFLD
secara global memiliki prevalensi sebesar 25,24% (Chasalani et al., 2018). Di Asia,
jumlah epidemiologi terbesar berada di Cina dengan prevalensi sebesar 20%,
Jepang (15%), Korea (16-22%), sedangkan Sri Lanka, Malaysia, dan Indonesia (15-
20%) (Chowdhury and Younossi, 2016).
Hati sering menjadi target dari senyawa yang dapat menimbulkan
kerusakan, salah satunya karbon tetraklorida (CCl4). Karbon tetraklorida
merupakan hepatotoksikan klasik yang dapat menyebabkan kerusakan hati. Karbon
tetraklorida membutuhkan bioaktivasi sitokrom P450 (CYP2E1) untuk membentuk
radikal bebas. Pembentukan radikal bebas dimulai dari karbon tetraklorida di
konversi menjadi radikal triklorometil (CCl3•) dan bereaksi dengan oksigen
menjadi radikal triklorometilperoksi (CCl3O2•). Radikal triklorometilperoksi akan
berikatan kovalen dengan asam lemak tak jenuh ganda dan protein seluler sehingga
menyebabkan adanya peroksidasi lipid dan kerusakan hepatosit (Hodgson and
Levi, 2010; Li et al., 2017).
Apabila sel hati mengalami kerusakan, enzim yang normalnya berada di
intrasel akan masuk ke dalam aliran darah dan terjadi peningkatan kadar enzim di
dalam darah. Salah satu enzim yang berada dalam sel hati adalah alanin
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
aminotransferase (ALT). ALT adalah indikator spesifik dalam pengukuran
kerusakan hati dibandingkan AST. Hal ini dikarenakan konsentrasi ALT lebih besar
pada sel hati dibandingkan enzim AST yang terdapat di sel jantung, otot rangka,
ginjal dan otak (Sacher and Pherson, 2002).
Banyaknya radikal bebas mampu menyebabkan kerusakan sel hati yang
semakin parah. Oleh sebab itu, diperlukan pemberian perlindungan terhadap hati
yang disebut sebagai hepatoprotektor. Hepatoprotektor merupakan senyawa yang
memiliki efek terapeutik dan berperan dalam memulihkan, memelihara dan
mengobati kerusakan hati (Marinda, 2014).
Tanaman obat dapat dikembangkan sebagai agen hepatoprotektor bahan
alam. Sebagian besar tanaman obat mempercepat proses penyembuhan alami
kerusakan hati. Hal itu dikarenakan adanya aktivitas antioksidan kuat dalam
tanaman (Ramamurthy and Abama, 2015). Tanaman obat memiliki berbagai
mekanisme sebagai hepatoprotektor, yaitu meningkatkan regenerasi hepatosit,
antiinflamasi, dan menjaga integritas membran sel (Wahyudi, 2011).
Seledri (Apium graveolens L.) merupakan salah satu jenis tanaman yang
dikenal oleh masyarakat. Selain digunakan untuk bahan sayur, seledri secara
empiris digunakan oleh masyarakat untuk obat rematik, asma, xeroptalmia, dan
hipertensi. Kandungan dalam tanaman seledri antara lain minyak atsiri, vitamin A,
vitamin B, vitamin C, besi, fosfor, sulfur, kalsium, dan flavonoid (Kusumadewi dan
Widiyastuti, 2010). Selain itu, kandungan polifenol terdistribusi secara luas dan
memiliki aktivitas sebagai antioksidan yang kuat (Sameh et al., 2011).
Salah satu senyawa polifenol yang memiliki aktivitas antioksidan adalah
flavonoid. Mekanisme kerja flavonoid menyebabkan ROS tidak mengikat
polyunsaturated fatty acids (PUFA) yang merupakan penyusun membran sel
sehingga terjadi penurunan angka peroksidasi lipid (Ancoferiawan et al., 2012).
Flavonoid pada seledri antara lain senyawa apiin dan apigenin yang berperan
sebagai antitumor, antiinflamasi dan antioksidan (Anggraeni et al., 2016).
Pada penelitian ini menggunakan pelarut etanol 70% sebagai pelarut untuk
proses ekstraksi. Berdasarkan penelitian sebelumnya, ekstrak etanol 95% seledri
dengan menggunakan teknik maserasi dapat menyari flavonoid pada seledri
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
terutama apiin dan apigenin dengan menggunakan analisis GC-MS (Anggraeni et
al., 2016). Pengunaan bahan herba seledri dipilih dikarenakan bahwa flavonoid
terdistribusi di batang, daun dan akar, sehingga flavonoid dalam herba seledri
tersari secara optimal (Iswantini et al., 2012).
Pada penelitian Abdou et al. (2012), ekstrak etanol 80% biji seledri dosis
300 mg/kgBB selama 60 hari memiliki aktivitas antioksidan dan hepatoprotektif
pada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida. Pemberian karbon tetraklorida dua
kali dalam seminggu secara oral dapat menurunkan total protein, DNA dan RNA.
Pemberian karbon tetraklorida juga mengakibatkan adanya aberasi kromosom,
kelainan pada sperma dan pola pita DNA pada tikus. Efek hepatoprotektif
ditunjukkan dengan kadar total protein, DNA dan RNA mendekati nilai normal
setelah pemberian ekstrak etanol seledri. Efek antioksidan ditunjukkan dengan
adanya kurangnya aberasi kromosom, kelainan sperma, dan meningkatnya jumlah
dan pola pita DNA.
Berdasarkan uraian diatas, penelitian ini dilakukan untuk mengetahui efek
hepatoprotektif dan dosis efektif ekstrak etanol 70% herba seledri (EEHS) dengan
tiga peringkat dosis yaitu dosis 150, 300 dan 600 mg/kg BB selama 6 hari terhadap
aktivitas serum ALT pada tikus betina galur Wistar dengan satu kali induksi karbon
tetraklorida.
METODE PENELITIAN
Jenis penelitian mengenai efek hepatoprotektif EEHS terhadap tikus betina
galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida merupakan eksperimental murni dengan
rancangan acak lengkap pola searah.
Alat
Alat yang digunakan adalah oven, mesin penyerbuk, ayakan nomor mesh
40, alat-alat gelas, corong, gelas ukur, erlenmeyer, tabung effendorf, alumunium
foil, timbangan analitik, cawan porselen, sendok, pipa kapiler, kertas saring, pipet
tetes, batang pengaduk, shaker maserator, rotary evaporator, corong Buchner,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
pompa vakum, labu takar, pipet ukur, baskom, spuit injeksi oral untuk tikus, spuit
injeksi intraperitonial untuk tikus, chamber, dan Moisture Balance.
Bahan
Bahan yang digunakan adalah etanol 70%, herba seledri, karbon
tetraklorida, olive oil, akuades, CMC Na, dan tikus betina galur Wistar berumur 2-
3 bulan dengan berat badan 150-250 gram diperoleh dari LPPT Unit IV Universitas
Gadjah Mada, silika gel GF254, kloroform, dan metanol.
Tatacara Penelitian
Persetujuan Ethical Cleareance dan Pemeliharaan Hewan Uji
Penelitian ini menggunakan hewan uji yaitu tikus betina galur Wistar telah
mendapatkan persetujuan dari Medical and Health Research Ethics Committee
(MHREC) Faculty of Medicine Universitas Gadjah Mada (Lampiran 1). Tikus
tersebut dibagi secara acak ke dalam kandang, dimana tiap kandangnya berisi 2-3
ekor tikus. Sebelum dilakukan penelitian, hewan uji di aklimatisasi selama 1
minggu di Laboratorium Farmakologi Toksikologi Universitas Sanata Dharma
dengan diberi pakan dan minum (Ancoferiawan et al., 2012). Tujuan dari
aklimatisasi yaitu agar hewan uji dapat beradaptasi dengan lingkungan baru.
Pengumpulan Bahan dan Pembuatan Serbuk Herba Seledri
Bahan uji yang digunakan adalah herba seledri yang didapatkan dari
Merapi Farma Herbal Yogyakarta. Herba seledri yang dipilih adalah warna hijau
merata, segar, tidak busuk, usia 3-4 bulan. Sebelum dilakukan proses ekstraksi,
herba seledri di cuci dengan air mengalir kemudian dipotong-potong. Selanjutnya,
dioven pada suhu 50ºC hingga kering dan digiling hingga menjadi serbuk. Serbuk
herba seledri diayak dengan ayakan nomer mesh 40.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
Determinasi Tanaman
Sampel herba seledri yang digunakan pada penelitian ini dilakukan
determinasi di laboratorium Fakultas Farmasi bagian Biologi Farmasi Universitas
Gadjah Mada Yogyakarta.
Penetapan Kadar Air Serbuk Herba Seledri
Penetapan kadar air serbuk simplisia menggunakan metode gravimetri.
Sebanyak 5 g serbuk herba seledri dimasukkan ke dalam piringan Moisture
Balance, diratakan dan dipanaskan hingga 120ºC kemudian didiamkan hingga
bobot tetap. Penetapan kadar air dilakukan dengan 3 kali replikasi. Syarat kadar air
pada serbuk simplisia yaitu kurang dari 10% (Kementerian Kesehatan RI, 2010 ;
Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2014).
Pembuatan EEHS
Sebanyak 400 g serbuk kering herba seledri di maserasi dengan pelarut
etanol 70% sebanyak 4000 mL selama 24 jam dan dilakukan remaserasi sebanyak
2 kali agar flavonoid dapat tersari secara optimal. Proses maserasi dilakukan dengan
cara diaduk selama 6 jam dan didiamkan selama 18 jam. Hasil maserasi dan
remaserasi dicampurkan dan di saring dengan kertas saring dan corong Buchner
dengan bantuan pompa vakum kemudian diuapkan menggunakan rotary
evaporator pada suhu 50ºC dengan tekanan 112 mbar. Hasil penguapan
dipindahkan ke dalam cawan porselen dan dilanjutkan penguapan dengan oven
pada suhu 50ºC. Kemudian ditimbang bobotnya hingga mendapatkan bobot tetap.
Bobot tetap yaitu perbedaan bobot ektrak kental dengan dua kali penimbangan
berturut-turut selama 1 jam dikeringkan tidak melebihi 0,5 mg. Rendemen ekstraksi
dihitung dari perbandingan bobot total ekstrak kental dan bobot total serbuk herba
seledri dalam % b/b. (Kementerian Kesehatan RI, 2010 ; Wiendarlina, 2010 ; Badan
Pengawas Obat dan Makanan RI, 2012 ; Wulandari et al., 2015).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
Uji Kromatografi Lapis Tipis
Plat silica gel GF254 5x15 cm diberi garis batas bawah 2 cm, jarak eluen 8
cm, dan jarak penotolan 1 cm. Fase gerak dibuat dengan cara mencampurkan
kloroform : metanol : air (70 : 30 : 6,5, v/v). Fase gerak dimasukkan ke dalam
chamber dan dijenuhkan dengan cara meletakkan kertas saring ke dalam chamber.
EEHS konsentrasi 10% didapatkan dengan cara sebanyak 1 gram ekstrak kental
herba sseledri dilarutkan ke dalam 10 ml etanol. Larutan EEHS ditotolkan pada plat
menggunakan pipa kapiler. Plat dimasukkan ke dalam chamber dan diangkat jika
eluen sudah sampai garis batas atas. Plat dikeringkan dengan cara diangin-anginkan
dan diuapkan dengan uap amoniak. Plat yang sudah diuapkan di deteksi dengan
UV366. Identifikasi apigenin dalam EEHS dilakukan dengan cara membandingkan
Rf sampel EEHS dengan Rf teoritis apigenin yaitu 0,70. Adanya senyawa apigenin
yaitu timbul bercak berwana kuning setelah diuapkan amoniak pada plat saat di
deteksi UV366 (Djatmiko dan Pramono, 2001).
Preparasi Suspensi EEHS untuk Uji Hepatoprotektif
Preparasi sampel dilakukan dengan cara melarutkan ekstrak kental dalam
CMC Na 1%. Cara pembuatan CMC Na 1% yaitu sebanyak 5 gram CMC Na
ditaburkan diatas 500 ml akuades dingin dan didiamkan selama 24 jam. Sebanyak
50 gram ekstrak kental herba seledri dilarutkan dalam 500 ml larutan CMC Na 1%
sehingga didapatkan konsentrasi suspensi EEHS 10%.
Pembuatan Larutan Karbon Tetraklorida Konsentrasi 50%
Larutan karbon tetraklorida dengan konsentrasi 50% dibuat dengan
perbandingan volume antara olive oil sebagai pelarut dengan karbon tetraklorida
sebesar 1:1. Cara pembuatan larutan karbon tetraklorida yaitu karbon tetraklorida
dilarutkan dalam olive oil dengan volume yang sama (Janakat and Al-Merie, 2002).
Uji Pendahuluan dan Penetapan Dosis EEHS
Dosis karbon tetraklorida yang digunakan adalah 2 mL/kgBB diinduksi
secara intaperitonial karena dapat menyebabkan efek hepatotoksik tanpa
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
menyebabkan kematian dan mencapai puncak tertinggi pada jam ke 24 setelah
induksi karbon tetraklorida (Janakat and Al-Merie, 2002). Penetapan waktu
pencuplikan darah dilakukan dengan orientasi pada 5 tikus yang diinduksi dengan
karbon tetraklorida 2 ml/kgBB. Setiap tikus diambil darahnya pada sinus orbitalis
menggunakan pipa kapiler kemudian ditampung dalam tabung effendorf sebanyak
1 mL. Pencuplikan darah dilakukan pada jam ke 0, 24, dan 48 kemudian diukur
kadar ALT.
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Abdou et al. (2012),
pemberian EEHS dengan dosis 300 mg/kg BB secara oral dapat memberikan efek
antioksidan dan hepatoprotektif. Pada penelitian ini digunakan 3 peringkat dosis
yaitu 150 mg/kgBB, 300 mg/kgBB dan 600 mg/kgBB. Dosis 150 mg/kgBB
didapatkan dengan menurunkan setengah dari dosis tengah sedangkan dosis 600
mg/kgBB didapatkan dengan menaikkan 2 kali dari dosis tengah.
Pengelompokkan dan Perlakuan Hewan Uji
Tikus betina galur Wistar sejumlah 30 ekor dibagi secara acak ke dalam 6
kelompok perlakuan dengan jumlah masing-masing 5 ekor hewan uji. Kelompok I
(kontrol hepatotoksin) diberi larutan karbon tetraklorida 50% dengan dosis 2
ml/kgBB secara intraperitonial (i.p). Kelompok II (kontrol negatif) diberi CMC Na
1% dengan dosis 20 mL/kgBB secara per oral (p.o) selama 6 hari. Kelompok III
(kontrol perlakuan) diberi EEHS dengan dosis 600 mg/kgBB secara per oral selama
6 hari. Kelompok IV, V, dan VI diberi EEHS dosis bertingkat 150 mg/kgBB, 300
mg/kgBB dan 600 mg/kgBB secara peroral selama 6 hari kemudian diinduksi
karbon tetraklodrida dosis 2,0 mL/kgBB pada hari ke tujuh secara i.p. Pengambilan
cuplikan darah kelompok II dan III pada hari ketujuh. Pada kelompok I, IV, V, dan
VI dilakukan 24 jam setelah diinduksi karbon tetraklorida. Pengambilan cuplikan
darah pada daerah sinus orbitalis mata hewan uji dan dilakukan pengukuran kadar
serum ALT.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
Pengukuran Aktivitas Serum ALT
Darah diambil dari sinus orbitalis sebanyak 1 mL dan dimasukkan
kedalam tabung effendorf. Darah tikus tersebut dimasukkan ke dalam ice box dan
di uji di Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu Unit 2 Universitas Gajah
Mada menggunakan Spectrophotometer Microlab-300. Sampel darah di sentrifuge
dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 menit. Sebanyak 100 µL serum dengan
reagen mix 1000 µL hingga homogen. Reagen mix didapatkan dengan cara
mencampurkan reagen 1 (TRIS buffer pH 7,3, L-alanine, NADH, dan LDH) dan 2
(α-ketoglutarat) yang memiliki perbandingan 4:1. Setelah serum dan reagen mix
homogen, diinkubasi selama 1 menit dan diukur kadar ALT pada panjang
gelombang 340 nm.
Analisis Data
Analisis data serum ALT dilakukan dengan program IBM SPSS Stastistic
22 oleh CE&BU Yogyakarta. Pada data kelompok uji pendahuluan dianalisis
menggunakan Uji T berpasangan untuk mengetahui perbedaan antara jam ke 0, 24,
dan 48. Hal ini dikarenakan bahwa analisis data diperoleh dari hewan uji yang sama,
dimana adanya beberapa kali pengujian kadar ALT pada jam ke 0,24, dan 48. Pada
data kelompok perlakuan dianalisis secara statistik dengan metode Shapiro Wilk
(<50 sampel) untuk mengetahui distribusi data normal atau tidak. Jika data
terdistribusi normal (p>0,05) maka dilakukan uji One Way ANOVA dengan taraf
kepercayaan 95% (Rohman, 2014). Kemudian dilakukan uji Levene Test untuk
mengetahui homogenitas varian data antar kelompok. Dilanjutkan uji Post Hoc
untuk melihat kebermaknaan perbedaan antar kelompok. Jika varian data homogen
(p>0,05) maka dilakukan uji pos hoc tukey. Sedangkan uji pos hoc games-howell
untuk analisis data apabila variansi tidak homogen (p<0,05) (Dahlan, 2014).
Jika data tidak terdistribusi normal (p<0,05) maka dilakukan uji Kruskal-
Wallis dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney untuk melihat kebermaknaan
perbedaan antar kelompok yang diuji (Rohman, 2014). Jika hasil analisis diperoleh
nilai p<0,05 maka diartikan adanya perbedaan bermakna antara dua kelompok data
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
dan jika nilai yang didapatkan yaitu p>0,05 maka diartikan perbedaan tersebut tidak
bermakna (Dahlan, 2014).
Penetapan Persen Efek Hepatoprotektif EEHS pada Aktivitas Serum ALT
Perhitungan persen efek hepatoprotektif EEHS terhadap induksi karbon
tetraklorida diperoleh dengan rumus :
Persen efek hepatoprotektif terhadap kadar ALT
(1-𝑝𝑢𝑟𝑎𝑡𝑎 𝐴𝐿𝑇 𝑝𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛−𝑝𝑢𝑟𝑎𝑡𝑎 𝐴𝐿𝑇 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙
𝑝𝑢𝑟𝑎𝑡𝑎 𝐴𝐿𝑇 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑘𝑎𝑟𝑏𝑜𝑛 𝑡𝑒𝑡𝑟𝑎𝑘𝑙𝑜𝑟𝑖𝑑𝑎−𝑝𝑢𝑟𝑎𝑡𝑎 𝐴𝐿𝑇 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑓)x100%
(Wackhaure et al., 2011).
HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengumpulan dan Determinasi Tanaman
Sampel herba seledri diperoleh dari Merapi Farma Herbal (Lampiran 2).
Herba seledri yang dikumpulkan sebagai bahan penelitian adalah berwana hijau
merata, segar, tidak busuk dan usia 3-4 bulan. Hal tersebut dimaksudkan untuk
mengendalikan variabel pengacau pada bahan herba seledri, sehingga dapat
memberikan hasil yang relatif lebih seragam. Setelah itu, dilakukan determinasi
untuk mengidentifikasi dan memastikan bahwa bahan uji yang digunakan dalam
penelitian ini merupakan herba seledri. Hasil determinasi tanaman membuktikan
bahwa sampel yang digunakan adalah herba seledri (Lampiran 3).
Pembuatan Serbuk Kering Herba Seledri
Herba seledri segar dicuci untuk menghilangkan kotoran. Setelah itu,
dilakukan perajangan dan memisahkan bagian-bagian dari herba seledri (akar,
batang dan daun) untuk memudahkan dalam pengeringan. Selanjutnya dilakukan
penimbangan untuk mengetahui bobot awal sebelum pengeringan yaitu sebesar 10
kg. Herba seledri tersebut dikeringkan di oven pada suhu 50ºC selama 14 hari.
Herba seledri yang telah kering ditandai dengan rapuhnya saat di remas. Kemudian
dilakukan penyerbukan dan pengayakan dengan nomer mesh 40 yang bertujuan
meningkatkan luas permukaan sehingga kandungan yang terdapat pada seledri
mudah tersari. Hasil yang didapatkan dalam pembuatan serbuk kering herba seledri
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
yaitu 1,3 kilogram dengan persen penyusutan sebesar 13%. Hasil persen rendemen
ekstrak kental herba seledri sudah sesuai dengan Farmakope Herbal Indonesia yaitu
tidak lebih dari 13% (Kementerian Kesehatan RI, 2010).
Penetapan Kadar Air Herba Seledri
Tujuan penetapan kadar air adalah memenuhi persyaratan serbuk simplisia
yang baik. Syarat kadar air dalam serbuk simplisia adalah kurang dari 10%
(Kementerian Kesehatan RI, 2010 ; Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2014).
Hasil rerata kadar air dari 3 kali replikasi sebesar 6,62% sehingga serbuk simplisia
herba seledri sudah memenuhi syarat kadar air (Lampiran 3). Air adalah media
pertumbuhan kapang dan jasad renik lainnya (Nasution, 2018). Selain itu, kadar air
dapat mempengaruhi sifat fisik, sifat fisikokimia dan perubahan kimia. Oleh karena
itu, kadar <10% ini dapat mencegah adanya kerusakan dan penurunan kualitas dari
serbuk kering herba seledri.
Ekstraksi Etanol Herba Seledri
Serbuk kering herba seledri yang didapatkan akan di ekstraksi dengan
menggunakan metode maserasi dan dilakukan penguapan pelarut. Berdasarkan
penelitian Anggraeni et al. (2016) ekstrak etanol 95% seledri dengan menggunakan
teknik maserasi dapat menyari berbagai jenis flavonoid pada seledri dengan
menggunakan analisis GC-MS. Selain itu, maserasi digunakan sesuai dengan sifat
fisika dan kimia flavonoid yang tidak tahan panas dan mudah teroksidasi pada suhu
tinggi (Rompas et al., 2012). Pelarut etanol 70% digunakan sebagai pelarut ekstrak
dikarenakan dapat menarik senyawa flavonoid terutama apigenin lebih banyak dan
lebih polar dibandingkan menggunakan etanol murni. Hal ini disebabkan adanya
penambahan 30% air menyebabkan kepolaran pelarut semakin bertambah sehingga
flavonoid dapat tersari (Bimakr et al., 2011). Penguapan bertujuan untuk
menghilangkan pelarut etanol 70% sehingga yang tertinggal adalah ekstrak kental.
Ekstrak kental yang didapatkan ditimbang sampai bobot tetap dan dihitung
rendemennya. Bobot ekstrak kental yang didapatkan sebesar 135, 61 gram dan hasil
rendemen yang didapatkan yaitu 33,90%. Hasil rendemen yang didapatkan sudah
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
memenuhi syarat bahwa rendemen untuk ekstrak kental herba seledri yaitu tidak
kurang dari 13% (Kementerian Kesehatan RI, 2010).
Hasil Uji Kromatografi Lapis Tipis
Seledri memiliki kandungan antara lain minyak atsiri terdiri dari limonen,
p-simol, α-terpineol, α-santalol, α-pinen, α-kariofilen; flavonoid terdiri dari apiin,
apigenin, isokuersitrin; kumarin terdiri dari asparagin, bergapten, isopimpinellin,
apiumetin, santotoksin; saponin; tanin 1%; sedanolida; asam sedanoat; manitol;
kalsium; fosfor; besi; protein; glisidol; vitamin A, B1, B2, C, dan K (Badan
Pengawas Obat dan Makanan, 2010). Kandungan yang terdapat dalam ekstrak
etanol seledri antara lain tannin, flavonoid, steroid, triterpenoid dan alkaloid
(Iswantini et al., 2012). Salah satu senyawa yang memiliki aktivitas sebagai
antioksidan yaitu flavonoid. Apigenin (5, 7, 4-trihydroxy flavones) merupakan
salah satu senyawa flavonoid dari subkelas flavon (Peng Li et al., 2013).
Uji kromatografi lapis tipis EEHS dilakukan untuk mengetahui ada tidaknya
senyawa apigenin yang terkandung dalam EEHS. Identifikasi senyawa apigenin
dilakukan dengan cara menotolkan EEHS kedalam plat silica gel GF254. Plat dielusi
dengan fase gerak kloroform : metanol : air (70:30:6.5 v/v). Setelah elusi selesai,
plat dikeringkan dengan cara diangin-anginkan. Plat yang sudah kering diuapkan
dengan uap amoniak dan dideteksi UV366. Bercak yang didapatkan di hitung untuk
mendapatkan nilai Rf tiap bercak. Perhitungan nilai Rf dilakukan dengan cara jarak
yang ditempuh senyawa dibagi dengan jarak eluen. Warna pendaran apigenin
sebelum di elusi yaitu berfluorensensi ungu dan berubah menjadi kuning kecoklatan
setelah diuapkan dengan uap amoniak nilai Rf apigenin sebesar 0,70 (Djatmiko dan
Pramono, 2001). Hasil uji Kromatografi Lapis Tipis pada Gambar 1 dan Tabel I.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
Gambar 1. Uji kromatografi lapis tipis EEHS pada UV366 setelah diuapkan
ammonia
Keterangan: A= totolan A, B= totolan B, C= totolan C. 1 = bercak berwana
kuning , 2 = bercak berwarna merah muda , 3 = bercak berwana merah.
Tabel I. Rf hasil uji kromatrografi lapis tipis EEHS
No.
Totolan
Fase gerak Fase diam Pendeteksi Rf
bercak
no. 1
Rf
bercak
no. 2
Rf
bercak
no. 3
A kloroform:
metanol :air
(70:30:6.5
v/v)
silica gel
GF254
deteksi
UV366 dan
uap
amoniak
0,75 0,89 0,98
B 0,75 0,91 0,1
C 0,76 0,91 0,1
Hasil uji KLT EEHS ditandai adanya 3 bercak pada nomer totolan A,B, dan
C yaitu pada nomer 1, 2, dan 3. Hal ini menunjukkan bahwa dalam EEHS
mempunyai kandungan selain flavonoid. Pada hasil uji KLT EEHS, apigenin belum
terdeteksi ditandai dengan adanya perbedaan antara Rf teoritis dengan Rf yang
didapatkan. Penyebab perbedaan Rf ini diduga faktor kejenuhan bejana, jumlah
cuplikan, suhu, dan struktur senyawa yang dipisahkan (Kusnadi dan Devi, 2017).
Oleh karena itu, pada penelitian ini hanya membuktikan bahwa senyawa yang
terdapat dalam EEHS yaitu flavonoid yang terdapat pada bercak nomer 1 tiap
totolannya, namun belum diketahui jenis flavonoid. Adanya senyawa flavonoid
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
dibuktikan dengan adanya pendaran warna kekuningan pada plat KLT setelah
diuapkan dengan uap amoniak dan deteksi UV366 dengan hasil Rf sebesar 0,75;0,75;
dan 0,76.
Uji Pendahuluan
Uji pendahuluan digunakan untuk menetapkan waktu cuplikan darah setelah
di induksi karbon tetraklorida sehingga didapatkan waktu yang optimal dalam
kenaikan aktivitas serum ALT. Menurut Janakat and Al-Merie. (2002), dosis
karbon tetraklorida 2 mL/kgBB secara intaperitonial dapat menyebabkan efek
hepatotoksik tanpa menyebabkan kematian dan waktu puncak tertinggi pada jam ke
24 setelah induksi karbon tetraklorida dan akan kembali ke kondisi normal pada
jam ke 48.
Karbon tetraklorida di metabolisme oleh enzim CYP2E1 di hati membentuk
radikal triklorometil (CCl3•) dan kemudian menjadi radikal triklorometilperoksi
(CCl3O2 •) (Hodgson and Levi., 2010). Radikal triklorometilperoksi yang
bertanggungjawab dalam proses peroksidasi lipid dan dekstruksi polyunsaturated
fatty acids (PUFA) pada membran retikulum endoplasma (Abdou et al., 2012;
Scholten et al., 2015). Apabila sel hati mengalami kerusakan, enzim yang
normalnya berada di intrasel akan masuk ke dalam aliran darah dan terjadi
peningkatan kadar enzim di dalam darah (Elya et al., 2010). Karbon tetraklorida
dapat menyebabkan kenaikan aktivitas serum ALT dan AST dalam darah (Arrak,
2013). Selain itu, karbon tetraklorida dapat menimbulkan akumulasi trigleserid,
deplesi GSH, gangguan sintesis protein, dan kehilangan aktivitas enzim (Ahmed et
al, 2002). Namun, kerusakan tersebut hanya bersifat reversible dan terjadi adanya
regenerasi sel hati (Oumi et al., 2012).
ALT adalah enzim yang memperantarai reaksi antara L-alanin dan α-
ketoglutamat menghasilkan piruvat dan L-glutamat (Huang et al., 2006). Pada
penelitian ini menguji aktivitas serum ALT dikarenakan lebih spesik dibandingkan
AST. Konsentrasi ALT berada di sel hati lebih besar dibandingkan enzim AST yang
berada di sel jantung, hati, otot rangka, ginjal dan otak (Sacher and Pherson, 2002).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
Hasil pengukuran aktivitas serum ALT pada jam ke 0, 24, dan 48 setelah
induksi karbon tetraklorida pada Tabel II, Gambar 2 dan Tabel III.
Tabel II. Rerata kadar serum ALT pada jam 0, 24, dan 48 setelah induksi
karbon tetraklorida
Waktu cuplikan darah Rerata ALT ±SE (U/L)
Jam ke 0 42,30±1,76
Jam ke 24 96,50±14,03
Jam ke 48 39,52±5,44
Keterangan : SE = standar error
Gambar 2. Rerata kadar serum ALT pada jam ke 0, 24, dan 48 setelah
induksi karbon tetraklorida
Tabel III. Uji paired T test serum ALT pada jam ke 0, 24, dan 48 setelah induksi
karbon tetraklorida
Waktu cuplikan
darah
Jam ke 0 Jam ke 24 Jam ke 48
Jam ke 0 BB BTB
Jam ke 24 BB BB
Jam ke 48 BTB BB
Keterangan : BB = berbeda bermakna (p<0,05), BTB = berbeda tidak bermakna
(p>0,05)
Hasil analisis statistik menunjukkan ALT pada jam ke 0 dengan rata-rata
42,30±1,76 U/L, jam ke 24 dengan rata-rata 96,50±14,03 U/L, dan jam ke 48
dengan rata-rata 39,52±5,44 U/L. Cuplikan darah pada waktu ke 0 menggambarkan
42.3
96.56
39.52
0
20
40
60
80
100
120
Jam ke 0 Jam ke 24 Jam ke 48Rer
ata
Kad
ar s
eru
m A
LT
(U/L
)
Waktu Cuplikan Darah
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
kondisi normal sebelum induksi karbon tetraklorida. Uji paired T test menunjukkan
adanya perbedaan bermakna antara jam ke 0 dengan jam ke 24 (p = 0,021). Hasil
tersebut menunjukkan bahwa terdapat kenaikan aktivitas serum ALT dari jam ke 0
terhadap jam ke 24 sebesar 2,28 kali lipat. Hal ini dikarenakan adanya kerusakan
pada sel hati sehingga enzim-enzim yang normalnya di intrasel keluar ke darah.
Puncak kenaikan aktivitas serum ALT terjadi pada jam ke 24 yang ditunjukkan
bahwa adanya perbedaan bermakna antara jam ke 24 dengan jam ke 48 (p = 0,004).
Aktivitas serum ALT pada jam ke 48 sudah kembali ke kondisi normal ditunjukkan
adanya perbedaan tidak bermakna (p = 0,675) antara jam ke 0 dengan jam ke 48.
Berdasarkan hasil analisitik, ditetapkan waktu cuplikan darah yaitu pada jam ke 24
setelah induksi karbon tetraklorida.
Efek Hepatoprotektif EEHS terhadap Aktivitas Serum ALT pada Tikus
Betina Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida
Uji efek hepatoprotektif pemberian EEHS menggunakan 6 kelompok
perlakuan yaitu kelompok perlakuan EEHS (EEHS 150, 300, dan 600 mg/kgBB)
dan kelompok kontrol (kontrol CMC Na 1%, kontrol EEHS, dan kontrol karbon
tetraklorida). Kadar ALT kelompok perlakuan EEHS dibandingkan dengan
kelompok kontrol untuk mengetahui efek pemberian EEHS. Efek hepatoprotektif
ditunjukkan dengan kadar serum ALT kelompok perlakuan EEHS lebih rendah dan
berbeda bermakna dengan kontrol karbon tetraklorida serta kelompok perlakuan
EEHS memiliki perbedaan tidak bermakna terhadap kontrol CMC Na 1%. Selain
itu, dilakukan analisis aktivitas serum ALT antar kelompok perlakuan untuk
mengetahui ada atau tidaknya kekerabatan antara peringkat dosis EEHS.
Analisis statistik aktivitas serum ALT dimulai dari uji Shapiro Wilk (<50
sampel) untuk melihat distribusi data tiap kelompok. Hasil menunjukkan bahwa
data distribusi normal (p>0,05). Kemudian dilakukan uji One Way ANOVA dengan
taraf kepercayaan 95% dan uji Levene dilanjutkan dengan uji post hoc Tukey. Hasil
analisis statistik kelompok kontrol dan kelompok perlakuan EEHS terhadap
aktivitas serum ALT pada Tabel IV, Gambar 3, Tabel V.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
Tabel IV. Rerata kadar serum ALT dan efek hepatoprotektif pemberian
EEHS
Kelompok Rerata ALT ± SE
(U/L)
Efek Hepatoprotektif
EEHS
Kontrol karbon tetraklorida 86,72±8,70 -
Kontrol CMC Na 1% 42.88±2,29 -
Kontrol EEHS 45,92±1,07 -
EEHS 150 mg/kgBB 54,34±1,77 80,79%
EEHS 300 mg/kgBB 57,12±1,72 74,45%
EEHS 600 mg/kgBB 46,70±0,60 82,20%
Keterangan : SE = standard error
Gambar 3. Rerata kadar serum ALT kelompok kontrol dan kelompok
perlakuan EEHS
86.72
42.8845.92
54.34 57.12
46.7
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
KONTROLCCl4
KONTROLCMC Na
KONTROLEEHS
EEHS150mg/kgBB
EEHS300mg/kgBB
EEHS600mg/kgBB
RER
ATA
KA
DA
R A
LT (
U/L
)
Kontrol dan Kelompok Perlakuan EEHS
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
Tabel V. Uji Pos Hoc pengaruh pemberian EEHS terhadap aktivitas serum
ALT
Kelompok Kontrol
karbon
tetraklorida
Kontrol
CMC
Na 1%
Kontrol
EEHS
EEHS
150
mg/kg
BB
EEHS
300
mg/kg
BB
EEHS
600
mg/kg
BB
Kontrol
karbon
tetraklorida
BB BB BB BB BB
Kontrol
CMC Na
1%
BB BTB BTB BTB BTB
Kontrol
EEHS
BB BTB BTB BTB BTB
EEHS 150
mg/kgBB
BB BTB BTB BTB BTB
EEHS 300
mg/kgBB
BB BTB BTB BTB BTB
EEHS 600
mg/kgBB
BB BTB BTB BTB BTB
Keterangan : BB = Berbeda Bermakna (p<0,05); BTB = Berbeda Tidak Bermakna
(p>0,05).
Kontrol CMC Na 1%
Kontrol CMC Na 1% merupakan pelarut dari EEHS dan berfungsi sebagai
kontrol negatif. Larutan CMC Na 1% digunakan sebagai pelarut ekstrak
dikarenakan larutan CMC Na 1% tidak memiliki pengaruh pada aktivitas serum
ALT dan secara histopatologi menggambarkan bahwa sel-sel hati dalam keadaan
normal (Cao et al., 2014). Hasil pengukuran aktivitas serum ALT pemberian
larutan CMC Na sebesar 42,88±2,29 U/L.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
Kontrol Karbon Tetraklorida
Kontrol karbon tetraklorida digunakan sebagai kontrol hepatoksin yang
memberi gambaran kondisi kerusakan hati. Pembuatan larutan karbon tetraklorida
dilakukan dengan cara karbon tetraklorida dilarutkan ke dalam olive oil dengan
perbandingan 1:1. Pengunaan olive oil sebagai pelarut dikarenakan olive oil tidak
memengaruhi aktivitas serum ALT dan secara histopatologi menggambarkan hati
dalam keadaan normal (Cao et al., 2014). Dosis yang digunakan dalam penelitian
ini adalah 2 ml/kgBB yang dipejankan secara intraperitoneal dan diambil darah
pada jam ke-24. Hasil rerata serum ALT kontrol karbon tetraklorida sebesar
86,72±8,70 U/L. Secara analisis statistik, kontrol karbon tetraklorida memiliki
perbedaan bermakna (p = 0,000) terhadap kontrol CMC Na 1% dengan kenaikan
aktivitas serum ALT sebesar 2,02 kali. Hal tersebut menunjukkan bahwa dengan
pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB dapat meningkatkan kadar ALT.
Menurut Zimmerman. (1999), kerusakan hati berupa steatosis akibat karbon
tetraklorida ditunjukkan kadar ALT meningkat 3 kali lipat. Oleh karena itu, perlu
penelitian pendukung mengenai aktivitas serum AST dan gambaran secara
histopatologi pada tikus betina galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida.
Kontrol EEHS
Fungsi kontrol EEHS untuk mengetahui pengaruh pemberian EEHS
terhadap aktivitas serum ALT. Dosis EEHS yang digunakan adalah dosis tertinggi,
yaitu 600 mg/kgBB selama 6 hari. Hasil pengukuran aktivitas serum ALT, yaitu
45,92±1,07 U/L. Pemberian EEHS secara statistik berbeda bermakna (p = 0,000)
dengan kontrol karbon tetraklorida dan memiliki perbedaan tidak bermakna (p =
0,993) dengan kontrol CMC Na 1%. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian EEHS
dosis 600 mg/kgBB tidak mempengaruhi terhadap aktivitas serum ALT.
Kelompok Perlakuan EEHS
Kelompok perlakuan EEHS dibagi menjadi 3 peringkat dosis yaitu 150
mg/kgBB, 300 mg/kgBB, dan 600 mg/kgBB. Aktivitas serum ALT pada pemberian
EEHS 150 mg/kgBB menghasilkan rerata sebesar 54,34±1,77 U/L. Hasil analisis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
statistik menunjukkan adanya perbedaan tidak bermakna (p = 0,316) terhadap
kontrol CMC Na 1% dan perbedaan bermakna (p = 0,000) dengan kontrol karbon
tetraklorida. Persen efek hepatoprotektif pada aktivitas serum ALT sebesar 80,79%.
Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa pemberian EEHS 150 mg/kgBB
memiliki efek untuk mencegah kenaikan dari aktivitas serum ALT dan dapat
mengembalikan fungsi normal hati.
Aktivitas serum ALT pada pemberian EEHS 300 mg/kgBB menghasilkan
rerata sebesar 57,12±1,72 U/L. Hasil analisis statistik menunjukkan adanya
perbedaan tidak bermakna (p = 0,131) terhadap kontrol CMC Na 1% dan perbedaan
bermakna (p =0,000) pada kontrol karbon tetraklorida. Persen efek hepatoprotektif
pada aktivitas serum ALT sebesar 74,45%. Hasil yang diperoleh menunjukkan
EEHS dengan dosis 300 mg/kgBB memiliki aktivitas sebagai pencegah kenaikan
aktivitas serum ALT dan dapat mengembalikan fungsi hati ke kondisi normal.
Aktivitas serum ALT pada pemberian EEHS 600 mg/kgBB menghasilkan
rerata sebesar 46,70±0,60 U/L. Hasil analisis statistik menunjukkan adanya
perbedaan tidak bermakna (p = 0,980) terhadap kontrol CMC Na 1% dan perbedaan
bermakna (p = 0,000) pada kontrol karbon tetraklorida. Persen efek hepatoprotektif
pada aktivitas serum ALT sebesar 82,20%. Hasil yang diperoleh menunjukkan
EEHS dengan dosis 600 mg/kgBB mampu mencegah kenaikan aktivitas serum
ALT dan mampu mengembalikan fungsi hati ke kondisi normal.
Analisis aktivitas serum ALT antar ketiga peringkat dosis digunakan untuk
mengetahui ada tidaknya kekerabatan. Kelompok dosis 150 mg/kgBB dengan
kelompok dosis 300 mg/kgBB memiliki perbedaan tidak bermakna (p = 0,995) dan
berbeda bermakna (p = 0,723) dengan kelompok dosis 600 mg/kgBB. Demikian
pula kelompok dosis 300 mg/kgBB memiliki perbedaan bermakna (p = 0,416)
dengan kelompok dosis 600 mg/kgBB. Disimpulkan bahwa tidak adanya
kekerabatan antara peringkat dosis pemberian EEHS dengan efek hepatoprotektif
terhadap aktivitas serum ALT.
Berdasarkan uraian hasil analisis diatas, dapat disimpulkan bahwa ketiga
peringkat dosis memiliki efek hepatoprotektif. Pada penelitian ini juga dilakukan
penentuan dosis efektif diantara ketiga peringkat dosis. Dosis efektif dalam
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
penelitian ini merupakan dosis yang dapat memberikan persen efek hepatoprotektif
yang paling besar. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa dosis 600 mg/kg BB
adalah dosis efektif yang ditunjukkan dengan persen efek hepatoprotektif paling
besar dibandingkan dosis 150 mg/kgBB dan dosis 300 mg/kg BB yaitu sebesar
82,20%.
Hasil penelitian ini selaras dengan penelitian Abdou et al. (2012), bahwa
ekstrak etanol 80% biji seledri dosis 300 mg/kgBB selama 60 hari memiliki
aktivitas antioksidan dan hepatoprotektif pada tikus yang terinduksi karbon
tetraklorida. Pemberian karbon tetraklorida dua kali dalam seminggu secara oral
dapat menurunkan total protein, DNA dan RNA. Pemberian karbon tetraklorida
juga mengakibatkan adanya aberasi kromosom, kelainan pada sperma dan pola pita
DNA pada tikus. Efek hepatoprotektif ditunjukkan dengan kadar total protein, DNA
dan RNA mendekati nilai normal setelah pemberian ekstrak etanol seledri. Efek
antioksidan ditunjukkan dengan adanya kurangnya aberasi kromosom, menurunnya
kelainan sperma, dan meningkatnya jumlah dan pola pita DNA.
Pada penelitian ini, EEHS memiliki efek hepatoprotektif dikarenakan
adanya aktivitas senyawa flavonoid (Ugochi et al., 2011). Flavonoid pada seledri
antara lain senyawa apiin dan apigenin yang berperan sebagai antitumor,
antiinflamasi dan antioksidan (Anggraeni et al., 2016). Flavonoid sangat efektif
dalam pencegahan peroksidasi lipid akibat dari radikal triklorometilperoksi yang
bertanggungjawab dalam proses peroksidasi lipid dan dekstruksi polyunsaturated
fatty acids (PUFA) (Scholten et al., 2015; Panche et al., 2016). Mekanisme
flavonoid sebagai antioksidan yaitu mencegah ROS berikatan dengan
polyunsaturated fatty acids (PUFA) yang merupakan penyusun membran sel
sehingga terjadi penurunan angka peroksidasi lipid (Ancoferiawan et al., 2012).
Flavonoid akan berikatan dengan ROS sehingga menghasilkan senyawa yang lebih
stabil dan kurang reaktif (Panche et al., 2016). Hal ini didukung adanya flavonoid
yang diduga apigenin dalam sediaan EEHS yang dibuktikan dengan adanya bercak
berwarna kuning pada hasil elusi uji KLT setelah diuapkan dengan uap amoniak
dan di deteksi pada UV366.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
KESIMPULAN
Pemberian EEHS 150, 300, dan 600 mg/kgBB mampu mencegah kenaikan
aktivitas serum ALT pada tikus betina galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida.
Dosis 600 mg/kgBB merupakan dosis efektif dengan persen efek hepatoprotektif
yang paling besar yaitu 96,81%.
SARAN
Saran yang dapat diambil yaitu perlu penelitian pendukung mengenai uji
efek hepatoprotektif pada aktivitas serum AST dan gambaran secara histopatologi
pada tikus betina galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
DAFTAR PUSTAKA
Abdou, H.S., Salah, S.H., Hoda, B., and Abdel R.E., 2012. Antioxidant Effect of
Celery Against Carbontetrachloride Induced Hepatic Damage in Rats.
African Journal of Microbiology Research, 6 (27), 5657-5667.
Ahmed, B., Alam, T., Varshney, M., and Khan, S.A., 2002. Hepatoprotective
Activity of Two Plants Belonging to the Apiaceace and the Euphorbiaceae
Family. Journal of Ethnopharmacology, 313-316.
Ancoferiawan, R., Aulanni’am, A., dan Wuragil, D.K., 2012. Studi Terapi Ekstrak
Etanol Akar Seledri (Apium graveolens) terhadap Kadar Malondialdehida
(MDA) dan Gambaran Histopatology Ileum Tikus (Rattus norvegicus) Model
Inflammatory Bowel Disease (IBD) Hasil Induksi Indometasin. Universitas
Brawijaya (online), Available from: https://fkh.ub.ac.id/wp-content/uploads/
2012/10/7.-Randi-Ancoferiawan.pdf [Accessed 11 Agustus 2018].
Anggraeni, T., Ridwan, A., dan Kodariah, L., 2016. Ekstrak Etanol Seledri (Apium
graveolens) sebagai Antiatherogenik pada Tikus (Rattus norvegicus) yang
Diinduksi Hiperlipidemia. Prosiding Symbion, 171-184.
Arrak, J.K., 2013. Tokxicopathological and biochemical effects of Carbon
Tetrachloride CCl4 with residual accumulation in Liver of mice. Kufa
Journal for Veterinary Medical Sciences, 4 (1), 57-68.
Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2012. Acuan Sediaan Herbal Volume 7
Edisi 1. Jakarta: Badan Pengawas Obat dan Makanan, 8-9.
Badan Pengawas Obat Makanan RI, 2014. Peraturan Kepala Badan Pengawas
Obat dan Makanan Republik Indonesia, Nomor 12 Tahun 2014, Tentang
Persyaratan Mutu Obat Tradisional. Jakarta: Sekretariat Negara Republik
Indonesia.
Bimakr, M., Rahman, R.A., Taip, F.S., Ganjloo, A., Salleh, L.M., Selamat, J.,
Hamid, A., and Zaidul, I.S.M., 2011. Comparison of different extraction
methods for the extraction of major bioactive flavonoid compounds from
spearmint (Mentha spicata L.) leaves. Food and Bioproducts Processing, 67-
72.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
23
Cao, G., Li, Q., Chen, X., Cai, H., and Tu, S., 2014. Hepatoprotective Effect of
Superfine Particles of Herbal Medicine against CCl4-Induced Acute Liver
Damage in Rats. BioMed Research International, 1-6.
Chalasani, N., Younossi, Z., Lavine, J.e., Charlton, M., Cusi, K., Rinella, M.,
Harrison, S.A., Brunt, E.M., and Sanyal, A.J., 2018. The Diagnosis and
Management of Nonalcoholic Fatty Liver Disease: Practice Guidance From
the American Association for the Study of Liver Diseases. Hepatology, 67
(1), 329-331.
Chowdhury, A., and Younossi, Z.M., 2016. Global Epidemiology and Risk Factors
for Nonalcoholic Fatty Liver Disease. Springer International Publishing
Switzerland, 29.
Dahlan, M.S., 2014. Statistik untuk Kedokteran dan Kesehatan. Jakarta:
Epidemiologi Indonesia.
Djatmiko, M., dan Pramono, S., 2001. Standarisasi Sediaan Daun Seledri (Apium
graveolens L.) secara KLT-Densitometri menggunakan Apigenin Sebagai
Parameter. Majalah Farmasi Indonesia, 12 (2), 59-64.
Dey, P., Saha, M.R., and Sen, A., 2013. Hepatotoxicity and The Present Herbal
Hepatoprotective Scenario. International Journal of Green Pharmacy, 7,
265-268.
Direktorat Bina Farmasi Komunitas dan Klinik, 2007. Pharmaceutical Care untuk
Penyakit Hati. Jakarta: Departemen Kesehatan RI, 2-4.
Elya, B., Amin, J., dan Eminayah, 2010. Toksisitas Akut Daun Justicia gendarussa
Burn. MAKARA, 14 (2), 130.
Hodgson, E., and Levi, P.E., 2010. A Textbook of Modern Toxicology 4th Ed. US:
John Wiley & Sons Inc, 263.
Huang, X-J., Choi, Y-K., Im, H-S., Yarimaga, O., Yoon, E., and Kim, H-S., 2006.
Aspartate Aminotransferase (AST/GOT) and Alanine Aminotransferase
(ALT/GPT) Detection Techniques. Sensors. 756-782.
Iswantini, D., Ramdhani, T.H., and Darusman, L.K., 2012. In Vitro Inhibition of
Celery (Apium graveolens L.) Extract on the Activity of Xanthine Oxidase
and Determination of its Active Compound. Indo J Chem, 12 (3), 247-254.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
24
Janakat, S., and Al-Merie, H., 2002. Optimization of the Dose and Route of
Injection, and Characterisation of the Time Course of Carbon Tetrachloride-
induced Hepatotoxicity in the Rat. Journal of Pharmacological and
Toxicological Methods, 48, 41-44
Kementerian Kesehatan RI. 2010. Farmakope Herbal Indonesia Suplemen I.
Jakarta: Kementerian Kesehatan RI, 93-96, 121-122, 140-141.
Kusnadi, K., dan Devi, E. T., 2017. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Flavonoid
pada Ekstrak Daun Seledri (Apium graveolens L.) dengan Metode Refluks.
PSEJ, 2 (1), 56-57.
Kusumadewi, A.P., dan Widiyastuti, Y., 2010. Uji Potensi Antioksidan Herba
Seledri (Apium graveolens L.) secara In Vitro. Balai Besar Litbang Tanaman
Obat dan Obat Tradisional, 3 (1), 60.
Li, P., Jia, J., Zhang, D., Xie, J., Xu, X., and Wei, D., 2014. In vitro and in vivo
antioxidant activites of a flavonoid isolated from celery (Apium graveolens L
var.dulce). Food Function, 50-55.
Marinda. 2014. Hepatoprotective Efect of Curcumin in Chronic Hepatitis. J
Majority, 3 (7), 52.
Misih, S.R.Z.A. and Bloomston, M., 2010. Liver Anatomy. Surgical Clinics North
America, 90 (4), 643.
Nasution, P. L. L., 2018. Uji Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Seledri
(Apium graveolens L.) terhadap Tikus Jantan yang Diinduksi ƛ-Karagenan.
Skripsi. Universitas Sumatera Utara.
Ugochi, N., Elijah, J.P., Leonard, O., and Charles, O., 2011. Antioxidant Properties
of Apium graveolens. Research Journal of Pharmacognosy and
Phytochemistry, 3(4), 103-108.
Oumi, N., Taniguchi, K.A., Kanai, A.M., Yasunaga, M., Nakanishi, T., and Sato,
K., 2012. A Crucial Role of Bone Morphogenetic Protein Signaling in the
Wound Healing Response in Acute Liver Injury Induced by Carbon
Tetrachloride. International Journal of Hepatology, 1-10.
Panche, A.N., Diwan, A.D., and Chandra, S.R., 2016. Flavonoids: an overview.
Journal of Nutritional Science, 5 (47), 1-15.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
25
Peng-Li, Jia, J., Zhang, D., Xie, J., Xu, X., and Wei, D., 2013. In vitro and in vivo
antioxidant activities of a flavonoid isolated from celery (Apium graveolems
L. var. dulce). Food Function, 50-56.
Ramamurthy, V., and Abama, 2015. Evaluation of Extract of Phyllanthus niruri
and it’s Effect on Carbon Tetrachloride Intoxicated Hepatotoxy in Albino
Rats. International Journal of Innovative Research in Science, Engineering
and Technology, 4 (7), 6255-6260.
Rohman, A., 2014. Statistika dan Kemometrika Dasar dalam Analisis Farmasi.
Yogyakarta: Pustaka Pelajar.
Rompas, R.A., Edy, H.J., and Yudistira, A., 2012. Isolasi dan Identifikasi Flavonoid
dalam Daun Lamun (Syringodium isoetifolium). Pharmacon, 1 (2), 59-63.
Sacher, R.A and Mc Pherson, R.A., 2002. Tinjauan Klinis Hasil Pemriksaan edisi
II. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC, 369-370.
Sameh, B., Ibtissem, B., Mahmoud, A., Boukef, K., and Boghattas, N.A., 2011.
Antioxidant Activity of Apium graveolens Extracts. Journal of Biologically
Active Products from Nature, 1 (5&6), 341.
Scholten, D., Trebicka, J., Liedtke, C., and Weiskirchen, R., 2015. The Carbon
Tetrachloride Model in Mice. Laboratory Animals, 49 (1), 4-11.
Wakchaure, D., Jain, D., Singjai, A.K., and Somani, R., 2011. Hepatoprotective
Activity of Symplocos racemose Bark on Carbon Tetrachloride-Induced
Hepatic Damage in Rats. Ayurveda Integrated Medication, 2 (3), 137-143.
Wiendarlina, I.K., 2010. Uji Antihipertensi Campuran Ekstrak Etanol Herba
Seledri (Apium graveolens L.) dan Daun Tempuyung (Sonchus arvensis L.)
Sebelum dan Sesudah Purifikasi. Tesis. Universitas Indonesia.
Wulandari, P., Herdini, dan Yumita, A., 2015. Uji Aktivitas Antioksidan DPPH dan
Aktivitas terhadap Artemia Salina Leach Ekstrak Etanol 96% Daun Seledri
(Apium graveolens L.). Sainstech Farma, 8 (2), 6-12.
Zimmerman, H.J., 1999. Hepatotoxicity edition II. Lippincort Williams and Wilkins
(online), Available from: https://books.google.co.id/books/about/Hepato
toxicity.html?id=fZtgamJXk70C&redir_esc=y [Accessed 4 July 2018].
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
26
LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Ethical Clearance
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
27
Lampiran 2. Surat Keterangan Pengambilan Herba Seledri CV. Merapi
Farma Herbal
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
28
Lampiran 3. Surat Keterangan Determinasi Herba Seledri
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
29
Lampiran 4. Penetapan Kadar Air Serbuk Kering Herba Seledri
Gambar 4. Hasil Kadar Air Replikasi 1
Gambar 5. Hasil Kadar Air Replikasi 2
Gambar 6. Hasil Kadar Air Replikasi 3
Rata-rata kadar air = 𝑅𝑒𝑝𝑙𝑖𝑘𝑎𝑠𝑖 1+𝑅𝑒𝑝𝑙𝑖𝑘𝑎𝑠𝑖 2+𝑅𝑒𝑝𝑙𝑖𝑘𝑎𝑠𝑖 3
3
= 𝟔,𝟗𝟔𝟕+𝟔.𝟖𝟏𝟎+𝟔,𝟎𝟖𝟑
𝟑 x 100%
= 6.62 %
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
30
Lampiran 5. Tahap Pembuatan Ekstraksi
Gambar 7. Herba Seledri
Segar
Gambar 8. Serbuk
Kering Herba Seledri
Gambar 9. Proses
Maserasi
Gambar 10. Filtrat
Ekstrak Etanol Herba
Seledri
Gambar 11. Penguapan
Pelarut
Gambar 12.
Penimbangan Bobot
Tetap
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
31
Lampiran 6. Perhitungan Rendemen Ekstrak Etanol Herba Seledri (EEHS)
Bobot total serbuk herba seledri
= R1 + R2 + R3 + R4
= (100,03 + 100,01 + 100,02 +100,01) g
= 400,06 g
Bobot total ekstrak etanol herba seledri
= R1 + R2 + R3 +…. + R8
= (7,4253 + 9,8795 + 28,7440 + 20,5237 + 5,8163 + 19,1520 + 28,8106 +
15,2604) g
= 135,6118 g ~ 135, 61g
Persen rendemen
= Bobot total ekstrak etanol herba seledri (g)
Bobot total serbuk herba seledri (g) x 100%
= 135,61 g
400,06 g x 100%
= 33,90%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
32
Lampiran 7. Hasil Uji Kromatografi Lapis Tipis EEHS
Gambar 13. Sebelum di elusi
deteksi UV366
Gambar 14. Sebelum di elusi
secara visible
Keterangan: A, B, dan C = totolan EEHS
Gambar 15. Sebelum diuapkan
deteksi UV366
Gambar 16. Sesudah diuapkan
deteksi UV366
Keterangan: A= totolan A, B= totolan B, C= totolan C. 1 =
bercak berwana kuning , 2 = bercak berwarna merah muda ,
3 = bercak berwana merah.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
33
Gambar 17. Setelah diuapkan
deteksi UV254
Gambar 18. Setelah diuapkan
secara visible
Keterangan: A, B, dan C = totolan EEHS
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
34
Lampiran 8. Tahap Perlakuan Hewan Uji
Gambar 19. Pembuatan
Larutan CMC Na
Gambar 20.
Penimbangan Ekstrak
Kental Herba Seledri
Gambar 21. Pembuatan
Larutan Ekstrak Etanol
Herba Seledri
Gambar 22. Larutan
Ekstrak Etanol Herba
Seledri
Gambar 23. Perlakuan
Hewan Uji
Gambar 24. Perlakuan
Injeksi Karbon
Tetraklorida
Gambar 25.
Pengambilan Darah
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
35
Lampiran 9. Surat Keterangan CE&BU untuk Penggunaan Program IBM
SPSS Statictics 22
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
36
Lampiran 10. Analisis Statistik Serum ALT pada Uji Pendahuluan
Statistic Std. Error
delta0_24 Mean -54.2000 14.80030
95% Confidence Interval for Mean Lower Bound -95.2922
Upper Bound -13.1078
5% Trimmed Mean -53.4444
Median -38.6000
Variance 1095.245
Std. Deviation 33.09449
Minimum -98.10
Maximum -23.90
Range 74.20
Interquartile Range 62.50
Skewness -.654 .913
Kurtosis -2.314 2.000
delta0_48 Mean 2.7800 6.16096
95% Confidence Interval for Mean Lower Bound -14.3256
Upper Bound 19.8856
5% Trimmed Mean 3.0389
Median 9.0000
Variance 189.787
Std. Deviation 13.77632
Minimum -14.60
Maximum 15.50
Range 30.10
Interquartile Range 26.35
Skewness -.566 .913
Kurtosis -2.709 2.000
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
37
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
delta0_24 .281 5 .200* .866 5 .249
delta0_48 .274 5 .200* .854 5 .207
*. This is a lower bound of the true significance.
a. Lilliefors Significance Correction
Descriptives
Statistic Std. Error
Alt_0 Mean 42.3000 1.75841
95% Confidence Interval for Mean Lower Bound 37.4179
Upper Bound 47.1821
5% Trimmed Mean 42.3278
Median 42.4000
Variance 15.460
Std. Deviation 3.93192
Minimum 37.20
Maximum 46.90
Range 9.70
Interquartile Range 7.55
Skewness -.182 .913
Kurtosis -1.546 2.000
Alt_24 Mean 96.5000 14.02690
95% Confidence Interval for Mean Lower Bound 57.5551
Upper Bound 135.4449
5% Trimmed Mean 95.5500
Median 83.8000
Variance 983.770
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
38
Std. Deviation 31.36511
Minimum 69.60
Maximum 140.50
Range 70.90
Interquartile Range 58.95
Skewness .761 .913
Kurtosis -1.620 2.000
Alt_48 Mean 39.5200 5.43824
95% Confidence Interval for Mean Lower Bound 24.4210
Upper Bound 54.6190
5% Trimmed Mean 39.6833
Median 37.9000
Variance 147.872
Std. Deviation 12.16026
Minimum 24.30
Maximum 51.80
Range 27.50
Interquartile Range 23.65
Skewness -.073 .913
Kurtosis -2.181 2.000
T-Test
Paired Samples Statistics
Mean N Std. Deviation Std. Error Mean
Pair 1 Alt_0 42.3000 5 3.93192 1.75841
Alt_24 96.5000 5 31.36511 14.02690
Pair 2 Alt_0 42.3000 5 3.93192 1.75841
Alt_48 39.5200 5 12.16026 5.43824
Pair 3 Alt_24 96.5000 5 31.36511 14.02690
Alt_48 39.5200 5 12.16026 5.43824
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
39
Paired Samples Correlations
N Correlation Sig.
Pair 1 Alt_0 & Alt_24 5 -.389 .517
Pair 2 Alt_0 & Alt_48 5 -.277 .652
Pair 3 Alt_24 & Alt_48 5 .882 .048
Paired Samples Test
Paired Differences
Mean
Std.
Deviation
Std. Error
Mean
95% Confidence Interval
of the Difference
Lower Upper
Pair 1 Alt_0 - Alt_24 -54.20000 33.09449 14.80030 -95.29223 -13.10777
Pair 2 Alt_0 - Alt_48 2.78000 13.77632 6.16096 -14.32556 19.88556
Pair 3 Alt_24 - Alt_48 56.98000 21.42398 9.58110 30.37861 83.58139
Paired Samples Test
t df Sig. (2-tailed)
Pair 1 Alt_0 - Alt_24 -3.662 4 .022
Pair 2 Alt_0 - Alt_48 .451 4 .675
Pair 3 Alt_24 - Alt_48 5.947 4 .004
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
40
Lampiran 11. Analisis Statistik Serum ALT pada Kelompok Perlakuan EEHS
dan Kelompok Kontrol
Descriptives
Kelompok Statistic Std. Error
Nilai KONTROL CCl4 Mean 86.7200 8.70353
95% Confidence Interval for Mean Lower
Bound 62.5551
Upper
Bound 110.8849
5% Trimmed Mean 85.9056
Median 83.8000
Variance 378.757
Std. Deviation 19.46168
Minimum 70.30
Maximum 117.80
Range 47.50
Interquartile Range 33.80
Skewness 1.221 .913
Kurtosis 1.327 2.000
KONTROL CMC
Na
Mean 42.8800 2.29072
95% Confidence Interval for Mean Lower
Bound 36.5199
Upper
Bound 49.2401
5% Trimmed Mean 43.0389
Median 43.6000
Variance 26.237
Std. Deviation 5.12221
Minimum 35.10
Maximum 47.80
Range 12.70
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
41
Interquartile Range 9.30
Skewness -.909 .913
Kurtosis .214 2.000
KONTROL EEHS Mean 45.9200 1.07163
95% Confidence Interval for Mean Lower
Bound 42.9447
Upper
Bound 48.8953
5% Trimmed Mean 46.0500
Median 47.3000
Variance 5.742
Std. Deviation 2.39625
Minimum 41.90
Maximum 47.60
Range 5.70
Interquartile Range 3.75
Skewness -1.667 .913
Kurtosis 2.479 2.000
DOSIS
150mg/kgBB
Mean 54.3400 1.77302
95% Confidence Interval for Mean Lower
Bound 49.4173
Upper
Bound 59.2627
5% Trimmed Mean 54.2333
Median 53.0000
Variance 15.718
Std. Deviation 3.96459
Minimum 50.40
Maximum 60.20
Range 9.80
Interquartile Range 7.25
Skewness .856 .913
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
42
Kurtosis -.461 2.000
DOSIS 300
mg/kgBB
Mean 57.1200 1.71855
95% Confidence Interval for Mean Lower
Bound 52.3486
Upper
Bound 61.8914
5% Trimmed Mean 57.0389
Median 57.8000
Variance 14.767
Std. Deviation 3.84279
Minimum 53.20
Maximum 62.50
Range 9.30
Interquartile Range 7.10
Skewness .402 .913
Kurtosis -.942 2.000
DOSIS
600mg/kgBB
Mean 46.7000 .59833
95% Confidence Interval for Mean Lower
Bound 45.0388
Upper
Bound 48.3612
5% Trimmed Mean 46.6889
Median 46.4000
Variance 1.790
Std. Deviation 1.33791
Minimum 45.40
Maximum 48.20
Range 2.80
Interquartile Range 2.65
Skewness .282 .913
Kurtosis -2.984 2.000
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
43
Tests of Normality
Kelompok
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Statistic df Sig. Statistic df Sig.
Nilai KONTROL CCl4 .215 5 .200 .876 5 .290
KONTROL CMC Na .184 5 .200* .927 5 .578
KONTROL EEHS .318 5 .110 .776 5 .051
DOSIS 150mg/kgBB .232 5 .200* .930 5 .598
DOSIS 300 mg/kgBB .220 5 .200* .918 5 .517
DOSIS 600mg/kgBB .234 5 .200* .848 5 .189
*. This is a lower bound of the true significance.
a. Lilliefors Significance Correction
Test of Homogeneity of Variances
Nilai
Levene Statistic df1 df2 Sig.
4.740 5 24 .054
ANOVA
Nilai
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 6535.311 5 1307.062 17.702 .000
Within Groups 1772.044 24 73.835
Total 8307.355 29
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
44
Post Hoc Tests
Multiple Comparisons
Dependent Variable: Nilai
(I)
Kelompok (J) Kelompok
Mean
Difference
(I-J)
Std.
Error Sig.
95% Confidence
Interval
Lower
Bound
Upper
Bound
Tukey
HSD
KONTROL
CCl4
KONTRO
CMC Na 43.84000**
5.43453 .000 27.0368 60.6432
KONTROL
EEHS 40.80000*
5.43453 .000 23.9968 57.6032
DOSIS
150mg/kgBB
32.38000* 5.43453 .000 15.5768 49.1832
DOSIS 300
mg/kgBB
29.60000* 5.43453 .000 12.7968 46.4032
DOSIS
600mg/kgBB
40.02000* 5.43453 .000 23.2168 56.8232
KONTRO
CMC Na
KONTROL
CCl4
-43.84000* 5.43453 .000 -60.6432 -27.0368
KONTROL
EEHS -3.04000
5.43453 .993 -19.8432 13.7632
DOSIS
150mg/kgBB -11.46000
5.43453 .316 -28.2632 5.3432
DOSIS 300
mg/kgBB -14.24000*
5.43453 .131 -31.0432 2.5632
DOSIS
600mg/kgBB -3.82000
5.43453 .980 -20.6232 12.9832
KONTROL
EEHS
KONTROL
CCl4
-40.80000* 5.43453 .000 -57.6032 -23.9968
KONTRO
CMC Na 3.04000
5.43453 .993 -13.7632 19.8432
DOSIS
150mg/kgBB -8.42000
5.43453 .637 -25.2232 8.3832
DOSIS 300
mg/kgBB -11.20000
5.43453 .340 -28.0032 5.6032
DOSIS
600mg/kgBB -.78000
5.43453 1.000 -17.5832 16.0232
KONTROL
CCl4
-32.38000 8.88229 .104 -72.8199 8.0599
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
45
DOSIS
150mg/kg
BB
KONTRO
CMC Na 11.46000
2.89672 .037 .7053 22.2147
KONTROL
EEHS 8.42000
2.07171 .040 .4204 16.4196
DOSIS 300
mg/kgBB -2.78000
2.46921 .858 -11.8041 6.2441
DOSIS
600mg/kgBB 7.64000
1.87126 .061 -.4117 15.6917
DOSIS
300
mg/kgBB
KONTROL
CCl4
-29.60000 8.87157 .137 -70.0829 10.8829
KONTRO
CMC Na
14.24000* 2.86370 .011 3.5660 24.9140
KONTROL
EEHS
11.20000* 2.02529 .008 3.4247 18.9753
DOSIS
150mg/kgBB
2.78000 2.46921 .858 -6.2441 2.78000
DOSIS
600mg/kgBB
10.42000* 1.81973 .016 2.6281 10.42000*
DOSIS
600mg/kg
BB
KONTROL
CCl4
-40.02000 8.72407 .055 -81.1846 1.1446
KONTRO
CMC Na 3.82000
2.36757 .627 -6.7163 14.3563
KONTROL
EEHS .78000
1.22735 .984 -4.0320 5.5920
DOSIS
150mg/kgBB -7.64000
1.87126 .061 -15.6917 .4117
DOSIS 300
mg/kgBB -10.42000
1.81973 .016 -18.2119 -2.6281
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
46
Lampiran 12. Penetapan Peringkat Dosis
Pada penelitian Abdou et al. (2012), ekstrak etanol 80% biji seledri dosis
300 mg/kgBB memiliki aktivitas antioksidan dan hepatoprotektif pada tikus yang
terinduksi karbon tetraklorida. Maka dari itu, dosis 300 mg/kgBB dijadikan sebagai
dosis acuan untuk dosis tengah. Peringkat dosis yang pertama diambil dari nilai
setengahnya dari dosis 300 mg/kgBB yaitu 150 mg/kgBB. Peringkat dosis yang
ketiga diambil dari dua kali lipat dari dosis 300 mg/kgBB yaitu 600 mg/kgBB.
Penetapan peringkat dosis EEHS yaitu 150, 300, 600 mg/kgBB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
47
Lampiran 13. Efek Hepatoprotektif EEHS terhadap Serum ALT
Persen efek hepatoprotektif terhadap kadar ALT
(1-𝑝𝑢𝑟𝑎𝑡𝑎 𝐴𝐿𝑇 𝑝𝑒𝑟𝑙𝑎𝑘𝑢𝑎𝑛−𝑝𝑢𝑟𝑎𝑡𝑎 𝐴𝐿𝑇 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙
𝑝𝑢𝑟𝑎𝑡𝑎 𝐴𝐿𝑇 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑘𝑎𝑟𝑏𝑜𝑛 𝑡𝑒𝑡𝑟𝑎𝑘𝑙𝑜𝑟𝑖𝑑𝑎−𝑝𝑢𝑟𝑎𝑡𝑎 𝐴𝐿𝑇 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑛𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑓)x100%
EEHS 150 mg/kgBB = (1-54.3400−45,9200
86.72−42.8800)x100% = 80.79%
EEHS 300 mg/kgBB = (1-57,1200−45,9200
86.72−42.8800)x100% = 74.45%
EEHS 600 mg/kgBB = (1-46,7000−45,9200
86.72−42.8800)x100% = 82.20%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
48
Lampiran 14. Perhitungan Konversi Dosis Manusia
Nilai konversi tikus dengan berat badan 200 gram ke manusia dengan berat
badang 70 kg yaitu 56
Dosis manusia 70 kg = dosis tikus 200 gram x nilai konversi
1. EEHS 150 mg/kgBB = 0,15 g/1000 gBB
= 0,03 g/200 gBB x 56
= 1,68 g/70kgBB
2. EEHS 300 mg/kgBB = 0,30 g/1000 gBB
= 0,06 g/200 gBB x 56
= 3,36 g/70 kgBB
3. EEHS 600 mg/kgBB = 0,60 g/1000 gBB
= 0,12 g/200 gBB x 56
= 7,72 g/70 kgBB
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
49
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi yang berjudul “Uji Hepatoprotektif
Ekstrak Etanol Herba Seledri terhadap Aktivitas Serum
ALT pada Tikus Betina Galur Wistar Terinduksi Karbon
Tetraklorida” dengan nama lengkap Maria Arielisa, lahir
di Boyolali, 28 Juli 1997. Penulis merupakan anak ketiga
dari pasangan Jonandar dan Noor Laila Sutan Hasanna.
Pendidikan formal yang telah ditempuh penulis, yaitu TK
Kanisius Boyolali, tingkat sekolah dasar di SD N
Surodadi, tingkat sekolah menengah pertama di SMP N 2
Mojosongo, dan sekolah menengah atas di SMA N 3 Boyolali. Penulis melanjutkan
Pendidikan sarjana Strata-1 di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma,
Yogyakarta. Dalam masa studinya, penulis memiliki pengalaman kerja sebagai
asisten dosen Praktikum Farmasi Fisika 2016 dan Praktikum Kimia Dasar 2017.
Penulis aktif dalam organisasi Jaringan Mahasiswa Kesehatan Indonesia Fakultas
selama 1 periode tahun 2016-2017 dan Jaringan Mahasiswa Kesehatan Indonesia
tingkat provinsi selama 2 periode tahun 2016-2018.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI